DE19630896A1 - Use of a gene for human vascular endothelial cell growth factor for direct gene therapy - Google Patents
Use of a gene for human vascular endothelial cell growth factor for direct gene therapyInfo
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Abstract
Description
Die vorliegende Erfindung betrifft die Verwendung eines Gens für humanen vaskulären Endothelzell-Wachstumsfaktor zur direkten Gen therapie.The present invention relates to the use of a gene for human vascular endothelial cell growth factor for direct gene therapy.
Der vaskuläre Endothelzell-Wachstumsfaktor (vascular endothelial cell growth factor) ist ein Endothelzell-spezifisches Mitogen, das strukturell mit dem platelet derived growth factor verwandt ist. Die Primärstruktur des Proteins und des dazugehörigen Pro teins sind in WO 90/13649 beschrieben. Durch alternatives Spli cing gibt es drei unterschiedliche Formen mit 189, 165 und 121 Aminosäuren, die entsprechend als VEGF₁₈₉, VEGF₁₆₅ und VEGF₁₂₁ in der Literatur bezeichnet werden (Tischer et al. J. Biol. Chem. Vol 266, 11947-11954, (1991); Weindel et al. Biochem. Biophys. Res. Comm. Vol 183, 11673-1174, (1992)).The vascular endothelial cell growth factor (vascular endothelial cell growth factor) is an endothelial cell-specific mitogen, that is structurally related to the platelet derived growth factor is. The primary structure of the protein and the associated pro teins are described in WO 90/13649. By alternative Spli There are three different forms of cing with 189, 165 and 121 Amino acids corresponding as VEGF₁₈₉, VEGF₁₆₅ and VEGF₁₂₁ in in the literature (Tischer et al. J. Biol. Chem. Vol 266, 11947-11954, (1991); Weindel et al. Biochem. Biophys. Res. Comm. Vol 183, 11673-1174, (1992)).
In WO 90/13649 wird die gentechnische Herstellung des VEGF-Pro teins sowie die therapeutische Verwendung dieses Proteins zur Behandlung von Traumata beschrieben, insbesondere nach Ein schnitten und Durchtrennungen von Blutgefäßen und bei Geschwüren der Endotheloberfläche.WO 90/13649 describes the genetic engineering of VEGF-Pro teins and the therapeutic use of this protein for Treatment of trauma described, especially after Ein cut and severed blood vessels and ulcers the endothelial surface.
Wolff et al. (Science Vol. 247, 1465-1468, (1990)) beschreiben die Expression von Reportergenen in Muskelzellen von Mäusen nach direkter Injektion von "reiner" DNA oder RNA.Wolff et al. (Science Vol. 247, 1465-1468, (1990)) the expression of reporter genes in muscle cells of mice direct injection of "pure" DNA or RNA.
Es bestand die Aufgabe, effektive Arzneimittel und Methoden zur Behandlung von chronisch ischämischen Zuständen, insbesondere von peripheren arteriellen Verschlußkrankheiten und von Angina pectoris, hervorgerufen durch Koronarienverengung oder -ver schluß, bereitzustellen.The task was to find effective medicines and methods for Treatment of chronic ischemic conditions, in particular peripheral arterial disease and angina pectoris caused by coronary artery narrowing or narrowing conclusion to provide.
Gefunden wurde die Verwendung eines Gens für humanen vaskulären Endothelzell-Wachstumsfaktor zur direkten Gentherapie von chro nisch ischämischen Zuständen.The use of a gene for human vascular was found Endothelial cell growth factor for direct gene therapy of chro African ischemic conditions.
Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist die Verwendung eines Gens für humanen vaskulären Endothelzell-Wachstumsfaktor zur Herstellung von Medikamenten zur Behandlung von chronisch ischä mischen Zuständen. Another object of the invention is the use of a Human vascular endothelial cell growth factor gene Manufacture of medicines for the treatment of chronic ischa mix states.
