DE19735931C2 - Piston stroke pipette for volume metering and viscosity measurement - Google Patents

Piston stroke pipette for volume metering and viscosity measurement

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Description

Für die Durchführung viskosimetrischer Affinitätsassays (Ehwald, R., Ballerstädt, R. und Dautzenberg, H., Anal. Biochemistry 234. 1-8 (1996) und für die quantitative Erfassung des Blutgerinnungsverlaufes ist eine bequeme und sichere Erfassung der Viskosität von Flüssigkeiten in einem sehr kleinen Volumen von Bedeutung. For performing viscometric affinity assays (Ehwald, R., Ballerstädt, R. and Dautzenberg, H., Anal. Biochemistry 234. 1-8 (1996) and for the quantitative assessment of the Blood coagulation course is a convenient and safe measurement of the viscosity of Liquids in a very small volume matter.  

Für die Viskositätsmessung in kleinen flüssigen Probevolumen können verschiedene in der Literatur bekannte Kapillarviskosimeter (vgl. DE 20 44 356 A oder Kulicke, W.- M., Böse, N. In: W.-M. Kulicke (Hersg.): Fließverhalten von Stoffen und Stoffgemischen, p.p 58-67, Hüthig & Wepf-Verl. Basel, Heidelberg, New York 1986) eingesetzt werden, jedoch fehlt ein handliches, transportables Gerät mit elektronischer Meßwertanzeige für diesen Zweck. Various can be used for viscosity measurement in small liquid sample volumes Capillary viscometers known in the literature (cf. DE 20 44 356 A or Kulicke, W.- M., Böse, N. In: W.-M. Kulicke (Hersg.): Flow behavior of substances and Mixtures, p.p 58-67, Hüthig & Wepf-Verl. Basel, Heidelberg, New York 1986) are used, but a handy, portable device is missing electronic measured value display for this purpose.  

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein transportables, gegebenenfalls ohne Netzanschluß und äußere Quelle für Über- oder Unterdruck funktionierendes Viskositäts­ meßgerät, das für bequem durchführbare, nahezu verlustfreie und wiederholte Messung der Viskosität oder eines von der Viskosität abhängigen Parameters in flüssigen Proben mit geringem Volumen (Mikrolitermaßstab) geeignet ist, zu entwickeln. Das Gerät soll die Gewinnung reproduzierbarer Viskositätswerte mit geringer Standardabweichung in kurzer Zeit ermöglichen und beispielsweise die genaue Messung des Zeitverlaufes der Viskosität in einem Bluttropfen ermöglichen, um die Wirksamkeit gerinnungshemmender Faktoren zu quantifizieren. Es soll auch eingesetzt werden können, um die Aktivität hydrolytischer Enzyme in einer Biopolymerlösung oder die Konzentration eines Affinitätsliganden in einer sensitiven Flüssigkeit schnell und sicher zu bestimmen. Die genannte Aufgabe bezieht sich daher auch auf die Bereitstellung bequemer und genauer viskosimetrische Affinitätsassays für eine große Zahl von geeigneten Analyten.The invention has for its object a portable, possibly without Mains connection and external source for positive or negative working viscosity measuring device for the convenient, practically lossless and repeated measurement of the Viscosity or a parameter dependent on the viscosity in liquid samples small volume (microliter scale) is suitable to develop. The device is said to Obtaining reproducible viscosity values with low standard deviation in a short time Enable time and, for example, the exact measurement of the time course of the viscosity in allow a drop of blood to increase the effectiveness of anticoagulant factors quantify. It is also said to be able to increase hydrolytic activity Enzymes in a biopolymer solution or the concentration of an affinity ligand in one sensitive liquid quickly and reliably. The task mentioned relates hence on providing more convenient and accurate viscometric affinity assays for a large number of suitable analytes.

Die Viskosität wäßriger Polymerdispersionen ist stets scherdruckabhängig. Es kommt jedoch in den genannten Anwendungsfällen nicht auf die räumliche oder zeitliche Konstanz der Schergeschwindigkeit oder des Scherdruckes bzw. auf eine durch konstante Werte dieser Größen definierte absolute Viskosität an. Es genügt die Vergleichbarkeit und Reproduzierbar­ keit der Messungen. Eine Konstanz der Schubspannung bzw. der Schergeschwindigkeit am Rand der Kapillare ist nicht erforderlich.The viscosity of aqueous polymer dispersions is always dependent on the shear pressure. It is coming however, in the applications mentioned, not on the spatial or temporal constancy the shear rate or the shear pressure or to a constant value of these Values defined absolute viscosity. Comparability and reproducibility are sufficient measurement. A constant shear stress or shear rate at The edge of the capillary is not necessary.

