DE1917939B2 - PROCESS FOR THE PREPARATION OF CYSTINE-CONTAINING PEPTIDES - Google Patents
PROCESS FOR THE PREPARATION OF CYSTINE-CONTAINING PEPTIDESInfo
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Description
Essige .:reVinegars.: Right
Äquivalent JodEquivalent of iodine
50prozentig50 percent
SOprozentigSO percent
SOprozentigSO percent
90prozentig90 percent
95prozentig95 percent
95prozentig95 percent
lOOprozentig100 percent
lOOprozentig100 percent
1.51.5
Ausbeuteyield
92'?,92 ' ? ,
Die Trinlgruppe ist zum intermediären Schutz der Mercaptofunktion des C> stein·- beim Auf hai: '-er· höheren Peptiden be .'its de·- öfteren verwendet worden. Zur i'berführung der S-geschützten Cwempeptide m dio Cwinpepude wurde die Trip, !gruppe mit starken Säuren oder mit Quecksilber- bzw. Silbersalzen abgespalten und nachträglich, z. B. mit LuH-sauerstoff. Jod oder Dijodäthan. oxvdiert. Weiterhin läßt sich eine S-Trity !bindung auch mit Jod in Äthanol oder Methanol spalten (J. Chem. Soc. 74. ['9*?1 S. 1S62: Helvetica Chimica Aita 5! [1963]. S. 2061 bi's 20W). Diese Methode läßt sich jedoch nur bei relativ kleinen, an d^r Amino- bzw. Carboxylgruppe geschützten Peptiden anwenden. Ja höhere und vor allem an Amino- und Carboxylgruppe ungeschützte Peptide ir; Methanol nicht mehr löslich sind. Zudem verläuft die Jodoxvdation in Methanol trotz Jodübtischuß sehr langsam (1 Stunde bei Raumtemperatur), und es entstehen als Nebenprodukte Peptidmethy!- ester. Die Anwendung von Wasser andererseits glaubte man vermeiden zu müssen, da man annahm, daß die S-Trity lgruppe in wasserhaltigen Lö-ungsmitteln gegen lodoxvuation beständig sei. was .us J. Amer. Chem. Soc. 87 (1965). S. 4923 und 4927. hervorceht. wo Z - Cys --(Tritl -Cys(DPM) NH - NH, und H AIa - CiIy YaI -Cys(lrit) Ser OCIl, in ν1 asserhaltigem Dioxan mittels Jod zum entsprechenden Heptapeptid verknüpf: werden. Wasserzusatz zu organischen : ösungsmitteln hat man auch deshalb vermieden, weil Methionin und Tyrosin von Jod in wasserhaltigen Lösungsmitteln anaeeriffen werden (HeIv. Chim. Acta 51 [1968] S. 2061 "bis "!064).The triple group has been used several times for the intermediate protection of the mercapto function of the C stone - in the case of the Aufhai: '-er · higher peptides be .'its de ·. To transfer the S-protected cwempeptides with Cwinpepude, the trip group was split off with strong acids or with mercury or silver salts and subsequently, e.g. B. with LuH oxygen. Iodine or diiodethane. oxidized. Furthermore, an S-trity bond can also be cleaved with iodine in ethanol or methanol (J. Chem. Soc. 74. ['9 *? 1 p. 1S62: Helvetica Chimica Aita 5! [1963]. Pp. 2061 to 20W ). However, this method can only be used with relatively small peptides protected by the amino or carboxyl group. Yes, higher peptides and above all unprotected at the amino and carboxyl groups ir; Methanol are no longer soluble. In addition, the iododation in methanol proceeds very slowly (1 hour at room temperature) despite iodine exposure, and peptide methyl esters are formed as by-products. The use of water, on the other hand, was believed to have to be avoided, since it was assumed that the S-trity oil group in water-containing solvents was resistant to iodine oxidation. what .us J. Amer. Chem. Soc. 87 (1965). Pp. 4923 and 4927. where Z - Cys - (Tritl -Cys (DPM) NH - NH, and H AIa - CiIy YaI -Cys (lrit) Ser OCIl, in ν 1 water-containing dioxane are linked by means of iodine to the corresponding heptapeptide. Addition of water to organic solvents has also been avoided because methionine and tyrosine are corroded by iodine in aqueous solvents (HeIv. Chim. Acta 51 [1968] p. 2061 "bis"! 064).
