DE19847107A1 - Use of pertussis toxin to prepare a pharmaceutical composition for treating tumors, especially carcinomas or sarcomas - Google Patents

Use of pertussis toxin to prepare a pharmaceutical composition for treating tumors, especially carcinomas or sarcomas

Info

Publication number
DE19847107A1
DE19847107A1 DE19847107A DE19847107A DE19847107A1 DE 19847107 A1 DE19847107 A1 DE 19847107A1 DE 19847107 A DE19847107 A DE 19847107A DE 19847107 A DE19847107 A DE 19847107A DE 19847107 A1 DE19847107 A1 DE 19847107A1
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
pertussis toxin
mobility
cell
tumor
cells
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
DE19847107A
Other languages
German (de)
Inventor
Herbert Ruebben
Thomas Otto
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Individual
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Individual filed Critical Individual
Priority to DE19847107A priority Critical patent/DE19847107A1/en
Publication of DE19847107A1 publication Critical patent/DE19847107A1/en
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/164—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Pertussis toxin (PTX) is used to prepare a pharmaceutical composition for treating tumors. An Independent claim is also included for a method for determining the effect of PTX on the mobility of tumor cells, comprising: (a) stably culturing tumor cells in a cell culture apparatus provided with means for determining cell mobility; (b) adding PTX; (c) culturing the cells for a time depending on the type of tumor cells involved; (d) determining the mobility of the cells after this time; and (e) evaluating the mobility with reference to a control lacking PTX.

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft die Verwendung des Pertussistoxins zur Ermittlung seines Einflusses auf die Beweglichkeit von Tumorzellen sowie zur Herstellung von pharmazeutischen Zusammensetzungen zur Behandlung von Tumorerkrankungen.The present invention relates to the use of the Pertussis toxins to determine its influence on the Mobility of tumor cells and for the production of pharmaceutical compositions for the treatment of Tumor diseases.

Jeder fünfte Todesfall in industrialisierten Ländern ist mittlerweile auf eine Krebserkrankung zurückzuführen. Die Behandlung von Krebs sowie das Verständnis der biochemischen Grundlagen der Krebsentstehung sind daher zu zentralen Gebieten der modernen Medizin und biomedizinischen Forschung geworden.Every fifth death is in industrialized countries meanwhile due to cancer. The Treating cancer as well as understanding the biochemical The basics of cancer development are therefore central areas of modern medicine and biomedical research.

Klassische Behandlungsmethoden von Krebs stellen z. B. die chirurgische Entfernung von Tumoren oder deren Zerstörung durch physikalische Verfahren wie der Strahlungstherapie dar. Diese Verfahren sind bei bösartigen Tumoren jedoch nur anwendbar und erfolgversprechend, wenn einerseits schon eine sichtbare Schädigung größerer Bereiche erfolgt ist, andererseits die Erkrankung sich trotzdem noch in einem lokalen Stadium befindet. Hat die Tumorerkrankung bereits das lokale Stadium verlassen und liegt infolge der Metastasierung eine Systemerkrankung vor, so stellt die systemische Chemotherapie die einzige etablierte Behandlungsform dar. Aufgrund der generellen Cytotoxizität der eingesetzten Chemotherapeutika werden bei einer solchen Behandlung jedoch nicht nur die zu zerstörenden Krebszellen, sondern prinzipiell jede sich teilende Körperzelle angegriffen. Daher ist eine systemische Chemotherapie mit einer Vielzahl von Nebenwirkungen verbunden.Classic treatment methods for cancer are e.g. B. the surgical removal of tumors or their destruction by physical processes such as radiation therapy. These However, procedures are only applicable to malignant tumors promising if, on the one hand, a visible one Damage to larger areas has occurred, on the other hand, the Disease is still at a local stage located. The tumor has already reached the local stage leave and lies due to metastasis Systemic chemotherapy presents systemic disease is the only established form of treatment general cytotoxicity of the chemotherapeutic agents used with such treatment, however, not only that destructive cancer cells, but in principle each itself dividing body cell attacked. Therefore it is systemic Chemotherapy is associated with a variety of side effects.

Die Aussichten auf eine Heilung der Patienten sind mit wenigen Ausnahmen wie z. B. bei Hodentumoren trotz der Behandlung mit Chemotherapeutika bei einer systemischen Krebserkrankung zur Zeit noch gering. Eine alternative Behandlungsverfahren könnte die Immuntherapie darstellen. Bei dieser wird durch Behandlung mit Cytokinen oder immunkompetenten körpereigenen Zellen versucht, die körpereigene Fähigkeit zur Zerstörung der Krebszellen ohne das massive Auftreten von Nebenwirkungen zu stimulieren. Diese Methode hat jedoch noch keinen Eingang in die Standardtherapie maligner Tumore gefunden.There are few prospects for healing the patient Exceptions such as B. in testicular tumors despite treatment with Chemotherapy drugs for systemic cancer Time still short. An alternative treatment method could be represent immunotherapy. This is through treatment  with cytokines or immune-competent cells in the body tries to destroy the body 's ability Cancer cells without the massive onset of side effects too stimulate. However, this method has no input into found the standard therapy for malignant tumors.

Auf molekularer Ebene sind die Prozesse, die zur Metastasierung führen, erst in groben Zügen verstanden. So wurde zum Beispiel 1986 ein Protein aus dem Überstand humaner Melanomzellkulturen isoliert, das bei in-vitro Experimenten bei einer Konzentration von 10 nM eine ungerichtete Steigerung der Beweglichkeit der Krebszellen bewirkte, die mit dem Verlust vorhandener Zell- Zellkontakte und einer Änderung der Morphologie (Ausbildung von Zellfortsätzen wie Pseudopodien) einherging. Dieses daher als autokriner Mobilitätsfaktor (AMF) bezeichnete Protein wurde dann später auch im Urin von Patienten, die an Blasentumor erkrankt waren, nachgewiesen. Ausgehend von diesen Beobachtungen ist dem AMF eine Beteiligung an der Metastasenbildung zugeschrieben worden.At the molecular level, the processes are related to metastasis lead, only roughly understood. For example 1986 a protein from the supernatant of human melanoma cell cultures isolated, that in in vitro experiments at a concentration of 10 nM an undirected increase in mobility Caused cancer cells, which with the loss of existing cell Cell contacts and a change in morphology (formation of Cell processes such as pseudopodia). This therefore as protein called autocrine mobility factor (AMF) then later in the urine of patients with bladder cancer were ill, demonstrated. Starting from these The AMF is involved in observations Metastasis has been attributed.

Ein zweites Glykoprotein mit ähnlichen Eigenschaften wie der AMF ist der sogenannte Scatter Faktor, der eine ausgeprägte Affinität zu Heparin besitzt. In vivo ist dieser Eiweißstoff bei Patienten mit signifikantem Leberzellzerfall gefunden worden. Im Gegensatz zum AMF wirkt der Scatter Faktor anscheinend jedoch nicht auf die ihn produzierenden Zellen, sondern nur auf andere Epithelzellen stimulierend. In Gegenwart des Proteins zeigen solche Zellen ebenfalls eine erhöhte Beweglichkeit und die Ausbildung von Zellfortsätzen. Weiterhin wurde bei in vitro Experimenten eine gesteigerte Invasivität von Zellen in eine Kollagenmatrix beobachtet, weshalb auch für dieses Protein eine Bedeutung für die Zellmotilität und Tumorzellmetastasierung vermutet wird.A second glycoprotein with properties similar to that AMF is the so-called scatter factor, which is a pronounced one Has affinity for heparin. This protein is in vivo found in patients with significant hepatic cell decay been. In contrast to the AMF, the scatter factor works but apparently not on the cells that produce it, but only stimulating other epithelial cells. In present of the protein, such cells also show an increased Mobility and the formation of cell processes. Farther increased invasiveness in in vitro experiments observed by cells in a collagen matrix, which is why for this protein is of importance for cell motility and Tumor cell metastasis is suspected.

