DE10234201A1

DE10234201A1 - Treatment of neuroendocrine or gastrointestinal tumors, using agents taken up by the monoamine transporter or benzodiazepine receptor

Info

Publication number: DE10234201A1
Application number: DE2002134201
Authority: DE
Inventors: Hans Dr.med. Scherübl
Original assignee: Freie Universitaet Berlin
Current assignee: Freie Universitaet Berlin
Priority date: 2002-07-26
Filing date: 2002-07-26
Publication date: 2004-02-12

Abstract

Use of a composition (A) containing at least one active agent (I) that is taken up by a monoamine transporter (MAT) for treatment of neuroendocrine tumors or other tumors that express MAT. Independent claims are also included for: (1) use of a composition (A1) containing at least one active agent (II) that interacts with the peripheral benzodiazepine receptor (BDAR) and/or the nucleic acid that encodes BDAR, for treatment and diagnosis of gastrointestinal tumors, especially of esophagus, stomach, pancreas, bile duct, large or small intestines, and/or lymphoma; and (2) a kit that contains at least one (A) or (A1).

Description

Im Gegensatz zu anderen peripheren Geweben besitzen neuroendokrine, gastrointestinale Tumoren die Fähigkeit, spezifisch Monoamine aufzunehmen, diese zu dekarboxylieren und in großen Mengen zu speichern. Die unkontrollierte Abgabe von Peptidhormonen und Monoaminen, die in sekretorischen Vesikeln gespeichert sind, verursachen die klinischen hypersekretorischen Syndrome dieser Tumoren (Scherübl H., Buhr H.J., Faiss S., Zimmer T., Riecken E.O., Wiedenmann B.; Neuroendocrine tumors of the gastroenteropancreatic system. Di agnostic and therapeutic advances. Onkologie 1996; 19:119-124 und 214-219. Wiedenmann B., John M., Ahnert-Hilger G., Riecken E.O.; Molecular and cell biological aspects of neuroendocrine tumors of the gastroenteropancreatic system. J. Mol. Med. 1998; 76: 637-673. Arnold R., Simon B., Wied M.; Treatment of neuroendocrine GEP tumors with somatostatin analogues – a review. Digestion 2000; 62: 84-92.). Obwohl die hypersekretorischen Syndrome durch eine Therapie mit Somatostatin oder α-Interferon wirksam kontrolliert werden können, ist bisher die pharmakologische cytoreduktive Therapie von neuroendokrinen, gastrointestinalen Tumoren unbefriedigend.Unlike other peripheral ones Tissues have neuroendocrine, gastrointestinal tumors the ability specifically to take up monoamines, to decarboxylate them and in huge Save quantities. The uncontrolled release of peptide hormones and monoamines stored in secretory vesicles, cause the clinical hypersecretory syndromes of these tumors (Scherübl H., Buhr H.J., Faiss S., Zimmer T., Riecken E.O., Wiedenmann B .; Neuroendocrine tumors of the gastroenteropancreatic system. Di agnostic and therapeutic advances. Oncology 1996; 19: 119-124 and 214-219. Wiedenmann B., John M., Ahnert-Hilger G., Riecken E.O .; Molecular and cell biological aspects of neuroendocrine tumors of the gastroenteropancreatic system. J. Mol. Med. 1998; 76: 637-673. Arnold R., Simon B., Wied M .; Treatment of neuroendocrine GEP tumors with somatostatin analogues - a review. Digestion 2000; 62: 84-92.). Although the hypersecretory syndromes through therapy with somatostatin or α-interferon can be effectively controlled is the pharmacological cytoreductive therapy of neuroendocrine, gastrointestinal tumors unsatisfactory.

In diesem Zusammenhang bietet die Spezifität und Ausschließlichkeit der Aufnahme von Monoaminen durch neuroendokrine, gastrointestinale Tumoren (Eriksson B., Bergstrom M., Orlefors H., Sundin A., Oberg K., Landstrom B.; Use of PET in neuroendocrine tumors. In vivo applications and in vitro studies. Q. J. Nucl. Med. 2000; 44: 68-76) in Form der Monoamin-Transporter vielversprechende und spezifische Zielproteine. Meta-Iodobenzylguanidin (MIBG) wird als strukturelles Norepinephrin-Analogon in Geweben neuroendokrinen Ursprungs aufgenommen und akkumuliert (Wieland D.M., Wu J.I, Brown L.W., Magner T.J., Swanson D.P., Beierwaltes W.H.; Radio-labelled adrenergic neuron-blocking agents: adrenomedullary imaging with [¹³¹I]-meta-iodobenzylguanidine. J. Nucl. Med. 1980;21: 349-353.). In seiner radioaktiv-iodierten Form wird MIBG vielfach verwendet, um einerseits neuroendokrine Tumorkrankheiten zu lokalisieren und andererseits dieselben pallitativ zu behandeln (Hoefnagel C.A., Voute P.A., de Kraker J., Marcuse H.R.; Radionuclide diagnosis and therapy of neural-crest tumors using¹³¹I-meta-iodobenzylguanidine. J. Nucl. Med. 1987; 28: 308-314. Taal B.G., Hoefnagel C.A., Rutgers M.; Carcinoid tumors. N. Engl. J. Med. 1999; 341: 545-555. Taal B.G., Hoefnagel C.A., Boot H., Olmos Valdes RAV, Rutgers M.; Improved effect of [¹³¹I]-MIBG treatment by predosing with non-radiolabled MIBG in carcinoid patients, and studies in xenografted mice. Ann. Oncol. 2000; 11: 1437-1443). MIBG ist daher als wichtiger radio-pharmazeutischer Wirkstoff bekannt. Vor kurzem ist entdeckt worden, daß nicht-radioaktives MIBG die Tumorkrankheit von Karzinoidpatienten stabilisiert, die nicht auf eine Behandlung mit Somatostatinen reagiert haben (Taal B.G., Hoefnagel C.A., Olmos Valdes RAV, Boot H., Beijnen J.H.; Palliative effect of meta-iodobenzylguanidine in meta static carcinoid tumors. J. Clin. Oncol. 1996; 14: 1829-1838. Zuetenhorst H., Taal B., Boot H., Valdes Olmos R., Hoefnagel C.; Long-term palliation in metastatic carcinoid tumors with various applications of meta-iodobenzylguanidine (MIBG): pharmacological MIBG, ¹³¹I-labelled MIBG and the combination. Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. 1999; 11: 1157-1164.). Die biologischen Effekte von MIBG werden vermutlich durch dessen Cytotoxizität verursacht und sind u.a. auf die Inhibierung der mitochondrialen Atmungskette, die zu einem Zusammenbruch der ATP-Synthese führt, zurückzuführen. Die für eine optimale Inhibition der Zellproliferation notwendigen MIBG-Konzentrationen sind viel höher, als diejenigen, die notwendig sind, um die ATP-Synthese vollständig zu inhibieren. Das läßt vermuten, daß die antineoplastischen Effekte des MIBG auf weitere zusätzliche Mechanismen zurückzuführen sind.In this context, the specificity and exclusivity of the uptake of monoamines by neuroendocrine, gastrointestinal tumors (Eriksson B., Bergstrom M., Orlefors H., Sundin A., Oberg K., Landstrom B .; Use of PET in neuroendocrine tumors. In vivo applications and in vitro studies. QJ Nucl. Med. 2000; 44: 68-76) in the form of the monoamine transporter promising and specific target proteins. Meta-iodobenzylguanidine (MIBG) is taken up and accumulated as a structural norepinephrine analogue in tissues of neuroendocrine origin (Wieland DM, Wu JI, Brown LW, Magner TJ, Swanson DP, Beierwaltes WH; radio-labeled adrenergic neuron-blocking agent imaging: adrenomed [ ¹³¹ I] -meta-iodobenzylguanidine. J. Nucl. Med. 1980; 21: 349-353.). In its radioactive iodine form, MIBG is widely used to localize neuroendocrine tumor diseases on the one hand and to treat the same pallitatively on the other hand (Hoefnagel CA, Voute PA, de Kraker J., Marcuse HR; Radionuclide diagnosis and therapy of neural-crest tumors using ¹³¹ I -meta-iodobenzylguanidine. J. Nucl. Med. 1987; 28: 308-314. Taal BG, Hoefnagel CA, Rutgers M .; Carcinoid tumors. N. Engl. J. Med. 1999; 341: 545-555. Taal BG , Hoefnagel CA, Boot H., Olmos Valdes RAV, Rutgers M .; Improved effect of [ ¹³¹ I] -MIBG treatment by predosing with non-radiolabled MIBG in carcinoid patients, and studies in xenografted mice. Ann. Oncol. 2000; 11 : 1437-1443). MIBG is therefore known as an important radio-pharmaceutical active ingredient. It has recently been discovered that non-radioactive MIBG stabilizes the tumor disease of carcinoid patients who have not responded to treatment with somatostatins (Taal BG, Hoefnagel CA, Olmos Valdes RAV, Boot H., Beijnen JH; Palliative effect of meta-iodobenzylguanidine in meta static carcinoid tumors. J. Clin. Oncol. 1996; 14: 1829-1838. Zuetenhorst H., Taal B., Boot H., Valdes Olmos R., Hoefnagel C .; Long-term palliation in metastatic carcinoid tumors with various applications of meta-iodobenzylguanidine (MIBG): pharmacological MIBG, ¹³¹ I-labeled MIBG and the combination. Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. 1999; 11: 1157-1164.). The biological effects of MIBG are presumably caused by its cytotoxicity and are due, among other things, to the inhibition of the mitochondrial respiratory chain, which leads to a breakdown in ATP synthesis. The MIBG concentrations required for optimal inhibition of cell proliferation are much higher than those necessary to completely inhibit ATP synthesis. This suggests that the antineoplastic effects of the MIBG can be attributed to additional mechanisms.

