DE112007001823T5 - Testing the effectiveness of preservatives - Google Patents
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Abstract
System zum Prüfen der antimikrobiellen Wirksamkeit von Konservierungsmitteln, mit einem Biosensor, der zumindest einen mikrobiellen Stamm enthält, der aus der Gruppe von Mikroorganismen ausgewählt ist, der einen von Aufsichtsbehörden anerkannten Schlüssel-Mikroorganismus zum Testen der Konservierungs-Wirksamkeit umfasst, wobei der Mikroorganismus so manipuliert ist, dass er einen konstitutiven Promotor hat, der mit einer lux- oder luc-Gen-Kassette verknüpft ist, um ein spezifisches erfassbares Signal zu erzeugen, das die Lebenfähigkeit des Mikroorganismus berichtet.A system for testing antimicrobial efficacy of preservatives, comprising a biosensor containing at least one microbial strain selected from the group of microorganisms comprising a regulatory recognized key microorganism for testing preservation efficacy, wherein the microorganism so manipulates by having a constitutive promoter linked to a lux or luc gene cassette to produce a specific detectable signal reporting the viability of the microorganism.
Description
Gebiet der ErfindungField of the invention
Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf ein System und Verfahren zum Püfen der antimikrobiellen Wirksamkeit von Konservierungsmitteln (AET oder PET) für die pharmazeutischen und kosmetischen/Hygieneartikel-Industrie.The The present invention relates to a system and method to test the antimicrobial efficacy of preservatives (AET or PET) for the pharmaceutical and cosmetic / hygiene industry.
Hintergrund der ErfindungBackground of the invention
Die Prüfung der Wirksamkeit von Konservierungsmitteln auf die antimikrobielle Konservierungs-Aktivität ist eine gesetzliche Vorschrift für pharmazeutische und kosmetische Produkte in den meisten Ländern, um die erforderliche oder geforderte Lagerfähigkeit für die Produkte zu sichern, unabhängig davon, ob antimikrobielle Konservierungsmittel als Zusätze in derartige Produkte eingefügt sind oder diese Produkte von Haus aus antimikrobielle Eigenschaften aufweisen.The Testing the effectiveness of preservatives on the Antimicrobial preservation activity is a legal Regulation for pharmaceutical and cosmetic products in most countries to the required or required To ensure shelf life for the products, regardless of whether to use antimicrobial preservatives as additives in such products are inserted or these products of House have antimicrobial properties.
Die Prüfung der Wirksamkeit von Konservierungsmitteln beruht normalerweise auf konventionellen mikrobiologischen Zellkultur-Techniken, bei denen eine Probe des pharmazeutischen oder kosmetischen Produktes mit einer mikrobiellen Suspension einer Population eines von den Regelungsbehörden anerkannten Schlüssel-Mikroorganismus beimpft wird, normalerweise einer von Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Enterobacter aerogenes oder Pseudomonas aeruginosa, oder von den Pilzen Candida albicans oder Aspergillus niger oder Hefe-Zygosaccharomyces rouxii. Das Beimpfen sollte normalerweise eine vorgegebene Anzahl von Kolonie bildenden Einheiten (CFU) haben, und die Überlebensrate wird durch eine aerobe Plattenzählung nach einer geeigneten Inkubationszeit bestimmt, normalerweise von 24 bis 48 Stunden, jedoch länger für die Pilze, wobei die beimpfte oder inokulierte Probe im Allgemeinen unter Verwendung der Oberflächen-Spreizung oder Plattengieß-Technik ausgebreitet wird. Die Ergebnisse werden dann mit den gesetzlichen Vorschriften verglichen, die beispielsweise eine 99,9%ige Verringerung der Bakterien oder der Hefe in einer definierten Periode der Beaufschlagung der Produktprobe mit dem Mikroorganismus fordern können.The Testing the effectiveness of preservatives is based normally on conventional microbiological cell culture techniques, where a sample of the pharmaceutical or cosmetic product with a microbial suspension of a population of one of the Regulatory bodies recognized key microorganism usually one of Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Enterobacter aerogenes or Pseudomonas aeruginosa, or from the fungi Candida albicans or Aspergillus niger or yeast Zygosaccharomyces rouxii. Inoculation should normally be a predetermined number of colony forming units (CFU), and survival rates is determined by an aerobic plate counting for a suitable Incubation period, usually from 24 to 48 hours, however longer for the mushrooms, with the inoculated or inoculated sample generally using surface spreading or plate casting technique is spread. The results are then compared to the legal regulations, for example, a 99.9% reduction of bacteria or yeast in a defined Period of exposure of the product sample to the microorganism can demand.
