DE1773841B1 - Process for preparing, preserving and transporting blood and serum samples - Google Patents

Process for preparing, preserving and transporting blood and serum samples

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Description

Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Vorbereitung, Konservierung und zum Transport von Blut- und Serumproben zur Bestimmung der Inhaltsstoffe, vorzugsweise der Lipide und der Glukose, bei dem man eine abgemessene Menge der zu untersuchenden Flüssigkeit auf einen 5augfähigen Träger aufträgt, trocknet und erst unmittelbar vor der Untersuchung eluiert. The present invention relates to a method for preparing Preservation and transport of blood and serum samples to determine the ingredients, preferably the lipids and glucose, in which a measured amount of the the liquid to be examined applies to an absorbent carrier, dries and only eluted immediately before the examination.

Der qualitative Nachweis und die quantitative Bestimmung von Bestandteilen oder Inhaltsstoffen des Blutes oder Serums haben für die medizinische Diagnostik in den letzten Jahren zunehmend an Bedeutung gewonnen. The qualitative detection and the quantitative determination of components or ingredients of the blood or serum have for medical diagnosis has become increasingly important in recent years.

Insbesondere die Untersuchung von Blutproben stieß bisher auf Schwierigkeiten. da sowohl durch den Transport der Proben zum Laboratorium als auch durch die gelegentlich unvermeidbare Lagerung die Untersuchungsergebnisse verfälscht wurden. Da Triglyceride nur im Serum und nicht im Blut bestimmt werden konnten, war außer der umständlichen und unangenehmen Venenpunktion die Abtrenn ung des Serums notwendig. Weiterhin war es nötig, die Proben für den Transport in bruchsicheren und sterilen Behältnissen zu verpacken. The examination of blood samples in particular has so far encountered difficulties. as both by the transport of the samples to the laboratory and by the occasional unavoidable storage the test results were falsified. Because triglycerides could only be determined in the serum and not in the blood, was beyond the cumbersome and unpleasant venipuncture, the separation of the serum is necessary. Furthermore was it is necessary to keep the samples for transport in unbreakable and sterile containers to wrap.

Es ist zwar bekannt, Blutproben zur Glukosebestimmung auf Filterpapier zu bringen und zu trocknen: da jedoch die Blutglukosewerte bei diesen Proben bereits innerhalb von 2 Stunden signifikant abnehmen, hat es sich als notwendig erwiesen. die Proben in einer umständlichen und zeitraubenden Prozedur mit Formaldehyddampf zu stabilisieren (vgl. Am. J. Clin. Pat. 45 [1966], S. 297). Durch die Einwirkung des Formaldehyds wird außerdem die Elution der an sich leicht löslichen Glukose so erschwert, daß vor der Bestimmung mindestens 20 Minuten eluiert werden muß. It is known to take blood samples for glucose determination on filter paper to bring and to dry: however, there the blood glucose values in these samples already decrease significantly within 2 hours, it has been shown to be necessary. the samples in a laborious and time-consuming procedure with formaldehyde vapor to stabilize (cf. Am. J. Clin. Pat. 45 [1966], p. 297). By the action of the formaldehyde is also the elution of the easily soluble glucose so difficult that it has to elute for at least 20 minutes before the determination.

Es wurde nun überraschenderweise gefunden. daß sich eine nachträgliche Stabilisierung von Blutproben zum Zweck der Bestimmung der Inhaltsstoffe erübrigt, wenn man einen saugfähigen Träger mit ionenaustauschenden Eigenschaften verwendet. It has now surprisingly been found. that there is a subsequent Stabilization of blood samples for the purpose of determining the ingredients is unnecessary, when using an absorbent carrier with ion exchange properties.