Kolorektale Karzinome sind die zweithäufigste Ursache für den Krebstod in westlichen Ländern. Die Prognose für kolorektale Karzinome hängt eng mit dem Tumorstadium zusammen. Selbst die TNM-Klassifikation (UICC I-IV) stellt die Prognosen aber nur in einem relativ breiten Bereich. Somit werden zusätzliche prognostische Marker benötigt, um die Überlebensraten der Patienten genauer angeben zu können. Der periphere Benzodiazepinrezeptor (PBR) ist bereits mit Tumorwachstum in Verbindung gebracht worden (Beurdeley-Thomas A., Miccoli L., Oudard S., et al.; The peripheral benzodiazepine receptors: a review. J. Neurooncol. 2000; 46: 45-56.). Es konnte gezeigt werden, daß die Bindung von PBR-spezifischen Liganten in verschiedenen Tumoren, z.B. bei Krebs des Darms, des Hirns, der Brust, der Ovarien und der Leber, stark steigt. PBR ist ein 18 kD-Protein, hauptsächlich an der äußeren mitochondrialen Membran lokalisiert, ist aber auch in der Plasmamembran und perinukleären Regionen gefunden worden (Beurdeley-Thomas A., Miccoli L., Oudard S., et al.; The peripheral benzodiazepine receptors: a review. J. Neurooncol. 2000; 46: 45-56.). Beinah alle Gewebe exprimieren PBR, obwohl festzuhalten ist, daß der Grad der Expression stark variiert. Der Grad der PBR-Expression ist insbesondere bei Organen hoch, die in der Steroidgenese involviert sind, liegt aber in der normalen Darmschleimhaut auf einem niedrigen Niveau (Gavish M., Katz Y., Bar-Ami S., et al. Biochemical, physiological, and pathological aspects of the peripheral benzodiazepine receptor. J. Neurochem. 1992; 58: 1589-601). Obwohl die Funktionen des PBR bisher nicht vollständig verstanden worden sind, gibt es gute Hinweise darauf, das er in der Steroidbiosynthese involviert ist. Des weiteren spielt er eine wichtige Rolle bei der Proliferation von Krebszellen (Hardwick M., Fertikh D., Culty M., et al.; Peripheral-type benzodiazepine receptor (PBR) in human breast cancer: correlation of breast cancer cell aggresive phenotype with PBR expression, nuclear localization, and PBR-mediated cell proliferation and nuclear transport of cholesterol. Cancer Res. 1999; 59: 831-42. Carmel I., Fares F.A.., Leschiner S., et al.; Peripheral-type benzodiazepine receptors in the regulation of proliferation of MCF-7 human breast carcinoma cell line. Biochem. Pharmacol. 1999; 58: 273-8. Beinlich A., Strohmeier R., Kaufmann M., et al.; Relation of cell proliferation to expression of peripheral benzodiazepine receptors in human breast cancer cell lines. Biochem. Pharmacol. 2000; 60: 397-402. Landau M., Weizmann A., Zoref-Shani E., et al. Antiproliferative and differentiating effects of benzodiazepine receptor ligands on B16 melanoma cells. Biochem. Pharmacol. 1998; 56: 1029-34. Ikezaki K., Black K.L.; Stimulation of cell growth and DNA synthesis by peripheral benzodiazepine. Cancer Lett. 1990; 49: 115-20). Trotz seiner Überexpression und seiner immensen Bedeutung bei der Regulation von kolorektalem Krebswachstum, ist der PBR bisher nicht auf seinen möglichen prognostischen Wert hin untersucht worden.Colorectal cancer is the second leading cause of cancer death in western countries. The prognosis for colorectal cancer is closely related to the tumor stage. Even the TNM classification (UICC I-IV) only makes the forecasts in a relatively broad range. Additional prognostic markers are therefore required in order to be able to specify the survival rates of the patients more precisely. The peripheral benzodiazepine receptor (PBR) has already been associated with tumor growth (Beurdeley-Thomas A., Miccoli L., Oudard S., et al .; The peripheral benzodiazepine receptors: a review. J. Neurooncol. 2000; 46: 45 -56.). It could be shown that the binding of PBR-specific ligands in various tumors, for example cancer of the intestine, brain, breast, ovaries and liver, increases significantly. PBR is an 18 kD protein, mainly located on the outer mitochondrial membrane, but has also been found in the plasma membrane and perinuclear regions (Beurdeley-Thomas A., Miccoli L., Oudard S., et al .; The peripheral benzodiazepine receptors : a review. J. Neurooncol. 2000; 46: 45-56.). Almost all tissues express PBR, although it should be noted that the level of expression varies widely. The level of PBR expression is particularly high in organs that are involved in steroid genesis, but is low in the normal intestinal mucosa (Gavish M., Katz Y., Bar-Ami S., et al. Biochemical, physiological , and pathological aspects of the peripheral benzodiazepine receptor. J. Neurochem. 1992; 58: 1589-601). Although the functions of the PBR have not yet been fully understood, there is good evidence that it is involved in steroid biosynthesis. Furthermore, it plays an important role in the proliferation of cancer cells (Hardwick M., Fertikh D., Culty M., et al .; Peripheral-type benzodiazepine receptor (PBR) in human breast cancer: correlation of breast cancer cell aggresive phenotype with PBR expression, nuclear localization, and PBR-mediated cell proliferation and nuclear transport of cholesterol. Cancer Res. 1999; 59: 831-42. Carmel I., Fares FA., Leschiner S., et al .; Peripheral-type benzodiazepine receptors in the regulation of proliferation of MCF-7 human breast carcinoma cell line. Biochem. Pharmacol. 1999; 58: 273-8. Beinlich A., Strohmeier R., Kaufmann M., et al .; Relation of cell proliferation to expression of peripheral benzodiazepine receptors in human breast cancer cell lines. Biochem. Pharmacol. 2000; 60: 397-402. Landau M., Weizmann A., Zoref-Shani E., et al. Antiproliferative and differentiating effects of benzodiazepine receptor ligands on B16 melanoma cells. Biochem. Pharmacol. 1998; 56: 1029-34. Ikezaki K., Black KL; Stimulation of cell growth and DNA synthesis by peripheral benzodiazepines. Cancer Lett. 1990; 49: 115-20). Despite its overexpression and its immense importance in the regulation of colorectal cancer growth, the PBR has not been examined for its possible prognostic value.

Sowohl die Therapie von fortgeschrittenen, gastrointestinalen Tumoren, als auch die Therapie von fortgeschrittenen, neuroendokrinen Tumoren ist heutzutage unbefriedigend. Neben fehlenden kurativen Therapieoptionen der meisten gastrointestinalen und neuroendokrinen Tumoren, haben die palliativ eingesetzten Therapien, wie systemische Chemotherapie, Biotherapie, Immuntherapie, aber auch lokale Strahlentherapie, den großen Nachteil, nicht tumorspezifisch zu wirken und führen deshalb durch ihre Nebenwirkungen auch zur Zerstörung oder Schädigung nicht-entarteter, gesunder Zellen und Gewebe. Es besteht daher ein großer Bedarf an Tumorzell-spezifischen Diagnostik- und Therapieansätzen bei gastrointestinalen Tumoren und ein Bedarf an Tumorzell-spezifischen Therapieansätzen bei neuroendokrinen Tumoren.Both the therapy of advanced, gastrointestinal tumors, as well as the therapy of advanced, Neuroendocrine tumors are unsatisfactory these days. In addition to missing curative therapy options for most gastrointestinal and neuroendocrine Tumors have palliative therapies, such as systemic Chemotherapy, biotherapy, immunotherapy, but also local radiation therapy, the big one Disadvantage of not being tumor-specific and therefore lead to their side effects also for destruction or injury undegenerated, healthy cells and tissues. There is therefore a greater Need for tumor cell-specific diagnostic and therapeutic approaches gastrointestinal tumors and a need for tumor cell-specific therapies in neuroendocrine tumors.

Diese Probleme des Standes der Technik werden durch die Verwendung einer Zusammensetzung, die mindestens einen Wirkstoff umfaßt, der über einen Monoamintransporter aufgenommen wird, zur Behandlung neuroendokriner Tumoren, gelöst.These problems of the prior art are achieved by using a composition that is at least comprises an active ingredient, the over a monoamine transporter is used to treat neuroendocrine Tumors, resolved.

Bevorzugt ist der Wirkstoff mindestens ein Monoamin und/oder ein Derivat/Analogon desselben.The active ingredient is preferably at least a monoamine and / or a derivative / analog thereof.

Ganz besonders bevorzugt umfaßt das Monoamin ausgewählt aus der Gruppe, die Meta-Iodobenzylguanidin, Noradrenalin, Serotonin, Dopamin und/oder Derivate/Analoga derselben umfaßt.The monoamine very particularly preferably comprises selected from the group called meta-iodobenzylguanidine, Norepinephrine, serotonin, dopamine and / or derivatives / analogues thereof includes.

Besonders bevorzugt ist der Wirkstoff mindestens ein Monoamin und/oder ein Derivat/Analogon desselben und mindestens ein Zytokin und/oder Somatostatin.The active ingredient is particularly preferred at least one monoamine and / or a derivative / analogue thereof and at least one cytokine and / or somatostatin.

Insbesondere ist das bevorzugte Zytokin ein Interferon.In particular, the preferred cytokine an interferon.

In einer bevorzugten Ausführungsform ist das Monoamin mit einem Radionuklid und/oder einem Toxin und/oder einem Chemotherapeutikum und/oder einem Vakzin verbunden.In a preferred embodiment is the monoamine with a radionuclide and / or a toxin and / or associated with a chemotherapy drug and / or a vaccine.

