DE10261825A1 - Use of hypericin and / or its derivatives for tumor prevention - Google Patents
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Abstract
Die vorliegende Erfindung betrifft die Verwendung von Hypericin und/oder dessen Derivaten zur Herstellung eines Arzneimittels zur Tumorprävention. Gegenstand der Erfindung sind auch die Verwendung von Hypericin und/oder dessen Derivaten zur Herstellung eines Nahrungs- oder Nahrungsergänzungsmittels und das Nahrungs- oder Nahrungsergänzungsmittel, umfassend Hypericin, in einer ernährungswirksamen Menge. Bevorzugt kann Hypericin in Form eines hypericinreichen pflanzlichen Trockenextrakts, vorzugsweise aus Johanniskraut, eingesetzt werden.The present invention relates to the use of hypericin and / or its derivatives for the manufacture of a medicament for tumor prevention. The invention also relates to the use of hypericin and / or its derivatives for the production of a food or nutritional supplement and the food or nutritional supplement comprising hypericin in a nutritionally effective amount. Hypericin can preferably be used in the form of a hypericin-rich vegetable dry extract, preferably from St. John's wort.
Description
Die vorliegende Erfindung betrifft die Verwendung von Hypericin und/oder dessen Derivaten zur Herstellung eines Arzneimittels zur Tumorprävention. Gegenstand der Erfindung sind auch die Verwendung von Hypericin und/oder dessen Derivaten zur Herstellung eines Nahrungs- oder Nahrungsergänzungsmittels und das Nahrungs- oder Nahrungsergänzungsmittel, umfassend Hypericin, in einer ernährungswirksamen Menge. Bevorzugt kann Hypericin in Form eines hypericinreichen pflanzlichen Trockenextrakts, vorzugsweise aus Johanniskraut, eingesetzt werden.The present invention relates to the use of hypericin and / or its derivatives for the preparation a drug for tumor prevention. The invention also relates to the use of hypericin and / or its derivatives for the manufacture of a food or nutritional supplement and the nutritional or nutritional supplement comprising hypericin, in a nutritionally effective Quantity. Hypericin can preferably be in the form of a hypericin-rich vegetable Dry extract, preferably from St. John's wort, can be used.
In Anbetracht der bis heute begrenzten therapeutischen Möglichkeiten besteht unter Fachleuten die Ansicht, dass die Chemoprävention der Krebserkrankungen durch spezifische Nahrung, Nahrungsergänzungsmittel und spezifische Arzneimittelzusammensetzungen enormes Potential zur Lebensverbesserung beinhaltet.Given the limited to date therapeutic options experts believe that chemoprevention cancer through specific food, dietary supplements and specific drug compositions have enormous potential to improve life.
Es ist bekannt, dass beispielsweise
polycyclische aromatische Kohlenwasserstoffe (PAKs) krankheitsauslösende Substanzen
sind. PAKs können
aus der Umgebung (Abgase) oder beim Rauchen aufgenommen werden,
aber auch beim Grillen entstehen polycyclische aromatische Kohlenwasserstoffe.
Sie werden insbesondere für
die Entstehung mutagener Veränderungen
und maligner Tumore verantwortlich gemacht. Die Metabolisierung
dieser Substanzen im Körper
war Gegenstand zahlreicher Forschungsarbeiten und ist am Beispiel
eines der wichtigsten Vertreter, dem Benzo[a]pyren(B[a]P), in
Die erste Stufe der Bioaktivierung des B[a]P führt über die CYP1A1-katalysierte Bildung des B[a]P-7,8-Epoxids und dessen Hydrolyse durch Epoxidhydrolase (EH) zum B[a]P-7,8-Dihydrodiol (7,8-diol-B[a]P). In einem zweiten Schritt wird dann das entstandene 7,8-diol-B[a]P durch CYP1A1 zum genotoxischen (±)-B[a]P-r-7,t-8-dihydro-diol-t-9,10-Epoxid (Diolepoxid 2, DE2) metabolisiert. Das Enzym Cytochrom P450 1A1 katalysiert also beide Epoxidationsschritte der Aktivierung von Benzpyrenen zu den Diolepoxiden, deren DNA-Addukte als die eigentlichen Krankheitsauslöser angesehen werden. Shimada et al. beschreiben in Drug Metab. Dispos. 29 (2001) 1176–1182, dass das humane Cytochrom P450 1A1 (CYP1A1) das wichtigste in die chemische Carcinogenese involvierte Enzym ist. Es wird durch PAKs wie z.B. Benzo[a]pyren induziert und aktiviert diese und viele andere Umweltgifte und Procarcinogene zu den eigentlichen Carcinogenen (Guengerich, F. P., Cancer Res. 48 (1988) 2946–2954). CYP1A1 ist im Wesentlichen ein extrahepatisches Enzym, neben der Lunge wird es vor allem im gesamten gastro-intestinalen Trakt (Speiseröhre, Magen, Dünn- und Dickdarm), in der Placenta, dem Gehirn und den Lymphozyten exprimiert.The first stage of bioactivation des B [a] P leads over the CYP1A1-catalyzed formation of the B [a] P-7,8 epoxide and its hydrolysis by epoxy hydrolase (EH) to B [a] P-7,8-dihydrodiol (7,8-diol-B [a] P). In one second step is the resulting 7,8-diol-B [a] P by CYP1A1 to the genotoxic (±) -B [a] P-r-7, t-8-dihydro-diol-t-9,10 epoxy (diol epoxide 2, DE2) metabolized. The enzyme cytochrome P450 1A1 catalyzes both epoxidation steps for the activation of benzopyrenes to the diolepoxides, their DNA adducts are regarded as the actual cause of the disease. Shimada et al. describe in drug metab. Disposables. 29 (2001) 1176-1182 that the human cytochrome P450 1A1 (CYP1A1) the most important in the chemical Carcinogenesis is the enzyme involved. PAKs such as Benzo [a] pyrene induces and activates these and many other environmental toxins and procarcinogens to the actual carcinogens (Guengerich, F. P., Cancer Res. 48 (1988) 2946-2954). CYP1A1 is essentially an extrahepatic enzyme, in addition to the lungs it is mainly used in entire gastrointestinal tract (esophagus, stomach, small and large intestine), expressed in the placenta, brain and lymphocytes.
