DE1673331A1

DE1673331A1 - Device and method for determining an increase in activity in monoesterase

Info

Publication number: DE1673331A1
Application number: DE19671673331
Authority: DE
Inventors: Foster Raymond O
Original assignee: WESTON LAB Inc
Current assignee: WESTON LAB Inc
Priority date: 1967-01-25
Filing date: 1967-11-29
Publication date: 1971-05-06
Also published as: GB1203619A; FR1548750A; JPS4942950B1; BE707187A; NL6716251A

Description

zu der Patentanmeldungto the patent application

WESTOK MBORATORIES IRO., Hitt and Swanson Streets, OTTAWA, Illinois, U.S.A.WESTOK MBORATORIES IRO., Hitt and Swanson Streets, OTTAWA, Illinois, U.S.A.

betreffendconcerning

"Einrichtung und Verfahren zur Bestimmung einer"Establishment and procedure for determining a

Aktivitätszunahme bei Monoesterase"Activity increase in monoesterase "

Die Erfindung bezieht sich auf ein analytisches Teetverfahren und die zugehörige Einrichtung zur Bestimmung einer Aktivitätszunahrae bei gewissen Enzymen, die gleichlaufend iot mit der fruchtbaren Periode der ITrau.The invention relates to an analytical Teet method and the associated device for Determination of an increase in activity for certain enzymes that are concurrent with the fertile one Period of ITrau.

Ceit jeher bestand ein großes Interesse daran, den Zeitabschnitt während dessen die Frau·fruchtbar, d. h. fähig int, Nachkommenschaft zu empfangen, vor-There has always been a great interest in the period during which the woman is · fertile, d. H. able int to receive progeny, pre-

109819/0318109819/0318

auszusagen und festzustellen. Dieser empfängnisfähige Zeitabschnitt besteht während der Gvulation, wenn das Ei das Ovarium verlassen hat und in einer Stellung, in der es befruchtet werden kann noch lebensfähig ist.to testify and determine. This fertile one Period of time exists during evulation, when the egg has left the ovary and in one Position in which it can be fertilized is still viable.

I¹Ur alle, einerlei ob sie die fruchtbare Periode ausnützen oder sie vermeiden wollen, ist es selbstverständlich wichtig, diesen Zeitabschnitt vorhersagen und bestimmen zu können. Allerdings weisen die für eine derartige Vorhersage und Bestimmung bisher verfügbaren Methoden und Mittel weder den wünschenswerten Grad an Bequemlichkeit noch an Sicherheit auf. Versuche, den fraglichen Zeitabschnitt unter Bezugnahme auf den Eintritt der Menses zu berechnen sind spekulativ und mit einem ünsicherheitsfaktor belastet, da der weibliche Organismus beispielsweise beim Menschen zu den verschiedensten und nicht vorhersehbaren Zeiten in die Ovulation eintritt. Aber auch mechanische Methoden, wie die Bestimmung und Aufzeichnung der Körpertemperatur sind, v/enn auch vielleicht genauer, ausges-prochen umständlich und verlangen eine-beträchtliche Geschicklichkeit in der Beobachtung und Auswertung der Daten.I ¹ All, regardless of whether you want to take advantage of the fertile period or avoid it, it is of course important to be able to predict and determine this period. However, the methods and means hitherto available for such a prediction and determination have neither the desirable degree of convenience nor of security. Attempts to calculate the time period in question with reference to the onset of the menses are speculative and burdened with an uncertainty factor, since the female organism, for example in humans, ovulates at very different and unpredictable times. But also mechanical methods, such as the determination and recording of body temperature, are perhaps more precise, extremely cumbersome and require considerable skill in the observation and evaluation of the data.

Es hat sich gezeigt, daß gewisse im Speichel (oder in anderen Körpersekretionen, z. B. im HaIs-It has been shown that certain secretions in saliva (or in other body secretions, e.g. in the neck

109819/0318 _ ₃ _109819/0318 _ ₃ _

und Raehenschleim) auftretende Enzyme während des ersten Teiles der fruchtbaren Periode der Frau und zur Zeit der Ovulation ihre Konzentration ändern. Von besonderem Interesse unter diesen Enzymen sind die alkalische Phosphatase, die Monoesterase und saure Phosphatase,enzymes occurring during the first part of a woman's fertile period and change their concentration at the time of ovulation. Of particular interest among these enzymes are alkaline phosphatase, monoesterase and acid phosphatase,

