DE10207734A1

DE10207734A1 - New polypeptide that binds immunoglobulin E and alters cytokine synthesis, useful for treating e.g. atopic eczema, asthma or allergy, also its encoding nucleic acid

Info

Publication number: DE10207734A1
Application number: DE10207734A
Authority: DE
Inventors: Karsten Neuber
Original assignee: AGELAB PHARMA GmbH
Current assignee: AGELAB PHARMA GmbH
Priority date: 2002-02-15
Filing date: 2002-02-15
Publication date: 2003-09-04

Abstract

Novel polypeptides (A) that are specifically capable of binding immunoglobulin E antibodies. Novel polypeptides (A) that: (i) include the sequence Gln-Glu-Leu-Asp-Tyr-Leu-Thr-Arg-His (S10); or (ii) include the sequence Lys-Val-Thr-Ala-Gln-Glu-Leu-Asp-Tyr-Cys (S15), obtained as a 12 kD fragment in trypsin cleavage of Staphylococcus aureus enterotoxin B; or (iii) are homologs or derivatives of (i) or (ii) able to bind immunoglobulin E (IgE). Independent claims are also included for the following: (1) nucleic acids (NA) that encode (A); and (2) method for preparing (A).

Description

Die Erfindung betrifft insbesondere ein Peptid, das spezifisch IgE-Antikörper zu binden vermag und aus dem natürlich vorkommenden S. aureus Enterotoxin B (SEB) erhältlich ist. Seine immunmodulatorischen Eigenschaften unterscheiden sich überraschenderweise erheblich von denen des bakteriellen SEB. Das erfindungsgemäße Peptid induziert im Gegensatz zu SEB überraschenderweise keine Proliferation von T-Zellen und hemmt aber andererseits die Interferon-gamma Synthese stimulierter T- Lymphozyten. Aufgrund seiner Eigenschaften ist das Peptid für die Therapie von Erkrankungen geeignet, die durch einen erhöhten Serum-IgE Spiegel und/oder eine vermehrte Produktion von Interferon-gamma charakterisiert sind. The invention particularly relates to a peptide that is specific IgE antibody can bind and from the natural occurring S. aureus Enterotoxin B (SEB) is available. His immunomodulatory properties differ Surprisingly, significantly different from those of the bacterial SEB. The In contrast to SEB, the peptide according to the invention induces Surprisingly, no proliferation of T cells and inhibits it on the other hand the interferon-gamma synthesis of stimulated T- Lymphocytes. Because of its properties, the peptide is for the therapy of diseases suitable by a increased serum IgE levels and / or increased production of Interferon gamma are characterized.

Staphylococcus aureus ist ein weit verbreiteter pathogener Mikroorganismus, der eine Vielzahl von schweren Infektionskrankheiten auslösen kann. S. aureus produziert Enterotoxine (Enterotoxin A, B, C, D, E und TSST-1) und Endotoxine (Koagulase, Staphylokinase, Lipase, Hyaluronidase, DNAse). Aufgrund der Entwicklung multipler Resistenzen gegenüber verschiedenen Antibiotika hat S. aureus in den letzten Jahren eine große Bedeutung als Erreger von Krankenhausinfektionen erlangt. Staphylococcus aureus is a common pathogenic Microorganism that is a variety of serious Can trigger infectious diseases. S. aureus produces enterotoxins (Enterotoxin A, B, C, D, E and TSST-1) and endotoxins (Coagulase, staphylokinase, lipase, hyaluronidase, DNAse). by virtue of the development of multiple resistances to different S. aureus has had a great deal of antibiotics in recent years Gained importance as a causative agent of hospital infections.

Die von S. aureus produzierten Enterotoxine (SE) können beim Menschen u. a. Lebensmittelvergiftungen und einen septischen Schock auslösen (1). The enterotoxins (SE) produced by S. aureus can be found in People u. a. Food poisoning and a septic Trigger shock (1).

