DE19947863A1

DE19947863A1 - New 3-salicyloyl-indole derivatives, useful for treating diseases dependent on protein kinase or estrogenic activity, especially tumor diseases, proliferative epidermal diseases or osteoporosis

Info

Publication number: DE19947863A1
Application number: DE1999147863
Authority: DE
Inventors: Werner Loewe; Ronald Gust; Sonja Witzel; Christoph Dietrich
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1999-09-23
Filing date: 1999-09-23
Publication date: 2001-04-05

Abstract

3-Salicyloyl-indole derivatives (I) are new. Indole derivatives of formula (I) and their salts are new. R1-R3 = H, OH, alkyl or alkoxy; or R1 + R2 = lower alkylenedioxy; R4 = H, halo, alkyl (optionally substituted by halo), OH, phenoxy, 3-7C cycloalkoxy or alkoxy; R5 = halo, alkyl (optionally substituted by halo), OH, phenoxy, 3-7C cycloalkoxy or alkoxy; R6 = H or alkyl (taken from the disclosure; R6 is not defined in the main claim); X = H, lower alkanoyl (optionally substituted by halo), alkyl, carboxyalkyl, alkoxycarbonylalkyl, aminocarbonylalkyl, N-alkylaminocarbonylalkyl, N,N-dialkylaminocarbonylalkyl or 6-12C aryl; and n = 0-3. All alkyl moieties are have 1-7C.

Description

Die Erfindung bezieht sich auf die Verwendung einer Verbindung gemäß Formel 1, wobei R₁, R₂ und R₃, jeweils unabhängig voneinander, Wasserstoff, Hydroxy, niederes Alkoxy oder niederes Alkyl bzw. R₁ und R₂ gemeinsam niederes Alkylendioxy darstellen. R₄ ist Wasserstoff, Halogen, niederes Alkyl, halogensubstituiertes niederes Alkyl, Hydroxy, Phenyloxy, C₃-C₇-Cycloalkyloxy bzw. niederes Alkoxy. Jedes R₅ wird, unabhängig von R₄ und gegebenenfalls auch noch anwesendem anderem R₅, aus Wasserstoff, Halogen, niederem Alkyl, halogensubstituiertem niederem Alkyl, Hydroxy, Phenyloxy, C₃-C₇-Cycloalkyloxy bzw. niederem Alkoxy ausgewählt. R₆ ist Wasserstoff oder niederes Alkyl. X ist Imino oder (halogensubstituiertes oder nicht-substituiertes niederes Alkanoyl, [niederes Alkyl oder Carboxy-, niederes Alkoxycarbonyl-, Aminocarbonyl-, N- mono oder N,N-di-niederes Alkylaminocarbonyl]-niederes Alkyl; bzw. C₆-C₁₂-Aryl)-substituiertes Imino. n ist 0, 1, 2, 3 oder eines seiner Salze, sofern mindestens eine salzbildende Gruppe vorliegt. Diese Verbindung dient der Behandlung bestimmter Krankheiten sowie der Hemmung der Proteinkinasen und beeinflusst (Anm. d. Übers.: Das Verb "beeinflusst" ist inhaltlich erforderlich; der grammatische Bezug ist im Originaltext nicht eindeutig.) die Estrogenaktivität. Weiterhin bezieht sich die Erfindung auf die neuen Verbindungen gemäß Formel 1 und ihre Salze. The invention relates to the use of a compound according to formula 1, wherein R ₁ , R ₂ and R ₃ , each independently of one another, are hydrogen, hydroxyl, lower alkoxy or lower alkyl or R ₁ and R ₂ together represent lower alkylenedioxy. R ₄ is hydrogen, halogen, lower alkyl, halogen-substituted lower alkyl, hydroxy, phenyloxy, C ₃ -C ₇ cycloalkyloxy or lower alkoxy. Each R ₅ , independently of R ₄ and possibly also other R _{5 present} , is selected from hydrogen, halogen, lower alkyl, halogen-substituted lower alkyl, hydroxy, phenyloxy, C ₃ -C ₇ cycloalkyloxy or lower alkoxy. R ₆ is hydrogen or lower alkyl. X is imino or (halogen-substituted or unsubstituted lower alkanoyl, [lower alkyl or carboxy, lower alkoxycarbonyl, aminocarbonyl, N-mono or N, N-di-lower alkylaminocarbonyl] lower alkyl; or C ₆ -C ₁₂ aryl) substituted imino. n is 0, 1, 2, 3 or one of its salts, provided that at least one salt-forming group is present. This compound is used for the treatment of certain diseases and the inhibition of protein kinases and influences the estrogenic activity (content of the verb: "influenced" is required; the grammatical reference is not clear in the original text). The invention further relates to the new compounds of formula 1 and their salts.

Summary of the invention

Die Erfindung bezieht sich auf die Verwendung eines salicyloyl-substituierten Indolderivats oder eines seiner Salze zur Hemmung der Proteinkinaseaktivität, insbesondere der EGF- rezeptorspezifischen Tyrosinproteinkinase und/oder bei Estrogenaktivitätsabhängigkeit, insbesondere bei einer Tumorerkrankung oder Osteoporose und/oder bei Psoriasis, falls die proliferierende Krankheit von der Proteinkinaseaktivität abhängig ist, sowie auf ein neuartiges salicyloylsubstituiertes Indolderivat oder eines seiner Salze.The invention relates to the use of a salicyloyl-substituted indole derivative or one of its salts to inhibit protein kinase activity, particularly EGF receptor-specific tyrosine protein kinase and / or with estrogen activity dependency, especially in the case of a tumor or osteoporosis and / or psoriasis, if the proliferating disease is dependent on protein kinase activity, as well as on a novel salicyloyl-substituted indole derivative or one of its salts.

Background of the Invention

Tumorkrankheiten sind eine der Haupttodesursachen in den Industriestaaten. Es werden enorme Anstrengungen unternommen, um wirksame Methoden und Mittel zur Tumorbehandlung zur Verfügung zu stellen. Insbesondere besteht wegen der großen Anzahl sehr unterschiedlicher möglicher Tumorerkrankungen ein ständiger Bedarf an neuen pharmazeutischen Verbindungen und Zusammensetzungen, die sich auf Grund ihrer Wirkstoffe entweder für die Behandlung einer größtmöglichen Zahl von Tumoren bzw. alternativ für die Behandlung sehr spezifischer Tumoren eignen.Tumor diseases are one of the main causes of death in industrialized countries. It will be enormous Efforts are being made to find effective methods and agents for tumor treatment To make available. In particular, there are very different because of the large number possible tumor diseases a constant need for new pharmaceutical compounds and compositions which, because of their active ingredients, are either for the treatment of a maximum number of tumors or alternatively for the treatment of very specific tumors own.

Die Literatur beschreibt Verbindungen der Formel 2 [1],
The literature describes compounds of the formula 2 [1],

wobei vorzugsweise R₁ Wasserstoff ist. R₂ ist eine Hydroxy- oder Methoxygruppe; R₃ ist eine Chlor- oder Bromgruppe; R₄ ist Wasserstoff und X ist Sauerstoff oder Imino.preferably R _{1 is} hydrogen. R ₂ is a hydroxy or methoxy group; R ₃ is a chlorine or bromine group; R ₄ is hydrogen and X is oxygen or imino.

Diese Verbindungen werden als wirksame Tyrosinkinasehemmer beschrieben und eignen sich daher zur therapeutischen Behandlung proteinkinaseabhängiger Tumorerkrankungen und anderer proliferativer proteinkinaseabhängiger Krankheiten.These compounds are described as effective tyrosine kinase inhibitors and are suitable hence for the therapeutic treatment of protein kinase-dependent tumor diseases and others proliferative protein kinase dependent diseases.

Weiterhin haben Traxler et al. ein Rezeptormodell für Verbindungen der Formel 2 veröffentlicht, aus dem die Notwendigkeit der vorgenannten (Formel 2) Substituenten R₁-R₄ und X [2] abgeleitet wird.Furthermore, Traxler et al. published a receptor model for compounds of formula 2, from which the need for the aforementioned (formula 2) substituents R ₁ -R ₄ and X [2] is derived.

Nach diesem Modell wurde jetzt festgestellt, daß die vollkommen neuartigen Verbindungen der Formel 1 wesentliche Strukturparameter besitzen, auf Grund derer sie mit dem vorerwähnten Rezeptor interagieren können. According to this model, it has now been found that the completely new connections of the Formula 1 have essential structural parameters, on the basis of which they with the aforementioned Receptor can interact.

Weiterhin ist eine Verbindung der Formel 1, bei der R₁, R₃ und R₆ Wasserstoff sind, R₂ Hydroxy, R₄ Wasserstoff, R₅ in den Positionen 5 oder 6 Hydroxy, in der Lage, mit dem Estrogenrezeptor zu interagieren und estrogene oder antiestrogene Wirkung zu zeigen, wodurch sie sich zur therapeutischen Behandlung von estrogenabhängigen Erkrankungen, insbesondere Brustkrebs und Osteoporose, eignet.Furthermore, a compound of formula 1 in which R ₁ , R ₃ and R _{6 are} hydrogen, R ₂ hydroxy, R ₄ hydrogen, R ₅ in positions 5 or 6 hydroxy, is able to interact with the estrogen receptor and is estrogenic or to show antiestrogenic activity, which makes it suitable for the therapeutic treatment of estrogen-dependent diseases, in particular breast cancer and osteoporosis.

Detailed description of the invention

Die Synthese von Verbindungen der Formel 1 durch Reduktion von Nitroisoflavonen war in keiner der nachstehend beschriebenen Formen zu erwarten. Dies gilt ebenfalls für den Wirkmechanismus über die Proteinkinasehemmung oder die Wechselwirkung mit dem nachstehenden beschriebenen Estrogenrezeptor. Im Einzelnen ist ein salicyloylsubstituiertes Indolderivat, das entsprechend der Erfindung verwendet werden kann, eine Verbindung gemäß Formel 1,
The synthesis of compounds of formula 1 by reduction of nitroisoflavones was not to be expected in any of the forms described below. This also applies to the mechanism of action via protein kinase inhibition or the interaction with the estrogen receptor described below. Specifically, a salicyloyl-substituted indole derivative that can be used in accordance with the invention is a compound of Formula 1

wobei R₁, R₂ und R₃, jeweils unabhängig voneinander, Wasserstoff, Hydroxy, niederes Alkoxy und niederes Alkyl bzw. R₁ und R₂ gemeinsam niederes Alkylendioxy darstellen. R₄ ist Wasserstoff, Halogen, niederes Alkyl, halogensubstituiertes niederes Alkyl, Hydroxy, Phenyloxy, C₃-C₇- Cycloalkyloxy bzw. niederes Alkoxy. Jedes R₅ wird, unabhängig von R₄ und gegebenenfalls auch noch anwesendem anderem R₅, aus Halogen, niederem Alkyl, halogensubstituiertem niederem Alkyl, Hydroxy, Phenyloxy, C₃-C₇-Cycloalkyloxy bzw. niederem Alkoxy ausgewählt. X ist Imino oder (halogensubstituiertes oder nicht-substituiertes niederes Alkanoyl, [niederes Alkyl oder Carboxy-, niederes Alkoxycarbonyl-, Aminocarbonyl, N-mono- oder N,N-di-niederes Alkylaminocarbonyl]-niederes Alkyl; bzw. C₆-C₁₂-Aryl)-substituiertes Imino. n ist 0, 1, 2, 3 oder eines seiner Salze, sofern mindestens eine salzbildende Gruppe vorliegt.wherein R ₁ , R ₂ and R ₃ , each independently of one another, represent hydrogen, hydroxy, lower alkoxy and lower alkyl or R ₁ and R ₂ together represent lower alkylenedioxy. R ₄ is hydrogen, halogen, lower alkyl, halogen-substituted lower alkyl, hydroxy, phenyloxy, C ₃ -C ₇ cycloalkyloxy or lower alkoxy. Each R ₅ , independently of R ₄ and possibly also other R _{5 present} , is selected from halogen, lower alkyl, halogen-substituted lower alkyl, hydroxy, phenyloxy, C ₃ -C ₇ cycloalkyloxy or lower alkoxy. X is imino or (halogen-substituted or unsubstituted lower alkanoyl, [lower alkyl or carboxy, lower alkoxycarbonyl, aminocarbonyl, N-mono- or N, N-di-lower alkylaminocarbonyl] -lower alkyl; or C ₆ -C ₁₂ aryl) substituted imino. n is 0, 1, 2, 3 or one of its salts, provided that at least one salt-forming group is present.

