DE10316059A1 - Diagnosis, prognosis and monitoring of cardiovascular disease, by determining at least one of soluble CD40 ligand, pregnancy-associated plasma protein-A or placental growth factor - Google Patents

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Abstract

Analysis of samples associated with acute cardiovascular disease by determining the concentration of at least one of the markers soluble CD40 ligand (sCD40L); PAPP-A (pregnancy-associated plasma protein-A) and placental growth factor (PlGF), and comparing the result with reference values or results from reference samples. Analysis of samples associated with acute cardiovascular disease by determining the concentration of at least one of the markers soluble CD40 ligand (sCD40L); PAPP-A (pregnancy-associated plasma protein-A) and placental growth factor (PlGF), and comparing the result with reference values or results from reference samples. Optionally at least one of the additional markers troponin T (TnT), MPO (not defined), NT-pro-BNP (brain natriuretic peptide), VEGF (vascular endothelial growth factor), BNP or additional inflammation markers are also determined and compared. An independent claim is also included for a diagnostic kit comprising reagents for performing the new method, optionally also other components and/or auxiliaries.

Description

Die Erfindung betrifft einen neuen Marker der vaskulären Entzündung als Werkzeug zur Diagnose und deren Prognose in Patienten mit kardiovaskulären Erkrankungen. Der Marker dient weiterhin als ein Werkzeug, das die Auswahl von Wirkstoffen zur Behandlung solcher Erkrankungen erleichtert und schließlich als Ansatzpunkt für die Behandlung von kardiovaskulären Erkrankungen. Weiterhin betrifft die Erfindung die Erstellung eines individuellen Risikoprofils von negativen Vorgängen, die mit dem Fortschreiten der Arteriosklerose zusammenhängen.The Invention relates to a new marker of vascular inflammation as a diagnostic tool and their prognosis in patients with cardiovascular diseases. The marker continues to serve as a tool that the selection of active ingredients relieved for the treatment of such diseases and finally as Starting point for the treatment of cardiovascular Diseases. Furthermore, the invention relates to the creation of a individual risk profile of negative events that progress arteriosclerosis.

Kürzliche Fortschritte in der Grundlagenforschung haben eine fundamentale Rolle für die Entzündung bei der Vermittlung aller Phasen der Arteriosklerose, von ihrem Beginn über Fortschreiten und, letztendlich, den thrombotischen Komplikationen von arteriosklerotischen Läsionen etabliert [1-4]. Die aus dem Zusammenhang zwischen Entzündung und Arteriosklerose erhaltenen Ergebnisse bilden die Rationale zur Verwendung von zirkulierenden Entzündungsmarkern als potentielle prädiktive Instrumente bei Patienten mit akuten Koronarsyndromen. In der Tat gehen erhöhte Spiegel von Entzündungsmarkern, wie zum Beispiel hoch sensitives C-reaktives Protein (hsCRP), Serum Amyloid A, und Interleukin-6 (IL-6) nicht nur allgemein mit akuten Koronarsyndromen einher [5,7], sondern – was wichtiger ist – können auch eine Aussage über den klinischen Ausgang von Patienten mit akuten Koronarsyndromen vorhersagen [6, 8, 11]. Obwohl das "klassische" akute Phase Protein hsCRP als der am meisten versprechende Biomarker für klinische Zwecke angesehen wird, besteht eine substantielle Heterogenität im Hinblick auf die Prävalenz von erhöhten hsCRP Spiegeln in Patienten mit akuten Koronarsyndromen [12].recent Advances in basic research have been fundamental Role for the inflammation at mediating all phases of arteriosclerosis, from its onset to progression and, ultimately, the thrombotic complications of arteriosclerotic lesions established [1-4]. That from the connection between inflammation and Results obtained atherosclerosis form the rationale for using circulating inflammatory markers as a potential predictive Instruments in patients with acute coronary syndromes. As a matter of fact go elevated Levels of inflammatory markers, such as highly sensitive C-reactive protein (hsCRP), serum Amyloid A, and Interleukin-6 (IL-6) not only generally with acute Coronary syndromes [5,7], but - what is more important - can also a statement about the clinical outcome of patients with acute coronary syndromes predict [6, 8, 11]. Although the "classic" acute phase protein hsCRP as the am most promising biomarkers viewed for clinical purposes there is substantial heterogeneity with regard to the prevalence of increased hsCRP levels in patients with acute coronary syndromes [12].

So zeigen mehr als 30 % der Patienten mit schwerer instabiler Angina keine erhöhten hsCRP Spiegel [6, 9]. Darüber hinaus können individuelle Unterschiede im Ausmaß der Response auf bestimmte entzündliche Stimuli möglicherweise die Spiegel der "stromabwärts" akute- Phase Reaktanten, wie hsCRP beeinflussen [13, 14]. Daher besteht immer noch eine wichtige Herausforderung darin, proximale Stimuli für vaskuläre Entzündung zu identifizieren, die als Risoko-vorhersagende Serummarker in Patienten mit koronarer Arteriosklerose verwendet werden können.So show more than 30% of patients with severe unstable angina no raised hsCRP levels [6, 9]. About that can out individual differences in the extent of the response to certain inflammatory stimuli possibly the levels of the "downstream" acute phase reactants, how to influence hsCRP [13, 14]. Therefore, there is still an important one Challenge in identifying proximal stimuli for vascular inflammation that as a risk-predicting serum marker in patients with coronary artery Arteriosclerosis can be used.

Die Etablierung der korrekten Diagnose, verbunden mit einer geeigneten Behandlung von Patienten mit instabilen koronaren Herzerkrankungen kann eine Herausforderung sein. Der Ausschluß von akuten Myokardinfarkten nach heutigen Standards ist nicht zufriedenstellend. In den letzten Jahren hat eine Konzentration auf die Risikostratifizierung und Steuerung der Behandlung stattgefunden mit dem Ziel, Patienten zu identifizieren, bei denen das Risiko besteht, lebensbedrohliche kardiologische Ereignisse zu entwickeln, und die vor allem von verbesserten therapeutischen und intervenierenden Strategien profitieren (Hamm CW, Bertrand M, Braunwald E. Lancet 2001; 358:1533-8). Das EKG hat in dieser Hinsicht nur begrenzte prognostische Relevanz, da bedeutende Abnormitäten selten sind und ihr Nachweis wenig empfindlich und spezifisch ist (Kaul P, Fu Y, Chang WC, et al., J Am Coll Cardiol 2001; 38:64-71 und Savonitto S, Ardissino D, Granger CB, et al. JAMA 1999; 281:707-13).The Establishing the correct diagnosis, combined with an appropriate one Treatment of patients with unstable coronary artery disease can be a challenge. The exclusion of acute myocardial infarction by today's standards is unsatisfactory. In the last Has a focus on risk stratification and years Control of the treatment took place with the aim of getting patients identify those at risk of life-threatening to develop cardiological events, and especially those of improved therapeutic and intervening strategies benefit (Hamm CW, Bertrand M, Braunwald E. Lancet 2001; 358: 1533-8). The EKG has in this regard, only limited prognostic relevance, as significant abnormalities are rare and their detection is not very sensitive and specific (Kaul P, Fu Y, Chang WC, et al., J Am Coll Cardiol 2001; 38: 64-71 and Savonitto S, Ardissino D, Granger CB, et al. JAMA 1999; 281: 707-13).

Deshalb haben sich Marker einer Nekrose von Myokardzellen, vor allem kardiale Troponine, zu wertvollen Werkzeugen bei der Evaluierung von Patienten mit akuten koronaren Syndromen entwickelt (Hamm CW, Braunwald E. Circulation 2000; 102:118-22). Troponine sind allerdings nicht aktiv an der Pathophysiologie akuter koronarer Syndrome beteiligt, sondern stellen eher eine Art Surrogat-Marker für die fragile Thrombusbildung dar (Lindahl B, Diderholm E, Lagerqvist B, Venge P, Wallentin L. J Am Coll Cardio. 2001; 38:979-86, Heeschen C, van Den Brand MJ, Hamm CW, Simoons ML. Circulation 1999; 100:1509-14; Benamer H, Steg PG, Benessiano J, et al.. Am Heart J 1999; 137:815-20).Therefore have become markers of necrosis of myocardial cells, especially cardiac ones Troponine, a valuable tool in evaluating patients developed with acute coronary syndromes (Hamm CW, Braunwald E. Circulation 2000; 102: 118-22). However, troponins are not active involved in the pathophysiology of acute coronary syndromes, but are more of a surrogate marker for fragile thrombus formation (Lindahl B, Diderholm E, Lagerqvist B, Venge P, Wallentin L. J Am Coll Cardio. 2001; 38: 979-86, Heeschen C, van Den Brand MJ, Hamm CW, Simoons ML. Circulation 1999; 100: 1509-14; Benamer H, bridge PG, Benessiano J, et al. Am Heart J 1999; 137: 815-20).

Entzündungsmarker, welche die Aktivität der Erkrankung bestimmen, möglichst bevor eine Myokardnekrose auftritt, könnten wichtige zusätzliche Informationen für die diagnostische und therapeutische Stratifizierung bei Patienten mit akuten Koronarsyndromen darstellen. Die spezifische therapeutische Inhibierung von Cytokinen, die für die Plaque-Stabilität wesentlich sind, mag eine neue Behandlungsstrategie für Patienten mit instabiler und stabiler koronarer Herzerkrankung sein.Inflammatory markers, which is the activity determine the disease, if possible Before myocardial necrosis occurs, important additional ones could be information for diagnostic and therapeutic stratification in patients with acute coronary syndromes. The specific therapeutic Inhibition of cytokines responsible for the plaque stability a new treatment strategy for patients may be essential with unstable and stable coronary artery disease.

Ein zuverlässiger biochemischer Marker der Entzündung in diesem Zusammenhang wurde aber bis heute nicht identifiziert.On reliable biochemical marker of inflammation in this context, however, has not been identified to date.

Von Plazenta-Wachstumsfaktor (PlGF), einem Mitglied der vaskulären-Endothel-Wachstumsfaktor-Familie (VEGF-Familie) von Wachstumsfaktoren, wurde kürzlich gezeigt, daß dieser in frühen und fortgeschrittenen arteriosklerotischen Läsionen hoch-reguliert ist.From placenta growth factor (PlGF), a member of the vascular endothelial growth factor tor family (VEGF family) of growth factors, has recently been shown to be highly regulated in early and advanced arteriosclerotic lesions.

Die US 6,225,088 beschreibt PlGF im Zusammenhang mit proliferativen Erkrankungen, wohingegen in der WO 92/06194 PlGF als angiogenetischer Faktor beschrieben wird.The US 6,225,088 describes PlGF in connection with proliferative diseases, whereas WO 92/06194 describes PlGF as an angiogenic factor.

De Falco et al. (De Falco S, Gigante B, Persico MG. "Structure and function of placental growth factor" Trends Cardiovasc Med 2002 Aug;12(6):241-6) beschreiben den Zusammenhang beeinträchtigter Angiogenese und Arteriogenese während pathologischer Zustände, wie zum Beispiel Ischämie und Tumorbildung in Mäusen. Dabei wird PlGF als ein wesentlicher Faktor für die Angiogenese unter pathologischen Bedingungen beschrieben. PlGF wird als alternatives Ziel für eine angiogenetische Therapie vorgeschlagen.de Falco et al. (De Falco S, Gigante B, Persico MG. "Structure and function of placental growth factor "trends Cardiovasc Med 2002 Aug; 12 (6): 241-6) describe the connection impaired Angiogenesis and arteriogenesis during pathological conditions, such as ischemia and tumor formation in mice. PlGF is considered an essential factor for angiogenesis among pathological Conditions described. PlGF is used as an alternative target for an angiogenic Therapy suggested.

Luttun et al. (Luttun A, Tjwa M, Moons L, Wu Y, Angelillo-Scherrer A, Liao F, Nagy JA, Hooper A, Priller J, De Klerck B, Compernolle V, Daci E, Bohlen P, Dewerchin M, Herbert JM, Fava R, Matthys P, Carmeliet G, Collen D, Dvorak HF, Hicklin DJ, Carmeliet P. Revascularization of ischemic tissues by PlGF treatment, and inhibition of tumour angiogenesis, arthritis and atherosclerosis by anti-Fltl Nat Med 2002 Aug;8(8):831-40) beschreiben therapeutische Verfahren von PlGF und Flt-1 im Rahmen der Angiogenese. Weiterhin wird beschrieben, daß Hemmung von PlGF das Wachstum und die Verletzlichkeit von arteriosklerotischen Plaques verringert.Luttun et al. (Luttun A, Tjwa M, Moons L, Wu Y, Angelillo-Scherrer A, Liao F, Nagy JA, Hooper A, Priller J, De Klerck B, Compernolle V, Daci E, Bohlen P, Dewerchin M, Herbert JM, Fava R, Matthys P, Carmeliet G, Collen D, Dvorak HF, Hicklin DJ, Carmeliet P. Revascularization of ischemic tissues by PlGF treatment, and inhibition of tumor angiogenesis, arthritis and atherosclerosis by anti-Fltl Nat Med 2002 Aug; 8 (8): 831-40) describe therapeutic methods of PlGF and Flt-1 in the context of angiogenesis. Furthermore, it is described that inhibition of PlGF the growth and vulnerability of arteriosclerotic Plaques decreased.

