DE1909997C3

DE1909997C3 - Process for the production of microorganisms

Info

Publication number: DE1909997C3
Application number: DE19691909997
Authority: DE
Inventors: Kazuo Kimura; Katsunobu Tanaka; Masaki Yamamoto
Original assignee: Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd
Current assignee: KH Neochem Co Ltd
Priority date: 1968-03-09
Filing date: 1969-02-27
Publication date: 1974-03-14
Also published as: DK127437B; DE1909997A1; NL6903526A; FR2003586A1; AT292608B; GB1216045A; BE729604A; CH508725A

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von Mikroorganismenzellen in einem! wäßrigen Nährmedium bei üblichen pH- und Temperaiurverhältnissen in Gegenwart wenigstens eines gasförmigen Kohlenwasserstoffs, wie Äthan, Projpan oder η-Butan, als Hauptkohlenstoffquelle und lüolierung und Gewinnung der so erzeugten Mikroorganismen. Dieses Verfahren ist dadurch gekennzeichnet, daß man als Mikroorganismen Nocardia paraffinica ATCC 21198, Nocardia paraffinica ATCC 21199, :o Nocardia butanica ATCC 21197, Brevibacterium parafh'nolyticum ATCC 21195, Brevibacterium butanicum ATCC 21196 oder Corynebacterium alkanum ATCC 21194 einsetzt.The present invention relates to a method for producing microorganism cells in one! aqueous nutrient medium at normal pH and temperature conditions in the presence of at least one gaseous hydrocarbon such as ethane, propane or η-butane, as the main carbon source and lüolierung and recovery of the microorganisms so produced. This process is characterized in that the microorganisms used are Nocardia paraffinica ATCC 21198, Nocardia paraffinica ATCC 21199,: o Nocardia butanica ATCC 21197, Brevibacterium parafh'nolyticum ATCC 21195, Brevibacterium butanicum ATCC 21196 or Corynebacterium alkanum ATCC 21194 uses.

Aus der britischen Patentschrift 1 062 816 ist es bereits bekannt. Mikroorganismen in einem wäßrigen Nährmedium unter aeroben Bedingungen in Gegenwart eines gasförmigen Kohlenwasserstoffs als Hauptkohlenstoffquelle zu züchten. Das erfindungsgemäße Verfahren unterscheidet sich von dem in dieser britischen Patentschrift beschriebenen Verfahren da durch, daß Mikroorganismen einer neuen Species eingesetzt werden. Die Verwendung dieser Mikroorganismen ermöglicht den Einsatz beliebiger gasförmiger Kohlenwasserstoffe als Kohlenstoffquelle, was gemäß der genannten britischen Patentschrift nicht möglich ist, wie auch das weiter unten folgende Beispiel 7 zeigt.It is already known from British patent specification 1,062,816. Microorganisms in an aqueous Nutrient medium under aerobic conditions in the presence of a gaseous hydrocarbon as the main carbon source to breed. The method according to the invention differs from the method described in this British patent because by using microorganisms of a new species. The use of these microorganisms enables the use of any gaseous hydrocarbons as a carbon source, which is not possible according to the said British patent specification, as is also the following below Example 7 shows.

D.e mikrobiologischen Eigenschaften dererfindungs-D.e microbiological properties of the invention

C. Physiologische EigenschaftenC. Physiological properties

1. Optimale Temperatur: 25 bis 37°C (leichtes Wachstum bei 42° C).1. Optimal temperature: 25 to 37 ° C (light Growth at 42 ° C).

2. Optimales pH: 6,0 bis 9,0.2. Optimal pH: 6.0 to 9.0.

3. Sauerstoffbedarf: Atrob.3. Oxygen demand: Atrob.

4. Lackmusmilch: Nicht verändert oder al kaiisch.4. Litmus milk: Not modified or alien.

5. Schwefelwasserstoff: Erzeugt.5. Hydrogen Sulphide: Generated.

6. Indol: Nicht erzeugt.6. Indole: Not generated.

7. Stärke: Nicht zersetzt.7. Starch: Not decomposed.

8. Nitrat wird reduziert.8. Nitrate is reduced.

9. Katalase: Positiv.9. Catalase: Positive.

10. Erzeugung von Ammonium: Negativ.10. Ammonium generation: negative.

11. Voges-Proskauer-Test: Negativ.11. Voges-Proskauer test: negative.

12. Verbrauch von Zuckern: Aus Glucose Fructose, Mannose, Rohrzucker, Manni und Sorbit wird Säure erzeugt.12. Consumption of sugars: From glucose, fructose, mannose, cane sugar, manni and sorbitol is generated acid.

13. Kohlenwasserstoff-assimilierende Eigen schäften: Assimilieren Äthan, Propan η-Butan, n-Dodecan, n-Tridecan, n-Tetra decan, n-Pentadecan, n-Hexadecan unc n-Heptadecan.13. Hydrocarbon Assimilating Eigen Shafts: Assimilating ethane, propane η-butane, n-dodecane, n-tridecane, n-tetra decane, n-pentadecane, n-hexadecane and n-heptadecane.

Nocardia paraffinica ATCC 21198 unc ATCC 21199 sind, soweit Untersuchunger ergeben haben, nur in der Konsistem des Schrägagars verschieden. ATCC 2119i ist brüchig, während ATCC 21199 butter artig ist.Nocardia paraffinica ATCC 21198 and ATCC 21199 are, as far as investigators only differ in the consistency of the agar slant. ATCC 2119i is brittle, while ATCC 21199 is butter is good.

gemäß verwendeten Mikroorganismen sind wie folgt: 30 "■ ^Nocardla butanica, ATCC 21197according to the microorganisms used are as follows: 30 "■ ^Nocardla butanica, ATCC 21197

3535

4545

I. Nocardia paraffinica, ATCC 21198 und ATCC 21199I. Nocardia paraffinica, ATCC 21198 and ATCC 21199

A. Morphologische EigenschaftenA. Morphological properties

1. Form der Mikroorganismen: Übliche kurze Stäbchen; junge Zellen zeigen den Myzeliumzustand; verzweigte und vergleichsweise lange Zellen werden gefunden. Die Bildung von Sporen hängt davon ab, ob das Myzelium aufbricht.1. Form of the microorganisms: Usual short rods; young cells show that Mycelium condition; branched and comparatively long cells are found. The formation of spores depends on whether the mycelium breaks open.

2. Größe: 0,5 bis 0,75 · 2,5 bis 16,0 μ.2. Size: 0.5 to 0.75 x 2.5 to 16.0 µ.

3. Bewegungsvermögen; Nicht beweglich.3. ability to move; Not movable.

4. Sporen: gebildet.4. Spores: formed.

5. Flagellum: Nicht gebildet.5. Flagellum: Not formed.

6. Gramfärbung: Positiv.6. Gram stain: positive.

7. Säurebeständige Verfärbung: Positiv.7. Acid-resistant discoloration: Positive.

B. ZüchtungseigenschaftenB. Breeding properties

1. Das Wachstum erfolgt in einer Fleischbrühenagarplattenkultur sehr langsam (kreisförmig, runzelig, wellenförmig, nabeiförmig, gelblichrot, glanzlos und undurchsichtig). 1. Grow in a meat broth agar plate culture very slow (circular, wrinkled, wavy, hub-shaped, yellowish-red, dull and opaque).

2. In einer Fleischbiühenagarschrägkultur verläuft das Wachstum langsam (fadenförmig, glanzlos, gelblichrot, geruchlos, brüchig). Das Kulturmedium wird nicht verändert.2. In a meat batch agar slant culture growth is slow (thread-like, dull, yellowish-red, odorless, brittle). The culture medium is not changed.

i. In einer Fleischbrühekultur erfolgt das Wachstum der Oberfläche häutchenartig, wobei man kaum eine Trübung und kein Absitzen feststellt. i. In a meat broth culture, the surface grows like a membrane, with hardly any turbidity and no settling.

4. In einer Gelatinestichkultur verläuft das Wachstum in dem oberen Teil besser als in dem unteren TdJ, wobei keine Verflüssigung erfolgt.4. In a gelatin stick culture, the growth in the upper part is better than in the lower TdJ, with no liquefaction occurring.