Im Zusammenhang mit der vorliegenden Patentschrift haben die vor- und nachstehend verwendeten allgemeinen Begriffe vorzugsweise die folgenden Bedeutungen, sofern nicht abweichend angegeben: In connection with the present specification, the above and below general terms used preferably have the following meanings, if not stated differently:

Das vor- und nachstehend verwendete Präfix "nieder" bezeichnet ein Radikal bis einschließlich einer maximalen Anzahl von 7, insbesondere bis einschließlich einer maximalen Anzahl von 4 bzw. vor allem mit 1 oder 2 Kohlenstoffatomen.The prefix "lower" used above and below denotes a radical up to and including a maximum number of 7, in particular up to and including a maximum number of 4 or especially with 1 or 2 carbon atoms.

"Weiter" oder "weiterhin" ist allgemein Radikalen bzw. Definitionen vorangestellt, die nicht in dem Maß bevorzugt sind wie die vor ihnen erwähnten."Next" or "continue" is generally preceded by radicals or definitions that are not in the As preferred as those mentioned before.

Bei Vorliegen asymmetrischer Kohlenstoffatome können die Verbindungen der Formel 1 in Form von Gemischen von Enantiomeren bzw. (bei Vorliegen von zwei oder mehr Asymmetriezentren) von Gemischen von Diastereomeren bzw. in Form der reinen Enantiomere bzw. Diastereomere vorliegen.If asymmetric carbon atoms are present, the compounds of formula 1 can be in the form of mixtures of enantiomers or (if two or more asymmetry centers are present) of mixtures of diastereomers or in the form of pure enantiomers or diastereomers available.

Niederes Alkoxy R₁, R₂ oder R₃ ist insbesondere Methoxy. Niederes Alkyl ist R₁, R₂ oder R₃ vorzugsweise Methyl oder Ethyl. Niederes Alkylendioxy, das gemeinsam durch R₁ und R₂ gebildet wird, ist vorzugsweise ein zweiwertiges Radikal, das aus Ethylendioxy (-O-CH₂-CH₂O-) und insbesondere Methylendioxy (-O-CH₂-O-) ausgewählt wird.Lower alkoxy R ₁ , R ₂ or R ₃ is in particular methoxy. Lower alkyl is R ₁ , R ₂ or R _3, preferably methyl or ethyl. Lower alkylenedioxy, which is formed jointly by R ₁ and R ₂ , is preferably a divalent radical which is selected from ethylenedioxy (-O-CH ₂ -CH ₂ O-) and in particular methylenedioxy (-O-CH ₂ -O-) .

Halogen R₄ ist Fluor, Iod bzw. vorzugsweise Brom oder Chlor. R₄ ist vorzugsweise Chlor. Niederes Alkyl R₄ ist vorzugsweise Methyl oder Ethyl.Halogen R ₄ is fluorine, iodine or preferably bromine or chlorine. R ₄ is preferably chlorine. Lower alkyl R ₄ is preferably methyl or ethyl.

Halogensubstituiertes niederes Alkyl R₄ oder R₅ ist niederes Alkyl wie beispielsweise Methyl, das durch ein Halogen wie beispielsweise Fluor oder Chlor substituiert ist, und insbesondere Trifluormethyl. C₃-C₇-Cycloalkyloxy ist vorzugsweise Cyclohexyloxy, niederes Alkoxy (das in den aus Phenyloxy, C₃-C₇-Cycloalkyloxy und niederem Alkoxy bestehenden Gruppen bevorzugt wird) ist insbesondere Ethoxy oder noch besonderer Methoxy.Halogen-substituted lower alkyl R ₄ or R ₅ is lower alkyl such as methyl, which is substituted by a halogen such as fluorine or chlorine, and especially trifluoromethyl. C ₃ -C ₇ cycloalkyloxy is preferably cyclohexyloxy, lower alkoxy (which is preferred in the groups consisting of phenyloxy, C ₃ -C ₇ cycloalkyloxy and lower alkoxy) is in particular ethoxy or even more particularly methoxy.

Halogen R₅ ist unabhängig definiert als Halogen R₄.Halogen R ₅ is independently defined as halogen R ₄ .

Niederes Alkyl R₅ ist vorzugsweise Methyl.Lower alkyl R ₅ is preferably methyl.

Niederes Alkyl R₆ ist insbesondere Methyl und Ethyl.Lower alkyl R ₆ is especially methyl and ethyl.

X ist Imino(-NH-) oder substituiertes Imino (bei dem H durch einen Substituenten ersetzt ist).X is imino (-NH-) or substituted imino (in which H is replaced by a substituent).

In (halogensubstituiertem oder nicht-substituiertem niederem Alkanoyl, [niederem Alkyl oder Carboxy-, niederem Alkoxycarbonyl-, Aminocarbonyl-, N-mono- oder N,N-di-niederem Alkylaminocarbonyl]-niederem Alkyl; bzw. C₆-C₁₂-Aryl)-substituiertem Imino. X ist der Iminosubstituent insbesondere niederes Alkanoyl, das durch ein Halogen oder insbesondere ein unsubstituiertes niederes Alkanoyl substituiert ist; niederes Alkyl, insbesondere Methyl, Ethyl, n- Propyl oder Isopropyl; oder substituiertes niederes Alkyl (vorzugsweise Methyl oder Ethyl), wobei die Substituenten (einer oder mehrere, insbesondere ein Substituent) aus Carboxy, niederem Alkoxycarbonyl wie beispielsweise Methoxy- oder Ethoxycarbonyl, Aminocarbonyl, N-mono- oder N,N-di-niederem Alkylaminocarbonyl oder C₆-C₁₂-Aryl, insbesondere Phenyl, ausgewählt werden. Der Index n ist vorzugsweise 0 oder 1, am bevorzugtesten 0.In (halogen-substituted or unsubstituted lower alkanoyl, [lower alkyl or carboxy, lower alkoxycarbonyl, aminocarbonyl, N-mono- or N, N-di-lower alkylaminocarbonyl] lower alkyl; or C ₆ -C ₁₂ - Aryl) substituted imino. X is the imino substituent, in particular lower alkanoyl, which is substituted by a halogen or in particular an unsubstituted lower alkanoyl; lower alkyl, especially methyl, ethyl, n-propyl or isopropyl; or substituted lower alkyl (preferably methyl or ethyl), the substituents (one or more, in particular one substituent) of carboxy, lower alkoxycarbonyl such as, for example, methoxy or ethoxycarbonyl, aminocarbonyl, N-mono- or N, N-di-lower alkylaminocarbonyl or C ₆ -C ₁₂ aryl, especially phenyl, can be selected. The index n is preferably 0 or 1, most preferably 0.

Die Salze der Verbindungen der Formel 1 sind insbesondere Additionssalze mit organischen oder anorganischen Säuren, insbesondere die pharmazeutisch akzeptablen, nicht-toxischen Salze. Geeignete anorganische Säuren sind beispielsweise Kohlensäure (vorzugsweise in Form der Carbonate oder Hydrogencarbonate); Halogenwasserstoffsäuren wie beispielsweise Salzsäure, Schwefelsäure oder Phosphorsäure. Geeignete organische Säuren sind beispielsweise Carbon-, Phosphon-, Sulfon- oder Sulfamidsäure, beispielsweise Essigsäure, Propionsäure, Octansäure, Decansäure, Dodekansäure, Glycolsäure, Milchsäure, 2-Hydroxybuttersäure, Gluconsäure, Glucosemonocarbonsäure, Fumarsäure, Succinsäure, Adipinsäure, Pimelinsäure, Suberinsäure, Azelainsäure, Apfelsäure, Weinsäure, Zitronensäure, Glucarsäure, Galactarsäure, Aminosäuren wie beispielsweise Glutaminsäure, Asparginsäure, N-Methylglycin, Acetylaminoessigsäure, N- Acetylasparagin oder N-Acetylcystin, Brenztraubensäure, Acetessigsäure, Phosphoserin, 2- oder 3-Glycerophosphorsäure, Glucose-6-phosphorsäure, Glucose-2-phosphorsäure, Fructose-1, 6-di phosphorsäure, Maleinsäure, Hydroxymaleinsäure, Methylmaleinsäure, Cyclohexancarbonsäure, Adamantancarbonsäure, Benzoesäure, Salicylsäure, 1- oder 3-Hydroxynaphthyl-2-carbonsäure, 3,4,5-Trimethoxybenzoesäure, 2-Phenoxybenzoesäure, 2-Acetoxybenzoesäure, 4-Aminosalicyi säure, Phthalsäure, Phenylessigsäure, Mandelsäure, Zimtsäure, Nicotinsäure, Isonicotinsäure, Glucuronsäure, Galacturonsäure, Methan- oder Ethansulfonsäure, 2-Hydroxyethansulfonsäure, Ethan-1,2-disulfonsäure, Benzolsulfonsäure, 2-Naphthalinsulfonsäure, 1,5-Naphthalin disulfonsäure, 2-, 3- oder 4-Methylbenzolsulfonsäure, Methylschwefelsäure, Ethylschwefelsäure, Dodecylschwefelsäure, N-Cyclohexylsulfamidsäure, N-Methyl-, N-Ethyl- oder N-Propylsulfamid säure oder andere organische protonische Säuren wie beispielsweise Ascorbinsäure. Verbindungen der Formel 1, die mindestens eine freie Carboxylgruppe besitzen, sind in der Lage, interne Salze oder Metall- oder Ammoniumsalze wie beispielsweise Alkalimetall- oder alkaline Erdmetallsalze wie beispielsweise Natrium-, Kalium-, Magnesium- oder Calciumsalze oder Ammoniumsalze mit Ammoniak- oder geeigneten organischen Aminen wie beispielsweise tertiären Monoaminen wie beispielsweise Triethylamin oder Tri(2-Hydroxyethyl)amin oder heterozyklischen Basen wie beispielsweise N-Ethyl-piperidin oder N,N'-Dimethylpiperazin zu bilden.The salts of the compounds of formula 1 are in particular addition salts with organic or inorganic acids, especially the pharmaceutically acceptable, non-toxic salts. Suitable inorganic acids are, for example, carbonic acid (preferably in the form of Carbonates or bicarbonates); Hydrohalic acids such as hydrochloric acid, Sulfuric acid or phosphoric acid. Suitable organic acids are, for example, carbon, Phosphonic, sulfonic or sulfamic acid, for example acetic acid, propionic acid, octanoic acid, Decanoic acid, dodecanoic acid, glycolic acid, lactic acid, 2-hydroxybutyric acid, gluconic acid, Glucose monocarboxylic acid, fumaric acid, succinic acid, adipic acid, pimelic acid, suberic acid, Azelaic acid, malic acid, tartaric acid, citric acid, glucaric acid, galactaric acid, amino acids such as glutamic acid, aspartic acid, N-methylglycine, acetylaminoacetic acid, N- Acetylasparagin or N-acetylcystin, pyruvic acid, acetoacetic acid, phosphoserine, 2- or 3-glycerophosphoric acid, glucose-6-phosphoric acid, glucose-2-phosphoric acid, fructose-1, 6-di phosphoric acid, maleic acid, hydroxymaleic acid, methyl maleic acid, cyclohexane carboxylic acid, Adamantane carboxylic acid, benzoic acid, salicylic acid, 1- or 3-hydroxynaphthyl-2-carboxylic acid, 3,4,5-trimethoxybenzoic acid, 2-phenoxybenzoic acid, 2-acetoxybenzoic acid, 4-aminosalicyi acid, phthalic acid, phenylacetic acid, mandelic acid, cinnamic acid, nicotinic acid, isonicotinic acid, Glucuronic acid, galacturonic acid, methane or ethanesulfonic acid, 2-hydroxyethanesulfonic acid, Ethane-1,2-disulfonic acid, benzenesulfonic acid, 2-naphthalenesulfonic acid, 1,5-naphthalene disulfonic acid, 2-, 3- or 4-methylbenzenesulfonic acid, methylsulfuric acid, ethylsulfuric acid, Dodecylsulfuric acid, N-cyclohexylsulfamic acid, N-methyl-, N-ethyl- or N-propylsulfamide acid or other organic protonic acids such as ascorbic acid. Compounds of the formula 1 which have at least one free carboxyl group are able to internal salts or metal or ammonium salts such as alkali metal or alkaline Earth metal salts such as sodium, potassium, magnesium or calcium salts or Ammonium salts with ammonia or suitable organic amines such as tertiary monoamines such as triethylamine or tri (2-hydroxyethyl) amine or heterocyclic bases such as N-ethyl-piperidine or N, N'-dimethylpiperazine form.

