DE10392933B4

DE10392933B4 - Use of CD152, PD-1 (progressive cell death-1) or BTLA (B and T lymphocyte attenuator), particularly CD152-positive cells, for treatment, prevention and diagnosis of autoimmune diseases and inflammation

Info

Publication number: DE10392933B4
Application number: DE10392933T
Authority: DE
Inventors: Monika Dr. Brunner-Weinzierl
Original assignee: Universitatsklinikum Charite Berlin
Current assignee: Charite Universitaetsmedizin Berlin
Priority date: 2002-07-15
Filing date: 2003-07-15
Publication date: 2007-04-12
Anticipated expiration: 2023-07-16
Also published as: AU2003250958A1; WO2004006950A2; DE10232697A1; DE10392933D2; AU2003250958A8; WO2004006950A3

Abstract

Use of CD152, PD-1 (progressive cell death-1) and BTLA (B and T lymphocyte attenuator) for treatment of autoimmune diseases and/or inflammation, is new. An independent claim is also included for a kit, or pharmaceutical composition, comprising CD152, PD-1 or BTLA, particularly CD152+ cells. ACTIVITY : Immunosuppressive; Antiinflammatory; Dermatological; Anabolic; Hypertensive; Nephrotropic; Hemostatic; Antithyroid; Antirheumatic; Antiarthritic; Antidiabetic; Antianemic; Ophthalmological; Neuroprotective; Uropathic; Gastrointestinal-Gen.; Antiulcer; Antibacterial; Hepatotropic; Virucide. No biological data given. MECHANISM OF ACTION : Inhibitor of activation/stimulation of other T cells. Cocultures of peripheral blood mononuclear cells and CD152+ T cells were restimulated with 1.5 Microg/ml of SEB. After 36 hours, interleukin-2 levels were less than 100 pg/ml; compared to about 1200 pg/ml when CD152- cells were used in place of CD152+ cells, or when the PBMC (peripheral blood mononuclear cells) were treated in absence of other T cells.

Description

Die Erfindung betrifft die Verwendung von CD152+ T Zellen zur Behandlung von Krankheiten des rheumatischen Formenkreises.The The invention relates to the use of CD152 + T cells for treatment of diseases of the rheumatic type.

Autoimmunkrankheiten oder Autoaggressionskrankheiten sind im engeren Sinne Erkrankungen, bei denen durch Autoimmunisierung gegen körpereigene Substanzen gerichtete Autoantikörper beziehungsweise spezifisch sensibilisierte Lymphocyten auftreten, die in der Pathogenese eine wesentliche Rolle spielen. Die Ursache der Autoimmunisierung ist die Aufhebung der gegenüber körpereigenen Geweben bestehenden Immuntoleranz infolge von Störungen der Selbst-Erkennung beziehungsweise der Kontrolle und Regulationsmechanismen des Immunsystems.Autoimmune diseases or autoaggressive diseases are diseases in the strict sense, in which directed by autoimmune to the body's own substances Autoantibodies or specifically sensitized lymphocytes occur, which play an essential role in the pathogenesis. The cause Autoimmunization is the abrogation of the body's own tissues existing immune tolerance due to disorders of self-detection or the Control and regulatory mechanisms of the immune system.

Die Autoimmunkrankheiten können in organspezifische, nicht-organspezifische und Misch- oder Übergangsformen eingeteilt werden. Organspezifische Autoimmunkrankheiten betreffen beispielsweise die Schilddrüse (z.B. Hashimoto-Thyreoiditis), den Magen (z.B. perniziöse Anämie) oder den Pankreas (z.B. juveniler Diabetis mellitus). Nicht-organspezifische Autoimmunkrankheiten betreffen z.B. die Gelenke (z.B. rheumatoide Arthritis) oder die Muskeln (z.B. Dermatomyositis). Misch- oder Übergangsformen der Autoimmunkrankheiten sind unter anderem die Werlhof-Krankheit, das Goodpasture-Syndrom oder die autoimmunhämolytische Anämie.The Autoimmune diseases can into organ-specific, non-organ-specific and mixed or transitional forms to be grouped. Affect organ-specific autoimmune diseases for example, the thyroid gland (e.g., Hashimoto's thyroiditis), the stomach (e.g., pernicious anemia) or the pancreas (e.g., juvenile diabetic mellitus). Non-organ-specific Autoimmune diseases are e.g. the joints (e.g., rheumatoid Arthritis) or the muscles (e.g., dermatomyositis). Mixed or transitional forms Autoimmune diseases include Werlhof disease, Goodpasture syndrome, and others the autoimmune hemolytic Anemia.

Autoimmunkrankheiten wie auch Entzündungen, insbesondere chronische, werden vor allem durch die Methoden der Immunserologie diagnostiziert. Therapiert werden diese Krankheiten bisher durch Lokaltherapien wie der Gabe von Kortikosteroiden oder einer allgemeinen Wundbehandlung beziehungsweise durch eine immunmodulierende Therapie mit Immunoglobulinen, Antiphlogistika, Cyclosporin oder Methotrexat. Bei organspezifischen Autoimmunerkrankungen ist häufig eine Substitutionsbehandlung, gegebenenfalls eine Transplantation, erforderlich. Sofern die Krankheit sich im Anfangsstadium befindet, ist es möglich, die durch die Autoimmun-Läsionen geschädigten Organe in ihrer Funktion dergestalt zu substituieren, dass Hormone gegeben werden; so wird bei einer Schilddrüsenunterfunktion das fehlende Schilddrüsenhormon mit Thyroxin substituiert.Autoimmune diseases as well as inflammations, especially chronic, are mainly due to the methods of Immunology diagnosed. These diseases are being treated so far by local therapies such as the administration of corticosteroids or a general wound treatment or by an immunomodulating Therapy with immunoglobulins, antiphlogistics, cyclosporin or Methotrexate. In organ-specific autoimmune diseases is often one Substitution treatment, if necessary, a transplantation required. If the disease is in the early stages, it is possible to have the through the autoimmune lesions damaged Organs in their function to substitute hormones are given; so is the missing in a thyroid subfunction thyroid hormone substituted with thyroxine.