Das erfindungsgemäße Verfahren ermöglicht überraschenderweise auch, Lipide, z. B. Triglyceride im Blut zu bestimmen. Da sämtliche Trennoperationen, die für die Serumgewinnung notwendig sind, wegfallen, läßt sich die zur Bestimmung benötigte Menge Blut von 0,5 ml auf 0,05 ml reduzieren. Bedeutsam ist dies insbesondere auch für Reihenuntersuchungen, da die geringe Blutmenge als Kapillarblut entnommen werden kann und nicht mehr durch Venenpunktion gewonnen werden muß. Ein weiterer Vorteil des erfindungsgemäßen Verfahrens besteht darin, daß von kleinen Laboratoriumstieren in Reihentests unbe- schadet mehrere Blutproben entnommen werden können, wodurch die Treffsicherheit der Ergebnisse erheblich gesteigert wird. The method according to the invention surprisingly also enables Lipids, e.g. B. To determine triglycerides in the blood. Since all separation operations, which are necessary for obtaining the serum are omitted, the determination can be done Reduce the required amount of blood from 0.5 ml to 0.05 ml. This is particularly important also for screening, as the small amount of blood is taken as capillary blood and no longer has to be obtained by venipuncture. Another The advantage of the method according to the invention is that of small laboratory animals unsatisfied in series tests multiple blood samples can be drawn, thereby causing harm the accuracy of the results is significantly increased.

Die nach dem erfindungsgemä#en Verfahren vorbereiteten und getrockneten Proben können auf einfache Weise im Briefumschlag versandt werden und gestatten es trotzdem, quantitative Bestimmungen mit großer methodischer Genauigkeit auch noch lange Zeit nach der Blutentnahme durchzuführen. The prepared and dried by the method according to the invention Samples can easily be sent in an envelope it anyway, quantitative determinations with great methodical accuracy too to be carried out a long time after the blood sample has been taken.

Sowohl bei Proben für r d ie die Glukosebestinimung als auch bei solchen für die Triglyceridbestimmung wurde in jeweils 25 Ansätzen gegenüber den unbehandelten Proben ein Korrelationskoffizient nach P e a r s o n on r = 099 0,99 ermittelt. Both with samples for the glucose determination and with those for the triglyceride determination was in each case 25 batches compared to the untreated samples had a correlation coefficient according to P e a r s o n on r = 099 0.99 determined.

Als saugfähige Träger mit ionenaustauschelIdel: Eigenschaften verwendet man vorzugsweise fonenaustauscherpapiere. Als lonenaustauscherpapiere kommen je nach Art der nachzuweisenden Blut- oder Serum bestandteile sowohl Kationenaustauscher als auch Anionenaustauscher in Frage. Glukose wird vorzugsweise im schwach sauren Bereich stabilisiert, wobei zu niedrige pH-Bereiche ZU vermeiden sind, da sonst Glukose aus der Zellulose des papiers abgespalten wird un d dann zu hohe Glukosegehalte vorgetäuscht werden. Used as an absorbent carrier with ion exchange properties it is preferable to use phone exchange papers. The ion exchange papers each come Depending on the type of blood or serum to be detected, both cation exchanger components as well as anion exchangers. Glucose is preferably in the weakly acidic Stabilized range, avoiding pH ranges that are too low, otherwise Glucose is split off from the cellulose of the paper and the glucose content is then too high be faked.

Da Triglyceride im Verlauf enzymatischer Untersuchungen alkalisch verseift werden erweisen sich zur Vorbereitung und Stabilisierung derartiger Proben insbesondere Anionenaustauscherpapiere als geeignet. Since triglycerides are alkaline in the course of enzymatic studies Saponifications prove to be useful in preparing and stabilizing such samples anion exchange papers are particularly suitable.

Selbstverständlich ist es möglich an Stelle von Filterpapier die verschiedensten saugfähigen Träger, wie gepreßte Zellulose. hydrophile Kunststoffe oder Textilgewebe, Dochte oder auf geeigneten Unterlagen mittels Haftstoffen (beispielsweise Leimzusatzl fixierte, organische oder anorganische Pulver- oder Granulatschichten mit ionenaustauschenden Eigenschaften zu verwenden, wobei es gleichgültig ist, ob die ionenaustauschenden Eigenschaften auf der Molekularstruktur des saugfähigen Trägers beruhen oder dem Träger erst durch nachträgliche imprägnierung verliehen werden. It is of course possible to use the filter paper instead of the various absorbent carriers, such as pressed cellulose. hydrophilic plastics or textile fabrics, wicks or on suitable substrates by means of adhesives (for example Glue additive fixed, organic or inorganic powder or granulate layers with ion-exchanging properties to be used, regardless of whether the ion exchange properties on the molecular structure of the absorbent Carrier based or given to the carrier by subsequent impregnation will.

