DE1617603C - Process for the production of therapeutic antibody sera in warm blooded animals - Google Patents
Process for the production of therapeutic antibody sera in warm blooded animalsInfo
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Description
Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Herstellung therapeutischer Antikörperseren in Warmblütern, bei dem den Tieren neben dem Antigen ein Stoff zur Verstärkung der Antikörperbildung einverleibt wird.The invention relates to a process for the production of therapeutic antibody sera in warm-blooded animals, in which the animals, in addition to the antigen, incorporate a substance to increase antibody formation will.
Die USA.-Patente 3 301754 und 3 325 361 beschreiben die Verwendung von Dipropylessigsäure und ihren Abkömmlingen als potentialisierend wirkende Mittel für Depressoren des Zentralnervensystems sowie als Antispasmodica.U.S. Patents 3,301754 and 3,325,361 describe the use of dipropyl acetic acid and their descendants as potentizing agents for depressors of the central nervous system as well as antispasmodics.
Im Lauf von pharmakologischen und klinischen Arbeiten, die auf der Basis dieser in den Patenten veröffentlichten Lehren aufbauten, wurde nun gefunden, daß Dipropylessigsäure und Abkömmlinge derselben außerdem bei Immunisierungsbehandlungen gegen diverse Antigene eine Vermehrung der Menge an Serum-Gamma-Globulin bewirken. Das heißt, bei gleichzeitiger Anwesenheit von Antigen und Dipropylessigsäure oder ihren Abkömmlingen im Tierkörper tritt eine verstärkte Antikörperbildung auf. Es wird danach angenommen, daß diese Verbindungen das Antikörper bildende retikuloendotheliale System anregen. In the course of pharmacological and clinical work on the basis of this published in the patents As the teachings built, it has now been found that dipropyl acetic acid and derivatives thereof also an increase in the amount of in immunization treatments against various antigens Effect serum gamma globulin. That is, with the simultaneous presence of antigen and dipropyl acetic acid or their descendants in the animal body, there is an increased formation of antibodies. It will thereafter believed that these compounds stimulate the antibody-producing reticuloendothelial system.
Das erfindungsgemäße Verfahren zur Herstellung therapeutischer Antikörperseren in Warmblütern, bei dem den Tieren neben dem Antigen ein Stoff zur Verstärkung der Antikörperbildung einverleibt wird, ist demnach dadurch gekennzeichnet, daß als Stoff Di-n-propylessigsäure, deren Salze, deren Amid oder deren Ureid verabreicht wird.The method according to the invention for the production of therapeutic antibody sera in warm-blooded animals in addition to the antigen, a substance for enhancing antibody formation is incorporated into the animals accordingly characterized in that the substance di-n-propyl acetic acid, its salts, its amide or whose ureid is administered.
Zum Nachweis der Wirkung des erfindungsgemäßen Verfahrens wurden Testreihen mit Erzeugung unterschiedlicher Antikörpergehalte durchgeführt, die sich bei den Versuchstieren (Kaninchen bzw. Meerschweinchen) im Laufe der Immunisierung gegen verschiedene Antigene einstellen. Für diese Untersuchungen wurden verschiedene Verstärkerstoffe verwendet und ihre Wirkung mit den Ergebnissen bei Kontrolltieren verglichen.To demonstrate the effect of the method according to the invention, test series were carried out with the generation of different antibody levels, which differ in the test animals (rabbits or guinea pigs) in the course of immunization against various Set antigens. Various reinforcing agents were used for these investigations and their effect compared with the results in control animals.