Es handelt sich um mittelgroße Proteine (20-30 kD), die sich hinsichtlich ihrer Aminosäuresequenzen sehr ähnlich sind. So beträgt die Übereinstimmung zwischen Staphylokokken Enterotoxin A (SEA) und Staphylokokken Enterotoxin E (SEE) über 90% (1). It is medium-sized proteins (20-30 kD) that are are very similar in terms of their amino acid sequences. So is the match between staphylococci Enterotoxin A (SEA) and staphylococcal enterotoxin E (SEE) over 90% (1).

Das Interesse an den immunologischen Eigenschaften dieser Toxine stieg beträchtlich, nachdem entdeckt wurde, daß sie bereits in Konzentrationen von 10^-13 M-10^-16 M zu den stärksten Induktoren einer Lymphozytenproliferation zählen und sich diese Proliferation auf die T-Zellen beschränkt (2). Interest in the immunological properties of these toxins increased considerably after it was discovered that they were already among the strongest inducers of lymphocyte proliferation at concentrations of 10 ^-13 M-10 ^-16 M and this proliferation was restricted to the T cells (2) ,

Die Aufklärung der genauen Stimulationsmechansimen begann mit der Beobachtung, daß SEs hochgereinigte T-Zellen nicht stimulieren, sondern daß die toxininduzierte Proliferation von der Anwesenheit akzessorischer Zellen, Monozyten oder B- Lymphozyten, abhängig ist. The elucidation of the exact stimulation mechansimen began with the observation that SE's highly purified T cells are not stimulate, but that the toxin-induced proliferation of the Presence of accessory cells, monocytes or B- Lymphocytes, is dependent.

Im Gegensatz zu gewöhnlichen Antigenen werden die Enterotoxine jedoch nicht prozessiert und in der Antigen-Bindungsstelle des MHC-II-Moleküls präsentiert, sondern sie kreuzvernetzen den MHC-II-Komplex auf Monozyten oder B-Zellen mit dem T-Zell- Rezeptor (3). In contrast to ordinary antigens, the enterotoxins however not processed and in the antigen binding site of the MHC-II molecule presented, but they cross-link the MHC-II complex on monocytes or B cells with the T cell Receptor (3).

Die Bindungsaffinität der Enterotoxine zu verschiedenen MHC- II-Proteinen des Menschen ist unterschiedlich. Die meisten SEs binden bevorzugt an HLA-DR, weniger stark an DQ und praktisch überhaupt nicht an DP (4). Der Grund für die massive, im Gegensatz zu Lektinen wie Concanavalin A jedoch limitierte T- Zell-Stimulation ist die spezifische Bindung der SEs an die Außenseite der V_β-Kette des T-Zell-Rezeptors (TZR). Die anderen Komponenten des T-Zell-Rezeptors, die sog. V_β-, J- oder D- Segmente, sind keine Bindungsstellen für SEs. Da nur T- Lymphozyten mit einer bestimmten V_β-Kette des TZR durch bestimmte SEs stimulierte werden, bezeichnet man die Toxine als Antigene und nicht als Mitogene. The binding affinity of enterotoxins to various MHC-II proteins in humans is different. Most SEs bind preferentially to HLA-DR, less strongly to DQ and practically not at all to DP (4). The reason for the massive, as opposed to lectins such as concanavalin A but limited T-cell stimulation is the specific binding of the SEs to the outside of the V _β chain of the T cell receptor (TCR). The other components of the T cell receptor, the so-called V _β , J or D segments, are not binding sites for SEs. Since only T lymphocytes with a certain V _β chain of the TZR are stimulated by certain SEs, the toxins are called antigens and not mitogens.

Da jedoch die Zahl der zirkulierenden T-Zellen, die durch ein bestimmtes Toxin stimuliert werden können, deutlich größer ist als die Zahl der T-Lymphozyten, die für ein konventionelles Antigen spezifisch sind, werden SEs als "Superantigene" bezeichnet (1). However, since the number of circulating T cells caused by one certain toxin can be stimulated is significantly larger than the number of T lymphocytes required for a conventional Antigen specific, SEs are called "superantigens" designated (1).