Oura et al. (Oura H, Bertoncini J, Velasco P, Brown LF, Carmeliet P, Detmar M. A critical role of placental growth factor in the induction of inflammation and edema formation. Blood 2003 Jan 15;101(2):560-7) beschreiben die Rolle von PlGF bei kutaner Entzündung und Angiogenese. Weiterhin werden die Effekte von erhöhten und verringerten Spiegeln von PlGF und deren Vergleich mit dem Status der Entzündung beschrieben.Oura et al. (Oura H, Bertoncini J, Velasco P, Brown LF, Carmeliet P, Detmar M. A critical role of placental growth factor in the induction of inflammation and edema formation. Blood 2003 Jan 15; 101 (2): 560-7) the role of PlGF in cutaneous inflammation and angiogenesis. Farther the effects of increased and decreased levels of PlGF and their comparison with status the inflammation described.

Im Hinblick auf das oben Genannte ist es somit eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung, ein Verfahren zur Verfügung zu stellen, mit dem das Risiko, ein kardiovaskulär nachteiliges Er eignis, bedingt durch Koronarthrombose, mit Hilfe eines individuellen Risikoprofils abgeschätzt werden kann. Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist weiterhin, ein Verfahren zur Evaluierung der Wahrscheinlichkeit, daß eine Behandlung mit einem Wirkstoff zur Hemmung des plazentalen Wachstumsfaktors (PlGF) von Vorteil ist, zu entwickeln. Mit Hilfe dieses Verfahren soll der behandelnden Arzt besser als bisher in die Lage versetzt werden, geeignete Maßnahmen auswählen zu können, um den Patienten positiv zu beeinflussen und/oder ein nachteiliges Ereignis zu verhindern oder zumindest in seiner Schwere für den betroffenen Patienten zu vermindern.in the In view of the above, it is therefore an object of the present Invention to provide a method by which the Risk of being a cardiovascular adverse event caused by coronary thrombosis with the help an individual risk profile can be estimated. Task of The present invention is also a method for evaluation the probability that one Treatment with an agent to inhibit placental growth factor (PlGF) is beneficial to develop. Using this procedure the treating doctor should be better placed than before appropriate measures choose to be able to positively influence the patient and / or a disadvantage Prevent event or at least its severity for the affected Lessen patient.

Gemäß der Erfindung wird eine erste Aufgabe durch ein Verfahren zur Analyse von biologischen Proben in Zusammenhang mit kardiovaskulären Erkrankungen gelöst. Das erfindungsgemäße Verfahren umfaßt die Schritte von: (a) Gewinnung einer zu untersuchenden biologischen Probe von einem Patienten; (b) Inkubieren der Probe mit einem oder mehreren Molekülen, die spezifisch an PlGF binden; (c) Nachweisen und/oder quantifizieren von PlGF in der Probe unter Verwendung immunologischer Methoden; und (d) Vergleichen des für die zu untersuchende Probe erhaltenen Ergebnisses mit einem Referenzwert und/oder dem Ergebnis einer Referenzprobe.According to the invention is a first task through a method of analyzing biological Samples related to cardiovascular disease resolved. The inventive method includes the Steps of: (a) Obtaining a biological to be examined Sample from a patient; (b) Incubate the sample with an or several molecules, that specifically bind to PlGF; (c) Detect and / or quantify of PlGF in the sample using immunological methods; and (d) comparing the for the sample to be examined obtained result with a reference value and / or the result of a reference sample.

Im Zusammenhang mit der vorliegenden Erfindung wurde PlGF als ein Marker der vaskulären Entzündung identifiziert, der unabhängig ist und dem prädiktiven Wert von CRP überlegen ist. Es zeigte sich, daß die PlGF Serumspiegel die von herkömmlichen Entzündungsmarkern in akuten Koronarsyndromen erhaltene prädiktive und prognostische Information signifikant erweitern. Ein erhöhtes Risiko von Herzpatienten mit hohen PlGF-Konzentrationen, die standardmäßig therapiert wurden, wurde durch die zusätzliche Behandlung mit einem Glycoprotein IIb/IIIa-Inhibitor aufgehoben. Die Messung von PlGF bei Patienten mit instabiler koronarer Herzerkrankung liefert wichtige Einblicke in die Aktivität der Erkrankung, das kardiale Risiko und die Wirkung einer Behandlung mittels Glycoprotein IIb/IIIa-Hemmung durch z.B. Abciximab.in the In connection with the present invention, PlGF was used as a marker the vascular inflammation identified the independent is and the predictive Superior value of CRP is. It turned out that the PlGF Serum levels that of conventional ones inflammatory markers predictive and prognostic information obtained in acute coronary syndromes expand significantly. An elevated one Risk of cardiac patients with high PlGF concentrations who are treated as standard were, was through the additional Treatment with a glycoprotein IIb / IIIa inhibitor canceled. Measurement of PlGF in patients with unstable coronary artery disease provides important insights into the activity of the disease, the cardiac Risk and effects of treatment with glycoprotein IIb / IIIa inhibition by e.g. Abciximab.

Bevorzugt ist ein erfindungsgemäßes Verfahren, wobei die zu untersuchende Probe und/oder die Referenzprobe aus einem Säugetier, insbesondere aus dem Menschen, stammen. Weiter bevorzugt ist ein erfindungsgemäßes Verfahren, wobei die zu untersuchende Probe und/oder die Referenzprobe ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus peripherem Blut oder Fraktionen davon und Zellkultur-Suspensionen oder Fraktionen davon. Bevorzugt ist weiterhin, daß die untersuchende Probe und/oder Referenzprobe Blutserum oder Blutplasma ist. Besonders bevorzugt ist peripheres Vollblut als zu untersuchende Probe und/oder Referenzprobe.A method according to the invention is preferred, the sample to be examined and / or the reference sample originating from a mammal, in particular from humans. A method according to the invention is further preferred, the sample to be examined and / or the reference sample being selected from the group consisting of peripheral blood or fractions thereof and cell culture suspensions or fractions thereof. It is further preferred that the sample to be examined and / or reference sample is blood serum or blood plasma. Peripheral whole blood is particularly preferred as the sample and / or reference to be examined sample.

Gemäß einem weiteren Aspekt des erfindungsgemäßen Verfahrens kann die zu untersuchende Probe und/oder die Referenzprobe vorbehandelt sein, wobei dem peripheren Blut z.B. ein Gerinnungshemmer, insbesondere Heparin, zugesetzt wird.According to one Another aspect of the method according to the invention can be investigating sample and / or the reference sample must have been pretreated the peripheral blood e.g. an anticoagulant, in particular Heparin is added.

Ein wesentlicher Aspekt des erfindungsgemäßen Verfahren ist die Inkubation der Probe mit einem oder mehreren Molekülen, die spezifisch an PlGF oder einen Teil davon binden. Diese Moleküle können aus einer sehr großen Vielzahl von für PlGF spezifischen Molekülen ausgewählt sein. Bevorzugt ist, daß die an PlGF bindenden Moleküle ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Antikörpern, die spezifisch gegen PlGF oder gegen Teile davon gerichtet sind, oder Teilen oder Fragmenten davon und einem PlGF-Rezeptor oder Teilen davon. Besonders bevorzugt ist ein erfindungsgemäßes Verfahren, wobei die Antikörper, Teile oder Fragmente davon polyklonale Antikörpern, monoklonale Antikörpern, Fab-Fragmente, scFv-Antikörper und Diabodies umfassen.On An essential aspect of the method according to the invention is incubation the sample with one or more molecules specific to PlGF or tie part of it. These molecules can be of a very large variety from for PlGF specific molecules selected his. It is preferred that the molecules binding to PlGF selected are from the group consisting of antibodies that are specific for PlGF or directed against parts thereof, or parts or fragments thereof and a PlGF receptor or parts thereof. Particularly preferred is a method according to the invention, where the antibodies, Parts or fragments thereof polyclonal antibodies, monoclonal antibodies, Fab fragments, scFv antibody and diabodies.

Gemäß eines weiteren Aspekts des Verfahrens der vorliegenden Erfindung können die Komponenten bei der Durchführung des Verfahrens an eine feste Phase gebunden vorliegen, somit können die an einen Marker bindenden Moleküle in Lösung oder Matrix-immobilisiert vorliegen. Als Matrices können eine Vielzahl von dem Fachmann bekannten Materialien verwendet werden, wie zum Beispiel Harz-Matrices und/oder herkömmliche Säulenmatrices. Besonders bevorzugt ist weiterhin ein erfindungsgemäßes Verfahren, bei dem die an einen Marker bindenden Moleküle an eines oder mehrere Detektionsmoleküle aus der Gruppe bestehend aus Fluoresceinthioisocyanat, Phycoerythrin, Enzymen (zum Beispiel Meerrettich-Peroxidase) und magnetisches Bead gekoppelt sind.According to one further aspect of the method of the present invention can be Components in the implementation of the process are bound to a solid phase, so that molecules binding to a marker in solution or matrix immobilized. As matrices one can A large number of materials known to the person skilled in the art are used. such as resin matrices and / or conventional column matrices. Particularly preferred is also a method according to the invention, in which the molecules binding to a marker are attached to one or more detection molecules from the Group consisting of fluoresceinthioisocyanate, phycoerythrin, enzymes (for example horseradish peroxidase) and magnetic bead are coupled.

Gemäß einem weiteren Aspekt des erfindungsgemäßen Verfahrens können die an PlGF bindenden Moleküle mit einem Antikörper, an den eine oder mehrere Detektionsmoleküle gekoppelt sind, nachgewiesen werden. Es handelt sich somit um einen indirekten Nachweis der Bindung des Moleküls. Solche zweistufigen Nachweise sind dem Fachmann zum Beispiel aus der anti-Antikörper-Nachweistechnik bestens bekannt.According to one further aspect of the method according to the invention can molecules binding to PlGF with an antibody, to which one or more detection molecules are coupled. It is therefore an indirect proof of the binding of the Molecule. Such two-stage verifications are known to the person skilled in the art, for example the anti-antibody detection technique well known.

Gemäß einem weiteren Aspekt des Verfahrens gemäß der vorliegenden Erfindung können zur Analyse der Probe immunzytologische Verfahren angewandt werden. Dabei sind alle Verfahren geeignet, die eine spezifische Bestimmung anhand der PlGF/Molekül-Interaktion erlauben. Bevorzugt sind Verfahren, die ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Sandwich-Enzym-Immuntest, ELISA und Festphasen-Immuntests.According to one another aspect of the method according to the present invention can immunocytological methods are used to analyze the sample. All methods are suitable that have a specific determination based on the PlGF / molecule interaction allow. Methods which are selected from the group are preferred from sandwich enzyme immunoassay, ELISA and solid phase immunoassays.

Die für die zu untersuchende Probe ermittelten Ergebnisse werden üblicherweise mit einer Referenzprobe verglichen. Welche Probe als Referenzprobe dienen kann, wird insbesondere von der Art der untersuchten Probe und der Krankengeschichte des Individuums, aus dem die zu untersuchende Probe stammt, abhängen. Bevorzugt ist ein erfindungsgemäßes Verfahren, bei dem die Referenzprobe aus einem oder dem Mittelwert mehrerer Säugetiere stammt, in dem/in denen eine kardiovaskuläre Erkrankung ausgeschlossen wurde. Dies muß aber nicht zwangsläufig so sein, wenn z.B. das Fortschreiten einer Erkrankung bestimmt werden soll, kann auch eine „alte" Probe desselben Patienten als Referenzprobe verwendet werden. Dem Fachmann ist offensichtlich, welche Proben als Referenzprobe für das erfindungsgemäße Verfahren geeignet sind.The for the Results to be examined are usually determined compared to a reference sample. Which sample as a reference sample can serve, in particular on the type of sample examined and the medical history of the individual from which the patient to be examined Sample comes from, depend. A method according to the invention is preferred in which the reference sample from one or the mean of several mammals in which a cardiovascular disease is excluded has been. But this must not necessarily be like this if e.g. the progression of a disease can be determined an "old" sample can also be used Patients can be used as a reference sample. It is obvious to the person skilled in the art which samples as a reference sample for the method according to the invention are suitable.

