DE10313291A1

DE10313291A1 - Medium for engineering of vascularized tissue and blood vessels, useful for making tissue for reconstructive surgery, includes somatotropin to improve stability or formation of a capillary-like network

Info

Publication number: DE10313291A1
Application number: DE2003113291
Authority: DE
Inventors: Bernhard Dr. Dr. Frerich; Jan Kurtz-Hoffmann; Nico Dr. Lindemann
Original assignee: Universitaet Leipzig
Current assignee: Universitaet Leipzig
Priority date: 2003-03-25
Filing date: 2003-03-25
Publication date: 2004-10-14

Abstract

Medium (A) for tissue engineering of vascularized tissue and of blood vessels that includes somatotropin (growth hormone) (I).

Description

Die Erfindung betrifft eine Zellkulturmediumzusammensetzung, die geeignet ist, zur verbesserten Stabilisierung bzw. Erhalt eines kapillarartigen Netzwerks beim in vitro Tissue engineering vaskularisierter Gewebe beizutragen.The The invention relates to a cell culture medium composition which is suitable is, for improved stabilization or maintenance of a capillary network to contribute to in vitro tissue engineering vascularized tissue.

Standardmäßig werden Kiefer-Gesichtsdefekte heutzutage mit sogenannten mikrochirurgischen Lappenplastiken gedeckt. Das Spektrum umfaßt fasziokutane Lappen und Jejunumpatches für flache Defekte genauso wie muskuläre Lappen. Die kaufunktionelle Rehabilitation nach Ober- und Unterkieferteilresektion erfolgt mit knöchernen Transplantaten, wobei heutzutage auch hier der mikrochirurgisch revaskularisierte Transfer dominiert. Über 50 verschiedene Transplantattypen bzw. Varianten wurden bisher beschrieben (O'Brien, B. M., Morrison, W. A.: Reconstructive Microsurgery Churchill Livingstone, Edinburgh 1987; Manktelow, R. T.: Mikrovaskuläre Wiederherstellungschirurgie-Anatomie, Anwendung und chirurgische Technik. Berlin Heidelberg New York Tokyo, Springer 1988). Diese Fortschritte haben entscheidenden Einfluß auf die Verbesserung der Lebensqualität von Tumorpatienten gehabt. Es haften diesen Verfahren jedoch Nachteile an, die bislang nicht vollständig behoben sind. In erster Linie gilt dies für den Hebedefekt an der Entnahmestelle des Transplantats, der zu einer je nach Lokalisation mehr oder weniger ausgeprägten Morbidität führt.By default Today's jaw facial defects with so-called microsurgical Rag cloth covered. The spectrum includes fasciocutaneous flaps and Jejunumpatches for flat Defects just like muscular ones Cloth. Functional rehabilitation after upper and lower jaw resection done with bony Transplants, the microsurgical here too revascularized transfer dominates. Over 50 different types of grafts and variants have been described previously (O'Brien, B.M., Morrison, W.A .: Reconstructive Microsurgery Churchill Livingstone, Edinburgh 1987; Manktelow, R. T .: Microvascular Reconstructive surgery anatomy, application and surgical Technology. Berlin Heidelberg New York Tokyo, Springer 1988). This Progress has a decisive impact on the improvement of the life quality from tumor patients. However, these processes have disadvantages at that so far not completely are fixed. This applies primarily to the lifting defect at the removal point of the graft, which depending on the localization more or less pronounced morbidity leads.