Die Verbindungen der Formel 1 weisen wertvolle, pharmakologisch nützliche Eigenschaften auf. Insbesondere entfalten sie spezifische hemmende Wirkungen, die pharmakologisch von Interesse sind. Sie sind insbesondere als Tyrosinproteinkinasehemmer wirksam und/oder interagieren mit der Estrogenbindenden Stelle.The compounds of formula 1 have valuable, pharmacologically useful properties. In particular, they have specific inhibitory effects that are of pharmacological interest are. They are particularly effective as tyrosine protein kinase inhibitors and / or interact with the estrogen binding site.

Sie hemmen die Tyrosinkinaseaktivität des Rezeptors für den epidermalen Wachstumsfaktor ("epidermal growth factor", EGF). Diese rezeptorspezifischen Enzymaktivitäten spielen eine Schlüsselrolle bei der Signalübertragung in einer großen Zahl von Säugetierzellen einschließlich der menschlichen Zelle.They inhibit the tyrosine kinase activity of the receptor for the epidermal growth factor ("epidermal growth factor", EGF). These receptor-specific enzyme activities play a role Key role in signal transmission in a large number of mammalian cells including the human cell.

Die Hemmung der EG-Frezeptorspezifischen Tyrosinproteinkinase (EGF-R-TPK) kann mittels bekannter Verfahren nachgewiesen werden, beispielsweise unter Verwendung der rekombinanten intrazellulären Domäne des EGF-Rezeptors; siehe zum Beispiel [3-5].The inhibition of EG freceptor-specific tyrosine protein kinase (EGF-R-TPK) can by known methods can be detected, for example using the recombinant intracellular domain of the EGF receptor; see for example [3-5].

Eine signifikante Aktivität (≧ 50%) wurde für eine Verbindung der Formel 1 (Beispiel 2) beobachtet (59%), die für die Hemmung der Proteinkinase-EGF-Rezeptor-Tyrosinkinase bei 10 µM ausgewählt wurde.Significant activity (≧ 50%) was observed for a compound of Formula 1 (Example 2) (59%) selected for the inhibition of protein kinase EGF receptor tyrosine kinase at 10 µM has been.

Die Wechselwirkung mit der estrogenbindenden Stelle besonders substituierter Verbindungen der Formel 1 zeigt sich in Radiologand-Bindungsstudien, beispielsweise unter Verwendung der Methoden von Oburn et al. [6] sowie Hartmann et al. [7].The interaction with the estrogen-binding site of particularly substituted compounds of the Formula 1 appears in radiologand binding studies, for example using the Methods by Oburn et al. [6] and Hartmann et al. [7].

Die Auswahl für die Hemmung der EGF-Rezeptor-Tyrosinkinase und die Verdrängung des Radioliganden aus den Estrogen-ER-α-bindenden Positionen bei 10µM zeigte eine signifikante Aktivität (≧50%) lediglich für die Verdrängung des Radioliganden aus Estrogen-ER-α-bindenden Positionen (104%) durch eine Verbindung der Formel 1 (Beispiel 1). Ebenfalls wurde eine schwache Tyrosinkinasehemmung (33%) beobachtet. Für diese Verbindung wurde eine RBA (relative Bindungsaffinität) von 0,78 beobachtet.The selection for the inhibition of EGF receptor tyrosine kinase and the displacement of the Radioligands from the estrogen ER-α binding positions at 10µM showed a significant Activity (≧ 50%) only for the displacement of the radioligand from estrogen-ER-α-binding Positions (104%) by a compound of formula 1 (Example 1). Also one weak inhibition of tyrosine kinase (33%) observed. For this connection, an RBA (relative binding affinity) of 0.78 was observed.

Die Verbindungen der Formel 1 bewirken eine Hemmung des Wachstums von Tumorzellen ebenfalls, wie gezeigt, durch beispielsweise den folgenden Test: der Test basiert auf einer Reduktion des Wachstums menschlicher MCF-7-Zellen [8, 9]. The compounds of formula 1 act to inhibit the growth of tumor cells also, as shown, for example by the following test: the test is based on a Reduction in the growth of human MCF-7 cells [8, 9].

Die Ergebnisse sind als prozentuale Werte für die Behandlungs-/Kontrollgruppe (T/C_corr [%]) angegeben. Eine Verbindung der Formel 1 (Beispiel 3) erreichte die maximale Wirkung von T/C_corr = 10% nach ca. 160 h bei einer Konzentration von 5 µMol.The results are given as percentages for the treatment / control group (T / C _corr [%]). A compound of formula 1 (example 3) achieved the maximum effect of T / C _corr = 10% after approx. 160 h at a concentration of 5 μmol.

Allgemein bezieht sich die vorliegende Erfindung auf die Verwendung der Verbindungen der Formel 1 zur Hemmung der Proteintyrosinkinasen, insbesondere der EGF-Rezeptor- Tyrosinkinase, zur Verwendung von Verbindungen der Formel 1 in der Wechselwirkung mit der estrogenbindenden Stelle und zur Verwendung von Verbindungen der Formel 1 bei der Hemmung des Wachstums von Tumorzellen, insbesondere von MCF-7-Zellen.In general, the present invention relates to the use of the compounds of Formula 1 for the inhibition of protein tyrosine kinases, especially the EGF receptor Tyrosine kinase, for the use of compounds of formula 1 in the interaction with the estrogen-binding site and for the use of compounds of formula 1 in the inhibition the growth of tumor cells, especially MCF-7 cells.

Bevorzugt für die Anwendung(en), pharmazeutische(n) Zusammensetzung(en), deren Herstellung und die vor- und nachstehend genannte(n) Behandlungsmethode(n) ist eine Verbindung der Formel 1, bei der R₁, R₂ und R₃, jeweils unabhängig voneinander, Wasserstoff, Hydroxy, niederes Alkoxy, insbesondere Methoxy oder niederes Alkyl, insbesondere Methyl darstellen. R₁ und R₂ bilden zusammen niederes Alkylendioxy, insbesondere Methylendioxy, wobei vorzugsweise R₂ aus der Gruppe ausgewählt wird, die aus Hydroxy und niederem Alkoxy besteht, insbesondere Methoxy oder niederes Alkyl, insbesondere Methyl, und wobei R₁ und R₃ aus der Gruppe ausgewählt werden, in der Wasserstoff enthalten ist; und unabhängig von R₂ aus Hydroxy oder aus niederem Alkoxy, insbesondere Methoxy; R₄ ist ein Halogen, insbesondere Chlor oder Brom oder Hydroxy oder Wasserstoff;
R₅ ist unabhängig von R₄ ein Halogen, insbesondere Chlor; Wasserstoff, Hydroxy;
R₅, falls vorhanden, ist vorzugsweise in Position 5 oder 6 des Indolheterocyclus in Formel 1 fixiert.
R₆ ist Wasserstoff oder ein niederes Alkyl, insbesondere Methyl.
X ist Imino oder ein substitutiertes Imino durch niederes Alkanoyl, insbesondere Acetyl; niederes Alkyl, insbesondere Methyl, Ethyl, n-Propyl oder Isopropyl; Carboxy-niederes Alkyl wie beispielsweise Carboxymethyl (-CH₂-COOH); niederes Alkoxycarbonyl-niederes Alkyl wie beispielsweise Methoxycarbonylmethyl oder Ethoxycarbonylmethyl (-CH₂-COOCH₃ oder -CH₂- COOCH₂CH₃); Aminocarbonyl (-CO-NH₂) oder Phenyl-niederes Alkyl, insbesondere 2-Phenylethyl; und
n ist 0 oder 1;
oder eines seiner Salze, falls mindestens eine salzbildende Gruppe vorliegt.Preferred for the application (s), pharmaceutical composition (s), their preparation and the treatment method (s) mentioned above and below is a compound of the formula 1 in which R ₁ , R ₂ and R ₃ , each independently, represent hydrogen, hydroxy, lower alkoxy, especially methoxy or lower alkyl, especially methyl. R ₁ and R ₂ together form lower alkylenedioxy, in particular methylenedioxy, R ₂ preferably being selected from the group consisting of hydroxy and lower alkoxy, in particular methoxy or lower alkyl, in particular methyl, and wherein R ₁ and R _{3 are selected} from the group be selected in which hydrogen is contained; and independently of R ₂ from hydroxy or from lower alkoxy, especially methoxy; R ₄ is a halogen, in particular chlorine or bromine or hydroxy or hydrogen;
R ₅ is a halogen, in particular chlorine, independently of R ₄ ; Hydrogen, hydroxy;
R ₅ , if present, is preferably fixed in position 5 or 6 of the indole heterocycle in formula 1.
R ₆ is hydrogen or a lower alkyl, especially methyl.
X is imino or a substituted imino by lower alkanoyl, especially acetyl; lower alkyl, especially methyl, ethyl, n-propyl or isopropyl; Carboxy lower alkyl such as carboxymethyl (-CH ₂ -COOH); lower alkoxycarbonyl-lower alkyl such as methoxycarbonylmethyl or ethoxycarbonylmethyl (-CH ₂ -COOCH ₃ or -CH ₂ - COOCH ₂ CH ₃ ); Aminocarbonyl (-CO-NH ₂ ) or phenyl-lower alkyl, especially 2-phenylethyl; and
n is 0 or 1;
or one of its salts if there is at least one salt-forming group.