Bevorzugt umfaßt die Zusammensetzung pharmazeutisch akzeptable Träger und/oder pharmazeutisch akzeptable Salze. Pharmazeutisch akzeptable Träger und Salze sind zur Herstellung entsprechender Produkte im Stand der Technik wohl bekannt.Preferably the composition comprises pharmaceutical acceptable carrier and / or pharmaceutically acceptable salts. Pharmaceutically acceptable carrier and salts are in the stand for the production of corresponding products well known in the art.

In einer besonders bevorzugten Ausführungsform umfaßt der Monamintransporter die Sequenz, die ausgewählt ist aus der Gruppe, die SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2 und SEQ ID NO:3 umfaßt.In a particularly preferred embodiment comprises the monamine transporter is the sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 and SEQ ID NO: 3.

Die Aufgabe der Erfindung wird weiterhin durch eine Zusammensetzung gelöst, die mindestens einen Wirkstoff umfaßt, der mit dem peripheren Benzodiazepinrezeptor und/oder einer für den Rezeptor kodierenden Nukleinsäure interagiert, zur Behandlung und Diagnose ga strointestinaler Tumoren, insbesondere Speiseröhrentumoren, Magentumoren, Bauchspeicheldrüsentumoren, Gallenwegstumoren, Dünn- und Dickdarmtumoren und/oder Lymphome.The object of the invention will continue solved by a composition which comprises at least one active ingredient which is associated with the peripheral Benzodiazepine receptor and / or a nucleic acid coding for the receptor, for the treatment and diagnosis of gastrointestinal tumors, in particular Esophageal tumors, Stomach tumors, pancreatic tumors, Biliary tract tumors, thin and colon tumors and / or lymphomas.

Bevorzugt umfaßt die Zusammensetzung zur Behandlung gastrointestinaler Tumoren weiterhin pharmazeutisch akzeptable Träger und/oder pharmazeutisch akzeptable Salze.The composition preferably comprises Treatment of gastrointestinal tumors remains pharmaceutically acceptable carrier and / or pharmaceutically acceptable salts.

In einer bevorzugten Ausführungsform ist der Wirkstoff aus einer Gruppe ausgewählt, die ein Ribozym, ein Antisense-Oligonukleotid, einen Antagonisten, einen Liganden und/oder einen Antikörper umfaßt. Antisense-Oligonukleotide können von einem Durchschnittsfachmann unter Zuhilfenahme der Sequenz des Benzodiazepinrezeptors hergestellt werden. Die entsprechenden Sequenzen finden sich in folgender Literatur, die hiermit durch Referenz aufgenommen wird: Riond J., Mattei M.G., Kaghad M., Dumont X., Guillemot J.C., Le Fur G., Caput D. und Ferrara P.; Molecular cloning and chromosomal localization of a human peripheraltype benzodiazepine receptor. Eur. J. Biochem. 1991; 195 (2): 305-311. Chang Y.J., McCabe R.T., Rennert H., Budarf M.L., Sayegh R., Emanuel B.S., Skolnick P. und Strauss J.F. III.; The human "peripheral-type" benzodiazepine receptor: regional mapping of the gene and characterization of the receptor expressed from cDNA. DNA Cell Biol. 1992; 11 (6): 471-480. Lin D., Chang Y.J., Strauss J.F. III und Miller W.L.; The human peripheral benzodiazepine receptor gene: cloning and characterization of alternative splicing in normal tissues and in a patient with congenital lipoid adrenal hyperplasia. Genomics 1993; 18 (3): 643-650. Yakovlev A.G., Ruffo M., Jurka J. und Krueger K.E.; Comparison of repetitive elements in the third intron of human and rodent mitochondrial benzodiazepine receptor-encoding genes. Gene 1995; 155 (2): 201-205. Weiterhin ist die Sequenz des humanen Rezeptors in den SEQ ID NO:4 dargestellt.In a preferred embodiment the active ingredient is selected from a group consisting of a ribozyme, an antisense oligonucleotide, an antagonist, a ligand and / or an antibody. Antisense oligonucleotides can by one of ordinary skill in the art using the sequence of Benzodiazepine receptor. The corresponding sequences can be found in the following literature, which is hereby incorporated by reference will: Riond J., Mattei M.G., Kaghad M., Dumont X., Guillemot J.C., Le Fur G., Caput D. and Ferrara P .; Molecular cloning and chromosomal localization of a human peripheral type benzodiazepine receptor. Eur. J. Biochem. 1991; 195 (2): 305-311. Chang Y.J., McCabe R.T., Rennert H., Budarf M.L., Sayegh R., Emanuel B.S., Skolnick P. and Strauss J.F. III .; The human "peripheral-type" benzodiazepine receptor: regional mapping of the gene and characterization of the receptor expressed from cDNA. DNA Cell Biol. 1992; 11 (6): 471-480. Lin D., Chang Y.J., Strauss J.F. III and Miller W.L .; The human peripheral benzodiazepine receptor gene: cloning and characterization of alternative splicing in normal tissues and in a patient with congenital lipoid adrenal hyperplasia. Genomics 1993; 18 (3): 643-650. Yakovlev A.G., Ruffo M., Jurka J. and Krueger K.E .; Comparison of repetitive elements in the third intron of human and rodent mitochondrial benzodiazepines receptor-encoding genes. Gene 1995; 155 (2): 201-205. Farther the sequence of the human receptor is shown in SEQ ID NO: 4.

In einer besonders bevorzugten Ausführungsform ist der Wirkstoff mit einem Radionuklid und/oder einem Toxin und/oder einem Chemotherapeutikum und/einer Vakzin verbunden.In a particularly preferred embodiment is the active ingredient with a radionuclide and / or a toxin and / or associated with a chemotherapy drug and / or a vaccine.

Alternativ ist der Wirkstoff zum diagnostischen Nachweis gastrointestinaler Tumoren geeignet.Alternatively, the active ingredient is diagnostic evidence of gastrointestinal tumors.

In einer bevorzugten Ausführungsform umfaßt der Benzodiazepinrezeptor die SEQ ID NO:4.In a preferred embodiment comprises the benzodiazepine receptor is SEQ ID NO: 4.

Bevorzugt ist ein Kit, der mindestens eine Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 9-14 umfaßt. Weiterhin ist ein Kit bevorzugt, der eine Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1-8 umfaßt. Alternativ enthalten die Kits nach einem der Ansprüche 15-16 weiterhin Informationsmaterial zur Verwendung der Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 9-14 und 1-8.A kit that has at least one is preferred a composition according to any one of claims 9-14. Farther a kit is preferred which comprises a composition according to any one of claims 1-8 includes. Alternatively, the kits according to any one of claims 15-16 further information material on the use of the composition according to one of the claims 9-14 and 1-8.

Unter dem Begriff „andere Tumoren" sollen Tumoren verstanden werden, die keine neuroendokrinen Tumoren sind, aber dennoch Monoamintransporter exprimieren. Diese Expression wird vorzugsweise durch die Expression eines geeigneten Nukleinsäure-Abschnitts in den entsprechenden Tumorzellen erreicht. Dabei sind sowohl stabile als auch transiente Expressionen möglich. Durch einen gezielten molekularbiologischen Eingriff in Tumorzellen, die auf natürliche Weise keine oder nur geringere Mengen an Monoamintransportern exprimieren, kann damit eine Möglichkeit geschaffen werden, Monoamintransporter in einer ausreichenden Menge zur Verfügung zu stellen, die eine Behandlung der entsprechenden Tumoren mit einer Zusammensetzung nach der vorliegenden Erfindung ermöglicht. Der molekularbiologische Eingriff kann sich sowohl auf eine komplette Nukleinsäure des Monoamintransporters, als auch auf Teilabschnitte beziehen, die einen entsprechenden Einsatz der Zusammensetzungen nach der Erfindung ermöglicht. Neben den in den SEQ ID NO:1-3 dargestellten Sequenzen sind auch Sequenzen oder deren Teilbereiche von Transportern anderer Tierspezies umfaßt, wobei Säugetiersequenzen besonders bevorzugt sind. Die Expression der Transporter kann durch Verfahren erreicht werden, wie sie für eine auf dem Sachgebiet arbeitende Durchschnittsfachperson bekannt sind. Damit sind geeignete Promotorsequenzen, Vektoren, Terminationssequenzen, Marker-Nukleinsäuren und Enhancer umfaßt. Weiterhin sind Squenzveränderungen der Monoamintransporter denkbar, die von den publizierten Sequenzen abweichen, aber dennoch zur Durchführung der vorliegenden Erfindung vorteilhaft sind.Under the term “other Tumors "are to be understood as tumors that are not neuroendocrine tumors are, but still express monoamine transporters. This expression is preferably by the expression of a suitable nucleic acid segment reached in the corresponding tumor cells. Both are stable as well as transient expressions possible. Through a targeted molecular biological intervention in tumor cells that occur naturally express no or only small amounts of monoamine transporters, can be a possibility be created, monoamine transporters in sufficient quantities to disposal to provide treatment of the corresponding tumors with a Composition according to the present invention enables. The molecular biological intervention can be a complete one nucleic acid of the monoamine transporter, as well as refer to sections, a corresponding use of the compositions according to the Invention enables. In addition to the sequences shown in SEQ ID NO: 1-3 Sequences or their sub-areas of transporters of other animal species, wherein mammalian sequences are particularly preferred. Expression of the transporter can be by method be achieved as for an average specialist working in the field is known. Suitable promoter sequences, vectors, termination sequences, Marker nucleic acids and Enhancer includes. There are also sequence changes the monoamine transporter conceivable from the published sequences deviate, but still to implement the present invention are advantageous.