Unter direkter Gentherapie soll die direkte Einführung von Nukleinsäure-Konstrukten (DNA oder RNA) in Zellen und Gewebe verstanden werden, ohne daß virale Vektorsysteme zur Ein schleusung benutzt werden. Die Einschleusung der DNA kann durch Injektion, liposomenvermittelt oder in Form von Calcium phosphat-Präzipitaten oder Dendrimerkomplexen erfolgen.Under direct gene therapy, the direct introduction of Nucleic acid constructs (DNA or RNA) in cells and tissues can be understood without viral vector systems smuggling can be used. The introduction of DNA can by injection, liposome mediated or in the form of calcium phosphate precipitates or dendrimer complexes.
Dazu wird die Nukleinsäure in einem funktionellen Genkonstrukt eingebaut. Bevorzugt wird bei der erfindungsgemäßen Verwendung als Nukleinsäure DNA, insbesondere cDNA verwendet.For this, the nucleic acid is in a functional gene construct built-in. Preference is given to the use according to the invention used as nucleic acid DNA, especially cDNA.
Die DNA wird mit Regulationssignalen für eine effiziente Gen expression versehen. Diese umfassen Transkriptionssignale wie Promotoren, Enhancer, Polyadenylierungsstellen und Translations signale wie ribosomale Bindungsstellen.The DNA uses regulatory signals for an efficient gene expression. These include transcription signals such as Promoters, enhancers, polyadenylation sites and translations signals such as ribosomal binding sites.
Als Promotoren werden bevorzugt eukaryotisch aktive Promotoren verwendet, die viralen Ursprungs, wie cMV-Promotor, RSV-Promotor oder zellulären Ursprungs, wie β-Aktin-Promotor, sein können. Gut geeignet sind auch von außen regulierbare oder steuerbare Pro motoren.Eukaryotic active promoters are preferred as promoters used the viral origin, such as cMV promoter, RSV promoter or cellular origin, such as a β-actin promoter. Good Pro, which can be regulated or controlled externally, are also suitable Engines.
Als Polyadenylierungssignale sind generell alle bekannten Poly adenylierungssignale einsetzbar, beispielsweise diejenigen von SV 40 oder vom humanen β-Globingen.All known poly are generally considered as polyadenylation signals adenylation signals can be used, for example those of SV 40 or from human β-globingen.
Weiterhin können die DNA-Konstrukte auch noch genetische Mar ker wie Antibiotika-Resistenzen und weitere Elemente wie einen Ursprungspunkt der Replikation tragen, die bei der Klonierung der DNA-Konstrukte in Mikroorganismen hilfreich sind.Furthermore, the DNA constructs can also genetic Mar like antibiotic resistance and other elements like one Bear the origin of replication when cloning of DNA constructs in microorganisms are helpful.
Diese DNA-Konstruktionen können beispielsweise durch Klonierung in Mikroorganismen und PCR-Technik erzeugt werden.These DNA constructions can be done, for example, by cloning generated in microorganisms and PCR technology.
Die Sequenz für das humane VEGF-Gen ist beispielsweise in Tischer et al. (J. Biol. Chem. Vol 266, 11947-11954, (1991)) in Fig. 4 und in Weindel et al. (Biochem. Biophys. Res. Comm. Vol 183, 1167-1174, (1992)) in Fig. 2 beschrieben, auf die ausdrücklich Bezug genommen wird. Die erfindungsgemäße Verwendung beschränkt sich jedoch nicht nur auf die dort aufgeführte Sequenz und Teile davon, sondern umfaßt auch allelische Varianten und Derivate davon, die durch Austausche, Insertion oder Deletion eines oder mehrerer Nukleotide entstehen, wobei die Aktivität des kodierten Genprodukts im wesentlichen dem oben beschriebenen VEGF ent spricht. Besonders bevorzugt ist die Verwendung eines Gens, das für den humanen VEGF₁₂₁ kodiert. The sequence for the human VEGF gene is described, for example, in Tischer et al. (J. Biol. Chem. Vol 266, 11947-11954, (1991)) in Fig. 4 and in Weindel et al. (Biochem. Biophys. Res. Comm. Vol 183, 1167-1174, (1992)) in Fig. 2, to which express reference is made. However, the use according to the invention is not limited only to the sequence and parts thereof listed there, but also includes allelic variants and derivatives thereof which result from the exchange, insertion or deletion of one or more nucleotides, the activity of the encoded gene product essentially being as described above VEGF complies. It is particularly preferred to use a gene which codes for human VEGF₁₂₁.