Die Aufgabe wird erfindungsgemäß dadurch gelöst, daß zur Bestimmung der apparenten Viskosität eine Kolbenhubpipette mit Zeitmeßvorrichtung eingesetzt wird. Mit Hilfe der Zeitmeßvorrichtung kann die Zeit erfaßt werden, die nach der Entspannung der Kolbenfeder für das Einsaugen eines bestimmten Volumens der zu analysierenden Flüssigkeit in die Pipettenspitze verstreicht. Eine weitere Möglichkeit besteht darin, die Zeit zu messen, die nach Drücken des Kolbens in die Auslaufposition für die vollständige Entleerung der Probe erforderlich ist. The object is achieved in that for determining the Apparent viscosity a piston stroke pipette with a time measuring device is used. With With the help of the time measuring device, the time after the relaxation of the Piston spring for sucking in a certain volume of the liquid to be analyzed spreads into the pipette tip. Another way is to measure the time after pushing the piston into the outlet position for the complete emptying of the Sample is required.  

Kolbenhubpipetten werden in zahlreichen Varianten (z. B. DE 28 57 423 C2, US- PS 4 304 138) zur Volumendosierung eingesetzt. Es sind auch Kolbenhubpipetten bekannt, bei denen die Pipettenspitze als Meßkammer für einen analytischen Sensor genutzt wird (AT 391 634 B). Obwohl mit jedem Pipettiervorgang ein Volumenfluß verbunden ist, sind Kolbenhubpipetten für die Viskositätsmessung bisher nicht ausgerüstet. Piston stroke pipettes are available in numerous variants (e.g. DE 28 57 423 C2, US PS 4 304 138) used for volume metering. They are too Piston stroke pipettes are known in which the pipette tip is used as a measuring chamber for an analytical sensor is used (AT 391 634 B). Although with everyone Pipetting process is connected to a volume flow, are piston stroke pipettes for the viscosity measurement has not been equipped so far.  

Ein wesentlicher Vorteil der Erfindung ist darin begründet, daß im Gegensatz zu allen bekannten Viskosimetern das Kapillarsystem erneuerbar ist und damit Reinigungen, zeitliche Abnutzungen oder sonstige durch den Gebrauch auftretende Veränderungen am Meßsystem entfallen können.A major advantage of the invention is that, in contrast to all known viscometers, the capillary system is renewable and thus cleaning, temporal Wear or other changes to the measuring system caused by use can be omitted.

Die erfindungsgemäße Kolbenhubpipette kann sowohl für die Volumendosierung als auch für Viskositätsmessungen eingesetzt werden. Sie ist handlich und für die Durchführung von viskosimetrischen Affinitätsassays oder für Viskositätsmessungen an kleinen Blutproben bequem einsetzbar. Das dargestellte Viskosimeter liefert im Fall Newton'scher Flüssigkeiten einen vom Gerät unabhängigen Materialparameter; in anderen Fällen wird eine Strömungszeit gemessen, die unter den gegebenen Bedingungen als integraler Ausdruck für die zeit- und ortsabhängigen Viskositäten der in der Pipettenspitze strömenden Flüssigkeit anzusehen ist. Die physikalische Komplexität der so gewonnenen apparenten Viskosität ist für die in der Aufgabe genannten Anwendungen ohne Nachteil, da diese Anwendungen ohnehin die Eichung des Gerätes erfordern.The piston stroke pipette according to the invention can be used both for volume metering can also be used for viscosity measurements. It is handy and easy to carry out of viscometric affinity assays or for viscosity measurements on small blood samples easy to use. The viscometer shown provides Newtonian liquids a material parameter independent of the device; in other cases there is a flow time measured which under the given conditions as an integral expression for the time and location-dependent viscosities of the liquid flowing in the pipette tip can be seen. The physical complexity of the apparent viscosity thus obtained is for that in the Applications mentioned task without disadvantage, since these applications anyway Require calibration of the device.