Gemäß einem weiteren bevorzugten Verfahren beträgt der PlGF-Referenzwert und/oder das Ergebnis einer Referenzprobe > 24,9 ng/l (95% Konfidenz). Besonders bevorzugt beträgt der Referenzwert und/oder das Ergebnis einer Referenzprobe > 27,0 ng/l bis > 27,3 ng/l (99% Konfidenz)According to one the PlGF reference value and / or is another preferred method the result of a reference sample> 24.9 ng / l (95% confidence). The reference value is particularly preferably and / or that Result of a reference sample> 27.0 ng / l to> 27.3 ng / l (99% confidence)

Gemäß einem weiteren Aspekt des Verfahrens gemäß der vorliegenden Erfindung können die zu diagnostizierenden und/oder prognostizierenden und/oder deren Therapie zu überwachenden kardiovaskulären Erkrankungen ausgewählt sein aus der Gruppe bestehend aus stabiler und instabiler Angina, Myokardinfarkt, aktuem Herzsyndrom, koronarer Arterienerkrankung und Herzinsuffizienz. Es soll jedoch nicht ausgeschlossen werden, daß sich das erfindungsgemäße Verfahren noch für weitere kardiologische Erkrankungszustände eignet und anwenden läßt.According to one another aspect of the method according to the present invention can those to be diagnosed and / or forecasted and / or their Therapy to be monitored cardiovascular disease selected be from the group consisting of stable and unstable angina, Myocardial infarction, current heart syndrome, coronary artery disease and heart failure. However, it should not be excluded that itself the inventive method still for other cardiological disease states is suitable and can be applied.

Ein weiterer Aspekt der vorliegenden Erfindung betrifft einen diagnostischen Kit, wobei der Kit Mittel zur Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens, unter Umständen zusammen mit weiteren Komponenten und/oder Hilfsstoffen umfaßt. Solche Mittel sind bevorzugterweise mindestens ein Antikörper zum Nachweis von PlGF und Mittel zur anschließenden Quanti fizierung von PlGF. Der Kit kann außerdem andere Komponenten und/oder Enzyme zur Durchführung der Verfahren der vorliegenden Erfindung, z.B. Gebrauchsanweisungen zur Interpretation der Ergebnisse des Tests im Hinblick auf das Risikoprofil des Patienten und entsprechende Gegenmaßnahmen und Therapievorschläge enthalten.Another aspect of the present invention relates to a diagnostic kit, the kit comprising means for carrying out the method according to the invention, possibly together with other components and / or auxiliaries. Such agents are preferably at least one antibody for the detection of PlGF and agents for the subsequent quantification of PlGF. The kit may also include other components and / or enzymes for performing the methods of the present invention, such as instructions for use to interpret the results of the test with respect to the patient's risk profile and ent containing countermeasures and therapy suggestions.

Bevorzugt ist, das erfindungsgemäßes Verfahren mit Hilfe eines einen diagnostischer Kits durchzuführen, der Gold-markierte polyklonale Maus-Indikatorantikörper, biotinylierte polyklonale Nachweisantikörper und eine Testvorrichtung, umfassend ein Fiberglas-Vlies, umfaßt.Prefers is the inventive method with the help of a diagnostic kit that Gold-labeled polyclonal mouse indicator antibodies, biotinylated polyclonal Detection antibodies and a test device comprising a fiberglass fleece.

Ein weiterer Aspekt der vorliegenden Erfindung betrifft somit die Verwendung des erfindungsgemäßen Verfahrens zur Diagnose und/oder Prognose kardiovaskulärer Erkrankungen und/oder zur Überwachung von deren Therapie. Dies geschieht durch die quantitative und kritische Bestimmung von PlGF. Aufgrund des daraufhin erstellbaren Risiokoprofils können dann geeignete Gegenmaßnahmen durch den behandelnden Arzt durchgeführt werden, um den Patienten positiv zu beeinflussen und das nachteilige Ereignis zu verhindern oder zumindest in seiner Schwere für den betroffenen Patienten zu vermindern. Eine solche Therapie kann erfindungsgemäß zunächst die Verabreichung von Inhibitoren des Flt-l-Rezeptors umfassen, weiter bevorzugt aber auch die Verabreichung von Inhibitoren des Glycoprotein IIb/III-Rezeptors, insbesondere Abciximab, umfassen. Dem Fachmann sind jedoch weitere mögliche Therapien bekannt, um kardiovaskuläre Erkrankungen zu therapieren, die nach herkömmlichen Schemata erfolgen können. So sagt der Marker PlGF in Patienten mit instabiler Koronar-Herzerkrankung den Behandlungseffekt der Glycoprotein IIb/III-Inhibierung mit, z.B., Abciximab voraus. Das erhöhte kardiale Risiko von Patienten mit hohen PlGF Spiegeln, die Standardtherapie erhielten, wurde durch die zusätzliche Behandlung mit einem Glycoprotein IIb/IIIa-Inhibitor verringert.On Another aspect of the present invention thus relates to the use of the method according to the invention for the diagnosis and / or prognosis of cardiovascular diseases and / or for monitoring of their therapy. This happens through the quantitative and critical Determination of PlGF. Because of the risk profile that can then be created can then appropriate countermeasures to be performed by the attending physician to the patient positively influence and prevent the adverse event or at least in its severity for reduce the affected patient. Such therapy can, according to the invention, first of all Administration of inhibitors of the Flt-1 receptor further but also preferably the administration of inhibitors of glycoprotein IIb / III receptor, especially abciximab. The specialist however, are other possible ones Therapies known to treat cardiovascular disease, the traditional ones Schemes can be done. The marker says PlGF in patients with unstable coronary heart disease the treatment effect of glycoprotein IIb / III inhibition with e.g., abciximab ahead. That increased cardiac risk of patients with high PlGF levels, the standard therapy received was through the additional Treatment with a glycoprotein IIb / IIIa inhibitor decreased.

Die pro-inflammatorischen Effekte von PlGF können spezifisch durch Blockieren seines Rezeptors Flt-1 inhibiert werden und stellen eine neue anti-inflammatorische therapeutische Option in Patienten mit Koronar-Arterienerkrankung zur Verfügung.The pro-inflammatory effects of PlGF can be specific by blocking its receptor Flt-1 can be inhibited and represent a new anti-inflammatory therapeutic option in patients with coronary artery disease to disposal.

In einer früheren Analyse einer Untergruppe von Patienten der CAPTURE-Studie wurde gezeigt, daß eine zusätzliche Behandlung mit dem Glycoprotein IIb/IIIa-Rezeptor-Antagonisten Abciximab das erhöhte Risiko Troponin-positiver Patienten auf das Maß von Troponin negativen Patienten reduziert (Hamm CW, Heeschen C, Goldmann B, et al.; N Engl J Med 1999; 340:1623-9). Diese Patienten stellen ungefähr 1/3 der Patienten mit akuten Koronarsyndromen dar (Hamm CW, Braunwald E; Circulation 2000; 102:118-22; Antman EM, Tanasijevic MJ, Thompson B, et al; N Engl J Med 1996; 335:1342-9; Ohman EM, Armstrong PW, Christenson RH, et al.; N Engl J Med 1996; 335:1333-41; Hamm CW, Ravkilde J, Gerhardt W, et al.; N Engl J Med 1992; 327:146-50; Hamm CW, Goldmann BU, Heeschen C, Kreymann G, Berger J, Meinertz T; N Engl J Med 1997; 337:1648-53). Ähnliche Befunden hinsichtlich Troponin T und Troponin I ergaben sich später aus anderen Studien (Newby LK, Ohman EM, Christenson RH, et al.; Circulation 2001; 103:2891-6; Januzzi JL, Chae CU, Sabatine MS, Jang IK; J Thromb Thrombolysis 2001; 11:211-5; Heeschen C, Hamm CW, Goldmann B, Deu A, Langenbrink L, White HD; Lancet 1999; 354:1757-62), und anschließend wurden Troponine in die neuen Richtlinien aufgenommen als Teil der Risikostratifizierung bei Patienten mit akuten Koronarsyndromen (Hamm CW, Bertrand M, Braundwald E; Lancet 2001; 358:1533-8; Braunwald E, Maseri A, Armstrong PW, et al.; Eur Heart J 1998; 19:D22-30).In an earlier one Analysis of a subset of patients in the CAPTURE trial was conducted shown that a additional Treatment with the glycoprotein IIb / IIIa receptor antagonist abciximab that increased Risk of troponin-positive patients to the degree of troponin-negative patients reduced (Hamm CW, Heeschen C, Goldmann B, et al .; N Engl J Med 1999; 340: 1623-9). These patients represent approximately 1/3 of the acute patients Coronary syndromes (Hamm CW, Braunwald E; Circulation 2000; 102: 118-22; Antman EM, Tanasijevic MJ, Thompson B, et al; N Engl J Med 1996; 335: 1342-9; Ohman EM, Armstrong PW, Christenson RH, et al .; N Engl J Med 1996; 335: 1333-41; Hamm CW, Ravkilde J, Gerhardt W, et al .; N Engl J Med 1992; 327: 146-50; Hamm CW, Goldmann BU, Heeschen C, Kreymann G, Berger J, Meinertz T; N Engl J Med 1997; 337: 1648-53). Similar Findings regarding troponin T and troponin I were later revealed other studies (Newby LK, Ohman EM, Christenson RH, et al .; Circulation 2001; 103: 2891-6; Januzzi JL, Chae CU, Sabatine MS, Jang IK; J Thromb Thrombolysis 2001; 11: 211-5; Heeschen C, Hamm CW, Goldmann B, Deu A, Langenbrink L, White HD; Lancet 1999; 354: 1757-62), and then Troponine included in the new guidelines as part of risk stratification in patients with acute coronary syndromes (Hamm CW, Bertrand M, Braundwald E; Lancet 2001; 358: 1533-8; Braunwald E, Maseri A, Armstrong PW, et al .; Eur Heart J 1998; 19: D22-30).

Die Ergebnisse der vorliegenden Studie etablieren den PlGF Serumspiegel als eine neue wirksame unabhängige prognostische Determinante des klinischen Ausgangs bei Patienten mit akuten Koronarsyndromen. Besonders zu bemerken ist, daß in Patienten mit niedrigen hsCRP Serumspiegeln, erhöhte PlGF Serumspiegel eine Untergruppe von Patienten identifizieren, die an einem signifikant erhöhten kardialen Risiko leiden (angepaßtes Gefahren-Verhältnis 3,58 [95% CI 1,48 – 7,72]; p = 0,001).The Results of the present study establish the PlGF serum level as a new effective independent prognostic determinant of clinical outcome in patients with acute coronary syndromes. It should be noted that in patients with low hsCRP serum levels, PlGF serum levels increased one Identify subset of patients at significant increased suffer from cardiac risk (adapted Hazard ratio 3.58 [95% CI 1.48 - 7.72]; p = 0.001).

Der prädiktive Wert von PlGF Serumspiegel ist unabhängig von Evidenz für myokardiale Nekrose, wie durch den Troponin Serumspiegel bestimmt. Zuletzt identifizieren erhöhte PlGF Serumspiegel nicht nur diejenigen Patienten mit akuten Brustschmerzen, die akute Koronarsyndrome entwickeln, sondern auch diejenigen Patienten, die an einem erhöhten Risiko von wiederkehrender Instabilität nach der Entlassung von einem anfänglichen akuten Koronarsyndrom leiden. Daher kann das Messen des PlGF Serumspiegels nicht nur ein verläßliches und wirksames klinisches Werkzeug für die Identifizierung von Patienten mit hoch-Risiko Läsions-Bildung sein, sondern auch von andauernder vaskulärer Entzündung der Koronarzirkulation.The predictive PlGF serum level is independent of evidence for myocardial Necrosis as determined by serum troponin levels. Identify last increased PlGF serum levels not only those patients with acute chest pain, who develop acute coronary syndromes but also those patients which at an elevated Risk of recurrent instability after being released from one initial suffer from acute coronary syndrome. Therefore, measuring the PlGF serum level not just a reliable one and effective clinical tool for patient identification with high-risk lesion formation but also from persistent vascular inflammation of the coronary circulation.

