DE1517811A1

DE1517811A1 - Process for the production of glutamic acid

Info

Publication number: DE1517811A1
Application number: DE19661517811
Authority: DE
Inventors: Megna John C; Boucher Richard D
Original assignee: International Minerals and Chemical Corp
Current assignee: International Minerals and Chemical Corp
Priority date: 1966-04-29
Filing date: 1966-04-29
Publication date: 1969-12-11

Description

Verfahren zur Herstellung von Glutaminsäure Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Eierstellung von Z-Glutaminsäure aus Kohlenhydraten auf biologische Weise.Process for the preparation of glutamic acid The invention relates to a process for egg production from Z-glutamic acid from carbohydrates to biological ones Way.

Während der letzten Jahre ist die mikrobiologische Herstellung von Z-Glutaminsäure Gegenstand intensiver Forschungsarbeit auf' der ganzen Welt gewesen. Obgleich bisher noch. kein eindeutiges Verfahren zur Identifizierung sämtlicher Klassen von Z-Glutaminsäure bildenden Mikroorganismen entwickelt werden konnte, ließen sich durch ausgedehnte Versuchsreihen auf empirische Weise mehrere Mikroorganismen ermitteln, die in Fermentationsbrühen Z-Glutaminsäure ansammeln können. Solche Mikroorganismen werden uoa. in der kanadischen Patentschrift 604 712 (Micrococcus glutamicus), der kanadischen Patentschrift 625 337 (Brevibaeterium divaricatum), der kanadischen Patentschrift 633 170 (M icrobacterium flavum), der belgischen Patentschrift 609 701 (Corynebacterium lilium und Corynebacterium callunae) und der USA-Patentschrift 3 032 474 (Bacillus mageterium-cereus) angegeben.During the past few years the microbiological production of Z-glutamic acid has been the subject of intense research around the world. Although so far. It was not possible to develop a clear method for the identification of all classes of Z-glutamic acid-producing microorganisms, several microorganisms which can accumulate Z-glutamic acid in fermentation broths could be empirically determined by extensive test series. Such microorganisms are uoa. in Canadian patent specification 604 712 (Micrococcus glutamicus), Canadian patent specification 625 337 (Brevibaeterium divaricatum), Canadian patent specification 633 170 (M icrobacterium flavum), Belgian patent specification 609 701 (Corynebacterium lilium and Corynebacterium callunae) and US patent specification 3,032,474 (Bacillus mageterium-cereus).

Die Wirksamkeit bzw. die Produktionsleistung der L-Glutaminsäure bildenden Mikroorganismen ist natürlich von größter Bedeutung. Es ist nicht nur wünschenswert, die Fermentation in einer verhältnismäßig kurzen Zeitdauer durchführen zu können, sondern es ist für die Wirtschaftlichkeit jedes Verfahrens auch von ausschlaggebender Bedeutung, daß ein bedeutender prozentualer Anteil des Hauptausgangsmaterials - d.h. des Hauptnährstoffs, der den Mikroorganismen zugeführt wird - in L-Glutaminsäure umgewandelt wird.The effectiveness or the production capacity of the L-glutamic acid forming Microorganisms is of the utmost importance, of course. It is not only desirable to be able to carry out the fermentation in a relatively short period of time, but it is also crucial for the economic efficiency of each process Meaning that a significant percentage of the main starting material - i.e. the main nutrient that is supplied to the microorganisms - in L-glutamic acid is converted.

Es wurde gefunden, daß die Mehrheit der L-Glutaminsäure bildenden Mikroorganismen biotinempfindlich ist. Bei den bisher durchgeführten Verfahren zur fermentativen Eierstellung von L-Glutaminsäure wurde daher gefunden, daß der Biotinspiegel im Fermentationsmedium genau geregelt werden muß, um gute Ausbeuten an L-G.Lutaminsäure erzielen zu können. Obgleich durch eine Regelung des Biotingehaltes in den Nährmedien bei den bekannten Verfahren eine erhöhte Wirksamkeit der Fermentation erreicht werden kann, hat eine solche Verfahrensweise doch mehrere Nachteile. So schlossen die bisherigen Versuche zur Regulierung des Biotingehalts der Nährmedien gewöhnlich die Verwendung von Nährmaterialien mit hohem Biotingehalt, wie z.B. Rübenmelassen, M e1 assen mit hohem Gehalt an stickstoffhaltigen und sonstigen Nichtzucker-Bestandteilen (high test molasses) und dgl. als Hauptnährstoffe aus. Derartige Materialien sind andererseits im Vergleich zu anderen Kohlenhydratnährstoffen verhältnismäßig billig, und es ist daher versucht worden, neue Verfahren zu entwickeln, die ihre Verwendung ermöglichen.The majority of L-glutamic acid producing microorganisms have been found to be sensitive to biotin. In the processes carried out to date for fermentative egg production of L-glutamic acid, it was therefore found that the biotin level in the fermentation medium must be precisely regulated in order to be able to achieve good yields of LG.lutamic acid. Although a regulation of the biotin content in the nutrient media in the known processes can increase the effectiveness of the fermentation, such a procedure has several disadvantages. So previous attempts to regulate the biotin content of the nutrient media usually included the use of nutrient materials with a high biotin content, such as beet molasses, masses with a high content of nitrogenous ones and other non-sugar components (high test molasses) and the like. As main nutrients. Such materials, on the other hand, are relatively inexpensive when compared to other carbohydrate nutrients and attempts have therefore been made to develop new methods which will enable their use.

Der Erfindung liegt daher als Hauptaufgabe die Entwicklung eines Verfahrens zugrunde, mit dessen Hilfe die Wirksamkeit bei der fermentativen Herstellung von Z-Glutaminsäure erhöht werden kann. Eine weitere Aufgabe, die der Erfindung zugrundeliegt, ist die Schaffung eines Verfahrens, bei dem biotinhaltige Materialien in den Fermentationsmedien verwendet werden können, ohne die Wirksamkeit bzw. Produktionsleistung des Verfahrens zu beeinträchtigen.The main object of the invention is therefore to develop a method basis, with the help of which the effectiveness in the fermentative production of Z-glutamic acid can be increased. Another object on which the invention is based, is the creation of a process in which biotin-containing materials are in the fermentation media can be used without compromising the effectiveness or productivity of the process to affect.

Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur aeroben Fermentation eines wäflrigen Kohlenhydratmediums, das eine Stickstoffquelle sowie einen biotinempfindlichen, Z-Glutaminsäure bildenden Mikroorganismus enthält, und das dadurch gekennzeichnet ist, daß nach einer anfänglichen Züchtungszeit, während der sich die Mikroorganismen auf das M edizun einstellen, ein biotinhaltiger Kohlenhydrat-Nährstoff nach und nach zu dem Medium gegeben wird, um während der restlichen Zeit der Fermentation einen Gesamtkohlenhydratgehalt von weniger als etwa 2 yb in dem Medium aufrechtzuerhalten. Das erfindungsgemäße Verfahren gestattet eine Erhöhung der molekularen Umwandlung von Kohlenhydrat in Z-Glutaminsäure, ohne daß sich die Fermentationszeit verlängert. Obgleich der Kohlenhydratgehalt während der letzten Stufen der Züchtungsverfahrens auf einem geringen Wert gehalten wird, ist die für das erfindungsgemäße Ver- fahren erforderliche Gesamtzeit gleich oder geringer als die Zeit, die für ein ansatzweises Verfahren benötigt wird, bei dem die gleiche Kohlenhydratgesamtmenge gleich zu An- fang eingesetzt wird. Gemäß einer bevorzugten Ausführungs- form des erfindungsgemäßen Verfahrens wird der Kohlen- hydratgehalt des .Pälilinediums zur Regelung des Wachstums und. damit der Assimilation von h-Glutamitis@iure durch den Mikroorganismus ausreichend gering gehalten. Bei dieser Ausführungsform ist der Biotingehalt des Mediums nicht von ausschlaggebender Fedeutung, und es können Materialien mit hohem Biotingehalt, wie z.B. ßiibenmeIassen, leicht und in vorteilhafter Wei:,c verwendet werden. Das erfindungsge- mäße Verfahren hat den weiteren Vortr-I , daß es die Ansamm- lung höherer hrozeiit: ,aal er Anteile rin freier Glutaminsäure in der Fermentation:ihrühe gestattet.The invention relates to a process for the aerobic fermentation of an aqueous carbohydrate medium which contains a nitrogen source and a biotin-sensitive, Z-glutamic acid-forming microorganism, and which is characterized in that after an initial cultivation time during which the microorganisms adjust to the drug, a biotin-containing carbohydrate nutrient is gradually added to the medium to maintain a total carbohydrate content of less than about 2 yb in the medium for the remainder of the fermentation. The process according to the invention allows the molecular conversion of carbohydrate to Z-glutamic acid to be increased without the fermentation time being extended. Although the carbohydrate content during the last stages of the breeding process on a low Value is held, is the for the inventive method drive required total time equal to or less than the time required for a rudimentary process, in which the same total amount of carbohydrates is equal to catch is used. According to a preferred embodiment form of the method according to the invention is the carbon hydrate content of the .Pälilinediums to regulate the growth and. thus the assimilation of h-glutamitis @ iure by the Microorganism kept sufficiently low. At this Embodiment is not the biotin content of the medium decisive spring interpretation, and it can use materials high biotin content, such as omitting, easy and in more advantageous Wei:, c can be used. The inventive This method has the further advantage that the accumulation tion of higher duration: as a proportion of free glutamic acid in the fermentation: you are allowed to bother.

Das erfindungsgemäße Verfahren i St ganz allgemein auf sämtliche Fermentationsmedien anwendbar, die Kohlenhydrate, wie z.n. Zucker, Dextrine und dgl., enthalten. Darüberhinaus ist das erfindungsgemätie Verfahren - wie oben dargelegt - auf sämtliche Glutaminsäure bildenden Mikroorganismen anwendbar. Spezielle Beispiele solcher Mikroorganismen sind, wie oben dargelegt, uaa. (ohne die Erfindung hierauf zu beschränken) Mikroorganismen der Gattungen Corynebaeterium, Micrococcus, Brevibaeterium, Microbaeterium und Bacillus, wie z.B. Corynebacterium lilium (NRRL-B-2243), Corynebacterium callunae (NRRL-B.-2244), Mieroeocous glutamicus (ATCC-13022, ATCC--13032 und ATCC-13058), Brevibacterium divaricatum (NRRL-2312), Microbacterium flavum und Bacillus mageterium-cereus, Corynebacterium lilium und Corynebacterium callunae sind die für die Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens bevorzugten Mikroorganismen.The method according to the invention applies very generally to all fermentation media applicable, the carbohydrates, such as z.n. Sugar, dextrins and the like. Contain. Furthermore the method according to the invention - as set out above - applies to all glutamic acid educational Microorganisms applicable. Specific examples of such As set out above, microorganisms are inter alia. (without restricting the invention to this) Microorganisms of the genera Corynebaeterium, Micrococcus, Brevibaeterium, Microbaeterium and Bacillus such as Corynebacterium lilium (NRRL-B-2243), Corynebacterium callunae (NRRL-B.-2244), Mieroeocous glutamicus (ATCC-13022, ATCC-13032 and ATCC-13058), Brevibacterium divaricatum (NRRL-2312), Microbacterium flavum and Bacillus mageterium-cereus, Corynebacterium lilium and Corynebacterium callunae are the ones for carrying preferred microorganisms of the method according to the invention.

Die zur Eierstellung von Glutaminsäure geeigneten Nährmedien variieren natürlich etwas mit dem jeweils verwendeten Mikroorganismus. Die Nährmedien sind jedoch in jedem Fall wäßrig und enthalten außer einem Kohlenhydrat und einer Quelle für Stickstoff sekundäre Nährstoffe, wie z.B. Calcium, Magnesium, Kalium, Zink, Phosphat, Sulfat, Wachstumshilfsfaktoren und Spurenelemente.The nutrient media suitable for egg production of glutamic acid vary of course, something with the microorganism used in each case. The culture media are but in each case aqueous and contain, in addition to a carbohydrate and a source secondary nutrients for nitrogen, such as calcium, magnesium, potassium, zinc, Phosphate, sulfate, growth factors and trace elements.

Zur Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens sind Zucker wie z.B. Glucose, Saccharose, Fructose, Maltose und dgl. sowie Gemische solcher Zucker höchst geeignet. Hier und im folgenden bedeuten die Begriffe "Zucker", "Stärke" und dgl. nicht nur diese Materialien als solche, sondern auch ihre Äquivalente. Der Begriff "Glucose" umfaßt z.B, auch Substanzen, wie "Cerelose" (Corn Products Company), die im Handel erhältliche Formen von Glucose-' monohydrat darstellen, die durch Hydrolyse von Maisstärke erhalten worden sind. Diese Begriffe umfassen ferner Invertzuckergemische, wie z.B. diejenigen, die durch Säurehydrolyse von Zuckern in bekannter Weise erhalten worden sind. Die Begriffe umfassen weiterhin biotinhaltige Kohlenhydratmaterialien, wie z.B. Rübenmelassen, "high test"-Melassen und dgl.. Solche biotinhaltigen Kohlenhydratmaterialien stellen bevorzugte Kohlenhydratausgangsmaterialien dar und .werden daher bei dem erfindungsgemäßen Verfahren im Ausgangsmedium und/oder bei der späteren, nach und nach erfolgenden Kohlenhydratzugabe bevorzugt verwendet.To carry out the method according to the invention, sugars are like e.g., glucose, sucrose, fructose, maltose and the like, as well as mixtures of such sugars most suitable. Here and in the following the terms "sugar", "starch" and the like. Not only these materials as such but also their equivalents. The term "glucose" also includes, for example, substances such as "Cerelose" (Corn Products Company), the commercially available forms of glucose 'monohydrate represented by Hydrolysis of corn starch. These terms also include invert sugar mixtures, such as those obtained by acid hydrolysis of sugars in a known manner have been. The terms also include biotin-containing carbohydrate materials, such as beet molasses, "high test" molasses, and the like .. Such biotin-containing carbohydrate materials are preferred carbohydrate starting materials and are therefore used in the method according to the invention in the starting medium and / or in the later, after and preferably used after adding carbohydrates.

Biotinhaltige Materialien mit etwa 0,02 - 0,3 YVII Biotin je g Kohlenhydrat sind für die bisher im Gebrauch befindlichen ansatzweisen Verfahren im allgemeinen nicht geeignet. Bei der Durchführung des, erfindungsgemäßen Verfahrens können solche Materialien jedoch mit Vorteil verwendet werden. Erfindungsgemäß können Materialien verwendet werden, die nicht mehr als etwa 0,3 @%"Biotin je g Kohlenhydrat enthalten , und Materialien mit etwa 0,03 -0,17 @'Biotin je g Kohlenhydrat werden besonders bevorzugt.Biotin-containing materials with about 0.02-0.3 YVII biotin per g of carbohydrate are generally unsuitable for the batch processes currently in use. When carrying out the method according to the invention, however, such materials can be used with advantage. In accordance with the invention, materials containing no more than about 0.3% "biotin per gram of carbohydrate can be used , and materials with about 0.03-0.17%" biotin per gram of carbohydrate are particularly preferred.