überraschenderweise wurde nun gefunden, daß hei Raumtemperatur in wäßriger Essigsäure die Abspaltung der S-Trity lgruppe und die gleichzeitige Oxydation zu Cystinpcptiden wesentlich rascher verläuft als 7. B. in Methanol, unter diesen Bedingungen wird auch Methionin und Tyrosin nicht oxydiert.Surprisingly, it has now been found that he Room temperature in aqueous acetic acid, the cleavage of the S-trity group and the simultaneous oxidation to cystine peptides proceeds much more rapidly than 7. B. in methanol, under these conditions methionine and tyrosine are also not oxidized.
Gegenstand der Erfindung ist somit ein Verfahren zur Herstellung von cystinhaltigen Peptiden aus S-geschützten Cysteinpeptiden, deren Mercaptogruppe durch die Tritylgruppe geschützt ist durch Spaltung der S-Tritylbindung mit Jod, dadurch gekennzeichnet, daß man die oxydative Spaltung mit 1 bis 2 Moläquivalent Jod in wäßriger 40 bis 95°/„iger Essigsäure durchführt.The invention thus relates to a process for the production of cystine-containing peptides from S-protected cysteine peptides whose mercapto group is protected by the trityl group by cleavage the S-trityl bond with iodine, characterized that the oxidative cleavage is carried out with 1 to 2 molar equivalents of iodine in aqueous 40 to 95% acetic acid performs.
Die Ausbeute ist abhängig von dem Wassergehalt der Essigsäure und der zugesetzten Jodmenge (s. Tabelle). The yield depends on the water content of the acetic acid and the amount of iodine added (see table).
Wie man aus der Tabelle entnehmen kann, fällt die Ausbeute mit steigender Essigsäurekonzentration. Li:; LherschuLi Jod in wäßriger Essigsäure verminder? ebenfalls überraschenderweise die Ausbeute. Methiorri wird dasesen in wäßriger Essigsäure nur sehr langen* anaeerifTeii. Zwei Tropfen einer 0.1 n-J KJ-Lö-l;:··; werden von 100 mg Methionin in 10 ml 40prozenti^: Essigsäure selbst nach einer Stunde noch nicht restlos entfärbt, während in wäßriger Lösung bereit- nac', 5 Sekunden die braune Jodfaibe der zugeset. uv J K.I-Lösung völlig verschwindet.As you can see from the table, the Yield with increasing acetic acid concentration. Li :; LherschuLi reduce iodine in aqueous acetic acid? also surprisingly the yield. Methiorri is this only very long in aqueous acetic acid * anaeerifTeii. Two drops of a 0.1 n-J KJ-Lö-l;: ··; 100 mg methionine in 10 ml 40 per centi ^: Acetic acid is not completely discolored even after one hour, while in aqueous solution it is ready 5 seconds the brown iodine faibe of the zugeset. uv J A.I solution completely disappears.
Man oxvdiert vorteilhaft mit einer wä.n-e:.
0.1 n-J., K.I-Lösung oder einer 0.1n-Jä Essigsäure-!
sune. Die S-Trityl-c_weinderivate vverden in währ:.:;τ
Essigsäure gelöst oder suspendiert und mit der .Kv. lösung versetzt. Man rührt 15 Minuten bei R.u - teinp'ratur
und arbeitet geeignet auf. Oxydjii-'nstabile
Lösungsmittel, wie Dioxan. Methanol oder Äthanol, können, wenn nötig, als LösungsvenrinLr
zugesetzt werden.It is advantageous to oxidize with a wä.ne :. 0.1 nJ., KI solution or a 0.1nJ ä acetic acid!
sune. The S-Trityl-c_weinderivate vverden in currency:.:; Τ acetic acid dissolved or suspended and with the .Kv. solution added. The mixture is stirred for 15 minutes at rock temperature and worked up in a suitable manner. Oxydjii-unstable solvents such as dioxane. Methanol or ethanol can, if necessary, be added as a solvent.