Die Verfahren zur artifiziellen Herstellung von Geweben oder Organen durch die Kombination spezifischer Zellkulturen mit resorbierbaren Gerüstsubstanzen für Transplantationszwecke werden unter dem Begriff "Tissue engineering" subsummiert (siehe Langer, R. et al.: Future directions in biomaterials. Biomaterials 11, 738–45, 1990, Cima, L. G. et al.: Tissue engineering by cell transplantation using degradable polymer substrates. J Biomech Eng 113, 143–51, 1991; Langer, R., Vacanti, J. P.: Artificial organs. Sci Am 273, 130–3, 1995). Wie sich aus den obigen Ausführungen ergibt, würde die Option eines mit den Methoden des Tissue engineering in vitro präformierten Transplantats auch für die plastisch-rekonstruktive Mund-, Kiefer- und Gesichtschirurgie eine Reihe von Vorteilen erbringen, wie z.B. die Vermeidung oder Reduktion von Hebedefekten, eine Verkürzung der OP-Zeit oder die Optimierung der räumlichen Konfiguration des Transplantats. Fettgewebstransplantate zur Konturierung von Weichgewebsdefiziten oder knöcherne Transplantate könnten individualisiert "maßgeschneidert" werden, was bei den jetzigen Techniken noch ein Problem darstellt.The Process for the artificial manufacture of tissues or organs by combining specific cell cultures with absorbable ones builders for transplant purposes are called "tissue engineering "(see Langer, R. et al .: Future directions in biomaterials. Biomaterials 11, 738-45, 1990, Cima, L.G. et al .: Tissue engineering by cell transplantation using degradable polymer substrates. J Biomech Eng 113, 143-51, 1991; Langer, R., Vacanti, J.P .: Artificial organs. Sci Am 273, 130-3, 1995). As can be seen from the above would result the option of one preformed with the methods of tissue engineering in vitro Graft also for plastic reconstructive oral, maxillofacial and facial surgery Bring a number of advantages, such as avoidance or reduction of lifting defects, a shortening the OR time or the optimization of the spatial configuration of the Graft. Adipose grafts for contouring soft tissue deficits or bony Transplants could be individually "tailor-made", what the current techniques is still a problem.

Eine wesentliche Hürde beim in vitro Tissue engineering komplexer Gewebe, wie es Weichgewebs- und Knochentransplantate darstellen, besteht allerdings in einer ausreichenden Oxygenation und Ernährung auch größerer dreidimensionaler Gewebsformationen in vitro und später, nach Transplantation, in vivo. Die Versorgung per Diffusion vermag in vivo wie in vitro 150 μm Gewebedicke nicht zu überschreiten.A essential hurdle in in vitro tissue engineering of complex tissues such as soft tissue and represent bone grafts, however, consists of one adequate oxygenation and nutrition even larger three-dimensional Tissue formations in vitro and later, after transplantation, in vivo. Diffusion supply can be performed in vivo as well as in vitro 150 μm fabric thickness not to exceed.

Bislang gibt es keine ideale Lösung für die Vaskularisation größerer dreidimensionaler Gewebeäquivalente in vitro noch eine andere Lösung für das Problem der Oxygenation und Ernährung beim in vitro Tissue engineering. Dies mag einer der Gründe sein, warum vaskularisierte Gewebe in klinisch applikablen Tissue engineering Ansätzen bislang eine untergeordnete Rolle spielen. Die Ergebnisse der Vaskularisation durch sekundäres Einwachsen von Blutgefäße in solche Gewebsäquivalente sind begrenzt und lösen nicht das Problem der Ernährung und Oxygenation in der in vitro Phase des Tissue engineerings vor der Transplantation. In der Konzeption eines in vitro hergestellten Weichgewebetransplantates sind eine Vaskularisation oder ein Äquivalent für eine Vaskularisation notwendig, da die Ernährung über die Diffusion sowohl in vitro wie auch in vivo auf eine Strecke von wenigen hundert Mikrometern limitiert ist. Ein möglicher Weg für das Engineering dieser Gewebe könnte die Entwicklung eines vaskulären Stromas in vitro sein, das dann als Basis für die Differenzierung eines spezifischen Transplantatgewebes dienen kann. Es ist die Frage, inwiefern die Applikation der in vitro Angiogenese in einem Ansatz für das Engineering von Weichgewebe zu einem funktionell relevanten vaskulären Netzwerk beitragen kann und in Zukunft, inwiefern die in vitro Formation von kapillarartigen Strukturen zur Ernährung dreidimensionaler artifizieller Gewebskonstrukte beitragen kann.So far there is no ideal solution for vascularization larger three-dimensional tissue equivalents another solution in vitro for the problem of oxygenation and nutrition in in vitro tissue engineering. This may be one of the reasons why vascularized tissue in clinically applicable tissue engineering approaches so far have played a subordinate role. The results of vascularization through secondary Ingrowth of blood vessels in such tissue equivalents are limited and solve not the problem of nutrition and oxygenation in the in vitro phase of tissue engineering the transplant. In the design of an in vitro manufactured Soft tissue grafts are a vascularization or equivalent for one Vascularization is necessary because the nutrition via diffusion is both in in vitro and in vivo over a distance of a few hundred micrometers is limited. A possible one Way for the engineering of these tissues could the development of a vascular Stromas in vitro, which is then the basis for the differentiation of a specific graft tissue can serve. The question is to what extent the application of in vitro angiogenesis in an engineering approach from soft tissue to a functionally relevant vascular network can contribute and in the future to what extent the in vitro formation of Capillary-like structures for feeding three-dimensional artificial Tissue constructs can contribute.