Nach der Entdeckung dieser Motilitätsfaktoren wurden bereits erste Versuche zur Hemmung der Zellbeweglichkeit von derartig angeregten Zellen vorgenommen. Dabei wurde z. B. beobachtet, dass in Zellkultursystemen die Motilität von Zellen, die zuvor durch den Scatter-Faktor stimuliert worden waren, durch Zugabe von Heparin, Protaminsulfat oder Suramin zeitweilig, da reversibel, vermindert wurde. Weiterführende Studien über die genaue Wirkung dieser Verbindungen oder eine Nutzung des von ihnen hervorgerufenen Antimotilitäts-Effekts für den Einsatz in der biomedizinischen Forschung oder zu therapeutischen Zwecken sind jedoch noch nicht bekannt.After the discovery of these motility factors were already first attempts to inhibit cell mobility of such excited cells. It was z. B. observed  that in cell culture systems the motility of cells that previously had been stimulated by the scatter factor, by adding of heparin, protamine sulfate or suramin temporarily because reversible, was reduced. Further studies on the exact effect of these compounds or a use of the antimotility effect caused by them for use in biomedical research or for therapeutic purposes are not yet known.

Die Aufgabe der vorliegenden Erfindung besteht nun darin, eine Verbindung bereitzustellen, mittels der eine verbesserte Behandlung von Krebs, insbesondere im metastasierenden Stadium ohne die bekannten Nebenwirkungen durchgeführt werden kann. Damit verbunden ist die Aufgabe, zuvor den Einfluß dieser Verbindung auf metastasierende Zellen mittels zellbiologischer Verfahren rasch und auf einfache Weise abschätzen zu können.The object of the present invention is now a To provide connection by means of which an improved Treatment of cancer, especially at the metastatic stage can be done without the known side effects. Associated with this is the task, the influence of this Connection to metastatic cells using cell biological To be able to estimate procedures quickly and easily.

Erfindungsgemäß wurde nun gefunden, dass das an sich schon bekannte Pertussistoxin aus dem Keuchhustenerreger Bordetella pertussis für die medikamentöse Behandlung verschiedener systemischer Krebserkrankungen eingesetzt werden kann. Dabei zeichnet sich das Pertussistoxin insbesondere durch die überraschende Eigenschaft aus, die Metastasenbildung von Tumoren, insbesondere von Karzinomen und Sarcomen, ohne das Auftreten von Nebenwirkungen deutlich zu reduzieren. Im Rahmen der vorliegenden Erfindung wurde weiterhin ein Verfahren zur Ermittlung der Beweglichkeit von Tumorzellen gefunden, das eine schnelle Abschätzung der Wirksamkeit des Pertussistoxins gegenüber Krebszellen erlaubt.According to the invention, it has now been found that this in itself known pertussis toxin from the whooping cough pathogen Bordetella pertussis for drug treatment of various systemic cancer can be used. Here the pertussis toxin is characterized in particular by the surprising property, the metastasis of Tumors, especially carcinomas and sarcomas, without that Significantly reduce the occurrence of side effects. As part of the present invention further a method for Determination of the mobility of tumor cells found one quick assessment of the effectiveness of pertussis toxin allowed against cancer cells.

Die im Rahmen der vorliegenden Erfindung angestellten Untersuchungen zeigen, dass für die erfindungsgemäße Verwendung des Pertussistoxins dessen Eigenschaft, die Beweglichkeit von malignen Krebszellen zu reduzieren, verantwortlich ist. Auf molekularer Ebene beruht die inhibitorische Wirkung des Pertussistoxins vermutlich auf seiner Fähigkeit, bestimmte alpha-Untereinheiten der an heterotrimere Guaninnukleotid- bindende Proteine koppelnden Rezeptoren (G-Protein-koppelnde Rezeptoren) zu ribosylieren, so dass das G-Protein vom Rezeptor entkoppelt wird und somit die für die Zellbeweglichkeit erforderliche Signalübertragung in den Zellen unterbrochen wird.Those employed in the present invention Studies show that for the use according to the invention of the pertussis toxin whose property, the mobility of reducing cancer cells is responsible. On at the molecular level, the inhibitory effect of Pertussis toxins presumably based on its ability to determine alpha subunits of the heterotrimeric guanine nucleotide  binding proteins-coupling receptors (G-protein-coupling receptors Receptors) to ribosylate so that the G protein from the receptor is decoupled and thus for cell mobility required signal transmission in the cells interrupted becomes.

Erfindungsgemäß kann das Pertussistoxin in den nachfolgend beschriebenen Ausführungsformen sowohl in gereinigter Form als auch in Form eines geeigneten Zellextraktes verwendet werden. Einen solchen Zellextrakt, in dem das Pertussistoxin zusammen mit anderen Zellbestandteilen vorliegt, stellt z. B. ein üblicherweise zur Keuchhustenimpfung eingesetztes Vakzin dar. Alternativ zur Gewinnung des Pertussistoxin aus seinem natürlichen Herkunftsorganismus, dem Keuchhustenerreger Bordetalla pertussis, kann das Pertussistoxin auch gentechnisch hergestellt werden.According to the invention, the pertussis toxin can be found in the following described embodiments both in purified form as can also be used in the form of a suitable cell extract. Such a cell extract, in which the pertussis toxin together with other cell components, z. B. a vaccine commonly used for whooping cough vaccine. As an alternative to obtaining the pertussis toxin from his natural organism of origin, the whooping cough pathogen Bordetalla pertussis, the pertussis toxin can also be genetically engineered getting produced.

Neben dem konventionellen Pertussistoxin können erfindungsgemäß auch proteinchemisch modifizierte Varianten des Pertussistoxins verwendet werden. So kann das Pertussistoxin z. B. an Verbindungen wie monoklonale Antikörper, die selektiv an Tumorzellen binden, gekoppelt werden. Dadurch kann die Wirksamkeit des Pertussistoxins durch eine erhöhte Selektivität noch verbessert werden, was insbesondere für therapeutische Zwecke von Interesse ist. Die kovalente Verknüpfung erfolgt dabei mittels der für die Kopplung von Liganden an Proteine üblicherweise eingesetzten Standardmethoden.In addition to the conventional pertussis toxin, according to the invention also protein-chemically modified variants of the pertussis toxin be used. So the pertussis toxin z. B. on Compounds such as monoclonal antibodies that are selective Bind tumor cells, be coupled. This allows the Effectiveness of pertussis toxin through increased selectivity still be improved, especially for therapeutic Is of interest. The covalent linkage takes place using the for the coupling of ligands to proteins commonly used standard methods.

Ferner können in der vorliegenden Erfindung auch Varianten des Pertussistoxins mit einer mutierten Aminosäuresequenz eingesetzt werden. Zu solchen genetisch veränderten Varianten gehören bevorzugt Mutanten der für die enzymatische Aktivität verantwortlichen A-Untereinheit, die eine erhöhte ADP- Ribosylierungsaktivität besitzen und somit eine noch effektivere Hemmung der Zellbeweglichkeit als das natürliche Pertussistoxin aufweisen sollten. Bevorzugte Mutationen in der A-Untereinheit sind der Austausch der dafür wichtigen Glycin-, Serin-, Glutamin-, Alanin, und Asparagin-Aminosäurereste.Furthermore, variants of the Pertussis toxins with a mutated amino acid sequence be used. To such genetically modified variants preferably include mutants for enzymatic activity responsible A subunit, which has an increased ADP Have ribosylation activity and therefore still more effective inhibition of cell mobility than natural Should have pertussis toxin. Preferred mutations in the  A subunits are the exchange of the important glycine, Serine, glutamine, alanine, and asparagine amino acid residues.