Obwohl das Prüfen der Wirksamkeit von Konservierungsmitteln eine Formulierungs- und Regelungs-Notwendigkeit mit gut festgelegten Protokollen ist, wie sie beispielsweise in dem englischen, US- und europäischen Pharmakopöen oder Arzneibüchern festgelegt ist, sind die traditionellen Kultur-Techniken für die Prüfung sehr zeitraubend und mühsam und erfordern ein umfangreiches Prüfen von Hand ohne eine Möglichkeit der Automatisierung. Diese konventionellen Techniken ermöglichen somit keine schnelle Überprüfung mit hohem Durchsatz und werden in vielen Fällen von dem Hersteller im Unterauftrag an ein unabhängiges mikrobiologisches Testlabor mit den sich daraus ergebenden weiteren Verzögerungen und Kosten vergeben. In letzteren Jahren wurden Versuche gemacht, die Wirksamkeit des AET-Prozesses durch eine luminometrische Echtzeit-Überwachung der ATP-Pegel von Mikroorganismus-Testzellen als eine Anzeige der lebensfähigen mikrobiellen Biomasse gefolgt von einer Überprüfung mit einem Testsubstrat zu verbessern. Dies muss sich jedoch noch als ein zuverlässiger Ersatz der konventionellen Zellkultur-Lösung erweisen.Even though checking the effectiveness of preservatives Formulation and regulatory need with well-defined Protocols is, as for example in the English, US and European pharmacopoeia or pharmacopoeias is established, are the traditional culture techniques for the test very time consuming and tedious and require Extensive testing by hand without a possibility automation. These conventional techniques thus enable no fast check with high throughput and are in many cases subcontracted by the manufacturer to an independent microbiological test laboratory with the resulting further delays and costs forgive. In the latter years, attempts were made to increase the effectiveness of the AET process by a luminometric real-time monitoring the ATP level of microorganism test cells as an indication of viable microbial biomass followed by a review to improve with a test substrate. However, this still has to be done as a reliable replacement of the conventional cell culture solution prove.
Es ist ein allgemeines Ziel der vorliegenden Erfindung, ein verbessertes System zum Prüfen die Wirksamkeit von Konservierungsmitteln-zu schaffen, das einen oder mehrere der Nachteile der konventionellen Testsysteme beseitigt und erhebliche Zeit- und Kosteneinsparungen während der Entwicklung oder der Produktion von pharmazeutischen oder kosmetischen Produkten ergibt.It is a general object of the present invention, an improved System for testing the effectiveness of preservatives-to create one or more of the disadvantages of the conventional one Test systems eliminated and significant time and cost savings during the development or production of pharmaceutical or cosmetic products.