Aus
Als eine wichtige chemopräventive Verbindung, die die Bildung von DNA-Addukten verhindert, gilt Quercetin, als natürlich vorkommendes Flavonoid Bestandteil vieler Früchte und Gemüse, das z.B. auch im Johanniskraut enthalten ist. So beschreiben Kang et al. in "Nutrition and Cancer" 35(2) (1999), 175–179, dass Quercetin die Entstehung Benzo[a]pyren-induzierter DNA-Addukte in humanen Hep G2-Zellen durch Beeinflussung der CYP1A1-Genexpression inhibiert. Die Autoren schlussfolgern, dass Quercetin eine langanhaltende präventive Wirkung auf die chemische Cancerogenese von Menschen haben kann, die eine an Gemüse und Früchten reiche Nahrung zu sich nehmen.As an important chemopreventive The compound that prevents the formation of DNA adducts is quercetin, than natural occurring flavonoid component of many fruits and vegetables that e.g. is also contained in St. John's wort. Kang et al. in "Nutrition and Cancer "35 (2) (1999) 175-179. that quercetin the formation of benzo [a] pyrene-induced DNA adducts in human Hep G2 cells inhibited by influencing the CYP1A1 gene expression. The authors conclude that quercetin has a long-lasting preventive effect on the chemical Cancerogenesis can have from people who are rich in vegetables and fruits Ingest food.
Natürlich vorkommende pflanzliche Phenole wie Tanninsäure, Quercetin, Myricetin und Anthraflavonsäure werden von Das, M. et al. in "Cancer Res. 47 (3) (1987), 767–73" als potente Inhibitoren der PAK-DNA-Addukt-Bildung in der Epidermis und der Lunge von SENCAR-Mäusen beschrieben. Die Autoren schlussfolgern, dass sich diese pflanzlichen Phenole als geeignet erweisen könnten, das Risiko der Tumorinduktion durch PAKs zu modifizieren.Naturally occurring vegetable Phenols such as tannic acid, Quercetin, myricetin and anthraflavonic acid are described by Das, M. et al. in "Cancer Res. 47 (3) (1987), 767-73 "as potent inhibitors the PAK-DNA adduct formation in the epidermis and lungs of SENCAR mice. The authors conclude that these plant phenols might prove appropriate to modify the risk of tumor induction by PAHs.
Aufgabe der vorliegenden Erfindung war es, hochwirksame Verbindungen zur Tumorprävention aufzufinden.Object of the present invention was to find highly effective connections for tumor prevention.
Es wurde nun überraschenderweise festgestellt, dass Hypericin und seine Derivate hochpotente chemopräventive Verbindungen zur Prophylaxe jeglicher Erkrankungen, die mit mutagenen Veränderungen einhergehen, wie z.B. neoplastische Transformationen, und insbesondere zur Cancerprophylaxe sind.It has now surprisingly been found that hypericin and its derivatives are highly potent chemopreventive Compounds for the prophylaxis of any disease associated with mutagenic changes go hand in hand, e.g. neoplastic transformations, and in particular for cancer prophylaxis.
Bisher wird Hypericin in der Literatur
zur Behandlung viraler Infektionen (
Hypericin gehört zu den Naphthodianthronen und hat folgende Strukturformel: Hypericin belongs to the naphthodian thrones and has the following structural formula:
Hypericin ist ein Bestandteil von
Pflanzen, die zur Art Hypericum (Johanniskraut) gehören [vgl. A.
Nahrstedt et al., Pharmacopsychiat. 30 (1997) (supplement) 129–134]. Die
Reinsubstanz Hypericin kann aus Pflanzen isoliert werden oder auch
chemisch synthetisiert werden. Eine ganze Reihe von Synthesewegen
sind beschrieben (vgl. z.B.
Damit ist Hypericin beispielsweise
dem als Cancerprophylaktikum beschriebenen Resveratrol überlegen,
das zwar die Hydroxylierung des B[a]P nicht hemmt, aber andererseits
auch die Epoxidation des 7,8-diol-B[a]P zu den genotoxischen Diolen
nur leicht inhibiert (vgl.