Zur zielgerichteten Aufnahme von Monoaminen und ihren Derivaten oder Analoga ist eine Zusammensetzung nach der Erfindung besonders vorteilhaft. Es ergibt sich die Möglichkeit, gastrointestinale Tumoren zu bekämpfen, die entsprechende Rezeptoren in ausreichender Menge auf ihren Zelloberflächen präsentieren als auch gezielt gegen Tumoren vorzugehen, die zuvor mit molekularbiologischen Methoden so verändert worden sind, daß eine Behandlung mit einer Zusammenseztung nach der Erfindung möglich wird. Die Bekämpfung der Tumoren findet so zielgerichtet statt, daß das gesunde Gewebe weitgehend unbeeinträchtigt bleibt. Diesen Vorteil bieten andere Krebsbehandlungsverfahren nicht. In dem vorliegenden Verfahren werden neben den Monoaminen auch Derivate und Analoga eingesetzt, die an sich toxisch sein können oder die entsprechenden Monoamine werden mit anderen Substanzen gekoppelt, z.B. mit Chemotherapeutika, Radionukliden, Vakzinen und/oder anderen toxischen Substanzen, die nach Eindringen oder Andocken des Monoamins an den Transporter zu einem Abtöten der Zielzelle führen. Der Zusammensetzung nach der Erfindung können weiterhin andere pharmazeutisch wirksame Substanzen zugesetzt werden, die auf der einen Seite die Wirkweise der Zusammensetzung bei der Bekämpfung von Tumoren unterstützen und andererseits auch anderweitige positive therapeutische Einflüsse haben können. Hierunter fallen insbesondere Vakzine und Zytokine. Die entsprechenden Sequenze der Transporter sind in folgender Literatur zitiert, die hiermit durch Refernz aufgenommen wird: Vandenbergh, D.J., Persico, A.M. und Uhl, G.R.; A human dopamine transporter cDNA predicts reduced glycosylation, displays a novel repetitive element and provides racially-dimorphic TagI RFLPs. Brain Res. Mol. Brain Res. 15 (1-2), 161-166 (1992); Giros B, el Mestikawy S, Godinot N, Zheng K., Han H., Yang-Feng T. und Caron M.G.; Cloning, pharmacological characterization, and chromosome assignment of the human dopamine transporter. Mol. Pharmacol. 42 (3), 383-390 (1992); Pristupa Z.B., Wilson J.M., Hoffman B.J., Kish S.J. und Niznik H.B.; Pharmacological heterogeneity of the cloned and native human dopamine transporter: disassociation of [3H]WIN 35,428 and [3H]GBR 12,935 binding. Mol. Pharmacol. 45 (1), 125-135 (1994); Kawarai T., Kawakami H., Yamamura Y.. und Nakamura S.; Structure and organization of the gene encoding human dopamine. Gene 195 (1), 11-18 (1997); Pacholczyk, T., Blakely, R.D. und Amara, S.G.; Expression cloning of a cocaine- and antidepressant-sensitive human noradrenaline transporter. Nature 350 (6316), 350-354 (1991); Bruss, M., Kunz, J., Lingen, B. und Bonisch, H.; Chromosomal mapping of the human gene for the tricyclic antidepressant-sensitive noradrenaline transporter. Hum. Genet. 91 (3), 278-280 (1993); Gelernter, J., Kruger, S., Pakstis, A.J., Pacholczyk, T., Sparkes, R.S., Kidd, K.K. und Amara, S.; Assignment of the norepinephrine transporter protein (NET1) locus to chromosome 16. Genomics 18 (3), 690-692 (1993); Porzgen, P., Bonisch, H. und Bruss, M.; Molecular cloning and organization of the coding region of the human norepinephrine transporter gene. Biochem. Biophys. Res. Commun. 215 (3), 1145-1150 (1995); Ramamoorthy, S., Bauman, A.L., Moore, K.R., Han, H., Yang-Feng, T., Chang, A.S., Ganapathy, V. and Blakely, R.D. Antidepressant- and cocaine-sensitive human serotonin transporter: molecular cloning, expression, and chromosomal localization. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90 (6), 2542-2546 (1993).For the targeted inclusion of Monoamines and their derivatives or analogs is a composition particularly advantageous according to the invention. There is a possibility fight gastrointestinal tumors, present the corresponding receptors in sufficient quantities on their cell surfaces as well as targeting tumors that were previously treated with molecular biology Methods so changed have been that a Treatment with a composition according to the invention is possible. The fight of the tumors takes place in such a targeted manner that the healthy tissue largely unimpaired remains. Other cancer treatment methods do not offer this advantage. In addition to the monoamines, derivatives are also used in the present process and analogues are used which can be toxic per se or the corresponding monoamines are coupled with other substances, e.g. with chemotherapy drugs, radionuclides, vaccines and / or others toxic substances after penetration or docking of the monoamine to the van to kill lead the target cell. The composition according to the invention may also be other pharmaceutical effective substances are added, which on the one hand Mode of action of the composition in the fight against tumors and support on the other hand also have other positive therapeutic influences can. This includes in particular vaccines and cytokines. The corresponding Sequences of the transporters are cited in the following literature: hereby incorporated by reference: Vandenbergh, D.J., Persico, AT THE. and Uhl, G.R .; A human dopamine transporter cDNA predicts reduced glycosylation, displays a novel repetitive element and provides racially-dimorphic TagI RFLPs. Brain Res. Mol. Brain Res. 15 (1-2), 161-166 (1992); Giros B, el Mestikawy S, Godinot N, Zheng K., Han H., Yang-Feng T. and Caron M.G .; Cloning, pharmacological characterization, and chromosome assignment of the human dopamine transporter. Mol. Pharmacol. 42 (3), 383-390 (1992); Pristupa Z.B., Wilson J.M., Hoffman B.J., Kish S.J. and Niznik H.B .; Pharmacological heterogeneity of the cloned and native human dopamine transporter: disassociation of [3H] WIN 35,428 and [3H] GBR 12,935 binding. Mol. Pharmacol. 45 (1), 125-135 (1994); Kawarai T., Kawakami H., Yamamura Y .. and Nakamura S .; Structure and organization of the gene encoding human dopamine. Gene 195 (1), 11-18 (1997); Pacholczyk, T., Blakely, R.D. and Amara, S.G .; Expression cloning of a cocaine- and antidepressant-sensitive human noradrenaline transporter. Nature 350 (6316), 350-354 (1991); Bruss, M., Kunz, J., Lingen, B. and Bonisch, H .; Chromosomal mapping of the human gene for the tricyclic antidepressant-sensitive noradrenaline transporter. Hum. Genet. 91 (3), 278-280 (1993); Gelernter, J., Kruger, S., Pakstis, A.J., Pacholczyk, T., Sparkes, R.S., Kidd, K.K. and Amara, S .; Assignment of the norepinephrine transporter protein (NET1) locus to chromosome 16. Genomics 18 (3), 690-692 (1993); Porzgen, P., Bonisch, H. and Bruss, M .; Molecular cloning and organization of the coding region of the human norepinephrine transporter gene. Biochem. Biophys. Res. Commun. 215 (3), 1145-1150 (1995); Ramamoorthy, S., Bauman, A.L., Moore, K.R., Han, H., Yang-Feng, T., Chang, A.S., Ganapathy, V. and Blakely, R.D. Antidepressant and cocaine sensitive human serotonin transporter: molecular cloning, expression, and chromosomal localization. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90 (6), 2542-2546 (1993).

Der Einsatz des Benzodiazepinrezeptors und seiner Derivate zur Bekämpfung und als prognostischer Marker gastrointestinaler Tumoren stellt eine zielgerichtete Bekämpfung der Tumoren zur Verfügung, ohne gesundes Gewebe in Mitleidenschaft zu ziehen. In diesem Fall werden Liganden, wie sie im Stand der Technik bekannt sind, eingesetzt, an die Toxizität vermittelnde Verbindungen gekoppelt sein können. Die besonders starke Expression des Rezeptors in Tumorzellen ermöglicht damit eine zielgerichtete Zerstörung der Zellen. Da nach vorliegenden Ergebnissen des Anmelders die Anzahl der vorhandenen Rezeptormoleküle pro Tumorzelle mit der Proliferation im Zusammenhang steht, hat ein Einsatz von antisense-Oligonukleotiden, der bevorzugt zu einer Verringerung der Expression des Rezeptors führt, einen negativen Einfluß auf das Tumorzellwachstum.The use of the benzodiazepine receptor and its derivatives for combating and as a prognostic marker for gastrointestinal tumors provides a targeted way of combating the tumors without affecting healthy tissue. In this case, ligands as are known in the prior art are used, to which toxicity-mediating compounds can be coupled. The special strong expression of the receptor in tumor cells thus enables targeted destruction of the cells. Since the applicant's available results indicate that the number of receptor molecules present per tumor cell is related to proliferation, the use of antisense oligonucleotides, which preferably leads to a reduction in the expression of the receptor, has a negative influence on tumor cell growth.

Beispiel 1example 1

Dieses Beispiel stellt die Wachstumsinhibition und Apoptose neuroendokriner, gastrointestinaler Tumorzellen durch Meta-Iodobenzylguanidin dar.This example represents growth inhibition and apoptosis of neuroendocrine, gastrointestinal tumor cells Meta-iodobenzylguanidine.