Die bekannten Verfahren und Verwendungen bestimmter Arzneimittel zur Behandlung von Autoimmunkrankheiten und chronischer Entzündungen weisen mehrere Nachteile auf. Bei der Gabe von substituierten Hormonen o.ä. werden lediglich die Symptome therapiert, ohne dass sich die Konstitution des Organs verbessert. Bei einer Gabe von bekannten Substanzen, die die Immunantwort allgemein unterdrücken – wie z.B. Cyclosporin – wird das gesamte Immunsystem supprimiert, was nachteilige Folgen wie die Zunahme von bösartigen Erkrankungen zur Folge haben kann. Ein weiterer Nachteil der bekannten Mittel und ihrer Verwendung ist, dass sie häufig nur sehr spezifisch eingesetzt werden können. Die Radiojodtherapie, bei der radioaktives Jod verabreicht wird, kann nur bei der Behandlung von Morbus Basodow eingesetzt werden. Eine Vitamin B₁₂-Gabe ist fast ausschließlich bei der atrophischen Gastritis sinnvoll. Die Verwendung von Immunspressiva, sofern sie nicht nahezu das gesamte Immunsystem herunter regulieren, ist oft nur selektiv für bestimmte Organe sinnvoll.The known methods and uses of certain drugs for the treatment of autoimmune diseases and chronic inflammation have several disadvantages. In the administration of substituted hormones or similar Only the symptoms are treated without improving the constitution of the organ. Administration of known substances that suppress the immune response in general - such as cyclosporin - suppresses the entire immune system, which can lead to adverse consequences such as the increase of malignant diseases. Another disadvantage of the known means and their use is that they can often only be used very specifically. Radioiodine therapy, which uses radioactive iodine, can only be used in the treatment of Basodov's disease. A vitamin B ₁₂ dose is almost exclusively useful in atrophic gastritis. The use of immune suppressants, unless they down regulate almost the entire immune system, is often only selectively for certain organs makes sense.

Im Stand der Technik ist auch die indirekte Verwendung von CD152, beispielsweise als Antigen zur Herstellung von anti-CD152-Antikörpern, zur Behandlung von Autoimmunerkrankungen bekannt. So wird in den Druckschriften Medline AN 1999065898 und Medline AN 97330226 zur Behandlung von Autoimmunerkrankungen u.a. das Oberflächenprotein CD152 (Synonym: CTLA-4) für die Herstellung von Antikörpern verwendet, die gegen CD152 gerichtet sind, oder für die Entwicklung von Agonisten des Rezeptors CTLA-4. In der Patentschrift DE 100 38 722 C2 werden Monozyten u.a. mit der cDNA für anti-CD152-Antikörper transfiziert, um mit Hilfe von gentechnisch manipulierten Monozyten Autoimmunerkrankungen behandeln zu können.The prior art also discloses the indirect use of CD152, for example as an antigen for the production of anti-CD152 antibodies, for the treatment of autoimmune diseases. For example, in the publications Medline AN 1999065898 and Medline AN 97330226 for the treatment of autoimmune diseases, the surface protein CD152 (synonym: CTLA-4) is used for the production of antibodies directed against CD152 or for the development of agonists of the receptor CTLA- 4th In the patent DE 100 38 722 C2 monocytes are transfected, inter alia, with the cDNA for anti-CD152 antibody in order to be able to treat autoimmune diseases with the aid of genetically engineered monocytes.

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, Mittel bereitzustellen, die für die effiziente Behandlung von Autoimmunerkrankungen, Entzündungen und unerwünschten Immunantworten, nähmlich Krankheiten des rheumatischen Formenkreises verwendet werden können.Of the Invention has for its object to provide means that for the efficient treatment of autoimmune diseases, inflammation and undesirable Immune responses, namely diseases of the rheumatic type group can be used.

Die Erfindung löst diese Aufgabe durch die Verwendung von CD152+ T Zellen zur Behandlung von Krankheiten des rheumatischen Formenkreises (1–9).The invention solves this problem by the use of CD152 + T cells for the treatment of diseases of the rheumatic type ( 1 - 9 ).

CD152 oder der B7-Rezeptor CTLA-4 ist ein Gegenspieler zu dem CD28-B7-Rezeptormolekül und nimmt daher eine "Master Switch-Funktion" im immunologischen Geschehen der T-Zell-Aktivierung und -Proliferation ein. Weitere wichtige Moleküle, die die Stimulation und Aktivierung von T Zellen gegensteuern, d.h. inhibieren, sind PD-1 (oder Programmed cell death 1) und BTLA (oder B and T lymphocyte attenuator), die von T Zellen exprimiert werden können. BTLA ist vor allem auf Th1-Zellen exprimiert. BTLA defiziente T Zellen zeigen vermehrte Zellteilung.CD152 or the B7 receptor CTLA-4 is an antagonist to the CD28-B7 receptor molecule and decreases therefore a "master Switch function "in immunological Done of T-cell activation and proliferation. Further important molecules, which counteract the stimulation and activation of T cells, i. are PD-1 (or Programmed cell death 1) and BTLA (or B and T lymphocyte attenuator), which can be expressed by T cells. BTLA is mainly expressed on Th1 cells. BTLA deficient T cells show increased cell division.

Die meisten Immunreaktionen des spezifischen Immunsystems sind abhängig von einer T-Zell-Aktivierung. Dabei erfordert jegliche Aktivierung dieser Zellen notwendig mindestens zwei Signale, die von der antigenpräsentierenden Zelle übermittelt werden müssen. Das erste erfolgt über die Bindung des auf einem MHC-Molekül präsentierten Antigens an einen spezifischen T-Zell-Rezeptor. Das zweite – die so genannte Kostimulation – resultiert aus einer zweiten Kontaktaufnahme der beiden beteiligten Zellen über das B7-Molekül auf der antigenpräsentierenden Zelle und CD28 – einem B7-Rezeptor – auf der T-Zelle.Most immune reactions of the specific immune system are dependent on T-cell activation. Any activation of these cells necessarily requires at least two sigs nals that must be transmitted by the antigen-presenting cell. The first is via binding of the antigen presented on an MHC molecule to a specific T cell receptor. The second - the so-called costimulation - results from a second contact of the two cells involved via the B7 molecule on the antigen-presenting cell and CD28 - a B7 receptor - on the T cell.

CTLA-4 oder CD152 ist ebenfalls ein B7-Rezeptormolekül und gleichzeitig ein direkter Gegenspieler zu CD28. Es ist ein für die Lymphozyten spezifischer Marker, der durch Aktivierung der Zelle auf der Oberfläche exprimiert und intrazellulär akkumuliert wird. Durch die 20fach höhere Affinität zu B7 – verglichen mit CD28 – verhindert es größtenteils die absolut notwendige Kostimulation. Insgesamt werden die Zellen so weniger empfänglich für die Stimulation der antigenpräsentierenden Zellen, produzieren weniger IL-2 ("Lymphozytenwachstumsfaktor") und verharren in einer Art anergischem Zustand. CD152 inhibiert durch Kompetition mit CD28 um den Liganden B7, aber auch durch direktes Signalling des Moleküls CD152.CTLA-4 or CD152 is also a B7 receptor molecule and a direct one at the same time Opponent to CD28. It is one specific to the lymphocytes Marker that expresses by activation of the cell on the surface and intracellular is accumulated. Due to the 20-fold higher affinity to B7 - compared with CD28 - prevented it mostly the absolutely necessary costimulation. Overall, the cells so less receptive for the Stimulation of antigen-presenting cells, produce less IL-2 ("lymphocyte growth factor") and persist in a kind of anergic condition. CD152 inhibited by competition with CD28 for the ligand B7, but also through direct signaling of the molecule CD152.

