DE1543890A1 - Process for the production of new glucosides - Google Patents

Process for the production of new glucosides

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DE1543890A1 DE1966S0107365 DES0107365A DE1543890A1 DE 1543890 A1 DE1543890 A1 DE 1543890A1 DE 1966S0107365 DE1966S0107365 DE 1966S0107365 DE S0107365 A DES0107365 A DE S0107365A DE 1543890 A1 DE1543890 A1 DE 1543890A1
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H17/00—Compounds containing heterocyclic radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H17/04—Heterocyclic radicals containing only oxygen as ring hetero atoms

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Description

Verfahren zur Herstellung neuer Glucoside Die vorliegende Erfindung betrifft neue Verbindungen der allgemeinen Formel I (siehe Formelblatt) worin R fUr den Phenyl-, den 2-Furyl-oder den 2-Thienylrest steht, sowie ein Verfahren zu deren Herstellung. Process for the preparation of novel glucosides The present invention relates to new compounds of general formula I (see formula sheet) in which R stands for the phenyl, the 2-furyl or the 2-thienyl radical, as well as a process their manufacture.

Das Verfahren ist dadurch gekennzeichnet, dass man 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid (Formel II) mit einem Aldehyd der allgemeinen Formel III in Gegenwart eines sauren Katalysators umsetzt. Als Katalysatoren kommen beispielsweise Lewissäuren, wie wasserfreies Zinkchlorid, oder ein getrockneter Kationenaustauscher mit SulfonsSuregruppen in der H-Fom in Frage.The method is characterized in that 4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucoside (Formula II) with an aldehyde of the general formula III in the presence of an acidic one Catalyst converts. For example, Lewis acids, such as anhydrous, can be used as catalysts Zinc chloride, or a dried cation exchanger with sulfonic acid groups in the H-form in question.

Besonders vorteilhaft ist es, 4'-Demethyl-epipodophyllotoxinß-D-glucosid direkt in reinem Aldehyd aufzulosen und den Katalysator zuzugeben. Die Reaktion verläuft im allgemeinen bei Zimmertemperatur oder bei leicht erhöhter Temperatur und ist nach 1 bis 10 Stunden, bei 20° meist nach 3 bis 6 Stunden, weitgehend beendet.It is particularly advantageous to use 4'-demethyl-epipodophyllotoxinß-D-glucoside dissolve directly in pure aldehyde and add the catalyst. The reaction generally takes place at room temperature or at a slightly elevated temperature and is largely complete after 1 to 10 hours, at 20 ° mostly after 3 to 6 hours.

Zur Isolierung des Kondensationsproduktes nimmt man das Reaktionsgemisch in einem mit Wasser nicht mischbaren Lösungsmittel, z. B. Chloroform auf, schUttelt mehrmals zur Entfernung wasserlöslicher Salze und Nebenprodukte mit Wasser aus, trocknet die organische Phase und dampft im Vakuum ein, wobei die Hauptmenge des überschüssigen Aldehyds entfernt wird. Man erhält einen bligen RUckstand, aus dem die letzten Reste des Aldehyds leicht durch Macerieren bzw. Digerieren des Kondensationsproduktes mit einem geeigneten Lösungsmittel, wie z. B. Petroläther, Pentan, Hexan oder durch Chromatographie an einem neutral reagierenden Adsorptionsmittel, wie z. B. Kieselgel, entfernt werden. Das Kondensationsprodukt wird hierauf auf an sich bekannte Weise isoliert und gereinigt, z. B. durch Chromatographie, UmRällen oder Kristallisation.The reaction mixture is used to isolate the condensation product in a water-immiscible solvent, e.g. B. chloroform, shakes several times to remove water-soluble salts and by-products with water, the organic phase dries and evaporates in vacuo, the majority of the excess aldehyde is removed. A bloody residue is obtained from which the last residues of the aldehyde easily by macerating or digesting the condensation product with a suitable solvent, such as. B. petroleum ether, pentane, hexane or by Chromatography on a neutrally reacting adsorbent, such as. B. silica gel, removed. The condensation product is then produced in a manner known per se isolated and cleaned, e.g. B. by chromatography, recirculation or crystallization.

4'-Demethyl-epipodophyllotoxin-B-D-glucosid (Formel II) Der fUr die Herstellung der neuen Verbindungen der allgemeinen Formel I dienende Ausgangsstoff 4'-Demethyl-epipodophyllotoxinw lucosid wird nach einem der folgenden Verfahren, die ebenfalls Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind, hergestellt : Entweder spaltet man aus Tetra-0-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid (Formel IV) zuerst die Carbobenzoxygruppe hydrogenolytisch ab und unterwirft das so erhaltene Tetra-0-acetyl-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid (Formel V) in Gegenwart von wasserfreiem Zinkacetat einer Alkoholyse oder man spaltet zuerst die Acetylgruppen des Tetra-0-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotox$n-fi-D-glucosids in Gegenwart von wasserfreiem Zinkacetat oder einem Gemisch von wasserfreiem Zinkacetat-Natriumacetat alkoholytisch ab und entfernt anschliessend hydrogenolytisch die Carbobenzoxygruppe.4'-Demethyl-epipodophyllotoxin-B-D-glucoside (Formula II) The one for the Preparation of the new compounds of general formula I serving starting material 4'-Demethyl-epipodophyllotoxinw lucoside is obtained by one of the following methods, which are also the subject of the present invention, produced: Either one cleaves from tetra-0-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucoside (Formula IV) first the carbobenzoxy group hydrogenolytically and subdues the Tetra-0-acetyl-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucoside (formula V) alcoholysis in the presence of anhydrous zinc acetate or one cleaves first the acetyl groups of the tetra-0-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotox $ n-fi-D-glucoside in the presence of anhydrous zinc acetate or a mixture of anhydrous zinc acetate-sodium acetate alcoholytically and then hydrogenolytically removes the carbobenzoxy group.

Hydrogenolyse Die Hydrogenolyse erfolgt nach an und für sich bekannten Methoden. Hierbei wird zweckmässigerweise ohne Ueberdruck und bei 20 bis maximal 40° in Gegenwart von Palladium-Katalysatoren, wie z. B. Palladium auf Kohle oder auf Bariumsulfat, hydriert. Als Losungsmittel kommen vorzugsweise Alkohole, wie z. B. Methanol oder Aethanol, unter Zusatz von 0, 5 bis 5 Volumen-Prozenten Eisessig und 10 bis 50 Volumen-Prozenten Aceton in Frage. Die Katalysatormenge beträgt 1-5 Gewichtsprozent, bezogen auf eingesetzte Substanz.Hydrogenolysis Hydrogenolysis takes place according to known methods Methods. This is expediently without excess pressure and at 20 to a maximum 40 ° in the presence of palladium catalysts, such as. B. palladium on charcoal or on barium sulfate, hydrogenated. The solvents used are preferably alcohols, such as z. B. methanol or ethanol, with the addition of 0.5 to 5 percent by volume of glacial acetic acid and 10 to 50 volume percent acetone in question. The amount of catalyst is 1-5 Percentage by weight, based on the substance used.

Alkoholyse Es war nicht zu erwarten, dass aus Tetra-0-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid bzw. Tetra-0-acetyl-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid die Acetylgruppen unter den Ublichen basischen und sauren Bedingungen hydrolytisch abspaltbar sind, um auf diese Weise zum entsprechenden frelen Clueosid zu gelangen. Bekanntlich erleiden Lignanglucoside durch Basen Empimerisierung, während ; . a. r : s c S. us ; ; , x I- : j9 . Abspur die zuckarrestes, führen kann.Alcoholysis It was not to be expected that from tetra-0-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucoside and tetra-0-acetyl-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucoside the acetyl groups can be split off hydrolytically under the usual basic and acidic conditions, in order to go to the corresponding frelen clueoside to arrive. It is known that lignanglucosides suffer from base empimerization while; . a. r: s c S. us; ; , x I-: j9. Trace the sugar arrest, can lead.

Es wurde nun überraschenderweise gefunden, dass sich aus Tetra-O-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid bzw, aus Tetra-O-acetyl-4'-demethylepipodophyllotoxin-ß-D-glucosid die Acetylreste ohne gleichzeitige Epimerisierung des Aglykons am C-3-Atom und ohne Abspaltung des gesamten zuckerrestes entfernen lassen, indem man diese Verbindungen einer Alkoholyse, vorzugsweise mit Methanol, in Un von wasserfreiem unter wirft.It has now surprisingly been found that tetra-O-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-β-D-glucoside or, from tetra-O-acetyl-4'-demethylepipodophyllotoxin-ß-D-glucoside the acetyl residues without simultaneous epimerization of the aglycone at the C-3 atom and without splitting off the remove all of the sugar residue by alcoholysis of these compounds, preferably with methanol, in Un of anhydrous under throws.

Die Methanolyse führt man in wasserfreiem Methanol bei Rückflusstemperaturdurch.DieKatalysatormengeliegtbeica.The methanolysis is carried out in anhydrous methanol at reflux temperature. The amounts of catalyst are included.

20-50 Cewichtsprozent, bezogen auf eingesetztes Tetra-O-acetyl-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid. Die Reaktionszeit liegt zwischen 15 und 30 Stunden. Bei der Methanolyse von Tetra-O-acetyl-4'-demethyl-epipodophyllotoxinß-D-glucosid bildet sich mit zinkacetat als Katalysator im Verlaufe der Reaktion eine Fällung. Zur Aufarbeitung wird dieser Niederschlag durch Zasatz von Esslgsäure unter leichtem Erwärmen in Losung gebracht.20-50 percent by weight, based on the tetra-O-acetyl-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucoside used. The reaction time is between 15 and 30 hours. In the methanolysis of tetra-O-acetyl-4'-demethyl-epipodophyllotoxinß-D-glucoside With zinc acetate as a catalyst, a precipitate forms in the course of the reaction. For work-up, this precipitate is added by adding acetic acid under gentle pressure Warming brought into solution.

Nach Abdampfen der Lösungsmittel wird der Rückstand in einem Chloroform-Butanol-Gemisch gelöst und die Zinksalze durch AusschUtteln mit Wasser entfernt. Aus der organischen Phase gewinnt man nach dem Eindampfen das rohe 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-gluQosid, das auf an sich bekannte Weise, s. B. durch Chromatographie und/oder Kristallisation, gereinigt wird.After evaporation of the solvent, the residue is dissolved in a chloroform-butanol mixture dissolved and the zinc salts through Shaking away with water. After evaporation, the crude 4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-gluQoside is obtained from the organic phase, this in a manner known per se, e.g. by chromatography and / or crystallization, is cleaned.