Je nach Häufigkeit der V_β-Populationen können in vivo 5-30% des zirkulierenden T-Zell-Repertoires durch bakterielle Superantigene stimuliert werden (5). Diese T-Zell-Stimulation induziert eine Fülle komplexer pathophysiologischer Mechanismen, die zur Zeit noch nicht vollständig aufgeklärt sind. Im Tiermodell, aber auch beim Menschen, führt die Intoxikation mit Superantigenen zu systemischen Reaktionen, die von Fieber bis zum kardiovaskulären Schock reichen können (4). Tabelle 1 zeigt die durch Enterotoxine von S. aureus induzierten immunologischen Reaktionen. Diese Reaktionen werden wahrscheinlich durch komplexe immunologische Vorgänge ausgelöst. Die Bindung der Toxine an den MHC-II-Komplex und den TZR führt zur Proliferation, Freisetzung von Zytokinen und anderen Mediatoren und zur Antikörperproduktion (Tabelle 1). Ausserdem wird das "cutaneous lymphocyte-associated antigen" (CLA), das die Rezirkulation von T-Zellen in die Haut steuert, verstärkt exprimiert (6). Tab. 1 Durch S. aureus Enterotoxine induzierte immunologische Reaktionen

Depending on the frequency of the V _β populations, 5-30% of the circulating T cell repertoire can be stimulated in vivo by bacterial superantigens (5). This T cell stimulation induces an abundance of complex pathophysiological mechanisms that are not yet fully understood. In animal models, but also in humans, intoxication with superantigens leads to systemic reactions that can range from fever to cardiovascular shock (4). Table 1 shows the immunological reactions induced by S. aureus enterotoxins. These reactions are likely to be triggered by complex immunological processes. The binding of the toxins to the MHC-II complex and the TZR leads to proliferation, release of cytokines and other mediators and to antibody production (Table 1). In addition, the "cutaneous lymphocyte-associated antigen" (CLA), which controls the recirculation of T cells into the skin, is increasingly expressed (6). Tab. 1 Immunological reactions induced by S. aureus enterotoxins

Nach dieser hyperreaktiven Phase gehen die Superantigenstimulierten T-Zellen in einen anergischen Zustand über, so daß es zu einer massiven Immunsuppression kommen kann. Andererseits können autoreaktive, aber anerge T-Zellen aktiviert werden, die dann Autoimmunkrankheiten auslösen. Bei der multiplen Sklerose (7) und der rheumatoiden Arthritis (8) wurde bereits eine oligoklonale Selektion bestimmter V_β-Ketten nachgewiesen, die auf einen Superantigen-vermittelten Pathomechanismus dieser Erkrankungen hindeutet. After this hyper-reactive phase, the superantigen-stimulated T cells change into an anergic state, so that massive immunosuppression can occur. On the other hand, autoreactive but anergic T cells can be activated, which then trigger autoimmune diseases. In multiple sclerosis (7) and rheumatoid arthritis (8), an oligoclonal selection of certain V _β chains has already been demonstrated, which indicates a superantigen-mediated pathomechanism of these diseases.

Darüber hinaus konnte gezeigt werden, daß SEB die IgE Synthese und die Produktion von Interleukin-4 bei Patienten mit atopischem Ekzem verstärkt (9, 10, 11). Ausserdem konnte eine ekzemauslösende Wirkung für SEB im Epikutantest nachgewiesen werden (12). In addition, it could be shown that SEB is the IgE synthesis and the production of interleukin-4 in patients with atopic eczema increased (9, 10, 11). In addition, one Eczema-triggering effect for SEB demonstrated in the patch test be (12).