Um die Aktivität des CYP1A1 bei der Hydroxylierung des B[a]P zum 3-OH-B[a]P zu charakterisieren, wurde der AHH-Test (aryl hydrocarbon hydroxylase assay) angewendet (Nebert, D.W. et al., J. Biol. Chem. 243 (1968) 6242–6249). Die Durchführung des Tests ist in Beispiel 1 beschrieben.To the activity of CYP1A1 in hydroxylation to characterize B [a] P to 3-OH-B [a] P, the AHH test (aryl hydrocarbon hydroxylase assay) (Nebert, D.W. et al., J. Biol. Chem. 243 (1968) 6242-6249). The implementation of the Testing is described in Example 1.
Um die Epoxidationsaktivität des CYP1A1 zu untersuchen, wurde erfindungsgemäß dessen Effekt auf die Epoxidation des 7,8-diol-B[a]P zu den Diolepoxiden bestimmt, also der zweite, terminale Epoxidationsschritt untersucht. Die Durchführung dieses Epoxidationstests ist in Beispiel 2 beschrieben. Vergleichende Untersuchungen wurden zum EROD-Test vorgenommen, einem klassischen Test unter Verwendung eines (unphysiologischen) Modellsubstrates, zur Bestimmung der CYP1A1-Aktivität. Hierbei wird die O-Deethylierung von 7-Ethoxyresorufin untersucht. Die Durchführung des EROD-Tests ist in Beispiel 3 beschrieben.The epoxidation activity of CYP1A1 To investigate, was its effect on epoxidation according to the invention of the 7,8-diol-B [a] P to the diol epoxides, i.e. the second terminal epoxidation step examined. Carrying out this Epoxidation tests are described in Example 2. Comparative studies were taken for the EROD test, a classic test using an (unphysiological) Model substrates, for the determination of CYP1A1 activity. Here will investigated the O-deethylation of 7-ethoxyresorufin. The implementation of the EROD testing is in example 3 described.
Es hat sich gezeigt, dass die alleinige
Anwendung des EROD-Tests
zu einer falschen Einschätzung
der inhibitorischen Potenz einer Substanz führen kann. So wurde Resveratrol
auf der Basis von EROD-Studien als ein starker selektiver Inhibitor
des humanen CYP1A1 identifiziert (Chun et al., Biochem. Biophys.
Res. Commun. 262 (1999), 20–24),
während
sich im hier erstmalig angewendeten Epoxidationstest zeigt, dass
Resveratrol die Epoxidation des 7,8-diol-B[a]P nur leicht hemmt
(vgl.
IC5
0-Werte wurden für Hypericin und vergleichsweise
für Quercetin
und α-Naphthoflavon
bestimmt. Der IC50-Wert ist definitionsgemäß diejenige Inhibitorkonzentration,
die zur 50%-igen Hemmung der Reaktion führt. Der IC50-Wert
des Hypericins wurde zu 0,5 μM
bestimmt, während
z.B. der von Quercetin, auch einem pflanzlichen Phenol, das präventiv auf
die chemische Cancerogenese wirkt, bei 1,5 μM liegt. Selbst der IC50-Wert des α-Naphthoflavons (α-NF, Alpha-NF),
einem gut bekannten selektiven CYP1A1-Inhibitor, liegt bei 0,8 μM. Letzterer
Wert wurde von den Erfindern erstmalig für die Hemmung der CYP1A1-abhängigen Epoxidation
von 7,8-diol-B[a]P
bestimmt. In
Enzymkinetische Studien (Inhibitorkinetik) haben gezeigt, dass Hypericin ein potenter nicht-kompetitiver Inhibitor der CYP1A1-Epoxidationsaktivität ist, mit einer Hemmungskonstante (Ki-Wert) von ca. 0,6 μM. Dagegen ist Quercetin ein Inhibitor vom Mischtyp (kompetitive plus nicht-kompetitive Hemmung) mit einem Ki = 2,4 μM.Enzyme kinetic studies (inhibitor kinetics) have shown that hypericin is a potent non-competitive inhibitor of CYP1A1 epoxidation activity, with an inhibition constant (K i value) of approximately 0.6 μM. In contrast, quercetin is a mixed-type inhibitor (competitive plus non-competitive inhibition) with a K i = 2.4 μM.
Es wurde somit gefunden, dass Hypericin und/oder seine Derivate vorteilhaft zur Prävention PAK-induzierter Tumore eingesetzt werden können, insbesondere zur Prävention von Lungenkarzinom, Mammakarzinom, Portiokarzinom, Darmkarzinom, Hautkarzinom und Hirnkarzinom. Die Substanzen sind auch zur Prävention anderer, durch PAK induzierte Erkrankungen einsetzbar, z.B. zur Prävention von neoplastischen Transformationen.It was thus found that hypericin and / or its derivatives are beneficial for the prevention of PAH-induced tumors can be used, in particular for prevention of lung carcinoma, breast carcinoma, portiocarcinoma, colon carcinoma, skin carcinoma and brain cancer. The substances are also for prevention other diseases induced by PAK can be used, e.g. to Prevention of neoplastic transformations.