Die Rolle von PlGF als einem primären Entzündungsmarker von arteriosklerotischer Läsions-Instabilität kann gut durch seine gut dokumentierten pro-inflammatorischen Effekte in Tiermodellen von Arteriosklerose oder Arthritis erklärt werden [15]. Obwohl PlGF zu der Familie von VEGF gehört, scheint seine ätiopathogenetische Rolle eher mit der Entzündung als mit der Angiogenese zusammenzuhängen [15]. In der Tat, während die VEGF-Erhöhung durch Hypoxie und die Erhöhung des VEGF-Serumspiegels als eine frühe Anpassung des Myokards an den abnehmenden Blutfluß angesehen werden [20], wird PlGF nicht durch Hypoxie beeinträchtigt oder herunter-reguliert [21, 22]. In Übereinstimmung mit diesen Daten, ergaben die Ergebnisse dieser Studie keine Korrelation zwischen dem PlGF Serumspiegel und dem Troponin T Serumspiegel als ein Marker von myokardialer Nekrose, wohingegen der VEGF Serumspiegel positiv mit dem Troponin T Serumspiegel korrelierte. Übereinstimmend damit korrelierte PlGF nicht mit dem VEGF Serumspiegel.The role of PlGF as a primary inflammation marker of atherosclerotic lesion instability can be well explained by its well-documented pro-inflammatory effects in animal models of atherosclerosis or arthritis [15]. Although PlGF belongs to the VEGF family, its etiopathogenetic role appears to be related to inflammation rather than angiogenesis [15]. In fact, while VEGF elevation due to hypoxia and an increase in VEGF serum levels are seen as an early adaptation of the myocardium to decreasing blood flow [20], PlGF is not associated with hypoxia impaired or down-regulated [21, 22]. In accordance with these data, the results of this study did not show a correlation between the PlGF serum level and the troponin T serum level as a marker of myocardial necrosis, whereas the VEGF serum level positively correlated with the troponin T serum level. Consistent with this, PlGF did not correlate with VEGF serum levels.

Daher scheint der PlGF Serumspiegel nicht durch myokardiale Nekrose beeinträchtigt zu werden. Im Gegenteil sind die VEGF Serumspiegel mit einer Erhöhung von Troponin T, beeinträchtigtem TIMI Fluß, und klinischen Anzeichen von myokardialer Ischämie gekoppelt [23]. Der PlGF Serumspiegel als nicht sensitiv gegenüber kleineren myokardialen Verletzungen könnte in Patienten mit akuten Koronarsyndromen spezifisch wichtig sein, von denen ungefähr ein Drittel bei Einlieferung positiv für Troponin sind [24].Therefore the PlGF serum level does not appear to be affected by myocardial necrosis become. On the contrary, the VEGF serum levels with an increase of Troponin T, impaired TIMI river, and clinical signs of myocardial ischemia [23]. The PlGF Serum levels as not sensitive to smaller myocardial Could injure be specifically important in patients with acute coronary syndromes, about of which a third are positive for troponin on posting [24].

Ähnlich könnte eine myokardiale Verletzung auch den Wert des hsCRP Serumspiegels kompromittieren, um so den Ausgang in Patienten mit akuten Koronarsyndromen vorhersagen zu können. Als ein klassischer unspezifischer stromabwärts akute-Phase-Marker, sind die hsCRP Serumspiegel in Patienten mit myokardialer Verletzung erhöht, wie durch Troponin T Erhöhung gemessen. Es ist gut etabliert, daß erhöhte Serumspiegel von hsCRP vor dem Auftreten eines Markers von myokardialer Nekrose in nahezu allen Patienten gefunden werden, in denen vor einem Infarkt eine instabile Angina auftritt [25]. Die Spezifität von erhöhtem hsCRP Serumspiegel, der eine verstärkte vaskuläre Entzündung bestätigt, ist daher in Anwesenheit von myokardialer Verletzung sehr begrenzt.A could be similar myocardial injury also compromise the value of the hsCRP serum level, to predict the outcome in patients with acute coronary syndromes to be able to. As a classic non-specific downstream acute-phase marker, are the hsCRP serum level in patients with myocardial injury elevated, as by increasing troponin T measured. It is well established that elevated serum levels of hsCRP before the appearance of a marker of myocardial necrosis in almost all patients are found in whom a unstable angina occurs [25]. The specificity of elevated hsCRP serum levels a reinforced one vascular inflammation approved, is therefore very limited in the presence of myocardial injury.

Daher können in Troponin-positiven Patienten erhöhte hsCRP Serumspiegel lediglich ein erhöhtes Risiko sekundär zu myokardialer Verletzung als ein Surrogatmarker für Thrombembolie darstellen, die eher von einem aktiven thrombotischen Prozeß innerhalb der kulpritischen Läsion als einer andauernden vaskulären Entzündung stammen.Therefore can in troponin-positive patients, hsCRP only increased serum levels an elevated Secondary risk to myocardial injury as a surrogate marker for thromboembolism represent that of an active thrombotic process within the culprit lesion as a persistent vascular inflammation.

Tatsächlich sind, wenn jeweils Troponin T und VEGF als Marker von myokardialer Nekrose und Ischämie in eine multivariante Analyse einbezogen werden, erhöhte hsCRP Serumspiegel nicht länger für eine erhöhtes Risiko in Patienten mit akuten Koronarsyndromen prädiktiv.In fact, if troponin T and VEGF are respectively markers of myocardial necrosis and ischemia be included in a multivariate analysis, increased hsCRP Serum levels no longer for one increased Predictive risk in patients with acute coronary syndromes.

Noch wichtiger variiert die berichtete Prävalenz von erhöhtem hsCRP Serumspiegel in akuten Koronarsyndromen beträchtlich. (Mehr als 30% der Patienten mit schwerer instabiler Angina und mehr als 50% der Patienten mit einem akuten myokardialen Infarkt zeigen keine erhöhten hsCRP Serumspiegel). Erhöhte hsCRP Serumspiegel fehlen in mehr als 30 % von Patienten mit schwerer instabiler Angina und in mehr als 50 % von Denjenigen mit einem akuten myokardialen Infarkt, der nicht nach einer instabilen Angina folgt [6, 25], was eine wichtige Heterogenität der Rolle von entzündlichen Auslösern des klinischen Syndroms der koronaren Instabilität vermuten läßt [1]. Jedoch ist es auch gut etabliert, daß Individuen in ihrer systemischen Antwort auf einen bestimmten entzündlichen Stimulus variieren können [26, 27]. Die Zunahme in hsCRP oder IL-6, die in Antwort auf das durch Ballondilatation induzierte vaskuläre Trauma oder sogar durch unkomplizierte Herzkatheterisierung beobachtet wurde, korreliert linear mit Basislinien hsCRP oder Interleukin-6 Serumspiegel [26]. Zusätzlich ist die IL-6 Produktion durch Monozyten, die von Patienten mit instabiler Angina isoliert werden, signifikant in Patienten mit erhöhtem hsCRP Serumspiegel erhöht, verglichen mit Patienten mit normalem hsCRP Serumspiegel [27]. Diese individellen Unterschiede im Ausmaß der Antwort auf einen bestimmten entzündlichen Stimulus können eine genetische Ursache haben [28]. Unglücklicherweise schränken solche heterogenen Antworten die Brauchbarkeit von stromabwärts akute-Phase Reaktanten, wie zum Beispiel hsCRP, als entzündlichen Marker für die Risikoabschätzung ein. Im Gegensatz dazu scheint PlGF ein direkter proximaler Stimulus für entzündliche Prozesse innerhalb der Gefäßwand zu sein [15]. Tatsächlich waren erhöhte PlGF Serumspiegel extrem informativ spezifisch in Patienten mit akuten Koronaxsyndromen, jedoch nicht nicht-erhöhte hsCRP Serumspiegel. In dieser Patientenkohorte, identifizierten erhöhte PlGF Serumspiegel eine Untergruppe von Patienten mit deutlich erhöhtem kardialem Risiko, das ähnlich zu den durch erhöhte Troponin Serumspiegel definierten hoch-Risiko Patienten war. Daher können erhöhte PlGF Serumspiegel in der Tat einen primären entzündlichen Anzeiger koronarer Instabilität darstellen.Yet more importantly, the reported prevalence of increased hsCRP varies Serum levels are significant in acute coronary syndromes. (More than 30% of the Patients with severe unstable angina and more than 50% of patients with an acute myocardial infarction show no increased hsCRP Serum levels). Increased hsCRP Serum levels are absent in more than 30% of patients with severe unstable angina and in more than 50% of those with one acute myocardial infarction which is not after an unstable angina follows [6, 25], which is an important heterogeneity of the role of inflammatory triggers of the clinical syndrome of coronary instability [1]. However, it is also well established that individuals in their systemic Response to a particular inflammatory stimulus will vary can [26, 27]. The increase in hsCRP or IL-6 in response to that vascular trauma induced by balloon dilation or even by uncomplicated cardiac catheterization was observed, correlated linear with baseline hsCRP or interleukin-6 serum levels [26]. additionally is the IL-6 production by monocytes by patients with unstable Angina isolation was significant in patients with elevated hsCRP Serum levels increased, compared to patients with normal hsCRP serum levels [27]. This individual differences in the extent of the response to a particular inflammatory Can stimulus have a genetic cause [28]. Unfortunately, such restrict heterogeneous responses to the usefulness of the downstream acute phase Reactants, such as hsCRP, as an inflammatory marker for risk assessment. In contrast, PlGF appears to be a direct proximal stimulus for inflammatory Processes within the vessel wall too be [15]. Indeed were increased PlGF Serum levels extremely informative specifically in patients with acute Coronax syndromes, but not non-elevated serum hsCRP levels. In in this patient cohort, elevated PlGF serum levels identified one Subgroup of patients with significantly increased cardiac risk who are similar to by increased Troponin serum levels defined high-risk patients. Therefore can increased PlGF serum levels are indeed a primary inflammatory coronary indicator instability represent.

Weiterhin könne, weil die pro-inflammatorischen Effekte von PlGF spezifisch durch Blockieren seines Rezeptors Flt-1 inhibiert werden können, diese Ergebnisse auch einen Ansatz für ein neues anti-inflammatorisches therapeutisches Target in Patienten mit koronarer arterieller Erkrankung zur Verfügung stellen [29].Farther could, because the pro-inflammatory effects of PlGF are specific Blocking its receptor Flt-1 can be inhibited by this Results also an approach for a new anti-inflammatory therapeutic target in patients with coronary arterial disease [29].

Zusammenfassend läßt sich sagen, daß die vorliegende Studie die bedeutende und unabhängige Rolle von PlGF als einen Marker für die diagnostische und therapeutische Risikostratifizierung dokumentiert. Das erhöhte kardiale Risiko von Patienten mit hohen PlGF-Konzentrationen, die eine Standardtherapie mit Heparin und Aspirin erhielten, wurde durch den Glycoprotein IIb/IIIa-Rezeptorantagonisten Abciximab aufgehoben. Die kombinierte Verwendung von Troponinen und PlGF, welche beide wesentliche Bestandteile der Pathophysiologie bei Patienten mit akuten Koronarsyndromen darstellen, liefert wichtige Einblicke in die Aktivität der Erkrankung, dem kardiologischen Risiko und der Wirksamkeit einer Behandlung mittels Glycoprotein IIb/IIIa-Hemmung durch Abciximab, welche der Verwendung eines einzelnen Markers überlegen ist.In summary, the present study documents the significant and independent role of PlGF as a marker for diagnostic and therapeutic risk stratification. The increased cardiac risk of patients with high PlGF concentrations who received standard therapy with heparin and aspirin was eliminated by the glycoprotein IIb / IIIa receptor antagonist abciximab. The Combined use of troponins and PlGF, which are both essential components of the pathophysiology in patients with acute coronary syndromes, provides important insights into the activity of the disease, the cardiological risk and the effectiveness of treatment with glycoprotein IIb / IIIa inhibition by abciximab, which of the use is superior to a single marker.

Zusammenfassend stellt der PlGF Serumspiegel einen wirksamen und verläßlichen Biomarker der vaskulären Entzündung und negativem Ausgang in Patienten mit akuten Koronarsyndromen dar. Ein Messen der PlGF Serumspiegel erweitert die von herkömmlichen entzündlichen Markern in akuten Koronarsyndromen erhaltene prädiktive und prognostische Information signifikant.In summary the PlGF serum level provides an effective and reliable Biomarkers of the vascular inflammation and negative outcome in patients with acute coronary syndromes. Measuring the PlGF serum level extends that of conventional ones inflammatory Predictive and prognostic information obtained for markers in acute coronary syndromes significant.