Wie oben angegeben, kann man bei der Abspaltung der Schutzgruppen aber auch in umgekehrter Reihenfolge vorgehen, indem man zuerst Tetra-0-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethylepipodophyllotoxin-ß-D-glucovid in Gegenwart von wasserfreiem Zinkacetat und gegebenenfalls Zugabe von wasserfreiem Natriumacetat in Methanol solange unter RUckfluss kocht, bis die Abspaltung der Aoetylgruppen beendet ist, wobei gleichzeitig teilweise auch die Carbobenzoxygruppe abgespalten wird. Aus dem so entstandenen Gemisch der Reaktionskomponenten liisgt sich das bisher unbekannte 4'-Carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid (Formel VI) isolieren, das weiter durch Hydrogenolyse der Carbobensoxygruppe in 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid übergeführt wird.As stated above, when splitting off the protective groups but also proceed in reverse order by first using tetra-0-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethylepipodophyllotoxin-ß-D-glucovid in the presence of anhydrous zinc acetate and optionally addition of anhydrous Sodium acetate in methanol boils under reflux until the cleavage of the Aoetylgruppen is ended, at the same time partially also the carbobenzoxy group is split off. Liisgt from the resulting mixture of reaction components the previously unknown 4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucoside (Formula VI) isolate, which further by hydrogenolysis of the carbobensoxy group in 4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucoside is converted.

Tetra-0-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-'epipodophyllotoxinß-D-glucosid (Formel IV) Der fUr die Herstellung von 4'-Demethyl-epi von ruz ß-D-glucosid dienende Ausgangsstoff Tetra-O-acetyl-4'-carbobenzoxy- wird mc, at ! folgenden Verfahren, die ebenfalls Gegenstand der vorliegenden Erfiodung sind, hergestellt :? Entweder kondensiert man 4'-Carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin (Formel VII) mit a-Acetobromglucose (Formel VIII) in einem, unter den Reaktionsbedingungen inerten organischen Lbsungsmittel und in Gegenwart von Zinkoxyd oder Queckailberoxyd oder man kondensiert 4'-Carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin (Formel VII) bzw. 4'-Carbobenzoxy-4'-demethyl-podophyllotoxin (Formel IX) mit 2, 3, 4, 6-Tetra-O-acetyl-ß-D-glucose (Formel X) in Gegenwart von Bortrifluorid-Aethylätherat, in einem unter den Reaktionabedingungen inerten organischen Ldsungsmittel bei einer Temperatur von unter O°C.Tetra-0-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-'epipodophyllotoxinß-D-glucoside (Formula IV) The one used for the production of 4'-demethyl-epi from ruz ß-D-glucoside Starting material tetra-O-acetyl-4'-carbobenzoxy- becomes mc, at! following procedures, which are also the subject of the present invention, produced:? Either 4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin (formula VII) is condensed with α-acetobromoglucose (formula VIII) in one, inert under the reaction conditions organic solvent and in the presence of zinc oxide or mercury oxide or 4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin (formula VII) or 4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-podophyllotoxin (formula IX) with 2, 3, 4, 6-tetra-O-acetyl-ß-D-glucose (Formula X) in the presence of boron trifluoride ethyl etherate, in one under the reaction conditions inert organic solvents at a temperature below 0 ° C.

Kondensation mit a-Acetobromglucose Die Herstellung des Tetra-0-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosids stiess wegen der durch die ungünstige Lage der sekundären OH-Gruppe am CI-Atom bedingten sterischen Hinderung am Aglykon auf Schwierigkeiten.Condensation with α-acetobromoglucose The production of tetra-0-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucoside collided because of the unfavorable position of the secondary OH group on the CI atom steric hindrance at the aglycone on difficulties.

So war es nicht mdglich, dièse Verbindung z. B. unter den Bedingungen der Koenigs-Knorr-Synthese in Benzol unter Zusatz ? von Silbersalzen (wie Ag2O oder Ag2CO3) oder in Acetonitril, in Gegenwart von Hg (CN) p, in praktisch verwertbarer Ausbeute aus 4'-Carbobenzexy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin und a-Aestcbremglucose zu gewinnen.So it was not possible to use this connection e.g. B. under the conditions the Koenigs-Knorr synthesis in benzene with additive? of silver salts (like Ag2O or Ag2CO3) or in acetonitrile, in the presence of Hg (CN) p, in a practically usable form Yield from 4'-carbobenzexy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin and a-Aestcbremglucose to win.

Es wurde nun überraschenderweise gefunden, dass sich Tetra-O-acstyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ßla3d'1'.. lba' I'f3. -l. a. '.It has now surprisingly been found that tetra-O-acstyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-βla3d'1 '.. lba 'I'f3. -l. a. '.

D-glucosid in guter ausbeute erhalten lässt, wenn man 4'-glucose in einem unter den Reaktionsbedingnng@@ @@@@ben opganischen Lösungsmittel und in Cegenwart von Q@@@@@ilbe@@@II@ oxyd oder vorzugsweise Zinkoxyd umsetzt.D-glucoside can be obtained in good yield if 4'-glucose in an organic solvent under the reaction conditions @@ @@@@ and in Cegenwart by Q @@@@@ ilbe @@@ II @ oxide or preferably zinc oxide.

Eine vorzugsweise Ausführungsform des erfiedungsgemässen Verfahrens besteht darin, dass man 4'-Carbobenzoxy-4'-demethylepipodophyllotoxin mit a-Acetobromglucose in einem goelgneten Lösungsmittel, wie z.B. Aethylenchlorid oder vorzugswelse Acetonitril, bei Temperaturen von 20 bis 80°, vorzugsweise zwischen 40 und 70°, in Gegenwart von Quecksilber-II-oxyd oder Zinkoxyd umsetzt, Die von der Tempnratur, Konzentration der Ausgangsstoffe und Korngrösse des Metalloxyds abhängige Reaktionsdauer liegt im Bereich von 0,5 bis 12 stunden, Um einen möglichst hohen Ümstz von 4'-Carbobenzoxy-4'-demethyl-epiodophyllotoxin bel der Glucosidierung zu erreichen, wird die a-Acetobromglucese in 2-4 fachem molaren Ueberschuss angewandt, Dans Metalloxyd setzt man in der Slel chen molaren Menge wie die a-Acetobromglucose eln, Die Anfangskonzentration von 4'-Carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodephyllotoxin im Lösungsmittel soll zwjschen 5 bis 20 Gewichtsprozent betragen, Die Umsetzung ist unter diesen Hedingungen nach 40 bis 60 minuten beendet, Zur isolierung des Tetra-O-a@etyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethylepipedophyllotoxin-ß-D-glucosids wird vom übersehüssigen Meta@lcxyd abfil@riert, das Lösungsmittel im Vakuum grössterteils abdestil@iert und der Rückstand zur Entfernung von quenkzilbersalzen a.t Natriumbromid-Lösung bzw. von Zinksalzen mit Wasser-Methanol (9 : 1) gewaschen. Zur Entfernung des Hauptteils der Zersetzungsprodukte aus der UberschUssigen a-Acetobromglucose wird das Reaktionsgemisch entweder einer Vorchromatographie unterworfen oder mit 5-30 %igem wässrigem Aethanol bei erhöhter Temperatur ausgezogen. Zur weiteren Reinigung werden die Spitzenfraktionen der Vorchromatographie einer Nachchromatographie unterworfen bzw. der äthanolunlosliche Rückstand an Kieselgel chromatographiert.A preferred embodiment of the method according to the invention is that you can 4'-carbobenzoxy-4'-demethylepipodophyllotoxin with a-acetobromoglucose in a gelled solvent such as ethylene chloride or preferably acetonitrile, at temperatures of 20 to 80 °, preferably between 40 and 70 °, in the presence of mercury (II) oxide or zinc oxide, which depends on the temperature, concentration The reaction time depends on the starting materials and grain size of the metal oxide in the range of 0.5 to 12 hours, in order to achieve the highest possible conversion rate of 4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epiodophyllotoxin To achieve glucosidation, α-acetobromoglucose is 2-4 times the molar If an excess is used, the metal oxide is used in the same molar amount as the α-acetobromoglucose eln, the initial concentration of 4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodephyllotoxin in the solvent should be between 5 and 20 percent by weight. The reaction is completed under these conditions after 40 to 60 minutes Tetra-O-a @ etyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethylepipedophyllotoxin-ß-D-glucoside is the excess metal oxide is filtered off, most of the solvent is removed in vacuo distilled off and the residue for the removal of Quenkzilbersalzen a.t sodium bromide solution or of zinc salts with Washed water-methanol (9: 1). To the distance of the main part of the decomposition products from the excess a-acetobromoglucose the reaction mixture is either subjected to a pre-chromatography or with 5-30% aqueous ethanol extracted at elevated temperature. For further cleaning the top fractions of the pre-chromatography are subjected to post-chromatography or the residue which is insoluble in ethanol is chromatographed on silica gel.

Die reinen Glucosidfraktionen werden vereinigt und ergeben nach Trocknung im Hochvakuum rohes Tetra-0-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid, das durch nochmalige Chromatographie gereinigt wird.The pure glucoside fractions are combined and give after drying in a high vacuum crude tetra-0-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucoside, which is purified by repeated chromatography.