Basierend auf den oben dargelegten Ergebnissen ist auch die Verwendung von Hypericin und/oder dessen Derivaten zur Hemmung der Epoxidationsaktivität des Enzyms CYP1A1 Gegenstand der vorliegenden Erfindung. Als Hypericin-Derivate kommen erfindungsgemäß insbesondere Pseudohypericin, Protohypericin, Pseudoprotohypericin, Cyclopseudohypericin und Emodinanthron in Frage. Vorzugsweise werden Hypericin und seine Derivate in Form ihrer Salze mit organischen oder anorganischen Säuren, z.B. als Acetate oder Phosphate, eingesetzt.Based on the above Results are also the use of hypericin and / or its Derivatives to inhibit the epoxidation activity of the enzyme CYP1A1 present invention. According to the invention, hypericin derivatives in particular come Pseudohypericin, protohypericin, pseudoprotohypericin, cyclopseudohypericin and emodinanthron in question. Hypericin and its are preferred Derivatives in the form of their salts with organic or inorganic acids, e.g. used as acetates or phosphates.
Zur Herstellung eines Arzneimittels
werden diese Verbindungen oder Gemische dieser Verbindungen in an
und für
sich bekannter Art und weise mit geeigneten Hilfs- und/oder Trägerstoffen
und/oder Verdünnungsmitteln
zu festen Darreichungsformen, zu Injektions- oder Infusionslösungen oder
zu topischen Darreichungsformen formuliert. Die orale Gabe der erfindungsgemäßen Wirkstoffe
ist bevorzugt. Die parenterale Gabe ist selbstverständlich auch
möglich.
Die Herstellung der galenischen Formulierungen stellt für den Fachmann
kein Problem dar. Ein Verfahren zur galenischen Zubereitung von Infusions-
oder Injektionslösungen
von Hypericin oder Hypericinderivaten ist beispielsweise in
Es ist erfindungsgemäß auch möglich, anstelle
des reinen Hypericins/Hypericinderivats einen hypericinreichen pflanzlichen
Extrakt, insbesondere aus Johanniskraut, besonders bevorzugt aus
Hypericum perforatum, einzusetzen. Die Herstellung eines solchen
Extraktes ist beispielsweise in
Da bekanntermaßen kommerziell erhältliche Johanniskraut-Extrakte, darunter auch die hypericinreichen, zur Behandlung von Verstimmungszuständen und nervöser Unruhe eingesetzt werden, und von großen Teilen, insbesondere der älteren Bevölkerung genutzt werden, wird damit erfindungsgemäß gleichzeitig ein tumorpräventativer Effekt erzielt.As is known, commercially available St. John's wort extracts, including also the hypericin-rich, for the treatment of mood disorders and nervous Unrest is used, and by large parts, especially the older population are used, according to the invention, at the same time it becomes a tumor preventative Effect achieved.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist auch ein Verfahren zur Tumorprävention, bei dem die oben beschriebenen pharmazeutischen Zubereitungen dem menschlichen oder tierischen Körper in einer Menge appliziert werden, die ausreichend und effektiv ist, die Epoxidationsaktivität des Enzyms CYP1A1 zu inhibieren. Es hat sich gezeigt, dass Plasmakonzentrationen von ca. 13 μg Hypericin/L, die bei üblicher Verabreichung von 900 mg Johanniskraut-Trockenextrakt/Tag durchschnittlich im stationären Zustand erreicht werden (Johne et al., in Clin. Pharmacol. Ther. (1999) 338–345) im in-vitro-Experiment zu einer mehr als 90%-igen Hemmung von CYP1A1 führen. Davon ausgehend sollte die Hypericin- bzw. Hypericin-Derivat-Dosis üblicherweise ca. 10 bis 200 μg/Tag betragen, bevorzugt von 70 bis 200 μg/Tag.Object of the present invention is also a method of tumor prevention in which the above described pharmaceutical preparations, human or animal body applied in an amount that is sufficient and effective, the epoxidation activity to inhibit the enzyme CYP1A1. It has been shown that plasma concentrations of approx. 13 μg Hypericin / L, which is more common Administration of 900 mg St. John's wort dry extract / day on average in stationary Condition can be achieved (Johne et al., In Clin. Pharmacol. Ther. (1999) 338-345) more than 90% inhibition of CYP1A1 in the in vitro experiment to lead. Based on this, the dose of hypericin or hypericin derivative should usually be approx. 10 to 200 μg / day amount, preferably from 70 to 200 μg / day.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind weiterhin die Verwendung von Hypericin und/oder dessen Derivaten zur Herstellung eines den Abbau toxischer und procarcinogener Substanzen fördernden Nahrungs- oder Nahrungsergänzungsmittels sowie das Nahrungs- oder Nahrungsergänzungsmittel, das Hypericin und/oder dessen Derivate in einer ernährungswirksamen Menge enthält. Es handelt sich damit um ein Nahrungs- oder Nahrungsergänzungsmittel, das die Epoxidationsaktivität des Enzyms CYP1A1 hemmt. Bevorzugt kann das Hypericin auch in Form eines hypericinreichen pflanzlichen Trockenextrakts, vorzugsweise aus Johanniskraut, im erfindungsgemäßen Nahrungs- oder Nahrungsergänzungsmittel enthalten sein.Object of the present invention continue to use hypericin and / or its derivatives for the production of a degradation of toxic and procarcinogenic substances promoting Food or nutritional supplement as well as the food or nutritional supplement, the hypericin and / or its derivatives in a nutritionally effective amount. It deals is a food or nutritional supplement that inhibits the epoxidation activity of the enzyme CYP1A1 inhibits. The hypericin can preferably also be in the form of a hypericin-rich herbal dry extract, preferably from St. John's wort, in foodstuffs according to the invention or nutritional supplements be included.