Description of the process steps

Die Verbindungen der Formel 1 können nach per se bekannten Verfahren hergestellt werden (Verfahren, die auf neuen Zwischenprodukten basieren und/oder zu neuartigen Verbindungen der Formel 1 führen oder deren Salze, insbesondere die in dieser Patentschrift als neuartig bezeichneten Verbindungen, wobei es sich um analoge Verfahren handelt, die zumindest auf Grund der Tatsache neuartig sind, daß neue Ausgangsstoffe verwendet werden und/oder daß neue Verbindungen der Formel 1 das Ergebnis sind), vorzugsweise durch Reaktion eines Nitroisoflavons der Formel 3:
The compounds of the formula 1 can be prepared by processes known per se (processes which are based on new intermediates and / or lead to novel compounds of the formula 1 or their salts, in particular the compounds described as novel in this patent specification, which are analogous Processes that are novel at least due to the fact that new starting materials are used and / or that new compounds of formula 1 are the result), preferably by reaction of a nitroisoflavone of formula 3:

wobei
R₁, R₂, R₃, R₄, R₅ und n die selben Bedeutungen haben, die bereits oben für Verbindungen der Formel 1 verwendet wurden, mit Reduktionsmitteln, insbesondere Palladium-Holzkohle und Cyclohexen in Ethanol; oder Zink, Zinn oder Eisen in Essigsäure, insbesondere im Fall des halogensubstituierten 3-Phenylrings in Formel 3.in which
R ₁ , R ₂ , R ₃ , R ₄ , R ₅ and n have the same meanings which have already been used above for compounds of the formula 1, with reducing agents, in particular palladium-charcoal and cyclohexene in ethanol; or zinc, tin or iron in acetic acid, especially in the case of the halogen-substituted 3-phenyl ring in formula 3.

Examples

Die folgenden Beispiele dienen der Veranschaulichung der vorliegenden Erfindung, ohne den Umfang der Erfindung auf irgend eine Art einzuschränken. Die folgenden Abkürzungen werden verwendet:
The following examples serve to illustrate the present invention without restricting the scope of the invention in any way. The following abbreviations are used:

Anal.: Elementaranalyse
Calcd. Berechnet
D₆DMSO Perdeuterodimethylsulfoxid
CDCl₃ Deuterochloroform
ether Diethylether
h Stunde(n)
min Minute(n)
mp Schmelzpunkt
IR Infrarotspektroskopie
MS Massenspektroskopie
¹H-NMR ¹H-Kernresonanz-Spektroskopie
¹³C-NMR ¹³C-Kernresonanz-Spektroskopie
Anal .: Elemental analysis
Calcd. Calculated
D ₆ DMSO perdeuterodimethyl sulfoxide
CDCl ₃ deuterochloroform
ether diethyl ether
h hour (s)
min minute (s)
mp melting point
IR infrared spectroscopy
MS mass spectroscopy
¹ H NMR ¹ H nuclear magnetic resonance spectroscopy
¹³ C NMR ¹³ C nuclear magnetic resonance spectroscopy

In den Daten für Kernmagnetresonanzspektren verwendete Abkürzungen:
Abbreviations used in the data for nuclear magnetic resonance spectra:

d Duplett
m Multiplett
s Singlett
t Triplettd doublet
m multiplet
s single
t triplet

example 1 3- (2,4-dihydroxybenzoyl) -6-hydroxy-indole

Ein Gemisch aus 1,0 g (3,3 mMol) 3-(4-Hydroxy-2-nitrophenyl)-7-hydroxy-isoflavon und 1,0 g Palladium/Holzkohle (10%) in 200 ml Ethanol und 10 ml Cyclohexan wird 12 h rückfließend erhitzt. Nach Eliminieren des Katalysators wird das resultierende Filtrat bis zur Trockene eingedampft und ergibt einen grau-grünen, festen Stoff, der durch Flashchromatographie gereinigt wird (Dichlormethan/Methanol 9 : 1) und 3-(2,4-Dihydroxybenzoyl)-6-hydroxy-indol ergibt. Ausbeute 0,25 g (28%). mp: 254-255°C. - ¹H-NMR (D₆DMSO): d (ppm) = 6,31 (s, 1H), 6,39 (d, 1H), 6,71 (d, 1H), 6,85 (s, 1H), 7,78 (d, 1H), 7,87 (d, 1H), 7,88 (s, 1H), 9,22 (s, 1H), 10,32 (s, 1H), 11,72 (s, 1H), 12,72 (s, 1H). - ¹³C-NMR (D₆DMSO): d (ppm) 191,8. - IR (KBr): 3429-3320, 1629 cm^-1. MS: (m/z) = 269 (M⁺), entsprechend C₁₅H₁₁NO₄ (269,24). Elementaranalyse berechnet für C 62,72 H 4,52 N 4,88 (C₁₅H₁₁NO₄. H₂O, 287,26). Gefunden C 62,39 H 4,55 N 4,81.A mixture of 1.0 g (3.3 mmol) of 3- (4-hydroxy-2-nitrophenyl) -7-hydroxy-isoflavone and 1.0 g of palladium / charcoal (10%) in 200 ml of ethanol and 10 ml of cyclohexane is refluxed for 12 h. After eliminating the catalyst, the resulting filtrate is evaporated to dryness and gives a gray-green, solid substance which is purified by flash chromatography (dichloromethane / methanol 9: 1) and 3- (2,4-dihydroxybenzoyl) -6-hydroxy- indole results. Yield 0.25 g (28%). mp: 254-255 ° C. - ¹ H NMR (D ₆ DMSO): d (ppm) = 6.31 (s, 1H), 6.39 (d, 1H), 6.71 (d, 1H), 6.85 (s, 1H) ), 7.78 (d, 1H), 7.87 (d, 1H), 7.88 (s, 1H), 9.22 (s, 1H), 10.32 (s, 1H), 11.72 (s, 1H), 12.72 (s, 1H). ¹³ C NMR (D ₆ DMSO): d (ppm) 191.8. - IR (KBr): 3429-3320, 1629 cm ^-1 . MS: (m / z) = 269 (M ⁺ ), corresponding to C ₁₅ H ₁₁ NO ₄ (269.24). Elemental analysis calculated for C 62.72 H 4.52 N 4.88 (C ₁₅ H ₁₁ NO ₄ .H ₂ O, 287.26). Found C 62.39 H 4.55 N 4.81.

Das Ausgangsmaterial wird wie folgt vorbereitet:The starting material is prepared as follows:

4-methoxy-2-nitrophenylacetic acid

Ein Gemisch aus 6,0 g (31,2 mMol) 4-Methoxy-2-nitrophenylacetonitril [10], 40 ml konzentrierter Schwefelsäure und 60 ml Wasser wird 15 Minuten unter Rückfluß gehalten. Nach Abkühlung auf Raumtemperatur wird das Gemisch auf Eis gegossen. Der beigefarbene Niederschlag wird gesammelt, getrocknet und durch Kristallisation aus Ethanol/Petrolether 1 : 1 gereinigt, wodurch man braune 4-Methoxy-2-nitrophenylessigsäurekristalle erhält. Ausbeute 5,5 g (83%). mp: 156 °C. - ¹H-NMR (D₆DMSO): d (ppm): 3,85 (s, 3H), 3,90 (s, 2H), 7,28 (d, 1H), 7,44 (d, 1H), 7,59 (s, 1H), 12,44 (s, 1H). - IR (KBr): 3440, 1698 cm^-1. - MS: (m/z) = 211 (M⁺), entsprechend C₉H₉NO₅ (211,17). Elementaranalyse berechnet für C 51,18 H 4,26 N 6,63. Gefunden C 51,35 H 4,25 N 6,65.A mixture of 6.0 g (31.2 mmol) of 4-methoxy-2-nitrophenylacetonitrile [10], 40 ml of concentrated sulfuric acid and 60 ml of water is refluxed for 15 minutes. After cooling to room temperature, the mixture is poured onto ice. The beige precipitate is collected, dried and purified by crystallization from ethanol / petroleum ether 1: 1, whereby brown 4-methoxy-2-nitrophenylacetic acid crystals are obtained. Yield 5.5 g (83%). mp: 156 ° C. - ¹ H NMR (D ₆ DMSO): d (ppm): 3.85 (s, 3H), 3.90 (s, 2H), 7.28 (d, 1H), 7.44 (d, 1H) ), 7.59 (s, 1H), 12.44 (s, 1H). - IR (KBr): 3440, 1698 cm ^-1 . - MS: (m / z) = 211 (M ⁺ ), corresponding to C ₉ H ₉ NO ₅ (211.17). Elemental analysis calculated for C 51.18 H 4.26 N 6.63. Found C 51.35 H 4.25 N 6.65.

2- (4-methoxy-2-nitrophenyl) -1- (2,4-dihydroxyphenyl) ethanone

2,2 g (10,4 mMol) 4-Methoxy-2-nitrophenylessigsäure und 1,1 g (9,99 mMol) Resorcinol (1,3- Dihydroxybenzol, Fluka, Buchs, Schweiz) werden in 100 ml (779 mMol) Bortrifluoridetherat (Lancaster Synthesis, Mühlheim, Deutschland) gelöst. Die braune Lösung wird 1,5 h auf 100°C erhitzt und sodann in eine wässrige Natriumacetatlösung (60 g Natriumacetat/500 ml Wasser) gegossen und mit Ether (150 ml) extrahiert. Die organische Phase wird mit 100 ml wäßrigem Natriumacetat extrahiert, über Natriumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wird unter Vakuum eliminiert, und man erhält ein braunes Öl, das durch Flashchromatographie gereinigt wird (Ethylacetat/n-Hexan 1 : 1), wodurch man das Rohprodukt erhält. Die Kristallisation aus Ethylacetat/n-Hexan 1 : 1 ergab hellgelbe 2-(4-Methoxy-2-nitrophenyl-1-(2, 4-dihydroxyphenyl)- Ethanonkristalle. Ausbeute 2,15 g (71%). mp: 155°C. - 1H-NMR (D₆DMSO): d (ppm): 3,87 (s, 3H), 4,72 (s, 2H), 6,29 (s, 1 H), 6,43 (d, 1 H), 7,33 (d, 1 H), 7,46 (d, 1 H), 7,63 (s, 1 H), 7,93 (d, 1H), 10,65 (s, 1H), 12,05 (s, 1H). - IR (KBr): 3370, 1628 cml. - MS: (m/z) = 303 (M⁺), entsprechend C₁₅H₁₃NO₆ (303,26). Elementaranalyse berechnet für C 59,40 H 4,29 N 4,62. Gefunden C 59,31 H 4,33 N 4,61.2.2 g (10.4 mmol) of 4-methoxy-2-nitrophenylacetic acid and 1.1 g (9.99 mmol) of resorcinol (1,3-dihydroxybenzene, Fluka, Buchs, Switzerland) are dissolved in 100 ml (779 mmol) Boron trifluoride etherate (Lancaster Synthesis, Mühlheim, Germany) solved. The brown solution is heated to 100 ° C. for 1.5 hours and then poured into an aqueous sodium acetate solution (60 g sodium acetate / 500 ml water) and extracted with ether (150 ml). The organic phase is extracted with 100 ml of aqueous sodium acetate and dried over sodium sulfate. The solvent is eliminated in vacuo to give a brown oil which is purified by flash chromatography (ethyl acetate / n-hexane 1: 1) to give the crude product. Crystallization from ethyl acetate / n-hexane 1: 1 gave light yellow 2- (4-methoxy-2-nitrophenyl-1- (2,4-dihydroxyphenyl) ethanone crystals. Yield 2.15 g (71%). Mp: 155 ° C. - 1H NMR (D ₆ DMSO): d (ppm): 3.87 (s, 3H), 4.72 (s, 2H), 6.29 (s, 1H), 6.43 (d , 1 H), 7.33 (d, 1 H), 7.46 (d, 1 H), 7.63 (s, 1 H), 7.93 (d, 1H), 10.65 (s, 1H), 12.05 (s, 1H). - IR (KBr): 3370, 1628 cml. - MS: (m / z) = 303 (M ⁺ ), corresponding to C ₁₅ H ₁₃ NO ₆ (303.26) Elemental analysis calculated for C 59.40 H 4.29 N 4.62 Found C 59.31 H 4.33 N 4.61.