Ein hypothetischer Weg für das engineering vaskularisierter Gewebe könnte die Entwicklung eines vaskulären Stromas in vitro sein, das dann als Basis für ein differenziertes Gewebe dienen kann. Ein wesentliches Proben eines solchen "mikrovaskulären Tissue engineerings" ist die fehlende Stabilisierung und Erhaltung kapillarartiger Strukturen in vitro.On hypothetical way for the engineering of vascularized tissue could be the development of a vascular Stromas be in vitro, which is then the basis for a differentiated tissue can serve. An essential sample of such a "microvascular tissue engineerings "is the lack of stabilization and maintenance of capillary structures in vitro.

In einer Publikation (Frerich, B., et al.: In vitro vascular stroma model for the engineering of vascularized tissues. Int. J. Oral Maxillofac. Surg. 30, 414–20, 2001) konnte aufgezeigt werden, daß die Erhaltung kapillarartiger Strukturen durch Zusatz von IGF-1 verbessert werden kann. Es ist allgemein bekannt, daß Wachstumshormon anabole und wachstumssteigernde Effekte hat, die über die Expression von IGF-1 vermittelt werden. Die angiogenen Effekte von Wachstumshormon werden ebenfalls der Wirkung von IGF-1 zugeschrieben. In Kindern mit Wachstumshormonmangel z. B. ist die Vaskularisation der Retina signifikant vermindert (Hellström et al Reduced retinal vascularization in children with growth hormone deficiency. J. Clin. Endocrinol. Metab. 84, 795–8. 1999). in vivo-Experimente von Smith et al (Essential role of growth hormone in ischemia-induced retinal neovascularization. Science 276, 1706–9, 1997) zeigen, daß das Vaskularisationsdefizit der Retina von Ratten mit Wachstumshormonmangel durch Gabe von IGF-1 verhindert werden konnte. Wachstumshormon stimuliert die Expression von IGF-1 und IGFBP's (IGF binding proteins) auch in Kulturen von stromal vaskulären Zellen (Chen et al., Hormonal regulation of insulin-like growth factor binding proteins and insulin-like growth factor I (IGF-I) secretion in porcine stromal- vascular cultures. J. Anim. Sci. 74, 2369–751996, 1996). Gould et al. (Activity of anterior pituitary tissue and growth hormone on the chick embryo chorio-allantoic membrane: a novel action of GH. Life Sci. 56, 587-94. 1995) zeigte, daß eine angiogene Wirkung von Wachstumshormon im CAM-(chick embryo chorio-allantoic membrane) assay ohne gleichzeitigen Anstieg von IGF-1 verzeichnet wurde. In physiologischen Konzentrationen bewirkt humanes Wachstumshormon die Proliferation von mikrovaskulären Epithellzellen und ist auch angingen in vitro (Rymaszewski et al., Human growth hormone stimulates proliferation of human retinal microvascular endothelial cells in vitro. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 88, 617–21. 1991). Humanes Wachstumshormon zeigt darüber hinaus anders als bei anderen Säugetierwachstumshormonen einen prolaktinähnlichen Effekt und es konnte gezeigt werden, daß die Mitglieder einer humanen Prolaktin-Wachstumshormonfamilie die Gefäßformierung stimulieren während das entsprechende 16-kDA N-terminale Fragment antiangiogen sowohl in vivo als auch in vitro wirkt (Struman et al., Opposing actions of intact and N-terminal fragments of the human prolactin/growth hormone family memebers on angiogenesis: An efficient mechanism for the regulation of angiogenesis. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96, 1246–1251. 1999).In a publication (Frerich, B., et al .: In vitro vascular stroma model for the engineering of vascularized tissues. Int. J. Oral Maxillofac. Surg. 30, 414-20, 2001) it could be shown that the maintenance of capillary-like Structures can be improved by adding IGF-1. It is well known that growth hormone has anabolic and growth enhancing effects mediated by the expression of IGF-1. The angiogenic effects of growth hormone are also attributed to the effects of IGF-1. In children with growth hormone deficiency e.g. B. the vascularization of the retina is significantly reduced (Hellström et al Reduced retinal vascularization in children with growth hormone deficiency. J. Clin. Endocrinol. Metab. 84, 795-8. 1999). In vivo experiments by Smith et al (Essential role of growth hormone in ischemia-induced retinal neovascularization. Science 276, 1706-9, 1997) show that the vascularization deficit of the retina of rats with growth hormone deficiency could be prevented by administration of IGF-1 , Growth hormone stimulates the expression of IGF-1 and IGFBP's (IGF binding proteins) also in cultures of stromal vascular cells (Chen et al., Hormonal regulation of insulin-like growth factor binding proteins and insulin-like growth factor I (IGF-I) secretion in porcine stromal vascular cultures. J. Anim. Sci. 74, 2369-751996, 1996). Gould et al. (Activity of anterior pituitary tissue and growth hormone on the chick embryo chorio-allantoic membrane: a novel action of GH. Life Sci. 56, 587-94. 1995) showed that an angiogenic effect of growth hormone in the CAM- (chick embryo chorio -allantoic membrane) assay without a simultaneous increase in IGF-1. In physiological concentrations, human growth hormone causes the proliferation of microvascular epithelial cells and is also concerned in vitro (Rymaszewski et al., Human growth hormone stimulates proliferation of human retinal microvascular endothelial cells in vitro. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88, 617- 21. 1991). In addition, unlike other mammalian growth hormones, human growth hormone has a prolactin-like effect, and it has been shown that the members of a human prolactin growth hormone family stimulate vascular formation while the corresponding 16-kDA N-terminal fragment is antiangiogenic both in vivo and in vitro ( Struman et al., Opposing actions of intact and N-terminal fragments of the human prolactin / growth hormone family memebers on angiogenesis: An efficient mechanism for the regulation of angiogenesis. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 96, 1246-1251. 1999).

Die Aufgabenstellung der Erfindung besteht darin, eine Mediumzusammensetzung für das Tissue engineering vaskularisierter Gewebe und Blutgefäße aufzuzeigen, die zur Stabilisierung (im Sinne der Rekrutierung von Perizyten und glatten Muskelzellen sowie im Sinne des Erhalts der Netzwerkstruktur) beiträgt und die Erhaltung kapillarartiger Strukturen verbessert.The The object of the invention is a medium composition for the To show tissue engineering vascularized tissue and blood vessels those for stabilization (in the sense of recruiting pericytes and smooth muscle cells and in the sense of maintaining the network structure) and the Maintenance of capillary structures improved.