Das erfindungsgemäße Nahrungs- oder Nahrungsergänzungsmittel kann beispielsweise ein Nahrungsmittelpulver aus Milchpulver, Kohlenhydraten, Vitaminen, Mineralien und Lipiden sein, das mindestens 0,3 Gew.% Hyperin/Hypericinderivat enthält. Es ist selbstverständlich möglich, auch jedes andere Nahrungsmittelpulver mit Hypericin/Hypericinderivaten anzureichern.The food or nutritional supplement according to the invention For example, a food powder made from milk powder, carbohydrates, Vitamins, minerals and lipids that are at least 0.3% by weight Contains Hyperin / Hypericin derivative. It is self-evident possible, also any other food powder with hypericin / hypericin derivatives to enrich.
Nachfolgend wird die Erfindung näher beschrieben, ohne sie auf die dargelegten Ausführungsformen einzuschränken.The invention is described in more detail below. without restricting it to the stated embodiments.
Es zeigen:Show it:
Die
EROD-Aktivität
ist auf rund der starken Eigenfluoreszenz von Hypericin nicht bestimmbar.
The EROD activity cannot be determined on the strong intrinsic fluorescence of hypericin.
Wirkung
auf die 7,8-diol-B[a]P-Epoxidationsaktivität des humanen CYP1A1.
Die
reziproken IC50-Werte wurden für alle drei
Inhibitoren dargestellt.
Effect on the 7,8-diol-B [a] P epoxidation activity of human CYP1A1.
The reciprocal IC 50 values were shown for all three inhibitors.
Ausführungsbeispiele Materialienembodiments materials
Quercetin, B[a]P, 7-Ethoxyresorufin, Resorufin, Alpha-Naphthoflavon, Dilaurylphosphatidylcholin (DLPC) wurden bei SIGMA (Deisenhofen, BR Deutschland) gekauft. 3-OH-B[a]P, 7,8-dihydrodiol-B[a]P, die Tetrole r-7,t-8,t-9,c-10-tetrahydroxy-7,8,9,10-tetrahydro-B[a]P (RTTC), r-7,t-8,t-9,t-10-tetrahydroxy-7,8,9,10-tetrahydro-B[a]P (RTTT), r-7,t-8,c-9,t-10-tetrahydroxy-7,8,9,10-tetrahydro-B[a]P (RTCT), r-7,t-8,c-9,c-10-tetrahydroxy-7,8,9,10-tetrahydro-B[a]P (RTCC) wurden bei NCI Chemical Carcinogen Repository (Midwest Research Institute, Kansas City, MI, USA) gekauft.Quercetin, B [a] P, 7-ethoxyresorufin, Resorufin, alpha naphthoflavone, Dilaurylphosphatidylcholine (DLPC) were obtained from SIGMA (Deisenhofen, BR Germany) bought. 3-OH-B [a] P, 7,8-dihydrodiol-B [a] P, the Tetrols r-7, t-8, t-9, c-10-tetrahydroxy-7,8,9,10-tetrahydro-B [a] P (RTTC), r-7, t-8, t-9, t-10-tetrahydroxy-7,8,9,10-tetrahydro-B [a] P (RTTT), r-7, t-8, c-9, t-10-tetrahydroxy-7,8,9,10-tetrahydro-B [a] P (RTCT), r-7, t-8, c-9, c-10-tetrahydroxy-7,8,9,10-tetrahydro-B [a] P (RTCC) at NCI Chemical Carcinogen Repository (Midwest Research Institute, Kansas City, MI, USA).