Als weitere Bausteine der S-Trity 1-cystein enthakenden Peptide kommen alle in natürlich vorkommende;. Peptiden anzutreffenden Aminosäuren in ihrer 1 - oder η-Form in Frage. Auch der Einsatz von ,<-Aminosäuren. wie z. B. ,-/-Alanin oder anderer nur synthetisch oder halbsynthetisch zugänglicher Aminosäuren, wieAs further building blocks of S-Trity 1-cysteine abstaining Peptides all come in naturally occurring. Peptides encountered amino acids in their 1 - or η-form in question. Also the use of, <- amino acids. such as B., - / - alanine or other only synthetic or semi-synthetically accessible amino acids, such as
4= z.B. \-Methylalanin. \-Mcthyl-3.4-dioxv-! -phenylalanin oder .-I-Chlor-i -alanin i^t möglich. Weitere funktioneile Gruppen können entsprechend den in der Peptidchemie üblichen Regeln geschützt sein (vgl. E. Schroder und K. Lübke. The Peptides.4 = e.g. \ -methylalanine. \ -Methyl-3.4-dioxv-! -phenylalanine or.-I-chloro-i -alanine i ^ t possible. Further functional groups can correspond to those in the Peptide chemistry usual rules be protected (see. E. Schroder and K. Lübke. The Peptides.
Academic Press. NW York und London 1965, Bd. I. insbesondere F. 3 bis 75). wenn dies notwendig erscheint. Academic Press. NW York and London 1965, Vol. I. especially F. 3 to 75). if this appears necessary.
Die Verfahrensprodukte können als Therapeutika Verwendung finden oder als Zwischenprodukte zurThe products of the process can be used as therapeutics or as intermediates for
;5 Herstellung anderer therapeutisch wertvoller Peptide, wie z. 8. Oxytocin. Vasopressin. Insulin oder Thyreocalcitonin, eingesetzt werden.; 5 Production of other therapeutically valuable peptides, such as 8. Oxytocin. Vasopressin. Insulin or thyreocalcitonin, can be used.
Die im vorstehenden und im folgenden verwendeten Abkürzungen der Aminosäuren entsprechen der internationalen Nomenklatur. Außerdem vverden folgende Abkürzungen verwendet:The amino acid abbreviations used above and below correspond to the international ones Nomenclature. The following abbreviations are also used:
Boc = tert.-ButyloxycarbonylBoc = tert-butyloxycarbonyl
Trit -- Trityl- (= Triphenyl)Trit - trityl (= triphenyl)
ONB — 4-Nitro-benzyiesterONB - 4-nitro-benzyiester
DCC — DieyclohexylcarbodiimidDCC - Dieyclohexylcarbodiimid
DCHA — DicyclohexylaminDCHA - dicyclohexylamine
DC = DiinnsehichtchromatographieTLC = thin layer chromatography
Durch die nachstehenden Beispiele wird die hrfindung näher erläutert.The following examples illustrate the explained in more detail.
Experimenteller Teil
1· Leu — Cys — GIyExperimental part
1 Leu - Cys - GIy
Leu — Cs s — GIy
a) Boc — Cys(Trit)— GK -ONBLeu - Cs s - GIy
a) Boc - Cys (Trit) - GK -ONB
Zu einer auf —10-C abgekühlten Lösung von -in, 2 g Boc — Cys(Trit) — OH gibt man 25.4 g" "To a solution of -in, 2 g, cooled to -10 ° C Boc - Cys (Trit) - OH give 25.4 g ""
H — GIy-ONB · HBrH - GIy-ONB · HBr
und 12.2? ml Triäthylamin. rührt 10 Minuten bei
— !0'C und gibt dann -^ine Lösung \on 19.? g DCC in
Meth>L..ailorid zu. Μύη rührt 4 Stunden bei 0: C und
la !M über Nacht bei Raumtemperatur--tehen. Anderen-Uiwird
der Niederschlag abgesaugt und da* f-iitrat
irr, Vakuum eingeengt. Der Ruckstand wird in Essige-ier
aufgenommen und mit 2n-Zi -onen.-äure. Natnumbicarhonatlö>ung
und Was:>er ausgeschüttelt, mit
Natriumsulfat getrocknet und die E^sigesteHösurig
eingeengt. Das zurückbleibende Öl wird in Aceton gelöst und über Aluminiumoxid (Woe Im. neutral!