Die Aktivität von VEGF wird beispielsweise nach dem von Rak et al. (Cancer Research 55, 4575-4580, 1995) beschriebenen Test ermittelt.The activity of VEGF is, for example, that of Rak et al. (Cancer Research 55, 4575-4580, 1995) determined.
Bei der erfindungsgemäßen Verwendung zur Herstellung von Medi kamenten wird die DNA in sterilen, physiologisch verträglichen, wäßrigen Puffern gelöst.In the use according to the invention for the production of medi The DNA is sterile, physiologically compatible, aqueous buffers dissolved.
Die Dosierung hängt von Alter, Zustand und Gewicht des Patienten, von der Schwere der Krankheit und der Applikationsart ab. In der Regel beträgt die Wirkstoffdosis zwischen etwa 1 und 1000 µg VEGF-Gen pro Patient.The dosage depends on the age, condition and weight of the patient, depends on the severity of the disease and the type of application. In the As a rule, the dose of active ingredient is between about 1 and 1000 µg VEGF gene per patient.
Die bevorzugte Applikationsform ist die intramuskuläre Injektion.The preferred form of administration is intramuscular injection.
Die Medikamente können auch noch übliche Zusatz- und Hilfsstoffe enthalten, wie sie bei Gentherapeutika gebräuchlich sind.The medication can also contain common additives contain, as they are used in gene therapy.
Bevorzugt werden die DNA-Konstrukte zur Behandlung von chronisch ischämischen Zuständen eingesetzt. Hierunter sind insbesondere periphere arterielle Verschlußkrankheiten, rekalzifizierende Wun den und Angina pectoris zu verstehen.The DNA constructs are preferred for the treatment of chronic ischemic conditions. These include in particular peripheral arterial occlusive diseases, recalcifying wishes to understand the and angina pectoris.
Die Erfindung ist in den folgenden Beispielen weiter veranschau licht.The invention is further illustrated in the following examples light.
Die VEGF₁₂₁ cDNA wurde durch PCR mittels Primern, die eine gerich tete Klonierung der cDNA (gesamte kodierende Region) erlauben aus humanem Muskelgewebe angereichert. Die Subklonierung des PCR Amplifikats erfolgte mittels der Elektrotransformation in pcDNA₃ (Invitrogen Corporation), einem Vektor der sowohl für transiente als auch für stabile Expression in eukaryotischen Wirtszellen geeignet ist. Zur Identifikation der korrekten Plasmide wurde eine plasmid-Minipräparation durchgeführt, die auf der modifi zierten alkalischen Lysierungsmethode nach Birnboim und Doly (Nucl. Acids Res. Vol 7, 1513-1522, (1979)), sowie der DNA-Ad sorption an Silika-Gel-Membranen in Gegenwart hoher Salzkon zentrationen (Vogelstein und Gillespie Proc. Natl. Acad. Sci. USA Vol 76, 615-619, (1979)) basiert. Sowohl pcDNA₃ als auch das PCR Produkt wurden mit den Restrikitonsenzymen Hind III und Bam HI verdaut und gelelektrophoretisch (1% Agarose-Gel, 1× TAE-Puffer) getrennt. Nach der Extraktion (QIAquick Gel Extraction Kit, Qia gen) der VEGF₁₂₁- Banden (circa 520 Basenpaare) erfolgte eine halbquantitative Mengenbestimmung der gereinigten DNA mittels de finierter Mengen an DNA-Marker VI (Boehringer Mannheim).The VEGF₁₂₁ cDNA was by PCR using primers, the one dish allowed cloning of the cDNA (entire coding