Für die vorliegende Untersuchung wurde die STC-1-Zellinie verwendet, die sich von einem intestinalen, neuroendokrinen Tumor aus Mäusen herleitet. Diese Mäuse waren für 2 Onkogene doppelt transgen, die unter Kontrolle des Insulin-Promotors exprimiert wurden (Rindi G., Grant S.G.N., Yiangou Y., Ghatei M.A., Bloom S.R., Bautch V.L., Solcia E., Polak J.M;. Development of neuroendocrine tumors in the gastrointestinal tract of transgenic mice. Am. J. Pathol. 1990; 136: 1349-1363.). Die Zellinie wurde freundlicherweise von Dr. Dougles Hanahan (University of California, San Francisco, CA, USA) zur Verfügung gestellt. Die Zellen wurden bei 37°C in Dulbecco's modifiziertem Eagle's-Medium (DMEM) unter Zusatz von 15% Pferdeserum (Biochrom AG, Berlin, Deutschland), 2,5% fötalem Kälberserum (FCS, Biochrom AG, Berlin, Deutschland), 1 % L-Glutamin, 100 u/ml Penicillin und 100 μg/ml Streptomycin in einer feuchten Atmosphäre (5% CO₂, 37°C) kultiviert. Des weiteren wurde eine nur schwach differenzierte, humane, kolorektale Adenokarzinom-Zellinie, HT29 (Fogh J. (ed);Human tumor cells in vitro. New York: Plenum Press 1975; 115-159.), in RPMI 1640-Medium gehalten, das mit 10% FCS angereichert worden war. Die Kultivierung fand ebenfalls in einem Inkubator bei 37°C und 5% CO₂ bei feuchter Atmosphäre statt.For the present study, the STC-1 cell line was used, which is derived from an intestinal, neuroendocrine tumor from mice. These mice were double transgenic for 2 oncogenes expressed under the control of the insulin promoter (Rindi G., Grant SGN, Yiangou Y., Ghatei MA, Bloom SR, Bautch VL, Solcia E., Polak JM; Development of neuroendocrine tumors in the gastrointestinal tract of transgenic mice. Am. J. Pathol. 1990; 136: 1349-1363.). The cell line was kindly provided by Dr. Dougles Hanahan (University of California, San Francisco, CA, USA). The cells were at 37 ° C in Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) with the addition of 15% horse serum (Biochrom AG, Berlin, Germany), 2.5% fetal calf serum (FCS, Biochrom AG, Berlin, Germany), 1% L-glutamine, 100 u / ml penicillin and 100 μg / ml streptomycin are cultivated in a humid atmosphere (5% CO ₂ , 37 ° C). Furthermore, a poorly differentiated, human, colorectal adenocarcinoma cell line, HT29 (Fogh J. (ed); Human tumor cells in vitro. New York: Plenum Press 1975; 115-159.), Was kept in RPMI 1640 medium, that had been enriched with 10% FCS. The cultivation also took place in an incubator at 37 ° C and 5% CO ₂ in a humid atmosphere.

Die in diesem Beispiel verwendeten Verfahren sind weitestgehend im Stand der Technik bekannt und sind in der jeweils angegeben Literatur beschrieben, wobei die Literatur, auf die sich hier bezogen wird, in die Anmeldung mit aufgenommen wird.The ones used in this example Methods are well known in the art and are described in the respective literature, the literature, to which reference is made here in the registration becomes.

Reverse-Transkriptase-Polymerase-Kettenreaktion (RT-PCR)Reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR)

Die RNA-Isolierung, die reverse Transkription und die anschließenden PCR-Reaktionen wurden, wie in der Literatur beschrieben, ausgeführt.RNA isolation, reverse transcription and the subsequent ones PCR reactions were carried out as described in the literature.

cDNA-ArraycDNA array

Zur Bestimmung von MIBG-induzierter, differenzieller Genexpression wurden STC-1-Zellen mit MIBG (50 μM) für 48 Stunden behandelt. Es wurde unter Verwendung von RNAClean (Hybaid, UK) Gesamt-RNA isoliert. Hierbei dienten nicht-behandelte Zellen als Kontrolle. Es wurden markierte Erststrang-cDNA-Sonden unter Verwendung der Poly(A⁺)RNAs von sowohl MIBG-behandelten, als auch Kontrollproben hergestellt. Jede Probe wurde mit einer individuellen Membran, auf der in identischer Weise 1200 Gene gespottet worden waren (Clontech, mouse cancer 1,2 cDNA-Array), hybridisiert. Nach entsprechenden Waschschritten wurde zur Quantifizierung ein Röntgenfilm auf die Membranen gelegt. Zur Bestimmung der Auf- und Abregulierung wurde die mittlere optische Dichte pro Quadratmillimeter jedes Gens identifiziert und gegen die Expression eines Haushaltsgens abgeglichen. Dann wurde das Verhältnis der Genexpression in behandelten gegenüber unbehandelten Zellen berechnet. Der Ausschlußwert für die Aufregulierung wurde auf ein zweifaches Ansteigen des OD-mm²-Verhältnisses der Gene in den behandelten Proben festgelegt, wobei die Abregulierung als eine 0,5-fache OD-mm²-Expression von Genen in den behandelten Proben bestimmt wurde.To determine MIBG-induced, differential gene expression, STC-1 cells were treated with MIBG (50 μM) for 48 hours. Total RNA was isolated using RNAClean (Hybaid, UK). Untreated cells served as controls. Labeled first strand cDNA probes were made using the poly (A ⁺ ) RNAs from both MIBG treated and control samples. Each sample was hybridized with an individual membrane on which 1200 genes had been spotted in an identical manner (Clontech, mouse cancer 1.2 cDNA array). After appropriate washing steps, an X-ray film was placed on the membranes for quantification. To determine the up and down regulation, the mean optical density per square millimeter of each gene was identified and compared against the expression of a household gene. Then the ratio of gene expression in treated versus untreated cells was calculated. The exclusion value for upregulation was set to a two-fold increase in the OD-mm ² ratio of the genes in the treated samples, the down-regulation being determined as a 0.5-fold OD-mm ² expression of genes in the treated samples.

Messung der Wachstumsinhibitionmeasurement of growth inhibition

Die Veränderung der Zellanzahl von STC-1- oder HT29-Zellen wurde mit Hilfe der Kristallviolett-Färbung nach 96 Stunden Inkubation mit steigenden Konzentrationen an MIBG (0-50 μM) bestimmt. Die Messungen wurden, wie in der folgenden Literatur beschrieben, durchgeführt: Höpfner M., Maaser K., Barthel B., von Lampe B., Hanski C., Riecken E.O., Zeitz M., Scherübl H. Growth inhibition and apoptosis induced by P2Y₂ receptors in human colorectal carcinoma cells: involvement of intracellular calcium and cyclic adenosine monophosphate. Int. J. Colorectal Dis. 2001; 16: 154-166. Die Bestimmung der Zellanzahl durch die Kristallviolett-Färbung gibt nicht genau die Wechsel in der Zellproliferation an, sondern reflektiert die Summe der entsprechenden Einflüsse. Die Zellen wurden mit Phosphat-gepufferter Salzlösung gewaschen und mit 1 % Glutaraldehyd fixiert. Nach einem anschließenden Waschschritt wurden die Zellen mit 0,1 % Kristallviolett gefärbt. Der ungebundene Farbstoff wurde durch Waschen entfernt und das an die Zellen gebundene Kristallviolett mit 0,2% Triton-X-100 löslich gemacht. Dann wurde die Lichtextinktion bei 570 mm unter Verwendung eines ELISA-Lesegeräts analysiert.The change in the number of cells of STC-1 or HT29 cells was determined with the aid of crystal violet staining after 96 hours of incubation with increasing concentrations of MIBG (0-50 μM). The measurements were carried out as described in the following literature: Höpfner M., Maaser K., Barthel B., von Lampe B., Hanski C., Riecken EO, Zeitz M., Scherübl H. Growth inhibition and apoptosis induced by P2Y ₂ receptors in human colorectal carcinoma cells: involvement of intracellular calcium and cyclic adenosine monophosphate. Int. J. Colorectal Dis. 2001; 16: 154-166. The determination of the number of cells by the crystal violet staining does not exactly indicate the changes in cell proliferation, but reflects the sum of the corresponding influences. The cells were washed with phosphate buffered saline and fixed with 1% glutaraldehyde. After a subsequent washing step, the cells were stained with 0.1% crystal violet. The unbound dye was removed by washing and the crystal violet bound to the cells solubilized with 0.2% Triton-X-100. Then the light absorbance was measured at 570 mm using egg Analyzed by an ELISA reader.

Bestimmung der CytotoxizitätDetermination of cytotoxicity

Es wurden Zellen in einer Dichte von 5000 Zellen/Well in 96-Well-Mikrotiterplatten ausgesäht und mit MIBG (0-50 μM) inkubiert. Das Entlassen des zytoplasmatischen Enzyms Lak tat-Dehydrogenase (LDH), das den Grad der Cytotoxizität angibt, wurde nach einer 48-stündigen Inkubation unter Verwendung des kolorimetrischen Kits von Roche (Mannheim, Deutschland), wie in der Literatur beschrieben (Decker T., Lohmann-Matthes M.L.; A quick and simple method for the quantitation of lactate dehydrogenase release in measurements of cellular cytotoxicity and tumor necrosis factor (TNF) activity. J. Immunol. Methods 1988; 115: 61-69), gemessen. Die maximale Abgabe von LDH wurde unter Hinzufügen von 100 μl 2% TritonX-100 zu unbehandelten Zellen erreicht. Zur Bestimmnug wurden 100 μl jeder Probe in eine 96-Well-Mikrotiterplatte gegeben. 100 μl des LDH-Testreagenzes wurden zu jedem Well hinzugefügt und für 30 Minuten bei Raumtemperatur unter Lichtausschluß inlcubiert. Die Absorption der Proben wurde dann bei 490 nm gemessen. Der Prozentsatz der LDH-Freisetzung wurde durch Teilen der freigesetzten LDH der behandelten Zellen durch die maximale LDH-Freisetzung, multipliziert mit 100, bestimmt. Es wurde weder eine signifikante LDH-Freisetzung in dem Gewebkulturmedium alleine, noch in dem in MIBG-enthaltenen Inkubationsmedium detektiert.There were cells in a density of 5000 cells / well sown in 96-well microtiter plates and with MIBG (0-50 μM) incubated. Discharge of the cytoplasmic enzyme Lak tat dehydrogenase (LDH), which indicates the degree of cytotoxicity, was determined after a 48 hour incubation using the colorimetric kit from Roche (Mannheim, Germany), as described in the literature (Decker T., Lohmann-Matthes M.L. .; A quick and simple method for the quantitation of lactate dehydrogenase release in measurements of cellular cytotoxicity and tumor necrosis factor (TNF) activity. J. Immunol. Methods 1988; 115: 61-69). The maximum release of LDH has been added 100 μl 2% TritonX-100 reached to untreated cells. For determination 100 μl each Place sample in a 96-well microtiter plate. 100 μl of the LDH test reagent were added to each well and for Incubated for 30 minutes at room temperature with the exclusion of light. The absorption of the samples was then measured at 490 nm. The percentage the LDH release was determined by dividing the released LDH treated cells multiplied by the maximum LDH release with 100, definitely. There was no significant LDH release in the tissue culture medium alone, still in the incubation medium contained in MIBG detected.