Wenn nach dem erfindun gsgemä#en Verfahren Blut untersucht werden soll. ist zu berücksichtigen da# die Ergebnisse auf Grund des zellulären Anteils um etwa 30% niedriger liegen als die unter Verwendung von Serum gewonnenen Werte: es ist jedoch nicht schwierig. den für die jeweilige Bestimmung maßgebenden Korrekturfaktor an Hand von Vergleichsversuchen zu bestimmen. When blood are examined according to the method according to the invention target. must be taken into account that # the results are based on the cellular proportion are about 30% lower than the values obtained using serum: however, it is not difficult. the correction factor relevant for the respective determination to be determined on the basis of comparative tests.

In den folgenden Beispielen sind typische und bevorzugte ausführungsformen des erfindungsgemä#en Verfahrens beschrieben. The following examples are typical and preferred embodiments of the method according to the invention.

Tabelle I Hexokinase-Methode GOD POD-Methode Glukose in Minuten nach Glukose in Minuten nach Glu- enteiwei#ter Glukose in Glukose- enteiwei#ter Glukose in kose-Applikation Blutprobe Papiereluat Applikation Blutprobe Papiereluat [mg%] [mg%] [mg%] [mg%] 0 131 132 0 131 135 30 328 308 30 336 333 60 220 219 60 204 216 120 130 124 120 115 120 Beispiel 1 Reihenuntersuchung des Blutglukosegehalts beim Kaninchen (unter zusätzlicher Glukosebelastung) Kationenaustauscherpapier wird in quadratische Stücke von 3 cm Kantenlänge zerschnitten.Table I. Hexokinase method GOD POD method Glucose in minutes after glucose in Minutes after protein glucose in glucose protein in kose application blood sample paper eluate application blood sample paper eluate [mg%] [mg%] [mg%] [mg%] 0 131 132 0 131 135 30 328 308 30 336 333 60 220 219 60 204 216 120 130 124 120 115 120 EXAMPLE 1 Serial examination of the blood glucose content in rabbits (with additional glucose exposure) Cation exchange paper is cut into square pieces with an edge length of 3 cm.

Einem unter Glukosebelastung stehenden Kaninchen (1 g Glukose/kg Gewicht) werden während 2 Stunden im Abstand von 30 bzw. 60 Minuten jeweils vier Blutproben zu 0,1 ml entnommen. Zwei dieser Proben werden sofort auf die vorbereiteten Ionenaustauscherpapiere aufgetragen, während mit den beiden anderen je eine herkömmliche Bestimmung nach der Hexokinase/G-6-PDH-und GOD/POD-Methode durchgeführt wird. Die präparierten Papierstücke werden schließlich nach dem Trocknen in je 2 ml 0,33 n-Perchlorsäure 15 Minuten eluiert, worauf das dekantierte und zentrifugierte Eluat ebenfalls nach der Hexokinase/G-6-PDH-und GOD/POD-Methode untersucht wird. Für sämtliche Bestimmungsmethoden werden gut übereinstimmende Werte gefunden (vgl. A rabbit exposed to glucose (1 g glucose / kg Weight) become four over a period of 2 hours at intervals of 30 or 60 minutes 0.1 ml blood samples taken. Two of these samples are immediately prepared on the Ion exchange papers applied, while with the other two each a conventional one Determination according to the hexokinase / G-6-PDH and GOD / POD method is carried out. the Prepared pieces of paper are finally dried in 2 ml of 0.33 n-perchloric acid each Eluted 15 minutes, whereupon the decanted and centrifuged eluate also after the hexokinase / G-6-PDH and GOD / POD method is examined. For all determination methods well-matching values are found (cf.