Erfindungsgemäß ist eine Testeinriehtung vorge- M According to the invention a Testeinriehtung superiors M

sehen, die sich verwenden läßt zur Feststellung einer iLktivitätszunahme bei der Monoesterase, die gleichlaufend ist mit der fruchtbaren Periode der Frau. Die Einrichtung besteht in einem saugfähigen Material, das imprägniert ist mit einen nichttoxischen Puffer, v/elcher den pH-¥ert im alkalischen Bereich zwischen etwa 7,o und etwa 9,ο hält, und einem Indikator der allgemeinen Formel R-O-X, worin R ein organisches Radikal bedeutet, das bei Sprengung der Esterbindungsee which can be used to determine a Increase in activity in monoesterase, which is concurrent is with the woman's fertile period. The device consists of an absorbent material, that is impregnated with a non-toxic buffer, v / which keeps the pH ¥ ert in the alkaline range between about 7, o and about 9, o, and an indicator of the general formula R-O-X, in which R denotes an organic radical which is released when the ester bond is broken

Monoesterase JMonoesterase J.

durch die erwähnte l eine Yer- ^by the mentioned l a yer- ^

bindung mit einer leicht erkennbaren Färbung bildet oder entwickelt und X ein Acetat-, Propionat-, Butyratöder Phosphatrest ist.forms or develops a bond with an easily recognizable color, and X forms an acetate, propionate or butyrate bait Phosphate residue is.

Ferner umfaßt die Erfindung ein Verfahren zur Bestimmung der fruchtbaren Periode der Frau durch Nachweis der Anwesenheit von Monoesterase, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man eine gewisse Menge desThe invention further comprises a method for determining the fertile period of women Evidence of the presence of monoesterase, which thereby is characterized by having a certain amount of the

109819/^31« - 4 -109819 / ^ 31 «- 4 -

Speichels der "betreffenden Frau mit der oben beschriebenen !Testeinrichtung in Verbindung bringt. Die ■ Testeinrichtung (z. B. das Testpapier) zeigt einen !Farbumschlag während der Zeit der Ovulation und der Fruchtbarkeit der Frau, während sie zu anderen Zeiten keine Farbänderung erleidet.Saliva of the "woman concerned with the one described above ! Bringing test facility in connection. The ■ test device (eg the test paper) shows a color change during the time of ovulation and the fertility of the woman while at other times she does not undergo any color change.

Als Indikator kann zwar grundsätzlich jede beliebige physiologisch akzeptable organische Verbindung der oben erwähnten allgemeinen Formel, soweit sie die entsprechenden Eigenschaften aufweist, verwendet werden, es wurde jedoch gefunden, daß Indikatoren, bei denen X den Essigsäurerest bedeutet und R für Indoxyl, 5-Bromindoxyl, Phenolphthalein oder 3-O-Methyl-Fluorescein steht, besonders vorteilhaft sind.In principle, any physiologically acceptable organic compound can be used as an indicator the above-mentioned general formula, insofar as it has the appropriate properties, can be used, but it has been found that indicators in which X represents the acetic acid residue and R for indoxyl, 5-bromoindoxyl, phenolphthalein or 3-O-methyl-fluorescein is particularly advantageous are.

Die Sprengung der Esterbindung in den erwähnten Indoxylverbindungen gibt das (gegebenenfalls substituierte) Indoxylradikal frei und in Anwesenheit von Sauerstoff oder Luft kombinieren sich zwei Indoxylradikale zu Indigo bzw. zu einem substituierten Indigo, der einen dunkelblauen Farbstoff darstellt. Diese · Reaktion verläuft normalerweise in sehr kurzer Zeit, etwa in 3o Sekunden bis ungefähr 2 Minuten. Die Farbtiefe der gebildeten Blaufärbung hängt von der MengeThe breaking of the ester bond in the indoxyl compounds mentioned gives the (optionally substituted) Free of indoxyl radicals and in the presence of oxygen or air, two indoxyl radicals combine to indigo or to a substituted indigo, which is a dark blue dye. These · Reaction usually takes a very short time, from about 30 seconds to about 2 minutes. The color depth the blue color formed depends on the amount

109819/0318 - 5 -109819/0318 - 5 -

_ 5 —_ 5 -

der anwesenden Monoesterase ab.of the present monoesterase.