Detektion der ApoptoseDetection of apoptosis

Mitochondriales MembranpotentialMitochondrial membrane potential

Die Veränderungen im mitochondrialen Membranpotential wurden cytometrisch unter Verwendung des "fluorgenic lipophilic cation JC-1" (Molecular Probes, Eugene; USA) gemessen. Nach einer 6-stündigen Inkubation wurden die Zellen mit 1 μg/m1 JC-1 für 15 Minuten bei 37°C unter Lichtausschluß gefärbt, bevor sie mit Hilfe der Flußzytometrie analysiert wurden. Bei einem negativen Membranpotential bildet JC-1 Aggregate, die eine Fluoreszenz im orange-farbenen Wellenlängenbereich emitieren, wohingegen die monomere Form eine Fluoreszenz im grün-farbenen Wellenlängenbereich emitriert. Das Verhältnis von roter und grüner Fluorezenzintensität stellt ein Maß für das mitochondriale Membranpotential zur Verfügung.The changes in the mitochondrial Membrane potentials were measured cytometrically using the "fluorgenic lipophilic cation JC-1 "(Molecular Probes, Eugene; USA) measured. After a 6 hour incubation the cells were treated with 1 μg / ml JC-1 for 15 minutes at 37 ° C dyed in the dark before them using flow cytometry were analyzed. With a negative membrane potential, JC-1 Aggregates that show fluorescence in the orange-colored wavelength range emit, whereas the monomeric form has a fluorescence in green Wavelength range emitriert. The relationship of red and green fluorescence intensity provides a measure of the mitochondrial Membrane potential available.

Caspase-3-AktivitätCaspase-3 activity

Es wurden Zellen mit Medium, das MIBG (0-50 μM) enthielt, für 48 Stunden inkubiert, zweimal mit Phosphat-gepufferter Salzlösung gewaschen und bei minus 80°C bis zur Verwendung gelagert. Ungefähr 10⁶ Zellen wurden in 500 μ1 Lyse-Puffer (10 mM Tris-HCl, 10 mM NaH₂PO₄/Na₂HPO₄, 130 mM NaCl, 1% Triton X-100, 10 mM NaPP; pH 7,5) lysiert und der Gesamtproteingehalt unter Verwendung des BCA-Proteinbestimmungskits (Pierce, Rockford, IL, USA) quantifiziert. Die Caspase-3-Aktivität wurde durch die Spaltung des fluorogenen Substrats DEVD-AMC berechnet (Decker T., Lohmann-Matthes M.L.; A quick and simple method for the quantitation of lactate dehydrogenase release in measurements of cellular cytotoxicity and tumor necrosis factor (TNF) activity. J. Immunol. Methods 1988; 115: 61-69.). Die Spaltung des DEVD-AMC wurde mit einem Versa Fluor-Fluorimeter (Biorad, München, Deutschland) bei einer Anregung von 360 nm und einer Emissionswellenlänge von 460 nm gemessen.Cells were incubated with medium containing MIBG (0-50 µM) for 48 hours, washed twice with phosphate-buffered saline and stored at minus 80 ° C until use. Approximately 10 ⁶ cells were placed in 500 μl lysis buffer (10 mM Tris-HCl, 10 mM NaH ₂ PO ₄ / Na ₂ HPO ₄ , 130 mM NaCl, 1% Triton X-100, 10 mM NaPP; pH 7.5) lysed and the total protein content quantified using the BCA protein determination kit (Pierce, Rockford, IL, USA). Caspase-3 activity was calculated by cleaving the fluorogenic substrate DEVD-AMC (Decker T., Lohmann-Matthes ML; A quick and simple method for the quantitation of lactate dehydrogenase release in measurements of cellular cytotoxicity and tumor necrosis factor (TNF activity. J. Immunol. Methods 1988; 115: 61-69.). The cleavage of the DEVD-AMC was measured with a Versa fluorofluorimeter (Biorad, Munich, Germany) with an excitation of 360 nm and an emission wavelength of 460 nm.

DNA-FragmentierungDNA fragmentation

Die DNA-Fragmentierung wurde unter Zuhilfenahme eines "Cell Death Detection"-ELISA (Roche Monecular Biochemicals) durchgeführt (Höpfner M., Lemmer K., Jansen A., Hanski C., Riecken E.O., Gavish M., Mann B., Buhr H., Glassmeier G., Scherübl H.; Expression of functional P2-purinergic receptors in primary cultures of human colorectal carcinoma cells. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1998; 251: 811-817.). Nach einer 48-stündigen Inkubation wurden die Zellen in Inkubationspuffer lysiert. Die cytoplasmatischen Fraktionen wurden so verdünnt, daß sie 2,5 × 10³ Zelläquivalente pro Milliliter enthielten und das Vorhandensein von Mono- und Oligonukleosomen wurde unter Verwendung von Antikörpern getestet, die gegen DNA und Histone gerichtet waren. Die DNA-Fragmente wurden mit Hilfe eines Peroxidasesystems mit Farbentwicklung bei 405 nm detektiert.DNA fragmentation was carried out with the aid of a "Cell Death Detection" ELISA (Roche Monecular Biochemicals) (Höpfner M., Lemmer K., Jansen A., Hanski C., Riecken EO, Gavish M., Mann B., Buhr H., Glassmeier G., Scherübl H .; Expression of functional P2-purinergic receptors in primary cultures of human colorectal carcinoma cells. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1998; 251: 811-817.). After a 48 hour incubation, the cells were lysed in incubation buffer. The cytoplasmic fractions were diluted to contain 2.5 x 10 ³ cell equivalents per milliliter and the presence of mono- and oligonucleosomes was tested using antibodies directed against DNA and histones. The DNA fragments were detected using a peroxidase system with color development at 405 nm.

ZellzyklusanalyseCell cycle analysis

Die Zellzyklusanlyse wurde nach einem Verfahren von Vindelov und Christensen (Vindelov L., Christensen IJ.; An integrated set of methods for routine flow cytometric DNA analysis. Methods Cell Biol. 1990; 33: 127-137.) durchgeführt. Die Zellen wurden hierbei mit Trypsin behandelt, gewaschen und die Nuklei unter Verwendung des "Cycle-Test-PLUS DNA"-Reagenzkits (Becton Dickinson, Heidelberg, Deutschland) isoliert. Nach Anfärben mit Propidiumiodid wurde der DNA-Gehalt der Nuklei mit Hilfe der Flußzytometrie detektiert und unter Verwendung der CellFit-Software (Becton Dickinson, Heidelberg, Deutschland) analysiert.The cell cycle analysis was carried out according to a method by Vindelov and Christensen (Vindelov L., Christensen IJ .; An integrated set of methods for routine flow cytometric DNA analysis. Methods Cell Biol. 1990; 33: 127-137.). The cells were treated with trypsin, washed and the nuclei with Ver isolated using the "Cycle-Test-PLUS DNA" reagent kit (Becton Dickinson, Heidelberg, Germany). After staining with propidium iodide, the DNA content of the nuclei was detected using flow cytometry and analyzed using CellFit software (Becton Dickinson, Heidelberg, Germany).