Chromatographien.
Ausbeute 49.5 g Öl (S" " „1: DC:
Einheitlich.and 12.2? ml of triethylamine. stirs for 10 minutes at -! 0'C and then gives - ^ a solution \ on 19.? g DCC in Meth> L..ailorid to. Μύη stirs for 4 hours at 0 : C and la! M overnight at room temperature. Otherwise, the precipitate is sucked off and the nitrate irr, reduced in a vacuum. The residue is taken up in vinegar eggs and treated with 2n-Zi -onen.-acid. Sodium bicarbonate solution and what: it is shaken out, dried with sodium sulfate, and the most acidic solution is concentrated. The remaining oil is dissolved in acetone and dried over aluminum oxide (Woe Im. Neutral! Chromatographien.
Yield 49.5 g of oil (S """1: TLC:
Uniformly.
b) H -- C\-.(Trit) -GIv ONB-* ->s\kitb) H - C \ -. (Trit) -GIv ONB- * -> s \ kit
4.65 g Boc CysfTriti — GIy — ONB werden in wasserfreier Trill uoresMgsäure gelöst. Man läßt 1 Stunde bei Raumtemperatur stehen und engt anschließend im Vakuum ein. Mit Äther wird zweimal nachdestilliert und der Rückstand in Essigester gelöst. Dazu iiiht man ■;.7g p-Toluölsulfoii'.äure-monohydrat und ?ällt mit Äther das Tosylat aus.4.65 g of Boc CysfTriti - GIy - ONB are dissolved in anhydrous TrilluoresMgsäure. The mixture is left to stand at room temperature for 1 hour and then concentrated in vacuo. It is distilled twice with ether and the residue is dissolved in ethyl acetate. For this one needs ■ ; .7g of p-toluene sulfoii'.acid monohydrate and the tosylate precipitates with ether.
Ausbeute 3.7 g (71.5° oi. Schmp. 137 bis 140C. \\]r, ■· 37.95 (c 2. Methanol).Yield 3.7 g (71.5 ° o i. Mp. 137 to 140C. \\] r, ■ · 37.95 (c 2, methanol).
c) Boc Leu - Cvs(Triti - GIy - ONBc) Boc Leu - Cvs (Triti - GIy - ONB
Zu einer auf OC abgekühlten Lösung \on 14.S g Boc -- Leu — OH in HM) ml Methylenchlorid gibt man eine ebenfalls gekühlte Lösung von 7 g DCC in wenig Metlnienchlorid. Man läßt 2 Stunden bei 0=C stehen, saugt den Niederschlag ab. kühlt das Filtrat und gibt 25 g ~H — Cys(Trit)- GIy — ONB-tosylat und 4.8 ml Triäthylamin zu. Man läßt den Ansatz über Nacht im Eisschrank stehen, engt anderntags im Vakuum ein und verteilt den Rückstand zwischen Essigester und Wasser. Die Essigesterphase wird wie bei 1, a) ausgeschüttelt, getrocknet und eingeengt. Der Rückstand wird mit Äther verrieben.A likewise cooled solution of 7 g of DCC in a little metal chloride is added to a solution of 14.5 g of Boc-Leu-OH in HM) ml of methylene chloride, which has been cooled to OC. The mixture is left to stand at 0 ° C. for 2 hours, and the precipitate is filtered off with suction. cools the filtrate and adds 25 g ~ H - Cys (trit) - GIy - ONB tosylate and 4.8 ml of triethylamine. The mixture is left to stand overnight in the refrigerator, the next day concentrated in vacuo and the residue is partitioned between ethyl acetate and water. The ethyl acetate phase is extracted, dried and concentrated as in 1, a). The residue is triturated with ether.