region) from enriched human muscle tissue. Subcloning the PCR Amplificate was carried out by means of the electrotransformation in pcDNA₃ (Invitrogen Corporation), a vector of both transient as well as for stable expression in eukaryotic host cells suitable is. The correct plasmids were identified a plasmid mini preparation carried out on the modifi graced alkaline lysing method according to Birnboim and Doly (Nucl. Acids Res. Vol 7, 1513-1522, (1979)), and the DNA ad sorption on silica gel membranes in the presence of high salt con centers (Vogelstein and Gillespie Proc. Natl. Acad. Sci. USA Vol 76, 615-619, (1979)) based. Both pcDNA₃ and the PCR Product were with the restriction enzymes Hind III and Bam HI digested and gel electrophoresis (1% agarose gel, 1 × TAE buffer) Cut. After extraction (QIAquick Gel Extraction Kit, Qia gen) of the VEGF₁₂₁ bands (approximately 520 base pairs) semi-quantitative determination of the amount of the purified DNA using de Finished amounts of DNA marker VI (Boehringer Mannheim).
Zur Konstruktion des im Tierversuch einzusetzenden Expression splasmids wurden der Vektor pcDNA₃ mit der gereinigten VEGF₁₂₁ cDNA im Verhältnis 1 : 3 ligiert. Der 20 µl Ansatz bestand aus: pcDNA₃, VEGF₁₂₁ cDNA, T4 DNA Ligase (1U/µl) und 1× T4 Ligase Puffer.To construct the expression to be used in animal experiments Splasmids were the vector pcDNA₃ with the purified VEGF₁₂₁ cDNA ligated in a ratio of 1: 3. The 20 µl batch consisted of: pcDNA₃, VEGF₁₂₁ cDNA, T4 DNA ligase (1U / µl) and 1 × T4 ligase Buffer.
Die Basenabfolge (Sequenz) des in der Minipräparation gewonnenen Plasmids pLVEGF₁₂₁ wurde unter Verwendung des fmol® DNA Sequen cing Systems (Promega, Madison, WI) bestimmt. Autoradiographisch konnte ein korrektes Leseraster sowohl für den Übergangsbereich Plasmid/Insert als auch für die restliche Nukleotidsequenz des humanen VEGF₁₂₁ verifiziert werden. Die Konstruktion des Plasmids pLVEGF₁₂₁ ist in Abb. 2 dargestellt.The base sequence (sequence) of the plasmid pLVEGF₁₂₁ obtained in the mini preparation was determined using the fmol® DNA sequencing system (Promega, Madison, WI). Autoradiographically, a correct reading frame could be verified both for the plasmid / insert transition region and for the remaining nucleotide sequence of human VEGF122. The construction of the plasmid pLVEGF₁₂₁ is shown in Fig. 2.
Zur Gewinnung von pcDNA₃/VEGF₁₂₁ für den Einsatz im Tier versuch wurde eine Maxipräparation mit dem EndoFree Maxi Kit (Qiagen, Hilden) durchgeführt. Eine Plasmid-Glycerolstammlösung wurde in Ampicillin enthaltendem Luria Broth Medium (200 µg/ml) über Nacht bei 37°C inkubiert. Die Maxipräparation erfolgte gemäß der Gebrauchsanleitung des Kits. Letztlich wurde die Konzentration der Plasmid-DNA photometrisch bei 260 nm bestimmt.To obtain pcDNA₃ / VEGF₁₂₁ for use in animals Maxi preparation was attempted with the EndoFree Maxi Kit (Qiagen, Hilden). A stock plasmid glycerol was in Luria Broth Medium (200 µg / ml) containing ampicillin incubated overnight at 37 ° C. The maxi preparation took place according to the instructions for use of the kit. Ultimately, the Concentration of the plasmid DNA determined photometrically at 260 nm.