Generell ist die Wirksamkeit von Therapeutika stark abhängig von der Art der Krebszellen, d. h. ausgehend von der Wirkung gegenüber einer bestimmten Zellart kann nicht einfach auf eine vergleichbare Wirkung gegenüber anderen Zellinien geschlossen werden. Der inhibitorische Effekt auf die Beweglichkeit von Krebszellen erlaubt nun in einer ersten Ausführungsform der Erfindung, die Wirksamkeit des Pertussistoxins auf eine Tumorzellinie mit Hilfe eines einfachen Verfahrens zu untersuchen.In general, the effectiveness of therapeutic agents is heavily dependent on the type of cancer cells, d. H. based on the effect versus a particular cell type cannot simply point to one comparable effect compared to other cell lines become. The inhibitory effect on the mobility of Cancer cells are now allowed in a first embodiment Invention, the effectiveness of pertussis toxin on a Tumor cell line using a simple procedure examine.

Gemäß dieser Ausführungsform werden die ausgewählten Tumorzellen zunächst in einer Zellkulturvorrichtung, die mit Mitteln zur Erfassung der Zellbeweglichkeit ausgestattet ist, kultiviert. Anschließend wird das Pertussistoxin zur Zellkultur hinzugegeben und die Zellen über einen Zeitraum, der an die jeweilige Tumorzellinie angepaßt ist, weiter kultiviert. Zur Verbesserung der Meßgenauigkeit kann dabei die Beweglichkeit der Zellen vorzugsweise noch durch Zugabe eines entsprechenden stimulierenden Faktors erhöht werden. Die Beweglichkeit der Zellen kann z. B. mittels Videoanalyse, des Boyden Chamber Assays oder des sogenannten "Phagokinetic Track Motility Assays", verfolgt werden. Sie wird üblicherweise mit der Beweglichkeit von Zellen des jeweils untersuchten Typs, die zur Kontrolle ohne Pertussistoxin kultiviert wurden, verglichen.According to this embodiment, the selected ones Tumor cells first in a cell culture device using Is equipped with means for detecting cell mobility, cultured. Then the pertussis toxin becomes a cell culture added and the cells over a period of time to the respective tumor cell line is adapted, further cultivated. For The mobility can be improved the cells preferably by adding a corresponding one stimulating factor can be increased. The agility of the Cells can e.g. B. by means of video analysis, the Boyden Chamber Assays or the so-called "Phagokinetic Track Motility Assays ". It is usually carried out with the Mobility of cells of the type examined in each case Control cultured without pertussis toxin were compared.

Die mittels dieses Verfahrens untersuchten Zellen können zum einem von einer bereits etablierten Tumorzellinie stammen. Zum andern können die Zellen aus einer Gewebeprobe, einem Tumor oder einer Metastase eines Patienten sowie aus Körpersekreten wie Blut, Urin, Liquor, Ascitesflüssigkeit, Speichel, Wundsekret, Peritonalerguß oder Pleuraerguß isoliert und für die Charakterisierung gegenüber dem Pertussistoxin zunächst in Primärkultur gehalten werden. The cells examined using this method can be used for one from an already established tumor cell line. To the the cells can change from a tissue sample, a tumor or a metastasis from a patient as well as from body secretions such as blood, urine, cerebrospinal fluid, ascites fluid, saliva, Wound secretion, peritoneal effusion or pleural effusion isolated and for the characterization compared to the pertussis toxin initially in Primary culture.  

Gemäß einer weiteren Ausführungsform der vorliegenden Erfindung wird das Pertussistoxin zur Herstellung von pharmazeutischen Zusammensetzungen verwendet. Diese Zusammensetzungen enthalten eine Menge des Pertussistoxins, die eine Verringerung der Beweglichkeit von malignen Zellen bewirkt und dadurch die Entstehung und Metastasierung von Tumoren verhindert.According to a further embodiment of the present invention is the pertussis toxin for the production of pharmaceutical Compositions used. These compositions contain a lot of the pertussis toxin, which is a decrease in The mobility of malignant cells causes and Prevention and metastasis of tumors prevented.

Erfindungsgemäß kann das Pertussistoxin nicht nur alleine in den oben genannten Darreichungsformen, sondern auch in Kombination mit anderen therapeutisch wirksamen Verbindungen eingesetzt werden. Bevorzugt ist dabei die Kombination des Pertussistoxins mit anderen zur Krebsbehandlung eingesetzten Mitteln wie Cytostatika, Immuntherapeutika oder Strahlungstherapeutika. In derartigen pharmazeutischen Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung ist neben dem Pertussistoxin zumindest mit Verbindung, die aus der Gruppe der eben genannten Therapeutika enthalten. Als Cytostatika werden vorzugsweise cis-Platin (Carboplatin), Methotrexat, 5- Fluoruracil, Capecitabine, Mitomycin C, Taxanabkömmlinge (vorzugsweise Paclitaxel, Docetaxel) oder Gemcitabine verwendet. Aus der Klasse der Immuntherapeutika finden vorzugsweise Interferone wie das Interferon α 2b oder Interleukine (z. B. Interleukin-2) Verwendung. Eingesetzte Strahlungstherapeutika sind im Rahmen der Radiochemotherapie die Kombination von perkutaner, intrakavitärer oder intraoperativer Bestrahlung mit z. B. Kobalt-60, schnellen Elektronen, Iod-125, Iridium-192, Aureum-198, Strontium-91) und die intraoperative Bestrahlung (IORT = intraoperativer Strahlungstherapie) mit Elektronen. Gleiches gilt für die Strahlungstherapie in Kombination mit der Hyperthermie (Thermoradiotherapie).According to the invention, the pertussis toxin can not only in alone the dosage forms mentioned above, but also in Combination with other therapeutically active compounds be used. The combination of is preferred Pertussis toxins with others used for cancer treatment Agents such as cytostatics, immunotherapeutics or Radiation therapeutics. In such pharmaceutical Compositions of the present invention is besides that Pertussis toxin at least with compound from the group of contain just mentioned therapeutic agents. As cytostatics preferably cis-platinum (carboplatin), methotrexate, 5- Fluorouracil, capecitabine, mitomycin C, taxane derivatives (preferably paclitaxel, docetaxel) or gemcitabine used. Find from the class of immunotherapeutics preferably interferons such as the interferon α 2b or Interleukins (e.g. Interleukin-2) use. Used Radiation therapeutics are part of chemoradiation the combination of percutaneous, intracavitary or intraoperative radiation with e.g. B. cobalt-60, rapid Electrons, Iodine-125, Iridium-192, Aureum-198, Strontium-91) and intraoperative radiation (IORT = intraoperative Radiation therapy) with electrons. The same applies to the Radiation therapy in combination with hyperthermia (Thermoradiotherapy).

Die unter Verwendung des Pertussistoxin hergestellten Zusammensetzungen können bei einer Reihe von Tumorerkrankungen eingesetzt werden, da das Pertussistoxin die Beweglichkeit einer Vielzahl von Tumorzellen, insbesondere die von Harnblasenkarzinomzellen, Prostatakarzinomzellen, Nierenzellkarzinomzellen und Sarkomzellen hemmt.Those made using the pertussis toxin Compositions can be used in a number of tumor diseases be used because the pertussis toxin agility a variety of tumor cells, especially those of  Bladder cancer cells, prostate cancer cells, Inhibits renal cell carcinoma cells and sarcoma cells.

Die Verabreichung der das Pertussistoxin enthaltenden Zusammensetzungen kann in den üblichen Formen erfolgen. So kann beispielsweise eine orale, intrakutane, subkutane, intramuskuläre, intravenöse, intravesikale, intracavitäre, inhalative, intraperitonale oder intrapleurale Applikation vorgenommen werden.The administration of those containing the pertussis toxin Compositions can be in the usual forms. So can for example an oral, intracutaneous, subcutaneous, intramuscular, intravenous, intravesical, intracavitary, inhalative, intraperitoneal or intrapleural application be made.