Zusammenfassung der ErfindungSummary of the invention
Gemäß einem ersten Gesichtspunkt der vorliegenden Erfindung wird ein System zum Prüfen der antimikrobiellen Wirksamkeit von Konservierungsmitteln geschaffen, das einen Biosensor umfasst, der zumindest einen mikrobiellen Stamm beinhaltet, der aus der Gruppe von Mikroorganismen ausgewählt ist, die einen von den Aufsichtsbehörden anerkannten Schlüssel-Mikroorganismus für das Testen der Konservierungs-Wirksamkeit umfassen, wobei die Mikroorganismen so behandelt sind, dass sie einen konstitutiven Promoter aufweisen, der mit einer Lux- oder Luc-Gen-Kassette verknüpft ist, um ein spezifisches erfassbares Signal zu erzeugen, das die Lebensfähigkeit des Mikroorganismus berichtet.According to one The first aspect of the present invention is a system for testing the antimicrobial efficacy of preservatives created, which includes a biosensor, the at least one microbial Strain that is selected from the group of microorganisms, the one recognized by the regulatory authorities key microorganism for testing the preservative efficacy, wherein the microorganisms are treated so that they have a constitutive Promoter associated with a Lux or Luc gene cassette is to generate a specific detectable signal that the Viability of the microorganism reported.
Dieses Signal wird in effektiver Weise in Echtzeit in irgendeinem Punkt nach einer anfänglichen Beimpfung oder Inokulation geliefert, und somit beseitigt dieses System die lange Verzögerung der Verfügbarkeit des Ergebnisses, die beim Stand der Technik von Natur aus gegeben ist, während die Menge und Qualität der erzeugten Daten vergrößert und die erforderliche Arbeit verringert wird. Das Ergebnis ist ein schnelles Untersuchungswerkzeug für die Auswertung und Optimierung von Konservierungssystemen von pharmazeutischen und kosmetischen Entwicklungs-Zusammensetzungen und Formulierungen.This Signal is effectively in real time at some point delivered after an initial inoculation or inoculation, and thus this system eliminates the long delay the availability of the result, in the prior art is given by nature, while the quantity and quality the data generated and the required Work is reduced. The result is a quick investigation tool for the evaluation and optimization of preservation systems of pharmaceutical and cosmetic development compositions and formulations.
Besonders bevorzugt wird der Mikroorganismus aus der im Arzneibuch spezifizierten Gruppe von Mikroorganismen/von den Aufsichtsbehörden anerkannten Schlüssel-Mikroorganismen ausgewählt, die Folgendes umfassen: Escherichia coli; Pseudomonas aeruginosa; Enterobacter aerogenes; Candida albicans; Staphylococcus aureus; Aspergillus niger; und Zygosaccharomyces rouxii.More preferably, the microorganism is selected from the group of microorganisms specified in the pharmacopoeia / key microorganisms recognized by the regulatory authorities, which include: Escherichia coli; Pseudomo nas aeruginosa; Enterobacter aerogenes; Candida albicans; Staphylococcus aureus; Aspergillus niger; and Zygosaccharomyces rouxii.
Der konstitutive Promotor ist ein Promotor, der es normalerweise einem Gen oder Operon ermöglicht, kontinuierlich exprimiert zu werden, und der es der Lux- oder Luc-Gene-Kassette ermöglicht, konstitutiv in dem Mikroorganismus exprimiert zu werden (das heißt kontinuierlich exprimiert zu werden, statt lediglich dann, wenn er induziert wird).Of the constitutive promoter is a promoter that normally has one Gene or operon allows expression continuously and that allows the Lux or Luc Gene cassette, constitutively expressed in the microorganism (ie to be expressed continuously instead of just when he is induced).
Der konstitutive Promotor ist vorzugsweise aus der Gruppe ausgewählt, die Folgendes umfasst: PlysS (Lysyl-tRNA-Synthtase), Pspc (spc-Ribosomal-Protein); PtatABCD (Zwillings-Arginin-Translocase-Protein-Exportsystem); Plpp (Lipoprotein der Außenmembran); und PcspC (Kälteschock-Proteine).The constitutive promoter is preferably selected from the group comprising: P lysS (lysyl tRNA synthase), P spc (spc ribosomal protein); P tat ABCD (twin arginine translocase protein export system); P lpp (outer membrane lipoprotein); and P cspC (cold shock proteins).