Es folgt die Beschreibung einiger dieser Tests:Some of these tests are described below:
Bestimmung der Antikörperbildung bei der Immunisierung von Kaninchen- mit Meerschweinchen-Erythrocyten mit und ohne Anwesenheit von Di-N-Propylacetamid (DPA)Determination of antibody formation during the immunization of rabbit and guinea pig erythrocytes with and without the presence of di-N-propylacetamide (DPA)
Das Versuchsprinzip besteht darin, daß min Kaninchen mit Meenc'iweinchen-Erythrocyten immunisiert und nach 3 Wochen Immunisieiu ig in Abständen von 8 Tagen den Antikörpergehalt von immunisierten und gleichzeitig mit DPA behandelten Kaninchen bestimmt und mit dem Antikörpergehalt von immunisierten Tieren vergleicht, die nicht mit DPA behandelt wurden, sondern die gleiche Menge Olivenöl erhielten, das als Lösungsmittel für DPA verwendet wurde.The principle of the experiment is that min rabbits immunized with Meenc'iweinchen erythrocytes and after 3 weeks immunization at intervals the antibody content of immunized rabbits treated with DPA at the same time was determined over a period of 8 days and compared to antibody levels in immunized animals not treated with DPA but were given the same amount of olive oil that was used as the solvent for DPA.
Als Versuchstiere wurden Kaninchen-Männchen der »Fauve de Bourgogne«-Art von etwa 2,5 kg gewählt. Das in neutralisiertem Olivenöl gelöste DPA wurde in einer Dosis von 200 mg/kg 24 Tage lang jeden Tag i. p. injiziert.Male rabbits of the "Fauve de Bourgogne" species weighing around 2.5 kg were chosen as test animals. The DPA dissolved in neutralized olive oil was used at a dose of 200 mg / kg for 24 days every day i. p. injected.
Die Antikörper wurden im Serum nach der CaI-mette-Methode bestimmt. Die erste Bestimmung erfolgte 8 Tage nach der letzten Injektion des Antigens (Woche Sl), die zweite 1 Woche später (Woche S2).The antibodies were determined in the serum by the Cal-mette method definitely. The first determination was made 8 days after the last injection of the antigen (Week S1), the second 1 week later (week S2).
In den nachfolgenJen Tabelle sind die Grenzverdünnungen Serumlösungen angegeben, mit denen noch eine vollständige Hämolyse der Antigenerythrocyten erreicht wird.The limit dilutions are shown in the following table Serum solutions indicated, with which a complete hemolysis of the antigen erythrocytes is achieved.
Tabelle I
Erster VersuchTable I.
First try
Tabelle II
Zweiter VersuchTable II
Second try
Ergebnisse der gleichen Größenordnung wurden bei Verwendung des Antigens von Schaferythrocyten erhalten.
Zu den folgenden Beispielen wird die Untersuchung des Antikörpergehaltes von Kaninchen
beschrieben, die mit Paratyphus-O-Antigen (Körperantigen, Paratyphus-O, hergestellt vom Pasteur-Institut)
immunisiert wurden.
Es wurden »Fauve de Bourgogne«-Kaninchen von 3 kg ± 250 g verwendet. Die Immunisierung wurde
im Abstand von zwei Injektionen pro Woche intravenös mit ansteigenden Dosen von Antigen und für
eine Zeit von 3 Wochen, wie folgt, vorgenommen: 1 ml erste Woche; 2 ml zweite Woche und 3 ml dritte
Woche. Die Tiere wurden im Laufe der Immunisierung mit verschiedenen Abkömmlingen der Di-n-propylessigsäure
wie folgt behandelt:Results of the same order of magnitude were obtained using the antigen from sheep erythrocytes.
The following examples describe the investigation of the antibody content of rabbits which have been immunized with paratyphoid O antigen (body antigen, paratyphoid O, manufactured by the Pasteur Institute).