Es konnte gezeigt werden, daß im Gegensatz zur nicht-neuroendokrinen, kolorektalen Krebszellinie HT29 in der neuroendokrinen, gastrointestinalen Zellinie STC-1 spezifische RNA für den Norepinephrin-Transporter (NET) vorhanden war. Weiterhin wurde beobachtet, daß je nach Dosis von MIBG die Anzahl der NET-positiven STC-1-Zellen absank. Nach einer Inkubation von 96 Stunden mit MIBG wurde ein Absinken des Zellwachstums um beinah 100% beobachtet. Eine signifikante Wachstumsinhibition durch MIBG wurde bei Konzentrationen von 1 μM und höher beobachtet. Im Gegensatz dazu zeigte MIBG bei NET-negativen HT29-Zellen selbst bei 10 μM überhaupt keine inhibitorische Wirkung. Nur bei der höchsten MIBG-Konzentration von 50 μM wurde eine marginale Wachstumsinhibition von ungefähr 20% detektiert. Ebenfalls wurde die Wirkung von MIBG auf die LDH-Freisetzung aus STC-1- und HT29-Zellen untersucht. In STC-1-Zellen wurde ein Dosis-abhängiger Anstieg bei der LDH-Freisetzung nach einer Inkubation von 48 Stunden mit 1 bis 50 μM MIBG beobachtet, wobei HT29-Zellen keine signifikante Freisetzung von LDH aufgrund der Inkubation mit MIBG zeigten. Die Freisetzung von LDH aus MIBG-behandelten Zellen zeigte somit eine Spezifität für NET-exprimierende, neuroendokrine STC-1-Zellen. Dies zeigt, daß MIBG keine allgemeinen negativen cytotoxischen Wirkungen auf NET-negative Zellen ausübt. Um zu untersuchen, ob die antiproliferativen Wirkungen von MIBG nicht ausschließlich durch Cytotoxizität, sondern auch durch die Induktion des programmierten Zelltodes hervorgerufen werden, wurde die Wirkung von MIBG auf das mitochondriale Membranpotential untersucht. Bei STC-1-Zellen führte eine 6-stündige Inkubation mit ansteigenden Konzentrationen von MIBG (1-50 μM) zu einem Dosis-abhängigen Absinken des mitochondrialen Membranpotentials. Die Anwendung von 50 μM MIBG führte zu einem Absinken des Membranpotentials auf mehr als 40%, verglichen zu nicht behandelten Kontrollen. Im Gegensatz dazu änderte sich das Membranpotential nach der Behandlung mit MIBG bei HT29-Zellen nicht. Selbst bei der höchsten Konzentration von 50 μM MIBG konnte kein Absinken des mitochondrialen Membranpotentials detektieri werden. Um die Apoptose-induzierende Wirkweise von MIBG auf NET-positive, neuroendokrine Tumorzellen zu untersuchen, wurde das Caspase-3-Schlüsselenzym für den apoptotischen Signalweg verwendet. Es konnte gezeigt werden, daß MIBG ein Ansteigen der Caspase-3-Aktivität in STC-1-Zellen in einer Dosis-abhängigen Art und Weise hervorruft. Die maximale Caspase-3-Aktivität, induziert durch MIBG, war nach einer Inkubation von 24 Stunden Inkubation erreicht. Es wurde ein Anstieg der Caspase-3-Aktivität um mehr als 430%, verglichen zur Kontrolle, beobachtet. In HT29-Zellen wurde nur ein leichtes Ansteigen der Caspase-3-Aktivität auf ungefähr 10% nach Anwendung von 50 μM MIBG beobachtet.It could be shown that in contrast for the non-neuroendocrine, colorectal cancer cell line HT29 in the neuroendocrine, gastrointestinal cell line STC-1 specific RNA for the Norepinephrine transporter (NET) was present. It was also observed that ever after the dose of MIBG, the number of NET-positive STC-1 cells decreased. After an incubation of 96 hours with MIBG, there was a decrease of cell growth observed by almost 100%. A significant inhibition of growth by MIBG was observed at concentrations of 1 μM and higher. In contrast in addition, MIBG showed at NET-negative HT29 cells even at 10 μM no inhibitory effect. Only at the highest MIBG concentration of 50 μM was one marginal growth inhibition of approximately 20% was detected. Likewise was the effect of MIBG on LDH release from STC-1 and HT29 cells examined. In STC-1 cells there was a dose dependent increase in the LDH release observed after an incubation of 48 hours with 1 to 50 μM MIBG, where HT29 cells are not due to a significant release of LDH incubation with MIBG. The release of LDH from MIBG-treated Cells thus showed specificity for NET-expressing, neuroendocrine STC-1 cells. This shows that MIBG no general negative cytotoxic effects on NET-negative Exerts cells. To investigate whether the antiproliferative effects of MIBG are not exclusively due to cytotoxicity, but also caused by the induction of programmed cell death the effect of MIBG on mitochondrial membrane potential examined. At STC-1 cells resulted a 6 hour Incubate with increasing concentrations of MIBG (1-50 μM) into one Dose-dependent Decrease in mitochondrial membrane potential. The application of 50 μM MIBG resulted in a decrease in the membrane potential to more than 40% on untreated controls. In contrast, it changed the membrane potential after treatment with MIBG in HT29 cells was not. Even at the highest Concentration of 50 μM MIBG was unable to lower the mitochondrial membrane potential to be detected. About the apoptosis-inducing mode of action of MIBG for NET-positive, neuroendocrine tumor cells the key caspase-3 enzyme for the apoptotic pathway used. It could be shown that MIBG a Increase in caspase-3 activity in STC-1 cells in a dose-dependent manner. The maximum caspase-3 activity, induced by MIBG, was after a 24 hour incubation reached. An increase in caspase-3 activity of more than 430% was compared for control, observed. Only slight was found in HT29 cells Increase in caspase-3 activity at about 10% after application of 50 μM MIBG observed.

Die Fragmentierung von DNA in Mono- und Oligonukleosomen ist ein Kennzeichen der Apoptose. MIBG induzierte DNA-Fragmentierung in STC-1-Zellen in Form einer Dosisabhängigen Art und Weise. Nach einer 24-stündigen Inkubation wurde ein Ansteigen der DNA-Fragmentierung von STC-1-Zellen auf bis zu 370% der Kontrollwerte beobachtet. In HT29-Zellen konnte nur ein Ansteigen der DNA-Fragmentierung auf 19% gemessen werden, nachdem diese mit 50 μM MIBG inkubiert worden waren. Die Daten der Apoptoseinduzierenden Wirkungen von MIBG in HT29-Zellen lassen vermuten, daß die geringe antiproliferative Wirkung von hohen Dosen an MIBG auf NET-negative Zellen aufgrund einer leichten Induktion der Apoptose hervorgerufen worden sein könnten. Um zu untersuchen, ob der Zellzyklus-Arrest auf das antiproliferative Potential von MIBG bei neuroendokrinen, gastrointestinalen Tumorzellen zurückzuführen ist, wurden flußzytometrische Zellzyklusanalysen durchgeführt. Dazu wurden STC-1-Zellen mit ansteigenden Konzentrationen von MIBG (1-50 μM) für 24 Stunden behandelt. Dies führte zu keiner Änderung des Anteils an Zellen, die in einer bestimmten Zellzyklusphase waren. Selbst bei der höchsten Konzentration von 50 μM zeigte MIBG keinen Einfluß auf den Zellzyklus der STC-1-Zellen. Wie von den negativen Ergebnissen der STC-1-Zellen erwartet, zeigten NET-negative HT29-Zellen keine Veränderung des Zellzyklus. Zur Untersuchung der MIBG-induzierten Veränderungen in der Genexpression von STC-1-Zellen auf transkriptionellem Niveau, wurden cDNA-Array-Analysen unter Verwendung eines krebsspezifischen "1,2 kcDNA Atlas-Arrays" durchgeführt (Clontech, Palo Alto, USA). Nach einer Inkubation von 48 Stunden mit 50 μM MIBG wurde eine differentielle Expression von 61 Proliferations- oder Apoptose-bezogenen Genen detektiert. 57 Gene davon wurden hochreguliert und 4 Gene zeigten ein Abregulierung im Vergleich mit unbehandelten Kontrollen. Viele Gene, einschließlich der Gene, die für Zytokine kodieren, oder solche, die in der Apoptose, der Streßantwort und dem Metabolismus involviert sind, wurden in MIBG-behandelten STC-1-Zellen differentiell hochreguliert. Unter den Genen, der apoptotischen Signalkaskade waren insbesondere BCL-2-Antagonist/Killer, Apaf-1, Interferonrezeptoren (alpha-, beta-, gamma-) und Proteine wie Tumornekrosefaktoren, Tumornekrosefaktorrezeptoren und Retinolsäure-Rezeptoren bei MIBG-behandelten STC-1-Zellen signifikant hochreguliert. In Bezug auf die Expression von Genen, die in den zellulären Metabolismus mit eingebunden sind, sind sowohl Cytochrom P450-Familienmitglieder, als auch die Monoaminoxidase B hochreguliert. Zusätzlich sind verschiedene Streßantwortgene hochreguliert (insbesondere GADD 153 und einige Hitzeschockproteine). Unter den vier Genen, die abreguliert worden waren, waren insbesondere das BCL2/Adenovirus E1B 19 kDa-interagierendes Protein 1 signifikant supprimiert.The fragmentation of DNA in mono- and oligonucleosomes is a hallmark of apoptosis. MIBG induced DNA fragmentation in STC-1 cells in the form of a dose dependent species and way. After a 24 hour Incubation was an increase in DNA fragmentation from STC-1 cells observed on up to 370% of control values. In HT29 cells could only an increase in DNA fragmentation to 19% can be measured, after this with 50 μM MIBG had been incubated. Apoptosis-inducing data Effects of MIBG in HT29 cells suggest that the low antiproliferative effect of high doses of MIBG on NET negative Cells caused due to a slight induction of apoptosis could have been. To investigate whether the cell cycle arrest is due to the antiproliferative Potential of MIBG in neuroendocrine, gastrointestinal tumor cells is due were flow cytometric Cell cycle analyzes performed. For this purpose, STC-1 cells with increasing concentrations of MIBG (1-50 μM) for 24 Hours treated. This resulted no change the percentage of cells that were in a particular cell cycle phase. Even at the highest Concentration of 50 μM MIBG showed no influence the cell cycle of the STC-1 cells. As from the negative results of the STC-1 cells expected, NET-negative HT29 cells showed none change of the cell cycle. To study the MIBG-induced changes in the gene expression of STC-1 cells at the transcriptional level, were cDNA array analyzes using a cancer-specific "1.2 kcDNA Atlas array" carried out (Clontech, Palo Alto, USA). After an incubation of 48 hours with 50 μM MIBG was a differential expression of 61 proliferation or genes related to apoptosis. 57 genes were up-regulated and 4 genes showed down regulation compared to untreated Controls. Many genes, including the genes for cytokines encode, or those in apoptosis, the stress response and the metabolism involved were treated in MIBG STC-1 cells differentially upregulated. Among the genes, the apoptotic Signal cascade were in particular BCL-2 antagonist / killer, Apaf-1, interferon receptors (alpha, beta, gamma) and proteins such as tumor necrosis factors, tumor necrosis factor receptors and retinoic acid receptors MIBG-treated STC-1 cells significantly upregulated. Regarding the expression of genes, those in the cellular Metabolism involved are both cytochrome P450 family members, and upregulates monoamine oxidase B. In addition are different stress response genes upregulated (especially GADD 153 and some heat shock proteins). Among the four genes that had been downregulated were particular ones the BCL2 / adenovirus E1B 19 kDa interacting Protein 1 significantly suppressed.