Tabelle I).Table I).

Kontrolluntersuchungen an Blutproben auf Ionenaustauscherpapier zeigten nach 2 Monaten Lagerung, daß sich der Glukosegehalt nicht meßbar verändert hat. Control examinations on blood samples on ion exchange paper showed after 2 months of storage that the glucose content has not changed measurably.

Beispiel 2 Triglyceridbestimmung in Kaninchenblut Kationenaustauscherpapier wird in quadratische Stücke von 3 cm Kantenlänge zerschnitten. Nach dem Aufbringen von jeweils 0,1 ml Blut und Trocknen werden die einzelnen Proben in einem Gemisch von 0,1 ml 0, 9°/Oiger Kochsalzlösung und 0,5 ml 0,Snormaler äthanolischer Kalilauge bei 70"C 1 Stunde im geschlossenen Schliffröhrchen hydrolysiert. Die Bestimmung der Triglyceride erfolgt anschließend und wird nach der Methode der enzymatischen Neutralfettbestimmung durchgeführt (vgl. F. H. Example 2 Triglyceride determination in rabbit blood, cation exchange paper is cut into square pieces with an edge length of 3 cm. After applying of 0.1 ml of blood and drying, the individual samples are in a mixture 0.1 ml 0.9% saline solution and 0.5 ml 0, normal ethanolic potassium hydroxide solution Hydrolyzed at 70 "C for 1 hour in a closed ground tube. The determination The triglyceride is then made and is made according to the enzymatic method Neutral fat determination carried out (see F. H.

5 eh m i d t, Z. Klin. Chem. u. Klin. Biochem., 6 [1968], S. 156). Die Werte für das Papiereluat werden mit dem empirischen Faktor 1,515 multipliziert, damit man sie mit den Werten für Serum vergleichen kann.5 eh m i d t, Z. Klin. Chem. And Klin. Biochem., 6 [1968], p. 156). The values for the paper eluate are multiplied by the empirical factor 1.515, so that they can be compared with the values for serum.

Die Ergebnisse sind in Tabelle II zusammengestellt: Tabelle II Papiereluat x Serum Papiereluat % Dif- 1,515 (Vergleich) mg V0 mg O/, mg 0/, ferenz 333 504 485 31 85 129 134 36 107 162 164 35 124 188 192 35 513 776 805 36 135 204 205 34 143 217 208 31 Patentansprüche: 1. Verfahren zur Vorbereitung, Konservierung und zum Transport von Blut- und Serumproben zur Bestimmung der Inhaltsstoffe, bei dem man eine abgemessene Menge der zu untersuchenden Flüssigkeit auf einen saugfähigen Träger aufträgt, trocknet und erst unmittelbar vor der Untersuchung eluiert, dadurch gekennzeichn e t, daß man einen saugfähigen Träger mit ionenaustauschenden Eigenschaften verwendet.The results are summarized in Table II: Table II Paper eluate x serum Paper Eluate% Dif- 1.515 (comparison) mg V0 mg O /, mg 0 /, ferenz 333 504 485 31 85 129 134 36 107 162 164 35 124 188 192 35 513 776 805 36 135 204 205 34 143 217 208 31 Claims: 1. A method for preparing, preserving and transporting blood and serum samples to determine the ingredients, in which a measured amount of the liquid to be examined is applied to an absorbent carrier, dried and only eluted immediately before the examination, thereby marked that one uses an absorbent carrier with ion-exchange properties.

Claims (1)

2. Verfahren gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man zur Bestimmung von Glukose in Blut schwach saures Kationenaustauscherpapier verwendet. 2. The method according to claim 1, characterized in that one for Determination of glucose in blood uses weakly acidic cation exchange paper. 3. Verfahren gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man zur Bestimmung von Lipiden in Blut Anionenaustauscherpapier verwendet. 3. The method according to claim 1, characterized in that one for Determination of lipids in blood used anion exchange paper.
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