Die Applikation des Pertussistoxins kann zu verschiedenen Zeitpunkten erfolgen. So kann das Pertussistoxin nach der operativen, strahlungstherapeutischen, immuntherapeutischen oder chemotherapeutischen Tumorbehandlung verabreicht werden. Gleichfalls ist eine Verabreichung bei einem erst bidimensional meßbaren Tumor sowie eine Anwendung zu prophylaktischen Zwecken möglich. Gerade bei Krankheitsformen, bei denen z. B. (noch) keine operative Behandlung möglich oder sinnvoll ist und/oder bei denen vom Einsatz von Cytostatika abzuraten ist, ist die Verwendung des Pertussistoxins aufgrund seiner guten Wirksamkeit und Verträglichkeit von Vorteil.The application of the pertussis toxin can vary Times. So the pertussis toxin after the operative, radiation therapy, immunotherapy or chemotherapeutic tumor treatment. Likewise, administration in a first is two-dimensional measurable tumor and an application for prophylactic purposes possible. Especially in the case of diseases in which, for. B. (still) no surgical treatment is possible or sensible and / or for which the use of cytostatics is not recommended is Use of pertussis toxin because of its good Efficacy and tolerance are an advantage.

Die Erfindung soll anhand der folgenden Beispiele näher erläutert werden.The invention is illustrated by the following examples are explained.

Beispiel 1example 1 Einfluß des Pertussistoxins auf die In-Vitro Mobilität von TumorzellenInfluence of pertussis toxin on in vitro Mobility of tumor cells

Für die Untersuchung des Einfluß des Pertussistoxins auf die Zellbeweglichkeit wurde die kontinuierliche Urothelkarzinom- Zellinie HTB1J82 eingesetzt. Diese Zellinie weist in allen Wachstumsstadien eine erhöhte Zellmotilität auf und erlaubt somit eine gute Beurteilung der Einflüsse von Antimotilitätsfaktoren.For the investigation of the influence of pertussis toxin on the Cell motility, the continuous urothelial carcinoma Cell line HTB1J82 used. This cell line points in all Stages of growth allow and increased cell motility thus a good assessment of the influences of Antimotility factors.

a) Testsubstanzena) Test substances

Das Pertussistoxin wurde für diese Untersuchungen sowohl in gereinigter Form (PTX) als auch in Form des üblicherweise als Impfstoff eingesetzten azellulären Pertussisvakzins (APV) verwendet.The pertussis toxin was used for both these studies purified form (PTX) as well as in the form of usually as Vaccine used acellular pertussis vaccine (APV) used.

Das PTX wurde aus dem Überstand einer 2 Tage alten Kultur von Bordetella pertussis mittels einer Gelfiltrationssäule gereinigt. Für die Untersuchung seiner inhibitorischen Aktivität wurde das Pertussistoxin in Phosphat-gepufferter Lösung (PBS) aufgenommen und in einer Konzentration von 100 ng/ml eingesetzt. Als Pertussisvakzin wurde ein thiomersalzfreies Vakzin (Takeda) mit einer Konzentration von 50 µg Pertussisantigen pro 0,5 ml Vakzin verwendet. Dabei enthielten 50 µg des Pertussisantigen 86 Gew.-% filamentöses Hemagglutinin (FHA), 4 Gew.-% einer Fraktion des Pertussismembranproteins, 2 Gew.-% pertussisspezifisches Agglutinogen und 8% Gew.-% Pertussistoxin.The PTX was made from the supernatant of a 2 day old culture of Bordetella pertussis using a gel filtration column cleaned. For the study of its inhibitory The pertussis toxin was buffered in activity Solution (PBS) taken up and in a concentration of 100 ng / ml used. As a pertussis vaccine was a thiomer salt free vaccine (Takeda) with a concentration of 50 µg pertussis antigen used per 0.5 ml vaccine. Here contained 50 µg of the pertussis antigen 86 wt .-% filamentous Hemagglutinin (FHA), 4 wt .-% of a fraction of the Pertussis membrane protein, 2 wt% pertussis specific Agglutinogen and 8% w / w pertussis toxin.

Zum Vergleich der durch das Pertussistoxin hervorgerufenen Inhibition der Zellbeweglichkeit wurde L65-15-82 (1-[3,5- dichloro,4-(4-chlorobenzoyl)]phenyl,4-carboxamid,5-amino­ triazol(1,2,3)), dessen konzentrationsabhängige, reversible Erniedrigung der Zellbeweglichkeit bereits bekannt und gut verstanden ist, herangezogen. Ursache des inhibitorischen Effekts von L65-15-82 ist eine Inhibition der Aktivatorsubstanzen des Phospholipase C-gekoppelten G-Proteins, infolge derer die für die Zellbeweglichkeit erforderliche G- Protein-gesteuerte Signalübertragung zur Bildung von Phosphoinositiden gehemmt sowie die Phosphoinositid gesteuerte Calciumfreisetzung reduziert ist.For comparison of those caused by the pertussis toxin Inhibition of cell motility was L65-15-82 (1- [3.5- dichloro, 4- (4-chlorobenzoyl)] phenyl, 4-carboxamide, 5-amino triazole (1,2,3)), its concentration-dependent, reversible Decreased cell mobility already known and good is understood. Cause of inhibitory Effect of L65-15-82 is an inhibition of the Activator substances of the phospholipase C-coupled G protein, as a result of which the G- required for cell mobility Protein-controlled signal transmission for the formation of Phosphoinositides inhibited and the phosphoinositide controlled Calcium release is reduced.

L65-15-82 (Merck Institute for Therapeutic Research, Rahway, NY, USA) wurde in dieser Versuchsreihe in einer Konzentration von 100 ng-10 µg eingesetzt.L65-15-82 (Merck Institute for Therapeutic Research, Rahway, NY, USA) was concentrated in this series of experiments of 100 ng-10 µg.

Zur Untersuchung des inhibitorischen Effekts dieser Antimotilitätsfaktoren wurde den untersuchten Urothelkarzinomzellen gleichzeitig noch der autokrine Motilitätsfaktor (AM), der die Tumorzellbeweglichkeit stimuliert, in einer Konzentration von 50-500 pg/ml eingesetzt. Der AM wurde aus dem Überstand humaner Fibrosarkom-Zellinien (HT-1080) wie folgt gewonnen.To study the inhibitory effect of this Antimotility factors were examined  Urothelial carcinoma cells at the same time as the autocrine Motility factor (AM), which determines the tumor cell mobility stimulated, used in a concentration of 50-500 pg / ml. The AM was made from the supernatant of human fibrosarcoma cell lines (HT-1080) won as follows.

Zunächst wurde das Medium von H-1080 Zellen durch Zentrifugation (10.000 × g 10 min. 4°C) gereinigt und zur Entfernung von Salzen und Makromolekülen kleineren Molekulargewichts gegen Wasser dialysiert. Danach wurde das Medium durch Lyophilisation konzentriert und die darin enthaltenen Proteine anschließend in PBS resuspendiert und gegen den gleichen Puffer dialysiert. Abschließend wurde der AM durch Chromatographie mittels einer Sephacryl S-200- Gelfiltationssäule weiter gereinigt und zur Lagerung in PBS auf genommen.First, the medium was made up of H-1080 cells Centrifugation (10,000 × g 10 min. 4 ° C) cleaned and to Removal of salts and smaller macromolecules Molecular weight dialyzed against water. After that it was Medium concentrated by lyophilization and the therein contained proteins then resuspended in PBS and dialyzed against the same buffer. In conclusion, the AM by chromatography using a Sephacryl S-200 Gel filtration column further cleaned and for storage in PBS taken on.

b) Quantifizierung der Zellbeweglichkeitb) quantification of cell mobility

Die Quantifizierung der oben genannten Substanzen auf die Zellbeweglichkeit wurde mittels des sog. "Phagokinetic track motility assay" vorgenommen.The quantification of the above substances on the Cell mobility was determined using the so-called "Phagokinetic track motility assay ".