Das atopische Ekzem gehört wie die allergische Rhinokonjunktivitis und das allergische Asthma bronchiale zu den Erkrankungen bei denen eine pathologisch verstärkte IgE Synthese auftritt. Diese Erkrankungen sind bisher nur symptomatisch zu behandeln, d. h. die Unterdrückung der IgE Synthese erfolgt unspezifisch durch die Suppression der an der Synthese beteiligten T-Lymphozyten. Die am häufigsten systemisch eingesetzten Medikamente sind dabei Cortison oder Cyclosporin A. Diese Substanzen bewirken häufig sehr schwere systemische Nebenwirkungen (Hautatrophie, Diabetes, Hypertonie, Nieren- und Hepatotoxizität u. a.). Durch eine spezifische Modulation der überhöhten IgE Synthese würden sich derart schwere Nebenwirkungen vermeiden lassen. Das gleiche gilt auch für Erkrankungen, die mit einer vermehrten Interferon-gamma Synthese der Lymphozyten einhergeht. Ein gutes Beispiel für einen solchen Zustand stellt die Psoriasis vulgaris dar. Bei dieser Erkrankung produzieren T-Zellen vermehrt Interferon-gamma und induzieren dadurch die Hyperproliferation der Epidermis. Zur Therapie der Psoriasis werden ebenfalls Immunsuppressiva wie Cortison oder Cyclosporin A zur Therapie verwendet. Die selektive Hemmung der Zytokinproduktion würde in diesem Fall ebenfalls die Nebenwirkungsrate deutlich verringern. Atopic eczema belongs just like allergic ones Rhinoconjunctivitis and allergic bronchial asthma Diseases in which a pathologically enhanced IgE synthesis occurs. So far, these diseases are only symptomatic treat, d. H. IgE synthesis is suppressed unspecific by the suppression of the synthesis involved T lymphocytes. The most common systemic Medicines used are cortisone or cyclosporin A. These Substances often cause very severe systemic Side effects (skin atrophy, diabetes, hypertension, kidney and Hepatotoxicity and a.). Through a specific modulation of the excessive IgE synthesis would cause such severe side effects avoid. The same also applies to diseases that with an increased interferon-gamma synthesis of the lymphocytes accompanied. A good example of such a condition represents psoriasis vulgaris. In this disease increasingly produce and induce interferon-gamma T cells thereby the hyperproliferation of the epidermis. For the therapy of Psoriasis are also immunosuppressive drugs such as cortisone or Cyclosporin A used for therapy. The selective inhibition cytokine production would also be the same in this case Significantly reduce side effects.

Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist daher die Bereitstellung eines neuen Wirkstoffs, der sich zur Behandlung von Erkrankungen eignet, die durch einen erhöhten IgE-Spiegel und/oder eine verstärkte Interferon-gamma-Produktion charakterisiert sind und der die im Stand der Technik bekannten Nachteile nicht aufweist. The object of the present invention is therefore Providing a new active ingredient that is used to treat Diseases caused by an elevated IgE level and / or increased interferon gamma production are characterized and those known in the prior art Does not have disadvantages.

Im Rahmen der vorliegenden Erfindung wurde nunmehr überraschenderweise festgestellt, daß sich aus dem natürlich vorkommenden S. aureus Enterotoxin B (SEB) ein Peptid isolieren läßt, welches in der Lage ist, spezifisch IgE-Antikörper zu binden. Dabei unterscheiden sich seine immunmodulatorischen Eigenschaften überraschenderweise erheblich von denen des bakteriellen SEB. Das erfindungsgemäße Peptid, dessen Aminosäuresequenz in SEQ ID NO: 10 dargestellt ist, induziert im Gegensatz zu SEB überraschenderweise keine Proliferation von T- Zellen und hemmt aber andererseits die Interferon-gamma Synthese stimulierter T-Lymphozyten. Aufgrund seiner Eigenschaften ist das Peptid für die Therapie von Erkrankungen geeignet, die durch die erhöhte Serum-IgE Spiegel und/oder vermehrte Produktion von Interferon-gamma charakterisiert sind. Vorzugsweise handelt es sich bei den Erkrankungen um die allergische Rhinokonjunktivitis, das allergische Asthma bronchiale sowie die Psoriasis vulgaris. Within the scope of the present invention surprisingly found that of course isolate occurring S. aureus enterotoxin B (SEB) a peptide which is able to specifically IgE antibodies tie. Its immunomodulatory differ Properties surprisingly significantly different from those of the bacterial SEB. The peptide according to the invention, the Amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 10 induced in In contrast to SEB, surprisingly no proliferation of T- Cells and on the other hand inhibits the interferon gamma Synthesis of stimulated T lymphocytes. Because of his Properties, the peptide is suitable for the therapy of diseases, which is caused by the increased serum IgE levels and / or increased Production of interferon-gamma are characterized. The diseases are preferably allergic Rhinoconjunctivitis, allergic bronchial asthma as well the psoriasis vulgaris.