Männliche Spraque-Dawley Ratten (Durchschnittsgewicht 488 g) wurden unter normalen Bedingungen gehalten (20°C, 12 Std. Hell-Dunkel-Zyklus, Futter und Wasser ad libitum).Male Spraque-Dawley rats (average weight 488 g) were kept under normal conditions (20 ° C, 12 h light-dark cycle, food and water ad libitum).
Für die Präparation erfolgte die Narkose intraperitoneal mit Ketamin-Hydrochlorid (50 mg/kg KG) und Pentobarbital (30 mg/kg KG). An beiden Hinterbeinen wurde ein longitudinaler Schnitt unterhalb des Ligamentum inguinale gesetzt und die jeweilige Arteria femoralis freipräpariert. Zwei Ligaturen wurden eng um die Arterie gelegt die erste an dem proximalen Beginn der A. femoralis als Zweig der A. iliaca externa, die zweite proxi mal zu der Stelle, an welcher die A. circumflexa superficialis die A. femoralis verläßt. Zur vollständigen Obstruktion des Blut flusses wurde die A. femoralis in der Mitte der Ligaturen durch trennt, wodurch sie für circa einen Zentimeter unterbrochen war. For the preparation, anesthesia was carried out intraperitoneally Ketamine hydrochloride (50 mg / kg body weight) and pentobarbital (30 mg / kg KG). A longitudinal cut was made on both hind legs set below the inguinal ligament and the respective Femoral artery dissected. Two ligatures became tight the first placed around the artery at the proximal beginning of the Femoral artery as a branch of the external iliac artery, the second proxi times to the point where the circumflex superficial artery leaves the femoral artery. For complete blood obstruction The femoral artery was flowed through in the middle of the ligatures separates, which interrupted it for about an inch.
Direkt nach der Ligatur wurden die intramuskulären Injektionen in vier verschiedene Oberschenkelregionen vorgenommen, wobei das rechte Bein als Behandlungsgruppe, das linke als intraindivi duelle Kontrolle diente. Appliziert wurden jeweils 45 µl Aliquots von 100 µg Plasmid gelöst in 150 µl Phosphat-gepufferter Kochsalz lösung bzw. Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung alleine: 1) caudal zur Ligationsstelle im Oberschenkel; 2) caudal zum Kniebereich; 3) nahe am Ende der Arteria iliaca interna und 4) distal zum Ursprung der Arteria iliaca interna. Bei jeder Injektion wurde die Injektionsnadel 5 mm tief ins Skelettmuskelgewebe eingeführt. Nach dem Aufstreuen von topischem Antibiotikapuder wurde die Wunde durch Einzelknopfnähte verschlossen.Immediately after the ligation were the intramuscular injections made in four different thigh regions, the right leg as treatment group, left as intraindivi dual control served. 45 µl aliquots were applied in each case of 100 µg plasmid dissolved in 150 µl phosphate-buffered table salt solution or phosphate-buffered saline alone: 1) caudal to the ligation site in the thigh; 2) caudal to the knee area; 3) close to the end of the internal iliac artery and 4) distal to the Origin of the internal iliac artery. With each injection the injection needle is inserted 5 mm deep into the skeletal muscle tissue. After sprinkling topical antibiotic powder, the Wound closed with single button sutures.