Wenn als Indikator eine gegebenenfalls substituierte Phenolphthaleinacetatverbindung verwendet wird, wird bei der Sprengung der Esterbindung ein Phenolphthaieinradikal frei, das eine matte Rotfärbung entwickelt, wenn der !Teststreifen in eine lösung mit einem pH-Wert von etwa 8,3 bis 1o,o getaucht wird. Bei der Sprengung des Pluoresceinesters wird ein gegebenenfalls substituiertes Fluorescein frei, das gelb ist. In allen Fällen ist die entwickelte erkennbare Farbe prinzipiell abhängig von der Menge der anwesenden Monoesterase.If an optionally substituted phenolphthalein acetate compound is used as an indicator is used, a phenolphthalic radical is released when the ester bond is broken, the one A dull red color is developed when the test strip is immersed in a solution with a pH of about 8.3 to 1o, o is dived. When the pluorescein ester was blown up an optionally substituted fluorescein is released, which is yellow. In all cases it is the discernible color developed, in principle, depends on the amount of monoesterase present.

Der große Torzug und die Einfachheit dieses oralen Testes int ohne weiteres ersichtlich. Die Frau braucht nur das Testpapier mit der Zunge zu befeuchten und ein paar Minuten zu warten um festzustellen, ob an dem Papier eine Farbänderung auftritt. Das Resultat ist sehr leicht zu beobachten und es müssen nicht über längere Zeit Daten aufge-ο zeichnet und interpretiert werden. Jeder einzelneThe great pull and the simplicity of this oral test are readily apparent. the Woman only needs to moisten the test paper with her tongue and wait a few minutes to see whether there is a color change on the paper. The result is very easy to observe and data does not have to be recorded and interpreted over a long period of time. Every single one

oo Tent ist in sich vollständig. Der Test ist zuver-JP lässig und einfach und kann ohne große Kosten aufoo Tent is complete in itself. The test is reliable casual and easy and can be done at no great expense

_ω bequeme Art durchgeführt werden. _ω convenient way to be carried out.

AIn 'Dentpapier dient vorzugsweise ein naugfähigen Papier, z. B. ein absorbierendes und chemisoh reines Filterpapier oder dergleichen. StoffstreifenIn 'Dentpaper is preferably an absorbent one Paper, e.g. B. an absorbent and chemisoh pure filter paper or the like. Strips of fabric

"■ Ό """"■ Ό" ""

oder poröse und absorbierende Holzlamellen können ebenfalls verwendet werden. Das Testpapier wird mit einer lösung der aktiven Bestandteile imprägniert und getrocknet, so daß die Lösungsmittel verdunsten und die aktiven Bestandteile auf dem Papier zurückbleiben.or porous and absorbent wooden slats can also be used. The test paper will impregnated with a solution of the active ingredients and dried, leaving the solvent evaporate and the active ingredients remain on the paper.

Bei einem repräsentativen Versuch, bei dem Indoxylacetat als Indikator dient, löst man 6,9 g Methocel (ein Methylzelluloseprodukt) in 44o ml destilliertem Wasser und fügt 1oo ml Äthylalkohol und 25o ml Propylalkohol zu. Getrennt davon löst man 4 g Hatriumzitrat und 7o mg Zitronensäure in 60 ml ¥asser und ferner 1,5 g Indoxylacetat in I00 ml Wasser, dem man 12,5 g Iween 80 (ein Polyoxy äthyl ender ivat von Sorbitan) zusetzt.In a representative experiment in which indoxylacetate is used as an indicator, 6.9 g are dissolved Methocel (a methyl cellulose product) in 440 ml distilled water and add 100 ml of ethyl alcohol and 250 ml of propyl alcohol. Separately it triggers one 4 g of sodium citrate and 7o mg of citric acid in 60 ml ¥ water and also 1.5 g of indoxylacetate in 100 ml of water to which 12.5 g of Iween 80 (a polyoxy ethyl ender ivate of sorbitan) is added.

Die drei Lösungen werden kombiniert, so daß die Gesamtlösung ein pH von etwa 7»6 aufweist. Mit dem Gemisch werden größere Blätter von chemisch reinem filterpapier imprägniert und an der Luft getrocknet.The three solutions are combined so that the total solution has a pH of about 7 »6. With Larger sheets of chemically pure filter paper are impregnated into the mixture and exposed to air dried.

Wenn im obigen Ansatz Indoxylpropionat, —butyrat oder -phosphat oder das Acetat, Propionat oder Phosphat den 5-Bromindoxyl oder des Phenolphthaleins oder des 3-0-Methyl-l?luoresceins das Indoxylacetat als φIf in the above approach indoxyl propionate, butyrate or phosphate or acetate, propionate or phosphate, 5-bromoindoxyl or phenolphthalein or of 3-0-methyl-luorescein the indoxylacetate as φ

109819/0318 . - 7 -109819/0318. - 7 -

Indikator ersetzen, kann die Indikatormenge von 5o mg "bis zu 25oo mg -variiert werden, je nach dem Sättigungsgrad der gewünschten färbung.Replace indicator, the indicator amount can be varied from 50 mg "up to 25oo mg, depending on the Degree of saturation of the desired coloring.