Neben dem erfindungsgemäßen Peptid wurden weitere Peptide hergestellt, die dieselben oder im wesentlichen dieselben biologischen und/oder immunologischen Eigenschaften aufweisen. Aufgrund ihrer besonderen Eigenschaften, d. h. Bindung von IgE- Antikörpern und Hemmung der Interferon-gamma-Synthese ohne Induktion der T-Zell-Proliferation, sind die erfindungsgemäßen Peptide besonders zur Behandlung von Erkrankungen geeignet, die mit einer erhöhten IgE-Synthese und vermehrter Interferongamma Synthese einhergehen, wie es zum Beispiel beim atopischen Ekzem (Neurodermitis) der Fall ist. Dieser Zustand ist bei der chronischen Verlaufsform des atopischen Ekzems beschrieben worden. Dabei finden sich vermehrt Interferon-gamma produzierende T-Lymphozyten in der Haut und erhöhte Serum-IgE- Werte. Die therapeutische Wirkung der Peptide könnte entweder direkt durch eine inaktivierende Bindung an das IgE erfolgen oder aber indirekt durch die Modulierung der Zytokinproduktion der T-Lymphozyten. In diesem Zusammenhang kommt auch die Hemmung weiterer Zytokine wie IL-4 und IL-13 in Betracht, von denen bekannt ist, daß sie die IgE-Synthese stimulieren. In addition to the peptide according to the invention, other peptides made the same or substantially the same have biological and / or immunological properties. Because of their special properties, i. H. Binding of IgE Antibodies and inhibition of interferon-gamma synthesis without Induction of T cell proliferation are those of the invention Peptides particularly suitable for the treatment of diseases, those with increased IgE synthesis and increased Interferon gamma synthesis go hand in hand, for example with atopic eczema (neurodermatitis) is the case. That state is in the chronic course of atopic eczema have been described. Interferon gamma is increasingly found producing T lymphocytes in the skin and increased serum IgE Values. The therapeutic effects of the peptides could either directly by inactivating binding to the IgE or indirectly by modulating cytokine production of T lymphocytes. In this context comes the Inhibition of other cytokines such as IL-4 and IL-13 into consideration which are known to stimulate IgE synthesis.

Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist daher ein Polypeptid, das die N-terminale Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO: 15 aufweist und durch Trypsin-Spaltung von S. aureus Enterotoxin B als 12 kD Spaltfragment erhältlich ist. The subject of the present invention is therefore a Polypeptide that contains the N-terminal amino acid sequence according to SEQ ID NO: 15 and by trypsin cleavage of S. aureus enterotoxin B is available as a 12 kD fragment.

Insbesondere betrifft die Erfindung ein Polypeptid (im folgenden als Peptid P1 bezeichnet), das die in SEQ ID NO: 10 angegebene Aminosäuresequenz aufweist und das in-vitro die Synthese von Interferon-gamma durch stimulierte T-Lymphozyten hemmt. In particular, the invention relates to a polypeptide (in hereinafter referred to as peptide P1), which the in SEQ ID NO: 10 has specified amino acid sequence and in vitro the synthesis of interferon-gamma inhibited by stimulated T lymphocytes.