Klonen, heterologe Expression und Reinigung des rekombinanten-CYP1A1Cloning, heterologous expression and purification of the recombinant CYP1A1
Humanes CYP1A1 und P450-Reductase wurden heterolog in Spodoptera frugiperda (Sf9)-Insektenzellen mit Hilfe des Baculovirus-Expressionssystem exprimiert und anschließend isoliert und gereinigt. Die Klonierung der cDNAs in Baculovirus-Transfervektoren pBlueBac4.5 (Invitrogen, Niederlande) erfolgte wie durch Schwarz et al. in Pharmacogenetics 10 (2000) 519–530 beschrieben. Danach wurde ein N-terminales 72 bp SphI-SexAI-Fragment ersetzt durch ein gleiches mit folgenden Modifizierungen: die codierende Sequenz upstream des Stop-Codons wurde erweitert durch eine codierende Sequenz für eine Thrombin-Spaltstelle und 6xHis-Reste. Danach wurde die gesamte modifizierte CYP1A1-Sequenz in den Vektor pAcMP3 (Pharmingen, USA) umkloniert (unter Kontrolle des 'late basic protein promotor' Pcor). Das auf diese Weise modifizierte pAcMP3-Plasmid wurde in E. coli amplifiziert und zur Präparation rekombinanter Baculoviren (nach dem Protokoll des Herstellers Pharmingen) verwendet. Die Expression erfolgte in 400 ml-Sf9-Spinnerkulturen über ca. 55 h, danach wurden die Zellen geerntet, lysiert und das CYP1A1-Protein als 6xHis-Fusionsprotein isoliert und gereinigt wie beschrieben durch Modi et al. in Biochemistry 35 (1996) 4540–4550, aber mit der Modifikation, daß eine Mischung von Emulgen 913 (2%) und Cholat (0.2%) für die Solubilisierung der Membranen eingesetzt wurde. CYP1A1 war elektrophoretisch homogen mit einem spezifischen P450-Gehalt von 11 nmol/mg Protein. Die Expression der Reductase erfolgte analog, deren Reinigung wurde nach der von Tamura et al. in Arch. Biochem. Biophys 293 (1992) 219–223 beschriebenen Methode durchgeführt.Human CYP1A1 and P450 reductase were heterologously expressed in Spodoptera frugiperda (Sf9) insect cells using the baculovirus expression system and then isolated and purified. The cDNAs were cloned into baculovirus transfer vectors pBlueBac4.5 (Invitrogen, Netherlands) as described by Schwarz et al. in Phar macogenetics 10 (2000) 519-530. An N-terminal 72 bp SphI-SexAI fragment was then replaced by the same with the following modifications: the coding sequence upstream of the stop codon was expanded by a coding sequence for a thrombin cleavage site and 6xHis residues. The entire modified CYP1A1 sequence was then cloned into the vector pAcMP3 (Pharmingen, USA) (under the control of the 'late basic protein promoter' P cor ). The pAcMP3 plasmid modified in this way was amplified in E. coli and used for the preparation of recombinant baculoviruses (according to the protocol of the manufacturer Pharmingen). The expression took place in 400 ml Sf9 spinner cultures over approx. 55 h, after which the cells were harvested, lysed and the CYP1A1 protein isolated and purified as a 6xHis fusion protein as described by Modi et al. in Biochemistry 35 (1996) 4540-4550, but with the modification that a mixture of emulsions 913 (2%) and cholate (0.2%) was used for the solubilization of the membranes. CYP1A1 was electrophoretically homogeneous with a specific P450 content of 11 nmol / mg protein. The expression of the reductase was carried out analogously, its purification was carried out according to the method described by Tamura et al. in Arch. Biochem. Biophys 293 (1992) 219-223.
Beispiel 1 example 1
Durchführung des EpoxidationstestsImplementation of the Epoxidationstests
Dieser Test (Epoxidation von 7,8-diol-B[a]P) dient dem Nachweis der terminalen Epoxidation beider Aktivierung von B[a]P zu den B[a]P-Diolepoxiden 1 und 2 (DE1 und DE2), wobei DE2 der ultimativ carcinogene Metabolit ist, der durch DNA-Adduktbildung zur Cancerogenese führt. Die 7,8-diol-B[a]P-Epoxidation wurde durch HPLC-Trennung und spektralphotometrischen Nachweis der Produkte entsprechend veröffentlichter Methodik nachgewiesen (Yang et al., in Cancer Res. 35 (1975) 3642–3650; Schwarz et al., in Carcinogenesis 22 (2001) 453–459), ausgenommen der Verwendung eines rekonstituierten Enzymsystems bestehend aus den gereinigten Enzymen (CYP1A1 und P450-Reductase) und Lipid (DLPC). Das rekonstituierte System, bestehend aus 200 pmol gereinigtem CYP1A1 (28 nmol/ml), 900 pmol gereinigter Reductase (56 nmol/ml) und 0.5 mg DLPC (5 mg/ml), wurde in 200 μl Puffer (50 mM Tris/HCl, 100 mM NaCl, pH 7,5) 10 min auf Eis inkubiert. Für den Test wurden 10 μl-Aliquote dieses Enzym-Lipid-Mix (entsprechend 10 pmol CYP1A1) pro Reaktion mit dem Substrat 7,8-diol-B[a]P (Endkonzentration: 2 μM) und der entsprechenden Inhibitorkonzentration in 200 μl Puffer inkubiert, danach auf 990 μl verdünnt und nochmals 1 min bei 37 °C präinkubiert. Die Reaktion wurde durch Zugabe von 10 μl NADPH (16,6 mg/200 μl) gestartet und im Wasserbad bei 37 °C für 15 min durchgeführt. Danach wurde die Reaktion durch Zugabe von 100 μl 1M K-Phosphat-Puffer (pH 3,5) gestoppt und die Suspension für 1h bei 4 °C der Hydrolyse überlassen. Nach Zugabe von 10 μg 1,1'-bi-2-Naphthol (10 μg/1Oμl Methanol) als internem HPLC-Standard wurden die Produkte und Substrat zweimal mittels Ethylacetat extrahiert. Nach Eindampfen des Lösungsmittels wurden Produkte und Substrat in 100 μl Methanol aufgenommen, in einem Ultraschallbad homogenisiert und in die HPLC-Anlage injiziert. Für die IC50- und die kinetischen Studien wurden Stamm-Lösungen mit geeigneter Inhibitorkonzentration in DMSO präpariert um zu gewährleisten, daß die DMSO-Konzentration < 0.5% war. Die Kontrollen (ohne Inhibitor, 100% Aktivität) wurden mit der entsprechenden Menge DMSO durchgeführt.This test (epoxidation of 7,8-diol-B [a] P) serves