DE19513177A1 - Cell layer prepn. and transport system for use in skin transplants - Google Patents

Cell layer prepn. and transport system for use in skin transplants

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DE19513177A1 DE1995113177 DE19513177A DE19513177A1 DE 19513177 A1 DE19513177 A1 DE 19513177A1 DE 1995113177 DE1995113177 DE 1995113177 DE 19513177 A DE19513177 A DE 19513177A DE 19513177 A1 DE19513177 A1 DE 19513177A1
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Abstract

Substrate cell layers containing a new collagen- or gel-type carrier as well as amnion or acellular dermis as substrate and a layer of cultured cells. Also claimed are (1) a method of preparing amnion preparations consisting of allogenic or xenogenic amnions which have been sepd. from the placenta and cleaned of attached substances and chorion parts; (2) a method for preparing above mentioned substrate cell layers, and (3) a transport system for the above mentioned preparations comprising an outer unbreakable coat and an inner chamber with loose sepg.-floors, for the storage of the cell layers, fixed by stamps, culture medium, heat sources for the temp. control and a controllable CO2 supply.

Description

Die Erfindung betrifft neue Amnionpräparate, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung für die Humanmedizin, z. The invention relates to novel Amnionpräparate, processes for their preparation and their use in human medicine, such. B. als Hautersatzmaterial oder als Träger für mehrlagige Zellschichten. B. as a skin substitute material or as carrier for multi-layer cell sheets.

Embryonalhüllen, auch Eihäute, Fruchthüllen oder Keimhüllen genannt, stellen vom tierischen und menschlichen Embryo abgeleitete Zellverbände dar, die den Körper umhüllen. called amnion, and fetal membranes, placental membranes or germ cases, be provided by the animal and human embryo is derived cell clusters that envelop the body. Sie reißen vor der oder bei der Geburt auf. They tear up before or at birth. Die Embryohüllen bestehen aus der inneren (Amnion) und aus der äußeren (Chorion) Hülle. The embryo cases consist of the inner (amnion) and from the outer (chorion) Case. Die Amnionhöhle ist mit Fruchtwasser zum weitgehenden Schutz des Embryos gefüllt (Lexikon der Biologie, Spektrum Akademischer Verlag Heidelberg - Berlin - Oxford, 1994). The amniotic cavity is filled with amniotic fluid to substantially protect the embryo (Dictionary of Biology, Oxford University Press Heidelberg - Berlin - Oxford, 1994).

Amnien werden seit vielen Jahren als Wundabdeckungsmaterialien eingesetzt, insbesondere als zeitweiliger Hautersatz bei Verbrennungswunden, insbesondere Human-Amnion-Membranen (z. B. Kucan, JO et al., Ann.-Plast-Surg. 1982, 8 (6): 523- 527; Lin, SiD. et al., Burns-Incl-Therm-Inj. 1985, 11 (5): 374-378; Gobel, P. et al., Betr- Orthop-Traumatol. 1990, 37 (9): 495-498), aber auch in der allgemeinen Chirugie, z. Amnien be used as a wound covering materials for many years, particularly as a temporary skin replacement in burn wounds, particularly human amniotic membranes (eg Kucan, JO et al, Ann. Plast Surg 1982, 8 (6):... 523- 527; Lin, SiD et al, Burns Incl-Therm-Inj, 1985, 11 (5):. 374-378; Gobel, P. et al, Betr- Orthop Traumatol-1990 37 (9)...:. 495-498), but also in the general surgery, z. B. als Wundverband bei chronischen Ulzerationen (Shun, A. et al., Med-J-Aust. 1983, 2 (6): 279-283), in der Orthopädie zur Vermeidung von Infektionen (Vishwakarma, GK et al., J-Bone-Joint-Surg-Br. 1986, 68 (1): 68-74) oder in der rekonstruktiven Chirugie (Lawson, VG, Aust-NZY-Surg. 1986, 56 (2): 163-166; Zohar, Y. et al., Laryngoscope, 1987, 97 (8 Pt 1): 978-980; Fishman, IJ et al., J-Urol. 1987, 138 (5): 1291-4). B. as a wound dressing for chronic ulcers (Shun, A. et al, Med J Aust-1983 2 (6):.. 279-283), in orthopedics to prevent infections (Vishwakarma, GK et al, J. -Bone joint Surg Br 1986 68 (1): 68-74) or in reconstructive surgery (Lawson, VG, Aust NZY Surg, 1986, 56 (2.): 163-166; Zohar, Y. . et al., Laryngoscope, 1987, 97 (8 Pt 1):.. 978-980; Fishman, IJ et al, J-Urol, 1987, 138 (5): 1291-4).