A. Morphologische EigenschaftenA. Morphological properties

1. Form der Mikroorganismen: Gewöhnlich kurze Stäbchen; junge Zellen zeigen Myzeliumzustand; verzweigte und vergleichsweise lange Zellen werden festgestellt. Di< Bildung von Sporen hängt davon ab, ot das Myzelium aufbricht.1. Form of the microorganisms: Usually short rods; young cells show mycelium state; branched and comparatively long cells are found. The formation of spores depends on ot the mycelium breaks open.

3. Bewegungsvermögen: Nicht beweglich.3. Movement: Not mobile.

4. Sporen: Gebildet.4. Spores: Formed.

5. Flagellum: Nicht gebildet.5. Flagellum: Not formed.

6. Gramverfärbung: Positiv.6. Gram stain: positive.

B. ZüchtungseigenschaftenB. Breeding properties

1. In einer Fleischbrühenagarplattenkultui ist das Wachstum ein wenig langsarr (kreisförmig, runzelig, wellenförmig, na belförmig, matt rot, glanzlos und un d rchsichtig).1. In a broth agar plate culture, growth is a little slow (circular, wrinkled, wavy, needle-shaped, dull red, dull and un thoughtful).

2. In einer Fleischbrühenagarschrägkultui verläuft das Wachsen langsam (faden förmig, glanzlos, matt rot, geruchlos brüchig). Das Kulturmedium wird nichi verändert.2. In a beef broth agar slant the growth is slow (thread-like, dull, dull red, odorless brittle). The culture medium is not changed.

3. In einer Fleischbrühenkultur verläuft das Wachstum der Oberfläche häutchenförmig wobei die Brühe praktisch klar ist unc keine Ablagerung gefunden werden kann3. In a broth culture, the surface growth is cuticle-shaped the broth is practically clear and no deposit can be found

4. In einer Gelatinestichkultur verläuft da: Wachstum in dem oberen Teil besser ah in dem unteren Teil, wobei man keine Gelatineverflüssigung feststellt.4. In a gelatin puncture culture there goes: growth in the upper part better ah in the lower part, no gelatin liquefaction being observed.

C. Physiologische EigenschaftenC. Physiological properties

1. Optimale Temperatur: 25 bis 35°C (leichtes Wachstum bei 42°C).1. Optimal temperature: 25 to 35 ° C (slight growth at 42 ° C).

2. Optimales pH: 6,0 bis 9,0.2. Optimal pH: 6.0 to 9.0.

'-K")9'-K ") 9

,11-, 11-

3. Sauerstoffbedarf: Ac>v :.3. Oxygen demand: Ac> v:.

4. Lackmusmüch: Nich. -,ii.i.ii· kaiisch.4. Litmusmüch: Not. -, ii.i.ii kaiisch.

5. Schwefelwasserstoff- F;/ei- · t). Indoi: Nicht erzeugt.5. Hydrogen sulfide- F; / a- · t). Indoi: Not created.

7. Stärke: Nicht zerset/t
K. Nitrat wird reduziert,
-λ Katalase: Positiv.
,0. Erzeugung von Ammonium- : il. Voges-Proskaucr-Test: Negativ '.2. Verbrauch von Zuckern: Säure Glucose, Fructose, Arabinose, Rohrzucker, Galactose, Xyl··: und Sorbit erzeugt.
! 3. Kohlenwasserstoff-assimiliereiiij schäften: Assimilieren Athan η-Butan, n-Octan, n-Undecan, n-Dodtcan, n-Tridecan, n-Tetradecan, n-Peniadecan, n-Hexadecan und n-Heptadecan. D>, uixonomischen Stellungen beider Mikroorga- so nisni'¹ werden £-mäß Bergeys Manual of Determinü ο Bacteriology, 7. Ausgabe, bestimmt.7. Starch: not decomposed / t
K. Nitrate is reduced,
-λ catalase: positive.
, 0. Generation of ammonium: il. Voges-Proskaucr test: negative '.2. Consumption of sugars: acid glucose, fructose, arabinose, cane sugar, galactose, xyl · ·: and sorbitol are produced.
! 3. Hydrocarbon assimilation: assimilate athan η-butane, n-octane, n-undecane, n-dodtcan, n-tridecane, n-tetradecane, n-peniadecane, n-hexadecane and n-heptadecane. D>, uixonomischen positions of both micro-organisms so nisni ^'1 are £ -mäß Bergey's Manual of Determinü ο Bacteriology, 7th edition determined.

Bei ic Bakteiien gehören zu der Ordnung Actinomycr:.i!es, da ihre Zellen steif sind und in einigen Wac¹ itumsphasen eine verzweigte myzeliumähnliche »5 Stru' ur gebildet wird. In dieser Ordnung gehören sie .·■■■ der Familie Actinomycetacene, da ein echtes •!mm erzeugt wird und zusätzlich Sporen durchIn ic Bakteiien belong to the order Actinomycr: .i it is because their cells are stiff and in some Wac ¹ itumsphasen a branched myzeliumähnliche "5 Stru 'ur formed. In this order they belong . · ■■■ of the Actinomycetacene family, since a real •! Mm is generated and additional spores through

ir.igen- !5 'ropan, •Vlifbrechen des Myzeliums gebildet werden. Darüber hinaus gehören sie in dieser Kamilie zu dem Genus Noeardia, da sie in obligatorischer Weise aerob und säurebeständig sind. In diesem Genus kommen sie 'Nociirdia asteroides, Nocardia polychromogenes, Nocmha caprae und Nocardia minima am nächsten. Wie aus der folgenden Tabelle hervorgeht, unterscheiden sie sich von Nocardia asleroides in ihrer I urne, in ihrem Wachstum in einem Glucosemedium sowie hinsichtlich ihrer optimalen Wachst umstemperatur. Von Nocardia polychromogenes unterscheiden sie sich hinsichtlich Farbe, optimaler Wachstumstemperatur und Wirkung gegenüber Milch. Der Unterschied zu Nocardia caprae besteht in dem Wachstum in einem Glucosemedium sowie in einem Fluschbrühenmedium, in der Erzeugung eines Luftmyzeliums, in der Einwirkung gegenüber Milch sowie hinsichtlich einer säurebeständigen Verfärbung. Gegenüber Nocardia minima besteht ein Unterschied hinsichtlich Farbe, optimaler Wachsiumstemperaiur und säurebeständiger Verfärbung. Ferner besitzen diese neuen Bakterien ein Assimilationsvermögen für gasförmige Kohlenwasserstoffe. Sie können als eine neue Spezies betrachtet werden.ir.igen-! 5 'ropan, • Vlifbruch the mycelium are formed. About it in addition, in this family they belong to the genus Noeardia, since they are in an obligatory manner aerobic and are acid-resistant. In this genus they come 'Nociirdia asteroides, Nocardia polychromogenes, Nocmha caprae and Nocardia minima closest. As can be seen from the following table, they differ they themselves from Nocardia asleroides in their urn, in their growth in a glucose medium as well as with regard to their optimal growth temperature. Differentiate from Nocardia polychromogenes they differ in terms of color, optimal growth temperature and effect on milk. the It differs from Nocardia caprae in that it grows in a glucose medium as well as in one Flush broth medium, in the creation of an aerial mycelium, in the action against milk as well as acid-resistant discoloration. There is a difference to Nocardia minima regarding color, optimal wax temperature and acid-resistant discoloration. Also own these new bacteria have an ability to assimilate gaseous hydrocarbons. You can as a new species to be considered.

Sie unterscheiden sich voneinander in ihrer Farbe. Größe zu Beginn des Züchiens sowie in inrem Zuckerverbrauch. Daher wurden sie als Nocardia paraflinica bzw. Nocardia butanica bezeichnet.They differ from each other in their color. Size at the beginning of breeding as well as in sugar consumption. Therefore they were called Nocardia paraflinica or Nocardia butanica.

Table I.