Ausbeute 25,6g (97%), Schmp. 178 bis ISl0C. [x]D—13.1' (c -="l, Methanol).Yield 25,6g (97%), mp 178 to ISL 0 C. [x] D -13.1 '. (C - = "l, methanol).
d) H — Leu — Cys(Trit) — GIy — OH · 1 H,0
Zu einer Suspension von 25,6 gd) H - Leu - Cys (Trit) - GIy - OH · 1 H, 0
To a suspension of 25.6 g
Boc—Lei Cys(Trit) — GIy — ONBBoc - Lei Cys (Trit) - GIy - ONB
in 120 ml Dioxin/Wasser (8:2) läßt man innerhalb
von elwa 4 Stunden 16,6 ml 2n-Natronlaugc zutropfen
fThvi.olnhthalcin als Indikator). Nach beendigter Zugäbe
neutralisiert man mit 2n-Zitronensäure und engt jm Vakuum ein. Der Rückstand wird zwischen Essig-Τ'
un.d -^onensäure verteilt. Die Essigesterphase
wird mit Wasser gewaschen, mit Natriumsulfat
getrocknet und eingeengt. Der Rückstand wird in Trifluoressigsäure
gelöst. Nach lstündigem Stehen destilliert man die Trifluoressigsäure im Vakuum gut ab .ind
destilliert mit Äther zweimal nach .Der Rückstand wird mit Natriumacetatlösung verrieben, wobei eine
kristalline Substanz ausfällt, welche abgesaugt und aus 70prozentigem Alkohol umkristallisiert wird.
Ausbeute ~13.8 g (75° 0). Schmp. 161 bis 165:C.
[\]n - 2.2 (c = 1.16.6 ml of 2N sodium hydroxide solution are added dropwise in 120 ml of dioxin / water (8: 2) within about 4 hours (thvi.olnhthalcin as an indicator). After completion were to admit a is neutralized with 2N citric acid and concentrated j m vacuo. The residue is distributed between vinegar-Τ ' and d - ^ onenic acid. The ethyl acetate phase is washed with water, dried with sodium sulfate and concentrated. The residue is dissolved in trifluoroacetic acid. After standing for one hour, the trifluoroacetic acid is well distilled off in vacuo .ind distilled twice with ether. The residue is triturated with sodium acetate solution, a crystalline substance precipitating, which is filtered off with suction and recrystallized from 70 percent alcohol.
Yield ~ 13.8 g (75 ° 0 ). 161 to 165 : C. [\] n - 2.2 (c = 1.
(75° 0). Schmp. 161 bis
Eisessie). DC: Einheitlich.(75 ° 0 ). M.p. 161 to
Eisessie). DC: Uniform.
b) Leu — Cys — GIyb) Leu - Cys - GIy
Leu — Cys — GIyLeu - Cys - GIy
.0.5CH3COOH.0.5CH 3 COOH
aa) Zu einer Lösung son 551.7 mgaa) To a solution 551.7 mg
H — Leu — Cys(Trit) — GIy — OH · 1 H;OH - Leu - Cys (Trit) - GIy - OH · 1H ; O
(1 mMol) in 5 ml Eises>ig gibt man 15 ml Was-er und 10 ml einer 0.1 n-.U EiM-^ig-Lösung. Die Reaktionsmischung wird 15 Minuten bei Raumtemperatur gerührt und anschließend im Vakuum eingeengt. Der verbleibende Rückstand zwischen Wasser und Äther verteilt. Die wäßrige Phase wird mit v\:nberlite IR 45· (beladen mit Acetat-ionen) gerührt, bis in der Lösung kein .Iodid mehr feststellbar ist. Der Austauscher wird abgesaugt und das Filtrat im Vakuum eingeengt, der Rückstand mit Äther verrieben und abgesaugt.(1 mmol) in 5 ml of ice is given to 15 ml of water and 10 ml of a 0.1 n-.U egg solution. The reaction mixture is stirred for 15 minutes at room temperature and then concentrated in vacuo. Of the remaining residue between water and ether distributed. The aqueous phase is mixed with v \: nberlite IR 45 (loaded with acetate ions) stirred until in solution no more iodide can be detected. The exchanger is filtered off with suction and the filtrate is concentrated in vacuo, the Triturated residue with ether and sucked off.