Erfindungsgemäß wird im Anspruch 1 und in weiteren ausgestaltenden Ansprüchen 2 bis 4 eine Zellkuiturenmediumzusammensetzung beschrieben, mit der ein verbesserter Erhalt kapillarartiger Strukturen im Rahmen des Tissue engineerings möglich ist. Das Medium ist dadurch gekennzeichnet, daß es einen Zusatz von Somatotropin (Wachstumshormon) enthält. Besonders günstig ist eine Konzentration von 50 ng/ml. Es sind damit sowohl serumhaltige wie auch serumfreie Mediumformulierungen möglich, die sich beide dadurch auszeichnen, daß kapillarartige Strukturen in einem Tissue engineering Ansatz stabilisiert werden.According to the invention Claim 1 and in further defining claims 2 to 4 a cell culture medium composition with which an improved preservation of capillary-like structures is possible as part of tissue engineering. This is the medium characterized it contains an addition of somatotropin (growth hormone). Especially Cheap is a concentration of 50 ng / ml. It is both serum and serum-free medium formulations are also possible, both of which result from this distinguish that capillary Structures are stabilized in a tissue engineering approach.

Im Folgenden wird die Erfindung in Ausführungsbeispielen erläutert.in the The invention is explained below in exemplary embodiments.

Beispiel 1 – Formulierungsbeispiel für das MediumExample 1 - formulation example for the medium

Iscove's mod. Dulbecco's Medium + Nutritient mixture Ham's F-12 werden im Verhältnis 1:1 angesetzt und mit Transferrin (2 bis 10 μg/ml), Insulin (5 bis 15 μg/ml), ggf. auch Hydrocortison 1 μg/ml. Serumzusatz ist bis 10% möglich, z.B. mit FKS (fetalem Kälberserum) oder NKS (Neugeborenen Kälberserum), aber auch serumfreie Formulierung mit Albuminzusatz von mind. 0,5% oder für dynamische Kultivierung z.B. unter Perfusionsbedingungen mit Dextranzusatz. Alternativ können auch vergleichbare Mediumformulierungen eingesetzt werden, die sich für die Endothelzellkultur eignen. Dazu wird humanes Somatotropin (Wachstumshormon = human growth hormone, hGH) gegeben, z.B. von Sigma-Aldrich GmbH, Steinheim, Deutschland in einer Konzentration zwischen 5 und 500 ng pro ml.Iscove's mod. Dulbecco's Medium + Nutritient mixture Ham's F-12 be in proportion Set up 1: 1 and with transferrin (2 to 10 μg / ml), insulin (5 to 15 μg / ml), if necessary also hydrocortisone 1 μg / ml. Serum addition is possible up to 10%, e.g. with FKS (fetal calf serum) or NKS (newborn calf serum), but also serum-free formulation with albumin addition of at least 0.5% or for dynamic cultivation e.g. under perfusion conditions with dextran additive. Alternatively, you can comparable medium formulations are also used, which are suitable for endothelial cell culture suitable. For this, human somatotropin (growth hormone = human growth hormones, hGH), e.g. by Sigma-Aldrich GmbH, Steinheim, Germany in a concentration between 5 and 500 ng per ml.

Beispiel 2 – Beispiele für Somatotropin-Wirkung im Zusammenhang mit Stabilisierung kapillarartiger StrukturenExample 2 - Examples for somatotropin effect in connection with stabilization of capillary-like structures