Dazu wurden zunächst Objektträger mit Serumalbumin und dann mit Gold beschichtet. Die kolloidal goldbeschichteten Objektträger wurden danach in 35 mm Kulturschalen plaziert und 5.000 Zellen in Form einer Suspension in jede Kulturschale eingebracht. Nach Adhäsion der Zellen auf den so behandelten Objektträgern (2,5 Stunden) wurde frisches Medium (DMEM) sowie 10%iges fetales bovines Serum (FBS) zugegeben und die Kulturen für eine weitere Stunde inkubiert. Danach wurden die Kulturen mit den ausgewählten Testsubstanzen (vgl. Tabelle 1) in den oben angegebenen Konzentration versetzt und die Beweglichkeit der Zellen nach einer Inkubationsdauer von 24 h gemessen.For this purpose, slides were first made with serum albumin and then with Gold coated. The colloidal gold-coated slides were then placed in 35 mm culture dishes and 5,000 cells introduced into each culture dish in the form of a suspension. To Adhesion of the cells on the slides treated in this way (2.5 Hours) was fresh medium (DMEM) and 10% fetal added bovine serum (FBS) and the cultures for another Incubated for one hour. Afterwards the cultures with the selected test substances (see Table 1) in the above specified concentration and the mobility of the Cells measured after an incubation period of 24 h.

Die Beweglichkeit der Zellen wurden mittels eines kommerziell erhältlichen Videoanalyse-Systems (Jandel Corp.) anhand der Areale, die von der Goldbeschichtung befreit sind, gemessen, da diese Flächen direkt mit der Zellbeweglichkeit korreliert sind. Als Einheit wurde dabei eine von 100 zufällig ausgewählten Zellen berechnete Fläche verwandt. Zusätzlich erfolgt eine Beurteilung der Objektträger im Dunkelfeldmikroskop der Firma Nikon bei einer 200-fachen Vergrößerung. Die Ergebnisse dieser Untersuchung sind in Tab. 1 dargestellt.The mobility of the cells was assessed using a commercial available video analysis system (Jandel Corp.) using the  Areas that are free of the gold coating, measured because these areas are directly correlated with cell mobility. As a unit, one of 100 was selected at random Cells related area used. There is also a Assessment of the slides in the company's dark field microscope Nikon at 200x magnification. The results of this Examination are shown in Tab. 1.

Wie Tabelle 1 zeigt, bewirkt das AM im Vergleich zur Negativ- Kontrolle (DMSO) eine Erhöhung der Tumorzellbeweglichkeit um mehr als 100%. Demgegenüber wird aufgrund des hemmenden Effekts des Pertussistoxins bei gleichzeitiger Anwesenheit des gereinigten Pertussistoxins oder des azellulärem Pertussisvakzins die Beweglichkeit der Zellen annähernd auf dem Ausgangsniveau gehalten. Ferner wird aus Tab. 1 die bei den eingesetzten Konzentrationen stärkere Hemmung der Zellbeweglichkeit durch das Pertussistoxin verglichen mit dem L65-15-82 deutlich.As Table 1 shows, the AM causes Control (DMSO) an increase in tumor cell mobility more than 100%. In contrast, due to the inhibitory Effect of pertussis toxin in the presence of the purified pertussis toxin or acellular Pertussis vaccine the mobility of the cells approximately on the Starting level maintained. Furthermore, from Tab. 1 the used concentrations stronger inhibition of Cell mobility by the pertussis toxin compared to that L65-15-82 clearly.

Tabelle 1 Table 1

In-vitro Antimotilitätseffekt von gereinigtem Pertussistoxin (PTX), azellulärem Pertussisvakzin (APV) und L65-15-82 In vitro antimotility effect of purified pertussis toxin (PTX), acellular pertussis vaccine (APV) and L65-15-82

Beispiel 2Example 2 Überprüfung der In-vivo-Wirksamkeit des PertussistoxinsReview the in vivo effectiveness of the Pertussis toxins

Die Überprüfung der In-vivo-Wirksamkeit des Pertussistoxins und der Vergleich mit schon bekannten Krebstherapeutika erfolgte im Tierversuch mit weiblichen Mäusen des Stamms B6D2F1.Reviewing the in vivo efficacy of pertussis toxin and the comparison with already known cancer therapeutics was made in Animal experiment with female mice of the B6D2F1 strain.

Bei den Versuchstieren (je 28 Tiere pro Versuchsgruppe) wurden durch 10-wöchige Verfütterung des bekannten urothelspezifischen Karzinogens N-Butyl-N-(4-hydroxybutyl)-nitrosamin (BBN; 0,05% im Trinkwasser) zunächst harnblasenwandüberschreitende Tumore erzeugt. Beginnend mit der dreizehnten Versuchswoche wurden die Tiere dann für eine Zeitdauer von 10 Wochen mit mehreren Prüfsubstanzen behandelt.In the experimental animals (28 animals per experimental group) by feeding the well-known urothelium-specific for 10 weeks Carcinogen N-butyl-N- (4-hydroxybutyl) nitrosamine (BBN; 0.05% tumors that cross the urinary bladder wall generated. Starting with the thirteenth week of the trial, the Animals then for a period of 10 weeks with several Test substances treated.

Als Prüfsubstanzen wurden neben dem Pertussistoxin, das wiederum sowohl als Reinsubstanz als auch in Form des azellulären Pertussisvakzins eingesetzt wurde, L65-15-82, Mitomycin C (MMC) sowie Interferon α 2b verwendet.In addition to the pertussis toxin, the again both as a pure substance and in the form of acellular pertussis vaccine was used, L65-15-82, Mitomycin C (MMC) and interferon α 2b used.

Bei dieser Versuchsreihe wurde das Pertussistoxin sowohl alleine als auch in Kombination mit Mitomycin eingesetzt (Tab. 2). Mitomycin C (MMC) und Interferon α 2b wurden beispielhaft für die Gruppe der Cytostatika bzw. der Cytokine ausgewählt, da beide Verbindungen bereits alleine oder in Kombination bei der adjuvanten Behandlung von oberflächlichen Harnblasenkarzinomen eingesetzt werden, um Tumorrezidiv und Tumorprogression zu verhindern.In this series of experiments the pertussis toxin was both used alone as well as in combination with mitomycin (Tab. 2). Mitomycin C (MMC) and interferon α 2b have been exemplified selected for the group of cytostatics or cytokines, because both connections alone or in combination with the adjuvant treatment of superficial bladder cancer used to relapse and progression of tumors prevent.

Die eben genannten Verbindungen wurden in folgender Form eingesetzt:
The compounds just mentioned were used in the following form:

  • - Pertussistoxin (PTX)
    Das in Beispiel 1 beschriebene gereinigte Pertussistoxin wurde in einer Dosierung von 2,4 µg/100 g Körpergewicht verwendet. Die Applikation erfolgte in 0,2 ml steriler, physiologischer Kochsalzlösung.     - Pertussis toxin (PTX)
    The purified pertussis toxin described in Example 1 was used in a dosage of 2.4 µg / 100 g body weight. The application was carried out in 0.2 ml of sterile, physiological saline.
  • - Azelluläres Pertussisvakzin (APV)
    Das in Beispiel 1 beschriebene APV wurde in einer Dosierung von 0,32 ml/100 g Körpergewicht verabreicht. Zur Applikation wurde das APV in steriler physiologischer Kochsalzlösung aufgenommen, von der jeweils 0,2 ml pro Applikation eingesetzt wurden.    - Acellular pertussis vaccine (APV)
    The APV described in Example 1 was administered in a dosage of 0.32 ml / 100 g body weight. For application, the APV was taken up in sterile physiological saline, of which 0.2 ml was used per application.
  • - L65-15-82
    L65-15-82 wurde in einer Dosierung von 5 mg/bOg Körpergewicht verabreicht. Da L65-15-82 nicht in Wasser löslich ist, erfolgte seine Applikation in einem Gemisch aus 50 Vol.-% Öl und 50 Vol.-% DMSO.    - L65-15-82
    L65-15-82 was administered at a dose of 5 mg / bOg body weight. Since L65-15-82 is not soluble in water, it was applied in a mixture of 50% by volume oil and 50% by volume DMSO.
  • - Interferon α 2b (IFN α)
    Als Cytokin wurde gentechnisch hergestelltes, biologisch aktives Interferon α 2b verwendet. Die Dosierung des Interferons α betrug 3 × 105 (IU), die jeweils in 0,2 ml physiologischer Kochsalzlösung aufgenommen und appliziert wurden.    Interferon α 2b (IFN α)
    Genetically engineered, biologically active interferon α 2b was used as the cytokine. The dosage of the interferon α was 3 × 10 5 (IU), each of which was taken up and applied in 0.2 ml of physiological saline.
  • - Mitomycin C (MMC)
    Im Rahmen einer hier untersuchten Kombination mit APV wurde Mitomycin C jeweils in einer Dosierung von 0,06 mg, gelöst in 0,2 ml physiologischer Kochsalzlösung appliziert. Dies entspricht einer durchschnittlichen Menge von 2,4 mg/kg Körpergewicht. Das Mitomycin C wurde während der Versuchsdauer jeweils im Wechsel mit dem APV verabreicht.    - Mitomycin C (MMC)
    As part of a combination with APV investigated here, Mitomycin C was applied in a dosage of 0.06 mg, dissolved in 0.2 ml of physiological saline. This corresponds to an average amount of 2.4 mg / kg body weight. Mitomycin C was administered alternately with the APV during the test period.

Die Applikation der einzelnen Verbindungen erfolgte jeweils einmal wöchentlich durch intraperitonale Injektion (Tab. 2). Während der Behandlungsdauer wurde unter anderm das Verhalten der Versuchstiere erfaßt. Am Ende der 23. Versuchswoche wurden die Tiere, falls diese nicht schon vorher gestorben waren, getötet und nach Entnahme der inneren Organe (Niere, Harnblase- und -leiter, Leber, Lunge, Milz, Lymphknoten, Herz) auf fortgeschrittenes (metastasierendes) Tumorwachstum sowie bei der Behandlung auftretende Nebenwirkungen untersucht. Die Ergebnisse dieser Untersuchungen sind in Tab. 3 zusammengefaßt. The individual compounds were applied in each case once a week by intraperitoneal injection (Table 2). During the treatment period, among other things, the behavior of the experimental animals. At the end of the 23rd week of the trial the animals, if they had not died before, killed and after removal of internal organs (kidney, bladder and head, liver, lungs, spleen, lymph nodes, heart) advanced (metastatic) tumor growth as well as in side effects of the treatment were examined. The The results of these investigations are summarized in Table 3.  

Tabelle 2 Table 2

Behandlungsschema von B6D2F1-Mäusen mit chemisch induzierten Blasenwandkarzinomen Treatment regimen of B6D2F1 mice with chemically induced bladder wall carcinoma

Wie in Tab. 3 gezeigt ist, entwickelten 11 der untersuchten 27 Tiere (entsprechend 41%) aus Gruppe I, denen zur Kontrolle mit PBS intraperitoneal verabreicht worden war, die gesamte Blasenwand erfassende sowie organüberschreitende Tumore. Fünf der Versuchstiere waren zudem vor Ablauf der 23. Woche tumorbedingt verstorben. Nach Behandlung mit Interferon α 2b (Gruppe II) wurde bei 10 von 27 Tieren (37%) ein histologisch lokal fortgeschrittenes und organüberschreitendes Harnblasenkarzinom festgestellt. Neun dieser Tiere mit fortgeschrittenem Tumorwachstum wiesen ferner eine Harnstauungsniere auf.As shown in Tab. 3, 11 of the 27 examined developed Animals (corresponding to 41%) from group I, those with control PBS had been administered intraperitoneally, the whole Tumors that seize the bladder wall and cross-organ. five the test animals were also before the end of the 23rd week died of tumor. After treatment with interferon α 2b (Group II) became histological in 10 of 27 animals (37%) locally advanced and cross-organ Bladder cancer found. Nine of these animals advanced tumor growth also showed a Urinary congestion.

Dagegen wurde bei nur drei von 28 untersuchten Tieren (11%), die mit reinem Pertussistoxin bzw. azellulärem Pertussisvakzin behandelt worden waren, ein über die Harnblasenwand hinausgehendes Karzinomwachstum ermittelt. Bei der Kombinationsbehandlung von APV und Mitomycin C wurden anhand der histopathologischen Untersuchung bei zwei von 28 Tieren (7%) ein fortgeschrittenes Tumorwachstum festgestellt. Bei der Behandlung mit L65-15-82 wurde demgegenüber zwar nur bei einem der 27 untersuchten Tiere (4%) ein metastasierendes fortgeschrittenes Harnblasenkarzinom diagnostiziert. Diese Behandlung erwies sich jedoch aufgrund des als Lösungsmittel für L65-15-82 notwendigen DMSO als äußerst problematisch. So verstarben therapiebedingt zwei der Tiere vor Erreichen der 23. Versuchswoche. Bei beiden Tieren wurde bei der Sektion eine Peritonitis als Todesursache festgestellt.In contrast, in only three of 28 animals examined (11%), those with pure pertussis toxin or acellular pertussis vaccine  had been treated, one over the bladder wall cancer growth beyond that determined. In the Combination treatment of APV and mitomycin C were based on histopathological examination in two of 28 animals (7%) found an advanced tumor growth. In the In contrast, treatment with L65-15-82 was only in one of the 27 animals examined (4%) metastasized diagnosed with advanced bladder cancer. This Treatment turned out to be a solvent, however DMSO necessary for L65-15-82 as extremely problematic. So Two of the animals died due to the therapy before reaching 23. Trial week. In both animals there was one in the section Peritonitis found to be the cause of death.

Gleichfalls traten als Nebenwirkung bei 19 (70%) der mit L65- 15-82 behandelten Tiere Auffälligkeiten im Sinne einer Peritonitis (WHO-Klassifikation Grad IV) auf. Acht Tiere zeigten zudem eine entzündlich bedingte einseitige Hydronephrose, die sich in einer signifikant erhöhten Granulozytenzahl der mit L65-15-82 behandelten Tiere dokumentierte. Nur insgesamt 6 der 27 Tiere aus Gruppe III blieben nach dem Ende der Versuchsreihe ohne erkennbare Nebenwirkungen.Similarly, as a side effect, 19 (70%) of those with L65- 15-82 treated animals abnormalities in the sense of a Peritonitis (WHO classification grade IV). Eight animals also showed an inflammatory one-sided Hydronephrosis, which increased significantly Granulocyte count of animals treated with L65-15-82 documented. Only a total of 6 of the 27 animals from group III remained without recognizable after the end of the test series Side effects.

Bei der alleinigen Behandlung mit Pertussistoxin in Form des gereinigten Proteins bzw. des APV sowie bei der Behandlung mit Interferon α 2b waren demgegenüber keine Nebenwirkungen oder Veränderungen im Blutbild zu erkennen. Bei der Kombination von APV und MMC (Gruppe VI) kam es aufgrund der Cytostatika- Behandlung dieser Tiere lediglich zu eine Hyperpigmentation im Fuß- und Krallenbereich. Ferner wurde bei 24 Tieren als Folge des Cytostatikums eine Verlangsamung der Bewegungen und Apathie im Vergleich zu den anderen Versuchsgruppen beobachtet. Bei je einem Tier dieser Gruppe wurde zudem noch partieller Haarverlust (WHO Grad II) bzw. eine einseitige Schrumpfniere bei kontralateral unauffälliger Niere festgestellt. When treated alone with pertussis toxin in the form of purified protein or APV as well as in the treatment with In contrast, interferon α 2b were no side effects or Detect changes in the blood count. When combining APV and MMC (Group VI) occurred due to the cytostatics Treatment of these animals only leads to hyperpigmentation in the Foot and claw area. Furthermore, in 24 animals as a result of the cytostatic a slowdown in movement and apathy observed in comparison to the other test groups. At each an animal from this group also became more partial Hair loss (WHO grade II) or a one-sided shrink kidney found in the contralateral inconspicuous kidney.  