Xondensation mit 2, 3, 4, 6-Tetra-0-acetyl-ß-D-glucose Es wurde üterraschenderweise gefunden, dass die Umsetzung von 2, 3, 4, 6-Tetra-C-acetyl-D-glucose in Form ihres reinen ß-Anomeren sowohl mit 4'-Carbobenzoxy-4'-deme4hyl-podophyllotoxin als auch mit 4'-Carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodcphyllotoxin, d. h. unabhängig von der Stereochemie der OH-Gruppe an C-1 des hglykons, in Gegenwart von Bortrifluorid-Aethylätherat bei einer Temperatur von unter 0° in einem, unter den Reaktionsbedingungen inerten Lösungsmittel zum Tetra-O-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllot oxin-ß-D-glucosid in hoher Ausbeute führt, wobei sich das Endprodukt einfach und in grosser Reinheit isolie en lässt. aufgrund der besehriebenen Reaktion konnte anhand des bisherigen Stands nicht vcrausgesehen werden, dass als Endprodukt praktisch nur die-Glucosidverbindung entsteht. Es war auch nicht zu erwarten, dass die empfindliche 2, 3, 4, 6-Tetra-O-acetyl-ß-D-glucose unter den angegebenen Reaktionsbedingungen, besonders in Gegenwart von Bortrifluorid-Aethylätherat, keine oder nur eine sehr geringe Anomerisierung zum a-Anomeren erleidet.Xondensation with 2, 3, 4, 6-tetra-0-acetyl-ß-D-glucose It was surprisingly found that the implementation of 2, 3, 4, 6-tetra-C-acetyl-D-glucose in the form of their pure ß-anomers with both 4'-carbobenzoxy-4'-deme4hyl-podophyllotoxin and with 4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodcphyllotoxin, d. H. regardless of the stereochemistry the OH group at C-1 of the glycone, in the presence of boron trifluoride ethyl etherate at a temperature of below 0 ° in one, inert under the reaction conditions Solvent for tetra-O-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllot oxin-ß-D-glucoside leads in high yield, the end product being simple and of great purity isolate. due to the reaction described above, based on the previous Stands are not expected to be as a practical end product only the glucoside compound is formed. Nor was it expected to be sensitive 2, 3, 4, 6-Tetra-O-acetyl-ß-D-glucose under the given reaction conditions, especially in the presence of boron trifluoride ethyl etherate, none or only very much suffers little anomerization to the a-anomer.

Ferner war überraschend, dass die Umsetzung von 2, 3, 4, 6-Tetra-0-acetyl-ß-D-glucose in Gegenwart von Bortrifluorid-Aethylätherat sowohl mit 4'-Carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin als auch mit 4'-Carbobenzoxy-4'-demethylpodophyllotoxin zum gleichen Endprodukt, nsmlich fast ausschliesslich zum Tetra-0-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid, führt. Das entsprechende Glucosid des 4'-Carbobenzoxy-4'-demethyl-podophyllotoxins wird nur in Spuren gebildet.It was also surprising that the implementation of 2, 3, 4, 6-tetra-0-acetyl-ß-D-glucose in the presence of boron trifluoride ethyl etherate both with 4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin as well as with 4'-carbobenzoxy-4'-demethylpodophyllotoxin to the same end product, Namely almost exclusively to tetra-0-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucoside, leads. The corresponding glucoside of 4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-podophyllotoxins is only formed in traces.

Eine vorzugsweise Ausführungsform des Verfahrens besteht darin, dass man eine Ldsung oder Suspension von 4'-Carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin oder 4'-Carbobenzoxy-4'-demethyl-podophyllotoxin und 2, 3, 4, 6-Tetra-0-acetyl-ß-D-glucose in einem, unter den Reaktionsbedingungen inerten Losungsmittel, wie z. B. Aethylenchlorid, Chloroform oder Methylenchlorid, bei-10 bis-25* mit Bortrifluorid-Aethylatherat versetzt. Zur mUgllchst quantitativen Umsetzung der wertvollen Aglykone werden pro Mol Aglykon 1, 5 bis 3 Mol 2, 3, 4, 6-Tetra-0-acetyl-ß-D-glucose und 2 bis 4 Mol Bortrifluorid -Aethylätherat eingesetzt. Die Anfangskonzentration von 4'-Carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin bzw. von 4'-Carboben20xy-4'-demethyl-podophyllotoxin im Losungsmittel soll ca. 25 bis 40 % betragen.A preferred embodiment of the method consists in that a solution or suspension of 4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin or 4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-podophyllotoxin and 2, 3, 4, 6-tetra-0-acetyl-β-D-glucose in a solvent which is inert under the reaction conditions, such as. B. ethylene chloride, Chloroform or methylene chloride, at -10 to -25 * with boron trifluoride ethyl etherate offset. For the most quantitative implementation of the valuable aglycones, pro Moles of aglycon 1, 5 to 3 moles 2, 3, 4, 6-tetra-0-acetyl-ß-D-glucose and 2 to 4 moles Boron trifluoride -Aethyl etherate used. The initial concentration of 4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin or of 4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-podophyllotoxin in the solvent should be approx. 25 to 40%.

Zur Isolierung des Tetra-0-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosids wird das Bortrifluorid durch Zusatz einer tertiären organischen Base, vorzugsweise Pyridin, inaktiviert und danach der Bortrifluorid-Pyridin-Komplex mit Wasser ausgewaschen. Das nach Eindampfen der organischen Lösungsmittel anfallende Gemisch von 2, 3, 4, 6-Tetra-0-acetyl-D-glucose und Kondensationsprodukt wird durch Fällung in wässrigem Aethanol von nicht umgesetzter Tetraacetylglucose befreit. Zur Entfernung einer geringen Menge eines störenden, schwerlöslichen Nebenproduktes wird die Fällung in heissem Methanol aufgenommen, die Lösung filtriert und das Methanol im Vakuum entfernt. Das so erhaltene Tetra-0-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid ist für die nachfolgenden Stufen genügend rein.For the isolation of the tetra-0-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucoside the boron trifluoride is preferably added by adding a tertiary organic base Pyridine, inactivated and then the boron trifluoride-pyridine complex washed out with water. The mixture of 2, 3, 4, 6-Tetra-0-acetyl-D-glucose and condensation product is obtained by precipitation in aqueous Ethanol freed from unreacted tetraacetylglucose. To remove a A small amount of a troublesome, sparingly soluble by-product is the precipitation taken up in hot methanol, the solution filtered and the methanol in vacuo removed. The tetra-0-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-β-D-glucoside thus obtained is sufficiently pure for the subsequent stages.

Durch Kristallisation aus Benzol-Pentan oder Benzol-Cyclohexan kann es in analysenreiner Form erhalten werden.By crystallization from benzene-pentane or benzene-cyclohexane can it can be obtained in analytically pure form.

4'-Carbobenzoxy-4'-demethyl-podophyllotoxin (formel IX und 4'-Carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin (Formel VII Die für die Herstellung von Tetra-0-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid dienenden Ausgangsstoffe 4-Carbobenzoxy-4'-demethyl-podophyllotoxin bzw.4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-podophyllotoxin (formula IX and 4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin (Formula VII for the preparation of tetra-0-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucoside serving starting materials 4-carbobenzoxy-4'-demethyl-podophyllotoxin or

4'-Carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin werden nach dem folgenden Verfahren, das ebenfalls Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist, hergestellt : 4'-Demethyl-podophyllotoxin (Formel XI) bzw. 4'-Demethylepipodophyllotoxin (Formel XII) wird in einem wasserfreien, unter den Reaktionsbedingungen inerten organischen Losungsmittel bei Temperaturen von-20 bis-5° in Gegenwart einer tertiären organischen Base mit Chloramelsensäurebenzylester zum 4'-Carbobenzoxy-4'-demethyl-podophyllotoxin bzw. 4'-Carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin umgesetzt.4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin are according to the following Process, which is also the subject of the present invention, produced : 4'-Demethyl-podophyllotoxin (Formula XI) or 4'-Demethylepipodophyllotoxin (Formula XII) is in an anhydrous, inert organic under the reaction conditions Solvent at temperatures from -20 to -5 ° in the presence of a tertiary organic Base with benzyl chloramelate to form 4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-podophyllotoxin or 4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin implemented.

Es war bisher nicht möglich, Schutzgruppen, wie z. B. Acylgruppen oder den Tetrahydropyrar¢lrest, selektiv an der phenolischen OH-Gruppe in Stellung 4' des 4'-Demethyl-epipodophyllotoxins einzuführen. S@ wird beis@iel weise bei der üblichen Acetylierung von 4'-Demethyl-podo@@yl@@tcxin bzw. von 4'-Demtnyl-epiodophyllotomin Cas l 4'-Diacetylderivaterhalten.Beiderartigen'De-sn'uendirekte selektive Abspaltung der Schutzgruppe in Stellung 1 nicht zu erreichen.It has not previously been possible to use protecting groups such. B. acyl groups or the tetrahydropyrar oil radical, selectively in position on the phenolic OH group Introduce 4 'of the 4'-demethyl-epipodophyllotoxin. S @ is used, for example, in the usual acetylation of 4'-demethyl-podo @@ yl @@ tcxin or of 4'-demethyl-epiodophyllotomine Cas l 4'-diacetyl derivative. Both types of'De-sn'uendirect selective cleavage the protective group in position 1 cannot be reached.

Bei der Reaktion des 4'-Demethyl-podophylloctoxins bzw, des 4'-Demethyl-epipodophyllotoxins mit Dihydvopyran gelingt zwar eine selektive Verätherung, doch erfolgt diese aufgrns einer sterischen Hinderung der phenolischen OH-Gruppe nicht an C-4', sondern in Stellung 1 (Bildung des 1-O-Tetra hydropyranyläthers).In the reaction of 4'-demethyl-podophylloctoxins or 4'-demethyl-epipodophyllotoxins With dihydvopyran a selective etherification succeeds, but this takes place on green steric hindrance of the phenolic OH group not at C-4 'but in Position 1 (formation of the 1-O-tetrahydropyranyl ether).

Es wurde nun überraschenderweise gefunden, dass es möglich ist, ein Derivat des 4'-Demethyl-podophyllotoxins bzw. des 4'-Demethyl-epipodophyllotoxins mit geschützter Hydroxylgruppe in Stellung 4'und freier Hydroxylgruppe in Stellung 1 zu erhalten.It has now surprisingly been found that it is possible to use a Derivative of 4'-demethyl-podophyllotoxins or of 4'-demethyl-epipodophyllotoxins with protected hydroxyl group in position 4 'and free hydroxyl group in position 1 to get.