NocardiaNocardia NocardiaNocardia Nocardia capraeNocardia caprae NocardiaNocardia NocardiaNocardia NocardiaNocardia asteroid·:.·asteroid·:.· .·. lychromogenes. ·. lychromogenes minimaminimum paraflinic2.paraflinic2. butanicabutanica Leicht gelbesSlightly yellow Zuerst farbFirst color ATCC21I'I8
ATCC211')yATCC21I'I8
ATCC211 ') y ATCC 2 Π17ATCC 2 17 Farbecolor Wachstum,Growth, los. In derCome on. In the GelblichrolYellowish rol MattrotDull red wird tiefgelbturns deep yellow letztenlast bis gelblichto yellowish WachstumsGrowth rotRed periodeperiod fleischrotmeat loaf GeringfügigeMinor oder koralor coral Buden dünntBooths thin Ablagerungdeposit
feiner Flok-fine flok
ken. Bildungken. education lenrotlenrot w αν ι ijtuiti tuw αν ι ijtuiti tu gelbliche
Häutchenyellowish
cuticle von Luft-from air Bilden geib-Form geib- Bilden matt-Form matt einem Glucose
mediuma glucose
medium myzelnmycelia lichrote
Häutchen.
Keine Abbright red
Cuticle.
No Ab rote Häut-red skinned
chen. Keinechen. None
Ablagerung,Deposit, lagerung, diestorage, the die Brühe istthe broth is Mäßig, Fbk-Moderate, Fbk- Brühe istBroth is praktisch klarpractically clear kenablage-kenablage- praktisch klapractically kla Wachstum inGrowth in rung. Bildungtion. education desgl.the same desgl.the same einem Fleischa meat von Luft-from air brühemediumbrew medium myzelnmycelia 37 C37 C 22 bis 25 C22 to 25 C. 22 bis 25 C22 to 25 C. Optimale WachsOptimal wax VerfestigenSolidify 25 bis 37 C25 to 37 C. 25 bis 35 C25 to 35 C. tumstemperaturtumble temperature WachsenGrow LeichtEasy Wirkung gegenEffect against Die meisten
sind night
säurebestän Most
are night
acid-resistant Nicht ver
ändertNot ver
changes Nicht ver
ändertNot ver
changes über Milch
Säurebeständige
Verfärbungabout milk
Acid Resistant
Discoloration digdig Säurebestän
digAcid resistance
dig Säurebestän
digAcid resistance
dig Verbrauch vonConsumption of Zuckern —Sugars - ArabinoscArabinosc GalactoseGalactose

irir

Corynehaeierium alkanium ATCC 21194, Brevibacterium paraflinoMicum ATCC 21195 und Brevibacterium butanicum ATCC 21196 werden jeweils aus dem Erdboden isoliert. Ihre mikrobiologischen Eigenschaften werden nachstehend angegeben:Corynehaeierium alkanium ATCC 21194, Brevibacterium paraflinoMicum ATCC 21195 and Brevibacterium butanicum ATCC 21196 are each isolated from the soil. Your microbiological Properties are given below:

I. Corynebacierium alkanium, ATCC 21194I. Corynebacierium alkanium, ATCC 21194

A. Morphologische EigenschaftenA. Morphological properties

!. Form der Mikroorganismen: Gewöhnlich m kurze Stäbchen; häulig werden unvollständige Spaltungszellen, verzweigte Zellen und V-ariige Spaltungszellen beobachtet.! Form of the microorganisms: Usually m short rods; frequent become incomplete Fission cells, branched cells, and V-like fission cells were observed.

2. Größe: 0,5-2,5 bis 5,0μ.2. Size: 0.5-2.5 to 5.0μ.

3. Bewegungsvermögen: Nicht beweglich.3. Movement: Not mobile.

4. Sporen: Nicht gebildet.4. Spores: Not formed.

5. Flagelium: Nicht gebildet.5. Flagelium: Not formed.

6. Gramverfärbung: Positiv.6. Gram stain: positive.

7. Säurebeständige Verfärbung: Negativ.7. Acid-resistant discoloration: negative.

B. ZüchtungseigenschaftenB. Breeding properties

1. In einer Fleichbrühenagarnlattenkultur mäßiges Wachstum (kreisförmig, glatt, vollständig, konvex, gelblichgrau, funkelnd und undurchsichtig).1. Moderate growth (circular, smooth, complete, convex, yellowish gray, sparkling and opaque).

2. In einer Fleischbrühenschrägagarkultur
mäßiges Wachstum (fadenförmig, funkelnd, gelblichgrau, geruchlos, butterartig). Das Kulturmedium wird nicht veiändert.2. In a broth slant agar culture
moderate growth (thread-like, sparkling, yellowish-gray, odorless, buttery). The culture medium is not changed.

3. In einer Fleischbrühenkultur verläuft das Wachstum der Oberfläche langsam, wcbei sich die Brühe etwas eintrübt.3. In a broth culture, surface growth is slow, as well the broth becomes cloudy a little.

4. In einer Gelatinestichkultur erfolgt ein geringfügiges Wachstum in dem oberen Teil, wobei keine Gelalincverfliissigung festzustellen ist.4. In a gelatin stab culture, there will be slight growth in the upper one Part, whereby no gelatin liquefaction can be observed.

C Physiologische EigenschaftenC Physiological properties

'. Optimale Temperatur: 25 bis 30 C. Das Wachsen erfolgt extrem leicht bei 35 C.'. Optimal temperature: 25 to 30 C. Waxing is extremely easy at 35 C.

2. Optimales pH: 5,0 bis 9,0 (kein Wachstum bei einem pH von 4.0).2. Optimal pH: 5.0 to 9.0 (no growth at pH 4.0).

3. Sauerstoffbedarf: Aerob.3. Oxygen demand: aerobic.

4. Lackmusmilch: Nicht verändert oder alkalisch. 4. Litmus milk: Not altered or alkaline.

5. Schwefelwasserstoff: Erzeugt.5. Hydrogen Sulphide: Generated.

6. Indol: Nicht erzeugt.6. Indole: Not generated.

7. Stärke: Nicht zersetzt.7. Starch: Not decomposed.

8. Nitrat wird reduziert.8. Nitrate is reduced.

9. Katalase: Positiv.9. Catalase: Positive.

10. Erzeugung von Ammonium: Negativ.10. Ammonium generation: negative.

11. Voges-Proskauer-Test: Negativ.11. Voges-Proskauer test: negative.

12. Verbrauch von Zuckern: Säure wird aus Glucose, Fructose, Mannose, Rohrzucker, Lactose, Mannit und Sorbit erzeugt.12. Consumption of sugars: Acid is made from glucose, fructose, mannose, cane sugar, Lactose, mannitol and sorbitol are produced.

13. Kohlenwasserstoff assimilierende Eigenschaflen: Assimilieren Propan, n-Butan, N-Dodecan, n-Tridecan, n-Tetradecan, n-Pentadecan, n-Hexadecan und n-Heptadecan. 13. Hydrocarbon assimilating properties: Assimilate propane, n-butane, N-dodecane, n-tridecane, n-tetradecane, n-pentadecane, n-hexadecane and n-heptadecane.

II. Brevibacterium butanicum, ATCC 21196
Λ. Morphologische EigenschaftenII. Brevibacterium butanicum, ATCC 21196
Λ. Morphological properties

1. Form der Mikroorganismen: Gewöhnlich kurze S'äbchen; häufig werden unvoll- *5 ständige S^altungszcllcn und V-artigc Spaltungszellen gebildet, wobei jedoch keine verzweigt.li Stellen festgestellt werden.1. Form of the microorganisms: Usually short rods; often become incomplete * 5 permanent aging cells and V-like cleavage cells formed, but no branched out places are found.

2. Größe: 0,5 -3,0 bis 6,0 μ.2. Size: 0.5-3.0 to 6.0μ.

3. Bevegungsvermögcrt: Nicht beweglich.3. Moving power: not movable.

4. Sporen: Nicht gebildet.4. Spores: Not formed.

5. Flagelium: NichI gebildet. (x ilraniverfärbung: Positiv.5. Flagelium: NichI formed. (x ilraniver staining: positive.

B. ZüchiungscigenschaftenB. Breeding properties

1 In einer Fleischbriihenagarplattenkul;: . übermäßiges Wachstum (kreisförmig, gi..·; vollständig, buckelig, hellbraun, matt ι.-· undurchsichtig).1 In a meat broth agar plate bowl ;:. excessive growth (circular, gi .. ·; complete, humped, light brown, dull ι.- · opaque).

2. In einer Fleischbrühenagarschrägkuitin· übermäßiges Wachstum (stachelig, πι::>■. hellbraun, geruchlos, butlerartig). n.._s Kulturmedium wird nichi verändert.2. In a meat broth agar slant · excessive growth (prickly, πι ::> ■. Light brown, odorless, butler-like). n .. _s culture medium is not changed.

3. In einer Frcischbrü'hekullur erfolgt es Wachstum der Oberfläche häutchenai■■'>.. Die Brühe isi praki\-.ch klar, wobei k;.- ._> Ablagerung festgestellt 'vird.3. In a fresh broth, the surface grows peeled.