Tabelle 3 Table 3

Zusammenfassung der Therapieergebnisse auf chemisch induzierte, fortgeschrittene Harnblasenkarzinome der Maus Summary of therapy results on chemically induced, advanced bladder carcinoma of the mouse

Aus dieser Versuchsreihe wird somit ersichtlich, dass das Pertussistoxin eine wesentlich bessere Wirksamkeit als z. B. Interferon α 2b bei der Behandlung beispielsweise von Harnblasenkarzinomen besitzt und die Bildung fortgeschrittener Tumore signifikant reduziert. Gleichzeitig ist die Applikation des Pertussistoxins frei von Nebenwirkungen und somit als wesentlich günstiger zu beurteilen als die von L65-15-82, das eine annähernd gleiche Wirksamkeit zeigt.From this series of experiments it can be seen that the Pertussis toxin a much better effectiveness than z. B. Interferon α 2b in the treatment of, for example Has bladder cancer and advanced education Tumors significantly reduced. At the same time is the application of pertussis toxin free of side effects and thus as much cheaper to assess than that of L65-15-82, the shows approximately the same effectiveness.

Auf dem tierexperimentellen Befund aufbauend wurde die Eignung des Pertussistoxins als Therapeutikum in einer ersten klinischen Studie überprüft. Dazu wurden aus einer Gruppe von 13 Patienten mit metastatisiertem Harnblasenkarzinom, dessen Progression durch die Gabe von Methroxat und Cisplatin nicht unterdrückt werden konnte, vier Patienten nur mit azellulärem Pertussisvakzin und neun Patienten mit einer Kombination aus Pertussisvakzin und den Cystostatika Taxol und Carboplatin behandelt.The suitability was based on the animal experiments of pertussis toxin as a therapeutic agent in a first clinical trial reviewed. For this purpose, a group of 13 patients with metastatic bladder cancer, whose No progression through the administration of methroxate and cisplatin could be suppressed, four patients only with acellular Pertussis vaccine and nine patients with a combination of Pertussis vaccine and the cystostatics Taxol and Carboplatin treated.

Bei dem alleinigen Einsatz von APV wurde eine Dosis von insgesamt 280 µg PTX über einen Zeitraum von 12 Wochen verabreicht. Die Kombinationstherapie wurde in mehreren dreiwöchigen Zyklen durchgeführt. Ein Zyklus wurde mit der dreimaligen Gabe von APV (47 µg PTX) in den ersten sechs Tagen begonnen, bevor dann je einmal Taxol (135 mg/m2 Körperoberfläche) und daraufhin Carboplatin (400 mg/m2 Körperoberfläche) verabreicht wurde. Danach wurde in viertägigen Intervallen wiederum APV (je 14 µg)verabreicht. Bei alleiniger Behandlung mit APV wurde nach 6 Monaten bei einem Patienten ein Stillstand der Krebserkrankung festgestellt (stable disease). Bei Anwendung einer Kombinationstherapie wurde bei drei Patienten nach zwei bis vier Zyklen eine vollständige Remission von Metastasen, die in der Beckenwand, der Leber bzw. den Lymphknoten angesiedelt waren, beobachtet. Während es bei Applikation der Cystostika trotz der Gabe von Antiemetika zu Erbrechen und Übelkeit kam, traten bei der Behandlung mit dem Pertussistoxin keine Nebenwirkungen auf.When APV was used alone, a total dose of 280 µg PTX was administered over a period of 12 weeks. The combination therapy was carried out in several three-week cycles. A cycle was started with the administration of APV (47 µg PTX) three times in the first six days, before taxol (135 mg / m 2 body surface) and then carboplatin (400 mg / m 2 body surface) were administered. APV (14 µg each) was then administered again at four-day intervals. When treated with APV alone, one patient was diagnosed with cancer stopping after 6 months (stable disease). When combination therapy was used, complete remission of metastases located in the pelvic wall, liver or lymph nodes was observed in two patients after two to four cycles. While vomiting and nausea occurred when the cystostics were administered despite the administration of antiemetics, there were no side effects during treatment with the pertussis toxin.

Claims (14)