3- (4-methoxy-2-nitrophenyl) -7-hydroxy-isoflavone

Ein Gemisch aus 2,14 g (7,06 mMol) 2-(4-Methoxy-2-nitrophenyl-1-(2,4-dihydroxyphenyl)-ethanon, 2 g (16,8 mMol) N,N-Dimethylformamiddimethylacetal (Lancaster Synthesis, Mühlheim, Deutschland) und 120 ml Tetrahydrofuran wird 1 h bei 90°C unter Rückfluß gehalten. Nach Abkühlung auf Raumtemperatur wird das Gemisch unter Vakuum bis zur Trockne eingedampft. Der erhaltene Rückstand wird mit 150 ml Essigsäure (50%) unter Rückfluß gehalten und erzeugt einen Niederschlag, der aus Ethanol/Petrolether rekristalliert wird und 3-(4-Methoxy-2- nitrophenyl)-7-hydroxy-isoflavon in Form hellgelber Kristalle bildet. Ausbeute 1,5 g (68%). mp: 248-249°C. - ¹H-NMR (D₆DMSO): d (ppm): 3,90 (s, 3H), 6,91 (s, 1H), 6,94 (d, 1H), 7,37 (d, 1H), 7,48 (d, 1H), 7,61 (s, 1H), 7,89 (d, 1H), 8,47 (s, 1H), 10,41 (s, 1H). - IR (KBr): 3422, 1624 cm^-1 - MS: (m/z) = 313 (M⁺), entsprechend C₁₆H₁₁NO₆ (313,26). Elementaranalyse berechnet für C 61,34 H 3,51 N 4,57. Gefunden C 61,21 H 3,75 N 4,48.A mixture of 2.14 g (7.06 mmol) of 2- (4-methoxy-2-nitrophenyl-1- (2,4-dihydroxyphenyl) ethanone, 2 g (16.8 mmol) of N, N-dimethylformamide dimethyl acetal ( Lancaster Synthesis, Mühlheim, Germany) and 120 ml of tetrahydrofuran is refluxed for 1 h at 90 ° C. After cooling to room temperature, the mixture is evaporated to dryness in vacuo, and the residue obtained is refluxed with 150 ml of acetic acid (50%) maintained and produced a precipitate which is recrystallized from ethanol / petroleum ether and forms 3- (4-methoxy-2-nitrophenyl) -7-hydroxy-isoflavone in the form of light yellow crystals. Yield 1.5 g (68%). mp: 248 -249 ° C. ¹ H NMR (D ₆ DMSO): d (ppm): 3.90 (s, 3H), 6.91 (s, 1H), 6.94 (d, 1H), 7. 37 (d, 1H), 7.48 (d, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.89 (d, 1H), 8.47 (s, 1H), 10.41 (s, 1H) - IR (KBr): 3422, 1624 cm ^-1 - MS: (m / z) = 313 (M ⁺ ), corresponding to C ₁₆ H ₁₁ NO ₆ (313.26). Elemental analysis calculated for C 61.34 H 3.51 N 4.57 Found C 61.21 H 3.75 N 4.48.

3- (4-Hydroxy-2-nitrophenyl) -7-hydroxy-isoflavone

1,5 g (4,8 mMol) 3-(4-Methoxy-2-nitrophenyl)-7-hydroxy-isoflavon werden zu 70 ml Bromwasserstoffsäure (48%) hinzugegeben und 12 h unter Rückfluß gehalten. Anschließend wird das Lösungsmittel unter Vakuum eliminiert. Wasser wird zugegeben, und der resultierende Niederschlag wird durch Filtration gesammelt. Die erhaltene feste Substanz wird durch Flashchromatoprahie (Ethylacetat/Ethanol 9 : 1) gereinigt und ergibt das Rohprodukt. Kristallisation aus Ethanol/Petrolether ergibt gelbe 3-(4-Hydroxy-2-nitrophenyl)-7-hydroxyisoflavonkristalle. Ausbeute 1,0 g (70%). mp: 290°C (Z). - ¹H-NMR (D₆DMSO): d (ppm): 6,91 (s, 1H), 6,94 (d, 1H), 7,17 (d, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,88 (d, 1H), 8,42 (s, 1H), 10,53 (s, 1H), 10,86 (s, 1H). - IR (KBr): 3360- 3252, 1625 cm^-1. - MS: (m/z) = 299 (M⁺), entsprechend C₁₅H₉NO₆ (299,23). Elementaranalyse berechnet für C 58,44 H 3,24 N 4,54 (C₁₅H₉NO₆.1/2 H₂O, 308,24). Gefunden C 58,30 H 3,22 N 4,47.1.5 g (4.8 mmol) of 3- (4-methoxy-2-nitrophenyl) -7-hydroxy-isoflavone are added to 70 ml of hydrobromic acid (48%) and kept under reflux for 12 h. The solvent is then eliminated under vacuum. Water is added and the resulting precipitate is collected by filtration. The solid substance obtained is purified by flash chromatography (ethyl acetate / ethanol 9: 1) and gives the crude product. Crystallization from ethanol / petroleum ether gives yellow 3- (4-hydroxy-2-nitrophenyl) -7-hydroxyisoflavone crystals. Yield 1.0 g (70%). mp: 290 ° C (Z). - ¹ H NMR (D ₆ DMSO): d (ppm): 6.91 (s, 1H), 6.94 (d, 1H), 7.17 (d, 1H), 7.35 (s, 1H) ), 7.88 (d, 1H), 8.42 (s, 1H), 10.53 (s, 1H), 10.86 (s, 1H). - IR (KBr): 3360-3252, 1625 cm ^-1 . - MS: (m / z) = 299 (M ⁺ ), corresponding to C ₁₅ H ₉ NO ₆ (299.23). Elemental analysis calculated for C 58.44 H 3.24 N 4.54 (C ₁₅ H ₉ NO ₆ .1 / 2 H ₂ O, 308.24). Found C 58.30 H 3.22 N 4.47.

Example 2 3- (2,4-dihydroxybenzoyl) -5-chloroindole

Ein Gemisch aus 0,25 g (0,79 mMol) 3-(5-Chlor-2-nitrophenyl)-7-hydroxyisoflavon und 0,7 g Zink in 30 ml Essigsäure (50%) wird 2,5 Stunden rückfließend erhitzt. Nach Entfernen des Zinks wird das Filtrat auf Eis (100 g) gegossen. Die resultierende Lösung wird mit Ethylacetat extrahiert (2 × 150 ml). Die organische Phase wird über Natriumsulfat getrocknet, zur Trockne eingedampft und ergibt eine feste, gelb-grüne Substanz, die zwei Mal mittels Flashchromatographie gereinigt wird (Dichlormethan/Methanol 9 : 1), wodurch man reines 3-(2,4-Dihydroxybenzoyl)-5-chlorindol zusammen mit 1 Mol H₂O erhält. Ausbeute 0,1 g (43%). mp: 205°C. - ¹H-NMR (D₆DMSO): d (ppm): 6,33 (s, 1H), 6,42 (d, 1H), 7,26 (d, 1H), 7,53 (d, 1H), 7,79 (d, 1H), 8,10 (s, 1H), 8,17 (s, 1H), 10,40 (s, 1H), 12,77 (s, 1H), 12,48 (s, 1H). - IR (KBr): 3450 - 3300, 1626 cm^-1. - MS: (m/z) = 287 (M⁺), entsprechend C₁₅H₁₀ClNO₃ (287,69). Elementaranalyse berechnet für C 59,01 H 3,93 N 4,59 (C₁₅H₁₀ClNO₃.H₂O, 305,70). Gefunden C 59,20 H 3,86 N 4,39.A mixture of 0.25 g (0.79 mmol) of 3- (5-chloro-2-nitrophenyl) -7-hydroxyisoflavone and 0.7 g of zinc in 30 ml of acetic acid (50%) is refluxed for 2.5 hours. After removing the zinc, the filtrate is poured onto ice (100 g). The resulting solution is extracted with ethyl acetate (2 x 150 ml). The organic phase is dried over sodium sulfate, evaporated to dryness and gives a solid, yellow-green substance which is purified twice by flash chromatography (dichloromethane / methanol 9: 1), whereby pure 3- (2,4-dihydroxybenzoyl) - 5-chloroindole together with 1 mol of H ₂ O is obtained. Yield 0.1 g (43%). mp: 205 ° C. - ¹ H NMR (D ₆ DMSO): d (ppm): 6.33 (s, 1H), 6.42 (d, 1H), 7.26 (d, 1H), 7.53 (d, 1H) ), 7.79 (d, 1H), 8.10 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 10.40 (s, 1H), 12.77 (s, 1H), 12.48 (s, 1H). - IR (KBr): 3450-3300, 1626 cm ^-1 . - MS: (m / z) = 287 (M ⁺ ), corresponding to C ₁₅ H ₁₀ ClNO ₃ (287.69). Elemental analysis calculated for C 59.01 H 3.93 N 4.59 (C ₁₅ H ₁₀ ClNO ₃ .H ₂ O, 305.70). Found C 59.20 H 3.86 N 4.39.

5-chloro-2-nitrophenylacetic acid

Ein Gemisch aus 4 g (20,4 mMol) 5-Chlor-2-nitrophenylacetonitril [11], 30 ml konzentrierter Schwefelsäure und 45 ml Wasser wird 15 Minuten unter Rückfluß gehalten. Nach Abkühlung auf Raumtemperatur wird das Gemisch auf Eis gegossen. Der beigefarbene Niederschlag wird gesammelt, getrocknet und durch Kristallisation aus Ethylacetat 1 n-Hexan (1 : 1) gereinigt, wodurch man beigefarbene 5-Chlor-2-nitrophenylessigsäurekristalle erhält. Ausbeute 3,2 g (73%). mp: 159 °C. - ¹H-NMR (D₆DMSO): d (ppm): 4,01 (s, 2H), 7,65 (d, 1H), 7,73 (s, 1H), 8,12 (s, 1H), 12,63 (s, 1H). - IR (KBr): 3550-3410, 1708 cml. - MS: (m/z) = 215 (M⁺), entsprechend C₈H₆ClNO₄ (215,58). Elementaranalyse berechnet für C 44,57 H 4,80 N 6,50. Gefunden C 44,61 H 2,77 N 6,53.A mixture of 4 g (20.4 mmol) of 5-chloro-2-nitrophenylacetonitrile [11], 30 ml of concentrated sulfuric acid and 45 ml of water is kept under reflux for 15 minutes. After cooling to room temperature, the mixture is poured onto ice. The beige precipitate is collected, dried and purified by crystallization from ethyl acetate 1 n-hexane (1: 1) to give beige 5-chloro-2-nitrophenylacetic acid crystals. Yield 3.2 g (73%). mp: 159 ° C. - ¹ H NMR (D ₆ DMSO): d (ppm): 4.01 (s, 2H), 7.65 (d, 1H), 7.73 (s, 1H), 8.12 (s, 1H) ), 12.63 (s, 1H). - IR (KBr): 3550-3410, 1708 cml. - MS: (m / z) = 215 (M ⁺ ), corresponding to C ₈ H ₆ ClNO ₄ (215.58). Elemental analysis calculated for C 44.57 H 4.80 N 6.50. Found C 44.61 H 2.77 N 6.53.