Eine vorzugsweise Ausführungsform zur Darstellung von 4'-Carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin besteht darin, dass man feinstgepulvertes 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin in Aethylenchlorid, Methylenchlorid oder Chloroform bei Temperaturen von-5 bis-15° mit Carbobenzoxychlorid (Chlorameisensäurebenzylester) in Gegenwart einer tertidren organischen Base, wie z. B. Pyridin oder Dimethylanilin, umsetzt, wobei pro Mol 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin 1 bis 1, 35 Mol Carbobenzoxychlorid verwendet werden sollen, um die Bildung grösserer Mengen der 1, 4'-Bis-carbobenzoxy-Verbindung zu vermeiden. Die Abtrennung des gebildeten 4'-Carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxins aus dem Reaktionsgemisch, das auch noch nicht umgesetztes 4'-Demethylepipodophyllotoxin sowie kleine Mengen 1, 4'-Bis-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin enthält, erfolgt auf an sich bekannte Weise, z. B. durch Kristallisation oder Chromatographie.A preferred embodiment for the preparation of 4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin consists of the very finely powdered 4'-demethyl-epipodophyllotoxin in ethylene chloride, Methylene chloride or chloroform at temperatures from -5 to -15 ° with carbobenzoxychloride (Benzyl chloroformate) in the presence of a tertiary organic base, such as z. B. pyridine or dimethylaniline, with per mole of 4'-demethyl-epipodophyllotoxin 1 to 1.35 moles of carbobenzoxychloride should be used to prevent the formation of larger ones Avoid amounts of the 1,4'-bis-carbobenzoxy compound. The separation of the educated 4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxins from the reaction mixture, which also not yet converted 4'-demethylepipodophyllotoxin and small amounts of 1,4'-bis-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin contains, is carried out in a manner known per se, e.g. B. by crystallization or chromatography.

Das als Ausgangsmaterial verwendete 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin kann durch Epimerisierung von 4'-Demethylpodophyllotcxin erhalten werden (s. Beispiel 1). Die Herstellung des 4'-Carbobenzoxy-4'-demethyl-podophyllotoxins erfolgt in analoger Weise, ausgehend vom 4'-Demethyl-podophyllotoxin, wobei pro Mol 4'-Demethyl-podophyllotoxin 1 bis 1, 6 Mol Carbobenzoxychlorid verwendet werden.The 4'-demethyl-epipodophyllotoxin used as the starting material can be obtained by epimerizing 4'-demethylpodophyllotcxin (see example 1). The production of 4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-podophyllotoxins takes place in analogous way, starting from 4'-demethyl-podophyllotoxin, whereby 1 to 1.6 moles of carbobenzoxychloride are used per mole of 4'-demethyl-podophyllotoxin will.

Die neuen Verbindungen der allgemeinen Formel I besitzen in vitro eine hohe cytostatische Wirkung an Mastocytom--zellen und Fibroblastenkulturen. Ferner zeichnen sie sich durch eine starke Wirksamkeit gegenüber experimentellen Tumoren, insbesondere der Mäuseleukamie L-1210 aus. The new compounds of general formula I have in vitro a high cytostatic effect on mastocytoma cells and fibroblast cultures. Furthermore, they are characterized by a strong effectiveness compared to experimental Tumors, especially mouse leukemia L-1210.

Die neuen Verbindungen der allgemeinen Formel I können therapeutisch verwendet werden zur Bekämpfung pathologischer Prozesse, welche mit Zellvermehrung einhergehen, z. B. maligne Neoplasmen. The new compounds of general formula I can be used therapeutically be used to combat pathological processes associated with cell proliferation go hand in hand, e.g. B. Malignant neoplasms.

Die Dosierung der neuen Verbindungen der allgemeinen Formel I variiert ungefähr zwischen l und 50 mg pro Tag. The dosage of the new compounds of general formula I varies approximately between 1 and 50 mg per day.

Die neuen Verbindungen kUnnen als Arzneimittel allein oder in entsprechenden Arzneiformen fUr orale, enterale oder parenterale Verabreichung verwendet werden. Zwecks Herstellung geeigneter Arzneiformen werden diese mit organischen oder anorganischen, pharmakologisch indifferenten Hilfsstoffen verarbeitet. Als Hilfsstoffe werden verwendet z. B. für Tabletten und Dragees : Milchzucker, Stärke, Talk, Stearinsäure usw. für Sirupe : Rohrzucker-, Invertzucker-, Glucoselösungen u. a. für Injektionspräparate : Wasser, Alkohole, Glycerin, pflanzliche Cele und dergl. für Suppositorien : naturliche oder gehartete Oele, Wachse u. a. mehr. The new compounds can be used as drugs alone or in appropriate Dosage forms for oral, enteral or parenteral administration can be used. For the purpose of producing suitable dosage forms, these are mixed with organic or inorganic, processed pharmacologically indifferent auxiliaries. As auxiliary materials are used z. B. for tablets and dragees: lactose, starch, talc, stearic acid, etc. for Syrups: cane sugar, invert sugar, glucose solutions, etc. for injectables : Water, alcohols, glycerine, vegetable celes and the like. for suppositories : natural or hardened oils, waxes, etc. more.

Zudem können die Zubereitungen geeignete Konservierungs-, Stabilisierungs-, Netzmittel, Losungsvermittler, Süss- und Farbstoffe, Aromantien usw. enthalten.In addition, the preparations can contain suitable preservation, stabilization, Contain wetting agents, solubilizers, sweeteners, colorings, flavorings, etc.

In den nachfolgenden Beispielen, welche die Ausführung des Verfahrens erläutern, den Umfang der Erfindung aber in keiner Weise einschränken sollen, erfolgen alle Temperaturangaben in Celsiusgraden. Die Sehmelz-bzw. Zersetzungspunkte sind auf dem Kofler-Block bestimmt. In the following examples, which illustrate the implementation of the process but are not intended to restrict the scope of the invention in any way, all temperatures are given in degrees Celsius. The Sehmelz or. Decomposition points are determined on the Kofler block.

Beispiel 1 : 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin 2 g 4'-Demethyl-podophyllotoxin werden in 25 ml Aceton und 15 ml Was-ser gelbst und nach Zusatz von 5 ml konz.Example 1: 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin 2 g of 4'-Demethyl-podophyllotoxin become yellow in 25 ml of acetone and 15 ml of water and after adding 5 ml of conc.

Salzsäure 2 Stunden unter Rückfluss erwSrmt. Danach wird die Saure mit festem Bariumcarbonat neutralisiert, filtriert und das Filtrat im Vakuum bei 40° vom Aceton befreit. Das ausgefallene Material wird in Chloroform + 5 % Aceton aufgenommen, die Lösung über Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum eingedampft. Der verbleibende RUckstand wird an Kieselgel mit Chloroform + 1 % Methanol chromatographiert, wobei man zuerst geringe Mengen Verunreinigungen, dann reines 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin und schliesslich unumgesetztes Ausgangsmaterial erhält.Hydrochloric acid heated under reflux for 2 hours. After that, the acid neutralized with solid barium carbonate, filtered and the filtrate in vacuo 40 ° freed from acetone. The precipitated material is dissolved in chloroform + 5% acetone taken up, the solution dried over sodium sulfate and evaporated in vacuo. The remaining residue is chromatographed on silica gel with chloroform + 1% methanol, first small amounts of impurities, then pure 4'-demethyl-epipodophyllotoxin and ultimately receives unreacted starting material.

Kristallisation der reinen Fraktionen von 4'-Demethylepipodophyllotoxin erfolgt aus Chloroform und Methanol.Crystallization of the pure fractions of 4'-demethylepipodophyllotoxin takes place from chloroform and methanol.

Smp. 228-230°, [a]D = -69,8° (c = 0,630 in Chloroform).Mp 228-230 °, [a] D = -69.8 ° (c = 0.630 in chloroform).

Beispiel 2 : 4'-CarbobeRzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin 60 g staubfein pulverisiertes 4'-Demthyl-epipodophyllotoxin werden in1000mlwasserfreiemAethylenchloridsuspendiert und nach Versetzen mit 19 ml abs. Pyridin auf 10° abgekühl abgeRühlt . Unter Rühren und Feuchtigkeitsausschluss wird rd bei -10° innert 2,5 Stunden eine Lösung von 34 g Chlorameisensäurebenzylester in 100 ml Aethylenchlorid zugetropft und danach eine weitere halbe Stunde reagieren gelassen. Anschliessend wird die Reaktionslösung mit Wasser gewaschen, die organische Phase über Natriumsulfat getrocknet, im Vakuum eingedampft und der Rückstand im Hochvakuum bei 70-80° getrocknet. Kristallisation des Rohi produktes aus Aceton-Aether und dann zweimal aus Methanol liefert 4'-Carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin vom Doppelschmelzpunkt 117-119°/202-205°. Durch Trocknen im Hochvakuum zuerst bei 95-110° und dann bei 130° oder Kristallisation aus Aceton-Aether wird die losungsmittelfreie Form vom Smp. 201-240°, [a] D21 = -43,9° (c = 0,535) in CHC13, erhalten.Example 2: 4'-CarbobeRzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin 60 g fine as dust powdered 4'-demethyl-epipodophyllotoxin are suspended in 1000 ml of anhydrous ethylene chloride and after adding 19 ml of abs. Pyridine cooled to 10 °. While stirring and moisture exclusion becomes a solution of around -10 ° within 2.5 hours 34 g of benzyl chloroformate in 100 ml of ethylene chloride were added dropwise and then left to react for another half hour. Then will the reaction solution is washed with water, the organic phase over sodium sulfate dried, evaporated in vacuo and the residue dried in a high vacuum at 70-80 °. Crystallization of the raw product from acetone-ether and then twice from methanol provides 4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin with a double melting point of 117-119 ° / 202-205 °. By drying in a high vacuum first at 95-110 ° and then at 130 ° or crystallization from acetone-ether the solvent-free form with melting point 201-240 °, [a] D21 = -43.9 ° (c = 0.535) in CHC13.

Beispiel 3 : Tetra-0-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyleDipodochyllotoxin-ß-D-glucosid 26, 8 g 4'-Carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin werden unter Erwärmen in 70 ml Aethylenchlorid geldst. Die, Lösung wird auf +15° abgekühlt und unter Rühren 26, 0 g 2, 3, 4, 6-Tetra-O-acetyl-ß-D-glucose zugesetzt. Sobald sich der überwiegende Teil der Tetraacetyl-ß-D-gluoose gelöst hat, wird rasch auf-11 bis-12° unter Feuchtigkeitsausschluss gekühlt. Ungeachtet geringer Mengen ungelöster Ausgangsverbindungen tropft man dann bei-10 bis -12° Innentemperatur 17, 5 ml auf-10° vorgekühltes Bortrifluorid-Aethylätherat (48 % BF3) im Verlauf von 10 Minuten zu und rührt anschliessend noch 40 Minuten bei-10°. Danach wird unter Rühren und Kühlung ein Gemisch von 17, 5 ml abs. Pyridin und 35 ml Aethylenchlorid zugetropft und nach Zusatz von weiteren 200-ml Aethylenchlorid viermal mit je 100 ml Wasser ausgeschüttelt. Example 3: Tetra-0-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyle-dipodochyllotoxin-β-D-glucoside 26.8 g of 4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin are heated in 70 ml of ethylene chloride cash. The solution is cooled to + 15 ° and stirred 26.0 g of 2, 3, 4, 6-tetra-O-acetyl-β-D-glucose were added. As soon as the predominant Part of the tetraacetyl-ß-D-gluose has dissolved quickly to -11 to -12 ° with exclusion of moisture chilled. Irrespective of small amounts of undissolved starting compounds, one then drips at -10 to -12 ° internal temperature 17.5 ml boron trifluoride ethyl etherate precooled to -10 ° (48% BF3) over the course of 10 minutes and then stirred for a further 40 minutes at -10 °. Then it is stirred and cooled a mixture of 17, 5 ml abs. Pyridine and 35 ml of ethylene chloride were added dropwise and, after the addition of more 200 ml of ethylene chloride extracted four times with 100 ml of water each time.