4. In efner Gelaimestidikultur verläuft i ,s Wachstum am besten in dem oberen Tu:. wobei keine Gelatincverflüssigung k ·,;-gestellt wird.4. In a first Gelaimestidikultur i , s growth proceeds best in the upper Tu :. no gelatin liquefaction k ·,; - is made.

C. Physiologische EigenschaftenC. Physiological properties

1. Optimale i empera'.uren: 25 bis 30 C. leichtes Wachstum bei 37' C.1. Optimal i empera'.uren: 25 to 30 C. slight growth at 37'C.

2. Optimale-. pH: 6,0 bis 9,0.2. Optimal. pH: 6.0 to 9.0.

3. Sauerstoff ivdarf: Aerob.3. Oxygen must be: aerobic.

5. Schwefelwasserstoff: Erzeugt.5. Hydrogen Sulphide: Generated.

6. Indol: Nicht erzeugt.6. Indole: Not generated.

7. Stärke: Nicht zersetzt.7. Starch: Not decomposed.

8. Nitrat wird reduziert8. Nitrate is reduced

9. Katalase: Positiv.9. Catalase: Positive.

10. Erzeugung von Ammonium: Negativ.10. Ammonium generation: negative.

11. Voges-Proskaucr-Test: NcRitiv.11. Voges-Proskaucr test: NcRitiv.

12. Verbrauch von Zucken: Säure wird aus Glucose. Fructose, Arabinose, Mannose, Rohrzucker. Xylose, Mannit und Sorbit erzeugt12. Consumption of twitching: Acid is made from glucose. Fructose, arabinose, mannose, Cane sugar. Produces xylose, mannitol and sorbitol

13. Kohlenwasserstoff assimilierende Eigenschaften: Assimilieren Propan, n-Butan, n-Dscan, n-Undecan, n-Dodecan, n-Tridecan, n-Tetradecan,n-Pentadecan,n-Hexadecan iiiid n-Heptadecan.13.Hydrocarbon assimilating properties: Assimilate propane, n-butane, n-dscane, n-undecane, n-dodecane, n-tridecane, n-tetradecane, n-pentadecane, n-hexadecane iiiid n-heptadecane.

III. Brevibacterium paraffinolytkum, ATCC 21195 A. Morphologische EigenschaftenIII. Brevibacterium paraffinolytkum, ATCC 21195 A. Morphological properties

1. Form der Mikroorganismen: Stäbe, häufig V-artige Spaltungszellen, wobei jedoch keine verzweigten Zellen gefunden werden.1. Form of the microorganisms: rods, often V-like cleavage cells, whereby however no branched cells are found.

2. Größe: 0,5-2.5 bis 5,0 ja.2. Size: 0.5-2.5 to 5.0 yes.

3. Bewegungsvermögen: Nicht beweglich.3. Movement: Not mobile.

4. Sporen: Nkht gebildet.4. Spores: Nkht formed.

5. Flagelium: Nicht gebildet.5. Flagelium: Not formed.

6. Gramverfärbung: Positiv.6. Gram stain: positive.

I 909I 909

B. /iichtungseigeiischaftenB. / iichtungseigeiischaften

1. In einer Fleischbrühcagarplattenkultui übermäßiges Wachstum (kreisförmig, glatt, vollständig, konvex bis kopfförmig, hellrosa, funkelnd und undurchsichtig).1. In a meat broth agar plate culture excessive growth (circular, smooth, complete, convex to head-shaped, light pink, sparkling and opaque).

2. In einer I leisehbrüheschrägagarkulttir übermäßiges Wachstum ifädchenförmig. funkelnd, gelblich grau, geruchlos, butlerartig). Das Kulturmedium wird mehl scr- '" ändert.2. In an I leisehbrühschlagagarkulttir excessive growth in a twine shape. sparkling, yellowish gray, odorless, butler-like). The culture medium is flour scr- '"changes.

3. In einer Fleischbruhekulfir erfolgt das Wachstum an der Ohcilläche langsam, wobei sich die Brühe mäßig eintrübt.3. This is done in a meat broth Slow growth on the surface of the ear, whereby the broth becomes moderately cloudy.

4. In einer (tdatinestiehkultur erfolgt das Wachstum am oberen Teil leicht, line (ielalmeverllüssigung wird nicht festgestellt. 4. In a (tdatinestiehkultur) this takes place Growth on the upper part slightly, line

C. Physiolog.sche EigenschaftenC. Physiological properties

1. Optimale Temperatur: 25 bis 30 C. Das Wachstum erfolgt sehr leicht bei 35 C.1. Optimal temperature: 25 to 30 C. Growth takes place very easily at 35 C.

2. Optimales pH: 5.0 bis 9.0 (kein Wachstum bei einem pll von 4,0). as2. Optimal pH: 5.0 to 9.0 (no growth with a pll of 4.0). as

3. Sauerstoffbedarf: Aerob.3. Oxygen demand: aerobic.

4. Eackmusinilch: Nicht verändeii oder alkalisch. 4. Eackmusin milk: Not changeable or alkaline.

5. Schwefelwasserstoff: 1 rzeugl.5. Hydrogen sulphide: 1 per liter.

('. liulol: Niehi erzeugt.('. liulol: Niehi generated.

1; Stärke: Nicht zersetzt. 1; Strength: Not decomposed.

S. Nitrat wird reduziert.S. Nitrate is reduced.

'). Kalalasc: P-'siliv. :;;>'). Kalalasc: P-'siliv. : ;;>

Ό. I rzcuüunü *··>η \mmonium: Negativ.Ό. I rzcuüunü * ··> η \ mmonium: negative.

11. Voges-I'rosk.Hier-fest: Negativ.11. Voges-I'rosk. Here-fest: negative.

12. Verhiauch von /uckern: Säure wird aus Glucose. I ruelosc. Rohrzucker. Eactose, ■»"'■ Mannit und Sorbit erzeugt.12. Misappropriation of / uckern: Acid turns out Glucose. I ruelosc. Cane sugar. Eactose, ■ »" '■ Mannitol and sorbitol are produced.

13. kohlenwasserstoff assimilierende Eigenschaften: Assimilieren Propan. n-Butan. n-Undecan. n-Dodecan. n-Tridecan. n-Tctradecan. n-Pentadcean. n-Hcxadecan und <5 n-lleptadecan.13. Hydrocarbon assimilating properties: Assimilate propane. n-butane. n-undecane. n-dodecane. n-tridecane. n-tctradecane. n-Pentadcean. n-hexadecane and <5 n-lleptadecane.

Die taxonomtsche Su-Ilung von Coryncbacierium alkanum, ATCC 21194 ird nach BergcyN Manual of Determinative Uaclcuolog\. 7. Ausgabe, bestimmt, j<; und zwar in Abhängigkeit von den vorstehend erwähnten Eigenschaften. Es gehört zu der Familie Corynebacteriaceae. und /war im Hinblick auf die Stabzellen, die Säureunbeständigkeit, das Fehlen eiiv:r Bildung von Trichomen. die Gramposilivität. das Fehlen einer Vergärung von Zuckern unter aeroben Bedingungen, das Fehlen einer Bildung von Endosporcn und des Bildens einer Zellenverzweigung. In dieser Familie gehört es zu dem Genus Corynebactcrium, da es eine gekrümmte und V-artige Spaltung zeigt, wobei der Katalasetest positiv ist. In diesem Genus kommt Corynebacterium am nächsten Corynebacterium agropyri und Corynebacterium rathayi. wobei jedoch" ein Unterschied von Corynebacterium agropyri hinsichtlich der Größe, der Gramverfärbung ".nd des Wachstums in einer Fleischbriiheschrägagarkultur besteht. Außerdem ist ein Unterschied gegenüber Corynebacterium rathayi hinsichtlich Größe, Wachstum und Gelalineverlliissiginij.' vorhanden. Darüber hinaus liegt ein Unterschied von den vorstehend erwähnten zwei Spezies vor, und /war hinsichtlich der Konsistenz des Schrägagars sowie der Asmmilatioiiseigenschaften für gasförmige und flüssige Kohlenwasserstoffe. Daher kann man von einer neuen Spezies sprechen. Diese Spezies wurde als ( orv. nehacierium alkanum. AICC 21I¹M bezeichnet.The taxonomic definition of Coryncbacierium alkanum, ATCC 21194 is based on BergcyN Manual of Determinative Uaclcuolog \. 7th output, determined, j <; depending on the properties mentioned above. It belongs to the Corynebacteriaceae family. and / was with regard to the rod cells, the acid instability, the lack of egg: r formation of trichomes. the gram-positivity. the lack of fermentation of sugars under aerobic conditions, the lack of formation of endospores and the formation of cell branching. In this family, it belongs to the genus Corynebactcrium because it exhibits a curved and V-like cleavage, the catalase test being positive. In this genus, Corynebacterium comes closest to Corynebacterium agropyri and Corynebacterium rathayi. however, there is "a difference from Corynebacterium agropyri in terms of size, gram discoloration" and growth in a meat broth slant agar culture. There is also a difference from Corynebacterium rathayi with regard to size, growth and gelatinous loss. ' present. In addition, there is a difference from the above-mentioned two species, and / was with regard to the consistency of the agar slant and the asmmilation properties for gaseous and liquid hydrocarbons. Hence one can speak of a new species. This species was named (orv. Nehacierium alkanum. AICC 21I ¹ M.