2- (5-chloro-2-nitrophenyl) -1- (2,4-dihydroxyphenyl) ethanone

5,6 g (26,0 mMol) 5-Chlor-2-nitrophenylessigsäure und 3,2 g (29,1 mMol) Resorcinol (1,3- Dihydroxybenzol, Fluka, Buchs, Schweiz) werden in 240 ml (1,87 Mol) Bortrifluoridetherat (Lancaster Synthesis, Mühlheim, Deutschland) gelöst. Die braune Lösung wird 1,5 h auf 100°C erhitzt und sodann in eine wäßrige Natriumacetatlösung (60 g Natriumacetat/500 ml Wasser) gegossen und mit Ether (200 ml) extrahiert. Die organische Phase wird mit 100 ml wäßrigem Natriumacetat extrahiert, über Natriumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wird unter Vakuum eliminiert, und man erhält ein braunes Öl, das durch Flashchromatographie gereinigt wird (Ethylacetat/n-Hexan 1 : 1), wodurch man das Rohprodukt erhält. Die Kristallisation aus Ethylacetat/n-Hexan 1 : 1 ergab hellgelbe 2-(5-Chlor-2-nitrophenyl-1-(2,4-dihydroxyphenyl)- Ethanonkristalle. Ausbeute 2,2 g (27.5%). mp: 180-181°C. - ¹H-NMR (D₆DMSO): d (ppm): 4,82 (s, 2H), 6,30 (s, 1H), 6,44 (d, 1H), 7,67 (d, 1H), 7,73 (ds, 1H), 7,89 (d, 1H), 8,15 (d, 1H), 10,68 (s, 1H), 11,89 (s, 1H). - IR (KBr): 3250-3410, 1631 cm^-1. - MS: (m/z) = 307 (M⁺), entsprechend C₁₄H₁₀ClNO₅ (307,68). Elementaranalyse berechnet für C 54,65 H 3,28 N 4,55, Gefunden C 54,74 H 3,23 N 4,57.5.6 g (26.0 mmol) of 5-chloro-2-nitrophenylacetic acid and 3.2 g (29.1 mmol) of resorcinol (1,3-dihydroxybenzene, Fluka, Buchs, Switzerland) are dissolved in 240 ml (1.87 Mol) dissolved boron trifluoride etherate (Lancaster Synthesis, Mühlheim, Germany). The brown solution is heated to 100 ° C. for 1.5 h and then poured into an aqueous sodium acetate solution (60 g sodium acetate / 500 ml water) and extracted with ether (200 ml). The organic phase is extracted with 100 ml of aqueous sodium acetate and dried over sodium sulfate. The solvent is eliminated in vacuo to give a brown oil which is purified by flash chromatography (ethyl acetate / n-hexane 1: 1) to give the crude product. Crystallization from ethyl acetate / n-hexane 1: 1 gave light yellow 2- (5-chloro-2-nitrophenyl-1- (2,4-dihydroxyphenyl) ethanone crystals. Yield 2.2 g (27.5%). Mp: 180- 181 ° C. ¹ H NMR (D ₆ DMSO): d (ppm): 4.82 (s, 2H), 6.30 (s, 1H), 6.44 (d, 1H), 7.67 (d, 1H), 7.73 (ds, 1H), 7.89 (d, 1H), 8.15 (d, 1H), 10.68 (s, 1H), 11.89 (s, 1H) - IR (KBr): 3250-3410, 1631 cm ^-1 . - MS: (m / z) = 307 (M ⁺ ), corresponding to C ₁₄ H ₁₀ ClNO ₅ (307.68). Elemental analysis calculated for C 54, 65 H 3.28 N 4.55, Found C 54.74 H 3.23 N 4.57.

2- (5-chloro-2-nitrophenyl) -7-hydroxy-isoflavone

Ein Gemisch aus 0,43 g (1,4 mMol) 2-(5-Chlor-2-nitrophenyl)-1-(2,4-dihydroxyphenyl)-ethanon, 1 g (9,34 mMol) N,N-Dimethylformamiddimethylacetal (Lancaster Synthesis, Mühlheim, Deutschland) und 320 ml Tetrahydrofuran wird 1 h bei 90°C unter Rückfluß gehalten. Nach Abkühlung auf Raumtemperatur wird das Gemisch unter Vakuum bis zur Trockne eingedampft. Der erhaltene Rückstand wird mit 50 ml Essigsäure (50%) unter Rückfluß gehalten und erzeugt einen Niederschlag, der aus Essigsäure rekristalliert wird und 3-(5-Chlor-2-nitrophenyl)-7-hydroxy- isoflavon in Form hellgelber Kristalle erzeugt. Ausbeute 0,3 g (68%). mp: 223°C. - ¹H-NMR (D₆DMSO): d (ppm): 6,94 (s, 1H), 6,96 (d, 1H), 7,74 (s, 1H), 7,76 (d, 1H), 7,90 (d, 1H), 8,11 (d, 1H), 8,61 (s, 1H), 10,96 (s, 1H). - IR (KBr): 3580 - 3180, 1629 cm^-1. - MS: (m/z) = 317 (M⁺), entsprechend C₁₅H₈ClO₅ (317,67). Elementaranalyse berechnet für C 56,71 H 2,54 N 4,41. Gefunden C 56,73 H 2,60 N 4,38.A mixture of 0.43 g (1.4 mmol) of 2- (5-chloro-2-nitrophenyl) -1- (2,4-dihydroxyphenyl) ethanone, 1 g (9.34 mmol) of N, N-dimethylformamide dimethyl acetal (Lancaster Synthesis, Mühlheim, Germany) and 320 ml of tetrahydrofuran is kept under reflux at 90 ° C. for 1 h. After cooling to room temperature, the mixture is evaporated to dryness in vacuo. The residue obtained is refluxed with 50 ml of acetic acid (50%) and produces a precipitate which is recrystallized from acetic acid and produces 3- (5-chloro-2-nitrophenyl) -7-hydroxy-isoflavone in the form of light yellow crystals. Yield 0.3 g (68%). mp: 223 ° C. - ¹ H NMR (D ₆ DMSO): d (ppm): 6.94 (s, 1H), 6.96 (d, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.76 (d, 1H) ), 7.90 (d, 1H), 8.11 (d, 1H), 8.61 (s, 1H), 10.96 (s, 1H). - IR (KBr): 3580 - 3180, 1629 cm ^-1 . - MS: (m / z) = 317 (M ⁺ ), corresponding to C ₁₅ H ₈ ClO ₅ (317.67). Elemental analysis calculated for C 56.71 H 2.54 N 4.41. Found C 56.73 H 2.60 N 4.38.

Example 3 3- (2-hydroxy-4-methylbenzoyl) indole

Ein Gemisch aus 0,52 g (1,86 mMol) 3-(2-Nitrophenyl)-7-methyl-isoflavon und 300 mg Palladium/Holzkohle (10%) in 50 ml Ethanol und 10 ml Cyclohexan wird 20 h rückfließend erhitzt. Nach Eliminieren des Katalysators wurde das resultierende Filtrat bis zur Trockene eingedampft. Die resultierende feste Substanz wird aus Dichlormethan/Methanol (9 : 1) rekristallisiert und ergibt gelbe 3-(2-Hydroxy-4-methylbenzoyl)-Indolkristalle. Ausbeute 0,19 g (54%). mp: 162°C. - ¹H- NMR (CDCl₃): d (ppm) = 2,38 (s, 3H), 6,72 (d, 1H), 6,88 (s, 1H), 7,30-7,35 (m, 2H), 7,45-7,47 (m, 1H), 7,76-7,78 (m, 2H), 8,24 (dd, 1H), 8,66 (s, 1H), 11,94 (s, 1H). - ¹³C-NMR (CDCl₃): d (ppm) 194,0. - IR (KBr): 3257 cm^-1. MS: (m/z) = 251 (M⁺), entsprechend C₁₆H₁₃NO₂ (251,29). Elementaranalyse berechnet für C 76,47 H 5,21 N 5,57. Gef. C 75,77 M 5,12 N 5,43.A mixture of 0.52 g (1.86 mmol) of 3- (2-nitrophenyl) -7-methyl-isoflavone and 300 mg of palladium / charcoal (10%) in 50 ml of ethanol and 10 ml of cyclohexane is refluxed for 20 hours. After eliminating the catalyst, the resulting filtrate was evaporated to dryness. The resulting solid substance is recrystallized from dichloromethane / methanol (9: 1) and gives yellow 3- (2-hydroxy-4-methylbenzoyl) indole crystals. Yield 0.19 g (54%). mp: 162 ° C. - ¹ H NMR (CDCl ₃ ): d (ppm) = 2.38 (s, 3H), 6.72 (d, 1H), 6.88 (s, 1H), 7.30-7.35 ( m, 2H), 7.45-7.47 (m, 1H), 7.76-7.78 (m, 2H), 8.24 (dd, 1H), 8.66 (s, 1H), 11 , 94 (s, 1H). ¹³ C NMR (CDCl ₃ ): d (ppm) 194.0. - IR (KBr): 3257 cm ^-1 . MS: (m / z) = 251 (M ⁺ ), corresponding to C ₁₆ H ₁₃ NO ₂ (251.29). Elemental analysis calculated for C 76.47 H 5.21 N 5.57. Found C 75.77 M 5.12 N 5.43.

3-methylphenyl-2-nitro-phenylacetate

Zu einer Lösung von 10 g (55,2 mMol) 2-Nitro-phenylessigsäure in 100 ml absolutem Dichlormethan wurden 21 g (164,4 mMol) Oxalylchlorid gegeben. Dieses Gemisch wurde bei Raumtemperatur 15 h gerührt, und das Lösungsmittel wurde unter Vakuum eliminiert. Das resultierende Säurechlorid wurde in 40 ml Ether gelöst, und die Lösung wurde tropfenweise zu einer Lösung aus 5,94 g (55,2 mMol) 3-Methylphenol und 5,5 g (55 mMol) Triethylamin in 150 ml Ether gegeben. Das Gemisch wurde unter Rückfluß 1 h unter Rühren erhitzt und anschließend auf Raumtemperatur abgekühlt. Der sich ergebende Niederschlag wurde abfiltriert, und das Filtrat wurde mit gesättigter, wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung (3 × 50 ml) und Wasser (3 × 50 ml) gewaschen. Die organische Schicht wurde über Magnesiumsulfat getrocknet, und das Lösungsmittel wurde unter Vakuum eliminiert. Das Ergebnis war ein braunes Öl, bestehend aus 3- Methylphenyl 2-nitrophenylacetat. Ausbeute 24,38 g (82%). - ¹H-NMR (CDCl₃): d (ppm): 2,33 (s, 3H), 4,24 (s, 2H), 6,60-6,70 (m, 1H), 6,90 (d, 1H), 6,98 (d, 1H), 7,21-7,25 (m, 1H), 7,43-7,52 (m, 2H), 7,63 (dt, 1H), 8,20 (d, 1H). - IR (NaCl): 1758 cm^-1. - MS: (m/z) = 271 (M⁺), entsprechend C₁₅H₁₃NO₄ (271,28). Elementaranalyse berechnet für C 66,41 H 4,83 N 5,16. Gefunden C 66,36 H 4,95 N 5, 27.21 g (164.4 mmol) of oxalyl chloride were added to a solution of 10 g (55.2 mmol) of 2-nitro-phenylacetic acid in 100 ml of absolute dichloromethane. This mixture was stirred at room temperature for 15 hours and the solvent was eliminated under vacuum. The resulting acid chloride was dissolved in 40 ml of ether and the solution was added dropwise to a solution of 5.94 g (55.2 mmol) of 3-methylphenol and 5.5 g (55 mmol) of triethylamine in 150 ml of ether. The mixture was heated under reflux with stirring for 1 h and then cooled to room temperature. The resulting precipitate was filtered off and the filtrate was washed with saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution (3 × 50 ml) and water (3 × 50 ml). The organic layer was dried over magnesium sulfate and the solvent was eliminated in vacuo. The result was a brown oil consisting of 3-methylphenyl 2-nitrophenylacetate. Yield 24.38 g (82%). - ¹ H NMR (CDCl ₃ ): d (ppm): 2.33 (s, 3H), 4.24 (s, 2H), 6.60-6.70 (m, 1H), 6.90 ( d, 1H), 6.98 (d, 1H), 7.21-7.25 (m, 1H), 7.43-7.52 (m, 2H), 7.63 (dt, 1H), 8 , 20 (d, 1H). - IR (NaCl): 1758 cm ^-1 . - MS: (m / z) = 271 (M ⁺ ), corresponding to C ₁₅ H ₁₃ NO ₄ (271.28). Elemental analysis calculated for C 66.41 H 4.83 N 5.16. Found C 66.36 H 4.95 N 5, 27.