Die "Master-Switch"-Funktion von CD152 resultiert aus der Steuerung der Immunantwort: Hyperergie – Normergie – Anergie. Mäuse ohne genetische Information für CD152 entwickeln sehr rasch eine lymphoproliferative Erkrankung. Es gibt Hinweise auf einen Zusammenhang zwischen dem Verlauf von Infektionskrankheiten und Expression von CTLA-4, beispielsweise wird die HIV-Infektion durch CD152 beeinflusst. So ist bekannt, dass insbesondere die T Zellen von HIV-Patienten eine erhöhte Expression von CTLA-4 aufweisen. Daneben besteht auch ein deutlicher Zusammenhang mit der Chemokinrezeptorexpression und damit der Ausbreitung der Infektion im Organismus. Es gab daher Überlegungen, den Level von CD152 zu senken oder die Wechselwirkung mit CD152 mit seinen Liganden zu blockieren, um Krankheitsverläufe positiv zu beeinflussen, z.B. bei bakterieller Sepsis. Auf Grund der Offenbarung der erfindungsgemäßen Lehre erkennt der Fachmann, dass die erfindungsgemäße Verwendung von CD152+ T Zellen von einer Verwendung von CD152Ig (CTLA-4Ig) abzugrenzen ist. Im Sinne der Erfindung verhindern die CD152+ T Zellen die Aktivierung und Stimulation von anderen, bevorzugt inflammatorischen T Zellen; sie inhibieren die Aktivierung, Zytokinsekretion, Proliferation und/oder die Migration. Durch das erfindungsgemäße abschalten der anderen, bevorzugt inflammatorischen T Zellen, durch die CD 152+ T Zellen werden keine bzw. weniger inflammatorische Zytokine produziert, die Zellteilung wird reduziert und die Entzündung gestoppt. Das Abschalten im Sinne der Erfindung betrifft alle biologischen oder chemischen Vorgänge, die dazu führen können, dass andere T Zellen eine geringere Aktivität aufweisen. Ein solcher Vorgang ist von einem Blockieren eines CD 152-Rezeptors durch CTLA-4Ig verschieden.The "Master Switch" feature of CD152 results from the control of the immune response: hyperergy - normal energy - anergy. Mice without genetic information for CD152 develop a lymphoproliferative disorder very rapidly. There is evidence of a relationship between the course of Infectious diseases and expression of CTLA-4, for example HIV infection is affected by CD152. So it is known In particular, the T cells of HIV patients have increased expression of CTLA-4. There is also a clear correlation with the chemokine receptor expression and thus the spread of Infection in the organism. There were therefore considerations, the level of To lower CD152 or interact with CD152 with its ligands to block disease progression to positively influence, e.g. in bacterial sepsis. On reason the disclosure of the teaching of the invention recognizes the expert that the use according to the invention of CD152 + T cells from use of CD152Ig (CTLA-4Ig) is to be delimited. For the purposes of the invention, the CD152 + T prevent Cells activate and stimulate others, preferably inflammatory T cells; they inhibit activation, cytokine secretion, proliferation and / or the migration. By switching off the other according to the invention, prefers inflammatory T cells, through the CD 152+ T cells are no or less inflammatory cytokines produced, The cell division is reduced and the inflammation stopped. The shutdown For the purposes of the invention, all biological or chemical operations that lead to can, that other T cells have lower activity. Such a process is different from blocking a CD 152 receptor by CTLA-4Ig.

Fusionsproteine aus CTLA-4 und dem IgG-Fusionsteil werden derzeit in der Therapie eingesetzt. Hierbei handelt es sich aber um eine Blockade des Liganden B7, so dass sowohl CD28-Kostimulation, als auch CD152-Signale verhindert werden. Dies bedeutet, dass die T Zelle einfach nur nicht stimuliert wird. Die Blockade von B7 durch CD152Ig und die damit verhinderte Kostimulation der T Zellen sind von der erfindungsgemäßen Lehre nicht erfaßt.fusion proteins from CTLA-4 and the IgG fusion part are currently in therapy used. This is a blockade of the ligand B7, preventing both CD28 costimulation and CD152 signaling become. This means that the T cell just is not stimulated. The blockade of B7 by CD152Ig and the resulting costimulation T cells are not covered by the teaching of the invention.

Der Erfindung liegt also die überraschende Lehre zugrunde, dass durch die Gabe von CD152+ T Zellen Krankheiten des rheumatischen Formenkreises behandelt werden können (1–9). Die Gabe von CD152 kann hierbei so erfolgen, dass Zellen verwendet werden, auf oder in denen CD152 (9) vorkommt.The invention is therefore based on the surprising teaching that the administration of CD152 + T cells can treat diseases of the rheumatic type ( 1 - 9 ). The administration of CD152 can be done using cells on or in which CD152 ( 9 ) occurs.

Bei chronischen Entzündungen oder einem erheblichen Teil der Autoimmunkrankungen werden T-Zellen, die eigentlich durch regulierende Mechanismen in ihrer Aktivität begrenzt werden sollten, permanent aktiviert. Dies hält den Entzündungsprozess aufrecht. Mit der erfindungsgemäßen Verwendung von CD152+ T Zellen ist es erstmals möglich, diesen Prozess der Entzündung oder Autoimmunität bei Krankheiten des rheumatischen Formenkreises spezifisch zu vermindern oder abzuschalten.at chronic inflammation or a significant proportion of autoimmune diseases become T cells, which is actually limited by regulatory mechanisms in their activity should be, permanently activated. This maintains the inflammatory process. With the use according to the invention of CD152 + T cells make it possible for the first time, this process of inflammation or autoimmunity to reduce specifically in diseases of the rheumatic type or shut down.

Es ist möglich, in vivo einen Kontext bereitzustellen, der zu einer Induktion von CD152 führt. Die Induktion von CD152 auf T Zellen erfolgt insbesondere mit TRAIL, TGFb, IL-10, Cystation, Vitamin D und seine Derivate, IL-15 oder anti-PD-1 Antikörpern.It is possible, to provide a context in vivo leading to induction of CD152 leads. The induction of CD152 on T cells takes place in particular with TRAIL, TGFb, IL-10, cystation, vitamin D and its derivatives, IL-15 or anti-PD-1 antibodies.