Zur Viskositätsmessung mit der Kolbenhubpipette können beispielsweise serienmäßig hergestellte auswechselbare Kunststoffspitzen mit definiertem effektivem Einström- oder Ausströmwiderstand in unterschiedlichen Typen eingesetzt werden. Die typenabhängigen Strömungswiderstände handelsüblicher Kunststoffspitzen sind so einheitlich, daß sie in Verbindung mit handelsüblichen Kolbenhubpipetten genau reproduzierbare Messungen der apparenten Viskosität in einem weiten Meßbereich ermöglichen. Für besondere Meßaufgaben kann es günstig sein, besonders gestaltete Pipettenspitzen für die Viskositätsmessung einzu­ setzen. Eine Möglichkeit hierzu besteht in der Verlängerung der Pipettenspitze mit einer definierten Kapillare oder in dem Aufsetzen einer Kapillare mit definiertem Strömungswider­ stand auf die Pipettenspitze. Im letztgenannten Fall ist es möglich, ein definiertes Volumen der zu untersuchenden Flüssigkeit in die Pipettenspitze einzusaugen, anschließend die Kapillare aufzusetzen und die Ausströmzeit zu messen.For viscosity measurement with the piston stroke pipette, for example, can be used as standard manufactured replaceable plastic tips with defined effective inflow or  Outflow resistance can be used in different types. The type-dependent Flow resistances of commercially available plastic tips are so uniform that they are in Connection with commercially available piston stroke pipettes for precisely reproducible measurements of the allow apparent viscosity in a wide measuring range. For special measuring tasks it can be beneficial to insert specially designed pipette tips for viscosity measurement put. One way to do this is to extend the pipette tip with a defined capillary or in the placement of a capillary with a defined flow resistance stood on the pipette tip. In the latter case it is possible to have a defined volume the liquid to be examined into the pipette tip, then the Put on the capillary and measure the outflow time.

Die durch einen fest eingestellten Kolbenhub erzeugte Druckdifferenz zwischen dem zu messenden Flüssigkeitsvolumen und dem gasgefüllten Raum zwischen dem Kolben und der Pipettenspitze kann durch Veränderung der Größe des genannten gasgefüllten Raumes variiert werden. Dies ermöglicht in Verbindung mit dem gleichen Typ der Pipettenspitze die Möglichkeit zur Einstellung eines für genaue Messungen optimalen Bereiches der Strömungszeit bzw. der Schergeschwindigkeit.The pressure difference between the generated by a fixed piston stroke volume of liquid to be measured and the gas-filled space between the piston and The pipette tip can be changed by changing the size of the gas-filled space can be varied. This enables the in connection with the same type of pipette tip Possibility to set an optimal range for accurate measurements Flow time or the shear rate.

Die Steuerung der Zeitmeßvorrichtung kann z. B. mit dem mechanischen System der Pipette durch elektrische Kontakte verbunden werden, so daß letztere nach Art einer Stoppuhr beim manuellen Betätigen des Kolbens in Gang gesetzt und gegebenenfalls auch beendet wird. Es sind aber auch andere, z. B. optische Sensoren, Druck- oder Ultraschallsensoren, für die Detektion des Startsignals einsetzbar.The control of the time measuring device can e.g. B. with the mechanical system of Pipette are connected by electrical contacts, so that the latter in the manner of a stopwatch started by manual actuation of the piston and possibly also ended becomes. But there are also others, e.g. B. optical sensors, pressure or ultrasonic sensors for the detection of the start signal can be used.

Die Pipette kann mit einer Füllstandsmeßvorrichtung versehen werden, die mit der Zeitmeßvorrichtung verbunden ist, so daß bei Erreichen eines bestimmten Füllstandes in der Pipettenspitze der Zeitmeßvorgang automatisch unterbrochen wird. Es ist vorteilhaft, wenn die Füllstandsmeßvorrichtung in die Pipette fest integriert ist und den Füllstand in der Pipette berührungslos erfaßt. Hierzu kann beispielsweise die Lichtbrechung oder Lichtreflexion am Meniskus in der Pipettenspitze durch geeignete Kombination einer Lichtquelle mit einem in der Pipette integrierten Lichtsensor, z. B. über einen Lichtleiter aus Glas gemessen werden. Die Füllstandsmessung kann auch durch andere, z. B. dielektrische, galvanische oder mechanische Meßsysteme erfolgen.The pipette can be provided with a level measuring device, which with the Timepiece is connected so that when a certain level is reached in the Pipette tip the time measurement process is automatically interrupted. It is beneficial if the level measuring device is firmly integrated in the pipette and the level in the pipette recorded without contact. For this purpose, for example, the refraction of light or light reflection on Meniscus in the pipette tip through a suitable combination of a light source and an in the pipette integrated light sensor, e.g. B. can be measured via a glass fiber. The level measurement can also be done by others, e.g. B. dielectric, galvanic or mechanical measuring systems.