Die organische Phase wird nach Trocknung über Natriumsulfat im Vakuum eingedampft und der Rückstand im Hochvakuum bei 70° getrocknet. Das Rohprodukt lost man in 125 ml heissem-Aethanol, versetzt unter Rühren mit 375 ml Wasser und rührt unter äusserer SUhlang mit Eis-Wasser, bis sich die anfänglich schmierige und klumpige Fllung in ein sandiges Pulver umgewandelt hat. Danach saugt man die FEllung ab, wäscht mit Aethanol-Wasser-Gemisch-l : 3 und trocknet im Hochvakuum bei 70°. Dieses Rohprodukt löst man in 300 ml heissem Methanol, filtriert von wenig ungelösten Flocken ab und dampft das Filtrat im Vakuum ein. Nach Trocknung des RUckstandes im Hochvakuum bei 700, erhält man Tetra-O-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epiodophyllotoxinß-D-glucosid als weissen Schau. [a]D20 = -41,7° (CHCl3).The organic phase is dried over sodium sulfate in vacuo evaporated and the residue dried in a high vacuum at 70 °. The raw product is lost one in 125 ml of hot ethanol, treated with stirring with 375 ml of water and stirred under the outer surface with ice-water until the initially greasy and lumpy Has transformed the filling into a sandy powder. Then the filling is suctioned off, washes with an ethanol-water mixture-l: 3 and dries in a high vacuum at 70 °. This The crude product is dissolved in 300 ml of hot methanol, and a little undissolved flakes are filtered off and the filtrate is evaporated in vacuo. After drying the residue in a high vacuum at 700, tetra-O-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epiodophyllotoxinß-D-glucoside is obtained as a white show. [a] 20 D = -41.7 ° (CHCl3).

Zur weiteren Reinigung kann aus Benzol-Pentan oder Benzol-Cyclchexan-Gemisch kristallisiert werden. reinstes Tetra-O-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epiodophylotoxinß-D-glucosid schmilzt bei 167-169°; [a]D20 = -46,6° (CHCl3).For further purification, benzene-pentane or a benzene-cyclchexane mixture can be used be crystallized. purest tetra-O-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epiodophylotoxinß-D-glucoside melts at 167-169 °; [a] 20 D = -46.6 ° (CHCl3).

Beispiel 4 : Tetra-O-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethylepipodophyllotoxin-ß-D-glucosid 8, 56 g 4'-Carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin werden in 55 ml Acetonitril bei 650 bis zur Lösung verrührt, 3, g trockenes Zinkoxyd zugesetzt und nach Zugabe xon 20, 0 g a-Acetobromglucose unter Feuchtigkeitsausschluss bei 65° verrührt. Nach je 10 Minuten wird eine Probe entnommen und im Dünnschichtchromatorgramm (Kieselgel/Chloroform + 10 % Aceton) untersucht. Nach vollständigem Umsatz der Acetobromglucose (ca. 40 bis 60 Minuten nach Beginn der Reaktion) kühlt man auf Zimmertemperatur ab, verdünnt mit 50 ml Chloroform, filtriert nicht umgesetztes Zinkoxyd ab und dampft das Filtrat im Vakuum bei 40° auf ein Volumen von ca. 20 ml. ein., Dieses Konzentrat wird in 250 ml Chloroform gelöst, die Chloroformphase zweimal mit je 300 ml Wasser-Methanol (9 : 1) gewaschen und die Chloroformschicht nach Trocknung über Natriumsulfat im Vakuum eingedampft.Example 4: Tetra-O-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethylepipodophyllotoxin-β-D-glucoside 8.56 g of 4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin are in 55 ml of acetonitrile stirred at 650 to solution, 3. g of dry zinc oxide was added and after addition of 20.0 g of α-acetobromoglucose with exclusion of moisture 65 ° stirred. After every 10 minutes a sample is taken and recorded in a thin-layer chromatorgram (Silica gel / chloroform + 10% acetone) investigated. After complete conversion of the acetobromoglucose (about 40 to 60 minutes after the start of the reaction) the mixture is cooled to room temperature off, diluted with 50 ml of chloroform, filtered off unreacted zinc oxide and evaporated the filtrate in a vacuum at 40 ° to a volume of approx. 20 ml., This concentrate is dissolved in 250 ml of chloroform, the chloroform phase twice with 300 ml of water-methanol each time (9: 1) washed and the chloroform layer after drying over sodium sulfate im Evaporated in vacuo.

Den getrockneten-RUckstand extrahiert man viermal mitje 70 ml siedend-heissem Aethanol-Wa sser-1:3-Gemisch. Den Aethanol-unlUsllchen Anteil chromatographiert man an der 50-fachen Menge Kieselgel mit Chloroform-Aceton (95 : 5) als Elutionsmittel.The dried residue is extracted four times with 70 ml of boiling hot water each time Ethanol-water 1: 3 mixture. The ethanol-insoluble portion is chromatographed one on 50 times the amount of silica gel with chloroform-acetone (95: 5) as the eluent.

Die reinen Olucosidfraktionen werden vereinigt und ergeben nach Trocknung im Hochvakuum bei 80°, rohes Tetra-0-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid.The pure olucoside fractions are combined and give after drying in a high vacuum at 80 °, crude tetra-0-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucoside.

Durch weitere Chromatographie lässt sich ein hochreines Priaparat gewinnen, das mit. den physikalischen Daten des im Beipie 3 beschriebenen Endproduktes übereinstimmt.A highly pure preparation can be obtained by further chromatography win that with. the physical data of the end product described in Example 3 matches.

Beispiel 5 : 4'-Carbobenzoxy-4'-demethyl-podophyllotoxin 15, 0 g 4-Demethyl-podophyllotoxin löst man in 450 ml warmem abs. Aethylenchlorid-Tetrahydrofuran-l : 1-Gemisch, versetzt mit 6, 0 ml abs. Pyridin und kühlt auf-10°. Unter Rühren und Kühlung werden nun im Verlauf von 1, 5 Stunden 8 mi Chlorameisensäurebenzylester, gelost in 55 ml Aethylenchlorid, zugetropft und danach 1 Stunde bei-5 bis-10° gerünrt. Dann dampft man bei 40° Badtemperatur im Vakuum auf ein Volumen von 20Q ml ein, verdünnt mit 250 ml Aethylenchlorid und wäscht die Losung einmal mit 100 ml 1 N Salzsäure, dann mit Wasser neural. Nach Trocknung über Natriumsulfat wird im Vakuum eingedampft und der Rückstand an der 20-fachen Menge Kieselgel chromatographiert.Example 5: 4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-podophyllotoxin 15.0 g of 4-demethyl-podophyllotoxin dissolve in 450 ml of warm abs. Ethylene chloride / tetrahydrofuran 1: 1 mixture, added with 6.0 ml abs. Pyridine and cools to -10 °. With stirring and cooling are now in the course of 1.5 hours 8 ml of benzyl chloroformate, dissolved in 55 ml of ethylene chloride, added dropwise and then curled at -5 to -10 ° for 1 hour. Then it is evaporated at a bath temperature of 40 ° in vacuo to a volume of 20Q ml, diluted with 250 ml of ethylene chloride and Wash the solution once with 100 ml of 1N hydrochloric acid, then with water neural. To Drying over sodium sulfate is evaporated in vacuo and the residue on the Chromatographed 20 times the amount of silica gel.

Chloroform mit 1 % Methanol eluiert zuerst kleine Mengen Nebenprodukte, dann reines 4'-Carbobenzoxy-4'-demethylpodophyllotoxin. Nach Kristallisation aus Methanol schmilzt die Verbindung bei 113-114° ; [a] D21 = -88,3° (Chloroform).Chloroform with 1% methanol first elutes small amounts of by-products, then pure 4'-carbobenzoxy-4'-demethylpodophyllotoxin. After crystallization from Methanol melts the compound at 113-114 °; [a] D21 = -88.3 ° (chloroform).

Beispiel 6 : Tetra-0-acetyl-4'-carbobenzbxy-4'-demethyleninodophyllotoxin-ß-D-glucosid 10, 7 g 4'-Carbobenzoxy-4'-demethyl-podophyllotoxin löst man unter Erwärmen in 30 ml Aethylenchlorid, kühlt die Losung auf +15° und setzt 14, 0 g 2, 3, 4, 6-Tetra-O-acetyl-ß-D-glucose zu. Nach 5 Minuten Rühren wird unter Feuchtigkeitsausschluss auf-15° gekühlt und innert 5 Minuten 7 ml auf-10° vorgekühltes Bortrifluorid-Aethylätherat (48 % BF3) zugetropft.Example 6: Tetra-0-acetyl-4'-carbobenzbxy-4'-demethyleneinodophyllotoxin-β-D-glucoside 10.7 g of 4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-podophyllotoxin are dissolved in 30 minutes with heating ml of ethylene chloride, the solution cools to + 15 ° and sets 14.0 g of 2, 3, 4, 6-tetra-O-acetyl-ß-D-glucose to. After stirring for 5 minutes, the mixture is cooled to -15 ° with exclusion of moisture and 7 ml of boron trifluoride ethyl etherate (48% BF3) pre-cooled to -10 ° within 5 minutes added dropwise.