Die Verwendung der menschlichen Plazenta als Ausgangsprodukt für die Gewinnung von Implantaten für die Gefäß- und Hautchirurgie ist Gegenstand der DE-OS (Deutsche Offenlegungsschrift) 3608329 (Bunge, J., 1987). The use of human placenta as a starting material for the production of implants for vascular and skin surgery is the subject of DE-OS (German Offenlegungsschrift) 3,608,329 (Bunge, J., 1987). Darin wird auch das Amnion als geeignetes Hauttransplantat zum Decken von großflächigen Verbrennungen beschrieben (vgl. auch DE-OS 32 40 909, Fauck, WP, 1983). This also the amnion is described as a suitable skin graft for covering extensive burns (see. Also DE-OS 32 40 909, Fauck, WP, 1983). Amnion-Membranen sind auch als Substratgewebe zur Bewertung des Wachstums von Zellen sowie als Wachstumssubstrat für Zellkulturen beschrieben worden (US-PS (Patentschrift) 4446234, Russo, R. et al. 1984) beschrieben worden. Amniotic membranes have also been described as the substrate tissue to evaluate the growth of cells as well as a growth substrate for cell cultures (US Patent (Patent) 4446234, Russo, R. et al. 1984) have been described.

Es ist ferner bekannt, daß eine bevorzugte Methode zur Aufbewahrung von Hauttransplantaten, z. It is also known that a preferred method for storage of skin grafts, z. B. in der Europäischen Haut-Bank, darin besteht, Spender-Haut in Glycerol zu konservieren (de Backere, ACJ: "EuTO Skin Bank: large scale skin banking in Europe based on glycerol-preservation of doner skin", Burns 1994 20 (1) 4-9; Hettich R. et al.: "The immunogenicity of glycerol-preserved doner skin", Burn 1994, 20 (1) 71-76. Kürzlich ist auch ein neues Protein, Kalinin genannt, bekanntgeworden, das die Adhäsion transplantierter Keratinozyten auf eine Substratunterlage, ua auch Amnion, verbessern soll (US-PS 5352668, Burgeson, RE, 1994). to preserve as the European Skin Bank, is donor skin in glycerol (de Backere, ACJ: "EUTO Skin Bank: large scale skin banking in Europe based on glycerol-preservation of doner skin", Burns 1994 20 ( 1) 4-9;. Hettich R. et al .: "the immunogenicity of glycerol-preserved skin doner" Burn in 1994, 20 (1) 71-76 Recently, a novel protein called Kalinin made famous, the adhesion to improve transplanted keratinocytes to an underlying substrate, including amnion, (US Patent No. 5,352,668, Burgeson, RE, 1994).