Das Medium enthält weiterhin eine übliche Quelle für Stickstoff, wie z.B. Ammoniak, Harnstoff oder eine andere assimilierbare Stickstoffquelle organischer oder anorganischer Natur. Es können die verschiedensten Ammoniumverbindungen, wie z.B. Ammoniumehlorid, Ammoniumsulfat, Amm.oniumphoaphat u.a., verwendet werden. Stickstoff und Phosphationen können zusammen in Form von Ammoniumphosphat oder - je nach Wunsch - auch gesondert zugeführt werden. Vorzugsweise ist während des Verfahrens mindestens ausreichend Stickstoff vorhanden, wie zum Zellenwachstum und zur theoretischen Umwandlung sämtlichen Kohlenhydrate in Glutaminsäure erforderlich Ist. Die Gesamtmenge an Stickstoffausgangsmaterial kann auf einmal zu Beginn des Verfahrens oder während der Fermentation in Anteilen zugegeben werden.The medium also contains a common source of nitrogen, such as ammonia, urea or another assimilable nitrogen source of an organic or inorganic nature. A wide variety of ammonium compounds, such as, for example, ammonium chloride, ammonium sulfate, ammonium phosphate, etc., can be used. Nitrogen and phosphate ions can be added together in the form of ammonium phosphate or - if desired - also separately. Preferably, there is at least sufficient nitrogen present during the process as required for cell growth and the theoretical conversion of all carbohydrates to glutamic acid. The total amount of nitrogen starting material can be added all at once at the start of the process or in portions during the fermentation.

Wachstumshilfsfaktoren können dem Medium ebenfalls zugesetzt werden. Hierbei kann es sich um Biotip, Biotihäquivalente (d.h. Substanzen, die die biologische Wirkung von Biotip aufweisen) oder Biotinmuttersubetanzen (d.h. Substanzen, die unter den Fermentationsbedingungen in Biotip oder Biotinäquivalente umgewandelt werden) handeln. Andere sekundäre Wachstumsfaktoren, wie z.B. Thiamin und dgl., können ebenfalls verwendet werden. Geeignete Quellen für die wachstumshilfsfaktoren, die allein oder in Kombina-tion verwendet werden können, sind u.a. Fleischextrakt, Pepten, M aisquellwaseer und ein im Handel erhältliches Produkt, das als "Protopepton No. 366" bekannt ist und von der Firma Wilson & Company hergestellt wird. Die obigen Materialien sind im Handel erhältlich und enthalten vielfach gleichzeitig Spurenelemente.Growth aid factors can also be added to the medium. These can be Biotip, Bioti equivalents (ie substances that have the biological effect of Biotip) or biotin parent substances (ie substances that are converted into Biotip or biotin equivalents under the fermentation conditions) . Other secondary growth factors such as thiamine and the like can also be used. Suitable sources of the growth-helpful factors that can be used tion alone or in combination are, including meat extract, Pepten, M aisquellwaseer and a commercially available product that is "366 Protopepton No." known as and manufactured by Wilson & Company will. The above materials are commercially available and often contain trace elements at the same time.

In dem Fermentationsmedium können die verschiedensten Caleium-, Kalium-- und M agnesiumsalze verwendet werden, wie z.B. die Chloride, Sulfate, Phosphate und dgl.. In ähnlicher Weise können die Phosphat- und Sulfationen in Form der verschiedenartigsten Salze zugeführt werden. Obgleich man Salze verwenden kann, die sowohl das gewünschte Anion als auch das gewünschte Kation zuführen (wie z.B. Kaliumphosphat, Magnesiumsulfat), ist das erfindungsgemäße Verfahren in keiner Weise hierauf beschränkt. Diese Substanzen sind in Fermentationsmedien üblich, und die Auswahl der speziellen Substanzen sowie ihres Mengenverhältnisses liegt im Rahmen des fachmännischen Könnens. In the fermentation medium a variety Caleium-, Kalium-- and M can be used agnesiumsalze, as are supplied, for example, the chlorides, sulfates, phosphates and the like .. Similarly, phosphate and sulfate ions can be in the form of varied salts. Although it is possible to use salts which deliver both the desired anion and the desired cation (such as, for example, potassium phosphate, magnesium sulfate), the process according to the invention is in no way limited thereto. These substances are common in fermentation media, and the selection of the specific substances and their proportions is within the skill of the art.

Unter den sogenannten "Spurenelementen" werden gewöhnlich Mangan, Eisen, Zink, Kobalt und bisweilen weitere Elemente verstanden. Von diesen Elementen sind lediglich ' Spurenmengen erforderlich, die in den zur Herstellung der Fermentationsmedien verwendeten Materialien gewöhnlich vorhanden sind. Spurenelemente können auch leicht mit Hilfe von im Ihsndel erhältlichen Substanzen zugeführt werden.The so-called "trace elements" usually include manganese, Iron, zinc, cobalt and sometimes other elements understood. From these elements only 'trace amounts are required, which are used in the preparation of the fermentation media materials used are usually available. Trace elements can also easily with the help of substances available in the store.