In einem besonders bevorzugten Ausführungsbeispiel wird das System als ein Satz oder Kit bereitgestellt und vorzugsweise so konfiguriert, dass es als zum einmaligen Gebrauch bestimmtes unabhängiges Multi-Proben-Biosensorsystem konfiguriert ist, das von dem Kunden im eigenen Haus verwendet werden kann.In In a particularly preferred embodiment, the System provided as a kit or kit and preferably so configured it to be considered as a one-time use independent Multi-sample biosensor system is configured by the customer can be used in-house.
In der Technik wurde die Verwendung von biolumineszenten Bakterien als eine Maßnahme zum Testen der Toxizität seit mehr als 20 Jahren praktisch angewandt. Die Firmen Edinburgh Instruments, Merck Ltd., Azur Environmental und LUMISmini verfügen über Systeme zur Messung der Toxizität von Abwasser. Cybersense, Oxford, Großbritannien, haben ein Mehrproben-Biolumineszenz-basiertes System, ROTAS, das natürlich vorkommende biolumineszente Bakterien verwendet, um die Toxizität in Bodenproben abzuschätzen, und die Remedios Ltd. verwendet genetisch modifizierte biolumineszente Bakterien zur Labor basierten Analyse von kontaminiertem Boden. Dennoch wurden Biosensorsysteme bisher nicht zur Verwendung zum Prüfen der antimikrobiellen Wirksamkeit von Konservierungsmitteln vorgeschlagen oder entwickelt.In The technique has been the use of bioluminescent bacteria as a measure of toxicity testing since Practically applied for more than 20 years. The companies Edinburgh Instruments, Merck Ltd., Azur Environmental and LUMISmini have Systems for measuring the toxicity of wastewater. Cyber Sense, Oxford, UK, have a multi-sample bioluminescence-based System, ROTAS, the naturally occurring bioluminescent bacteria used to estimate toxicity in soil samples, and the Remedios Ltd. uses genetically modified bioluminescent Bacteria for laboratory-based analysis of contaminated soil. Yet Biosensor systems have not been used for testing the antimicrobial effectiveness of preservatives proposed or developed.
Durch Erdenken und Entwickeln des Biosensorsystems der vorliegenden Erfindung zur Verwendung beim der Prüfung der antimikrobiellen Wirksamkeit von Konservierungsmitteln haben wir unmittelbar die Verzögerungszeit zwischen dem Gewinnen der Probe und dem Gewinnen der Ergebnisse beseitigt und eine zuverlässige, ein Echtzeit-Ansprechverhalten aufweisende Überwachung der Formulierungs-Performanz ermöglicht.By Devising and developing the biosensor system of the present invention for use in testing antimicrobial efficacy of preservatives we immediately have the delay time between winning the sample and obtaining the results eliminated and a reliable, a real-time response monitoring the wording performance.
Das Biosensorsystem ermöglicht im Gegensatz zu derzeitigen AET-Systemen eine Automatisierung. Weiterhin gewinnen pharmazeutische und kosmetische Unternehmen durch die Beschleunigung des AET-Prozesses beträchtliche logistische, organisatorische, gesetzliche und finanzielle Vorteile unter Einschluss einer verringerten Zeit zum Vermarkten von neuen Formulierungen. Die Vorteile dieses neuen Systems können auf andere Endbenutzer unter Einschluss der Nahrungsmittelindustrie, um nur einige zu nennen, erweitert werden.The Biosensor system allows in contrast to current AET systems an automation. Continue to win pharmaceutical and cosmetic companies by accelerating the AET process considerable logistical, organizational, legal and financial benefits including a reduced time to market new formulations. The benefits of this new Systems can be included on other end users The food industry, to name but a few, has expanded become.
Kurze Beschreibung der ZeichnungenBrief description of the drawings
Eine
bevorzugte Ausführungsform der vorliegenden Erfindung wird
nunmehr speziell in Form eines Beispiels unter Bezugnahme auf die
beigefügten Zeichnungen beschrieben, in denen
Ausführliche Beschreibung von bevorzugten AusführungsformenDetailed description of preferred embodiments
Die vorliegende Erfindung wird nunmehr lediglich in Form eines Beispiels beschrieben. Dies sind nicht die einzigen Möglichkeiten, wie die Erfindung in die Praxis umgesetzt werden kann, doch sind es die besten Möglichkeiten, die derzeit dem Anmelder bekannt sind.The The present invention will now be described by way of example only described. These are not the only ways how the invention can be put into practice, yet it is the best options currently known to the applicant are.