Die Kolbenhubpipette kann mit einem elektronischen Meßwertwandler verbunden werden, so daß nach Eingabe des Ergebnisses einer oder mehrerer Eichmessungen eine Transformation der Strömungsdauer in eine apparente Viskosität oder eine von ihr abhängige Größe, z. B. eine Konzentration, durchführbar ist. Zur Vereinfachung der Anwendung kann der Meßwertwandler so ausgestattet werden, daß nach Überschreitung eines einzugebenden Grenzwertes ein akustisches oder optisches Signal ausgeben wird.The piston stroke pipette can be connected to an electronic transducer so that after entering the result of one or more calibration measurements Transformation of the flow duration into an apparent viscosity or one dependent on it Size, e.g. B. a concentration is feasible. Can simplify the application the transducer must be equipped in such a way that after an input has been exceeded An acoustic or optical signal is output.

Durch Integration eines Temperatursensors innerhalb oder in unmittelbarer Nähe der Pipettenspitze kann außerdem die Voraussetzung für eine Temperaturkorrektur der gemessenen Werte geschaffen werden.By integrating a temperature sensor inside or in the immediate vicinity of the Pipette tip can also be the prerequisite for a temperature correction of the measured values are created.

Das Gerät kann mit einem internen Meßwertspeicher und einer Steckverbindung für den Anschluß an ein datenverarbeitendes System ausgerüstet werden.The device can be equipped with an internal measured value memory and a plug connection for the connection to a data processing system.

Mit der dargestellten Kolbenhubpipette ist es erfindungsgemäß möglich, viskosi­ metrische Affinitätsassays in vorgefertigten Einwegbehältern mit sensitiver Flüssigkeit oder den lyophilisierten Komponenten dieser Flüssigkeit durchzuführen, ohne daß vor dem Meßvorgang eine Dosierung der sensitiven Flüssigkeit erforderlich ist. Erfindungsgemäß können standardisierte Mengen der sensitiven Flüssigkeit oder ihrer Komponenten in den Probenbehältern einer Mikrotiterplatte vorliegen, mit der zu analysierenden Probe vermischt und mit der Kolbenhubpipette analysiert werden. Es kann vorteilhaft sein, wenn definierte Mengen der sensitiven Flüssigkeit bereits in den Pipettenspitzen abgefüllt vorliegen, wobei die Öffnungen der Pipettenspitzen verschlossen sind. In dieser Form können die Pipetten­ spitzen in einer geeigneten Halterung vor der Durchführung des Tests kühl gelagert werden. Zur Durchführung des Assays werden die Pipettenspitzen dann in ihrer Halterung auf die Untersuchungstemperatur gebracht, die sensitive Flüssigkeit wird mit der Probe gemischt und die Pipettenspitze auf die Pipette aufgesetzt, wobei die Auslauföffnung noch durch eine abnehmbare Kappe verschlossen bleibt. Zum Druckausgleich zwischen dem inneren Gasraum der Pipette und der Atmosphäre bei aufgesetzter verschlossener Pipettenspitze muß vorübergehend ein Ventil geöffnet werden. Beispielsweise können durch Drehen der Pipettenspitze am Pipettenschaft zwei zueinander passende Bohrungen in der Pipettenspitze und im Pipettenschaft miteinander verbunden und anschließend wieder geschlossen werden. Danach kann der Auslauf der Pipettenspitze geöffnet werden und die Messung, gegebenen­ falls mit aufgesetzter Meßkapillare, erfolgen.With the piston stroke pipette shown, it is possible according to the invention to viscous metric affinity assays in prefabricated disposable containers with sensitive liquid or to carry out the lyophilized components of this liquid without prior to Measuring process a dosage of the sensitive liquid is required. According to the invention can standardized amounts of the sensitive liquid or its components in the Sample containers of a microtiter plate are present, mixed with the sample to be analyzed and be analyzed with the piston stroke pipette. It can be advantageous if defined Amounts of the sensitive liquid are already filled into the pipette tips, whereby the openings of the pipette tips are closed. The pipettes can be used in this form tips should be stored in a suitable holder in a cool place before performing the test. To carry out the assay, the pipette tips are then held in their holders on the  Brought to the test temperature, the sensitive liquid is mixed with the sample and the pipette tip is placed on the pipette, the outlet opening still being covered by a removable cap remains closed. For pressure equalization between the inner gas space the pipette and the atmosphere when the pipette tip is closed temporarily open a valve. For example, by turning the Pipette tip on the pipette shaft two matching holes in the pipette tip and connected in the pipette shaft and then closed again. Then the outlet of the pipette tip can be opened and the measurement given if with measuring capillary attached.