Die Erfindung soll nun im folgenden anhand von Beispielen unter Bezugnahme auf die beigefügten Figuren näher erläutert werden, ohne jedoch dadurch begrenzt zu werden. In den Figuren zeigt:The The invention will now be described in the following by means of examples on the attached Figures closer explained without being limited by it. The figures show:

1 den Zusammenhang zwischen PlGF und hsCRP als einem stromabwärts akute-Phase Reaktanten (n = 1088). 1 the relationship between PlGF and hsCRP as a downstream acute-phase reactant (n = 1088).

2 jeweils die PlGF und hsCRP Serumspiegel, gemäß dem Basislinien Troponin T Status (n = 1088). 2 PlGF and hsCRP serum levels, respectively, according to the baseline Troponin T status (n = 1088).

3 den Zusammenhang zwischen der Serumkonzentration an PlGF und der Häufigkeit eines kardialen Ereignisses nach 24 Stunden, 72 Stunden, 30 Tagen und 6 Monaten in der Patientengruppe, die ein Placebo erhalten hatte (n = 547). Der Bereich der PlGF-Konzentrationen war wie folgt: unterhalb von gleich zu 13,3 ng/l (1. Quintil), 13,4 bis 19,2 ng/l (2. Quintil), 19,3 bis 27,3 ng/l (3. Quintil), 27,4 bis 40,0 ng/l (4. Quintil), und oberhalb 40,0 ng/l (5. Quintil). Die Unterschiede in den Raten eines Vorkommens zwischen den Quartilen waren signifikant bei 30 Tagen (p 0,001) und 6 Monaten (p < 0,001) anschließender Untersuchung. 3 the relationship between the serum concentration of PlGF and the frequency of a cardiac event after 24 hours, 72 hours, 30 days and 6 months in the patient group who had received a placebo (n = 547). The range of PlGF concentrations was as follows: below equal to 13.3 ng / l (1st quintile), 13.4 to 19.2 ng / l (2nd quintile), 19.3 to 27.3 ng / l (3rd quintile), 27.4 to 40.0 ng / l (4th quintile), and above 40.0 ng / l (5th quintile). The differences in the rates of occurrence between the quartiles were significant at 30 days (p 0.001) and 6 months (p <0.001) subsequent examination.

4 Receiver-Operating-Charakteristia Kurvenanalyse für den prädiktiven Wert von PlGF Serumspiegeln für das Auftreten von Mortalität oder nicht-tödlichem Myokardinfarkt bei 6 Monaten Nachuntersuchung. 4 Receiver operating characteristics Curve analysis for the predictive value of PlGF serum levels for the occurrence of mortality or non-fatal myocardial infarction after 6 months of follow-up.

5 eine Darstellung nach Kaplan-Meier der kumulativen Inzidenz von Myokardinfarkt mit tödlichem oder nicht-tödlichem Ausgang nach 72 Stunden (a) und 6 Monaten (b) gemäß den Base Line-Werten der PlGF-Serumspiegel (diagnostischer Schwellenwert 27,0 ng/l; n = 547). 5 a Kaplan-Meier representation of the cumulative incidence of myocardial infarction with fatal or non-fatal outcome after 72 hours (a) and 6 months (b) according to the base line values of the PlGF serum levels (diagnostic threshold value 27.0 ng / l; n = 547).

6 den prädiktiven Wert von PlGF für die Inzidenz von Myokardinfarkt mit tödlichem oder nicht-tödlichem Ausgang nach hsCRP Serumspiegeln (a) und Troponin T Serumspiegeln (b). Diagnostische Schwellenwerte waren 27,0 ng/l für PlGF, 0,1 ug/l für Troponin T und 10 mg/l für hsCRP; n = 547). 6 the predictive value of PlGF for the incidence of myocardial infarction with fatal or non-fatal outcome after hsCRP serum levels (a) and troponin T serum levels (b). Diagnostic thresholds were 27.0 ng / l for PlGF, 0.1 µg / l for Troponin T and 10 mg / l for hsCRP; n = 547).

7 den prädiktiven Wert von Entlassungs-PlGF Serumspiegeln für das Patientenergebnis bei 6-Monaten Nachuntersuchung. Patienten mit erhöhten PlGF Serumspiegeln unterlagen einem höheren kardialen Risiko, mit einer Auftrittsrate von 7,4 %, verglichen mit 2,2 % für Patienten mit PlGF Serumspiegeln unterhalb von 27,0 ng/l(p = 0,005). 7 the predictive value of discharge PlGF serum levels for patient outcome after 6 months of follow-up. Patients with elevated PlGF serum levels were at higher cardiac risk, with an occurrence rate of 7.4% compared to 2.2% for patients with PlGF serum levels below 27.0 ng / l (p = 0.005).

BeispieleExamples

PlGF wurde ursprünglich in der Plazenta identifiziert [16] und stimuliert vaskuläres glattes Muskelwachstum, rekrutiert Makrophagen in arteriosklerotischen Läsionen, reguliert die Produktion von TNF-α und MCP-1 durch Makrophagen hoch und stimuliert die pathologische Angiogenese [15]. Weit wichtiger, von der Inhibierung der Effekte von PlGF durch Blockieren seines Rezeptors Tyrosinkinase Flt-1 wurde experimentell gezeigt, daß dies sowohl arteriosklerotisches Plaque-Wachstum als auch die Verwundbarkeit durch die Inhibierung der entzündlichen Zellinfiltration unterdrückt [15]. Diese Daten lassen vermuten, daß PlGF vielleicht als ein primärer inflammatorischer Anzeiger der arteriosklerotischen Plaque-Instabilität dient.PlGF was originally identified in the placenta [16] and stimulates vascular smooth Muscle growth, recruits macrophages in arteriosclerotic lesions, regulates the production of TNF-α and MCP-1 through macrophages and stimulates pathological angiogenesis [15]. More importantly, by inhibiting the effects of PlGF Blocking its receptor tyrosine kinase Flt-1 has been shown experimentally that this atherosclerotic plaque growth as well as vulnerability by inhibiting the inflammatory Cell infiltration suppressed [15]. These data suggest that PlGF may be considered a primary inflammatory Indicator of arteriosclerotic plaque instability.

Daher wurde die prognostische Signifikanz von PlGF in Patienten mit akuten Koronarsyndromen unter der Verwendung der Daten der Patienten mit akuten Koronarsyndromen, die in die CAPTURE Untersuchung aufgenommen wurden (c7E3 „Anti Platelet Therapy in Unstable Refractory angina"), verwendet, und dann die diagnostische und prognostische Signifikanz in einer großen Patientenpopulation, die mit Schmerzen in der Brust eingeliefert wurden, vorläufig validiert. Die PlGF Serumspiegel wurden in 1088 Patienten mit akuten Koronarsyndromen aus der CAPTURE Untersuchung gemessen. Weiterhin wurde die diagnostische und prognostische Signifikanz von PlGF Serumspiegeln in einer heterogenen Gruppe von 619 Patienten mit akuten Schmerzen in der Brust vorläufig validiert. Die Inzidenz von Myokardinfarkt mit tödlichem oder nicht-tödlichem Ausgang wurde während der Folgezeit aufgezeichnet.Therefore, the prognostic significance of PlGF in patients with acute coronary syndromes was used using the data from patients with acute coronary syndromes included in the CAPTURE examination (c7E3 "Anti Platelet Therapy in Unstable Refractory Angina"), and then the diagnostic and Predictive significance in a large patient population admitted with chest pain has been provisionally validated, and PlGF serum levels were measured in 1,088 patients with acute co ronar syndromes measured from the CAPTURE examination. Furthermore, the diagnostic and prognostic significance of PlGF serum levels in a heterogeneous group of 619 patients with acute chest pain was provisionally validated. The incidence of fatal or non-fatal myocardial infarction was recorded during the subsequent period.

Material und Methodenmaterial and methods

1. Patienten1. Patients

Aufbau des Sets von Patienten mit akuten Koronarsyndromen. Die CAPTURE-Studie registrierte 1265 Patienten mit akuten Koronarsyndromen (61% männlich, im Alter von 61 ± 10 years). Alle CAPTURE-Patienten klagten über wiederkehrende Brustschmerzen im Ruhezustand, assoziiert mit EKG-Änderungen während einer Behandlung mit intravenösem Heparin und Glycerintrinitrat. Die gesamte Patientenpopulation wurde vor der Randomisierung einer Koronarangiographie unterzogen, die das Auftreten einer deutlichen koronaren Arterienerkrankung mit auslösenden Läsionen von > 70 %, die für eine Angioplastie geeignet waren, signifikant aufzeigte. Heparin von vor der Randomisierung bis mindestens 1 h nach der PTCA Prozedur verabreicht. Bei allen Patienten waren innerhalb von 18 bis 24 Stunden nach Beginn der Behandlung koronare Interventionen vorgesehen. Die Patienten wurden einer Behandlung durch Abciximab oder Placebo zufallsverteilt zugeordnet. Primäre Endpunkte der Studie waren Mortalität und nicht-fataler Myocardinfarkt währen der 6-Monate Nachuntersuchungs-Periode [17]. Serumproben wurden 8,7 [75% CI 3,6-11,3] Stunden nach Einsetzen der Symptome entnommen.construction the set of patients with acute coronary syndromes. The CAPTURE study registered 1265 patients with acute coronary syndromes (61% male, at the age of 61 ± 10 years). All CAPTURE patients complained of recurrent chest pain at rest, associated with ECG changes during treatment with intravenous Heparin and glycerol trinitrate. The entire patient population was undergo coronary angiography prior to randomization; the appearance of a clear coronary artery disease triggering lesions of> 70% for angioplasty were significantly significant. Heparin from before randomization administered until at least 1 h after the PTCA procedure. At all Patients were within 18 to 24 hours of onset Treatment provided for coronary interventions. The patients were randomly assigned to treatment with abciximab or placebo. Primary endpoints the study was mortality and non-fatal myocardial infarction during the 6-month follow-up period [17]. serum samples were 8.7 [75% CI 3.6-11.3] hours after the onset of symptoms taken.

2. Validierung von Patienten mit akutem Brustschmerz2. Validation of patients with acute chest pain

Eine separate Gruppe von 626 Patienten mit Brustschmerz (161 Frauen und 465 Männer, mittleres Alter 61 [38-82] Jahre), die in fortlaufender Reihe mit akutem Brustschmerz, der weniger als 12 Stunden (im Mittel 5,1 [2,1-10,4] Stunden) andauerte, in die Notaufnahme kamen, wurden als Set erstellt. Nicht berücksichtigt wurden Patienten mit einer charakteristischen ST-Hebung im Basis-EKG bzw. einem dokumentierten akuten Myokardinfarkten während der vorangegangenen 2 Wochen. Serumproben wurden zum Zeitpunkt der Aufnahme (vor Beginn der Behandlung) und 4 Stunden später gewonnen, auf Eis gehalten, innerhalb von 20 Minuten nach Probennahme zentrifugiert und zur späteren Analyse bei –80°C gelagert. Die Patienten wurden bis zu ihrer Entlassung aus dem Krankenhaus und 30 Tage danach beobachtet, um tödliche und nicht-tödliche Myokardinfarkte zu verzeichnen. Das Vorhandensein einer koronaren Arterienerkrankung wurde durch eines der folgenden Kriterien nachgewiesen: EKG-Anzeichen auf eine Myokard-Ischämie (neue Änderungen in der ST-Strecke oder Inversion der T-Welle), eine koronare Herzerkrankung in der Anamnese (Myocardinfarkt oder koronare Revaskularisierung, ein positiver Belastungstest oder Einengung des Durchmessers einer Hauptkoronararterie um mindestens 50% in einem früheren Angiogramm). Patienten ohne koronare Herzerkrankung hatten ein normales Koronar-Angiogramm aufzuweisen.A separate group of 626 patients with chest pain (161 women and 465 men, mean age 61 [38-82] years) in consecutive order with acute chest pain lasting less than 12 hours (mean 5.1 [2.1-10.4] Hours) that went to the emergency room were created as a set. Not considered Patients with a characteristic ST elevation in the basic ECG or a documented acute myocardial infarction during the previous 2 Weeks. Serum samples were taken at the time of admission (before the start treatment) and 4 hours later recovered, kept on ice, within 20 minutes of sampling centrifuged and for later Analysis stored at -80 ° C. The patients were admitted to the hospital until their discharge and observed 30 days later for fatal and non-fatal myocardial infarctions to be recorded. The presence of coronary artery disease was detected by one of the following criteria: ECG signs for myocardial ischemia (new changes in the ST segment or inversion of the T wave), a coronary heart disease History (myocardial infarction or coronary revascularization, a positive stress test or narrowing the diameter of one Main coronary artery by at least 50% in a previous angiogram). Patients without coronary artery disease had a normal coronary angiogram exhibit.