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, Amnionpräparate zur Verfügung zu stellen, die sich in einem gebrauchsfähigen Zustand zur Vorratshaltung eignen. The invention has for its object to provide Amnionpräparate available that are in a serviceable condition for stockpiling. Die Aufgabe wurde dadurch gelöst, daß Embryonalhüllen von der Plazenta abgetrennt, von anhaftenden Bestandteilen befreit, in feuchtem Zustand das Chorion abstreift und die verbleibenden Amnien in konservierenden Lösungen aufbewahrt werden. The object has been achieved in that amnion separated from the placenta, freed from adhering components in the moist state the chorion and the remaining strips Amnien be stored in preservative solutions. Verwendung finden Embryonalhüllen nach Spontangeburten. are used amnion after spontaneous delivery. Humane Amnionpräparate setzen Spenderinnen voraus, die ihre Zustimmung zu einer Befragung über mögliche Ausschlußkriterien und zu infektionsserologischen Untersuchungen erteilt haben. Humane Amnionpräparate require donors who have given their consent for questioning about possible exclusion criteria and infection serological tests. In diesem Fall werden die Embryonalhüllen tiefgefroren und bis zur Freigabe durch negative infektionsserologische Befunde zwischengelagert. In this case, the embryonic membranes are frozen and stored until released by negative infection serological findings. Das Abstreifen des Chorions erfolgt auf einer desinfizierbaren festen Unterlage. The stripping of the chorion is performed on a disinfected solid support. Nach der Sterilisierung der zugeschnittenen Amnien mit einem Peressigsäure-Alkoholgemisch und erneutem Waschen werden die Präparate in konservierenden Lösungsmitteln unter Kühlung aufbewahrt. After sterilization of the cut Amnien with a peracetic acid-alcohol mixture and washing again, specimens are stored in preservative solvents under cooling.

Es hat sich herausgestellt, daß die erfindungsgemäßen Amnionpräparate gute hautverträgliche Eigenschaften zeigen und als Trägermaterial für Zelltypen, die im Laufe des Zellwachstums mehrschichtige Lagen bilden, wie Keratinozyten, geeignet sind. It has been found that Amnionpräparate to the invention exhibit good skin-compatible properties and are suitable as support material for cell types that form multilayer sheets in the course of cell growth, such as keratinocytes.

Die Erfindung soll anhand von Ausführungsbeispielen näher erläutert werden. The invention will be explained in more detail with reference to embodiments.

Ausführungsbeispiele embodiments Beispiel 1 example 1 Allgemeine Vorschrift General procedure

Die Anlieferung der Embryonalhüllen erfolgt in gefrorenem Zustand mit Serum in luftdicht verschlossenen Beuteln der Behältern. The delivery of the embryonic membranes takes place in a frozen state with serum in airtight bags of containers. Dabei beträgt die Aufbewahrungstemperatur bis zur Verarbeitung -20 bis -40°C. The storage temperature is -20 to -40 ° C until processed. Zur Verarbeitung wird das Material in einem geeigneten Gefäß in kaltem bis handwarmem Wasser aufgetaut. For processing the material is thawed in a suitable vessel in cool to lukewarm water. Nach dem Auftauen wird ein Wasserwechsel vorgenommen. After thawing water change is made.

In diesem Wasserbad wird das Material in Gläsern mit Schraubverschluß geschüttelt, (etwa 3 bis 5 min). In this water bath the material is shaken in glass jars with screw-cap (about 3 to 5 min). Dabei erfolgt das Lösen von Blut und anderen anhängenden Gewebebestandteilen sowie die teilweise Trennung von Amnion und Chorion. In this case, the release of blood and other appended tissue components and the partial separation of the amnion and chorion is performed.

Dann wird das Material auf eine glatte Präparierunterlage (desinfizierbar) gebracht und durch stumpfes Lösen Amnion vom Chorion getrennt (Chorion wird evtl. verworfen). Then the material on a smooth Präparierunterlage (disinfected) is placed and separated by blunt dissolving amnion from the chorion (chorion is possibly discarded).

Nach Begradigen der Einrißstellen mit der Schere (um ein weiteres Einreißen zu verhindern) wird die Fläche vermessen, mittels Kontrollmarke gekennzeichnet und das präparierte Amnion mit der Kontrollmarke in ein Spezialgefäß für Amnion und Haut gegeben (das Gefäß ist durch Spezialöffnungen durchflutbar für die unterschiedlichen Medien). After straightening the Einrißstellen with scissors (to prevent further tearing) is measured the surface, characterized by control mark and the prepared amnion given with the control mark in a special vessel for amnion and skin (the vessel is through special openings durchflutbar for the various media) ,

Nach anschließendem Spülen unter fließendem Wasser erfolgt der Sterilisationsvorgang im Vakuum (Exsikkator) für 2 Stunden unter Schütteln, wobei die Sterilisationslösung aus After subsequent rinsing with running water, the sterilization process is carried out in vacuum (desiccator) for 2 hours under shaking, with the sterilizing solution of

Glycerin|375 ml Glycerin | 375 ml
Wofasteril Wofasteril 19 ml 19 ml
Ethanol ethanol 250 ml 250 ml
Aqua dest. Dist. 356 ml 356 ml

besteht. consists.