Beispiel 2Example 2

Im Zusammenhang mit kolorektalen Karzinomen wurden 116 konsekutive Patienten, die 1989-1991 am Universitätskrankenhaus Benjamin Franklin (Freie Universität Berlin, Deutschland) an einem kolorektalen Karzinom im Tumorstadium UICC III oder IV operiert wurden, untersucht. Für mindestens 5 Jahre bis zu ihrem Tod wurden die Ergebnisse aller Patienten in Form einer vollständigen Nachfolgeuntersuchung dokumentiert.Colorectal related Carcinomas were 116 consecutive patients admitted to the university hospital in 1989-1991 Benjamin Franklin (Free University Berlin, Germany) on one Colorectal cancer in the tumor stage UICC III or IV operated on were examined. For The results of all were at least 5 years until her death Patients in the form of a complete Follow-up examination documented.

Imunhistochemische FärbungenImunhistochemische colorations

Mikroschnitte (2-3 μM) von Paraffin-eingebetteten Primärtumoren wurden von Paraffin befreit und in absteigenden Alkoholserien rehydriert (Grabowski P., Schindler I., Anagnostopoulos I., et al.; Neuroendocrine differentiation is a relevant prognostic factor in stage III-IV colorectal cancer. Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. 2001; 13: 405-11. Grabowski P., Mann B., Mansmann U., et al.; Expression of SIALYL-Le^(x) antigen defined by Mab AM-3 is an independent prognostic marker in colorectal carcinoma patients. Int. J. Cancer 2000; 88: 281-6.). Die Immunhistochemie wurde unter Verwendung eines Roboter-Systems durchgeführt. Die Schnitte wurden anschließend mit dem anti-PBR-Antikörper 8D7 (0,5 μg/ml) für 30 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert. Der Antikörper wurde freundlicherweise von P. Carayon (Dussossoy D., Carayon P., Feraut D., et al.; Development of a monoclonal antibody to immuno-cytochemical analysis of the cellular localization of the peripheral benzodiazepine receptor. Cytometry 1996; 24: 39-48.) zur Verfügung gestellt. Nach dem Waschen der Proben wurden diese mit einem anti-Maus-IgG (1:20 Verdünnung) für 30 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert und die Färbung mit Hilfe eines "fast-red" systems (DAKO, Heidelberg, Deutschland) detektiert. Die Proben wurden leicht mit Mayer'schem Hämatoxylin gegengefärbt.Micro sections (2-3 μM) of paraffin-embedded primary tumors were freed from paraffin and rehydrated in descending alcohol series (Grabowski P., Schindler I., Anagnostopoulos I., et al .; Neuroendocrine differentiation is a relevant prognostic factor in stage III-IV colorectal cancer. Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. 2001; 13: 405-11. Grabowski P., Mann B., Mansmann U., et al .; Expression of SIALYL-Le ^(x) antigen defined by Mab AM-3 is an independent prognostic marker in colorectal carcinoma patients. Int. J. Cancer 2000; 88: 281-6.). Immunohistochemistry was performed using a robotic system. The sections were then incubated with the anti-PBR antibody 8D7 (0.5 μg / ml) for 30 minutes at room temperature. The antibody was kindly provided by P. Carayon (Dussossoy D., Carayon P., Feraut D., et al .; Development of a monoclonal antibody to immuno-cytochemical analysis of the cellular localization of the peripheral benzodiazepine receptor. Cytometry 1996; 24: 39-48.). After washing the samples, they were incubated with an anti-mouse IgG (1:20 dilution) for 30 minutes at room temperature and the color was detected using a "fast-red" system (DAKO, Heidelberg, Germany). The samples were lightly counterstained with Mayer's hematoxylin.

Semiquantitative Evaluierung der PBR-FärbungSemiquantitative Evaluation of the PBR staining

Die Färbeintensität des Tumorgewebes wurde mit derjenigen verglichen, die dem normalen mukosalen Gewebe jedes Patienten entsprach. Die damit erhaltenen Ergebnisse wurden statistisch ausgewertet.The staining intensity of the tumor tissue was measured with compared to that of each patient's normal mucosal tissue corresponded. The results obtained were evaluated statistically.

Die monohistochemischen Analysen zeigten, daß alle kolorektalen Gewebe PBR exprimierten. PBR wurde im Zytoplasma von sowohl Krebszellen, als auch normalen mukosalen Zellen detektiert, aber nicht in den Plasmamembranen von Nuklei. Bei 88% der kolorektalen Karzinome wurde PBR in Tumorgewebe im Vergleich zum korrespondierenden normalen, mukosalen Gewebe überexprimiert. Nur ein Tumor zeigte eine geringere PBR-Expression als nor males mukosales Gewebe. Bei 11 % der kolorektalen Krebsfälle war die PBR-Expression die gleiche wie in normalen, mukosalen Geweben. 28% aller Tumoren zeigten eine hohe Überexpression von PBR. Patienten im Tumorstadium UICC III hatten einem mittlere Überlebensrate von 86,8 ± 6,6 Monaten bei Tumoren mit einer niedrigen PBR-Expression, aber nur 56,2 ± 9,2 Monate bei Tumoren mit einer hohen PBR-Expression. Somit beeinflußt der PBR-Status deutlich die allgemeine Überlebensrate von Phase III-kolorektalen Krebspatienten. Für Patienten im Tumorstadium UICC IV konnten keine signifikanten Unterschiede in der Überlebenszeitdauer im Zusammenhang mit dem PBR-Status detektiert werden.The monohistochemical analyzes showed that everyone colorectal tissue expressed PBR. PBR was found in the cytoplasm of both cancer cells and normal mucosal cells are detected, but not in the plasma membranes of nuclei. In 88% of the colorectal Carcinoma was compared to the corresponding PBR in tumor tissue normal, mucosal tissue overexpressed. Only one tumor showed lower PBR expression than normal mucosal tissue. Was in 11% of colorectal cancer cases PBR expression is the same as in normal mucosal tissues. 28% of all tumors showed a high overexpression of PBR. patients in tumor stage UICC III had an average survival of 86.8 ± 6.6 months in tumors with low PBR expression, but only 56.2 ± 9.2 months in tumors with a high PBR expression. Thus, the PBR status significantly affects the overall survival rate of phase III colorectal cancer patients. For patients in the tumor stage UICC IV could not find any significant differences in survival be detected in connection with the PBR status.

Die in der vorliegenden Erfindung zitierten SEQ ID NOs haben folgende Sequenz: SEQ ID NO:1

The SEQ ID NOs cited in the present invention have the following sequence: SEQ ID NO: 1

SEQ ID NO:2

SEQ ID NO: 2

SEQ ID NO:3

SEQ ID NO: 3

SEQ ID NO:4

SEQ ID NO: 4

Die in der vorangehenden Beschreibung sowie den Ansprüchen offenbarten Merkmale der Erfindung können sowohl einzeln, als auch in beliebiger Kombination für die Verwirklichung der Erfindung in verschiedenen Ausführungsformen wesentlich sein.Those in the previous description as well as the claims Features of the invention disclosed can be both individually and in any combination for the implementation of the invention in various embodiments be essential.

Claims

Use of a composition containing at least one active ingredient comprises the over a monoamine transporter is used to treat neuroendocrine Tumors and other tumors that express monoamine transporters.

Use according to claim 1, wherein the active ingredient is at least one Monoamine and / or a derivative / analogue thereof.

Use according to claim 1, wherein the active ingredient is at least one Monoamine and / or a derivative / analogue thereof and at least is a cytokine and / or somatostatin.

Use according to any one of claims 2-3, wherein the monoamine is selected from a group that meta-iodobenzylguanidine, noradrenaline, serotonin, Dopamine and / or derivatives / analogues thereof.

Use according to one of claims 3 and 4, wherein the cytokine is an interferon.

Use according to one of the preceding claims, wherein the monoamine with a radionuclide and / or a toxin and / or is associated with a chemotherapy drug and / or a vaccine.

Use according to one of the preceding claims, wherein the composition pharmaceutically acceptable carrier and / or pharmaceutical acceptable salts.

Use according to one of the preceding claims, wherein the monoamine transporter comprises the sequence that is selected from the group comprising SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 and SEQ ID NO: 3.

Use of a composition containing at least one active ingredient comprises the one with the peripheral benzodiazepine receptor and / or one for the receptor coding nucleic acid interacts, for the treatment and diagnosis of gastrointestinal tumors, especially esophageal tumors, Stomach tumors, pancreatic tumors, Biliary tract tumors, thin and colon tumors and / or lymphomas.

Use according to claim 9, wherein the composition further pharmaceutically acceptable carriers and / or pharmaceutically acceptable salts.

Use according to one of claims 9-10, wherein the active ingredient is selected from a group that contains a ribozyme, an antisense oligonucleotide, an antagonist, a ligand and / or an antibody.

Use according to any one of claims 9-11, wherein the active ingredient with a radionuclide and / or a toxin and / or a chemotherapeutic agent and / or a vaccine.

Use according to any one of claims 9-12, wherein the active ingredient suitable for the diagnostic detection of gastrointestinal tumors is.

Use according to any one of claims 9-13, wherein the benzodiazepine receptor which comprises SEQ ID NO: 4.

Kit, characterized in that it has at least one composition according to one of claims 9-14 includes.

Kit, characterized in that it has at least one composition according to one of claims 1-8 includes.

Kit according to one of the claims 15-16, characterized in that it contains information material on Use of the composition according to any one of claims 9-14 or information material on the use of the composition one of the claims 1-8 includes.