1. Verfahren zur Bestimmung des Einflusses von Pertussistoxins auf die Beweglichkeit von Tumorzellen, dadurch gekennzeichnet, dass Tumorzellen in vitro in einer Zellkulturvorrichtung, die mit Mitteln zur Erfassung der Zellbeweglichkeit versehen ist, stabil kultiviert werden, danach Pertussistoxin zu der Tumorzellkultur hinzugegeben wird, die Zellen weiter über einen dem Typ der Tumorzelle angepaßten Zeitraum in der Vorrichtung kultiviert werden, wobei die Beweglichkeit der Tumorzellen durch die Mittel zur Erfassung der Zellbeweglichkeit aufgezeichnet wird, und die Beweglichkeit nach diesem Zeitraum in einer Auswertungseinheit unter Bezugnahme auf eine Kontrolle ohne Verabreichung von Pertussistoxin ausgewertet wird.1. A method for determining the influence of pertussis toxin on the mobility of tumor cells, characterized in that tumor cells are stably cultivated in vitro in a cell culture device which is provided with means for detecting cell mobility, after which pertussis toxin is added to the tumor cell culture, the cells be cultured in the device for a period of time adapted to the type of the tumor cell, the mobility of the tumor cells being recorded by the means for detecting cell mobility, and the mobility after this period being evaluated in an evaluation unit with reference to a control without administration of pertussis toxin . 2. Verfahren gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass zusätzlich zum Pertussistoxin eine die Zellbeweglichkeit stimulierende Verbindung zu der Tumorzellkultur hinzugegeben wird.2. The method according to claim 1, characterized in that in addition to pertussis toxin, cell mobility stimulating compound added to the tumor cell culture becomes. 3. Verfahren gemäß Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass das Pertussistoxin als Reinstoff zu der Tumorzellkultur hinzugeben wird.3. The method according to claim 1 or 2, characterized characterized that the pertussis toxin as a pure substance to the Tumor cell culture will add. 4. Verfahren gemäß Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass das Pertussistoxin in Form eines Zellextraktes, vorzugsweise in Form eines azellulären Pertussisvakzins, zu der Tumorzellkultur hinzugegeben.4. The method according to claim 1 or 2, characterized characterized in that the pertussis toxin in the form of a Cell extract, preferably in the form of an acellular Pertussis vaccine, added to the tumor cell culture. 5. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass die Tumorzellen vor der in-vitro Kultivierung aus einem biologischen Material, das aus der Gruppe ausgewählt wird, die aus Tumorgewebe, Blut, Lymphe, Ascitesflüssigkeit, Peritonalerguß, Pleuraerguß, Liquor, Urin, Speichel und Wundsekret besteht, isoliert und in Primärkultur gehalten werden. 5. The method according to any one of claims 1 to 4, characterized characterized that the tumor cells before the in vitro Cultivation from a biological material that comes from the Group selected from tumor tissue, blood, lymph, Ascites fluid, peritoneal effusion, pleural effusion, cerebrospinal fluid, urine, Saliva and wound secretions exist, isolated and in primary culture being held.   6. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass die Mittel zur Erfassung der Zellbeweglichkeit die Bestimmung mittels Videoanalyse, des Phagokinetic Truck Assay oder des Boyden Chamber Assays ermöglicht.6. The method according to any one of claims 1 to 5, characterized characterized that the means to capture the Cell mobility the determination by video analysis, the Phagokinetic Truck Assay or Boyden Chamber Assay enables. 7. Verwendung des Pertussistoxins zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Behandlung von Tumorerkrankungen.7. Use of the pertussis toxin to produce a pharmaceutical composition for the treatment of Tumor diseases. 8. Verwendung gemäß Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, dass das Pertussistoxin aus dem natürlichen Herkunftsorganismus isoliert oder gentechnisch hergestellt wird.8. Use according to claim 7, characterized in that that the pertussis toxin comes from the natural organism of origin isolated or genetically engineered. 9. Verwendung gemäß Anspruch 7 oder 8, dadurch gekennzeichnet, dass das Pertussistoxin als Reinstoff vorliegt.9. Use according to claim 7 or 8, characterized characterized that the pertussis toxin is present as a pure substance. 10. Verwendung gemäß Anspruch 7 oder 8, dadurch gekennzeichnet, dass das Pertussistoxin in Form eines pharmakologisch akzeptablen Zellextrakts, vorzugsweise in Form eines azellulären Pertussisvakzins, vorliegt.10. Use according to claim 7 or 8, characterized characterized in that the pertussis toxin in the form of a pharmacologically acceptable cell extract, preferably in the form an acellular pertussis vaccine. 11. Verwendung gemäß einem der Ansprüche 7 bis 10, dadurch gekennzeichnet, dass die pharmazeutische Zusammensetzung zumindest ein weiteres Krebstherapeutikum enthält, das aus der Gruppe ausgewählt wird, die aus Cystostatika, Immuntherapeutika und Strahlungstherapeutika besteht.11. Use according to one of claims 7 to 10, characterized characterized that the pharmaceutical composition Contains at least one other cancer therapeutic that comes from the Group is selected from cystostatics, immunotherapeutics and radiation therapy. 12. Verwendung gemäß Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, dass das Krebstherapeutikum aus der Gruppe ausgewählt wird, die aus Interleukin, Interferon α 2b, Mitomycin C, Taxanabkömmlingen, vorzugsweise Paclitaxel, Gemcitabinen sowie aus Cisplatin und Carboplatin besteht.12. Use according to claim 11, characterized in that that the cancer therapeutic is selected from the group that from interleukin, interferon α 2b, mitomycin C, Taxane derivatives, preferably paclitaxel, gemcitabins as well consists of cisplatin and carboplatin. 13. Verwendung gemäß einem der Ansprüche 7 bis 12 zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur oralen, intrakutanen, subkutanen, intramuskulären, intravenösen, intravesikalen, intracavitären, inhalativen, intraperitonalen oder intrapleuralen Applikation.13. Use according to one of claims 7 to 12 for Production of a pharmaceutical composition for oral, intracutaneous, subcutaneous, intramuscular, intravenous,  intravesical, intracavitary, inhalative, intraperitoneal or intrapleural application. 14. Verwendung gemäß einem der Ansprüche 7 bis 13 zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Behandlung von Karzinomen und Sarcomen.14. Use according to one of claims 7 to 13 for Production of a pharmaceutical composition for Treatment of carcinomas and sarcomas.
DE19847107A 1998-10-13 1998-10-13 Use of pertussis toxin to prepare a pharmaceutical composition for treating tumors, especially carcinomas or sarcomas Ceased DE19847107A1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19847107A DE19847107A1 (en) 1998-10-13 1998-10-13 Use of pertussis toxin to prepare a pharmaceutical composition for treating tumors, especially carcinomas or sarcomas

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19847107A DE19847107A1 (en) 1998-10-13 1998-10-13 Use of pertussis toxin to prepare a pharmaceutical composition for treating tumors, especially carcinomas or sarcomas

Publications (1)

Publication Number Publication Date
DE19847107A1 true DE19847107A1 (en) 2000-04-20

Family

ID=7884286

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE19847107A Ceased DE19847107A1 (en) 1998-10-13 1998-10-13 Use of pertussis toxin to prepare a pharmaceutical composition for treating tumors, especially carcinomas or sarcomas

Country Status (1)

Country Link
DE (1) DE19847107A1 (en)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1988009797A1 (en) * 1987-06-05 1988-12-15 The United States Of America, As Represented By Th Autocrine motility factors in cancer diagnosis and management

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1988009797A1 (en) * 1987-06-05 1988-12-15 The United States Of America, As Represented By Th Autocrine motility factors in cancer diagnosis and management

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Chemical Patents Index, Documentation Abstracts Journal, B, Derwent Publications, London 1989, Nr.89, 266840/37 zu. JP 1193231 A *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0142641B1 (en) Means and product for the diagnosis and therapy of tumours and for the treatment of weaknesses of the cellular and humoral immune system
DE69821011T3 (en) Method of modulating the neovascularization and / or growth of collateral arteries and / or other arteries from existing arteriolar compounds
Stewart et al. Human central nervous system distribution of cis-diamminedichloroplatinum and use as a radiosensitizer in malignant brain tumors
DE69732225T2 (en) Process for the encapsulation of biologically active substances in erythrocytes and apparatus therefor
DE69928410T2 (en) SELENIUM COMPOSITION FOR TREATING SYSTEMIC INFLAMMATORY SYNDROME
DE69735202T2 (en) STIMULATING EFFICIENT DEFENSE MECHANISMS AGAINST CANCER
DE60213407T2 (en) COMPOSITIONS FOR INHIBITING ANGIOGENESIS
DE69628838T2 (en) CHEMOKIN BINDING PROTEIN AND METHOD FOR USE THEREOF
DE202014011208U1 (en) C1-INH compositions for the prevention and treatment of disorders associated with C1-esterase inhibitor deficiency
DE3319347A1 (en) MEDICINAL PRODUCTS FOR REINFORCING THE THERAPEUTIC EFFECT OF ANTITUARY AGENTS AND THE USE THEREOF
DE69917796T2 (en) DECURSIN-CONTAINING PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS
EP0083600A1 (en) Use of alkaloid derivatives for the manufacture of a medicament for the strengthening of the immune system and for the treatment of viral, bacterial and fungal infections.
DE3115080A1 (en) MEDICINAL PRODUCTS FOR ORAL ADMINISTRATION AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF
AT501983B1 (en) Cytostatic drug containing a polymeric guanidine derivative
DE112009003659T5 (en) Means for eliminating multi-drug resistance
DE60216292T2 (en) CALCIUM TRIFLUORACETATE WITH CYTOTOXIC EFFECT
DE69634138T2 (en) HGF mutant and its use as an anticancer agent
DE19847107A1 (en) Use of pertussis toxin to prepare a pharmaceutical composition for treating tumors, especially carcinomas or sarcomas
DE69735204T2 (en) STIMULATING EFFICIENT DEFENSE MECHANISMS AGAINST TUMORS
EP1633394B1 (en) Combined pharmaceutical preparations for the treatment of cancer, containing glutaminase and antineoplastic anthracyclines or platinum compounds
DE60036790T2 (en) USE OF E5564 FOR THE TREATMENT OF SEPSIS BY INTRAVENOUS INFUSION
EP1466614A1 (en) Polypeptide, the conjugate thereof containing doxorubicine and a pharmaceutical composition based thereon
DE2528460A1 (en) 1-Carbamoyl 2-cyano aziridine as immunostimulant - for therapy of bacterial and viral infections
DE2815891A1 (en) ORAL ADMINISTRATIVE ANTITUMOR PREPARATION AND USE OF POLYACRYLIC ACID ALKALIMETAL SALTS TO INCREASE THE ABSORPTION OF ANTITUMOR AGENTS AT GASTROINTESTINAL TUMOR SITES
DE10226216A1 (en) Treatment of severe infections and septic shock

Legal Events

Date Code Title Description
OP8 Request for examination as to paragraph 44 patent law
8131 Rejection