Die laxonomisclic Stellung \οί Brevibacterium butanicam. ATCC 21 !¹M. wird ^: ι der vorstehend beschriebenen Weise bestimmt. I ~ gehört zu der I ainilio Urevibaeteriaeeae. km\^\ zwar aus folgenden Ciriinden: Vorliegen \on Stäbchen/ollen, Säiireunbesiändigkeit·. keine Bildung von I richomen, (iraniposiii\. keine Bildung von Indosporen und keine Bildung von verzweigten /eilen. In dieser Familie gehört es /i\ dem Genus Bre\ ibacterium. und zwar wegen der nicht verzweigten Stäbchen, die keine Fäden bilden. In diesem Genus kommt es Brevibaclerium miiris. Brevibaeterium fuscum und Brevibaeteiium ammoniagencs (vgl. die folgende Tabelle) am nächsten. Wie jedoch .ms dieser Tabelle hervorgeht, besteht ein Ijiiterschied zu Brevibaeterium maris hinsichtlich Grolle, Farbe und Höhe eier Kolonien, der Erzeugung von Schwefelwasserstoff sowie der Wirkung auf Rohrzucker. I einer besteht ein Unterschied zu Bre\ ibacterium fuseum hinsichtlich Grolle, Farbe und Hüne der Kolonien sowie hinsichtlich eines Wachstums einer Stichkultur sowie einer lleischbrühekultur. Der \ nierschial zu Brevibaeterium ammoniageiies liegt in der Grolle, in '.Irr Hohe sowie in der Farbe der Kolonien sowie feiner in >.Lt Konsistenz, der Kolonien sowie in bezug auf die Assimilationseigenschaflen für gasförmige und llüssige Kohlenwasserstoffe. Daher kann man von einer neuen Spezies sprechen, die als Brevihaetcnum bulanicum. ATCC 21190 bezeichnet worden istThe laxonomisclic position \ οί Brevibacterium butanicam. ATCC 21! ¹ st is ^: ι determined in the manner described above. I ~ belongs to the I ainilio Urevibaeteriaeeae. km \ ^ \ from the following categories: Existence of rods / owls, acid insecurity. no formation of I rich omen, (iraniposiii \. No formation of Indosporen and no formation of branched / rush. In this family, it belongs / i \ the genus Bre \ ibacterium. because of the non-branched rods that form no threads. In Brevibaclerium miiris, Brevibaeterium fuscum and Brevibaeteiium ammoniagencs (see the following table) come closest to this genus the effect on cane sugar. I of a difference to Bre \ ibacterium fuseum respect Grolle, color and giant colonies as well as in terms of a growth of a stab culture and a lleischbrühekultur. the \ nierschial to Brevibaeterium ammoniageiies is the Grolle in '.IRR High and in the color of the colonies and finer in the consistency of the colonies and in terms of their assimilation properties Chaflen for gaseous and liquid hydrocarbons. Hence one can speak of a new species called Brevihaetcnum bulanicum. ATCC 21190 has been designated

Die !axonomische Stellung von Brevi'naeienimi paraflinolyticum. AICC 21195. wird in der vorstehend beschriebenen Weise bestimm;. Is gehört zu der I amilie Brevibacleriaceae. und /ά,ιγ aus folgenden eirunden: Stäbehenzellen. Säureunhesiändigkeil, keine Bildung von Trichomen. Grampositiv, keine Bildung von Endosporen und keine Bildung von verzweigten /eilen. In dieser Familie gehört es zu dem Genus Brev ihaclerium. und /war wegen der nicht verzweigten Stäbchen, die Keine laden bilden. In diesem Genus kommt es Brevibaeterium maris. Bi ev ibacterium fiiscum und Brevibaeterium ammoniagencs am nächsten. Wie aus tier folgenden Tabelle hervorgeht, unterscheidet es sich .on Brevibaeterium maris hinsichtlich Größe, Farbe, Wachstum in einer Fleischbrühenkultur, Wirkung auf Rohizuckcr und Erzeugung von Schwefelwasserstoff. Gegenüber Brevibaeterium fuscum besteht ein Unterschied hinsichtlich Größe und Wachstum in einer Gelatinestichkultur. Darüber hinaus besteht ein Unterschied gegenüber Brevibacterium ammoniagencs hinsichtlich Größe, Farbe sowie Konsistenz der Kolonien und der Assimilationseigenschaften für gasförmige und flüssige Kohlenwasserstoffe. Daher kann man von einer neuen Spezies sprechen. E'iese wurde als Brevibacterium paraffinolyticum, ATCC 21195, bezeichnet. Brevibacterium butanicum, ATCC 2Ι19(ί, und Brevibacterium paraffinolyticum, ATCC 21195, sind voneinander verschiedene Spezies, da sie sich hinsichtlich Farbe, Glanz und Zuckerverbrauch unterscheiden. The axonomic position of Brevi'naeienimi paraflinolyticum. AICC 21195. is provided in the above described manner ;. Is belongs to the I amilie Brevibacleriaceae. and / ά, ιγ from the following round: rod cells. Acid unhesitating wedge, no formation of trichomes. Gram positive, no endospore formation and no formation of branched / rush. In this family it belongs to the genus Brev ihaclerium. and / was because of non-branched rods that do not form any load. In this genus it occurs Brevibaeterium maris. Bi ev ibacterium fiiscum and Brevibaeterium ammoniagencs the next. As can be seen from the table below, it differs from the Brevibaeterium maris with regard to size, color, growth in a broth culture, effect on raw sugar and generation of hydrogen sulfide. There is a difference to Brevibaeterium fuscum regarding size and growth in a gelatin stick culture. There is also a difference against Brevibacterium ammoniagencs in terms of size, color and consistency of the colonies and the assimilation properties for gaseous and liquid hydrocarbons. Hence can to speak of a new species. E'iese was named Brevibacterium paraffinolyticum, ATCC 21195, designated. Brevibacterium butanicum, ATCC 2Ι19 (ί, and Brevibacterium paraffinolyticum, ATCC 21195, are distinct species from each other in that they are differentiate in terms of color, shine and sugar consumption.