Primäre Endpunkte der Studie waren Mortalität, Myokardinfarkt oder die Notwendigkeit zu sofortiger Intervention (Angioplastie, Bypass-Operationen der Koronararterie) aufgrund einer Instabilität während 30 Tagen oder 6 Monaten. Bei Patienten, die während des Krankenhausaufenthalts einen Herzinfarkt erlitten hatten, wurde ein solcher diagnostiziert, wenn ihre Werte der Kreatinkinase-Enzymaktivität in mindestens zwei Proben mehr als dreimal so hoch waren wie die obere Grenze des Normalbereichs oder wenn ihr EKG neue deutliche Q-Zacken in mehr als zwei aufeinanderfolgenden Intervallen aufwiesen. Diese strikte Definition wurde gewählt, um jeden unbedeutend geringen Anstieg der Kreatinkinase nach PTCA auszuschließen. Bei Patienten mit einem Myokardinfarkt nach der Entlassung wurde ein solcher definiert, wenn ihre Werte der Kreatinkinase-Enzymaktivität mehr als doppelt so hoch waren, wie die obere Grenze des Normalbereichs oder wenn ihr EKG neue deutliche Q-Zacken in zwei oder mehr aufeinanderfolgenden Intervallen aufwies. Der sekundäre Endpunkt war die symptomatische koronare Restenose der behandelten Läsion mit einem Stenosedurchmesser ≥ 70% und die Notwendigkeit zu wiederholter Revaskularisierung während der nachfolgenden 6 Monate.Primary endpoints the study was mortality, Myocardial infarction or the need for immediate intervention (Angioplasty, coronary artery bypass surgery) due to a instability while 30 days or 6 months. In patients who are hospitalized had been diagnosed with a heart attack, if their creatine kinase enzyme activity levels in at least two more samples than three times the upper limit of the normal range or if your EKG new clear Q waves in more than two consecutive Intervals. This strict definition was chosen to to rule out any insignificant small increase in creatine kinase after PTCA. at Patients with a myocardial infarction after discharge were enrolled such defined when their levels of creatine kinase enzyme activity more than were twice the upper limit of the normal range or if your EKG new clear Q waves in two or more consecutive Showed intervals. The secondary The endpoint was the symptomatic coronary restenosis of the treated lesion with a stenosis diameter ≥ 70% and the need for repeated revascularization during the subsequent 6 months.

3. Biochemische Analyse3. Biochemical analysis

Serumproben wurden zentral bei –80°C gelagert. Die Bestimmung der kardialen Marker wurde in Unkenntnis der Krankengeschichte der Patienten und der angeordneten Behandlung im Forschungslabor der Universität Frankfurt durchgeführt. Die Serumspiegel von PlGF und VEGF wurden mittels ELISA (R&D Systems, Wiesbaden) gemessen. Zur Quantifizierung von kardialem Troponin T (TnT) wurde ein Ein-Schritt-Enzym-Immuntest auf der Grundlage der Elektrochemilumineszenz-Technologie (Elecsys 2010, Roche Diagnostics) verwendet. Hoch-sensitives C-reaktives Protein (hsCRP) wurde mit Hilfe des Behring BN II Nephelometers (Behring Diagnostics) gemessen. Ein diagnostischer Schwellenwert von 10,0 mg/l wurde verwendet [9, 18].Serum samples were stored centrally at -80 ° C. The determination of the cardiac markers was carried out in ignorance of the patient's medical history and the treatment ordered in the research laboratory of the University of Frankfurt. The serum levels of PlGF and VEGF were measured by means of ELISA (R&D Systems, Wiesbaden). A one-step enzyme immunoassay based on electrochemiluminescence technology (Elecsys 2010, Roche Diagnostics) was used to quantify cardiac troponin T (TnT). Highly sensitive C-reactive protein (hsCRP) was developed using the Behring BN II Nephelo meters (Behring Diagnostics). A diagnostic threshold of 10.0 mg / l was used [9, 18].

4. Quantitative Bestimmung von PlGF4. Quantitative determination by PlGF

Die PlGF-Konzentration wurde unter Verwendung der Sandwich-Enzym-Immuntest-Technik (R&D Systems, Wiesbaden) bestimmt. Eine Mikrotiterplatte wurde mit einem polyklonalen Antikörper, der spezifisch gegen PlGF gerichtet war, beschichtet. Standards und Proben wurden in die Näpfe pipettiert und vorhandenes PlGF wurde durch den immobilisierten Antikörper gebunden. Nachdem nicht-gebundenes Material weggewaschen worden war, wurde ein Enzym-gekoppelter polyklonaler Antikörper, der spezifisch gegen PlGF gerichtet war, zu den Näpfen gegeben. Nach einem Waschschritt, um nicht gebundenes Antikörper-Enzym-Reagenz wegzuwaschen, wurde eine Substrat-Lösung zu den Näpfen gegeben, und die Farbe entwickelte sich im Verhältnis zur Menge an PlGF, die im ersten Schritt gebunden wurde. Die Farbentwicklung wurde abgestoppt und die Farbintensität wurde gemessen.The PlGF concentration was determined using the sandwich enzyme immunoassay technique (R&D Systems, Wiesbaden). A microtiter plate was made with a polyclonal Antibody, which was specifically directed against PlGF. standards and samples were placed in the wells pipetted and existing PlGF was immobilized by the antibody bound. After unbound material has been washed away was an enzyme-linked polyclonal antibody that specifically directed against PlGF was given to the wells. After a wash step, to wash away unbound antibody-enzyme reagent became a substrate solution to the bowls given, and the color developed in proportion to the amount of PlGF that was tied in the first step. The color development was stopped and the color intensity was measured.

5. Statistische Verfahren5. Statistical procedures

Nach einer blinden Beurteilung der biochemischen Marker wurden die Testergebnisse mit der Datenbank abgeglichen. Um Patienten mit verschiedenen Graden eines kardiologischen Risikos unterscheiden zu können, wurde eine orientierende Datenanalyse gewählt. Das Cox Proportional-Hazards Regression Model wurde verwendet, um das relative Risiko für kardiovaskuläre Vorkommnisse abzuschätzen, und die Patienten wurden gemäß der PlGF-Konzentration der Quintilen eingeteilt [19]. Die Post-hoc Analyse der Quintilen wurde unter Verwendung des Cox Proportional-Hazards Regression Model mit den PlGF Quintilen als eine kategorische Variable durchgeführt, und Patienten in dem ersten Quintil dienten als Referenz. Receiver Operating Characteristics (ROC) Curve Analysis über den dynamischen Bereich des PlGF-Tests wurde verwendet, um die Schwellenkonzentration für PlGF zu identifizieren, die den höchsten Vorhersagewert für die Risikostratifikation von Patienten mit akuten Koronarsyndromen lieferte. Der Effekt der Basislinien-Charakteristika (wobei p = 0,10 erforderlich war, um eine Variable in das Model einzubringen) und anderer biochemischer Marker auf jede beobachtete Zusammenhänge zwischen PlGF Spiegeln und kardiovaskulären Vorkommnissen wurde unter der Verwendung schrittweiser Cox Proportional-Hazards Regression Model durchgeführt. Alle Ergebnisse der kontinuierlichen Variablen sind als Mittel ± Standardabweichung ausgedrückt. Der Vergleich zwischen den Gruppen wurde durch einen t-Test (zweiseitig) analysiert. Der Vergleich von kategorischen Variablen wurde durch den Pearson χ2 Test generiert. p-Werte < 0,05 wurden als statistisch signifikant betrachtet. Alle Analysen wurden mit SPSS 11.0 (SPSS Inc., Chicago) durchgeführt.After a blind assessment of the biochemical markers, the test results were compared with the database. In order to differentiate between patients with different degrees of cardiological risk, an orientative data analysis was chosen. The Cox proportional-hazards regression model was used to estimate the relative risk of cardiovascular events and the patients were classified according to the PlGF concentration of the quintiles [19]. Post hoc analysis of the quintiles was performed using the Cox Proportional-Hazards Regression Model with the PlGF quintiles as a categorical variable, and patients in the first quintile served as a reference. Receiver Operating Characteristics (ROC) Curve Analysis over the dynamic range of the PlGF test was used to identify the threshold concentration for PlGF that provided the highest predictive value for risk stratification in patients with acute coronary syndromes. The effect of baseline characteristics (where p = 0.10 was required to introduce a variable into the model) and other biochemical markers on each observed association between PlGF levels and cardiovascular events was performed using the step-by-step Cox proportional-hazards regression model , All results of the continuous variables are expressed as mean ± standard deviation. The comparison between the groups was analyzed by a t-test (two-sided). The comparison of categorical variables was generated by the Pearson χ 2 test. p values <0.05 were considered to be statistically significant. All analyzes were carried out with SPSS 11.0 (SPSS Inc., Chicago).

Beispiel 1: Zusammenhang zwischen kardialem Risiko und PlGF-KonzentrationExample 1: Relationship between cardiac risk and PlGF concentration

Die Ausgangscharakteristika der für diese Studie ausgewählten Population (n = 1088, 86% der CAPTURE-Patienten) unterschied sich nicht von der Gesamtpopulation der Studie im Hinblick auf Alter, Geschlecht, kardiovaskuläres Risikoprofil und begleitende Behandlung vor und nach der zufälligen Auswahl. Die Reduktion kardialer Ereignisse in der Abciximab-Gruppe der Population war mit der gesamten CAPTURE-Population vergleichbar sowohl vor PTCA (2,2% Placebo versus 0,9% Abciximab; p = 0,07), als auch nach PTCA (7,9% versus 3.5%; p = 0,001), und bei 30 Tagen (9,0% versus 4,2%; p = 0,001) [17].The Initial characteristics of the for selected this study Population (n = 1088, 86% of CAPTURE patients) differed not of the total population of the study in terms of age, Sex, cardiovascular Risk profile and accompanying treatment before and after the random selection. The reduction in cardiac events in the abciximab group of the population was comparable to the entire CAPTURE population both before PTCA (2.2% placebo versus 0.9% abciximab; p = 0.07), as well after PTCA (7.9% versus 3.5%; p = 0.001), and at 30 days (9.0% versus 4.2%; p = 0.001) [17].

PlGF war in den Base Line-Serumproben von 95,6 % der Patienten der Studie, mit einem Mitteawert von 23,0 ng/l (Bereich 7,0-181,2) nachweisbar. Der PlGF Serumspiegel korrelierte nicht mit den gemessenen Konzentrationen an Troponin T (r = 0,14) und VEGF Spiegeln (r = 0.07), zeigte jedoch eine signifikante Korrelation mit hsCRP Serumspiegeln (r = 0.48) ( 1). Der PlGF Serumspiegel unterschied sich nicht zwischen Troponin T-positiven und Troponin T-negativen Patienten, wohingegen die hsCRP Serumspiegel in Troponin T-positiven Patienten signifikant höher waren (2). Die Patienten der Placebo-Gruppe (n = 547) wurden nach ihren gemessenen PlGF Serumspiegeln in Quintile eingeteilt: Jeweils (PlGF 1) < 13,3 ng/l(n = 109), (PlGF 2) 13,4-19,2 ng/l (n = 110), (PlGF 3) 19,3-27,3 ng/l (n = 110), (PlGF 4) 27,3-40,0 ng/L (n = 109), und (PlGF 5) > 40,0 ng/l(n = 109). Während der ersten 24 Stunden waren die kombinierten Endpunkte Mortalität und nicht-tödlicher Myokardinfarkt zwischen den PlGF-Quintilen nicht unterschiedlich (p = 0,11) (3). Zu späteren Zeitpunkten (72 Stunden, 30 Tage, 6 Monate) zeigten die Vorkommnis-Raten signifikante Unterschiede zwischen den PlGF Quintilen. Bei 72 Stunden Nachfolgeuntersuchung, waren die Vorkommnis-Raten in der vierten und fünften Quintile signifikant höher, wenn mit der ersten Quintile verglichen (jeweils p = 0,038 und p = 0,011). Während der anschließenden 6 Monate Nachfolgeuntersuchung, divergierten die Vorkommnis-Raten weiter, was zu signifikanten Unterschie den für die vierte und fünfte Quintile bei 30 Tagen (jeweils p = 0,005 und p = 0,017) und 6 Monate Nachfolgeuntersuchung (jeweils p = 0,002 und p = 0,001) führte.PlGF was detectable in the baseline serum samples from 95.6% of the patients in the study, with a mean value of 23.0 ng / l (range 7.0-181.2). The PlGF serum level did not correlate with the measured concentrations of troponin T (r = 0.14) and VEGF levels (r = 0.07), but showed a significant correlation with hsCRP serum levels (r = 0.48) ( 1 ). The PlGF serum level did not differ between troponin T-positive and troponin T-negative patients, whereas the hsCRP serum level was significantly higher in troponin T-positive patients ( 2 ). The patients in the placebo group (n = 547) were divided into quintiles according to their measured PlGF serum levels: each (PlGF 1) <13.3 ng / l (n = 109), (PlGF 2) 13.4-19.2 ng / l (n = 110), (PlGF 3) 19.3-27.3 ng / l (n = 110), (PlGF 4) 27.3-40.0 ng / L (n = 109), and (PlGF 5)> 40.0 ng / l (n = 109). During the first 24 hours, the combined endpoints mortality and non-fatal myocardial infarction were not different between the PlGF quintiles (p = 0.11) ( 3 ). At later times (72 hours, 30 days, 6 months), the event rates showed significant differences between the PlGF quintiles. At 72 hours follow-up, the incidence rates in the fourth and fifth quintiles were significantly higher when compared to the first quintile (p = 0.038 and p = 0.011, respectively). During the subsequent 6 months of follow-up, the incidence rates continued to diverge, resulting in significant differences for the fourth and fifth quintiles at 30 days (p = 0.005 and p = 0.017, respectively) and 6 months of follow-up (p = 0.002 and p =, respectively) 0.001).