2 - (- 2-nitrophenyl) -1- (2-hydroxy-4-methylphenyl) ethanone

Ein Gemisch aus 0,98 g (3,6 mMol) 3-Methylphenyl-2-nitro-phenylacetat und 0,92 g (6,8 mMol) Aluminiumchlorid wurde 0,5 h lang auf 80°C erhitzt. Die Temperatur wurde über einen Zeitraum von 1 h schrittweise auf 160°C erhöht, und das Reaktionsgemisch wurde 1,5 h lang bei 160°C gerührt. Das Rohprodukt wurde auf Raumtemperatur abgekühlt und mit 20 ml 3-N-Salzsäure hydrolysiert. Der resultierende Rückstand wurde in 10 ml Ethylacetat gelöst und durch Flashchromatographie (Ethylacetat) gereinigt und ergab reines 2-(2-Nitrophenyl)-1-(2-hydroxy-4- methylphenyl)ethanon in Form beigefarbener Kristalle. Ausbeute 0,7 g (23%). mp: 134°C. - ¹H- NMR (CDCl₃): d (ppm): 2,40 (s, 3H), 4,74 (s, 2H), 6,79 (t, 2H), 7,35 (d, 1H), 7,51 (t, 1H), 7,63 (t, 1H), 7,77 (d, 1H), 8,17 (d, 1H), 11,83 (s, 1H). - IR (KBr): 1624 cm^-1. - MS: (m/z) = 271 (M⁺), entsprechend C₁₅H₁₃NO₄ (271,28). Elementaranalyse berechnet für C 66,41 H 4,83 N 5,16. Gefunden C 66,29 H 4,82 N 5,01. A mixture of 0.98 g (3.6 mmol) of 3-methylphenyl-2-nitro-phenylacetate and 0.92 g (6.8 mmol) of aluminum chloride was heated to 80 ° C for 0.5 h. The temperature was gradually raised to 160 ° C over a period of 1 hour and the reaction mixture was stirred at 160 ° C for 1.5 hours. The crude product was cooled to room temperature and hydrolyzed with 20 ml of 3N hydrochloric acid. The resulting residue was dissolved in 10 ml of ethyl acetate and purified by flash chromatography (ethyl acetate) to give pure 2- (2-nitrophenyl) -1- (2-hydroxy-4-methylphenyl) ethanone in the form of beige crystals. Yield 0.7 g (23%). mp: 134 ° C. - ¹ H NMR (CDCl ₃ ): d (ppm): 2.40 (s, 3H), 4.74 (s, 2H), 6.79 (t, 2H), 7.35 (d, 1H) , 7.51 (t, 1H), 7.63 (t, 1H), 7.77 (d, 1H), 8.17 (d, 1H), 11.83 (s, 1H). - IR (KBr): 1624 cm ^-1 . - MS: (m / z) = 271 (M ⁺ ), corresponding to C ₁₅ H ₁₃ NO ₄ (271.28). Elemental analysis calculated for C 66.41 H 4.83 N 5.16. Found C 66.29 H 4.82 N 5.01.

3 - (- 2-nitrophenyl) -7-methyl-isoflavone

Ein Gemisch aus 0,37 g (1,38 mMol) 2-(-2-Nitrophenyl-1-(2-hydroxy-4-methylphenyl)ethanon und 15 ml N,N-Dimethylformamiddimethylacetal wurde 0,5 h unter Rückfluß gehalten. Nach Abkühlung auf Raumtemperatur wurde der Niederschlag durch Filtration gesammelt und aus Methanol kristallisiert. Man erhält 3-(2-Nitrophenyl)-7-methyl-isoflavon in Form beigefarbener Kristalle. Ausbeute 0,27 g (68%). mp: 188°C. - ¹H-NMR (CDCl₃): d (ppm): 2,51 (s, 3H), 7,24 (d, 2H), 7,37 (dd, 1 H), 7,56 (dt, 1H), 7,67 (dt, 1H), 8,00 (s, 1H), 8,09 (d, 1H), 8,12 (d, 1H). - IR (KBr): 1641 cm^-1 - MS: (m/z) = 281 (M⁺), entsprechend C₁₆H₁₁NO₄ (281,27). Elementaranalyse berechnet für C 68,32 H 3,94 N 4,98. Gefunden C 68,14 H 4,03 N 4,81.A mixture of 0.37 g (1.38 mmol) of 2 - (- 2-nitrophenyl-1- (2-hydroxy-4-methylphenyl) ethanone and 15 ml of N, N-dimethylformamide dimethyl acetal was held under reflux for 0.5 h. After cooling to room temperature, the precipitate was collected by filtration and crystallized from methanol to give 3- (2-nitrophenyl) -7-methyl-isoflavone in the form of beige crystals. Yield 0.27 g (68%). Mp: 188 ° C. - ¹ H NMR (CDCl ₃ ): d (ppm): 2.51 (s, 3H), 7.24 (d, 2H), 7.37 (dd, 1 H), 7.56 (dt, 1H), 7.67 (dt, 1H), 8.00 (s, 1H), 8.09 (d, 1H), 8.12 (d, 1H). - IR (KBr): 1641 cm ^-1 - MS: (m / z) = 281 (M ⁺ ), corresponding to C ₁₆ H ₁₁ NO ₄ (281.27). Elemental analysis calculated for C 68.32 H 3.94 N 4.98. Found C 68.14 H 4 , 03 N 4.81.

Example 4 Estrogen receptor binding study

Die angewandte Methode wurde bereits von Hartmann et al. [7] beschrieben und mit einigen Abwandlungen eingesetzt. Die relative Bindungsaffinität (RBA) der Testverbindung gegenüber dem Estrogenrezeptor wurde durch die Verdrängung des 17β-(³H)-Estradiol von seiner Bindungsstelle ermittelt. Zu diesem Zweck wurde die Testverbindung, gelöst in Ethanol und verdünnt mit TRIS-Puffer auf 6-8 geeignete Konzentrationen (300 µl), über Nacht bei 4°C inkubiert und mit Kalbsuteruscytosol (100 µl) sowie 17β-(³H)-Estradiol (0,723 µmol in TRIS-Puffer, 100 ml); (Aktivität: 2249,4 Bq/Reagenzglas) geschüttelt. Um die Reaktion zu stoppen, wurden jedem Reagenzglas 500 ml Dextran-Holzkohlelösung in TRIS-Puffer zugesetzt. Nach 90- minütigem Schütteln bei 4°C und Zentrifugieren wurden 500 µl HiSafe3 mit 100 µl des Überstands jeder Probe vermischt und die Reaktivität mittels Flüssigkeitsszintillationsspektroskopie ermittelt. Das selbe Verfahren wurde zur Quantifizierung der Bindung des 17β-(³H)-Estradiols (0,723 pmol - Kontrolle) angewandt. Die unspezifische Bindung wurde mittels 2 nmol 17β-Estradiol als Konkurrenzligand berechnet. Auf einem Semilog-Plot wird der prozentuale Anteil des maximal gebundenen, markierten Steroids, korrigiert um das unspezifisch gebundene 17β-(³H)-Estradiol gegenüber der Konzentration des Konkurrenten (10-g-Achse) aufgetragen. Zur Abschätzung der Bindungsaffinität wurden mindestens sechs Konzentrationen jeder Verbindung ausgewählt. An Hand dieser Kurve wurden diejenigen Molkonzentrationen unmarkierten Estradiols und seiner Konkurrenten ermittelt, die die Bindung des Radioliganden um 50% reduzieren.
The method used has already been described by Hartmann et al. [7] described and used with some modifications. The relative binding affinity (RBA) of the test compound to the estrogen receptor was determined by the displacement of the 17β- ( ³ H) -estradiol from its binding site. For this purpose, the test compound, dissolved in ethanol and diluted with TRIS buffer to 6-8 suitable concentrations (300 μl), was incubated overnight at 4 ° C. and with calf uterine cytosol (100 μl) and 17β- ( ³ H) -estradiol (0.723 µmol in TRIS buffer, 100 ml); (Activity: 2249.4 Bq / test tube) shaken. To stop the reaction, 500 ml of dextran charcoal solution in TRIS buffer was added to each test tube. After shaking at 4 ° C. for 90 minutes and centrifuging, 500 μl HiSafe3 were mixed with 100 μl of the supernatant of each sample and the reactivity was determined by means of liquid scintillation spectroscopy. The same procedure was used to quantify the binding of the 17β- ( ³ H) -estradiol (0.723 pmol - control). The non-specific binding was calculated using 2 nmol 17β-estradiol as a competitive ligand. The percentage of the maximum bound, labeled steroid, corrected for the unspecifically bound 17β- ( ³ H) -estradiol compared to the concentration of the competitor (10 g axis), is plotted on a semilog plot. At least six concentrations of each compound were selected to estimate binding affinity. This curve was used to determine the molar concentrations of unlabeled estradiol and its competitors that reduce the binding of the radioligand by 50%.

RBA einer Verbindung der Formel 1 (Beispiel 1): 0,78; RBA einer Verbindung der Formel 3 (Beispiel 1): 1,1.RBA of a compound of formula 1 (Example 1): 0.78; RBA of a compound of formula 3 (Example 1): 1.1.

Example 5 In vitro chemosensitivity test

Der In-Vitro-Test der Verbindung auf Antitumoraktivität wurde an Hand sich exponentiell teilender MCF-7-Zellen entsprechend eines zuvor veröffentlichten Mikrotiteransatzes [8, 9] durchgeführt. Die Wirksamkeit (zytostatische Wirkung) einer Testverbindung wird ausgedrückt als:
The in vitro test of the compound for antitumor activity was carried out using exponentially dividing MCF-7 cells according to a previously published microtiter approach [8, 9]. The effectiveness (cytostatic effect) of a test compound is expressed as:

T/C_corr [%] = [(T-C₀)/(C-C₀)] × 100
T / C _corr [%] = [(TC ₀ ) / (CC ₀ )] × 100

mit T (Test) und C (Kontrolle) als optischer Dichte des Kristallviolettextrakts der Zellschicht in den Wells (d. h. das mit Ethanol (70%) extrahierte, chromatingebundene Kristallviolett) bei 590 nm und C₀ als optischer Dichte des Zellextrakts unmittelbar vor Behandlung. Zur automatischen Bestimmung der optischen Dichte des Kristallviolettextrakts in den Wells wurde ein Mikroplattenphotometer verwendet.with T (test) and C (control) as the optical density of the crystal violet extract of the cell layer in the wells (ie the chromate-bound crystal violet extracted with ethanol (70%)) at 590 nm and C ₀ as the optical density of the cell extract immediately before treatment. A microplate photometer was used to automatically determine the optical density of the crystal violet extract in the wells.

Eine Verbindung der Formel 1 (Beispiel 3) erreichte die maximale Wirkung von T/C_corr = 10% nach ca. 160 h bei einer Konzentration von 5 µMol (Abb. 1).A compound of formula 1 (Example 3) achieved the maximum effect of T / C _corr = 10% after approx. 160 h at a concentration of 5 µmol ( Fig. 1).