Obwohl die Viskosität von Polymersuspensionen von der Temperatur abhängt, ist bei Einzelmessungen eine Thermostatierung der Proben nicht dringend erforderlich, wenn die für die Eichung zu vermessenden Lösungen vor und während der Messung bei gleicher Tempera­ tur wie die Probe aufbewahrt wurden. Zur Vermessung größerer Proben zahlen oder zur Untersuchung der Zeitabhängigkeit der Viskositätsänderung kann die Halterung für die Probengefäße als thermostatierbarer Metallblock ausgeführt, werden, um den Einfluß der Temperatur auf den Meßwert auszuschließen.Although the viscosity of polymer suspensions depends on the temperature, at Individual measurements do not require thermostatting of the samples if necessary for the calibration of the solutions to be measured before and during the measurement at the same temperature how the sample was stored. Pay to measure larger samples or to Examination of the time dependence of the change in viscosity can be carried out for the holder Sample vessels designed as a thermostattable metal block, to the influence of the Exclude temperature on the measured value.

Die Kolbenhubpipette kann auch Bestandteil eines stationär zu betreibenden Gerätes sein, bei dem die Messung automatisch durchgeführt werden kann. Das Gerät kann gleich­ zeitig Vorrichtungen enthalten, die einen automatischen Austausch der Spitzen und eine automatische Zuführung der Proben ermöglichen.The piston stroke pipette can also be part of a device to be operated stationary in which the measurement can be carried out automatically. The device can do the same early contain devices that automatically exchange tips and one enable automatic feeding of samples.

Anwendungsbeispielexample

Das Beispiel bezieht sich auf die Glucosebestimmung mit dem viskosimetrischen Affinitätsassay, der mit einer gepufferten sensitiven Lösung aus Concanavalin A und Dextran T2000 durchgeführt wird (Phosphatpuffer pH 7: 0,03 M, NaN3: 0.05%, CaCl2: 0,1 mM, MnCl2: 0,1 mM, ConA: 15 mg/ml, Dextran: 45 mg/ml).The example relates to the glucose determination with the viscosimetric affinity assay, which is carried out with a buffered, sensitive solution of Concanavalin A and Dextran T2000 (phosphate buffer pH 7: 0.03 M, NaN 3 : 0.05%, CaCl 2 : 0.1 mM, MnCl 2 : 0.1 mM, ConA: 15 mg / ml, dextran: 45 mg / ml).

50 mg-Mengen der sensitiven Flüssigkeit wurden auf Probenräume einer kommerziell erhältlichen Mikrotest-Platte dosiert, die Probenräume mit kommerziell angebotenem selbstklebendem Verschlußfilm auf Polyesterbasis gasdicht verschlossen und bis zur Untersuchung kühl gelagert. Vor der Untersuchung wurde die Mikrotiterplatte auf eine Temperatur von 25°C gebracht. In die einzelner Probenräume wurden mit einer 25 µl-Pipette wäßrige Lösungen mit unterschiedlichem Glucosegehalt nach Durchstechen der Verschluß­ folie mit der Spitze dosiert und durch mehrmaliges Aufziehen in die Pipette mit der sensitiven Flüssigkeit vermischt.50 mg amounts of the sensitive liquid were commercialized on sample rooms available microtest plate dosed, the sample rooms with commercially offered self-adhesive sealing film on polyester base sealed gas-tight and up to Examination stored cool. Before the examination, the microtiter plate was placed on a Brought temperature of 25 ° C. A 25 µl pipette was used in the individual sample rooms aqueous solutions with different glucose content after piercing the closure foil dosed with the tip and by pulling it several times into the pipette with the sensitive one Liquid mixed.