Anschliessend wird 1 Stunde bei -15° gerührt, dann eine LUsung von 7 ml abs. Pyridin in 20 ml Aethylenchlorid zugetropft. Nach VerdU=en mit 100 ml Chloroform wird fünfmal mit Je 50 ml Wasser gewaschen. Die organische Phase trooknet man über Natriumsulfat, dampft im Vakuum ein und trocknet den Rückstand bei 60° im Vakuum. Den erhaltenen Schaum löst man in 50 ml heissem Aethanol, kUhlt auf ca. 50° ab, versetzt mit 150 ml kaltem Wasser und verrührt solange, bis shah der anfänglich klumpige und schmierige Niederschlag in ein sandiges Pulver verwandelt hat. Das Produkt wird abgesogen, mit 40 ml 25 % igem Aethanol nachgewaschen und im Vakuum bei 60° getrocknet. Dann löst man das Präparat in 200 ml heissem Methanol, filtriert klar, dampft das Filtrat im Vakuum ein und trocknet den Rückstand im Hochvakuum bei 80° bis zur Gewiahtskonstanz. Das derart gewonnene Tetra-0-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid ist mit dem, nach Beispiel 3 hergestellten PrGparzt identisch.The mixture is then stirred for 1 hour at -15 °, then a solution of 7 ml abs. Pyridine in 20 ml of ethylene chloride was added dropwise. After dilution with 100 ml Chloroform is washed five times with 50 ml of water each time. Trooknet the organic phase it is evaporated over sodium sulfate in vacuo and the residue is dried at 60 ° in a vacuum. The foam obtained is dissolved in 50 ml of hot ethanol, cooled to approx. 50 °, mixed with 150 ml of cold water and stirred until the initially shah has turned lumpy and greasy precipitate into a sandy powder. That Product is sucked off, washed with 40 ml of 25% ethanol and in vacuo dried at 60 °. The preparation is then dissolved in 200 ml of hot methanol and filtered clear, the filtrate is evaporated in vacuo and the residue is dried in a high vacuum at 80 ° to constant weight. The tetra-0-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-β-D-glucoside obtained in this way is identical to the PrGparzt produced according to Example 3.

Beispiel?!Tetra-0-acetyl-4'-aemethyl-ecipodoohyllötoxin-' ß-D-glucosid Zur Abspaltung des Carbobenzoxyrestes aus Tetra-O-acetyl-4'-oarbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid werden 13, 4 g dieser Verbindung in 100 ml Aceton-Awthanol (1 : 2) t, mit O, 5 ml Eisessig und 2 g Palladium-Kohle (mit 10 % Pd) versetzt und bei 20* hydriert. Danach filtriert man vom Katalysator ab, wäscht diesen mit warmem Aceton-Methanol-Gemisch nach und dampft das Filtrat im Vakuum ein.Example?! Tetra-0-acetyl-4'-aemethyl-ecipodoohyllötoxin- 'ß-D-glucoside For splitting off the carbobenzoxy radical from tetra-O-acetyl-4'-oarbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucoside 13.4 g of this compound in 100 ml of acetone-ethanol (1: 2) t, with 0.5 ml Glacial acetic acid and 2 g of palladium-carbon (with 10% Pd) are added and the mixture is hydrogenated at 20 °. Thereafter filtered the catalyst is washed off with a warm acetone-methanol mixture gradually and the filtrate evaporated in vacuo.

Der RUckstand wird mit 100 ml siedend-heissem Aethanol Ubergossen, kristallisieren gelassen und die Kristalle nach Absaugen und Waschen mit Methanol im Vakuum getrocknet. Reinstes Tetra-0-acetyl-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid kristallisiert in feinen Nadeln vom Smp. 225-227°, [a]D21 = -64,4° (o = 1,024) in Chloroform.The residue is poured over with 100 ml of boiling-hot ethanol, left to crystallize and the crystals after filtering off with suction and washing with methanol dried in vacuum. Pure tetra-0-acetyl-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucoside crystallizes in fine needles with a melting point of 225-227 °, [a] D21 = -64.4 ° (o = 1.024) in Chloroform.

Beispiel 8 : 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid 25 g reines Tetra-0-aoetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethylepipodophyllotoxin-ß-D-glucosid, 3,6 g wasserfreies Zinkaestat und 45 g wasserfreies Natriumaoetat werden in 150 ml Methanol unter Rückfluss und Rühren erwärmt. Nach 2 und 4 Stunden destilliert man je 12,5 ml Methanol ab.Example 8: 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin-β-D-glucoside 25 g pure Tetra-0-aoetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethylepipodophyllotoxin-β-D-glucoside, 3.6 g anhydrous zinc acetate and 45 g of anhydrous sodium acetate are dissolved in 150 ml of methanol heated under reflux and stirring. After 2 and 4 hours, 12.5 each are distilled ml of methanol.

Danach werden nach je 2 Stunden 12, 5 ml Methanol zugesetzt und wieder abdestilliert. Naoh total 18 Stunden ist die Abspaltung der Acetylgruppen beendet und es liegt ein Gemisch von ca. 60 % 4'-Carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid und ca. 40 % 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid vor. Die Reaktion wird im Di schichtchromatogramm auf Kieselgelplatten mit dem Fliessmittel Isopropylacetat-Methanol (4:1), wassergesättigt, verfolgtj Entwicklung durch Besprühen mit einer 0, 2 % igen Lösung von Cer- (IV)-sulfat in 50 %iger Schwefelsäure und Erwärmen auf 110-150°.Thereafter, after every 2 hours, 12.5 ml of methanol are added and again distilled off. After a total of 18 hours, the splitting off of the acetyl groups has ended and there is a mixture of about 60% 4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-β-D-glucoside and about 40% 4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucoside. The reaction will in the di-layer chromatogram on silica gel plates with the flow agent isopropyl acetate-methanol (4: 1), saturated with water, followed by development by spraying with a 0.2% strength Solution of cerium (IV) sulfate in 50% sulfuric acid and heating to 110-150 °.

Zur Aufarbeitung versetzt man mit 5 ml Eisessig, dampft im Vakuum bei 50° Badtemperatur ein und trocknet 15 Minuten im Hochvakuum bei 50°. Den Rückstand nimmt man in 250 ml Chloroform-Isopropanol (4 : 1) und 25 ml Wasser auf, trennt die wässrige Phase ab und wäscht die organische Phase nochmals mit 25 ml Wasser. Die beiden WasahwUsser werden mit 50 ml Chloroform-Isopropanol nachextrahiert und die vereinigten organischen Phasen nach Trocknung über Natriumsulfat im Vakuum eingedampft. Der Rückstand wird dreimal mit je 30 ml Aceton im Vakuum hochgezogen und danach zwei Stunden im Hochvakuum bei 75° getrocknet.For working up, 5 ml of glacial acetic acid are added and the mixture is evaporated in vacuo at 50 ° bath temperature and dried for 15 minutes in a high vacuum at 50 °. The residue one takes up in 250 ml of chloroform-isopropanol (4: 1) and 25 ml of water, separates the aqueous phase and the organic phase was washed again with 25 ml of water. The two WasahwUsser are extracted with 50 ml of chloroform-isopropanol and the combined organic phases, after drying over sodium sulfate, evaporated in vacuo. The residue is drawn up three times with 30 ml of acetone each time in vacuo and then dried for two hours in a high vacuum at 75 °.

Aus dem Gemisch von 4'-Carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid und 4'-Demethyl-epipodophyllotoxinß-D-glucosid kann durch Kristallisation aus Methanol 4'-Carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid in nicht ganz reiner Form gewonnen werden. Chromatographie an der 100-fachen Menge Kieselgel liefert bei der Elution mit Isopropylacetat-Methanol (9:1), wassergesättigt, reines 4'-Carbobenzoxy-4'=demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid, das, aus Aceton kristallisiert, bei 155-156° schmilzt, [a]D21 = -92,0e (c = 1,00) in Chloroform.From the mixture of 4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucoside and 4'-demethyl-epipodophyllotoxinß-D-glucoside can be obtained by crystallization from methanol 4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucoside in not entirely pure Form can be obtained. Chromatography on 100 times the amount of silica gel provides when eluting with isopropyl acetate-methanol (9: 1), water-saturated, pure 4'-carbobenzoxy-4 '= demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucoside, which, crystallized from acetone, melts at 155-156 °, [a] D21 = -92.0e (c = 1.00) in chloroform.

Zur Abspaltung der Carbobenzoxygruppe lost man das Gemisch von 4'-Carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid und 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin--D-glucosid in 200 ml Aceton, gibt die Lösung zu einer Suspension von 3 g Palladium-Kohle (10 % Pd) in 50 ml Wasser und hydriert bis zur beendeten Abspaltung der Schutzgruppe (1, 5 Stunden).To split off the carbobenzoxy group, the mixture of 4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-β-D-glucoside is dissolved and 4'-demethyl-epipodophyllotoxin - D-glucoside in 200 ml of acetone, gives the solution to a suspension of 3 g Palladium-carbon (10% Pd) in 50 ml Water and hydrogenated until the splitting off of the protective group has ended (1.5 hours).

Kontrolle der Reaktion im m Dünnschichtchromatorgramm wie oben.Check the reaction in the thin-layer chromatogram as above.

Danach filtriert man vom Katalyßator ab, wlsaht diesen mit 100 ml Aceton-Wasser (4 : 1) nach und dampft das Filtrat im Vakuum auf ein Volumen von ca. 40-45 ml ein, wobei bereits 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid auskristallisiert. Zur Vervollständigung der Kristallisation lässt man noch 20 Minuten im Eisbad stehen, saugt die ausgefallenen Kristalle ab, wlsaht mit 25 ml Wasser und trocknet im Hochvakuum bei 70°. Kristallisation aus Methanol liefert reines 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid vom Smp.The catalyst is then filtered off and 100 ml washed Acetone-water (4: 1) and the filtrate evaporated in vacuo to a volume of approx. 40-45 ml, with 4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucoside already crystallizing out. To complete the crystallization, it is left to stand in the ice bath for another 20 minutes, The precipitated crystals are filtered off with suction, washed with 25 ml of water and dried in a high vacuum at 70 °. Crystallization from methanol yields pure 4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucoside from smp.

225-227°, [a]D21 = -88,6° (c = 1, 05) in Methanol. Eine andere Modifikation zeigt den Smp. 262-2640.225-227 °, [a] D21 = -88.6 ° (c = 1.05) in methanol. Another modification shows m.p. 262-2640.