Ferner umfaßt die vorliegende Erfindung Homologe und Derivate der vorgenannten Polypeptide, die an IgE binden. Bei den homologen Polypeptiden handelt es sich um solche Substanzen, die sich aber von den vorgenannten Aminosäuresequenzen, insbesondere von der Sequenz gemäß SEQ ID NO: 10, infolge des Austauschs einer oder mehrerer Aminosäuren oder durch Insertion oder Deletion einer oder mehrerer Aminosäuren unterscheiden, wobei sie eine Sequenzhomologie von etwa 50 bis 99%, vorzugsweise von mindestens etwa 75% aufweisen. Eine Sequenzhomologie von mindestens 85% ist besonders bevorzugt. Unter einem Derivat werden erfindungsgemäß solche Polypeptide verstanden, bei denen eine oder mehrere Aminosäuren der vorgenannten Sequenzen, insbesondere der Sequenz gemäß SEQ ID NO: 10, durch eine entsprechende, modifizierte Aminosäure ausgetauscht sind. Unter modifizierten Aminosäuren werden solche Aminosäuren verstanden, deren Seitenketten im Vergleich zu natürlich vorkommenden Aminosäuren chemisch verändert sind, beispielsweise durch Glykosylierung, Phosphorylierung, Methylierung usw. Derartige Modifikationen sind dem Fachmann wohlbekannt. Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung weisen die Homologen und Derivate, die IgE binden, die selben oder im wesentlichen dieselben Eigenschaften auf wie das vorgenannte Peptid gemäß SEQ ID NO: 10, d. h., daß sie die in-vitro die Synthese von Interferon-gamma stimulierter T-Lymphozyten hemmen und/oder daß sie die Proliferation von T-Lymphozyten nicht induzieren. The present invention further includes homologs and derivatives of the aforementioned polypeptides that bind to IgE. Both homologous polypeptides are those substances that but different from the aforementioned amino acid sequences, in particular from the sequence according to SEQ ID NO: 10, as a result of the Exchange of one or more amino acids or by insertion or distinguish deletion of one or more amino acids, with a sequence homology of about 50 to 99%, preferably have at least about 75%. A Sequence homology of at least 85% is particularly preferred. Under According to the invention, such a derivative becomes such polypeptides understood, in which one or more amino acids of the aforementioned Sequences, in particular the sequence according to SEQ ID NO: 10 a corresponding, modified amino acid are exchanged. Modified amino acids include such amino acids understood whose side chains compared to natural occurring amino acids are chemically changed, for example through glycosylation, phosphorylation, methylation, etc. Such modifications are well known to those skilled in the art. According to a preferred embodiment of the invention Homologs and derivatives that bind IgE, the same or in the essentially the same properties as the aforementioned Peptide according to SEQ ID NO: 10, d. that is, they are the in vitro the Inhibit synthesis of interferon-gamma stimulated T lymphocytes and / or that they do not proliferate T lymphocytes induce.

Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung weist das Homologe die in SEQ ID NO: 11 angegebene Aminosäuresequenz auf. According to a preferred embodiment of the invention the homologue is the amino acid sequence given in SEQ ID NO: 11 on.

Die Erfindung schließt auch Polypeptide mit einer Länge von mehr als 9 Aminosäuren ein, die die in SEQ ID NO: 10 oder 11 angegebene Aminosäuresequenz enthalten und die in-vitro die Synthese von Interferon-gamma durch stimulierte T-Lymphozyten hemmt. The invention also includes polypeptides of length more than 9 amino acids which are those in SEQ ID NO: 10 or 11 contain specified amino acid sequence and the in vitro the Synthesis of interferon gamma by stimulated T lymphocytes inhibits.

Ferner betrifft die Erfindung ein Nukleinsäuremolekül, das eine für ein vorgenanntes Polypeptid kodierende Nukleinsäuresequenz enthält. Vorzugsweise weist es die in SEQ ID NO: 9 angegebene Nukleinsäuresequenz auf. Das Nukleinsäuremolekül kann verwendet werden, um die Sequenz in einen Expressionsvektor einzuklonieren und das erfindungsgemäße Peptid rekombinant herzustellen. Diese Methoden sind dem Fachmann wohlbekannt. The invention further relates to a nucleic acid molecule which one encoding a aforementioned polypeptide Contains nucleic acid sequence. It preferably has the one in SEQ ID NO: 9 specified nucleic acid sequence. The nucleic acid molecule can used to convert the sequence into an expression vector to be cloned and the peptide according to the invention recombinantly manufacture. These methods are well known to those skilled in the art.