An eine kommerziell erhältliche Kolbenhubpipette der Firma Eppendorf mit einstellbarem Volumen (10 bis 100 µl) wurden an den äußeren Kolben zwei Metallkontakte aufgeklebt, so daß einer dieser Kontakte bei vollständig gedrücktem Kolben (Auslaufposi­ tion), der andere bei entspannter Feder geschlossen war. Die Kontakte wurden an einen elektronischen Zähler angeschlossen, so daß in Auslaufposition der Zähler auf den Wert "0" gesetzt und bei entspannter Feder der Zeitmeßvorgang gestartet werden konnte. Bei leichtem Eindrücken des Kolbens (beide Kontakte geöffnet), wurde der Zeitmeßvorgang unterbrochen, und die Strömungszeit konnte abgelesen werden. Als Pipettenspitzen wurden Multi-Flex- Kristall-Tips (0,5-10 µl, rund, farblos), über einen selbstgefertigen Adapter auf die Pipette gesteckt. Für jede Messung wurde eine neue Einwegspitze verwendet, an die eine Strichmarke bei 32 mm (entspricht 5 µl Füllstand) angebracht wurde. Die Pipette wurde mit einem Kolbenhub von 20 µl eingesetzt. Gemessen wurde die Zeit, welche die zu messende Lösung benötigte, um bei einem auf 20 µl eingestellten Kolbenhub der Pipette die Strichmarke zu erreichen. Mit dieser einfachen Anordnung konnten viskosimetrische Affinitätsassays sehr zeitsparend durchgeführt werden. Für eine Bestimmung wurden etwa 90 s benötigt. Das Ergebnis ist in der beigefügten Abbildung ersichtlich. Die Abb. 1 zeigt im oberen Teil die Abhängigkeit der Strömungsdauer t von der Glucosekonzentration C der zugesetzten Lösung an Hand von Mittelwerten mit Standardabweichungen, gemessen an je 10 nach­ einander durchgeführten Messungen. Im unteren Teil ist die Abhängigkeit des reziproken Wertes der mittleren Strömungsdauer, 1/t, von der Glucosekonzentration C dargestellt. Das Beispiel zeigt, daß die erfindungsgemäße Kolbenhubpipette und der mit ihr durchgeführte erfindungsgemäße Affinitätsassay mit der eingesetzten sensitiven Flüssigkeit für die Messung des Liganden (in diesem Fall Glucose) im Konzentrationsbereich von 3 bis 30 mM in µl-Pro­ ben geeignet ist. Bekanntlich können sensitive Flüssigkeiten grundsätzlich für alle Affinitäts­ liganden und Rezeptormoleküle hergestellt werden. Der erfindungsgemäße Affinitätsassay in der dargestellten Form ist daher für Proteinbindungsassays breit einsetzbar.To a commercially available piston stroke pipette from Eppendorf with adjustable volume (10 to 100 µl), two metal contacts were glued to the outer piston so that one of these contacts was closed when the piston was fully depressed (outlet position) and the other was closed when the spring was relaxed. The contacts were connected to an electronic counter, so that the counter was set to the value "0" in the run-out position and the time measurement process could be started with the spring relaxed. When the piston was pressed in slightly (both contacts open), the time measurement process was interrupted and the flow time could be read. Multi-Flex crystal tips (0.5-10 µl, round, colorless) were inserted as pipette tips using a self-made adapter on the pipette. A new disposable tip was used for each measurement, to which a line at 32 mm (corresponds to 5 µl fill level) was attached. The pipette was used with a piston stroke of 20 µl. The time it took for the solution to be measured to reach the line mark with a piston stroke of the pipette set to 20 µl was measured. With this simple arrangement, viscometric affinity assays could be carried out very quickly. About 90 s were needed for a determination. The result can be seen in the attached figure. The upper part of Fig. 1 shows the dependence of the flow duration t on the glucose concentration C of the added solution on the basis of mean values with standard deviations, measured on 10 measurements carried out in succession. The dependence of the reciprocal of the mean flow duration, 1 / t, on the glucose concentration C is shown in the lower part. The example shows that the piston pipette according to the invention and the affinity assay carried out with it according to the invention with the sensitive liquid used is suitable for measuring the ligand (in this case glucose) in the concentration range from 3 to 30 mM in μl samples. As is known, sensitive liquids can in principle be produced for all affinity ligands and receptor molecules. The affinity assay according to the invention in the form shown can therefore be widely used for protein binding assays.