409 611 /467409 611/467

GrölteGrowl

l^:arhc u einer F-Icisclihriiheschräeagarkultur l ^: arhc u of a F-Icisclihriiheschräeagar culture

GraniverfärbungGranular discoloration

/utkervfrhrain.li
Glucose
Rohrzucker
Lactose/utkervfrhrain.li
glucose
Cane sugar
Lactose

/ersctzimgsvermögen vom Stärke (lOlatiitestichkultiir/ spare capacity from strength (lOlatiitestichkultiir

l'arlie und Wachstum in einer
Heischbrüheagarplattenkulturl'arlie and growth in one
Meatbrew agar plate culture

1010

Tabelle IlTable Il C iMyik'kiclcniiMiC iMyik'kiclcniiMi ( Ί'Ι VMcil.lClL'nilll!(Ί'Ι VMcil.lClL'nilll! (.'cn viieh.icl(.'cn viieh.icl I !Ii!!1I! Ii !! 1 lalliiiyilalliiiyi .ilkaiiii'm. Λ Κ (21 I'M.ilkaiiii'm. Λ Κ (21 I'M ;ι.·ι·ιιρ; ι. ι ιιρ ν licν lic 0.6 bis 0.75 · 0,750.6 to 0.75 x 0.75 0,5 · 2,5 bis 5.0 μ0.5 x 2.5 to 5.0 µ 0,4 bis ».fi0.4 to ».fi • ().<) • (). <) bis 1,5 i).up to 1.5 i). bis 1,1 μ up to 1.1 μ gelbyellow gelblichgniiiyellowish gniii gelbyellow positivpositive positivpositive wei.hseliulwei.hseliul Säure wird erzeugtAcid is generated Saure wird er/engtAcid he / she becomes narrow Säure wire:Acid wire: erzeugtgenerated Säure wird erzeugtAcid is generated Säure wird erzeugtAcid is generated Säure ivinl erzeugtAcid generated ivinl Säure wird erzeug!Acid is generated! Säure win:Acid win: erzeug!generate! keinesnone schwachweak allmälilich verflüssigtgradually liquefied nicht VLi'lliiv.i-'inot VLi'lliiv.i-'i nicht vcrllinot vcrlli ISSIgiISSIgi nach 7 Wochenafter 7 weeks gelbyellow telblichgraiitelblichgraii gelbyellow langsames Wachstumslow growth mäßiges \V,h ii .nunmoderate \ V, h ii .well langsamslow huiierarliühuiierarliü sehr zähesvery tough V\ ach st umV \ ach st um

Iahelle IIIIahelle III

HlCMh ICICMCIIll jHlCMh ICICMCIIll j

πι:ιιί- Ιπι: ιιί- Ι

Ii' c\ ii\u lei ium
■ΐ!ηηΐι>ηι..:χ·ηυ·.Ii 'c \ ii \ u lei ium
■ ΐ! Ηηΐι> ηι ..: χ · ηυ ·.

Ii' α ih.icleriiiniIi 'α ih.icleriiini

IMi.ill'iiiiilylieniiiIMi.ill'iiiiilylieniii

Λ I ( (' ^l l'isΛ I (('^ l l'is

Hiv\ Γ¹ Hiv \ Γ ¹

till! :till! :

AKiAKi

Heischbrii! e- j
agarplattenK ulturBrii! e- j
agar plates culture

(iclatinestkh- |
kultur i(iclatinestkh- |
culture i

Heisdibrühe- j
kultur IHeisdibrühe- j
culture I

/iickerv erbrauch
Rohrzucker/ iickerv consumption
Cane sugar

LactoseLactose

Schwelelwa..erstell' Schwelelwa..create

0.7 bis O.X ■
1.0 bis 1.2 ·,. orangegelh,
komc\0.7 to OX ■
1.0 to 1.2 · ,. orange-yellow,
komc \

O.d ■ I.O.d ■ I.

hräimlichgelb. '■ uran u
leicht kori>..'\ j .J₁U₁Kyellowish yellow. '■ uran u
slightly kori> .. '\ j .J ₁ U ₁ K

! O.X · 1,4 bis |.7;λ; O.s 2.> bis >.();, ' 0,5 . Λ! OX · 1.4 to | .7; λ; Os 2.> to>. () ;, ' 0.5. Λ

¹ heilrovifarheii. i hellhra ¹ Heilrovifarheii. i hellhra

nicht NerHüssiet I allmählichnot NerHüssiet I gradually

koines biskoines up

^;i'^ult ' k.-.pff.irinig ^{; i} ' ^ult ' k .-. pff.irinig

nicht verllussigt : m. hl verflüssintnot forfeited: m. hl liquefied

hiu keilhiu wedge

nie Ii!never ii!

bildet ein orange; gefärbtes I laut- j eben uno cm ' Sediment, kerne ' Trübungforms an orange; colored I according to- j just uno cm 'sediment, cores' Cloudiness

i keiner | i none |

keinernone

i nicht erzeugt ι i not generated ι

bildet em Ii.mt- ; mähige Trübung das Wachsen
eben. Sediment, m der N.'lic der : der Oberlläche
keine irui·,;:,.!: , Oherlläche ι verläuft hum-forms em Ii.mt-; poor cloudiness growing
even. Sediment, m the N.'lic of: the surface
no irui ·,;:,.!:, Oherllache ι runs hum-

sam. mäl.ligc
1 inli'.ibiuigsam. mäl.ligc
1 inli'.ibiuig

Säure wird
erzeug!
Saure wird
erzeugt
erzeugtAcid will
generate!
Becomes acidic
generated
generated

Säure w ir
erzeugt
Säure > r,.
nicht er/L;
erzeugtAcid w ir
generated
Acid> r ,.
not he / L;
generated

Zur Durchführung der Gärung kann entweder ein synthetisches Kulturmedium oder ein natürliches Nährmedium verwendet werden, sofern es die für das Wachstum des verwendeten Mikroorganismen-Stamms wesentlichen Nährmittel enthält. Derartige Nährmittel sind bekannt. Es handelt sich beispielsweise um Substanzen, wie eine Kohlenstoffqueiie, eine Stickstoffquelle, anorganische Verbindungen od. dgl., wobei diese Substanzen von den eingesetzten Mikroorganismen >n den entsprechenden Mengen verbraucht werden.To carry out the fermentation can either a synthetic culture medium or a natural one Culture medium can be used provided that it is suitable for the growth of the strain of microorganisms used contains essential nutrients. Such Nutrients are known. These are, for example, substances such as a carbon source, a nitrogen source, inorganic compounds or the like. These substances differ from those used Microorganisms> n are consumed in the appropriate quantities.

Die erfindungsgemä'ße Gärung wird in einem wäßrigen Nährmedium durchgeführt, das einen gasförmigen Kohlenwasserstoff oder eine Mischung aus gasförmigen Kohlenwasserstoffen als Hauptkohlenstofiquelle enthält. Von den verwendeten gasförmigen Kohlenwasserstoffen seien Äthan, Propan und Butan erwähnt. Kolilenstoffquellen. die in kleinen Meanen in dem Garungsmedium verwendet werden können. sind beispielsweise flüssige Kohlenwasserstoffe, wie z. U. n-Dodecan, n-Tridecan. n-Tetradecan, n-Pentadecan. n-Hexadecan. n-Heptadecan od. dgl. Kohlehydrate wie beispielsweise Glucose. Fructose, Maltose, Rohrzucker, Stärkehydrolysat, Melassen od.dgl., oder andere geeignete Kohlenstoffquellen, wie beispielsweise Glyzerin, Mannit, Sorbit, organische Sauren od. dgl.The fermentation according to the invention is carried out in an aqueous Nutrient medium carried out, which a gaseous hydrocarbon or a mixture of gaseous hydrocarbons as the main carbon source contains. The gaseous hydrocarbons used are ethane, propane and butane mentioned. Sources of colilants. those in small meanen can be used in the cooking medium. are for example liquid hydrocarbons, such as z. U. n-dodecane, n-tridecane. n-tetradecane, n-pentadecane. n-hexadecane. n-Heptadecane or the like. Carbohydrates such as glucose. Fructose, maltose, Cane sugar, starch hydrolyzate, molasses or the like., Or other suitable carbon sources, such as Glycerine, mannitol, sorbitol, organic acids or the like.

Als Stickstoffquelle kommen verschiedene Arten anorganischer oder organischer Salze oder Verbindungen in Frage, beispielsweise Harnstoff, Ammoniak oder Ammoniumsalze, wie z. B. Ammonhimchlorid, Ammoniumsulfat, Ammoniumnitrat, Ammoniumphosphat od. dgl. Außerdem kann man eine oder mehrere Aminosäuren verwenden. Ferner könnenVarious types of inorganic or organic salts or compounds can be used as the nitrogen source in question, for example urea, ammonia or ammonium salts, such as. B. ammonium chloride, Ammonium sulfate, ammonium nitrate, ammonium phosphate or the like. In addition, one or use multiple amino acids. Furthermore can