to demonstrate the terminal epoxidation during activation of B [a] P to the B [a] P-diolepoxides 1 and 2 (DE1 and DE2), whereby DE2 is the ultimate carcinogenic metabolite that leads to cancerogenesis through DNA adduct formation. The 7,8-diol-B [a] P epoxidation was detected by HPLC separation and spectrophotometric detection of the products in accordance with published methodology (Yang et al., In Cancer Res. 35 (1975) 3642-3650; Schwarz et al. , in Carcinogenesis 22 (2001) 453-459), except for the use of a reconstituted enzyme system consisting of the purified enzymes (CYP1A1 and P450 reductase) and lipid (DLPC). The reconstituted system, consisting of 200 pmol purified CYP1A1 (28 nmol / ml), 900 pmol purified reductase (56 nmol / ml) and 0.5 mg DLPC (5 mg / ml), was dissolved in 200 μl buffer (50 mM Tris / HCl, 100 mM NaCl, pH 7.5) incubated on ice for 10 min. For the test, 10 μl aliquots of this enzyme-lipid mix (corresponding to 10 pmol CYP1A1) per reaction with the substrate 7,8-diol-B [a] P (final concentration: 2 μM) and the corresponding inhibitor concentration in 200 μl buffer incubated, then diluted to 990 μl and preincubated again at 37 ° C. for 1 min. The reaction was started by adding 10 μl of NADPH (16.6 mg / 200 μl) and carried out in a water bath at 37 ° C. for 15 min. The reaction was then stopped by adding 100 μl of 1M K-phosphate buffer (pH 3.5) and the suspension was left for hydrolysis at 4 ° C. for 1 h. After addition of 10 μg of 1,1'-bi-2-naphthol (10 μg / 10 μl of methanol) as an internal HPLC standard, the products and substrate were extracted twice using ethyl acetate. After evaporation of the solvent, the product and substrate were taken up in 100 μl of methanol, homogenized in an ultrasonic bath and injected into the HPLC system. For the IC 50 and kinetic studies, stock solutions with a suitable inhibitor concentration in DMSO were prepared to ensure that the DMSO concentration was <0.5%. The controls (without inhibitor, 100% activity) were carried out with the appropriate amount of DMSO.
Trennung und Identifizierung der Produkte und ihre Analyse wurden mittels 'Reversed-Phase'-HPLC nach der durch Schwarz et al., in Carcinogenesis 22 (2001) 453–459 und Shou et al. in Mol. Carcinogenesis 10 (1994) 159–168) publizierten Methodik durchgeführt. Obwohl beide Diolepoxide DE1 und DE2) als Produkte analysiert wurden, beziehen sich alle in der vorliegenden Arbeit aufgeführten und diskutierten Aktivitäten und Bildungsraten, einschließlich der kinetischen Analysen, auf DE2, da es das ultimativ cancerogene Produkt darstellt und mit einer erheblich größeren Rate als DE1 gebildet wird.Separation and identification of the Products and their analysis were carried out using reversed-phase HPLC according to the method described by Schwarz et al., in Carcinogenesis 22 (2001) 453-459 and Shou et al. in Mol. Carcinogenesis 10 (1994) 159-168) Methodology performed. Although both diol epoxides DE1 and DE2) were analyzed as products, relate to all those listed and discussed in the present work activities and education rates, including of kinetic analysis, on DE2, as it is the ultimate carcinogenic Product represents and is formed at a significantly higher rate than DE1 becomes.
Beispiel 2Example 2
Durchführung des AHH-TestsImplementation of the AHH tests
Dieser Test (Aryl Hydrocarbon Hydroxylation,
AHH) ist ein Assay zur Quantifizierung der CYP1A1-katalysierten
Hydroxylierung von B[a]P zu 3-OH-B[a]P. Die Reaktion charakterisiert
den Entgiftungsweg (vgl.
Beispiel 3Example 3
Durchführung des EROD-TestsImplementation of the EROD tests
Dieser Test (7-Ethoxyresorufin-O-Deethylierung, EROD) ist der bekannte Standard-Assay zur Charakterisierung der Aktivität von CYP1A1, der die Umsetzung des Substrates zu Resorufin mit Hilfe der Fluoreszenzspektroskopie misst (Burke und Mayer in Chem. Biol. Int. 45 (1983) 243–258). Das rekonstituierte CYP1A1-System wurde wie unter Beispiel 1 beschrieben präpariert. 10 μl-Aligote (entsprechend 10 pmol CYP1A1) wurden mit dem Substrat (Endkonzentration: 0.5 μM) und der entsprechenden Inhibitorkonzentration in 200 μl inkubiert, auf 790 μl verdünnt und 1 min bei 37 °C präinkubiert, bevor die Reaktion durch Zugabe von 10 μl NADPH gestartet wurde. Nach 15 min bei 37 °C wurde die Reaktion durch Zugabe von 1,5 ml Aceton (kalt) gestoppt. Danach wurde die Suspension 5 min bei 3000 U/min zentrifugiert und das gebildete Produkt Resorufin durch Messung seiner Fluoreszenz nachgewiesen (Anregung: 530 nm, Emission: 585 nm). Die Quantifizierung erfolgte mittels einer Eichkurve, die unter den gleichen Bedingungen mit authentischem Resorufin erstellt wurde.This test (7-ethoxyresorufin-O-deethylation, EROD) is the well-known standard assay for the characterization of activity from CYP1A1, which helps to convert the substrate to resorufin fluorescence spectroscopy (Burke and Mayer in Chem. Biol. Int. 45 (1983) 243-258). The reconstituted CYP1A1 system was described as in Example 1 prepared. 10 ul aligote (corresponding to 10 pmol CYP1A1) were mixed with the substrate (final concentration: 0.5 μM) and the corresponding inhibitor concentration in 200 μl, to 790 μl diluted and 1 min at 37 ° C preincubated before the reaction was started by adding 10 μl of NADPH. To 15 min at 37 ° C the reaction was stopped by adding 1.5 ml acetone (cold). The suspension was then centrifuged at 3000 rpm for 5 min and the product resorufin formed by measuring its fluorescence detected (excitation: 530 nm, emission: 585 nm). The quantification was carried out using a calibration curve under the same conditions was created with authentic resorufin.