Die Verwendung von CD152+ T Zellen kann zunächst in vitro vorbereitet werden oder sofort in vivo im Patienten erfolgen (9). Beispielsweise ist es möglich, CD152 exprimierte T Zellen zu verwenden und in den Patienten einzubringen, die zuvor außerhalb des Patienten generiert worden sind. Die Zellen können vom Entzündungsherd des Patienten selbst entnommen, isoliert und vermehrt werden, um sie zu verwenden oder von einer anderen Quelle stammen; beispielsweise können es immunkompetente Zellen, wie inflammatorische Zellen, sein; die so behandelt werden, dass CD152 auf ihnen induziert oder in sie transfiziert wird. Es ist selbstverständlich auch möglich, in vivo einen Kontext bereitzustellen, der zu einer Expansion von CD152⁺ T Zellen führt oder zu einer Induktion von CD152. Die Induktion von CD152 auf T Zellen erfolgt insbesondere mit TRAIL, TGFb, IL-10, Cystation, VitaminD und seinen Derivaten, Statine, IL-15 oder anti-PD-1 Antikörpern.The use of CD152 + T cells can first be prepared in vitro or immediately in vivo in the patient ( 9 ). For example, it is possible to use and introduce into the patient CD152-expressed T cells previously generated outside of the patient. The cells may be taken from the inflammatory focus of the patient, isolated and propagated to use or from another source; for example, it may be immunocompetent cells such as inflammatory cells; which are treated to induce or transfect CD152 on them. It is of course also possible to provide a context in vivo which leads to an expansion of CD152 ⁺ T cells or to an induction of CD152. The induction of CD152 on T cells is carried out in particular with TRAIL, TGFb, IL-10, cystation, vitamin D and its derivatives, statins, IL-15 or anti-PD-1 antibodies.

Es ist beispielsweise auch möglich, CD152⁺-T Zellen aus bereits laufenden Immunantworten zu isolieren, um sie nach einer in vitro Anreicherung in den Patienten zurückzugeben (1, 2, 4 und 5). Hierbei können autologe T Zellen alleine oder im Verbund mit anderen Zellen in vitro stimuliert werden oder ex vivo einem Entzündungsherd am Patienten entnommen werden, dann in vitro angereichert und dem Patienten zurückgegeben werden.For example, it is also possible Isolate CD152 ⁺ T cells from existing immune responses in order to return them to the patient after in vitro enrichment ( 1 . 2 . 4 and 5 ). This autologous T cells can be stimulated alone or in combination with other cells in vitro or taken ex vivo from a source of inflammation in the patient, then enriched in vitro and returned to the patient.

Bei der Krankheit handelt es sich um eine mit Rheuma assoziierte Krankheit, insbesondere die rheumatische Arthritis. Krankheiten des rheumatischen Formenkreises wie Lupus erythematodes, Sklerodermie, Rheumatoide Arthritis, Spondylopathien und/oder reaktive Arthritis werden behandelt.at the disease is a disease associated with rheumatism, especially rheumatoid arthritis. Diseases of the rheumatic Formkreisreises such as lupus erythematosus, scleroderma, rheumatoid Arthritis, spondylopathies and / or reactive arthritis are treated.

Es konnte erfindungsgemäß gezeigt werden, dass isolierte CD152⁺-T-Zellen vorteilhafterweise CD152 auf ihrer Oberfläche behalten (1). Die Zelle kann insbesondere eine Oberflächen-CD152 exprimierende Zelle sein. Bei der CD152⁺-T-Zelle kann es sich vorteilhafterweise um Zellen handeln, die aus einem Entzündungsherd des Patienten isoliert wurden (5) oder um Zellen, die durch in vitro Stimulation von PBMCs generiert wurden (1, 2, 4 und 6). Mit Vorteil können die so gewonnenen Zellen angereichert werden, um sie dann direkt zur Behandlung von Autoimmunkrankheiten oder Entzündungen zu verwenden. Mit Vorteil sind insbesondere isolierte CD152⁺-T-Zellen fähig, andere Zellen, vor allem immunassoziierte Zellen, zu inaktivieren (2, 6 und 7). CD4⁺CD25⁺ regulatorische Zellen sind in der Peripherie präsent und können Autoimmunität verhindern. Die CD152⁺ T Zellen, die aus den CD4+CD25+ T Zellen entstehen, müssen vorteilhafterweise für ihre inhibitorische Funktion CD152 nicht ausschließlich benutzen; hier ist es insbesondere ein Marker, wobei es für die inhibitorische Funktion benutzt werden kann. Um ihre regulatorische Wirkung ausführen zu können, wird insbesondere direkter Zell-Zellkontakt mit der Zielzelle benötigt (7 und 8); lösliche Faktoren, wie z.B. pleiotrop wirkende Zytokine sind als primärer Mechanismus auszuschließen. Diese Zellen können allerdings nicht anhand ihres Oberflächenmoleküls CD25 aus bereits etablierten Immunantworten identifiziert werden, da alle T-Zellen, die Antigen-Kontakt hatten, den Marker CD25 hochregulieren. Mehr als 50 % der CD25⁺ T_reg Zellen exprimieren allerdings CD152 und behalten es nach Aktivierung über einen langen Zeitraum auf der Oberfläche. Diese Eigenschaft ermöglicht es, vorteilhafterweise, regulatorische T Zellen von inflammatorischen T Zellen während einer bereits etablierten Immunantwort zu trennen. Die getrennten und isolierten Zellen können den Patienten insbesondere bei jedem Rückfall appliziert werden.It has been possible according to the invention to show that isolated CD152 ⁺ T cells advantageously retain CD152 on their surface ( 1 ). In particular, the cell may be a surface CD152 expressing cell. The CD152 ⁺ T cell may advantageously be cells isolated from a site of inflammation of the patient ( 5 ) or cells generated by in vitro stimulation of PBMCs ( 1 . 2 . 4 and 6 ). Advantageously, the cells thus obtained can be enriched to then use them directly for the treatment of autoimmune diseases or inflammation. In particular, isolated CD152 ⁺ T cells are capable of inactivating other cells, especially immune-associated cells ( 2 . 6 and 7 ). CD4 ⁺ CD25 ⁺ regulatory cells are peripheral and can prevent autoimmunity. The CD152 ⁺ T cells arising from the CD4 + CD25 + T cells do not have to use exclusively for their CD152 inhibitory function exclusively; here it is in particular a marker, whereby it can be used for the inhibitory function. In order to be able to carry out its regulatory effect, in particular direct cell cell contact with the target cell is required ( 7 and 8th ); Soluble factors, such as cytokines that have a pleiotropic effect, should be ruled out as the primary mechanism. However, these cells can not be identified from already established immune responses by their surface molecule CD25, since all T cells that had antigen contact upregulate the marker CD25. However, more than 50% of the CD25 ⁺ T _reg cells express CD152 and retain it on the surface for a long time after activation. This property makes it possible advantageously to separate regulatory T cells from inflammatory T cells during an already established immune response. The separated and isolated cells can be administered to the patient, especially with each relapse.