Die receiver operating characteristics Kurven-Analyse bestätigte einen Schwellenwert von 27,0 ng/l für den maximierten Vorhersagewert von PlGF (4). Auf der Grundlage diese Schwellenwertes, wiesen 223 Patienten (40,8 %) PlGF Serumspiegel oberhalb oder gleich zu 27,0 ng/l auf, und 324 Patienten unterhalb von 27,0 ng/l. Wie Tabelle 1 zeigt, traten geringe Unterschiede in den Ausgangscharakteristika der beiden Gruppen auf. Patienten mit erhöhten PlGF Serumspiegeln waren häufiger Diabetiker und wiesen Bluthochdruck auf und hatten signifikant höhere hsCRP Serumspiegel (Tabelle 1). Bei Patienten mit hohem PlGF Serumspiegel, waren die kombinierten Endpunkte tödlicher und nicht-tödlicher Myokardinfarkt signifikant verschieden von Patienten mit niedrigem PlGF Serumspiegel. Nach 72 Stunden (einschließlich koronarer Interventionen bei allen Patienten) hatten 12,1 % der Patienten mit hohem PlGF Serumspiegel ein negatives Ereignis, verglichen mit 4,9 % für Patienten mit niedrigem PlGF Serumspiegel (p = 0,002) (5a). Während der 6-monatigen Folgezeit divergierten die Kurven, welche die Häufigkeit eines Ereignisses anzeigen zwischen Patienten mit hohen bzw. niedrigen PlGF Serumspiegeln weiter (5b). Signifikante Unterschiede gab es sowohl nach 30 Tagen (15,8 % versus 3,6 %; p = 0,001) als auch nach 6 Monaten (20,3 % versus 4,9 %; p < 0,001). Trotz der relativ niedrigen Mortalität der CAPTURE-Gruppe unterschied sich die Endpunktmortalität nach 6 Monaten signifikant zwischen den beiden Gruppen (4,0 % versus 0,9 %; p = 0,021). In a multivarianten Analyse, die Basislinie Charakteristika und biochemische Marker (Troponin T, VEGF, hsCRP), verblieb PlGF als ein unabhängiger wirksamer Prädiktor erhöhten kardialen Risikos sowohl bei 30 Tagen Nachfolgeuntersuchung (eingestelltes Gefahren-Verhältnis 3,34 [95 % CI 1,79 – 6,24]; p < 0,001) und bei 6 Monaten Nachfolgeuntersuchung (eingestelltes Gefahren-Verhältnis 3,58 [95 % CI 1,48 – 7,72]; p < 0,001) (Tabelle 2). Aufteilen der Patienten in vier Gruppen, basierend auf ihren PlGF und hsCRP Spiegeln ergab, daß PlGF eine Untergruppe von Patienten mit niedrigen hsCRP Serumspiegeln identifizierte, die an einem signifikant erhöhten kardialen Risiko litten. Patienten mit niedrigem hsCRP Serumspiegel, jedoch PlGF Serumspiegeln oberhalb 27,0 ng/l wiesen ein signifikant höheres Risiko auf, als Patienten, die niedrige Spiegel für sowohl hsCRP und PlGF aufwiesen (23,6 % versus 3,9 %; p = 0,001) (6a).The receiver operating characteristics curve analysis confirmed a threshold of 27.0 ng / l for the maximized predictive value of PlGF ( 4 ). Based on this threshold, 223 patients (40.8%) had PlGF serum levels above or equal to 27.0 ng / l, and 324 patients below 27.0 ng / l. As Table 1 shows, there were slight differences in the baseline characteristics of the two groups. Patients with elevated PlGF serum levels were more frequently diabetic and had high blood pressure and had significantly higher hsCRP serum levels (Table 1). In patients with high PlGF serum levels, the combined endpoints of fatal and non-fatal myocardial infarction were significantly different from those with low PlGF serum levels. After 72 hours (including coronary interventions in all patients), 12.1% of patients with high PlGF serum levels had a negative event compared to 4.9% for patients with low PlGF serum levels (p = 0.002) ( 5a ). During the 6-month period that followed, the curves showing the frequency of an event continued to diverge between patients with high or low PlGF serum levels ( 5b ). There were significant differences both after 30 days (15.8% versus 3.6%; p = 0.001) and after 6 months (20.3% versus 4.9%; p <0.001). Despite the relatively low mortality of the CAPTURE group, endpoint mortality after 6 months differed significantly between the two groups (4.0% versus 0.9%; p = 0.021). In a multivariate analysis, the baseline characteristics and biochemical markers (troponin T, VEGF, hsCRP), PlGF remained as an independent effective predictor of increased cardiac risk both at 30 days follow-up (adjusted risk ratio 3.34 [95% CI 1.79 - 6.24]; p <0.001) and at a 6-month follow-up examination (adjusted risk ratio 3.58 [95% CI 1.48 - 7.72]; p <0.001) (Table 2). Splitting the patients into four groups based on their PlGF and hsCRP levels revealed that PlGF identified a subset of patients with low serum hsCRP levels who had a significantly increased cardiac risk. Patients with low hsCRP serum levels but PlGF serum levels above 27.0 ng / l were significantly higher at risk than patients with low levels for both hsCRP and PlGF (23.6% versus 3.9%; p = 0.001) ( 6a ).

Weiterhin war der prädiktive Wert von PlGF unabhängig von myokardialer Nekrose. Hohe PlGF Serumspiegel zeigten ein erhöhte kardiales Risiko sowohl in Troponin T-positiven Pati enten (15.4 % versus 4.1 %; P=0.005) als auch in Troponin T-negativen Patienten an (26,1 % versus 10,1 %; p = 0,001) (6b).Furthermore, the predictive value of PlGF was independent of myocardial necrosis. High PlGF serum levels indicated an increased cardiac risk both in Troponin T-positive patients (15.4% versus 4.1%; P = 0.005) and in Troponin T-negative patients (26.1% versus 10.1%; p = 0.001 ) ( 6b ).

Beispiel 2: Wirkung von Abciximab im Hinblick auf PlGF-SerumspiegelExample 2: Effect of Abciximab for PlGF serum levels

Eine logistische Regressionsanalyse wies auf einen Grenz-signifikanten Zusammenhang zwischen der Wirksamkeit einer Behandlung mit Abciximab und der PlGF-Konzentrationen hin (p = 0,043). Patienten mit erhöhten PlGF Serumspiegeln, die Abciximab erhielten hatten ein signifikant geringeres Risiko bei 30 Tage Nachfolgeuntersuchung (eingestelltes Gefahren-Verhältnis 0,38 [0,19 – 0,74]; p = 0,005). Dieser signifikante Unterschied wurde bei 6 Monaten Nachuntersuchung (0,57 [0,34 – 0,96]; p = 0,037) beibehalten. Im Unterschied dazu erhielten Patienten mit niedrigen PlGF Serumspiegeln keinen signifikant therapeutischen Vorteil von einer Behandlung mit Abciximab (30 Tage Nachfolgeuntersuchung: eingestelltes Gefahren-Verhältnis 0,59 [0,27 – 1,33]; p = 0,23).A logistic regression analysis indicated a border-significant Relationship between the effectiveness of treatment with abciximab and the PlGF concentrations (p = 0.043). Patients with increased PlGF Serum levels that received abciximab were significantly lower Risk after 30 days of follow-up examination (adjusted risk ratio 0.38 [0.19 - 0.74]; p = 0.005). This significant difference was at 6 months Follow-up examination (0.57 [0.34-0.96]; p = 0.037) maintained. In contrast, patients received with low PlGF serum levels no significant therapeutic Advantage of treatment with abciximab (30 days follow-up examination: set danger ratio 0.59 [0.27-1.33]; p = 0.23).

Beispiel 3: Entlassungs PlGF Serumspiegel sind für den Langzeitausgang prädiktivExample 3: Dismissal PlGF serum levels are for the long-term outcome predictive

Eine zweite Blutprobe, die vor der Entlassung abgenommen wurde (7,2 ± 4,5 Tage nach Randomisierung), war für 489 Patienten der 547 Placebo-Patienten erhältlich (89,4%). Die PlGF Serumspiegel nahmen von einem Mittel von 27,12 ± 19,56 ng/l bei Basislinie auf 23,4 ± 26,2 ng/l bei Entlassung ab (p = 0,012). Für Patienten mit einem PlGF Serumspiegel oberhalb 27,0 ng/l bei Entlassung war das Auftreten von Mortalität und nicht-fatalem myokardialem Infarkt signifikant höher, wenn mit Patienten mit niedrigem PlGF Serumspiegel verglichen, sowohl bei 30 Tage (4,6 % versus 0,8 %; p = 0,019) und 6 Monate Nachfolgeuntersuchung (7,4 % versus 2,2 %; p = 0,005) (7).A second blood sample, taken before discharge (7.2 ± 4.5 days after randomization), was available for 489 of the 547 placebo patients (89.4%). The PlGF serum levels decreased from an average of 27.12 ± 19.56 ng / l at baseline to 23.4 ± 26.2 ng / l at discharge (p = 0.012). For patients with a PlGF serum level above 27.0 ng / l at discharge, mortality and non-fatal myocardial infarction were significantly higher when compared to patients with low PlGF serum levels, both at 30 days (4.6% versus 0, 8%; p = 0.019) and 6 months follow-up (7.4% versus 2.2%; p = 0.005) ( 7 ).

Beispiel 4: Validierung des PlGF-Schwellenwerts in Patienten mit akuten BrustschmerzenExample 4: Validation the PlGF threshold in patients with acute chest pain

Von 626 Patienten mit akuten Brustschmerzen, litten 308 Patienten an einem akuten Koronarsyndrom (117 Patienten hatten einen nicht-ST-Erhöhungs myokardialen Infarkt). Die anderen Patienten wurden den folgenden Diagnosen zugeteilt: n = 91 stabile Angina, n = 10 pulmonare Embolie, n = 11 kongestives Herzversagen, n = 7 Myokarditis, und n = 199 kein Hinweis auf Herzerkrankung. Die PlGF Serumspiegel waren in Patienten mit akuten Koronarsyndromen signifikant erhöht (Mittel 28,3 [95 % CI 21,3 – 2,2] ng/l), wenn jeweils mit Patienten mit stabiler Angina verglichen (Mittel 16,2 [95 % CI 13,8 – 18,6 ng/l; p = 0,001), und Patienten ohne Anzeichen auf Herzerkrankung (Mittel 9,6 [95 % CI 10,4 – 12,9 ng/l; p = 0,001). Die PlGF Serumspiegel in Patienten mit nicht-ST-Erhöhungs myokardialem Infarkt unterschieden sich nicht signifikant von PlGF Serumspiegeln in Patienten mit instabiler Angina (30,5 [95 % CI 26,9 – 34,1] versus 28,3 [95 % CI 21,3 – 32,2] ng/l; p = 0,42) Die 97,5 Prozent obere Referenzgrenze in Patienten ohne Hinweis auf Herzerkrankung war 24,9 ng/l und die 99 Prozent obere Referenzgrenze war 27,3 ng/l. Der PlGF Serumspiegel korrelierte nicht mit Markern der Nekrose (Troponin T [r = 0,07]), korrelierte jedoch signifikant mit Entzündungsmarkern (C-reaktivem Protein [r = 0,43]).Of 626 patients with acute chest pain, 308 patients had acute coronary syndrome (117 patients had a non-ST elevation myocardial infarction). The other patients were assigned the following diagnoses: n = 91 stable angina, n = 10 pulmonary embolism, n = 11 congestive heart failure, n = 7 myocarditis, and n = 199 no evidence of heart disease. The PlGF serum levels were significantly increased in patients with acute coronary syndromes (mean 28.3 [95% CI 21.3 - 2.2] ng / l) when compared with patients with stable angina (mean 16.2 [95% CI 13.8 - 18.6 ng / l; p = 0.001), and patients with no signs of heart disease (mean 9.6 [95% CI 10.4 - 12.9 ng / l; p = 0.001). The PlGF serum levels in patients with non-ST elevation myocardial infarction were not significantly different from PlGF serum levels apply to patients with unstable angina (30.5 [95% CI 26.9 - 34.1] versus 28.3 [95% CI 21.3 - 32.2] ng / l; p = 0.42) The 97 , 5 percent upper reference limit in patients without evidence of heart disease was 24.9 ng / l and the 99 percent upper reference limit was 27.3 ng / l. The PlGF serum level did not correlate with markers of necrosis (troponin T [r = 0.07]), but did correlate significantly with inflammation markers (C-reactive protein [r = 0.43]).