Beispiel 4Example 4
Bestimmung der IC50-Werte, Bestimmung der Hemmungskonstanten für Hypericin und QuercetinDetermination of the IC 50 values, determination of the inhibition constants for hypericin and quercetin
Für die Bestimmung der IC50-Werte wurden die Aktivitäten (z.B. die Bildungsrate von DE2) in Abhängigkeit von der Inhibitorkonzentration, wie in Beispiel 1–3 beschrieben, gemessen. Die gemessenen Aktivitäten wurden auf die Kontrollaktivität (100%) in Abwesenheit des Inhibitors bezogen. Danach erfolgte die Bestimmung des IC50-Wertes durch lineare Regression der prozentualen Aktivitäten vs. der logarithmisch transformierten Inhibitorkonzentrationen. Die Bestimmung der Hemmkonstanten für Hypericin und Quercetin erfolgte durch Analyse der Inhibitorkinetik, d.h. durch Messungen der Enzymkinetik für verschiedene Inhibitorkonzentrationen. Für Hypericin wurde die Analysen mit einer Substratkonzentration von 2 μM für vier Inhibitorkonzentrationen durchgeführt (0, 1, 2 und 5 μM). Für Quercetin erfolgten die Messungen bei der gleichen Substratkonzentration für folgende Inhibitorkonzentrationen: 0, 1, 5 und 10 μM. Danach wurden die Umsatzraten zunächst durch Lineweaver-Burk-Plots analysiert und der Typ der Inhibierung bestimmt (kompetitiv, nicht kompetitiv, unkompetitiv oder Mischtyp), ehe die kinetischen Konstanten, einschließlich der Hemmkonstanten Ki, durch nichtlineare Regression mittels SIGMA-PLOT-2001 und ENZYME-KINETICS-Modul 1.1 (Software von SPSS Science Software, Erkrath, BR Deutschland) bestimmt wurden.For the determination of the IC 50 values, the activities (for example the rate of DE2 formation) were measured as a function of the inhibitor concentration, as described in Examples 1-3. The activities measured were based on the control activity (100%) in the absence of the inhibitor. The IC 50 value was then determined by linear regression of the percentage activities vs. the logarithmically transformed inhibitor concentrations. The inhibition constants for hypericin and quercetin were determined by analyzing the inhibitor kinetics, ie by measuring the enzyme kinetics for different inhibitor concentrations. For hypericin, the analyzes were carried out with a substrate concentration of 2 μM for four inhibitor concentrations (0, 1, 2 and 5 μM). For quercetin, the measurements were carried out at the same substrate concentration for the following inhibitor concentrations: 0, 1, 5 and 10 μM. After that, the conversion rates were first analyzed by Lineweaver-Burk plots and the type of inhibition (competitive, non-competitive, uncompetitive or mixed type) before the kinetic constants, including the inhibition constants K i , by non-linear regression using SIGMA-PLOT-2001 and ENZYME KINETICS module 1.1 (software from SPSS Science Software, Erkrath, BR Germany).
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WO2001056558A1 (en) * | 2000-01-31 | 2001-08-09 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Polycyclic dianthraquinones as anti-cancer and anti-angiogenic agents |
DE10062813A1 (en) * | 2000-12-18 | 2002-07-11 | Katharina Kern | Nutritional supplement based on migroalgae, also containing medicinal plant to give stronger and more targeted action, e.g. in improving general health or improving blood flow |
Family Cites Families (2)
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---|---|---|---|---|
US6174542B1 (en) * | 1999-07-01 | 2001-01-16 | Pms Mood Food, Inc. | Dietary supplements and food products for treating symptoms of PMS |
AT408835B8 (en) * | 2000-05-23 | 2002-07-25 | Andreas Dipl Ing Dr Kubin | PREPARATION OF HYPERICIN TIED TO POLYVINYLPYRROLIDONE (PVP) DIFFERENT GRADES OF POLYMERIZATION AND CROSSLINKING |
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Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2001056558A1 (en) * | 2000-01-31 | 2001-08-09 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Polycyclic dianthraquinones as anti-cancer and anti-angiogenic agents |
DE10062813A1 (en) * | 2000-12-18 | 2002-07-11 | Katharina Kern | Nutritional supplement based on migroalgae, also containing medicinal plant to give stronger and more targeted action, e.g. in improving general health or improving blood flow |
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