natürliche Substanzen, die Stickstoff enthalten, eingesetzt werden, beispielsweise Maisi|iiellwasser, I IcTeextrakt, Fleischextrakt. Fischmehl, l'epton. Fleischbrühe. Kaseinhvdrolvsate. lösliche Fischbeslandteile. Reiskleieextrakl od. dgl. Diese Substanzen können ebenfalls entwe-lei für sich allem oder in Kombination aus zwei oder mehreren Substanzen verwendet werden. Anorganisciie Verbindungen, die dem Kul'urmedium in entsprechenden Mengen zugesetzt werden können, sind beispielsweise Phosphate, ,vie /. if ίο iNal rium phosphat, Dinatri u miniuiolivd rogen phosphat, ftaliumdihvdrogenphospliat. kaliumnumoln drog-juthosphat. Metaliverhindungeii. wie beispielsweise lagnesiiinisulfat. Mangansiilfat. /mksulfat. Kuplerlulfat. I isensulfai oder aiulere liscn.alze. Mangan- ι-, thlorid. Koballehlorid. Nickel· lilorid. ( aleiuniehlotid. Calciumearbonat. Borsäure. N'atriummolvbdat <id. dgl. (is kann ferner notwendig sein, bestimmte Wesentliche Nährmillei dem k'iliurmedium /ii/u-•ct/en. und zwar je nach d'¹'" eingesetzten Mikro- an Organismus, wobei beispiei-weise Ntiiinosäuren. wie t. B. Asparaginsäure. Ί hreonm. Methionin οι! dgl., lind/oder Vitamine, heispielsv ;i .c Biotin, 1 In;mim. kobalamiM od. dgl., erwähnt seien.Natural substances that contain nitrogen are used, for example maize liquor, tea extract, meat extract. Fish meal, l'epton. Meatsoup. Caseinhvdrolvsate. soluble fish besides. Rice bran extract or the like. These substances can also be used either alone or in combination of two or more substances. Inorganic compounds which can be added to the culture medium in appropriate amounts are, for example, phosphates,, vie /. if ίο iNal rium phosphate, Dinatri u miniuiolivd roe phosphate, ftaliumdihvdrogenphospliat. potassium numoles drug jutophosphate. Metal connectioneii. such as, for example, magnesium sulfate. Manganese sulfate. / mksulfate. Copper sulfate. I isensulfai or aiulere liscn.alze. Manganese, chloride. Cobal Chloride. Nickel · liloride. The k'iliurmedium / ii / u • ct / s., And depending upon d ^'1' "micro employed (aleiuniehlotid. Calciumearbonat. Boric acid. N'atriummolvbdat <id. The like. (Is may be also necessary to certain essential Nährmillei .... - hreonm to organism, exampIe-wise Ntiiinosäuren such as aspartic acid t Ί methionine οι like, lind / or vitamins, heispielsv; i .c biotin 1 In; mim kobalamiM or the like, mentioned!.... be.

Das /lichten ivird untei aeroben Bedingungen iiei 2;, einer Zucht ungsiemi>cr.iHir \. ί ungefähr 20 bis JO C und bei einem pH von unuefiihr 4.(1 bis 9.0 durchgeführt. Der verwendete gasförmige Kohlenwasserstoff wird in ga-förmiuem Zustand /ugeluhri. Fr wird nut I 11 Γι oder Sauerstofl vermischt verwendet, tu Heispielsweise seien als verwendete gasförmige Kohlenwasserstoffe \t!ian. Pro|-.an und Butan erwähnt. Die (iaskon/enli.1I1011 tinterhc'.-t keine;! hesondeien Mc schränkungen.The light is under aerobic conditions iiei 2 ;, of a Zuchtungsiemi> cr.iHir \. ί about 20 to JO C and at a pH of about 4. (1 to 9.0 accomplished. The gaseous hydrocarbon used is in a ga-form state / ugeluhri. For use only I 11 Γι or mixed oxygen is used, tu For example, the gaseous hydrocarbons used are \ t! ian. Pro | -.an and butane mentioned. the (iaskon / enli.1I1011 tinterhc' .- t no;! hesondeien Mc restrictions.

Verschiedene (lärungsmelhoden. die bei der Durch- ,i.5 führunu uHichcr Gärungsverfahren unter ' 'Twenduni: von saccharmmaten.ihen oder tlüssigen KohlenwasscrslofTen aK I laiiptkohleiisioffi|uellen angewendet werden, können ausgeübt werden. Beispielsweise kann die (lärungsgeseliw mdmkei; durch Zugabe von kleinen Mengen ,111 ver/v e-m!· eiligen tlüssigen Kohlenwasserstoffen erheblich besi hleuniiit werden, lerner könr-.-n Substanzen, die cmc ähnliche Wirkung besitzen, oder grenzflächenaktive Mittel zur Frhöhung der Auflösungsgeschwindigkeit der gasförmigen KoIi- .(-, lenwasserstoffe 111 dem Kunmmedium zugesetzt werden. Nach Beendigung der Gäning können die Mikroortumismenzellen von der Kulturbrühe nacli üblichen Methoden ahge'rennt wi. ;den.Various (lärungsmelhoden. Those in the through, i.5 leitunu uHichcr fermentation process under '' Twenduni: of saccharified or liquid hydrocarbons aK I laiiptkohleiisioffi | uellen applied can be exercised. For example can the (lärungsgeseliw mdmkei; by adding small amounts of volatile liquid hydrocarbons be considerably accelerated, learner kannr -.- n substances that have cmc similar effect own, or surfactants for enhancement the rate of dissolution of the gaseous coli. (-, lenwasserstoffe 111 are added to the Kunmmedium. After the end of the Gäning, the microortumism cells can nacli from the culture broth usual methods ahge'rennt wi. ;the.

Die folgenden Beispiele dienen der Frläuterimg der Erfindung. Sofern nicht anders angegeben, beziehen sich die Prozentangaben auf Gewichts-/ Volumprozent.The following examples serve to clarify the matter the invention. Unless otherwise stated, the percentages relate to weight / Volume percentage.

BeispieExample

5555

2.7 I eines Kulturmediums, das aus 0.05% KH₂PO₄, 0,05% Na„HPO, · 12 HoO. 0.01% MgSO₁ · 7 H₂O, 0.001% MnSO₄ · 4 H.,0, 0.001% FeSO₁ · 7 Η.,Ο, 0,001% ZnSO₄ · 7 H.'O. 0,001% CaCL · 2 H₂O, lOy/l H₃BO₃. lOy/I "Na₁MoO₄ · 2 H₂O, 5Oy/! CuSO₄ · 5 H₂O, lOy/l CoCl₂ · 2 H,O, 5Oy/! NiCl₂ · 6 FI₂O, 0,05% Maisquell wasser und 0,2% NH₄NO₃ bei einem pH von 7,2 besteht, werden in ein 5-1-G5. rungsgefäß gegeben und sterilisiert.2.7 l of a culture medium consisting of 0.05% KH ₂ PO ₄ , 0.05% Na “HPO, · 12 HoO. 0.01% MgSO ₁ · 7 H ₂ O, 0.001% MnSO ₄ · 4 H., 0, 0.001% FeSO ₁ · 7 Η., Ο, 0.001% ZnSO ₄ · 7 H.'O. 0.001% CaCl · 2H ₂ O, 10y / l H ₃ BO ₃ . 10 y / l "Na ₁ MoO ₄ • 2 H ₂ O.5 Oy /! CuSO ₄ • 5 H ₂ O, 10 y / l CoCl ₂ • 2 H, 0.5 Oy /! NiCl ₂ • 6 FI ₂ O, 0.05 % Corn steeple water and 0.2% NH ₄ NO ₃ at a pH of 7.2 are placed in a 5-1 G5 jar and sterilized.

Nocardia paraffinica, ATCC 21198, wird zuvor 6g unter Schütteln in einem Kulturmedium gezüchtet, das 0,25% Hefeextrakt, 0,5 % Fleischextrakt, 0,5% Pepton. 0,25% Natriumchlorid und 2,0% Sorbit enthält. Das pH dieses Mediums betrügt 7.2. wobei das Züchter 24 Stunden lang durchgeführt wird. Diese Bakterien werden auf das erste Kulturmedium in einer Menge von 10'V₁₁ aufgeiinpfl und bei 30 C unter Rühren (ungefähr 600 Upm) gezüchtet. Dabei erfolgt eine Belüftung mit I l/l pro Minute eines gemischten Gases (die Konzentralion an n-Bulan in Luft beträgt 1.3",',,) während einer Zeitspanne von 72 Stunden. Das pH wird während ties /üehiens durch Zugabe vmii Ammoniakwasser auf einem Weil von 7.2 gehallen.Nocardia paraffinica, ATCC 21198, is previously grown for 6 g with shaking in a culture medium containing 0.25% yeast extract, 0.5% meat extract, 0.5% peptone. Contains 0.25% sodium chloride and 2.0% sorbitol. The pH of this medium is 7.2. the breeding being carried out for 24 hours. These bacteria are aufgeiinpfl to the first culture medium in an amount of 10'V ₁₁ and (about 600 rpm) grown at 30 C with stirring. Aeration of a mixed gas at 1 l / l per minute (the concentration of n-Bulan in air is 1.3 ",") takes place over a period of 72 hours. The pH is increased during this period by adding a small amount of ammonia water because of 7.2.