In Patienten mit akuten Koronarsyndromen, wiesen 44,8 % der Patienten PlGF Serumspiegel oberhalb der 99 Prozent obere Referenzgrenze auf. Unter der Verwendung des Schwellenwerts für PlGF von 27,0 ng/l, unterlagen Patienten mit erhöhtem PlGF Serumspiegel einem signifikant höheren Risiko für Tod und myokardialem Infarkt (eingestelltes Gefahren-Verhältnis 2,97 [95 % CI 1,74 bis 9,06; p = 0,014). Innerhalb der gesamten heterogenen Population von Patienten mit Brustschmerzen identifizierte der Schwellenwert von 27,0 ng/l auch zuverlässig Patienten, die dem höchsten Risiko für Tod und myokardialem Infarkt ausgesetzt waren (eingestelltes Gefahren-Verhältnis 4.95 [95 % CI 2.50 to 9.79; P0.001).In Patients with acute coronary syndromes had 44.8% of the patients PlGF serum levels above the 99 percent upper reference limit. Using the PlGF threshold of 27.0 ng / l Patients with elevated PlGF serum levels have a significantly higher risk of death and myocardial infarction (adjusted risk ratio 2.97 [95% CI 1.74 to 9.06; p = 0.014). Within the whole heterogeneous population of patients with chest pain identified the threshold of 27.0 ng / l also reliably represents patients at the highest risk for death and myocardial infarction (risk ratio 4.95 [95% CI 2.50 to 9.79; P0.001).

Zusammenfassung der BeispieleSummary of examples

In Patienten mit ACS, korreliert PlGF nicht mit VEGF, Troponin T, und ST-Segment Veränderungen, zeigte jedoch eine signifikante Korrelation mit hsCRP (p = 0,001). Patienten mit erhöhtem PlGF Serumspiegel (> 27,0 ng/l; 40,8 %) erfuhren ein erheblich erhöhtes kardiales Risiko (Tod und nicht-fataler myokardialer Infarkt) sowohl bei 30 Tagen (eingestelltes Gefahren-Verhältnis 3,34 [95 % CI 1,79 – 6,24]; p = 0,001) und bei 6 Monaten (eingestelltes Gefahren-Verhältnis 3,58 [95 % CI 1,48 – 7,72]; p = 0,001) nach ACS. Die PlGF Serumspiegel waren spezifisch in Patienten mit niedrigen hsCRP Spiegeln informativ. Die vorläufige Validierung in Patienten mit akuten Brustschmerzen ergab, daß PlGF Serumspiegel > 27 ng/l identifizierte zuverlässig diejenigen Patienten, die dem höchsten Risiko für Tod und myokardialem Infarkt (eingestelltes Gefahren-Verhältnis 4,95 [95 % CI 2,50 bis 9,79; p = 0,001) ausgesetzt waren. Das erhöhte Risiko in Patienten mit high PlGF Serumspiegel wurde durch die Behandlung mit dem Glycoprotein IIb/IIIa Rezeptorinhibitor Abciximab verringert (eingestelltes Gefahren-Verhältnis 0,38 [0,19 – 0,74]; p = 0,005). Tabelle 1: Base Line-Charakteristika gemäß dem PlGF Status für die Placebogruppe des CAPTURE Versuchs (n = 547)

Figure 00200001
Tabelle 2: Multivariantes Cox proportionales-Gefahren-Regressionsmodell für tödlichen und nicht-tödlichen Myokardinfarkt innerhalb der ersten 6 Monate der Nachuntersuchung, abgeleitet von der Placebogruppe der CAPTURE Untersuchung
Figure 00210001
In patients with ACS, PlGF did not correlate with VEGF, Troponin T, and ST segment changes, but showed a significant correlation with hsCRP (p = 0.001). Patients with elevated PlGF serum levels (> 27.0 ng / l; 40.8%) experienced a significantly increased cardiac risk (death and non-fatal myocardial infarction) both at 30 days (adjusted risk ratio 3.34 [95% CI 1.79 - 6.24]; p = 0.001) and at 6 months (adjusted risk ratio 3.58 [95% CI 1.48 - 7.72]; p = 0.001) according to ACS. The PlGF serum levels were informative specifically in patients with low hsCRP levels. The preliminary validation in patients with acute chest pain showed that PlGF serum levels> 27 ng / l reliably identified those patients who were at the highest risk of death and myocardial infarction (adjusted risk ratio 4.95 [95% CI 2.50 to 9, 79; p = 0.001) were exposed. The increased risk in patients with high PlGF serum levels was reduced by treatment with the glycoprotein IIb / IIIa receptor inhibitor abciximab (adjusted risk ratio 0.38 [0.19 - 0.74]; p = 0.005). Table 1: Base line characteristics according to the PlGF status for the placebo group of the CAPTURE trial (n = 547)
Figure 00200001
Table 2: Multivariate Cox proportional-hazard regression model for fatal and non-fatal myocardial infarction within the first 6 months of the follow-up examination, derived from the placebo group of the CAPTURE examination
Figure 00210001

LiteraturlisteBibliography

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Claims (18)

Verfahren zur Analyse von biologischen Proben in Zusammenhang mit kardiovaskulären Erkrankungen, wobei das Verfahren folgende Schritte umfaßt: (a) Gewinnung einer zu untersuchenden biologischen Probe von einem Patienten; (b) Inkubieren der Probe mit einem oder mehreren Molekülen, die spezifisch an PlGF binden; (c) Nachweisen und/oder quantifizieren von PlGF in der Probe unter Verwendung immunologischer Methoden; und (d) Vergleichen des für die zu untersuchende Probe erhaltenen Ergebnisses mit einem Referenzwert und/oder dem Ergebnis einer Referenzprobe.Methods for the analysis of biological samples related to cardiovascular Diseases, the method comprising the following steps: (A) Obtaining a biological sample to be examined from a patient; (B) Incubate the sample with one or more molecules that bind specifically to PlGF; (c) Detect and / or quantify of PlGF in the sample using immunological methods; and (D) Compare the for the sample to be examined obtained result with a reference value and / or the result of a reference sample. Verfahren nach Anspruch 1, wobei die zu untersuchende Probe und/oder die Referenzprobe aus einem Säugetier, insbesondere aus dem Menschen, stammt.The method of claim 1, wherein the one to be examined Sample and / or the reference sample from a mammal, in particular from the People, comes. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, wobei die zu untersuchende Probe ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus peripherem Blut oder Fraktionen davon und Zellkultur-Suspensionen oder Fraktionen davon.A method according to claim 1 or 2, wherein the one to be examined Sample selected is from the group consisting of peripheral blood or fractions thereof and cell culture suspensions or fractions of them. Verfahren nach Anspruch 3, wobei die zu untersuchende Probe Serum ist.The method of claim 3, wherein the one to be examined Sample is serum. Verfahren nach Anspruch 3, wobei dem peripheren Blut ein Gerinnungshemmer, insbesondere Heparin, zugesetzt wird.The method of claim 3, wherein the peripheral blood an anticoagulant, especially heparin, is added. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 5, wobei die an PlGF bindenden Moleküle ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus anti-PlGF-Antikörpern oder Teilen davon und PlGF-Rezeptoren oder Teilen davon.Method according to one of claims 1 to 5, wherein the PlGF binding molecules selected are from the group consisting of anti-PlGF antibodies or Parts thereof and PlGF receptors or parts thereof. Verfahren nach Anspruch 7, wobei die Antikörper, Teile oder Fragmente davon polyklonale Antikörper, monoklonale Antikörper, Fab-Fragmente, scFv-Fragmente und Diabodies umfassen.The method according to claim 7, wherein the antibodies, parts or fragments thereof are polyclonal antibodies, monoclonal antibodies, Fab fragments, scFv fragments and diabodies include. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 7, wobei PlGF und/oder die an PlGF bindenden Moleküle in Lösung oder Matrix-immobilisiert vorliegen.Method according to one of claims 1 to 7, wherein PlGF and / or the molecules binding to PlGF in solution or matrix immobilized. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 8, wobei die an PlGF bindenden Moleküle an eines oder mehrere Nachweisgruppen aus der Gruppe bestehend aus Fluoresceinthioisocyanat, Phycoerythrin, einem Enzym und magnetisches Bead gekoppelt sind.A method according to any one of claims 1 to 8, wherein the PlGF binding molecules to one or more detection groups from the group consisting of Fluoresceinthioisocyanate, Phycoerythrin, an enzyme and magnetic Bead are coupled. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 9, wobei die an PlGF bindenden Moleküle mit einem Antikörper, an den eine oder mehrere Nachweismoleküle gekoppelt sind, nachgewiesen werden.Method according to one of claims 1 to 9, wherein the PlGF binding molecules with an antibody, to which one or more detection molecules are coupled become. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 10, wobei die immunologischen Verfahren ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Sandwich-Enzym-Immuntest, ELISA und Festphasen-Immuntests.Method according to one of claims 1 to 10, wherein the immunological Process selected are from the group consisting of sandwich enzyme immunoassay, ELISA and solid phase immunoassays. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 11, wobei der Referenzwert > 24,9 ng/l, und insbesondere > 27,0 ng/l bis > 27,3 ng/l beträgt.Method according to one of claims 1 to 11, wherein the reference value is> 24.9 ng / l, and in particular> 27.0 ng / l to> 27.3 ng / l. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 12, wobei die kardiovaskulären Erkrankungen ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus stabiler und instabiler Angina, Myokardinfarkt, aktuem Herzsyndrom, koronarer Arterienerkrankung und Herzinsuffizienz.Method according to one of claims 1 to 12, wherein the cardiovascular diseases are selected from the group consisting of stable and unstable angina, myocardial infarction, Current heart syndrome, coronary artery disease and heart failure. Diagnostischer Kit, umfassend Mittel zur Durchführung des Verfahrens nach einem der Ansprüche 1 bis 13, gegebenenfalls zusammen mit weiteren Komponenten und/oder Hilfsstoffen.Diagnostic kit comprising means for performing the Method according to one of the claims 1 to 13, optionally together with other components and / or Excipients. Diagnostischer Kit nach Anspruch 14, umfassend Gold-markierte polyklonale Maus-Indikatorantikörper, biotinylierte polyklonale Nachweisantikörper und eine Testvorrichtung, umfassend ein Fiberglas-Vlies.A diagnostic kit according to claim 14, comprising gold-marked mouse polyclonal indicator antibodies, biotinylated polyclonal detection antibodies and a test device comprising a non-woven fiberglass. Verwendung des Verfahrens nach einem der Ansprüche 1 bis 13 zur Diagnose und/oder Prognose kardiovaskulärer Erkrankungen und/oder zur Überwachung von deren Therapie.Use of the method according to one of claims 1 to 13 for the diagnosis and / or prognosis of cardiovascular diseases and / or for monitoring of their therapy. Verwendung nach Anspruch 16, wobei die Therapie die Verabreichung von Inhibitoren des Flt-l-Rezeptors umfaßt.Use according to claim 16, wherein the therapy the administration of inhibitors of the Flt-1 receptor. Verwendung nach Anspruch 16 oder 17, wobei die Therapie die Verabreichung eines Glycoprotein IIb/IIIa-Inhibitors umfaßt, insbesondere Abciximab.Use according to claim 16 or 17, wherein the therapy the administration of a glycoprotein IIb / IIIa inhibitor, in particular Abciximab.
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