SchließlA c h enthält das Nährmedium eine nichttoxische Alkalisubstanz bzw. Puffersubstanz, im den pH-Wert im gewünschten Bereich zu halten. Auch hier kann wieder eine gr@oPf Zahl der verschiedenartigsten nichttoxischen Materialien Verwendung fii:den. Wegen ihrer leichten Erhältlichkeit werden oftm alt; Calciumcarbonat oder Ammoniak (gzi;3f'örmiges Ammoniak oder Ammoniaklösung) verwendet, um der) pH-Wert der Ferrentationemedien auf dem gewünschten Wert zu halten. - Bei der Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens wird das Fermentationsmedium mit einer Kultur der Mikroorganismen beimpft und der Mikroorganismus innerhalb einer Anfangswachstumszeit auf das Nährmedium einsteilen gelassen. Diese Anfangszeit hängt u.a. von dem jeweiligen Mikroorganismus und der angewendeten Anfangskonzentration an Kohlenhydrat ab. Im allgemeinen beträgt diese Wachstumszeit jedoch etwa 1 - 10 Stunden. Während dieser Zeit stellen sich die Mikroorganismen nicht nur auf das Medium ein, sondern. es wird auch die Kohlenhydratkonzentration auf einen Wert innerhalb der erfindungsgemäß angewendeten Bereiche verringert, falls sie nicht bereits innerhalb dieses Bereichs liegt. Das anfangs eingesetzte Fermentationsmedium kann sämtliche zweckmäßigen sekundären Fermentationsnährstoffe enthalten. Der primäre Kohlenhydratnährstoff sollte jedoch in einer Gewichtsmenge von weniger als etwa 6 % und vorzugsweise in einer Menge von weniger als etwa 3 % vorhanden sein, am besten in einer Menge von weniger als etwa 2 %. Niedrigere Anfangskonzentrationen, wie z.B. von weniger als etwa 3 %, sind besonders dann vorzuziehen,wenn es sich bei dem in dem Anfangsmedium verwendeten Kohlenhydratnährstoff um ein biotinhaltiges Material handelt. Wenn bei der Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens biounempfindliche Mikroorganismen verwendet werden, ist es zweckmäßig, daß das Anfangsmedium nicht mehr als etwa 10 @ /Liter und vorzugsweise weniger als etwa 7,5,r/Liter Biotin enthält. Der pH-Wert des Mediums sollte zweckmäßig zwischen etwa 5 und etwa 9 und vorzugsweise zwischen etwa 6 und etwa 8 liegen. Weiterhin sollte das Medium auf einer Temperatur von etwa 20 - 40C und vorzugsweise von etwa 25 - 35°C gehalten werden. Sowohl die Temperatur- als auch die pfI-Bedingungen sollten während der ganzen Fermentationszeit auf den angegebenen Bereichen gehalten werden.Finally, the nutrient medium contains a non-toxic alkali substance or buffer substance to keep the pH value in the desired range. Here too can again use a large number of the most varied of non-toxic materials Usage fii: den. Often times because of their easy availability; Calcium carbonate or ammonia (gzi; 3-shaped ammonia or ammonia solution) used to adjust the) pH to keep the ferrentation media at the desired value. - At the implementation of the method according to the invention, the fermentation medium is with a culture of the microorganisms inoculated and the microorganism within a Let the initial growth time adjust to the nutrient medium. This starting time depends among other things of the respective microorganism and the applied initial concentration in carbohydrate. In general, however, this growth time is around 1-10 Hours. During this time, the microorganisms do not just stand on that Medium one, but rather. it will also reduce the carbohydrate concentration to a value within of the ranges used according to the invention, if they are not already within this area lies. The fermentation medium used initially can all contain appropriate secondary fermentation nutrients. The primary carbohydrate nutrient however, should be in an amount by weight of less than about 6% and preferably in be present in an amount less than about 3%, preferably in an amount of less than about 2%. Lower initial concentrations, such as less than about 3%, is particularly preferable when it is in the initial medium The carbohydrate nutrient used is a biotin-containing material. If at the implementation of the method according to the invention bio-insensitive microorganisms are used, it is desirable that the initial medium no more than about 10 @ / Liter and preferably less than about 7.5 r / liter Biotin contains. The pH of the medium should suitably be between about 5 and about 9 and preferably between about 6 and about 8. Furthermore, the medium should be on a temperature of about 20-40C and preferably of about 25-35 ° C will. Both the temperature and the pfI conditions should be used during the throughout the fermentation time are kept on the specified areas.

Nach der Anfangswachstumszeit, während der sich die Mikroorganismen auf das Medium einstellen und während der die Kohlenhydratkonzentration auf einen Wert unterhalb von etwa 2 % verringert wird' falls sie nicht bereits unterhalb dieses Wertes liegt, wird das Kohlenhydrat nach und nach zu dem Medium gegeben, um einen Kohlenhydratgehalt von nicht mehr als etwa 2 % aufrechtzuerhalten. Bei der bevorzugten Ausführungsform und wenn de- Biotingehalt des Mediums ein bedeutender Faktor ist und Kohlenhydrate mit bedeutendem niotingehalt verwendet werden, wird der Kohlen-' hydratgehalt des Mediums bei einem Wert von nicht mehr als etwa 1 % und zweckmäßig von nicht mehr als etwa 0,5 Gewo-% des Gesamtmediums gehalten. Der Begriff "nach und nach" umfaßt sowohl die kontinuierliche Zugabe des Kohlenhydrats als auch die periodische, d.h. anteilweise Zugabe geringer Mengen an Kohlenhydrat. Es versteht sich, daß auch die sekundären Nährstoffe nach und nach zu dem Medium gegeben werden können.After the initial growth period, during which the microorganisms adjust to the medium and during the the carbohydrate concentration to one Value below about 2% is reduced 'if it is not already below this Is the value, the carbohydrate is gradually added to the medium to a Maintain carbohydrate content of no more than about 2%. With the preferred Embodiment and when de-biotin content of the medium is a significant factor and carbohydrates with a significant niotin content are used, the carbohydrates' hydrate content of the medium at a value of not more than about 1% and expedient held at no more than about 0.5% by weight of the total medium. The term "after and after "includes both the continuous addition of the carbohydrate and the periodic, i.e. partial addition of small amounts of carbohydrate. It understands ensure that the secondary nutrients are also gradually added to the medium can.

Die Fermentation wird natürlich aerob und daher in Gegenwart von Sauerstoff und unter Rühren durchgeführt. Die optimale Sauerstoffaufnahmegeschwindigkeit und die optimale Rühr- bzw. Bewegungsgeschwindigkeit des Mediums variieren etwas in Abhängigkeit von dem jeweiligen Medium und den jeweils gezüchteten Mikroorganismen, liegen jedoch innerhalb des fachmännischen Könnens. Die Gesamtzeit der Fermentation kann innerhalb ziemlich breiter Bereiche variieren, ist jedoch im allgemeinen nach etwa 20 - 50 Stunden beendet. Gewöhnlich wird die Fermentation beendet, wenn keine weitere rasche Ansamm., Jung von Glutaminsäure im Medium mehr erfolgt. Die zum Medium zugegebene Gesamtmenge an Kohlenhydrat kann variieren, beträgt jedoch vorzugsweise mindestens 7,5 Gew.-% des Mediums. Es können leicht Kohlenhydratmengen von etwa 10 - 20 Gew.-1% des Mediums zugesetzt werden. Die Isolierung der L-Glutaminsäure aus der Fermentationsbrühe kann nach üblichen Verfahren mit nur geringen oder gar keinen Abänderungen erfolgen. Bei einem brauchbaren Isolierungsverfahren wird die Brühe zunächst zur Entfernung suspendierter Feststoffe filtriert. Sie kann dann nach verschiedenen Verfahren behandelt werden, um sehleimige Stoffe zu entfernen bzw. deren Konzentration au verringern. ?.B. kann die Flüssigkeit mit einem geringen Mengenanteil an Tannin oder Alkalilignin behandelt werden, wie es in den USA-Patentschriften 2 487 807 und 2 487 785 beschrieben wird. Alternativ kann sie auf einen Feststoffgehalt von etwa 25 - 45 Gew.-% eingeengt und sodann mit einem geringen Mengenanteil Bariumchlorid, Bariumhydroxyd oder dgl. bei einem pH-Wert oberhalb von 7 vermischt werden, um organische Verunreinigungen zu entfernen, wie es in der USA-Patentschrift 2 796 433 beschrieben wird. Die, gereinigte Flüssigkeit wird dann eingeengt und mit Schwefelsäure, Salzsäure oder dgl. auf einen pH-Wert von etwa 3,2 eingestellt, wobei die L-Glutaminsäure in guter Ausbeute auskristallisiert.The fermentation is of course aerobic and therefore carried out in the presence of oxygen and with stirring. The optimum oxygen absorption rate and the optimum stirring or moving speed of the medium vary somewhat depending on the particular medium and the respective cultured microorganisms, however, are within the skill of the art. The total time of fermentation can vary within rather wide ranges, but in general the one after about 20 - completed 50 hours. Fermentation is usually terminated when there is no further rapid accumulation of glutamic acid in the medium. The M edium the total added amount of carbohydrate can vary, but is preferably at least 7.5 wt .-% of the medium. Carbohydrate amounts of about 10-20% by weight of the medium can easily be added. The isolation of the L-glutamic acid from the fermentation broth can be carried out by conventional methods with little or no modification. One useful isolation procedure involves first filtering the broth to remove suspended solids. It can then be treated according to various methods in order to remove glutinous substances or to reduce their concentration. ? .B. the liquid to be treated, as described in the US Patents 2,487,807 and 2,487,785 with a small proportion of tannin or alkali lignin. Alternatively, it can be concentrated to a solids content of about 25-45% by weight and then mixed with a small amount of barium chloride, barium hydroxide or the like at a pH value above 7 in order to remove organic contaminants, as is the case in the USA - Patent 2,796,433. The purified liquid is then concentrated and adjusted to a pH of about 3.2 with sulfuric acid, hydrochloric acid or the like, the L-glutamic acid crystallizing out in good yield.