In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung erfolgt demgemäß die Induktion von CD152 in immunkompetenten Zellen, vorzugsweise inflammatorischen T Zellen, wobei die Induktion bevorzugt ex vivo durchgeführt wird. Die Induktion kann hierbei durch Transfektion von immunkompetenten Zellen erfolgen, insbesondere mit TRAIL, TGFb, IL-10, Statinen, Cystation, Vitamin D und/oder seinen Derivaten, IL-15 oder anti-PD-1 Antikörpern.In a preferred embodiment According to the invention, the induction is carried out accordingly of CD152 in immunocompetent cells, preferably inflammatory T cells, wherein the induction is preferably carried out ex vivo. Induction may be by transfection of immunocompetent cells especially TRAIL, TGFb, IL-10, statins, cystation, Vitamin D and / or its derivatives, IL-15 or anti-PD-1 antibodies.

In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die CD152+ T Zellen direkt ex vivo aus einem Entzündungsherd eines Patienten isoliert, in vitro expandiert und in einen Entzündungsherd zurückgegeben. Es kann vorteilhaft sein, die CD152+ T Zellen in vitro aus autologen PBMCs zu isolieren, wobei die PBMCs mit 0,05 μg/ml–10 μg/ml anti-CD3, 0,05 μg/ml–10 μg/ml SEB oder 0,05 μg/ml–10 μg/ml anti-CD3/0,05 μg/ml–10 μg/ml anti-CD28 stimuliert werden.In a further preferred embodiment According to the invention, the CD152 + T cells are directly ex vivo from a inflammation isolated from a patient, expanded in vitro and into a focus of inflammation returned. It may be beneficial to remove the CD152 + T cells from autologous in vitro PBMCs with PBMCs containing 0.05 μg / ml-10 μg / ml anti-CD3, 0.05 μg / ml-10 μg / ml SEB or 0.05 μg / ml-10 μg / ml anti-CD3 / 0.05 μg / ml-10 μg / ml anti-CD28 be stimulated.

Besonders bevorzugt ist es, 0,1 μg/ml–5 μg/ml anti-CD3, 0,1 μg/ml–5 μg/ml SEB oder 0,1 μg/ml–5 μg/ml anti-CD3/0,1 μg/ml–5 μg/ml anti-CD28 zu verwenden.Especially it is preferred to use 0.1 μg / ml-5 μg / ml anti-CD3, 0.1 μg / ml-5 μg / ml SEB or 0.1 μg / ml-5 μg / ml anti-CD3 / 0.1 μg / ml-5 μg / ml anti-CD28 use.

Ganz besonders bevorzugt ist es mehr als 1 μg/ml anti-CD3, 1 μg/ml SEB und/oder 1 μg/ml anti-CD28 zu verwenden. Die Menge kann von einem Fachmann durch Routineversuche bestimmt werden. Beispielsweise dadurch, dass er in regelmäßigen bzw. unregelmäßigen Abständen Proben bzw. Aliquots entnimmt und die gewünschten Parameter hierin bestimmt.All more preferably it is greater than 1 μg / ml anti-CD3, 1 μg / ml SEB and / or 1 μg / ml to use anti-CD28. The amount can be passed by a specialist Routine experiments are determined. For example, by the fact that he in regular or irregular intervals samples or aliquots and determines the desired parameters herein.

In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform werden die CD152+ T Zellen nach 48 h bis 7 Tagen isoliert, bevorzugt nach 2 bis 3 Tagen.In a further preferred embodiment the CD152 + T cells are isolated after 48 h to 7 days, preferably after 2 to 3 days.

Es ist selbstverständlich auch möglich, CD152 durch Transfektion in den T Zellen zu generieren oder zu induzieren.It is self-evident also possible, CD152 by transfection in the T cells to generate or induce.

Die Transfektion kann physikalisch, chemisch und/oder biologisch erfolgen. Die physikalische Transfektion kann insbesondere mittels Elektroporation erfolgen.The Transfection can be done physically, chemically and / or biologically. The physical transfection can in particular by means of electroporation respectively.

Es ist beispielsweise möglich, dass die DNA, die für CD152 codiert in einem Entzündungsherd subkutan injiziert wird und der elektrische Impuls 'über eine Klammer an der Haut appliziert wird. Die chemische Transfektion von CD152-Plasmid-Konstrukten wird insbesondere durch die Gegenwart von DEAE-Dextran, Natriumphosphat oder Dendrimeren vermittelt. Die biologische Transfektion von CD152 oder CD152 umfassenden Plasmiden, Cosmiden oder anderen Vektoren – einschließlich Goldpartikeln – ist mit Vorteil über den rezeptorvermittelten Gentransfer, die Lipotektion oder die retrovivale Transfektion oder andere virale Aufnahmemechanismen möglich.For example, it is possible for the DNA encoded for CD152 to be injected subcutaneously in an inflammatory focus and for the electrical pulse to be applied to the skin via a clamp. The chemical transfection of CD152 plasmid constructs is mediated in particular by the presence of DEAE-dextran, sodium phosphate or dendrimers. The biological transfection of CD152 or CD152-comprising plasmids, cosmids or other vectors - including gold particles - is advantageous via receptor-mediated gene transfer, lipotection or retroviral transfection or other viral uptake mechanisms Lich.

Die genannten Verfahren zur Transfektion von CD152 sind vorteilhafterweise billig und gut reproduzierbar und führen zu einem stabilen Einbau der CD152 codierten DNA in der Zielzelle.The mentioned methods for the transfection of CD152 are advantageously cheap and easy to reproduce and lead to a stable installation of the CD152 encoded DNA in the target cell.

Im Folgenden soll die Erfindung anhand von Ausführungsbeispielen erläutert werden, ohne auf diese beschränkt zu sein.in the Below, the invention will be explained with reference to exemplary embodiments, without being limited to these to be.