Als erstes wird ein konstitutiver Promotor für die konstitutive Exprimierung des vorgeschlagenen Reporter-Gens in dem Test-Mikroorganismus ausgewählt und in einem geeigneten Vektor eingeführt. Der Test-Mikroorganismus der bevorzugten Ausführungsform ist einer der von den Aufsichtsbehörden anerkannten Schlüssel-Mikroorganismen, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Enterobacter aerogenes, Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans, Aspergillus niger oder Zygosaccharomyces rouxii.When first becomes a constitutive promoter for the constitutive Expression of the proposed reporter gene in the test microorganism selected and introduced in a suitable vector. The test microorganism of the preferred embodiment is one of the key microorganisms recognized by regulators, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Enterobacter aerogenes, Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans, Aspergillus niger or Zygosaccharomyces rouxii.
Für den gezeigten Test-Mikroorganismus, E coli ATCC 8739, war der ausgewählte Vektor das populäre Plasmid pBR322 und der Promoter P wurde zwischen der EcoR1-Restriktions-Spaltungsstelle an der 4359-Position des Plasmiden und der BamH1-Restriktions-Spaltungsstelle an der 375-Position des Plasmiden eingeführt.For the test microorganism shown, E coli ATCC 8739, was the selected one Vector the popular plasmid pBR322 and the promoter P was inserted between the EcoR1 restriction cleavage site at the 4359 position of the Plasmids and the BamH1 restriction cleavage site at the 375 position of the plasmid.
In dem ersten Beispiel war der Promotor P einer der Promotoren die aus Folgendem ausgewählt sind:
- 1. PlysS native downstram-Genfunktion: Lysyl-tRNA-Synthtase
- 2. Pspc native downstream-Genfunktion: spc-ribosomaler Protein-Operon Promotor
- 3. PtatABCD native downstream-Genfunktion: Twin-Arginin-Transport-Protein-Exportsystem
- 4. Plpp native downstream-Genfunktion: äußeres Membran-Lipoprotein
- 5. PcspC native downstream-Genfunktion: Kälteschock-Proteine
- 1. P lysS native downstram gene function: lysyl tRNA synthase
- 2. P spc native downstream gene function: spc ribosomal protein operon promoter
- 3. P tatABCD native downstream gene function: twin-arginine transport protein export system
- 4. P lpp native downstream gene function: outer membrane lipoprotein
- 5. P cspC native downstream gene function: cold-shock proteins
Wie
dies in
Das pBR322-Plasmid mit dem eingefügten Promotor-Bestandteil P wurde dann auch mit BamH1 aufgeschlossen, so dass die extrahierte lux CDABE-Gen-Kassette dann mit dem Plasmid an der BamH1-Stelle gebunden und damit in das pBR322-Plasmid direkt stromabwärts von dem Promotor P eingeführt werden konnte. Das so geformte Konstrukt wurde dann in den Test-Mikroorganismus umgewandelt und ausgelagert und auf seine Ampicillin-Beständigkeit und seine Biolumineszenz überprüft.The pBR322 plasmid with the inserted promoter component P was then also digested with BamH1, so that the extracted lux CDABE gene cassette then with the plasmid at the BamH1 site bound and thus into the pBR322 plasmid directly downstream from the promoter P could be introduced. The construct thus formed was then converted to the test microorganism and outsourced and checked for its ampicillin resistance and its bioluminescence.