Die so hergestellten Testpapiere "bzw. Teststreifen wurden "bei klinischen Untersuchungen verwendet um die Genauigkeit des !Testes bei der Bestimmung öer J?ruchtbarkeitsperiode zu prüfen, wie sie durch den !Farbumschlag, der durch den v/eiblichen Speichel hervorgerufen wird, in Erscheinung tritt. Verglichen mit der bisher angewandten Standardmethode, nämlich der (Grundkörpertemperatur—) Wärmeverschiebungixuntersuchung ergeben die beschriebenen !Teststreifen eine deutliche Übereinstimmung.The test papers "or test strips" produced in this way were "used in clinical examinations to check the accuracy of the! test in determining which fertility period you like through the! color change, that through the physical Saliva is produced. Compared to the previously used standard method, namely the (base body temperature) heat displacement analysis the test strips described show a clear match.

Erfindungsgemäß wird demnach ein leicht durchzuführender und sicherer Test und die zugehörige Einrichtung (z. B. Testpapier) zur Bestimmung der fruchtbaren Perlode durch einen einfachen Test mit dem Speichel bereitgestellt. Mit Hilfe der oben beschriebenen Teststreifen läßt sich leim Kontakt mit Speichel während der Ifruchtbarkeitsperiode dadurch eine Zunahme der Monoesteraneaktivität feststellen, daß sieh eine leicht erkennbare Färbung in kurzer Zeit entwickelt. Wenn kein merklicher Anstieg an Monoeoteraseaktivität stattgefunden hat, entwickeltAccording to the invention, therefore, it is easy to carry out and safe test and the associated device (e.g. test paper) for determining the fertile perlode provided by a simple test with the saliva. With the help of the above Test strips can be used to make contact with saliva during the infertility period notice an increase in monoesterane activity that you will see an easily discernible color in a short time Time evolves. If there has been no noticeable increase in monoeoterase activity, developed

109819/0318109819/0318

- 8- 8th

der Teststreifen "beim Kontakt mit Speichel nicht die leicht feststellbare Färbung.the test strip "does not have the easily discernible color when it comes into contact with saliva.

Abgesehen von seiner primären Bedeutung für den weiblichen Organismus beim Menschen ist das erfindungsgemäße Verfahren offensichtlich auch anwendbar auf weibliche Tiere und kann für die Tierzucht von beträchtlicher Wichtigkeit sein.Apart from its primary importance for the female organism in humans, this is The method according to the invention obviously also applicable to female animals and can be used for Animal breeding can be of considerable importance.

Das Ansprechen der Testeinrichtung kann auch mit anderen verwandten Körperflüssigkeiten demonstriert werden, besonders mit dem Hals- und ßachenschleira.The response of the test device can also be demonstrated with other related body fluids especially with the neck and ßachenschleira.

Claims

109819/0318109819/0318

Claims

8 MÜNCHEN 9O8 MUNICH 9O

SOHWEIBEHSTHASSE 2HATE OF SONS 2

TBLIFOJC 88 08 31TBLIFOJC 88 08 31

PHOTKOTFATJB1TTPHOTKOTFATJB1TT

November 29, 1967 1Λ-33 991

P ate η ta η s ν r ti ο he

fiJ test device for determining an increase the activity of monoesterase in saliva or other body secretions that are concurrent with the fertility period of the 3? rough, characterized by an absorbent i'fe.terial impregnated with ana non-toxic Buffer, which adjusts the pH in a range from about 7 ° to about 9 °, and an indicator in Porm of a compound of the general Pormel R-O-X, wherein for the acetate, propionate, butyrate or Phosphate radical and R is an organic radical which, when the ester bond is broken up by the monoesteraoe forms a compound with a conspicuous color. '

2. Test device according to claim 1, characterized in that the indicator Indoxylacetate, 5-bromoindoxylacetate, 3-0-methylfluorescein is acefcat or phenolphthalein acetate.

3. Method for the detection of alkaline phosphatase

- 2 109819/0318 * &

eggs in saliva or related body, through this. characterized. that the secretion with a device according to claim 1 or 2 in contact ".

109819/0318109819/0318