Es wurde gefunden, daß insbesondere bei höheren Zuckerkonzentrationen außer freier Glutaminsäure gebundene Glutaminsäure von den Organismen gebildet wird. Dement- sprechend kann das Fermentatioiismedium einer Hydrolyse unterworfen werden, um die in ihm enthaltenen Verbindungen zu freier Gltat,imiri:iäure zu hydrolysi ereno Auch die Hydrolyse karu wich üblichen Verf;iliren erfolgen, wie z.b. nach dem Säurphydrolyseverfahren dei, USA-Patentschrift 2 548 124. Führen das verwendete Medium und die angewende- ten Fermentationsbedingungen zu gar keinen oder nur unbe- deutenden Mengen an gebundener Glutaminsäure, braucht natürlich keine Hydrolyse durchgeführt zu werden. Die folgenden Beispiele dienen der weiteren Erläu- terung der Durchführinig des erfindungsgemäßen Verfahrens. Die Beispiele dienen lediglich der Erläuterung und be- grenzen in keiner !leise den Erfindungsbereich. Es wurden 5c;-Liter-Fermentationsbehälter aus rost- freiem Stahl verwendet, die anfangs mit 39,7 Litern wäßri- gem Nährmedium beschickt wunden. Dn:' Anfangsmedium wurde 30 Minuten bei 121°C sterilisiert und dann mit der angegebenen Impfkultur bei einer Temperatur von etwa 30 - 320C beimpft. Die Impfkultur stellte etwa 10 Vol,-% der Beschickung dar.It has been found that, particularly at higher sugar concentrations, bound glutamic acid in addition to free Glutamic acid is produced by organisms. Demented Speaking of which, the fermentation medium can undergo hydrolysis be subjected to the compounds contained in it to free Gltat, imiri: iäure zu hydrolysi ereno also the Hydrolysis karu gave way to the usual methods, such as by the acid hydrolysis process dei, USA patent 2 548 124. Do the medium used and the applied fermentation conditions with no or only unrelated significant amounts of bound glutamic acid of course no hydrolysis to be performed. The following examples serve to explain tion of the implementation of the method according to the invention. The examples are for explanation purposes only and in no way limit the scope of the invention. There were 5c; -liter fermentation vessels made of rust free steel is used, initially with 39.7 liters of water- wounds loaded according to the nutrient medium. Dn: 'Initial medium became Sterilized for 30 minutes at 121 ° C and then inoculated with the specified inoculum culture at a temperature of around 30-320C. The inoculum represented about 10% by volume of the charge.

Die 50-Liter-Fermentationsbehälter waren mit 4 Flügel-Rührerri von 15,2 cm Durchmesser versehen, i-4 die mit 300 Umdrehungen pro Minute betrieben wurden.The 50 liter fermentation vessels were equipped with 4 blade stirrers 15.2 cm in diameter, i-4 operated at 300 revolutions per minute.

Der Glutaminsäuregehalt wurde in den Beispielen nach dem üblichen Glutaminsäuredecarboxylase-Verfahren bestimmt, wie es u.a.'in Agricultural and Food Chemistry, Band 5, No. 6, Seite 448, Juni 1957, beschrieben wird. Beispiel 1 10,5 Liter des folgenden Fermentationsmediums wurden in den Fermentationsbehälter eingeführt, sterilisiert und mit Corynebacterium lilium NRRL-B-2243 beimpft: Fermentationsmedium Gew.-% des Mediums K2HP04 0,2 MgS04.7H20 0,2 (NH4)2S04 0,1 Maisquellflüssigkeit-Feststoffe 0,2 FeS04 0,01 CaC12 0,025 MnS04#H20 0,02 Zinkacetat 0,0005 Saccharose (Uerelose") 16,3 Biotin (gereinigt) 3,5 r /Liter Der pH-Wert des Mediums wurde mit Ammoniak auf etwa 7,0 .gehalten und die Fermentation 45 Minuten fortschreiten gelassen, wonach keine bedeutende Ansammlung von Glutaminsäure mehr eintrat.In the examples, the glutamic acid content was determined by the customary glutamic acid decarboxylase method, as described, inter alia, in Agricultural and Food Chemistry, Volume 5, No. 6, page 448, June 1957. Example 1 10.5 liters of the following fermentation medium were introduced into the fermentation vessel, sterilized and inoculated with Corynebacterium lilium NRRL-B-2243: Fermentation Medium% by weight of the medium K2HP04 0.2 MgS04.7H20 0.2 (NH4) 2S04 0.1 Corn steep liquor solids 0.2 FeS04 0.01 CaC12 0.025 MnS04 # H20 0.02 Zinc acetate 0.0005 Sucrose (Uerelose ") 16.3 Biotin (purified) 3.5 r / liter The pH of the medium was maintained at about 7.0 with ammonia and the fermentation allowed to proceed for 45 minutes, after which no significant accumulation of glutamic acid occurred.

Die Analyse der Fermentationsflüssigkeit zeigte eine Ausbeute an Glutaminsäurewertstoffen von 68,7 mg/ccm, 68 Gew.-@ der insgesamt vorhandenen Glutaminsäure (gebundene Glutaminsäure eingeschlossen) lagen in Form von freier Glutaminsäure vor, Bezogen auf die in der Lösung vorhandene Anfangsmenge von .16,3 % Zucker entsprach die Ausbeute einer molekularen Umwandlung vön 56,1 9b. Beispiel 2 Zur Erläuterung der Vorteile des erfindungagemäBen Verfahrens wurde eine zweite Fermentation unter Verwendung von 39,7 Litern des folgenden Anfangsmediums durchgeführt: Fermentationsmedium Gewo-% des Mediums K2F04 0,2 MgS0497H20 092 (NH4)2S04 0,1 Maisquellflüssigkeit-Feststoffe 0,2 FeS04 0,01 CaC12 0,025 MnS04#H20 0,02 Zinkacetat 0,0005 Saocharose ("Cerelose") 2% Biotin (gereinigt) 3,5 t /Liter Das Medium wurde sterilisiert, mit Corynebacteritun lilium NRRL-B-2243 beimpft und während der ganzen Fermentationszeit mit Hilfe von Ammoniak bei etwa pH 7,0 gehalten.The analysis of the fermentation liquid showed a yield of glutamic acid valuable substances of 68.7 mg / ccm, 68% by weight of the total glutamic acid present (including bound glutamic acid) was in the form of free glutamic acid, based on the initial amount of .16 present in the solution .3% sugar corresponded to the yield of a molecular conversion of 56.1 9b. Example 2 To explain the advantages of the process according to the invention, a second fermentation was carried out using 39.7 liters of the following initial medium: Fermentation medium% by weight of the medium K2F04 0.2 MgS0497H20 092 (NH4) 2S04 0.1 Corn steep liquor solids 0.2 FeS04 0.01 CaC12 0.025 MnS04 # H20 0.02 Zinc acetate 0.0005 Saocharose ("Cerelose") 2% Biotin (purified) 3.5 t / liter The medium was sterilized, inoculated with Corynebacteritun lilium NRRL-B-2243 and kept at about pH 7.0 with the aid of ammonia during the entire fermentation period.