Nach Beendigung des Züchten-. beträgt die angewachsene Menge des Bakteriums 10 mg in Form von getrockneten Zellen pro ml des Mediums. 30 g der Zellen werden nach einem Abzentrifiigieren. Waschen mit Wasser und Trocknen erhalten.After finishing the breeding. is the increased Amount of the bacterium 10 mg in the form of dried cells per ml of the medium. 30 g of the cells are centrifuged off. Wash with water and dry.

Example 2

Noeardia butamca. A'ICC I2I')7. wird in der gleichen Weise wie im Beispiel I beschrieben gezüchtet, wobei nut einem gemischten Gas (die Konzentration des Propans 111 der luft beträgt 1,5" „1 während einer Zeitspanne von 72 Stunden belüftet wird, mit der \usiiahme. dall Propan als KohlenstofTc]iielle v,.wendet wird. Nach Beendigung des Züehtens heu.'gt die angewachsene Menge des lUikteriums in lomi von getrockneten /eilen IO mg ml des Mediums.Noeardia butamca. A'ICC I2I ') 7. is in the cultured in the same manner as described in Example I, using a mixed gas (the concentration the propane 111 in the air is 1.5 "" 1 ventilated for a period of 72 hours, with the \ usiiahme. that propane is an essential component of carbon v,. is used. After the cultivation has ended, the increased amount of urinary tract increases in lomi of dried / rush IO mg ml of the medium.

Example 3

Nocardia paraflinica. \ l'CC 211¹W. wird nach der im Beispiel 2 besehi iebencn Arbeitsweise gezüchtet, nut der Ausnahme, dall eine hohe Konzentralion an η-Butan als Kohlenstoffquelle verwende; wird. I'liter Verwendung eines gemischten Gases wird belüftet (die Konzentration an u-Butan in I ai'i beträgt 20"..I. N,ich 72siundigem /lichten werden 25 mg der getrockneten Zellen ml des Mv,hums erhalten.Nocardia paraflinica. \ l'CC 211 ¹ W. is grown according to the procedure described in Example 2, with the exception that a high concentration of η-butane is used as the carbon source; will. I liter using a mixed gas is ventilated (the concentration of u-butane in I ai'i is 20 ".. I. N, I 72 seconds / light, 25 mg of the dried cells ml of the Mv, hums are obtained.

Example 4

Brev ibactermm paraflinolvtieuni, ATCC 2Ί195. wird nach der im Beispiel 3 bjschriebenen Arbeitsweise gezüchtet, wobei ein Kuhurmodium verwendet wird, da- aus 0.05",, KII,PO₁. 0.05" „ NiUIPO, Ί2 ILO. 0.01 " „ MijSO, ■ 7 H ,(). I)_-(K)I "'„ MnSf I₁ . 4 1LÖ. 0.001",, IeSO₁ · 7 ILO. 0.001% ZnSO, 7 H.'O. 0.001",,'Cad.. · 2 ILO. 10;· I II₁BO₁. 10; ! Na-MO₁ · 2 ILO. 50;· I CuSO, · 5 ILO. 10;! CoCL. ■ 2 ILO/50-/ I NiCI,, · (S II..O. 0.05",, Maisflüssigkeit und 0,2% (NMjI_-1SOi besteht, mit der Ausnahme, daß ein gemischtes Gas mit einer SO'V^iger Butankonzenlration in Luft zur Belüftung verwende! wird. Nach 96stünüigem Züchten werden 4 mg dei getrockneten Zellen/ml des Mediums erhalten.Brev ibactermm paraflinolvtieuni, ATCC 2-195. is bred according to the procedure described in Example 3, using a Kuhurmodium, from which 0.05 ", KII, PO _1. 0.05""NiUIPO, Ί2 ILO. 0.01 "" MijSO, ■ 7 H, (). I) _- (K) I "'" MnSf I ₁ . 4 1LÖ. 0.001 ",, IeSO ₁ · 7 ILO. 0.001% ZnSO, 7 H.'O. 0.001" ,, 'Cad .. · 2 ILO. 10; · I II ₁ BO ₁ . 10; ! Na-MO ₁ x 2 ILO. 50; I CuSO, 5 ILO. 10 ;! CoCL. ■ 2 ILO / 50- / I NiCI ,, · (S II..O. 0.05 ",, corn liquor and 0.2% (NMjI _-1 SOi, with the exception that a mixed gas with a SO'V ^ Use a concentrated butane concentration in air for ventilation. After 96 hours of cultivation, 4 mg of the dried cells / ml of the medium are obtained.

Example 5

Brevibacterium butanicum, ATCC 21196, wire nach der im Beispiel 4 beschriebenen Arbeitsweisi gezüchtet. Nach 96stündigem Züchten werden 5 mj der getrockneten Zellen/ml des Mediums erhaltenBrevibacterium butanicum, ATCC 21196, wire according to the procedure described in Example 4 bred. After 96 hours of cultivation, 5 ml of the dried cells / ml of the medium are obtained

Example 6

Corynebacterium alkanum, ATCC 21194, win nach der im Beispiel 4 beschriebenen Arbeitsweis gezüchtet. Nach einem 96stündigen Züchten werdei 3 mg der getrockneten Zellen/ml des Medium erhalten.Corynebacterium alkanum, ATCC 21194, win grown according to the procedure described in Example 4. After 96 hours of growing 3 mg of the dried cells / ml of the medium are obtained.

39033903

IU- i s ρ i e I 7IU- i s ρ i e I 7

Is wurde ein Vergleichsverstieh durchgeführt, wobei Yiicrococcus ceriiicans. ATCC I49K7, gemiill tier britischen Patentschrift I 002 K16 verwendet wurde. Dieser Mikroorganismus wurde ,laiallcl /u crlmdungsgcmüften Mikroorganismen ge/üelitct. «<>bei zwei gasförmige Kohlenwasserstuffe, und zwar Propan und Butan, als Kohlenstoffciuclle verwendet wurden. Während die /eilen der erlindungsgemäl.len Mikroorganismen in der K ulturbriihe in der in den Heispielen gezeigten Weise angereichert wurde, vermochte eier Mikroorganismus Mierococcus cerilicans ATCt 14987 Propan und Bulan nicht /u assimilieren, so dal.) keine /eilen erhallen wurden.A comparison was carried out, being Yiicrococcus ceriiicans. ATCC I49K7, gemiill tier British patent I 002 K16 used would. This microorganism was, laiallcl / u Informative smells of microorganisms affected. «<> At two gaseous hydrocarbons, namely propane and butane, are used as carbon cylces became. While the / rush of the inventions Microorganisms in the culture broth was enriched in the manner shown in the examples eggs microorganism Mierococcus cerilicans ATCt 14987 propane and bulan do not / u assimilate, so there.) no / rush were received.

Daraus ist zu ersehen, dall bei der Durchführung lies erlindungsgcmäüen Verfahrens beliebige gasförmige Kohlenwasserstoffe als Kohlcnsloffquellc einiiesel/l werden können. Man braucht daher erlin-From this it can be seen that any gaseous form can be used when carrying out the process Hydrocarbons as a source of carbon dioxide can be. One therefore needs to learn

dtingsgemäü im gasförmige KoIi treffen.dtingsgemäü im meet gaseous koIi.

Hinblick auf die jeweils verwendete lenstoffqucllc keinerlei Auswahl zuNo selection is made with regard to the respective used lenstoffqucllc

Claims

Claim:

Process for the production of Microorganism cells in an aqueous medium in the usual pH and temperature conditions in the presence of at least one gaseous hydrocarbon, such as ethane, propane or n-human, as the main carbon source and isolation and extraction of the so ore microorganisms characterized as microorganisms Noeardia paraffinica ATCC 21198. Nocardia paraffinica ATCC 211 ¹ J ". Nocardia butanica ATCC 21197. Brevibrcterkim paraffinolyticum ATCC 21195, Brevibacterium butanicum ATCC 21196 oct Coryncbactcrium alkanum ATCC 21194.