Ausheute 281mg (92° „). Schmp. 212 bis 215" C (Zersetzung) DC: Einheitlich.Today 281mg (92 ° "). M.p. 212 to 215 "C (Decomposition) DC: Uniform.
bb) Zu einer Lösung von 551.7 mgbb) To a solution of 551.7 mg
H — Leu — Cys(Trit) — GIy — OH · 1 H2OH - Leu - Cys (Trit) - GIy - OH · 1H 2 O
(1 mMol) in 5 ml Eisessig gibt man 5 ml Wasser und 10ml einer 0.1 n-wäßrigea J2 KJ-Lösung. Die Reaktionsmischung engt man im Vakuum ein ir.d verteilt den Rückstand zwischen Wasser und Äther. Die wäßrige Phase wird im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wird in Sprozentiger Essigsäure durch Filtration über »Sephadex G 10<· (Säule 90 · 1.5 cm) von anorganischen Bestandteilen befreit. Ausbeute 277 mg (91 °0) DC: Einheitlich und identisch mit dem aus Versuch e. aa) gewonnenem Material.(1 mmol) in 5 ml of glacial acetic acid are added to 5 ml of water and 10 ml of a 0.1 N aqueous I 2 KJ solution. The reaction mixture is concentrated in vacuo and the residue is distributed between water and ether. The aqueous phase is concentrated in vacuo. The residue is freed from inorganic constituents by filtration through “Sephadex G 10” (column 90 x 1.5 cm) in 1-percent acetic acid. Yield 277 mg (91 ° 0 ) TLC: Uniform and identical to that from experiment e. aa) recovered material.
2. YaI—C\>—AIa
VaI — Cys, — AIa
a) Boc — Vat -— Cys(Trit) — OH-DCHA2. YaI - C \> - AIa
VaI - Cys, - AIa
a) Boc - Vat - Cys (Trit) - OH-DCHA
Zu einer Suspension von 7,25g S-Trityl-cystein (20 mMol) in 40 ml Dioxan gibt man 10 ml 2n-NaOH, rührt, bis alles gelöst ist, und gibt dann 3,15 gTo a suspension of 7.25 g of S-trityl-cysteine (20 mmol) in 40 ml of dioxane are added to 10 ml of 2N NaOH, the mixture is stirred until everything has dissolved, and then 3.15 g are added
Boc — VaI — OSuBoc - VaI - OSu
(10 mMol) zu, rührt 1 Tag bei Raumtemperatur und engt anderntags die neutralisierte Reaktionsmischung ein. Der Rückstand wird zwischen Essigester und 2n-Zitronensäure verteilt. Ausfallendes, im Überschuß eingesetztes S-Trityl-cystein wird abgesaugt und die Essigesterphase mit Wasser ausgeschüttelt, mit(10 mmol), stirred for 1 day at room temperature and concentrated the next day the neutralized reaction mixture a. The residue is partitioned between ethyl acetate and 2N citric acid. Failure, in excess S-trityl-cysteine used is suctioned off and the ethyl acetate phase is shaken out with water, with
Natriumsulfat getrocknet und eingeengt. Es bleiben 8.3 g Öl zurück"Dried sodium sulfate and concentrated. 8.3 g of oil remain "
Das Öl wird in Äther gelöst. Von Unlöslichem wird filtriert. Nun setzt man DCHA bis zur basischen Reaktion zu. nitriert noch einmal von unlöslichem Material und fällt anschließend mit Petroläther das DCHA-SaIz. Ausbeute 5.7 g (76.6%). amorph. DC: Einheitlich.The oil is dissolved in ether. Becomes of the insoluble filtered. Now DCHA is set until it has a basic reaction to. nitrates again from insoluble material and then falls the DCHA-SaIz with petroleum ether. Yield 5.7 g (76.6%). amorphous. DC: Uniform.