Zwischen 5 und 25 Stunden nach Züchtungsbeginn wurden 791 ccm/Stunde einer 50 %igen wäßrigen Lösung von "Cerelose" nach und nach zu dem Medium gegeben. Zwischen 27 und 41 Stunden nach Züchtungsbeginn wurden weitere 475 ccm einer 50 %igen wäßrigen "Cerelose'"-Lösung zu dem Medium gegeben. Die "Cerelose"-Zufuhr wurde nach 41 Stunden beendet und die Fermentation nach 45 Stunden abgebrochen.Between 5 and 25 hours after the start of cultivation, the rate was 791 ccm / hour a 50% aqueous solution of "Cerelose" gradually added to the medium. Between 27 and 41 hours after the start of breeding, another 475 ccm of a 50 % strength aqueous "Cerelose '" solution was added to the medium. The "cerelose" feed was ended after 41 hours and the fermentation stopped after 45 hours.

Während der ganzen Fermentationszeit wurden dem Fermentationsmedium insgesamt 16,9 gZucker zugeführt und in ihm verbraucht. Zum Schluß enthielt das Fermentationsmedium 71,4 mg/ccm Glutaminsäurewertstoffe, wovon 72,2 gb in Form von freier Glutaminsäure vorlagen. Diese Ausbeute entspricht einer molekularen Umwandlung von 73,1 %, während nach Beispiel 1 nur eine molekulare Umwandlung von 56,1 % erhalten worden war.The fermentation medium was used throughout the fermentation period a total of 16.9 g of sugar is supplied and consumed in it. At the end that contained Fermentation medium 71.4 mg / ccm glutamic acid valuable substances, of which 72.2 gb in the form of free glutamic acid were present. This yield corresponds to a molecular conversion of 73.1%, while according to Example 1 only obtained a molecular conversion of 56.1% had been.

Beispiel 3 Es wurde eine ansatzweise Fermentation unter Verwendung von Corynebacterium lilium NRRh#B-2243 in 39,7 Litern des folgenden Nährmediums durchgeführt Fermentationsmedium Gew,-g6 des Mediums K2HP04 0,2 MgS04# 7H20 0,2 (NH4)2S04 0,1 ' Maisquellflüssigkeit-Feststoffe 0,2 FeS04 0,01 CaC12 0,025 MnS04#H20 0,02 Zinkacetat 0,0005 Rübenmelasse 30 Die Fermentation wurde bei einem pH-Wert von etwa 7,0 für eine Gesamtzeit von 45 Stunden durchgeführt, Die Rübenmelassen enthielten 50 96 Saecharose und 0,043 j'Biotin je g , so daß im Fermentationsmedium 15 % Zucker und 13,0 rBiotin/Ziter enthalten waren, Bei Beendigung der Fermentation enthielt das Medium 8,8 g/ocm Glutaminsäurewertstoffe, von denen nur 14,8 % in Form von freier Glutaminsäure vorlagen, Beispiel 4 Eine zweite Fermentation mit Corynebaeterium lilium NRRZ-B-2243 wurde durchgeführt, indem nach und nach mit Rübenmelassen beschickt wurde, Die Zusammensetzung des anfänglich verwendeten Nährmediums war wie folgt: Fermentationsmedium Gew.-% des Mediums K2HP04 0,2 MgS04 47H2 0 0 , 2 (NH4)2504 0,1 Maisquellflüssigkeit-Feststoffe 0,2 FeS04 0,01 CaC12 0,025 MnS04'H20 0,02 Zinkacetat 0,0005 Saecharose ("Cerelose") 0,5 Nach einer Anfangszüchtungszeit von 5 Stunden wurde mit der nach und nach erfolgenden Zugabe von Rübenmelassen begonnen. Zwischen 5 und 25 Stunden nach Züchtungsbeginn wurden 475 ccm Rübenmelassen je Stunde zu dem Medium gegeben. Zwischen 27 und 41 Stunden nach Züchtungsbeginn wurden weitere 285 ccm Rübenmelassen je Stunde nach und nach zu dem Medium gegeben. Mit der Beschickung wurde nach 41 Stunden aufgehört und die Fermentation nach 45 Stunden beendet. Example 3 Batch fermentation was carried out using Corynebacterium lilium NRRh # B-2243 in 39.7 liters of the following nutrient medium Fermentation medium wt, -g6 of the medium K2HP04 0.2 MgS04 # 7H20 0.2 (NH4) 2S04 0.1 Corn steep liquor solids 0.2 FeS04 0.01 CaC12 0.025 MnS04 # H20 0.02 Zinc acetate 0.0005 Beet molasses 30 The fermentation was carried out at a pH of about 7.0 for a total time of 45 hours. The beet molasses contained 50,96 saecharose and 0.043% biotin per g, so that the fermentation medium contained 15% sugar and 13.0% biotin / citer At the end of the fermentation the medium contained 8.8 g / ocm glutamic acid valuable substances, of which only 14.8% were present in the form of free glutamic acid. Example 4 A second fermentation with Corynebaeterium lilium NRRZ-B-2243 was carried out by following and was charged after using beet molasses, the composition of the nutrient medium initially used was as follows: Fermentation Medium% by weight of the medium K2HP04 0.2 MgS04 47H2 0 0.2 (NH4) 2504 0.1 Corn steep liquor solids 0.2 FeS04 0.01 CaC12 0.025 MnS04'H20 0.02 Zinc acetate 0.0005 Saecharose ("Cerelose") 0.5 After an initial cultivation time of 5 hours, the gradual addition of beet molasses was started. Between 5 and 25 hours after the start of cultivation, 475 cc of beet molasses per hour were added to the medium. Between 27 and 41 hours after the start of cultivation, a further 285 cc of beet molasses per hour were gradually added to the medium. The feed was stopped after 41 hours and the fermentation stopped after 45 hours.

Die als Ausgangsmaterial verwendeten Melassen enthielten etwa 0,04 YBiotin je g, so daB die zu dem Fermentationsmedium gegebene Gesamtmenge an Biotin etwa 10,38 @ /Liter betrug.The molasses used as the starting material contained about 0.04 YBiotin per g, so that the total amount of biotin added to the fermentation medium was about 10.38 @ / liter.

Zum SchluB enthielt die Fermentationsbrühe 50,9 mg/ ccm Glutaminsäurewertstoffe, von denen praktisch 100 % in Form von freier Glutaminsäure vorlagen. Diese Ausbeute entspricht einer 73,6 %igen molekularen Umwandlung. Insgesamt 13,06 % Zucker wurden während des ganzen Verfahrens zugesetzt. ' Beispiel 5 Zur weiteren Erläuterung der Vorteile des erfindungsgemäßen Verfahrens wurde eine Fermentation unter Verwendung von 10975 Litern des folgenden Anfangsmediums durchgeführt: Fermentationsmedium Gew.-% des Mediums Rübenmelassen 3,0 "Pharmamedia" 0,3 M aisquellflüssigkeit-Feststoffe 0,1 (NH4)2S04 0,1 K2HP04 0,4 Biotin 2 /Liter Das Medium wurde sterilisiert und mit Brevibacterium divaricatum NRRL-2312 beimpft, Das Medium wurde während der ganzen Fermentationszeit mit Ammoniak bei etwa pH 7,5 gehalten.In the end, the fermentation broth contained 50.9 mg / ccm glutamic acid valuable substances, of which practically 100% was in the form of free glutamic acid. This yield corresponds to a 73.6% molecular conversion. A total of 13.06% sugar was added throughout the procedure. Example 5 To further explain the advantages of the process according to the invention, a fermentation was carried out using 10975 liters of the following initial medium: Fermentation Medium% by weight of the medium Beet molasses 3.0 "Pharmamedia" 0.3 M aiswell liquid solids 0.1 (NH4) 2S04 0.1 K2HP04 0.4 Biotin 2 / liter The medium was sterilized and enriched with Brevibacterium divaricatum NRRL-2312, the medium was inoculated during kept at about pH 7.5 with ammonia throughout the fermentation period.