"Fauve de Bourgogne" rabbits weighing 3 kg ± 250 g were used. The immunization was administered intravenously with increasing doses of antigen at intervals of two injections per week and for a period of 3 weeks as follows: 1 ml first week; 2 ml second week and 3 ml third week. In the course of the immunization, the animals were treated with various derivatives of di-n-propyl acetic acid as follows:
■ Beispiel2 ,■ example2,
NatriumdipropylacetatSodium dipropyl acetate
Eine wäßrige Lösung des Natriumdi-n-propylacetat wurde von der ersten Antigenverabreichung an injiziert. Die Dauer der Behandlung betrug 3 Wochen mit Abständen von 2 Tagen zwischen den InjektionenAn aqueous solution of sodium di-n-propyl acetate was used from the first antigen administration injected. The duration of treatment was 3 weeks with 2 day intervals between injections
(i. p.) von je 200 mg/kg.(i.p.) of 200 mg / kg each.
Cholin-dipropylacetatCholine dipropyl acetate
Eine wäßrige Lösung von Cholin-Dipropylacetat wurde in der gleichen Reihenfolge wie im Beispiel 2 verabreicht.An aqueous solution of choline dipropyl acetate was prepared in the same order as in Example 2 administered.
Beispiel 4
DipropylacetylureidExample 4
Dipropylacetylureid
Eine ölige Suspension von Dipropylacetylharnstoff (100 mg/ml) wurde 3 Wochen lang alle 2 Tage in einer Dosis von 200 mg/kg verabreicht. Die erste Verabreichung erfolgte am gleichen Tage wie die erste Injektion von Antigen.An oily suspension of dipropylacetylurea (100 mg / ml) was given in one every 2 days for 3 weeks Dose of 200 mg / kg administered. The first administration took place on the same day as the first Injection of antigen.
B e i sp i e 1 5 DipropylacetamidFor example 15 dipropylacetamide
Eine ölige Suspension von Dipropylacetamid (100 mg/ ml) wurde in einer Dosis von 200 mg/kg intraperitoneal verabreicht. Dauer und Häufigkeit waren die gleichen wie im Beispiel 4.An oily suspension of dipropylacetamide (100 mg / ml) was given intraperitoneally at a dose of 200 mg / kg administered. Duration and frequency were the same as in Example 4.
Die Bestimmung der Antikörper erfolgte nach der serodiagnostischen Technik von W i d a I. Dazu wurde ίο dreimal Blut aus der Zentralvene des Ohres entnommen, und zwar 1 Woche, 2 Wochen und 3 Wochen nach der ersten Injektion von Antigen.The determination of the antibodies was carried out according to the serodiagnostic technique of W i d a I. This was done ίο blood drawn three times from the central vein of the ear, namely 1 week, 2 weeks and 3 weeks after the first injection of antigen.
Die folgenden Tabellen zeigen die nach den Beispielen 2, 3, 4 und 5 erzielten Ergebnisse:The following tables show the results obtained according to Examples 2, 3, 4 and 5:
Tabelle III
Erste WocheTable III
First week
Tabelle IV
Zweite WocheTable IV
Second week
Tabelle V
Dritte WocheTable V
Third week
Bestimmung des Antikörpergehalts bei Kaninchen, die mit Paratyphus-A-Antigen und mit Flagellarem Paratyphus-H-Antigen immunisiert und mit Cholin-Determination of the antibody content in rabbits with paratyphoid A antigen and with flagellarem Paratyphoid H antigen immunized and treated with choline
dipropylacetat behandelt wurden
Die Versuchstechnik ist die gleiche wie für das Antigen
O, jedoch erscheinen hier die Antikörper bekanntlich langsamer. Die Ergebnisse sind in der folgenden
Tabelle zusammengestellt:dipropyl acetate were treated
The experimental technique is the same as for the antigen O, but here the antibodies are known to appear more slowly. The results are summarized in the following table:
Diese Wirksamkeit der Dipropylessigsäure und ihrer Abkömmlinge kann gemäß der Erfindung gewerbsmäßig zur Erhöhung der Antikörperbildung bei der Herstellung von therapeutischen Seren ausgenutzt werden.This activity of dipropylacetic acid and its derivatives can be used commercially according to the invention used to increase antibody formation in the production of therapeutic serums will.