Die folgenden Enzymtests sowie die Radioligandbindungstests wurden von MDS Panlabs Pharmacology Services durchgeführt:The following enzyme tests as well as the radioligand binding tests were carried out by MDS Panlabs Pharmacology Services performed:

Example 6 CAT. # 170000 protein kinase, EGF receptor tyrosonkinase [3-5]

Quelle: humanrekombinante Insektenzellen Sf9
Substrat: 10 µ/ml Poly (glu : tyr, 4 : 1)
Vehikel: 1% DMSO
Präinkubationszeit/-temperatur: 15 Minuten, 25°C
Inkubationszeit/-temperatur: 10 Minuten, 25°C
Inkubationspuffer: 50 mM Hepes, 20 mM MgCl₂ Source: human recombinant insect cells Sf9
Substrate: 10 µ / ml poly (glu: tyr, 4: 1)
Vehicle: 1% DMSO
Pre-incubation time / temperature: 15 minutes, 25 ° C
Incubation time / temperature: 10 minutes, 25 ° C
Incubation buffer: 50 mM Hepes, 20 mM MgCl ₂

, 0,2 mM Na₃ , 0.2 mM Na ₃

VO₄ VO ₄

, ph 7,4
Quantifizierungsmethode: ELISA-Quantifizierung von P-tyr
Referenzverbindung: Tyrphostin 47, IC50 11,8 µM
Signifikanzkriterien: ≧ 50% der maximalen Stimulation bzw. Hemmung
, pH 7.4
Quantification method: ELISA quantification of P-tyr
Reference compound: Tyrphostin 47, IC50 11.8 µM
Significance criteria: ≧ 50% of the maximum stimulation or inhibition

Für die Verbindung der Formel 1 (Beispiel 2), ausgewählt in Hinblick auf die Hemmung des Proteinkinase-EGF-Rezeptors Tyrosinkinase wurde bei 10 µM eine signifikante Aktivität (≧ 50%) beobachtet (59%).For the compound of formula 1 (Example 2), selected with a view to inhibiting the Protein kinase EGF receptor tyrosine kinase showed significant activity (≧ 50%) at 10 µM observed (59%).

Example 7 CAT. # 226010 estrogen ER-α [6]

Quelle: humanrekombinante Insektenzellen Sf9
Ligand: 0,5 nM³ Source: human recombinant insect cells Sf9
Ligand: 0.5 nM ³

H Estradiol
Vehikel: 0,4% DMSO
Inkubationszeit/-temperatur: 2 Stunden, 25°C
Inkubationspuffer: 10 mM Tris-HCl, pH 7,5, 10% Glycerol, 1 mM DTT, 1 mg/ml BSA
Unspezifischer Ligand: 1 µM Diethylstilbestrol
Kd: 0,08 nM
BMax: 5900 pmol/mg Protein
Spezifische Bindung: 85%
Quantifizierungsmethode: Radioligandbindung
Signifikanzkriterien: ≧ 50% der maximalen Stimulation bzw. Hemmung
H estradiol
Vehicle: 0.4% DMSO
Incubation time / temperature: 2 hours, 25 ° C
Incubation buffer: 10 mM Tris-HCl, pH 7.5, 10% glycerol, 1 mM DTT, 1 mg / ml BSA
Non-specific ligand: 1 µM diethylstilbestrol
Kd: 0.08 nM
BMax: 5900 pmol / mg protein
Specific binding: 85%
Quantification method: radioligand binding
Significance criteria: ≧ 50% of the maximum stimulation or inhibition

Für die Verbindung der Formel 1 (Beispiel 2) ausgewählt in Hinblick auf die Hemmung der EGF- Rezeptortyrosinkinase und auf die Verdrängung des Radioliganden aus den estrogen-ER-α- bindenden Positionen ergab sich bei 10 µM eine signifikante Aktivität (≧50%) lediglich bei der Verdrängung des Radioliganden aus den estrogen-ER-α-bindenden Positionen (104%). Weiterhin wurde auch eine schwache Hemmung der Tyrosinkinase (33%) beobachtet. For the compound of formula 1 (Example 2) selected with a view to inhibiting EGF Receptor tyrosine kinase and on the displacement of the radioligand from the estrogen ER-α binding positions showed a significant activity (≧ 50%) at 10 µM only at the Displacement of the radioligand from the estrogen ER-α binding positions (104%). Farther Weak inhibition of tyrosine kinase (33%) was also observed.

literature

[1] PCT/EP 97/05697; WO 98/17662.
[2] Traxler, P., Greene, J., Mett, H., Sequin, U. und Furet, P., J. Med. Chem. 1999, 42, 1018- 1026.
[3] Geissler, J. F., Traxier, P., Regenass, U., Murray, B., J., Roesel, J. L., Meyer, T., McGlynn, E., Storni, A. und Lydon, N. B., J. Biol. Chem. 1990, 265, 22251-22255.
[4] Wedegartner, P. S. und Gill, C., J. Biol. Chem. 1989, 264, 11346-11353.
[5] Yaish, P., Gazit, A., Gilon, C. und Levitzky, A., Science 1988, 242, 933-935.
[6] Obourn, J. D., Koszewski, N. J. und Notides, A. C., Biochemistry 1993, 32, 6229-6236.
[7] Hartmann, R., Kranzfelder, G., v. Angerer, E. und Schönenberger, H., J. Med. Chem. 1980, 23, 841-848.
[8] Bernhardt, G., Reile, H., Birnböck, H., Spruß, T. und Schönenberger, H., J. Cancer Res. Clin. Oncol. 1992, 118, 35-43.
[9] Reile, H., Birnböck, H., Bernhardt, G., Spruß, T. und Schönenberger, H., Anal. Biochem. 1990, 187, 262-267.
[10] GB 2 253 848 A.
[11] Makosza, M., Wenäll, M., Golinski, M. und Kinowski, A., Bull. Soc. Sci. Chim. Polon. 1985, 33, 427-431.[1] PCT / EP 97/05697; WO 98/17662.
[2] Traxler, P., Greene, J., Mett, H., Sequin, U. and Furet, P., J. Med. Chem. 1999, 42, 1018-1026.
[3] Geissler, JF, Traxier, P., Regenass, U., Murray, B., J., Roesel, JL, Meyer, T., McGlynn, E., Storni, A. and Lydon, NB, J. Biol. Chem. 1990, 265, 22251-22255.
[4] Wedegartner, PS and Gill, C., J. Biol. Chem. 1989, 264, 11346-11353.
[5] Yaish, P., Gazit, A., Gilon, C. and Levitzky, A., Science 1988, 242, 933-935.
[6] Obourn, JD, Koszewski, NJ and Notides, AC, Biochemistry 1993, 32, 6229-6236.
[7] Hartmann, R., Kranzfelder, G., v. Angerer, E. and Schönenberger, H., J. Med. Chem. 1980, 23, 841-848.
[8] Bernhardt, G., Reile, H., Birnböck, H., Spruß, T. and Schönenberger, H., J. Cancer Res. Clin. Oncol. 1992, 118, 35-43.
[9] Reile, H., Birnböck, H., Bernhardt, G., Spruß, T. and Schönenberger, H., Anal. Biochem. 1990, 187, 262-267.
[10] GB 2 253 848 A.
[11] Makosza, M., Wenäll, M., Golinski, M. and Kinowski, A., Bull. Soc. Sci. Chim. Polon. 1985, 33, 427-431.

Claims

1. Use of a compound of formula 1:
in which:
R ₁ , R ₂ and R ₃ , each independently of one another, represent hydrogen, hydroxy, lower alkoxy or lower alkyl or R ₁ and R ₂ together represent lower alkylenedioxy.
R ₄ is hydrogen, halogen, lower alkyl, halogen-substituted lower alkyl, hydroxy, phenyloxy, C ₃ -C ₇ cycloalkyloxy or lower alkoxy. Each R ₅ , independently of R ₄ and possibly also other R _{5 present} , is selected from halogen, lower alkyl, halogen-substituted lower alkyl, hydroxy, phenyloxy, C ₃ -C ₇ cycloalkyloxy or lower alkoxy.
X is imino or (halogen-substituted or unsubstituted lower alkanoyl, [lower alkyl or carboxy, lower alkoxycarbonyl, aminocarbonyl, N-mono or N, N-di-lower alkylaminocarbonyl] lower alkyl; or C ₆ -C ₁₂ aryl) substituted imino.
n is 0, 1, 2, 3,
or one of its salts, provided there is at least one salt-forming group. This compound is used to prepare a pharmaceutical composition for the treatment of a disease which is dependent on protein kinase activity.

2. The use according to claim 1 of a compound of formula 1 or one of its salts, if there is at least one salt-forming group, the disease to be treated is dependent on estrogen activity.

3. The use according to claim 1 of a compound of formula 1 or one of its salts, if there is at least one salt-forming group, the disease to be treated is a tumor and / or proliferative epidermal disease or osteoporosis.

4. A compound of formula 1, wherein R ₁ , R ₂ and R ₃ , each independently of one another, are hydrogen, hydroxy, lower alkoxy or lower alkyl or R ₁ and R ₂ together represent lower alkylenedioxy. R ₄ is hydrogen, halogen, lower alkyl, halogen-substituted lower alkyl, hydroxy, phenyloxy, C ₃ -C ₇ cycloalkyloxy or lower alkoxy. Each R ₅ , independently of R ₄ and possibly also other R _{5 present} , is selected from halogen, lower alkyl, halogen-substituted lower alkyl, hydroxy, phenyloxy, C ₃ -C ₇ cycloalkyloxy or lower alkoxy.
X is imino or (halogen-substituted or unsubstituted lower alkanoyl, [lower alkyl or carboxy, lower alkoxycarbonyl, aminocarbonyl, N-mono or N, N-di-lower alkylaminocarbonyl] lower alkyl; or C ₆ -C ₁₂ aryl) substituted imino.
n is 0, 1, 2, 3
or one of its salts, provided there is at least one salt-forming group.

5. A compound of formula 1 according to claim 4, wherein
R ₁ , R ₂ and R ₃ , each independently of one another, represent hydrogen, hydroxy, lower alkoxy, in particular methoxy or lower alkyl, in particular methyl. R ₁ and R ₂ together form lower alkylenedioxy, in particular methylenedioxy, R ₂ preferably being selected from the group consisting of hydroxy and lower alkoxy, in particular methoxy or lower alkyl, in particular methyl, and wherein R ₁ and R _{3 are selected} from the group be selected in which hydrogen is contained; and independently of R ₂ from hydroxy or from lower alkoxy, especially methoxy; R ₄ is a halogen, in particular chlorine or bromine or hydroxy or hydrogen;
R ₅ is a halogen, in particular chlorine, independently of R ₄ ; Hydrogen, hydroxy; R ₅ , if present, is preferably fixed in position 5 or 6 of the indole heterocycle in formula 1. R ₆ is hydrogen or a lower alkyl, especially methyl.
X is imino or an imine substituted by a lower alkanoyl, especially acetyl; lower alkyl, especially methyl, ethyl, n-propyl or isopropyl; Carboxy lower alkyl such as carboxymethyl (-CH ₂ -COOH); lower alkoxycarbonyl-lower alkyl such as methoxycarbonylmethyl or ethoxycarbonylmethyl (-CH ₂ -COOCH ₃ or -CH ₂ - COOCH ₂ CH ₂ CH ₃ ); Aminocarbonyl (-CO-NH ₂ ) or phenyl-lower alkyl, especially 2-phenylethyl;
and n is 0 or 1;
or one of its salts if there is at least one salt-forming group.