Zwischen 5 und 25 Stunden nach Züchtungsbeginn wurden 475 ccm Rübenmelassen je Stunde nach und nach zu dem Medium gegeben. Zwischen 27 und 45 Stunden nach Züchtungsbeginn wurden weitere 285 ccm Rübenmelassen je Stunde zu dem Medium gegeben. Die Beschickung wurde nach 45 Stunden und die Fermentation nach 55 Stunden beendet, Während der ganzen Zeit der Fermentation waren insgesamt 15,2 % Zucker zugesetzt und in dem Fermentationomedium verbraucht worden. Am Sohluß enthielt das Fermentationsmedium 68,3 mg/ccm Glutsminsäurewertstoffe, von denen 53,8 gb in Form von freier Glutamineäure vorlagen. Diese Ausbeute entspricht einer molekularen Umwandlung von 58,7 9@.Between 5 and 25 hours after the start of cultivation, 475 cc of beet molasses per hour were gradually added to the medium. A further 285 cc of beet molasses per hour were added to the medium between 27 and 45 hours after the start of cultivation. The feed was stopped after 45 hours and the fermentation after 55 hours during the whole period of fermentation had been added in total 15.2% sugar and consumed in the Fermentationomedium. The fermentation medium at the sole contained 68.3 mg / ccm glutamic acid valuable substances, of which 53.8 gb were in the form of free glutamic acid. This yield corresponds to a molecular conversion of 58.7 9 @.

Beispiel 6 Eine Fermentation wurde unter Verwendung von 10,75 Litern des folgenden Anfangsmediume durchgeführt: Fermentationsmedium Gew.-96 des Mediums Maisquellflüssigkeit-Feststoffe 0,2 FOS04#7H20 0,01 0a012 0,025 MnS04#H20 0,02 Zinkaoetat 0,0005 Qluoose (Dextrose) 0,5 ä2HP04 0,2 xgso4 0,2 (NH 4)2S0 4 0,1 Das M edium wurde sterilisiert und mit Nierocoeoue glutamieus ATCC 13032 beimpft. Das Medium wurde während der ganzen Fezen entationszeit mit Ammoniak bei etwa pH 7,5 gehalten, Zwischen 5 und 25 Stunden nach Züchtungsbeginn wur- den 475 ccm Rübenmelassen je Stunde nach und nach zu dem. Medium gegeben. Zwischen 27 und 41 Stunden nach Züchtungsbeginn wurden weitere 285 ccm Rübenmelassen je Stunde zu dem Medium gegeben. Mit dem Beschicken wurde nach 41 Stunden und mit der Fermentation nach 55 Stunden aufgehört.EXAMPLE 6 A fermentation was carried out using 10.75 liters of the following initial Mediume: Fermentation medium by weight 96 of the medium Corn steep liquor solids 0.2 FOS04 # 7H20 0.01 0a012 0.025 MnS04 # H20 0.02 Zinc acetate 0.0005 Qluoose (dextrose) 0.5 ä2HP04 0.2 xgso4 0.2 (NH 4) 2S0 4 0.1 The medium was sterilized and inoculated with Nierocoeoue glutamieus ATCC 13032. The medium was kept at about pH 7.5 with ammonia throughout the entire period of fermentation . Between 5 and 25 hours after the start of cultivation, 475 ccm of beet molasses per hour were gradually added . Medium given. A further 285 cc of beet molasses per hour were added to the medium between 27 and 41 hours after the start of cultivation. Loading was stopped after 41 hours and fermentation was stopped after 55 hours.

Während der ganzen Fermentationazeit wurden insgesamt 13,2 ,°> Zucker zugesetzt und in dem Fermentationsmedium verbraucht. Am Schluß enthielt das Fermentations- von medium 56,7 zn;/`c:cm Glutaminsäurewertstoffe, wot"n 88,3% in Form von freier Glutaminsäure vorlagen. Diese Ausbeute entspricht: f hier molekularen Umwandlung von 56,0 >>. Ilei-spiel 'l Eine wurde unter Verwendung von 10,75 folgenden Anfangsmediums durchgeführt: Fermentatioi):;r"c ci:-#1iin Gewo -# des MediiaG Rübenmc;a assei-, :3 ,0 npliai@nn edi@: " 0, 3 Mais quelll'lgl,ei t-l'estatoffe 0, 1 (NH4)2504 0,1 R2HP04 0,4 Biotin 2 r /Liter Das Medium wurde sterilisiert und mjt M icrocoecus glutamicus ATCC 130511 beimpft. Das Mediums wurde während der ganzen Fermentationszeit mit Ammoniak bei etwa pH 7,5 gehalten. Zwischen 5 und 25 Stunden nach Züchtungsbeginn wurden 475 ccm Rübenmelassen je Stunde nach und nach zu dem Medium gegeben. Zwischen 27 und 45 Stunden nach Züchtungsbeginn wurden weitere 285 ccm Rübenmelassen je Stunde zu dem Medium gegeben. Mit dem Beschicken wurde nach 45 Stunden und mit der Fermentation nach 55 Stunden aufgehört.During the entire fermentation period, a total of 13.2% sugar was added and consumed in the fermentation medium. At the end the fermentation from medium 56.7 zn; / `c: cm glutamic acid valuable substances, wot" n 88.3% were in the form of free glutamic acid. This yield corresponds to: f here molecular conversion of 56.0 >>. Ilei-game 'l One was made using 10.75 of the following starting medium: Fermentatioi) :; r "c ci: - # 1iin Gewo - # des MediiaG Beet mc; a assei-,: 3, 0 npliai @ nn edi @: "0, 3 Mais quelll'l gl, ei t-l'estatoffe 0, 1 (NH4) 2504 0.1 R2HP04 0.4 Biotin 2 r / liter The medium was sterilized and inoculated with M icrocoecus glutamicus ATCC 130511. The medium was kept at about pH 7.5 with ammonia throughout the fermentation period. Between 5 and 25 hours after the start of cultivation, 475 cc of beet molasses per hour were gradually added to the medium. A further 285 cc of beet molasses per hour were added to the medium between 27 and 45 hours after the start of cultivation. With the feeding was stopped after 45 hours and the fermentation after 55 hours.

Während der ganzen Fermentationszeit wurden insgesamt 1592 9& Zucker zu dem Fermentationsmedium gegeben und in ihm verbraucht. Zum Schluß enthielt das Fermentationsmedium 72,7 mg/Ccm Glutaminsäurewertstoffey wovon 73,3 % in Form von freier Glutaminsäure vorlagen. Diese Ausbeute entspricht einer molekularen Umwandlung von 62,5 p.During the entire fermentation period, a total of 1592% sugars were added to and consumed in the fermentation medium. At the end of the fermentation medium contained 72.7 mg / cm3 of glutamic acid valuable substances, of which 73.3% was in the form of free glutamic acid. This yield corresponds to a molecular conversion of 62.5 p.