BeispieleExamples

Erstmals ist es erfindungsgemäß gelungen, individuelle, CD152-exprimierende Zellen auch zytometrisch darzustellen und sie für funktionelle Untersuchungen zu isolieren. Mit Hilfe einer sensitiven Färbemethode konnte unter anderem gezeigt werden, dass während einer antigen-spezifischen Stimulation zellmembrangebundenes CD152 lediglich auf einer Subpopulation aktivierter Zellen (CD152⁺ T Zellen) exprimiert wird. Isolierte, aktivierte CD152⁺ T Zellen waren im Gegensatz zu aktivierten CD152^– T Zellen bei Restimulation in ihrer Proliferation inhibiert (4). Diese heterogene Expression von CD152 auf aktivierten T Zellen gewährleistet die Mannigfaltigkeit einer klonalen T Zellantwort (3). Die Generierung von T Zellen mit verschiedenen Effektorfunktionen ist eine grundlegende Eigenschaft der adaptiven Immunantwort. Die Daten zeigen auch, dass CD152 tatsächlich in der Lage ist, bereits aktivierte, individuelle T Zellen zu inhibieren (3). CD152 kann demnach sehr gut auch etablierte, "laufende" Immunantworten regulieren.For the first time, it has been possible according to the invention to cytometrically represent individual CD152-expressing cells and to isolate them for functional studies. Among other things, a sensitive staining method has been used to show that cell-membrane-bound CD152 is only expressed on a subpopulation of activated cells (CD152 ⁺ T cells) during antigen-specific stimulation. Isolated, activated CD152 ⁺ T cells were inhibited in their proliferation in contrast to activated CD152 ^- T cells ( 4 ). This heterogeneous expression of CD152 on activated T cells ensures the diversity of a clonal T cell response ( 3 ). The generation of T cells with different effector functions is a fundamental property of the adaptive immune response. The data also show that CD152 is indeed able to inhibit already activated, individual T cells ( 3 ). Thus, CD152 can very well regulate established, "ongoing" immune responses.

In vitro wurden periphere mononukleäre Zellen vom Menschen unter kontrollierten Kulturbedingungen stimuliert. Zunächst wurden oberflächen-CD152-exprimierende Zellen aus einer Immunantwort in vitro isoliert und charakterisiert. Es wurde mit der bereits etablierten "real time PCR" das momentane Zytokinprofil von CD152⁺ T Zellen ermittelt und eine für regulatorische Zellen typische Verminderung der IL-2 mRNA und vermehrte Akkumulation von TGFβ und IL-10 RNA festgestellt (2). Im Maussystem wurde gezeigt, dass oberflächen-exprimierende CD152⁺ T Zellen autoregulatorisch wirken. Weiterhin hat sich mit humanen CD152⁺ T Zellen eine suppressive Wirkung auf andere T-Zellantworten gezeigt (IL-Produktion nach 24 Stunden) (2). Außerdem hat sich mit humanen CD152⁺ T Zellen eine suppressive Wirkung auf andere Immunantworten bestätigt (IFNg Produktion nach 3 Tagen) (6). Sereologische Blockade von CD152 während Mitogenstimulation von PBMCs von Patienten mit rheumatischer Arthritis ergaben, dass das Molekül CD152 bei Patienten funktionell ist. CD152⁺ T Zellen werden am Entzündungsherd von rheumatoider Arthritis (RA) im Synovium gefunden ( 5). Im Detail:In vitro, human peripheral blood mononuclear cells were stimulated under controlled culture conditions. First, surface CD152-expressing cells were isolated and characterized from an immune response in vitro. With the already established "real time PCR" the current cytokine profile of CD152 ⁺ T cells was determined and a reduction of the IL-2 mRNA typical for regulatory cells and an increased accumulation of TGFβ and IL-10 RNA were observed ( 2 ). In the mouse system, surface-expressing CD152 ⁺ T cells were shown to be autoregulatory. Furthermore, with human CD152 ⁺ T cells, a suppressive effect on other T cell responses has been shown (IL production after 24 hours) ( 2 ). Moreover, human CD152 ⁺ T cells have been shown to have a suppressive effect on other immune responses (IFNg production after 3 days) ( 6 ). Sereologic blockade of CD152 during mitogen stimulation of PBMCs from patients with rheumatoid arthritis revealed that the molecule CD152 is functional in patients. CD152 ⁺ T cells are found at the site of inflammation of rheumatoid arthritis (RA) in the synovium ( 5 ). In detail:

Beispiel 1example 1

CD152 bleibt auf einer Fraktion der T Zellen länger exprimiert.CD152 stays on one Fraction of T cells expressed longer.

Humane PBMCs (2 × 10⁵/ml) wurden mit 1,5 μg/ml SEB stimuliert und nach 48 Stunden die CD152⁺ T Zellen isoliert. Unter Kultivierung mit syngenen PBMCs und mit oder ohne 1,5 μg/ml SEB wurde 62 Stunden später erneut CD152 auf der Oberfläche der T-Zellen zytometrisch gemessen. Die Y-Achse zeigt in % die Anzahl der CD152+ T Zellen aller CD4+ T Zellen. Schwarze Säulen: CD152+ oder CD152– T Zellen, die zu PBMCs gesetzt wurden und nach 62h noch CD152 exprimieren (Anteilig zu allen zugesetzten Zellen), weisse Säulen zeigen die CD152+ T Zellen die neu in den PBMCs nach Restimulation entstanden sind.1 und 2 haben kein SEB zur Restimulation erhalten, 2 und 4 haben 1,5 μg/ml SEB bei Restimulation erhalten. In den Kokulturen 1 und 2 wurden CD152+ T Zellen, in den Kokulturen wurden CD152– T Zellen zu den PBMCs zugesetzt.Human PBMCs (2 × 10 ⁵ / ml) were stimulated with 1.5 μg / ml SEB and after 48 hours the CD152 ⁺ T cells were isolated. After culturing with syngeneic PBMCs and with or without 1.5 μg / ml SEB, CD152 was again measured cytometrically 62 hours later on the surface of the T cells. The Y-axis shows in% the number of CD152 + T cells of all CD4 + T cells. Black Columns: CD152 + or CD152- T cells added to PBMCs and still expressing CD152 after 62h (Proportional to all added cells), white columns show the CD152 + T cells newly created in the PBMCs after restimulation 1 and 2 no SEB was obtained for restimulation, 2 and 4 have received 1.5 μg / ml SEB with restimulation. In cocultures 1 and 2 were CD152 + T cells, in the cocultures CD152-T cells were added to the PBMCs.

Beispiel 2Example 2

Aktivierte, isolierte CD152⁺ T Zellen inhibieren die Stimulation anderer T Zellen.Activated, isolated CD152 ⁺ T cells inhibit stimulation of other T cells.