Beispiel 9 : 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid 2, 0 g des nach Beispiel 7 erhaltenen Tetra-0-aeetyl-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid und 1 g wasserfreies Zinkacetat werden in 30 ml absolutem Methanol 25 Stunden unter RUckfluss erwSrmt. Anschliessend wird der entstandene weisse Niederschlag durch Zusatz von wenigen ml Eisessig und leichtem Erwärmen in Lösung gebracht, das Losungsmittel im Vakuum bei 40° entfernt und der RUckstand in 50 ml Chloroform-Butanol (4 : 1) aufgenommen. Die organische Phase wäscht man zweimal mit je 10 ml Wasser, dampft nach Trocknung über Natriumsulfat im Vakuum ein und chromatographiert den RUckstand an Kieselgel.Example 9: 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucoside 2.0 g des Tetra-0-aeetyl-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucoside obtained according to Example 7 and 1 g of anhydrous zinc acetate are taken in 30 ml of absolute methanol for 25 hours Reflux warmed. Then the resulting white precipitate is through Adding a few ml of glacial acetic acid and heating gently brought the solvent into solution removed in vacuo at 40 ° and the residue in 50 ml of chloroform-butanol (4: 1) recorded. The organic phase is washed twice with 10 ml of water each time and evaporated after drying over sodium sulfate in vacuo and the residue is chromatographed on silica gel.

Isopropylacetat-Methanol (9:1), wassergesättigt, eluiert zuerst unpolare Anteile, dann reines 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid. Die einzelnen Fraktionen werden im Dünnschichtchromatogramm auf Kieselgelplatten mit dem.Isopropyl acetate-methanol (9: 1), saturated with water, elutes non-polar at first Proportions, then pure 4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucoside. The single ones Fractions are in the thin layer chromatogram on silica gel plates with the.

Fllessmittel Isopropylacetat-Methanol (8 : 1), wassergesättigt, untersucht und die Glucosidfraktionen vereinigt und zweimal aus Methanol kristallisiert. 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid schmilzt bei 222-230°, eine andere Modifikation bei 262-2640, [a]D21 = -88° (c = 0,507) in Methanol.Fluxing agent isopropyl acetate-methanol (8: 1), saturated with water, investigated and the glucoside fractions combined and crystallized twice from methanol. 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucoside melts at 222-230 °, another modification at 262-2640, [a] D21 = -88 ° (c = 0.507) in methanol.

Beispiel 10 : 4'-Demethyl-epi odophyllotoxin-ß-D-benzyliden glucosid 1 g getrocknetes 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid wird in 20 ml reinem Benzaldehyd geldst und nach Zugabe von 0, 5 g wasserfreiem Zinkohlorid unter Feuchtigkeitsausschluss während 5 bis 6 Stunden bei 20° auf der Maschine geschuttelt.Example 10: 4'-Demethyl-epiodophyllotoxin-β-D-benzylidene glucoside 1 g of dried 4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucoside will in 20 ml of pure benzaldehyde and after adding 0.5 g of anhydrous zinc chloride Shaken in the absence of moisture for 5 to 6 hours at 20 ° on the machine.

Das Fortschreiten der Reaktion wird laufend mittels Dünnschichtchromatographie verfolgt. Dazu eignen sich Kieselgelplatten und Chloroform mit 6 % Methanol als Fliessmittel.The progress of the reaction is monitored by means of thin layer chromatography tracked. Silica gel plates and chloroform with 6% methanol are suitable for this purpose Superplasticizer.

Zur Sichtbarmachung der Substanzen besprüht man die Platten mit einer 1-proz. Lösung von Cer- (IV)-ammoniumnitrat in 50-pro. Schwefelsäure und arErmt anschliessend auf 100 bis 120°. Zur Aufarbeitung des Kondensationsproduktes versetzt man die klare, rotbraun gefärbte Reaktionslosung mit Chloroform und schüttelt mit Wasser aus. Die wässrige Phase wird zweimal mit Chloroform nachextrahiert. Man vereinigt sämtliche Chloroformphasen, wäscht zweimal mit Wasser nach, trocknet liber Natriumsulfat und verdampft die Lösungsmittel im Vakuum.To make the substances visible, the plates are sprayed with a 1 percent Solution of cerium (IV) ammonium nitrate in 50-per. Sulfuric acid and poor then to 100 to 120 °. Added to work up the condensation product the clear, red-brown colored reaction solution with chloroform and shaken with Water out. The aqueous phase is extracted twice with chloroform. One unites all chloroform phases, washed twice with water, dried over sodium sulfate and evaporates the solvents in vacuo.

Der anfallende blige Rückstand wird zur Entfernung von immer noch anhaftendem Benzaldehyd mit Pentan verrieben, bis ein pulvriges Produkt erhalten wird. Zur weiteren Reinigung nimmt man das Benzylidenderivat in 10 ml Aceton auf und tropft die Acetonldsung unter RWhren zu vorgelegten 100 ml Pentan, wobei eine hellgelbe bis weiss gefärbte Fällung erhalten wird. Das Rohprodukt kann auch durch Chromatographie an Kieselgelsäulen gereinigt werden. Dazu filtriert man eine möglichst konzentrierte Lösung von 1 g des rohen Benzylidenderivates in einem Gemisch von Chloroform + 2 % Methanol auf eine Säule aus 200 g Kieselgel und eluiert mit dem gleichen Lösungsmittelgemisch. Die dünnschichtchromatographisch einheitlichen Fraktionen werden vereinigt und aus Aceton-Pentan umgefällt. 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-benzylidenglucosid wird als weisses Pulver vom Smp. 182-185° erhalten.The resulting oily residue is still used to remove adhering benzaldehyde triturated with pentane until a powdery product is obtained will. For further purification, the benzylidene derivative is taken up in 10 ml of acetone and the acetone solution is added dropwise to 100 ml of pentane, with a light yellow to white colored precipitate is obtained. The crude product can also through Purified chromatography on silica gel columns. To do this, filter one if possible concentrated solution of 1 g of the crude benzylidene derivative in a mixture of Chloroform + 2% methanol on a column of 200 g of silica gel and eluted with the same mixture of solvents. The thin-layer chromatography uniform fractions are combined and reprecipitated from acetone-pentane. 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-benzylidene glucoside is obtained as a white powder with a melting point of 182-185 °.

Umkristallisation aus abs. Aethanol : Kristalle vom Smp. 245-2460. Die optischen Drehwerte betragen ; [a) 20 =-990 in D Methanol und-104° in Chloroform.Recrystallization from abs. Ethanol: crystals with a melting point of 245-2460. The optical rotation values are; [a) 20 = -990 in D methanol and -104 ° in chloroform.

Beispiel 11 : 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-thenylidenglucosid 0,5 g getrocknetes 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid werden mit 10 ml reinem Thiophen-2-aldehyd und 0, 25 g wasserfreiem Zinkchlorid versetzt und die Mischung unter Feuchtigkeitsausschluss bei 20° auf der Machine geschüttelt, wobei allmählich eine klare Lösung entsteht. Der Verlauf der Kondensation wird-wie oben beschrieben-mittels DUnnschichtchromatographie verfolgt. Nach 3-4-stündiger Reaktionsdauer verdünnt man die Lösung mit Chloroform und schUtteXt mit Wasser aus. Die Chloroformphase wird noch zweimal mit wenig Wasser nachgewaschen und dann über Natriumsulfat getrocknet und eingedampft.DeranfallendeRückstand wird zur Entfernung von überschüssigem Thiophen-2-aldehyd in wenig Aceton gelöst und du4rch Zugabe von Pentan umgefällt.Example 11: 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin-β-D-thenylidene glucoside 0.5 g of dried 4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucoside are mixed with 10 ml pure thiophene-2-aldehyde and 0.25 g of anhydrous zinc chloride added and the Mixture shaken with exclusion of moisture at 20 ° on the machine, whereby a clear solution gradually emerges. The course of the condensation is as above described-followed by thin-layer chromatography. After a reaction time of 3-4 hours the solution is diluted with chloroform and poured out with water. The chloroform phase is washed twice with a little water and then dried over sodium sulfate and evaporated. The resulting residue is used to remove excess thiophene-2-aldehyde dissolved in a little acetone and reprecipitated by adding pentane.

Die Umfällung aus Aceton-Pentan wird solange wiederholt, bis das Kondensationsprodukt in flockiger Form ausfällt. Zur weiteren Reinigung wird das Rohprodukt an Kieselgel chromategraphiert. Die dünnschichtchromatographisch einheitlichen Fraktionen werden vereinigt und liefern aus absolutem Alkohol Kristalle. Reines 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-thenyliden-gluoosid zeigt einen Schmelzpunkt von 242-246° (letzte Reste bis 255°) und besitzt in Chlorogorm-Methanol (9:1) die optische Drehung [a]D20 = -107°.The reprecipitation from acetone-pentane is repeated until the condensation product precipitates in flaky form. For further purification, the crude product is put on silica gel chromatographed. The uniform ones according to thin-layer chromatography Fractions are combined and give crystals from absolute alcohol. Pure 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-thenylidene-gluooside shows a melting point from 242-246 ° (last remnants up to 255 °) and has in Chlorogorm-methanol (9: 1) the optical rotation [a] D20 = -107 °.

Beispiel12:4'-Deniethyl-e9ipodophyllotoxin-ß-D-furfurylidenglucosid 0,5 g getrocknetes 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid wird mit 10 ml reinem Furfurol versetzt und nach Zugabe von 0,25 g wasserfreiem Zinkohlorid unter Feuchtigkeitsausschluss wShrend 3 bis 4 Stunden bei 20° auf der Maschine geschüttelt.Example 12: 4'-Deniethyl-e9ipodophyllotoxin-β-D-furfurylidene glucoside 0.5 g of dried 4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucoside is mixed with 10 ml of pure Furfural is added and after adding 0.25 g of anhydrous zinc chloride with exclusion of moisture Shaken for 3 to 4 hours at 20 ° on the machine.