Für den experimentellen Nachweis der Somatotropin-Wirkung im Rahmen des Tissue engineerings wurden dreidimensionale Kulturen in Transwelleinsätzen zusammengesetzt (Corning Costar, Cambridge, Ma, USA). Der Boden dieser Einsätze wird von einer porösen Polycarbonatmembran gebildet, wobei die Poren einen Durchmesser von 12 μm besitzen. Die Untersuchungen wurden an einem vereinfachten Gewebemodell durchgeführt, das im Wesentlichen aus Fettgewebsstromazellen und humanen umbilikalen venösen Endothelzellen bestand. Dextranmicrocarrier dienten in diesem vereinfachten Modell als ein Ersatz für z. B. ein resorbierbares Gerüstmaterial. Dicht bewachsene Mikrocarrier (bei dichter Packung 4 ml) wurden von den Rührkulturflaschen entnommen und zentrifugiert, um überschüssiges Medium zu entfernen. Humane umbilikale Endothelzellen wurden trypsiniert und zentrifugiert. Das Pellet wurde in Thrombinlösung resuspendiert und mit den Mikrocarriern vermischt. Diese Fibrinlösung war vorher mit einem konstanten Gemisch angiogener Wachstumsfaktoren (VEGF, bFGF, EGF) supplementiert worden. Sechs Stunden nach der Polymerisation wurden die Fibringele zusätzlich mit einer Schicht aus Endothelzellen sowohl auf der Ober- wie auf der Unterfläche besiedelt. Danach wurden die Einsätze in die Multiwellplatten zurückgesetzt und mit serumfreiem Kulturmedium bedeckt. Das Medium wurde jeden zweiten Tag gewechselt. Vier experimentelle Serien wurden kultiviert mit unterschiedlichen hGH-Konzentrationen im Medium von 0,5 ng/ml, 5 ng/ml, 50 ng/ml und 500 ng/ml.For the experimental detection of the somatotropin effect in the context of tissue engineering, three-dimensional cultures were assembled in trans-wave applications (Corning Costar, Cambridge, Ma, USA). The bottom of these inserts is formed by a porous polycarbonate membrane, the pores having a diameter of 12 μm. The investigations were carried out on a simplified tissue model, which essentially consisted of adipose stromal cells and human umbilical venous endothelial cells. Dextran microcarriers served in this simplified model as a replacement for e.g. B. a resorbable scaffold. Tightly overgrown microcarriers (4 ml in a tight package) were removed from the stirred culture bottles and centrifuged to remove excess medium. Human umbilical endothelial cells were trypsinized and centrifuged. The pellet was resuspended in thrombin solution and mixed with the microcarriers. This fibrin solution had previously been supplemented with a constant mixture of angiogenic growth factors (VEGF, bFGF, EGF). Six hours after the polymerization, the fibrin gels were additionally covered with a layer of endothelial cells on both the upper and the upper Settled area. The inserts were then replaced in the multiwell plates and covered with serum-free culture medium. The medium was changed every other day. Four experimental series were cultivated with different hGH concentrations in the medium of 0.5 ng / ml, 5 ng / ml, 50 ng / ml and 500 ng / ml.

Die Ausmessung der Formation kapillarartiger Strukturen wurde über UEA-TRITC-Markierung und konfokale Laser-Scanning-Mikroskopie durchgeführt. Die Länge positiver kapillarartiger Strukturen wurde interaktiv an einem Bildauswertungssystem ausgemessen. Im Vergleich zur Kontrollgruppe führte der Zusatz von hGH zu einem Anwachsen der Länge kapillarartiger Strukturen. Dieser Effekt schien auch dosisabhängig zu sein. Mit steigender Dosierung von 0,5 ng/ml über 5 ng/ml bis zu 50 ng/ml wurden höhere Werte für die Gesamtlänge kapillarartiger Strukturen pro Volumeneinheit erreicht (1). Die besten Resultate wurden erreicht mit einer Dosierung von 50 ng/ml. Der Abfall vom achten bis zum 32-ten Tag war deutlich flacher im Vergleich zu dem bei der 0,5 ng-Gruppe und der 5 ng-Gruppe. Dieser Umstand eines flacheren Abfalls der Kurven wurde als verbesserte Stabilisierung bzw. Erhaltung kapillarartiger Strukturen über den zeitlichen Verlauf interpretiert. Eine weitere Steigerung der Dosierung von 500 ng/ml zeigte keine weitere Verbesserung.The formation of the formation of capillary-like structures was carried out using UEA-TRITC marking and confocal laser scanning microscopy. The length of positive capillary-like structures was measured interactively on an image evaluation system. Compared to the control group, the addition of hGH led to an increase in the length of capillary structures. This effect also appeared to be dose dependent. With increasing doses from 0.5 ng / ml to 5 ng / ml up to 50 ng / ml, higher values were achieved for the total length of capillary structures per unit volume ( 1 ). The best results were achieved with a dosage of 50 ng / ml. The drop from the eighth to the 32nd day was significantly flatter compared to that in the 0.5 ng group and the 5 ng group. This fact of a flatter fall in the curves was interpreted as improved stabilization or maintenance of capillary structures over the course of time. A further increase in the dosage of 500 ng / ml showed no further improvement.