Der Versuch wurde wie unter 1 durchgeführt. 36 Stunden nach Restimulation wurde IL-2 im Überstand der Kulturen gemessen. Es wurden entweder CD152+ T Zellen (Säulen 3 und 4) oder CD152– (Säule 5 und 6) oder keine Zellen zu den PBMCs zugefügt (Säulen 1 und 2). Graue Säulen 1, 3 und 5 zeigen Kokulturen, die keinen weiteren Stimulus nach Restimulation, schwarze Säulen 2, 4 und 6 haben 1,5 μg/ml SEB erhalten. Der Balken unter der Abbildung zeigt, dass CD152+ T Zellen vor Zugabe zu den Kokulturen 170 % mRNA für das inhibitorische Zytokin TGFbeta aufwiesen, CD152– allerdings nur 100. In Anwesenheit von CD152⁺ T Zellen war fast kein IL-2 mehr zu messen. IL-2 Produktion steht hier als Parameter für allgemeine Inhibition der Stimulation.The experiment was as under 1 carried out. 36 hours after restimulation, IL-2 was measured in the supernatant of the cultures. Either CD152 + T cells (columns 3 and 4) or CD152 (columns 5 and 6) or no cells were added to the PBMCs (columns 1 and 2). Gray columns 1, 3 and 5 show cocultures that have no further stimulus after restimulation, black columns 2, 4 and 6 have received 1.5 μg / ml SEB. The bar below the figure shows that CD152 + T cells before addition to the cocultures had 170% mRNA for the inhibitory cytokine TGFbeta, but CD152- only 100. In the presence of CD152 ⁺ T cells, almost no IL-2 was measurable. IL-2 production is here as a parameter for general inhibition of stimulation.

Beispiel 3Example 3

Ein CD152-Signal führt zur Inaktivierung einer Subpopulation von aktivierten T Zellen.A CD152 signal leads to Inactivation of a subpopulation of activated T cells.

Murine T Zellen wurden für 48 Stunden mit fest-Phase-gekoppelten anti-CD3/anti-CD28 stimuliert, dann restimuliert mit Antikörper-gekoppelten Latexkügelchen, entweder (1) mit aCD3+aCD28+Kontrollantikörper oder (2) aCD3+aCD28+aCD152. Die Zellen wurden mit CFSE markiert. Die Abnahme der Intensität zeigt die Teilung der Zelle an. Unter CD152-Kreuzvernetzung bleiben mehr Zellen in der langsamsten Generation zurück als ohne Kreuzvernetzung.murine T cells were used for 48 hours with fixed-phase-coupled stimulated anti-CD3 / anti-CD28, then restimulated with antibody-coupled Latex beads, either (1) with aCD3 + aCD28 + control antibody or (2) aCD3 + aCD28 + aCD152. The cells were labeled with CFSE. The decrease in intensity shows the division of the cell. Under CD152 cross-linking remain more Cells in the slowest generation back than without cross-linking.

Beispiel 4Example 4

Aktivierte, individuelle CD152⁺ T Zellen sind refraktär gegenüber einer Antigen-spezifischen Restimulation.Activated individual CD152 ⁺ T cells are refractory to antigen-specific restimulation.

PBMCs wurden für 48 Stunden mit löslichem anti-CD3 aktiviert und für CD152 markiert, zytometrisch und isoliert. Die CD152+ , CD152– und unsortierte CD4 Zellen wurden zu frischen PBMCs gesetzt. Zwei Tage später wurde die Proliferation der Fraktionen anhand der CFSE-Färbung detektiert. CD152⁺ T Zellen (CD4+mCD152+, graue Kurve) proliferierten nicht, bzw. weniger als CD4+ oder CD4+CD152– T Zellen. Aus dem Dargestellten ergibt sich, dass durch CD152 bereits aktivierte T-Zellen abgeschaltet werden können. M1 markiert den Anteil der proliferierenden Zellen. Meanfluorescenceintensity (%): CD4+: 2200 (61 %), CD4+CD152+ 3000 (36 %), CD4+CD152– (1800) 74 %.PBMCs were activated for 48 hours with soluble anti-CD3 and labeled for CD152, cytometry and isolation. The CD152 +, CD152 and unsorted CD4 cells were added to fresh PBMCs. Two days later, the proliferation of fractions was detected by CFSE staining. CD152 ⁺ T cells (CD4 + mCD152 +, gray curve) did not proliferate, or less than CD4 + or CD4 + CD152-T cells. It can be seen from the above that CD152 already activated T cells can be switched off. M1 marks the proportion of proliferating cells. Mean fluorescence intensity (%): CD4 +: 2200 (61%), CD4 + CD152 + 3000 (36%), CD4 + CD152- (1800) 74%.

Beispiel 5Example 5

5–30 % der CD4+ T Zellen aus der Synovialflüssigkeit exprimieren CD152 auf ihrer Oberfläche ex vivo. Zytometrische Darstellung von CD4+ T Zellen, die CD152 auf ihrer Oberfläche exprimieren. Synovialflüssigkeit (S) aus dem Kniegelenk von 10 (n = 10) Patienten mit Rheumatoider Arthritis, Blutvon 6 Patienten mit Rheumatoider Arthritis (RA) und Blut von 6 Gesunden (N) wurde ex vivo auf den Anteil CD152+ der CD4+ T Zellen (%) analysiert und verglichen.
SEB: Staphylococcus aureus B, IL-2: Interleukin 2, mCD152 : Membranständiges CD152.5-30% of synovial fluid CD4 + T cells express CD152 on their surface ex vivo. Cytometric representation of CD4 + T cells expressing CD152 on their surface. Synovial fluid (S) from the knee joint of 10 (n = 10) patients with rheumatoid arthritis, blood from 6 patients with rheumatoid arthritis (RA) and blood from 6 healthy (N) was measured ex vivo on the proportion CD152 + of CD4 + T cells (%) analyzed and compared.
SEB: Staphylococcus aureus B, IL-2: Interleukin 2, mCD152: Membrane-bound CD152.

Beispiel 6Example 6

Aktivierte, isolierte CD152⁺ T Zellen inhibieren die Stimulation anderer T Zellen, am Beispiel des proinflammatorischen Zytokins IFNgamma.Activated, isolated CD152 ⁺ T cells inhibit the stimulation of other T cells, using the example of the proinflammatory cytokine IFNgamma.

PBMCs wurden für 48 h mit anti-CD3 und anti-CD28 gekoppelt an Latexpartikel stimuliert und anschliessend CD152+ und CD152– CD4+ T Zellen getrennt. Diese Zellen wurden zu frischen PBMCs gegeben. Dann wurde für 48 Stunden restimuliert mit entweder SEB, anti-CD3 oder anti-CD3/anti-CD28. Es wurden entweder keine weiteren Zellen (weiss) CD152+ T Zellen zugefügt (schwarze Säule) oder CD152- (graue Säule) zugefügt und es wurde IFNgamma im Überstand der Kulturen mit ELISA gemessen. In Anwesenheit von CD152⁺ T Zellen war fast kein IFNgamma mehr zu messen. IFNgamma Produktion steht hier als Entzündungsparameter für allgemeine Inhibition der Stimulation (2). Die verschiedenen Stimulationsbedingungen stehen für verschiedene und verschieden starke Stimulationsbedingungen für die T Zellen, die alle zu dem gleichen Ergebnis führen: IFNgamma ist stark reduziert in den Kokulturen.PBMCs were stimulated for 48 h with anti-CD3 and anti-CD28 coupled to latex particles and then CD152 + and CD152-CD4 + T cells separated. These cells were added to fresh PBMCs. Then restimulated for 48 hours with either SEB, anti-CD3 or anti-CD3 / anti-CD28. Either no further cells (white) were added to CD152 + T cells (black column) or CD152 (gray column) and IFNgamma was measured in the supernatant of the cultures by ELISA. In the presence of CD152 ⁺ T cells, almost no IFNgamma could be measured. IFNgamma production is here as an inflammatory parameter for general inhibition of stimulation ( 2 ). The different stimulation conditions represent different and different stimulation conditions for the T cells, all leading to the same result: IFNgamma is greatly reduced in cocultures.