Claims (8)

1. Kolbenhubpipette mit auswechselbaren Spitzen für die Volumendosierung und Viskositätsmessung in kleinen flüssigen Proben mit einer Zeitmeßvorrichtung zur Messung der Zeit, die nach Betätigung des Kolbens ein bestimmtes Volumen der zu analysierenden Flüssigkeit braucht, durch die Öffnung der Pipettenspitze zu strömen, wobei die Zeitmeßvorrichtung so mit dem Kolben der Pipette verbunden ist, daß sie beim manuellen Betätigen des Kolbens eingeschaltet wird, und wobei die Zeitmeßeinrichtung mit einer Füllstandsmeßvorrichtung in der Pipettenspitze so verbunden ist, daß bei Erreichen eines bestimmten Füllstandes der Zeitmeßvorgang beendet wird.1. Piston stroke pipette with interchangeable tips for volume metering and Viscosity measurement in small liquid samples with a time measuring device Measurement of the time it takes to operate a certain volume of the piston analyzing liquid needs to flow through the opening of the pipette tip, wherein the timing device is connected to the piston of the pipette so that it is turned on when manually actuating the piston, and the Time measuring device with a fill level measuring device in the pipette tip is connected that when a certain level is reached, the time measurement process is ended. 2. Kolbenhubpipette nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Füllstandsmessung optoelektronisch, elektrisch, druckabhängig oder durch mechanische Wellen erfolgt.2. Piston stroke pipette according to claim 1, characterized in that the Level measurement optoelectronic, electrical, pressure-dependent or through mechanical waves occur. 3. Kolbenhubpipette nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß sie einen elektronischen Meßwertwandler enthält, der nach einer Eichmessung die Strömungsdauer in eine absolute oder scheinbare Viskosität oder eine von der Viskosität abhängige Größe, z. B. eine Konzentration, umrechnet.3. Piston stroke pipette according to claim 1 or 2, characterized in that it contains an electronic transducer, which after a calibration measurement Flow duration in an absolute or apparent viscosity or one of the Viscosity dependent size, e.g. B. converts a concentration. 4. Kolbenhubpipette nach einem der Ansprüche 1-3, dadurch gekennzeichnet, daß pipettenspitzennah ein Temperatursensor integriert ist.4. Piston stroke pipette according to one of claims 1-3, characterized in that A temperature sensor is integrated near the pipette tip. 5. Kolbenhubpipette nach einem der Ansprüche 1-4, dadurch gekennzeichnet, daß ein interner Meßwertspeicher und/oder eine Steckverbindung für den Anschluß an ein externes Datenverarbeitungsgerät vorhanden ist.5. Piston stroke pipette according to one of claims 1-4, characterized in that an internal measured value memory and / or a plug connection for the connection an external data processing device is available. 6. Kolbenhubpipette nach einem der Ansprüche 1-5, dadurch gekennzeichnet, daß sie so ausgebildet ist, daß nach Überschreiten eines vorwählbaren Grenzwertes der viskositätsabhängigen Strömungsdauer ein akustisches oder optisches Signal ausgegeben wird.6. Piston stroke pipette according to one of claims 1-5, characterized in that it is designed so that after a preselectable limit value is exceeded viscosity-dependent flow duration an acoustic or optical signal is issued. 7. Kolbenhubpipette nach einem der Ansprüche 1-6, dadurch gekennzeichnet, daß ein Ventil zwischen der Atmosphäre und dem unter dem Kolben liegenden Gasraum angeordnet ist.7. Piston stroke pipette according to one of claims 1-6, characterized in that a valve between the atmosphere and the gas space under the piston is arranged. 8. Verwendung der Kolbenhubpipette nach einem der Ansprüche 1-7 bei der Affinitätsviskosimetrie.8. Use of the piston pipette according to one of claims 1-7 in the Affinitätsviskosimetrie.
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