Beispiel 4 – Verbesserung der Vernetzung kapillarartiger Strukturen in Somatotropin-supplementierten KulturenExample 4 - improvement the networking of capillary-like structures in somatotropin-supplemented cultures

Die Vernetzung kapillarartiger Strukturen und Remodellierungsprozeß werden durch HGH Zusatz verbessert. Die Kulturen, die mit 50 und 500 ng/ml HGH supplementiert worden waren, zeigten kapillarartige Strukturen in breiten irregulären Bändern mit dünnen Fortsetzungen in den ersten Tagen. Nach 16 Tagen war das Netzwerk weniger dicht aber homogener mit einem höheren Grad an Vernetzungen. Dieser Trend setzte sich bis zum 32-ten Tag fort mit homogen konfigurierten Strukturen ähnlich dem natürlichen Remodellierungsprozeß. In der Kontrollgruppe und in der 0,5 ng/ml-Gruppe wurde dieser Remodellierungsprozeß nicht in dem selben Ausmaß beobachtet. Um ein Ausmaß für den Grad der Vernetzung des kapillarartigen Netzwerks zu erhalten, wurde die relative Verteilung der Einzellängen miteinander verbunden nach Strukturen ausgewertet (2). Nach acht Tagen war selbst bei den Gruppen mit niedriger hGH Dosierung (0,5 und 5 ng/ml) die Länge der Einzelstrukturen höher als in der Kontrollgruppe. In der Interpretation bedeutet dies, daß ein höherer Vernetzungsgrad mit längeren miteinander verbundenen Strukturen bestand. Maximal war dieser Effekt in der 50 und 500 ng/ml-Gruppe. Aber nur bei einer Dosierung von 50 ng/ml zeigte die Längenverteilung nach 16 und 32 Tagen ansteigende Werte der Einzelstrukturen, was bedeutet, daß sich kleinere Strukturen zu größeren gefäßartigen Vernetzungen vereinigten.The networking of capillary-like structures and the remodeling process are improved by the addition of HGH. The cultures supplemented with 50 and 500 ng / ml HGH showed capillary-like structures in wide irregular bands with thin continuations in the first few days. After 16 days the network was less dense but more homogeneous with a higher degree of networking. This trend continued until the 32nd day with homogeneously configured structures similar to the natural remodeling process. This remodeling process was not observed to the same extent in the control group and in the 0.5 ng / ml group. In order to obtain a measure of the degree of cross-linking of the capillary network, the relative distribution of the individual lengths was evaluated according to structures ( 2 ). After eight days, even in the groups with low hGH doses (0.5 and 5 ng / ml), the length of the individual structures was longer than in the control group. In interpretation, this means that there was a higher degree of cross-linking with longer interconnected structures. This effect was maximal in the 50 and 500 ng / ml group. But only at a dose of 50 ng / ml did the length distribution show increasing values of the individual structures after 16 and 32 days, which means that smaller structures combined to form larger vessel-like cross-links.

Claims

Medium composition for tissue engineering vascularized Tissues and blood vessels is characterized in that the Composition contains somatotropin (growth hormone).

Medium composition according to claim 1, which is characterized by distinguishes that a Basic medium that for the endothelial cell culture is suitable and with insulin and transferrin, possibly also corticoids is supplemented, and if necessary has an albumin addition of more than 0.5% and a dextran addition, Contains somatotropin (growth hormone).

Medium composition according to claim 1 and 2, characterized characterized that somatotropin is contained in a concentration of 5 to 500 ng / ml.

Medium composition according to claim 1 to 3, characterized characterized that somatotropin is contained in a concentration of 50 ng / ml.