Beispiel 8 Eine Fermentation wurde unter Verwendung von 10,75 Litern des folgenden Anfangsmediums durchgeführt: Fermentationsmedium Gew.-% des Mediums Rübenmelassen 3,0 "Pharmamedia't 093 M aisquellflüssigkeit-Feststoffe 091 (NH4)2S04 0,1 K2HP04 094 Biotin 2 r /Liter Das Medium wurde sterilisiert und mit Mieroeocous glutamicus ATCC 13032 beimpft. Das Medium wurde während der. ganzen Fermentationszeit mit Hilfe von Ammoniak bei etwa pH 7,5 gehalten. Zwischen 5 und 25 Stunden nach Beginn des Züchtens wurden 475 ccm Rübenmelassen je Stunde nach und nach zum Medium gegeben. Zwischen 27 ufd und 45 Stunden nach Züchtungsbeginn würden weitere 285 ccm Rübenmelassen je Stunde zu dem Medium gegeben. Mit dem Beschicken wurde nach 45 Stunden und mit der Fermentation nach 55 Stunden aufgehört, Während der ganzen Fermentationszeit wurden dem Fermentationamedium insgesamt 15,2 % Zucker zugesetzt und in dem Fermentationsmedium verbraucht. Am Schluß enthielt das Fermentationsmedium 56,7 mg/ccm Glutaminsäurewertatoffe, von denen 75,9 % in Form von freier Glutaminsäure vorlagen. Diese Ausbeute entspricht einer molekularen Umwandlung von 48,6 %, Beispiel 9 Eine Fermentation wurde unter Verwendung von 10,75 Litern des folgenden Anfangsmediums durchgeführt: Fermentationämedium Gew,-% des Mediums Rübenmelassen 11,0 "Pharmamedia" 0,3 Maisquellflüssigkeit-Feststoffe 0,1 (NH4)2S04 0,1 K2HP04 094 Das Medium wurde sterilisiert und mit Corynebacterium lilium NRRL-B-2243 beimpft. Das Medium wurde während der ganzen Fermentationszeit mit Hilfe von Ammoniak auf etwa pH 7,5 gehalten. Example 8 Fermentation was carried out using 10.75 liters of the following starting medium: Fermentation Medium% by weight of the medium Beet molasses 3.0 "Pharmamedia't 093 Source fluid solids 091 (NH4) 2S04 0.1 K2HP04 094 Biotin 2 r / liter The medium was sterilized and inoculated with Mieroeocous glutamicus ATCC 13032. The medium was during the. The whole fermentation time is kept at about pH 7.5 with the help of ammonia. Between 5 and 25 hours after the start of cultivation, 475 cc of beet molasses per hour were gradually added to the medium. Between 27 ufd and 45 hours after the start of cultivation, a further 285 cc of beet molasses per hour would be added to the medium. Charging was stopped after 45 hours and fermentation after 55 hours. During the entire fermentation time, a total of 15.2% sugar was added to the fermentation medium and consumed in the fermentation medium. At the end the fermentation medium contained 56.7 mg / cc of glutamic acid valencies, of which 75.9% was in the form of free glutamic acid. This yield corresponds to a molecular conversion of 48.6%, Example 9 Fermentation was carried out using 10.75 liters of the following starting medium: Fermentation medium% by weight of the medium Beet molasses 11.0 "Pharmamedia" 0.3 Corn steep liquor solids 0.1 (NH4) 2S04 0.1 K2HP04 094 The medium was sterilized and inoculated with Corynebacterium lilium NRRL-B-2243. The medium was kept at about pH 7.5 with the aid of ammonia during the entire fermentation period.

Zwischen 10 und 15 Stunden nach Beginn des Züchtens wurden 514 ccm Rübenmelassen je Stunde nach und nach zu dem Medium gegeben. Zwischen 16 und 44 Stunden nach Züchtungsbeginn wurden dann weitere 152 ccm Rübenmelassen je Stunde zu dem Medium gegeben. Mit dem Beschicken wurde nach 44 Stunden und mit der Fermentation nach 63 Stunden aufgehört.Between 10 and 15 hours after the start of the cultivation, it became 514 cc Beet molasses added gradually to the medium every hour. Between 16 and 44 Hours after the start of cultivation, a further 152 cc of beet molasses were then added per hour given to the medium. The loading took place after 44 hours and the fermentation stopped after 63 hours.

Während der ganzen Fermentationszeit wurden dem Fermentationamedium insgesamt 17,9 °`> Zucker zugesetzt und in ihm verbraucht. Zum 'L)'cliliiß enthielt das Fermentationsmedium 78,0 mg/ccm Glutarj!ilisäiarewertstoi'fe, wovon 83,1 % in Forrit von freier Glutamingiiijre vorlagen. Diese Ausbeute entsprichte einer n,ol ekularen Umwandlung von 56,9 9,.During the entire fermentation period, a total of 17.9 ° of sugar was added to the fermentation medium and consumed in it. The fermentation medium contained 78.0 mg / cc of glutaric / iliacal values, 83.1% of which was in the form of free glutamine. This yield corresponds to an n, olecular conversion of 56.9 9.

Die in den Beispielen 5 - @@ erzielten Umwandlungen sind bedeutend höher als die Umwandlungen bei Versuchen, bei denen die gesamte Menge an Kohlenhydratnährstoff dem Anfangsmedium zugesetzt wurde.The conversions achieved in Examples 5 - @@ are significant higher than the conversions in experiments involving the full amount of carbohydrate nutrient was added to the initial medium.

Claims

P a t e n t a n s p r ü c h e 1. Process for the production of glutamic acid, wherein an aqueous carbohydrate medium containing a source of nitrogen with The help of a biological microorganism formed by a glutamic acid producing microorganism Catalyst system is fermented aerobically, characterized in that in the later At the fermentation stage, a carbohydrate material is gradually added to the medium is to have a carbohydrate content of not more than about 2 wt. 9d maintain.

2. The method according to claim 1, characterized in that the Carbohydrate material is gradually added to the medium to bring about a carbohydrate concentration of no more than about 1% by weight.

3. The method according to claim 1 or 2, the microorganism being an oleotin-sensitive, glutamic acid-forming Microorganism is used, characterized in that a biotin-containing Carbohydrate material containing no more than about 0.3 biotin per gram, according to and after gives to the medium to have a carbohydrate content of no more in the medium than about 1% by weight.

4. The method according to claim 1, 2 or 3, characterized in that a total of at least about 7.5% by weight of carbohydrate are added during the fermentation, 5. The method according to claim 1, 2, 3 or 4, characterized in that a total of about 10 - 20 wt .-% carbon hydrate be added to the medium. 6. The method according to claim 1 -5, characterized marked records that are used as micro-organism those of the genera Corynebaoterium, Mierococous, Brevibaoterium, Micro.-baoterium or Bacillus used. 7. The method of claim 1 or 2, characterized in that the carbohydrate material is gradually added to the medium to maintain a carbohydrate content of no more than about 0.5 % by weight . B. The method of claim 1 or 2, characterized in that the carbohydrate material about 0.02 - 0.3 containing biotin per g. 9. The method according to claim 1 or 2, characterized in that the carbohydrate material contains about 0.03-0.174r biotin per g. 10. The method according to claim 1-9, characterized in that beet molasses is used as the carbohydrate material.