Die zeitliche Entwicklung des Kollateralgefäßbettes wurde bei 3, 7, 14 und 42 Tagen untersucht. In den mit Pentobarbital (50 mg/kg KG) narkotisierten Tieren wurde über die abdominale Aorta ein 4 F Katheter eingeführt und kaudal bis circa 0,5 cm vor die Aortenbi furkation geschoben. Nach einer intraarteriellen Injektion von Nitroglycerin erfolgte sofort die Applikation von insgesamt 5 ml Kontrastmittel (Hexabrix® 320) mit einer Rate von 1,5 ml/s. Von jedem Tier wurden beide Hinterbeine gemeinsam in je drei Angio grammen aufgenommen. Abb. 3 zeigt ein Angiogramm eines behandel ten und eines Kontrolltieres. (Abb. 3A zeigt eine Kontrollratte mit zweiseitiger A. femoralis Ligatur und Injektion von Puffer lösung alleine; die Injektionsstellen sind durch weiße Quadrate gekennzeichnet. Abb. 3B zeigt eine Ratte mit zweiseitiger A. femo ralis Ligatur und Injektion von Wirkstoff (active treatment) oder Pufferlösung alleine (solute control); die Injektionsstellen sind durch weiße Quadrate gekennzeichnet).The temporal development of the collateral vascular bed was examined at 3, 7, 14 and 42 days. In the animals anesthetized with pentobarbital (50 mg / kg body weight), a 4 F catheter was inserted over the abdominal aorta and pushed caudal up to about 0.5 cm in front of the aortic bifurcation. After an intra-arterial injection of nitroglycerin, a total of 5 ml of contrast medium (Hexabrix® 320) was applied immediately at a rate of 1.5 ml / s. Both hind legs of each animal were taken together in three angiograms. Fig. 3 shows an angiogram of a treated and a control animal. ( Fig. 3A shows a control rat with bilateral A. femoralis ligation and injection of buffer solution alone; the injection sites are marked by white squares. Fig. 3B shows a rat with bilateral A. femoralis ligature and injection of active substance (active treatment) or Buffer solution alone (solute control; the injection sites are marked by white squares).
Die Vaskularisierung in den Hinterbeinen wurde über die Aus zählung der sichtbaren Gefäße bestimmt. Rechnerisch kann daraus ein angiographischer Score gebildet werden (ein transparentes 5 mm² -Gitter wird über das jeweilige Angiogramm gelegt und der angiographische Score folgendermaßen definiert: Quotient aus der Anzahl der Gitterkreuzungspunkte, die von einem Kontrastmittel gefüllten Gefäß geschnitten werden und der Anzahl der gesamten Gitterkreuzpunkte im jeweiligen Oberschenkelbereich. Die Aus zählung erfolgte geblindet durch Zweifachanalyse; die Einzel werte wurden gemittelt. The vascularization in the hind legs was over number of visible vessels determined. Mathematically, it can an angiographic score (a transparent one 5 mm² grid is placed over the respective angiogram and the angiographic score defined as follows: quotient from the Number of grid crossing points from a contrast medium filled vessel to be cut and the total number Cross points in the respective thigh area. The out blinded counting by double analysis; the single values were averaged.
Die Ergebnisse werden als Mittelwerte ± SEM dargestellt. Signi fikanzberechnungen erfolgten über den t-Test für unverbundene Stichproben. Als signifikant galt p < 0,01.The results are presented as mean values ± SEM. Signi The accounting calculations were made using the t-test for unconnected Random samples. P <0.01 was considered significant.