Nach Ablauf der Sterilisationszeit erfolgen die weiteren Arbeitsgänge unter Reinraumbedingungen (Klasse A), wie Spülen in einem Gemisch von sterilisierter isotonischer Kochsalzlösung und sterilisiertem Glycerin. After expiration of the sterilization time, the subsequent operations take place under clean-room conditions (class A), such as rinsing in a mixture of a sterilized isotonic saline solution and sterilized glycerol.

Danach erfolgt die Entnahme aus dem og Spezialspülgefäß und Qualitätskontrolle des Amnionpräparats, die Sterilprobenentnahme und die Konfektionierung (Endverpackung mit Überführung in sterilisiertes Glycerin und definitiven Verschluß). Thereafter, the extraction from the above-mentioned Spezialspülgefäß and quality control of the Amnionpräparats, the sterile sampling and the assembly (final package with conversion into sterilized glycerol and definitive closure) is carried out.

Beispiel 2 example 2 Humane Amnionpräparat humane Amnionpräparat 2.1. 2.1. Entnahme withdrawal

Die Entnahme der Embryonalhüllen von der Nachgeburt (Plazenta) geschieht auf der rechtlichen Basis der schriftlichen Zustimmung der Spenderin, der pharmazeutisch relevanten Spenderausschlußkriterien und der schriftlichen Erklärung (Entnahme protokoll) des behandelnden Arztes der Eignung des Gewebes für die Herstellung eines klinisch bedenkenlos einsetzbaren Präparates. The removal of the amnion from the placenta (placenta) is done on the legal basis of the written consent of the donor, the pharmaceutically relevant organ donor Final criteria and the written declaration (sampling protocol) of the attending physician of the suitability of the fabric for the production of clinically safely usable preparation.

2.2. 2.2. Zwischenlagerung und Transport Between storage and transport

Die Zwischenkonservierung in der Klinik erfolgt carried the interim protection in the clinic

  • - in einer Flasche mit gesättigter Kochsalzlösung und Kühlschrankbedingungen oder - in a bottle with brine and refrigerator conditions or
  • - in einem Plastbeutel verschlossen und gefroren bei mindestens -20°C oder darunter oder - sealed in a plastic bag and frozen at -20 ° C or below, or
  • - durch einfache Lagerung in physiologischer Kochsalzlösung und normothermer Lagerung - by easy storage in saline and normothermic storage

oder Verschluß im Plastbeutel und normothermer Lagerung, wenn die Abholung innerhalb von 12 Stunden nach Entnahme erfolgt. When the pick-up within 12 hours after collection is carried out or closure in plastic bags and normothermic storage.

Der Transport erfolgt in einer Isolierbox unter Kühlbedingungen. The transport takes place in an insulated box under refrigerated conditions. Bei Entnahme und Transport innerhalb von 12 Stunden nach Entnahme kann der Transport ohne zusätzliche Kühlung erfolgen. Taking and transporting within 12 hours of collection of transportation without additional cooling can take place. Eine Ausnahme sind Umgebungstemperaturen über 20°C. An exception are ambient temperatures above 20 ° C.

2.3. 2.3. Zwischenlagerung bis zur Präparation Interim storage to preparation

Nach Anlieferung des Amnion-Ausgangsmaterials vom "Sammlungsort" (geburtshilfliche Einrichtungen) verbleibt das Gewebe in Quarantänelagerung (-18°C oder darunter) bis zum Vorliegen der infektionsserologischen Befunde (AIDS, Hepatitis, Lues, Cytomegalie). After delivery of the amnion starting material of the "collection site" (obstetric devices) remains in the tissue quarantine storage (-18 ° C or below) pending the infection serological findings (AIDS, hepatitis, syphilis, cytomegalovirus). Diese Zwischenlagerung wird bis zum Beginn der mechanischen Bearbeitung ausgedehnt. This interim storage is extended until the start of machining.