b) Boc — VaI — Cys(Trit) — Ala — ONB
Eine E-oigesterlösung von 5.7 αb) Boc - VaI - Cys (Trit) - Ala - ONB
An E-oigester solution of 5.7 α
Boc — VaI — Cys(Trit) — OH ■ DCHABoc - VaI - Cys (Trit) - OH ■ DCHA
(7.66 m.Mol) wird mit 2n-Zitronensäure und Wasser ausgeschüttelt, mit Natriumsulfat getrocknet und eingeengt. Der Rückstand wird in Methylenchlorid gelöst und "mit 3.74 g H — AIa -- ONB-tosylat (9.J rnMoI) versetzt. Unter Rühren gibt man nun bei O C 1.24 ml Triäihvl.imin (9.1 mMol). 2.1 g N-Hydroxysuce'nirnid (IS.2 iiiMol) und eine kalte Lösung von 2.0 g DCC in Methy lenchlorid zu. Man läßt 2 Stunden bei OC und über Nacht bei Raumtemperatur stehen und arbeitet wie bei 1. a) auf.(7.66 m.Mol) is extracted with 2N citric acid and water, dried with sodium sulfate and concentrated. The residue is dissolved in methylene chloride and "with 3.74 g of H - AIa - ONB tosylate (9.J rnMoI) offset. 1.24 ml are then added at OC with stirring Triäihvl.imin (9.1 mmol). 2.1 g N-hydroxysuce'nirnide (IS.2 iiiMol) and a cold solution of 2.0 g DCC in Methylene chloride too. It is left to stand for 2 hours at OC and overnight at room temperature and work is carried out as in 1. a).
Ausbeute 5.15 g (87.5%). Schmp. 175 bis 177CC.Yield 5.15 g (87.5%). M.p. 175 to 177 C C.
Zur Reinigung wurde die Substanz in Fssigester gelöst und über neutrales Aluminiumoxid (Woe Im. Aktiv stufe I) Chromatographien.For purification, the substance was dissolved in liquid ester and on neutral aluminum oxide (Woe Im. Active level I) chromatographies.
Ausbeute 4.0g (68%). Schmp. 1S5 bis 1M6'C. [^]11 _ !9.6: (£· -= 2. Dimethylformamid).Yield 4.0g (68%). M.p. 15.5 to 1M6'C. [^] 11 _! 9.6 : (£ · - = 2. dimethylformamide).
c) H — VaI — Cys(Trit) -- AIa — OH. 2.5 CH,COOHc) H - VaI - Cys (Trit) - AIa - OH. 2.5 CH, COOH
6.6g Boc — VaI — Cys(Trit) — AIa — ONB uerden wie bei Ld) mit 1 η-Natronlauge verseift und anschließend mit Trifluoressjgsäure behandelt. Aufarbeitung wie bei 1. d).6.6g Boc - VaI - Cys (Trit) - AIa - ONB uerden as with Ld) saponified with 1 η sodium hydroxide solution and then treated with trifluoroacetic acid. Reconditioning as in 1. d).
Ausbeute 4.6 g. umknstallisiert aus Eisessig Äther. Schmp. 146 bis 147"C.Yield 4.6 g. umknstallisiert from glacial acetic ether. M.p. 146 to 147 "C.
d) VaI — Cys — Alad) VaI - Cys - Ala
. 1 CH3COOH. 1 H.,0
NV — C ys — AIa. 1 CH 3 COOH. 1 H., 0
NV - C ys - AIa
Zu einer Suspension von 683.S m_To a suspension of 683.S m_
aoH- VaI — Cys(Trit) — AIa — OH. 2.J CH5COOH in 30 ml eines Gemisches Essigsäure Wasser 1 : 2 gibt man 10 ml einer 0.1 n-J-JEisessig-Lösung, rührt 1ς Minuten bei Raumtemperatur und arbeitet wie bei L e, aa) auf.aoH - VaI - Cys (Trit) - AIa - OH. 2.J CH 5 COOH in 30 ml of a mixture acetic acid: water 1: 2 are 10 ml of a 0.1 nJ JEisessig solution, stirred for 1 ς minutes at room temperature and worked up as in L e, aa) on.
Ausbeute 285 mg (86.5%), Schmp. 227 bis 230 C (Zersetzung). DC: Einheitlich.Yield 285 mg (86.5%), melting point 227 to 230 ° C. (decomposition). DC: Uniform.
Claims (1)
(Reaktionszeit: 15 Minuten bei Raumtemperatur)Elimination of S-trity groups and simultaneous oxidation of H - Leu - Cys (Trit) - Gly - OH with iodine to the corresponding cystine peptide in acetic acid
(Reaction time: 15 minutes at room temperature)
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