In diesem Beispiel wird die Immunisierungsbehandlung von Meerschweinchen mit einmaliger Injektion eines Dipropylessigsäurederivats und wiederholten Antigeninjektionen mit steigender Dosis durchgeführt.In this example, the immunization treatment of guinea pigs is a single injection of a dipropyl acetic acid derivative and repeated antigen injections with increasing dose.
Als Versuchstiere dienten weiße Meerschweinchen von 420 g, die in zwei Gruppen von 30 Tieren aufgeteilt wurden. Von diesen diente die erste Gruppe als Vergleichsgruppe, der nur das Antigen verabreicht wurde. Die zweite Gruppe erhielt das Antigen in gleicher Weise und darüber hinaus am ersten Tag eine einmalige intramuskuläre Injektion von 3 ml einer wäßrigen DPA-Lösung mit 65 mg DPA/ml, d. h. eine Menge von 195 mg DPA.White guinea pigs weighing 420 g, which were divided into two groups of 30 animals, were used as test animals became. Of these, the first group served as a comparison group that administered only the antigen would. The second group received the antigen in the same way and in addition on the first day a single intramuscular injection of 3 ml of an aqueous DPA solution containing 65 mg DPA / ml, d. H. an amount of 195 mg DPA.
Als Antigen diente ein Virus aphthosus (Eiweiß-Viralimmunigen). Das Antigen wurde über eine Zeitdauer von zwei Monaten in wachsenden Dosen mitA virus aphthosus (protein viral immune system) served as the antigen. The antigen was left over for a period of time of two months in growing doses
ίο Wechsel der Verabreichungsart wie weiter unten angegeben, injiziert. Dabei wurde bei jeder Injektion eine Dosis appliziert, die geringer als die oder gleich der »Unterschwelldosis« (maximale Dosis, bei deren Verabreichung noch keine spezifischen Schäden bei Meerschweinchen auftreten; diese Dosis wird nachfolgend als »c.p.-Dosis« bezeichnet) ist.ίο change the type of administration as indicated below, injected. With each injection, a dose was applied that was less than or equal to that "Sub-threshold dose" (maximum dose which, when administered, does not cause any specific damage Guinea pigs occur; this dose is hereinafter referred to as the "c.p. dose").
Die Antigeninjektionen wurden in folgender Weise verabreicht:The antigen injections were given in the following ways:
1. Tag 1Z4 c.p.-Dosis subcutan1st day 1 Z 4 cp dose subcutaneously
21. Tag 1J2 c.p.-Dosis subcutan21. Day 1 I 2 cp dose subcutaneously
36. Tag 1Z2 c.p.-Dosis subcutan36th day 1 Z 2 cp dose subcutaneously
42. Tag 1Z2 c.p.-Dosis intramuscular42nd day 1 Z 2 cp dose intramuscular
47. Tag 1 c.p.-Dosis intracardial47th day 1 c.p. dose intracardially
52. Tag 1 c.p.-Dosis intracardial52nd day 1 c.p. dose intracardially
57. Tag BlutentnahmeDay 57 blood collection
Der Antikörpergehalt wurds durch Komplementärfixierung bestimmt. Dabei wurden folgende Ergebnisse (angegeben in Kehrwerten der Grenzverdünnung) erzielt:The antibody content was determined by complementary fixation definitely. The following results (given in reciprocal values of the limit dilution) achieved:
a) mit DPA behandelte Tiere 50 bis 100a) animals treated with DPA 50 to 100
b) Vergleichstiere 20b) Comparison animals 20
Wie die vorstehenden Beispiele zeigen, führt dieAs the above examples show, the
gleichzeitige Anwesenheit von Antigen und Dipropylessigsäure (derivat) im Tierblut zu einer deutlichen Steigerung des Antikörpergehalts im Blut.simultaneous presence of antigen and dipropyl acetic acid (derivative) in animal blood leads to a significant increase in the antibody level in the blood.
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