Beispiel 7Example 7

Aktivierte, isolierte CD152⁺ T Zellen (E) inhibieren die Proliferation anderer T Zellen (T).Activated, isolated CD152 ⁺ T cells (E) inhibit the proliferation of other T cells (T).

Der Versuch wurde wie unter 6 durchgeführt. 48 Stunden nach anti-CD3-Restimulation mit PBMCs und anti-CD3 wurde die Proliferation der Targetzellen (CFSE-markierte CD4⁺ T Zellen der PBMCs der proliferierenden Zellen) in den Kulturen gemessen. Es wurden CD152⁺ T Zellen (E) zu den PBMCs (T sind die CD4 Zellen der PBMCs) zugefügt. In Anwesenheit von CD152⁺ T Zellen war fast keine Proliferation der CD4-Targetzellen (T) anhand von abnehmender CFSE-Färbungsintensität zu messen. Proliferation steht hier als Parameter für allgemeine Inhibition der Stimulation und des chronischen Entzündungsprozesses. In 2 wurden die Überstände aus dem linken Versuch (1) genommen und auf anti-CD3-stimulierte PBMCs gegeben. Es wurde die Proliferation der CD4 Zellen der PBMCs nach 3 Tagen gemessen. Als Parameter diente die CFSE-Färbung der CD4 Zellen (schwarzer Diamant). Überstände von Kokulturen mit CD152– T Zellen sind durch weisse Vierecke gekennzeichnet. C (weisser Diamant) stellt in 1 eine Probe mit nur stimulierten PBMCs dar, in 2 PBMCs mit diesem Überstand inkubiert während Restimulation.The experiment was as under 6 carried out. Forty-eight hours after anti-CD3 restimulation with PBMCs and anti-CD3, proliferation of target cells (CFSE-labeled CD4 ⁺ T cells of the PBMCs of the proliferating cells) was measured in the cultures. CD152 ⁺ T cells (E) were added to the PBMCs (T are the CD4 cells of the PBMCs). In the presence of CD152 ⁺ T cells, almost no CD4 target cell proliferation (T) was measured by decreasing CFSE staining intensity. Proliferation is a parameter for general inhibition of stimulation and the chronic inflammatory process. In Figure 2, the supernatants from the left experiment (Figure 1) were taken and added to anti-CD3 stimulated PBMCs. The proliferation of CD4 cells of PBMCs was measured after 3 days. The parameter used was the CFSE staining of the CD4 cells (black diamond). Supernatants of cocultures with CD152-T cells are indicated by white squares. C (white diamond) represents a sample with only stimulated PBMCs in Figure 1, incubated with this supernatant in 2 PBMCs during restimulation.

Zusammenfassung der BeispieleSummary the examples

PBMCs wurden mit anti-CD3 stimuliert (A) oder aus dem Entzündungsherd direkt isoliert, so dass eine Fraktion CD152 auf der Oberfläche exprimiert (obere Reihe der Zellen). 1) Diese Zellen produzieren kein oder kaum IL-2 oder IFNgamma und sind in ihrer Proliferation limitiert (2). Unter Zell-Zellkontakt können diese CD152+ T Zellen weiter Zellen in ihrer Proliferation und inhibition von proinflammatorischen Zytokinen abschalten. Die Entzündung ist gestoppt. Die unteren Zellen zeigen inflammatorische T Zellen, die die Entzündung in Gang halten.PBMCs were stimulated with anti-CD3 (A) or from the site of inflammation directly isolated so that a fraction expresses CD152 on the surface (upper row of cells). 1) These cells do not produce or hardly IL-2 or IFNgamma and are limited in their proliferation (2). Under cell-cell contact can These CD152 + T cells continue to proliferate and inhibit cells of proinflammatory cytokines. The inflammation is stopped. The lower cells show inflammatory T cells, the the inflammation keep going.

Wirkungsweise von CD152+ T ZellenMode of action of CD152 + T cells

PBMCs werden stimuliert und so CD152+ T Zellen erhalten (oder CD152+ T Zellen werden aus dem Entzündungsherd isoliert). Es können auch inflammatorische T Zellen durch CD152 umprogrammiert werden, indem CD152 induziert oder transfiziert wird. Dann werden die Zellen in vitro expandiert und dem Patienten zurückgegeben. Die Enzündung wird abgeschaltet (9, rechts unten).PBMCs are stimulated to obtain CD152 + T cells (or CD152 + T cells are isolated from the site of inflammation). Inflammatory T cells can also be reprogrammed by CD152 by inducing or transfecting CD152. Then the cells are expanded in vitro and returned to the patient. The ignition is switched off ( 9 , bottom right).

Claims

Use of CD152 + T cells for therapy of Diseases of the rheumatic type.

Use according to claim 1, characterized that the diseases of the rheumatic type Lupus erythematosus, Scleroderma, rheumatoid arthritis, spondylopathies and / or reactive Are arthritis.

Use according to one of the preceding claims, characterized characterized in that CD152 induces in immunocompetent cells is, preferably in inflammatory T cells.

Use according to one of the preceding claims, characterized characterized in that the induction is performed ex vivo.

Use according to one of the preceding claims, characterized characterized in that induction by transfection of immunocompetent Cells, especially with TRAIL, TGFb, IL-10, statins, cystation, Vitamin D and / or its derivatives, IL-15 and / or anti-PD-1 antibodies.

Use according to one of the preceding claims, characterized characterized in that the CD152 + T cells are directly ex vivo from a inflammation isolated from a patient, expanded in vitro and returned become.

Use according to one of the preceding claims, characterized characterized in that the CD152 + T cells in vitro from autologous PBMCs, with the PBMCs containing 0.05 μg / ml-10 μg / ml anti-CD3, 0.05 μg / ml-10 μg / ml SEB or 0.05 μg / ml-10 μg / ml anti-CD3 / 0.05 μg / ml-10 μg / ml anti-CD28 be stimulated.

Use according to the preceding claim, characterized characterized that the CD152 + T cells after 48 h-7 days be isolated, especially after 2-3 days.