2.4. 2.4. Mechanische Präparation mechanical preparation

In Vorbereitung auf die mechanische Präparation wird das Gewebe im Wasserbad aufgetaut. In preparation for the mechanical preparation of the tissue is thawed in a water bath. Es schließt sich ein Waschvorgang zur Entfernung von anhaftende Geweben und von Blut an. This is followed by a washing operation to remove adhering tissues and of blood.

In diesem Wasserbad wird das Gewebe in Gläsern oder Plastflaschen mit Schraubverschluß etwa 3 bis 5 Minuten geschüttelt. In this water bath the fabric is shaken in glass or plastic bottles with screw cap about 3 to 5 minutes. Dabei erfolgt das erleichterte Lösen von Blut sowie die bereits teilweise Trennung von Amnion und Chorion. In this case, the facilitated dissolution of blood as well as the already partial separation of the amnion and chorion is performed.

Auf einer desinfizierbaren festen Unterlage wird dann das Amnion in feuchtem Zustand durch Abstreifen vom Chorion befreit. the amnion is then freed in a wet state by stripping from the chorion on a disinfected solid support.

Es schließt sich eine Begradigung eventueller Einrißstellen mit der Schere oder anderer mechanischer Schneidinstrumente an. This is followed by a straightening any Einrißstellen with scissors or other mechanical cutting tools. Damit wird ein weiteres Einreißen und Unbrauchbarwerden des Präparates verhindert. For a further tearing and becoming unusable of the preparation is prevented. Die verbleibende Fläche wird vermessen. The remaining area is measured. Das Präparat wird zur Kennzeichnung mit einer Kontrollmarke versehen. The preparation is provided for labeling with a marker.

2.5. 2.5. Sterilisation sterilization

Das so behandelte und gereinigte Amnion wird nun einem Sterilisationsprozeß unterworfen. The thus treated and purified amnion is then subjected to a sterilization process.

Diese Sterilisation erfolgt mit einem Peressigsäure-Alkoholgemisch. This sterilization is done with a peracetic acid-alcohol mixture. Dazu wird ein Spezialgefäß verwendet, das sowohl die Vermischung der einzelnen Amnienpräparate verhindert als auch durch speziell angebrachte Öffnungen leicht mit den verwendeten Lösungen durchflutet (durchströmt) werden kann. A special-purpose vessel is used, which prevents both the mixing of the individual Amnienpräparate and through specially mounted openings easily flooded with the solutions used (flow through) may be used.

Die Lösung besteht bevorzugt aus: The solution is preferably made of:

- Glycerin|375 ml - Glycerol | 375 ml
- Wofasteril - Wofasteril 19 ml 19 ml
- Ethanol - ethanol 250 ml 250 ml
- Aqua dest. - distilled water. 356 ml 356 ml

Der Sterilisationsvorgang wird bevorzugt über einen Zeitraum von 2 Stunden unter Schütteln durchgeführt. The sterilization process is preferably carried out over a period of 2 hours with shaking.

Die Sterilisation wird durch einen Spülvorgang zum Auswaschen der Sterilisationslösung mit (bevorzugt) isotonischer steriler Kochsalzlösung und sterilem Glycerin durchgeführt. The sterilization is performed by a flushing operation for washing out the sterilization solution (preferred) isotonic sterile saline and sterile glycerol. Nach Ablauf der Sterilisation erfolgen alle weiteren Arbeitsgänge unter Reinraum bedingungen (Reinraumklasse A). After expiration of the sterilization all the other operations take place under clean-room conditions (clean room class A).

2.6. 2.6. Sterilkontrolle sterile control

Als nächster Schritt erfolgt die Entnahme des Amnions aus den og Spezialgefäßen und die Entnahme einer Probe zur Sterilkontrolle. As a next step, the removal of the amnion from the above mentioned special vessels and taking a sample of sterile control is carried out.