Am Tag 3 besteht kein signifikanter Unterschied des angio graphischen Scores zwischen pVEGF₁₂₁-behandelten und Kontroll gruppen (0,26 ± 0,02 vs. 0,20 + 0,05; p = NS). Danach kann eine progressive Zunahme der Gefäßdichte im Oberschenkel beobachtet werden. Bereits am 7. Tag zeigt der Plasmid-behandelte Ober schenkel signifikant mehr Kollateralgefäße als die kontralaterale Kontrolle (0,59 ± 0,05 vs. 0,34 ± 0,05; p < 0,01). Auch nach 14 und 42 Behandlungstagen bleibt dieser Unterschied signifikant ausgeprägt (0,77 ± 0,01 bzw. 0,75 ± 0,02 vs. 0,41 ± 0,05 bzw. 0,42 ± 0,03; p < 0,001).There was no significant difference in angio on day 3 graphic scores between pVEGF₁₂₁-treated and control groups (0.26 ± 0.02 vs. 0.20 + 0.05; p = NS). Then one progressive increase in vascular density in the thigh was observed will. The plasmid-treated waiter shows on the 7th day leg significantly more collateral vessels than the contralateral Control (0.59 ± 0.05 vs. 0.34 ± 0.05; p <0.01). Even after 14 and 42 days of treatment, this difference remains significant pronounced (0.77 ± 0.01 or 0.75 ± 0.02 vs. 0.41 ± 0.05 or 0.42 ± 0.03; p <0.001).
Innerhalb der pVEGF₁₂₁-behandelten Gruppen zeigen sich signi fikante Unterschiede des angiographischen Scores zwischen dem 7. und 14. Behandlungstag (0,59 ± 0,05 vs. 0,77 ± 0,01 bzw. 0,75 ± 0,02 p < 0,05). Wogegen die Kontrollgruppen nur eine signifikante Zunahme der Gefäßdichte zwischen dem 3. und 14. Tag zeigen (0,20 ± 0,05 vs. 0,41 ± 0,05 bzw. 0,42 ± 0,03; p < 0,05). Sowohl in den Plasmid- als auch in den Kontrollgruppen bleibt die Gefäßdichte zwischen dem 14. und 42. Tag nahezu konstant (Plasmid: 0,77 ± 0,01 vs. 0,75 ± 0,02; Kontrolle: 0,41 ± 0,05 vs. 0,42 ± 0,03; p = NS).Signi show up within the pVEGF₁₂₁-treated groups noticeable differences in the angiographic score between the 7th and 14th day of treatment (0.59 ± 0.05 vs. 0.77 ± 0.01 or 0.75 ± 0.02 p <0.05). Whereas the control groups only one significant increase in vascular density between the 3rd and 14th day show (0.20 ± 0.05 vs. 0.41 ± 0.05 or 0.42 ± 0.03; p <0.05). Remains in both the plasmid and control groups the vascular density was almost constant between the 14th and 42nd day (Plasmid: 0.77 ± 0.01 vs. 0.75 ± 0.02; control: 0.41 ± 0.05 vs. 0.42 ± 0.03; p = NS).
In Abb. 1 ist der Effekt von intramuskulär appliziertem pVEGF₁₂₁ (100 µg) auf die Revaskularisation bei Ratten mit bilateraler Femoralarterien-Ligatur gezeigt; aufgetragen ist der angiographi sche Score nach 3, 7, 14 und 42 Tage postoperativ. (Mittelwerte ± EM).In Fig. 1 the effect of intramuscularly applied pVEGF₁₂₁ (100 µg) on the revascularization in rats with bilateral femoral artery ligature is shown; the angiographic score is plotted after 3, 7, 14 and 42 days postoperatively. (Mean values ± EM).
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|---|---|---|---|---|
| DE19940012A1 (en) * | 1999-08-24 | 2001-03-08 | Karin Faerber | Eukaryotic expression plasmid useful for treating peripheral arterial occlusive disease, comprises two expression cassettes, one containing the gene for human vascular endothelial growth factor VEGF165 |
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- 1997-07-22 WO PCT/EP1997/003946 patent/WO1998005774A1/en active Application Filing
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|---|---|---|---|---|
| DE19940012A1 (en) * | 1999-08-24 | 2001-03-08 | Karin Faerber | Eukaryotic expression plasmid useful for treating peripheral arterial occlusive disease, comprises two expression cassettes, one containing the gene for human vascular endothelial growth factor VEGF165 |
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