Das
konstruiete E coli mit dem Lux-Reporter-Gen und dem Promoter-Bestandteil
wurde als nächstes in einen Prototypen-Testsatz für
AET eingefügt. Dies ermöglichte eine Echtzeit-Abschätzung
der lebensfähigen Test-Mikroben-Population gefolgt von einer
Nachprüfung mit einem Probenprodukt, das an irgendeinem
Punkt in einer AET-Untersuchung zu testen war, durch Messen des
Lichtausganges mit einem PALcheck-Luminometer (
Das Lichtausgangssignal von eine stationäre Phase aufweisenden Kulturen der transformierten Bakterienzellen korrelierte mit dem traditionellen Kulturverfahren, die für AET verwendet werden, und den Zählungen von lebenfähigen Zellen, die durch eine konfokale Mikroskopie gezählt wurden, wodurch die Wirksameit dieses neuen AET-Systems in seiner Verfahrensweise gezeigt wird. Die eine stationäre Phase aufweisenden Bakterien erzeugen ein Lichtausgangssignal bezogen auf die Population von lebenfähigen, eine stationäre Phase aufweisenden Zellen, und tatsächlich ist die Lichtleistung zuverlässiger als traditionelle Plattenzählungs-Techniken, weil lebenfähige, jedoch nicht kulturfähige (VBNC-)Zellen ebenfalls durch das Verfahren erfasst werden. Weiterhin können Bakterien, die aktiv wachsen, ein verstärktes Signal erzeugen, was als ein nützlicher frühzeitiger Alarm für einen katastrophalen Ausfall der Formulierung dienen kann. Diese Eigenschaft zusammen mit der Echtzeit-Messung, die durch den Biosensor geboten wird, verringert beträchtlich die Zeit, die für die Entwicklung von Formulierungen erforderlich ist.The Light output signal of a stationary phase having Cultures of the transformed bacterial cells correlated with the traditional culture techniques used for AET, and the counts of viable cells that were counted by confocal microscopy, thereby the effectiveness of this new AET system in its approach will be shown. The stationary phase having bacteria produce a light output related to the population of viable, stationary phase cells, and indeed the light output is more reliable as traditional plate counting techniques because viable, however nonculturable (VBNC) cells also by the procedure will be recorded. Furthermore, bacteria, which are actively growing, producing an amplified signal, what as a useful early alarm for can serve a catastrophic failure of the formulation. These Property along with the real-time measurement by the biosensor considerably reduces the time required for the development of formulations is required.
Während ein traditioneller AET 28 Tage einer Überwachung erfordert, und der tatsächliche logistische Prozess ungefähr 45 Tage erfordert, wenn mehrere Wiederholungen erforderlich sind wird AET zu einer beträchtlichen Komponente der Formulierungs-Entwicklungszeit. Durch Identifizieren fehlschlagender Formulierungen zu einer frühen Zeit verringert der Biosensor erheblich die Gesamtzeit, die für die Entwicklung der Formulierung erforderlich ist, während der Durchsatz dramatisch vergrößert wird, was die Anzahl der erforderlichen Iterationen verringert. Weiterhin wird die pro AET erforderliche Anzahl von Mann-Stunden verringert, und die Beseitigung einer fünftägigen Verzögerungszeit nach jedem Probenpunkt verringert weiterhin die Zeit, die für AET erforderlich ist.While a traditional AET requires 28 days of monitoring, and the actual logistic process about 45 days required if multiple repetitions are required AET becomes a significant component of formulation development time. By identifying failed formulations at an early age Time the biosensor significantly reduces the total time spent for the development of the formulation is needed while the throughput is dramatically increased, which reduces the number of required iterations. Farther the number of man-hours required per AET is reduced, and the elimination of a five-day delay time after each sampling point, the time remaining for that continues to decrease AET is required.