2.7. 2.7. Konfektionierung packing

Das sterilisierte Amnion wird nun in ein definitiv verschließbares Gefäß, bevorzugt aus Glas oder Plast, welches mit sterilem Glycerin voll gefüllt ist, gebracht. The sterilized amnion is then brought into a definitively closable vessel, preferably made of glass or plastic which is filled with sterile glycerol. Dies ist die Endverpackung. This is the final packaging.

2.8. 2.8. Dokumentation, Label nach Arzneimittelgesetz Documentation, label after drug law 2.9. 2.9. Endlagerung/Depothaltung Disposal / deposit attitude

Bis zur Abgabe an den Besteller wird das Amnionpräparat bei Kühlschranktemperatur oder darunter gelagert. To delivery to the customer the Amnionpräparat at refrigerator temperature or stored under.

Die Glycerinkonservierung gestattet auch eine schadensfreie Lagerung bei Minustemperaturen. The glycerol preservative also allows damage-free storage at temperatures below freezing. Dies bedeutet eine Verlängerung der Haltbarkeit und damit Verlängerung der Lagerungszeit. This means an extension of the shelf life and thus extend the storage period.

Beispiel 3 example 3 Bovines Amnionpräparat (Fließschema) Bovine Amnionpräparat (flow chart)

Die Embryonalhüllen werden nach Spontangeburten von der Plazenta abgetrennt, tiefgefroren und bei -18°C bis zur Freigabe durch negative infektionsserologische Befunde zwischengelagert. The embryonic membranes are separated after spontaneous delivery of the placenta, frozen and stored at -18 ° C until released by negative infection serological findings.

Zur weiteren Aufarbeitung werden die Amnien im Wasserbad aufgetaut. For further processing, the Amnien be thawed in a water bath.

Zur Entfernung von Blut ua anhaftenden Bestandteilen werden die Embryonalhüllen mit Wasser gewaschen. For the removal of blood, for adhering components, the embryonic membranes are washed with water.

Auf einer desinfizierbaren festen Unterlage werden sie in feuchtem Zustand durch Abstreifen vom Chorion befreit. On a disinfected solid support they are freed in a wet state by stripping from the chorion. Das Chorion wird verworfen. The chorion is discarded.

Das verbleibende Amnion wird nochmals mit Wasser gespült und anschließend auf die gewünschte Größe zugeschnitten. The remaining amnion is rinsed again with water and then cut to the desired size.

Die Sterilisation erfolgt mit 1%iger Peressigsäure unter Zusatz von Alkohol und Glycerin für 2 Stunden unter Schütteln. Sterilization is carried out with 1% peracetic acid by adding alcohol and glycerin for 2 hours with shaking.

Es folgt das Auswaschen der Sterilisationslösung mit isotonischer Kochsalzlösung und die Entnahme der Sterilitätskontrolle. This is followed by washing out the sterilizing solution with isotonic saline solution and removal of the sterility control.

Es folgen: Konfektionieren des Präparates unter Laminar Air Flow (Reinraumklasse A) in definitiv verschließbare Gefäße in Glycerin. This is followed by: making-up of the preparation under laminar air flow (pure class A) in definitely sealable vessels in glycerol.

Lagerung bei Kühlschranktemperatur oder darunter. Storage at refrigerator temperature or below.

Abgabe des Präparates auf Anforderung. Delivery of the drug on demand.

Beispiel 4 example 4 Trägermaterial support material

Zelltypen, die im Laufe des Zellwachstums mehrschichtige Zellayer bilden, z. Cell types that form in the course of cell growth multilayered cell layer, eg. B. Keratinozyten, werden in Kulturgefäßen auf Feederzellen bzw. mit Basalmembran proteinen beschichteten Zellkulturoberflächen gezüchtet, die Zellayer enzymatisch abgelöst und auf verschiedene Trägermaterialien gebracht. B. keratinocytes are cultured in culture vessels on feeder cells or with basement membrane proteins coated cell culture surfaces, enzymatically detached cell layer and brought to the various carrier materials.