Der Verlauf der Kondensationsreaktion wird dünnschichtchromatographisch kontrolliert. Die Dünnschichtchrpmatographie kann auf Kieselgelplatten mit Chloroform mit 6 % Methanol als Fliessmittel ausgefuhrt werden. Zur Sichtbarmachung der Stoffe besprUht man mit einer 1-proz. Lösung von Cer-(IV)-ammoniumnitrat in 50-proz. Schwefelsäure und erwärmt anschliessend auf 100 bis 120°. Nach Beendigung der Kondensation versetzt man die e grün-gefärbte Reaktionslösung mit Chloroform und schUttelt anschliessend mit Wasser aus. Die wässrige Phase wird zweimal mit Chloroform nachextrahiert. Man vereinigt sämtliche Chloroformphasen, wäscht noch zweimal mit wenig Wasser aus, trocknet Uber Natriumsulfat und verdampft das Losungsmittel im Vakuum bei 60°, Der verbleibende ölige RUckstand (ca. 10 ml) wird zur Entfernung von anhaftendem @ Furfurol unter RUhren in 150 ml Pentan zugetropft, wobei eine schmierige Fällung erhalten wird. Nach Abdekantieren des Uberstehenden Pentans nimmt man die Fllung in wenig Aceton auf und tropft diese Lösung zu 150 ml vorgelegtem Pentan. Das abgeschiedene, nunmehr flockige Kondensationsprodukt kann durch Chromatographie an Kieselgel gereinigt werden. Zur Chromatographie beschickt man eine Seule anus 100 g Kieselgel mit einer konzentrierten Ldaung des Rohproduktes in Chloroform + 2 % Methanol und eluiert mit dem gleichen Losungsmittelgemisch. Die dünnsohichtohromatographisch einheitlichen Spitzenfraktionen werden vereinigt und aus Aceton-Pentan umgefällt. 4'-Demthyl-epipodophyllotoxin-ß-D-furfuryliden-glucosid wird als weisses Pulver vom Smp. 188-191° erhalten. Aus abs. Aethanol terden Kristalle vom Smp. 267-269° erhalten. Der otische Drehwert in Chloroform beträgt [a]D20 = -102°, Beispiel 13: 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-benzylidenglucosid 1, 0 g fein pulverisiertes 4'-Demethyl-eplpodophyllotoxinß-D-glucosid wird in 20 mg reinem Benzaldehyd gelant und 2 g getrocknetes Dowexpulver 50 WX 2 zugesetzt. Die Luft im Kolben wird mit Stickstoff verdrdngt und das Reaktionsgemisch unter Feuohtigkeitsausschluss mittels Magnetrührer gerührt.The course of the condensation reaction is determined by thin-layer chromatography controlled. Thin-layer chromatography can be performed on silica gel plates with chloroform be carried out with 6% methanol as the eluent. To make the fabrics visible if sprayed with a 1 percent. Solution of cerium (IV) ammonium nitrate in 50 percent. sulfuric acid and then heated to 100 to 120 °. Added after condensation has ended the green-colored reaction solution is mixed with chloroform and then shaken with water. The aqueous phase is extracted twice with chloroform. Man combines all chloroform phases, washes twice more with a little water, dries over sodium sulphate and evaporates the solvent in vacuo at 60 ° remaining oily Residue (approx. 10 ml) is used to remove adhering @ furfural was added dropwise with stirring in 150 ml of pentane, with a greasy Precipitation is obtained. After decanting off the supernatant pentane you take the Filling in a little acetone and this solution is added dropwise to 150 ml of the initially charged pentane. The separated, now fluffy condensation product can by chromatography be purified on silica gel. A column of anus is charged for chromatography 100 g of silica gel with a concentrated solution of the crude product in chloroform + 2% methanol and eluted with the same solvent mixture. The thin layer ohromatographically uniform top fractions are combined and reprecipitated from acetone-pentane. 4'-Demthyl-epipodophyllotoxin-ß-D-furfurylidene-glucoside comes as a white powder obtained from m.p. 188-191 °. From abs. Ethanol terden crystals with a melting point of 267-269 ° obtain. The otic rotation value in chloroform is [a] D20 = -102 °, example 13: 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-benzylidene glucoside 1.0 g finely powdered 4'-Demethyl-epodophyllotoxinß-D-glucoside is gelated in 20 mg of pure benzaldehyde and 2 g of dried Dowex powder 50 WX 2 added. The air in the flask is with Nitrogen is displaced and the reaction mixture is by means of exclusion of moisture Magnetic stirrer stirred.

Das Fortschreiten der Reaktion wird laufend mittels DUnnschichtchromatographie verfolgt [System a) Chloroform + 6 % Methanol, b) Chloroform-Methanol-Wasser- (70 : 25 : 5)]. Nach einer Stunde ist die Reaktion beendet.The progress of the reaction is monitored continuously by means of thin-layer chromatography followed [system a) chloroform + 6% methanol, b) chloroform-methanol-water- (70 : 25: 5)]. The reaction has ended after one hour.

Zur Aufarbeitung wird die organgegefärbte Losung vom Katalysator abfiltriert und mit Chloroform gut nachgewaschen. Das Lösungsmittel entfernt man bei 50° im Vakuum. Erhalten wird ein Oel, das an 60 g Kieselge "Merck" (Korngrösse O, 05 bis 0, 2 mm) gereinigt wird. Nach Abtrennung des Benzaldehyds durch Chloroform-Extraktion, eluiert man die Substanz mit Chloroform + 2 % Methanol. Diese ohromatographische Reinigung liefert amorphes 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-benzylidenglucosid, das im DUnnschichtchromatogramm völlig einheitlich ist. Zur Charakterisierung wird das Präparat in 5 ml Aceton gelöst und zu 60 ml Pentan unter Rtihren getropft. 4'-Demethylepipodophyllotoxin-ß-D-benzyliden-glucosid wird als farbloses amorphes Pulver vom Smp. 182-1840 erhalten. Aus abs.-Aethanol werden Kristalle vom Smp. 245-246° erhalten. [a]D = -104° (c = O, 766 in Chloroform).For work-up, the orange-colored solution is filtered off from the catalyst and washed well with chloroform. The solvent is removed at 50 ° im Vacuum. An oil is obtained which is mixed with 60 g of silica gel "Merck" (particle size 0.05 to 0.2 mm). After separation of the benzaldehyde by chloroform extraction, the substance is eluted with chloroform + 2% methanol. This ohromatographic Purification provides amorphous 4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-benzylidene glucoside, which is completely uniform in the thin-layer chromatogram. Is used for characterization the preparation dissolved in 5 ml of acetone and added dropwise to 60 ml of pentane with stirring. 4'-Demethylepipodophyllotoxin-ß-D-benzylidene-glucoside is obtained as a colorless amorphous powder with a melting point of 182-1840. From absolute ethanol crystals with a melting point of 245 ° -246 ° are obtained. [a] D = -104 ° (c = 0.766 in chloroform).

Claims (11)

Patentansprüche : 1. Verfahren zur Herstellung von neuen Verbindungen der allgemeinen Formel I (siehe Formelblatt), worin R fUr den Phenyl-, den 2-Furyl-oder den 2-Thienylrest steht, welches dadurch gekennzeichnet ist, dass man 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid (Formel II) mit einem Aldehyd der allgemeinen Formel III in Gegenwart eines sauren Katalysators umsetzt.Claims: 1. Process for the production of new compounds of the general formula I (see formula sheet), in which R stands for phenyl, 2-furyl or the 2-thienyl radical, which is characterized in that 4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucoside (Formula II) with an aldehyde of the general formula III in the presence of an acidic one Catalyst converts. 2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnete dass man als Katalysator Lewissäuren verwendet.2. The method according to claim 1, characterized in that as Lewis acids catalyst used. 3. Verfahren nach Anspruch 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, dass man als Katalysator wasserfreies chlorid verwendet.3. The method according to claim 1 and 2, characterized in that one used as a catalyst anhydrous chloride. 4. Verfahren nach Anspruch l, dadurch gekennzeichnete dass man als Katalysator einen getrockneten Kationenaustauscher mit Sulfonsäuregruppen in der H+-Form verwendet.4. The method according to claim l, characterized in that as Catalyst a dried cation exchanger with sulfonic acid groups in the H + form used. 5. Verfahren zur Herstellung von 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid (Formel II), dadurch gekennzeichnet, dass man aus Tetra-0-acetyl-4'-. carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid (formel IV) zunächst die Carbobenzoxygruppe hydrogenolytisch abspaltet und das so erhaltene Tetra-0-acetyl-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ßD-glucosid (Formel V) in Gegenwart von wasserfreien Zinksalzen einer Alkoholyse unterwirft.5. Process for the preparation of 4'-demethyl-epipodophyllotoxin-β-D-glucoside (Formula II), characterized in that from tetra-0-acetyl-4'-. carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucoside (formula IV) firstly splits off the carbobenzoxy group hydrogenolytically and that way obtained tetra-0-acetyl-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-βD-glucoside (formula V) in Subject to alcoholysis in the presence of anhydrous zinc salts. 6. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, dass man als wasserfreies Zinksalz Zinkacetat verwendet..6. The method according to claim 5, characterized in that as anhydrous zinc salt zinc acetate uses .. 7. Verfahren zur Herstellung von 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid (Formel II), dadurch gekennzeichnet, dass man aus Tetra-0-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid (Formel IV) die Acetylgruppen in Gegenwart von wasserfreiem Zinkacetat oder einem Gemisch von wasserfreiem Zinkacetat-Natriumacetat alkoholytisch abspaltet und anschliessend die Carbobenzoxygruppe hydrogenolytisch entfernt.7. Process for the preparation of 4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucoside (Formula II), characterized in that from tetra-0-acetyl-4'-carbobenzoxy-4'-demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucoside (Formula IV) the acetyl groups in the presence of anhydrous zinc acetate or a Mixture of anhydrous zinc acetate-sodium acetate is split off alcoholytically and then the carbobenzoxy group is removed hydrogenolytically. 8. Verfahren nach Anspruch 5 und 6, dadurch gekennzeichnet, dass man die hydrogenolytische Abspaltung bei Temperaturen zwischen 20 und 40° in Gegenwart eines Palladium-Katalysators durchführt.8. The method according to claim 5 and 6, characterized in that one the hydrogenolytic cleavage at temperatures between 20 and 40 ° in the presence a palladium catalyst. 9. Verbindungen der allgemeinen Formel I, worin R obige Bedeutung besitzt.9. Compounds of the general formula I in which R has the above meaning owns. 10. 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin-ß-D-glucosid 10. 4'-Demethyl-epipodophyllotoxin-β-D-glucoside 11. Arzneimittel, dadurch gekennzeichnet, dass es Verbindungen der allgemeinen Formel I, worin R obige Bedeutung besitzt, enthält.11. Medicines, characterized in that there are compounds of the general formula I, wherein R is above Has meaning, contains.
DE1966S0107365 1965-12-14 1966-12-10 NEW 4'-DIMETHYL-EPIPODOPHYLLOTOXINBETA-D-GLUCOSIDE DERIVATIVES, THEIR PRODUCTION AND MEDICINAL PRODUCTS Granted DE1543890B2 (en)

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