Obwohl das System vorstehend auf der Grundlage eines Plasmiden zur Einführung des Reporter-Konstrukten in den Test-Mikroorganismus beschrieben wurde, werden zu gegebener Zeit anstelle einer Plasmid-Grundlage die am stärksten bevorzugten Promotor-Lux-Konstrukte in das Chromosom des Test-Bakteriums durch homologe Rekombination integriert werden, wodurch stabile Konstrukte erzeugt werden, wie dies für eine Langzeit-Anwendung und die Einhaltung von Vorschriften erforderlich ist.Even though the system above based on a plasmid for introduction of the reporter constructs described in the test microorganism will be used in due course instead of a plasmid basis the most preferred promoter-Lux constructs in the chromosome of the test bacterium is integrated by homologous recombination which produces stable constructs, as it does for a long-term application and regulatory compliance required is.
Weiterhin werden für einen kommerziellen Testsatz die Biosensor-Bakterien als ein gefriergetrocknetes Produkt hergestellt, um ein geregeltes zuverlässiges und gleichförmiges Produkt zu erzeugen, das gemäß strikten Anweisungen durch die Endbenutzer wiederhergestellt werden kann. Dies beinhaltet die Optimierung von Batch- und Zuführungs-Batch-Kulturen zur Erzeugung früher stationärer Phasen-Kulturen, gefolgt von einem Waschen und Gefriertrocknen.Farther become the biosensor bacteria for a commercial test set produced as a freeze-dried product to a regulated to produce a reliable and uniform product that according to strict instructions by the end user can be restored. This includes the optimization of Batch and feed batch cultures to produce early stationary phase cultures, followed by washing and Freeze-drying.
Obwohl die als Beispiel angegebenen Konstrukte einen einzigen Reporter haben, können zwei oder mehr Reporter eingefügt werden, wenn dies erwünscht ist. Weiterhin umfasst der Satz der Erfindung in geeigneter Weise eine Batterie von zwei oder mehr der Test-Mikroorganismen, die unterschiedliche der durch die Aufsichtsbehörden vorgeschriebenen Mikroorganismen sind und/oder unterschiedliche Promotoren und/oder Reporter-Gene haben, um es dem Benutzer zu ermöglichen, die erforderliche Bandbreite von Tests für einen vorgegebenen Typ auszuführen.Even though the constructs given as an example are a single reporter can have two or more reporters inserted if desired. Furthermore, the Set of the invention suitably a battery of two or more the test microorganisms that are different from the regulatory agencies are prescribed microorganisms and / or different promoters and / or have reporter genes to allow the user the required range of tests for a given Type.
Zusammenfassung:Summary:
Die vorliegende Erfindung betrifft Verbesserungen an und bezüglich der Prüfung der antimikrobiellen Wirksamkeit von Konservierungsmitteln (ABT) und stellt in einem ersten Gesichtspunkt ein System zum Prüfen der antimikrobiellen Wirksamkeit von Konservierungsmitteln bereit, das einen Biosensor umfasst, der zumindest einen mikrobiellen Stamm beinhaltet, der aus der Gruppe von Mikroorganismen ausgewählt ist, die einen von Aufsichtsbehörden anerkannten Schlüssel-Mikroorganismus zum Prüfen der Wirksamkeit von Konservierungsmitteln umfasst, wobei der Mikroorganismus so manipuliert ist, dass er einen konstitutiven Promotor aufweist, der mit einer Lux- oder Luc-Gen-Kassette verknüpft ist, um ein spezifisches erfassbares Signal zu erzeugen, das die Lebensfähigkeit des Mikroorganismus berichtet.The present invention relates to improvements in and to the testing of the antimicrobial efficacy of preservatives (ABT) and, in a first aspect, provides a system for testing antimicrobial efficacy of preservatives comprising a biosensor comprising at least one microbial strain derived from the Group of microorganisms containing a regulatory-recognized key microorganism for testing the preservative efficacy, wherein the microorganism is engineered to have a constitutive promoter linked to a Lux or Luc gene cassette to produce a specific detectable signal reporting the viability of the microorganism.
ZITATE ENTHALTEN IN DER BESCHREIBUNGQUOTES INCLUDE IN THE DESCRIPTION
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Zitierte Nicht-PatentliteraturCited non-patent literature
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