Die erfindungsgemäßen Amnionpräparate eignen sich in vorteilhafter Weise zur Verwendung solcher Trägermaterialien. The Amnionpräparate invention are suitable advantageously for using such substrates.

Claims (7)

1. Amnionpräparate, bestehend aus Amnien, die aus von der Plazenta abgetrennten Embryonalhüllen nach Entfernen anhaftender Bestandteile und der Chorionanteile hervorgehen. 1. Amnionpräparate consisting of Amnien, resulting from separated from the placenta after removal of embryonic membranes attached components and the Chorionanteile.
2. Amnionpräparate nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß sie humane oder bovine Amnionpräparate darstellen. 2. Amnionpräparate according to claim 1, characterized in that they represent human or bovine Amnionpräparate.
3. Amnionpräparate nach Anspruch 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, daß die Embryonalhüllen nach Spontangeburten von der Plazenta abgetrennt, tiefgefroren zwischengelagert, nach der infektionsserologischen Freigabe aufgetaut, von anhaftendem Blut und Gewebe befreit, in feuchtem Zustand das Chorion abgestreift, die verbleibenden Amnien zugeschnitten, sterilisiert, gewaschen, in eine konservierende Lösung gegeben und nach der Konfektionierung kühl gelagert werden. 3. Amnionpräparate according to claim 1 and 2, characterized in that the amnion separated after spontaneous delivery of the placenta, frozen stored, thawed after infection serological released, freed from adhering blood and tissue, stripped in a wet state the chorion, cut the remaining Amnien, be sterilized, washed, placed in a preservative solution and stored refrigerated after assembly.
4. Verfahren zur Herstellung von Amnionpräparaten, dadurch gekennzeichnet, daß die Embryonalhüllen nach Spontangeburten von der Plazenta abgetrennt, tiefgefroren zwischengelagert, nach der infektionsserologischen Freigabe aufgetaut, von anhaftendem Blut und Gewebe befreit, in feuchtem Zustand das Chorion abgestreift, die verbleibenden Amnien zugeschnitten, sterilisiert, gewaschen, in eine konservierende Lösung gegeben und nach der Konfektionierung kühl gelagert werden. 4. A process for preparing Amnionpräparaten, characterized in that the amnion separated after spontaneous delivery of the placenta, frozen stored, thawed after infection serological released, freed from adhering blood and tissue, stripped in a wet state the chorion, cut the remaining Amnien sterilized, , washed, placed in a preservative solution and stored refrigerated after assembly.
5. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß die Embryonalhüllen bei Temperaturen von mindestens -10°C gefroren zwischengelagert, das Abstreifen des Chorions auf einer desinfizierbaren festen Unterlage erfolgt, die Sterilisation mit einem Peressigsäure-Alkoholgemisch, der Waschvorgang mit isotonischer steriler Kochsalzlösung und sterilem Glycerin und die Endverpackung in sterilem Glycerin vorgenommen wird. 5. The method according to claim 4, characterized in that the embryonic membranes stored frozen at temperatures of at least -10 ° C, is carried out the stripping of the chorion on a disinfected solid support, the sterilization with a peracetic acid-alcohol mixture, the washing operation with isotonic sterile saline solution and sterile glycerol and the final packaging is performed in sterile glycerol.
6. Verwendung der Amnionpräparate nach Anspruch 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, daß sie als Hautersatzmaterial oder als Trägermaterial für mehrschichtige Zellschichten eingesetzt werden. 6. Use of the Amnionpräparate according to claim 1 to 5, characterized in that they are used as a skin substitute material or as carrier material for multi-layer cell sheets.
7. Verwendung nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß der Einsatz als Hautersatzmaterial, insbesondere bei Verbrennungswunden und als Trägermaterial insbesondere für Keratinozyten erfolgt. 7. Use according to claim 6, characterized in that the use as a skin substitute material, in particular burn wounds and as a carrier material is carried out in particular for keratinocytes.
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