Gegenstand der Erfindung ist ferner die Verwendung eines Polypeptids, das die Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO: 10 aufweist oder enthält, zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Immunmodulation und zur Hemmung der Zytokinproduktion von Lymphozyten, insbesondere T-Lymphozyten. Eingeschlossen ist ferner die Verwendung eines solchen Polypeptids zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Behandlung von Erkrankungen, die mit einer verstärkten Produktion von Zytokinen (wie z. B. Interferon-gamma) und/oder einem erhöhten Spiegel von IgE-Antikörpern einhergehen. Bei den Ekrankungen handelt es sich insbesondere um Atopisches Ekzem (insbesondere in der chronischen Verlaufsform), Asthma bronchiale, Rhinokonjunktivitis allergica, Psoriasis, Rheumatoide Arthritis oder Multiple Sklerose. Gemäß einer besonderen Ausführungsform handelt es sich bei dem Zytokin um Interferon-gamma, Interleukin-4 (IL-4), Interleukin-5 (IL-5), Interleukin-10 (IL-10), Interleukin-12 (IL-12) und/oder Interleukin-13 (IL- 13). The invention also relates to the use of a Polypeptide which has the amino acid sequence according to SEQ ID NO: 10 or contains, for the manufacture of a pharmaceutical Composition for immunomodulation and inhibition of Cytokine production by lymphocytes, especially T lymphocytes. The use of such a polypeptide is also included Manufacture of a pharmaceutical composition for Treatment of diseases with increased production of cytokines (such as interferon gamma) and / or one associated with increased levels of IgE antibodies. Both Diseases are atopic eczema in particular (especially in the chronic form), bronchial asthma, Allergic rhinoconjunctivitis, psoriasis, rheumatoid Arthritis or multiple sclerosis. According to a special one Embodiment, the cytokine is interferon-gamma, Interleukin-4 (IL-4), Interleukin-5 (IL-5), Interleukin-10 (IL-10), Interleukin-12 (IL-12) and / or Interleukin-13 (IL- 13).

Die vorliegende Erfindung schließt die Verwendung eines oben beschriebenen Polypeptids ein, das eine zu SEQ ID NO: 10 homologe oder davon abgeleitete Aminosäuresequenz aufweist. Hinsichtlich der homologen oder davon abgeleiteten Sequenzen wird auf die obige Definion der "Homologen" und "Derivate" Bezug genommen, wobei insbesondere solche IgE-bindenden Polypeptide eingeschlossen sind, die die Proliferation von T-Lymphozyten nicht induzieren und/oder in-vitro die Synthese von Interferon-gamma durch stimulierte T-Lymphozyten hemmen. Gemäß einer besonderen Ausführungsform der Erfindung weist das verwendete Polypeptid die Sequenz gemäß SEQ ID NO: 11 auf. Soweit die Erfindung die Verwendung von Polypeptiden betrifft, die die Sequenz gemäß SEQ ID NO: 10 oder SEQ ID NO: 11 oder dazu homologe oder davon abgeleitete Sequenzen mit den selben oder im wesentlichen den selben biologischen oder immunologischen Eigenschaften als Teil einer längeren Aminosäuresequenz enthalten, sind Polypeptide mit einer Länge von bis zu 30 Aminosäuren, insbesondere mit einer Länge von bis zu 15 Aminosäuren, bevorzugt. The present invention includes the use of one above a polypeptide described which is one of SEQ ID NO: 10 has homologous or derived amino acid sequence. Regarding the homologous or derived sequences refer to the above definition of "homologues" and "derivatives" taken, in particular those IgE-binding polypeptides which include the proliferation of T lymphocytes do not induce and / or in vitro the synthesis of Inhibit interferon gamma by stimulated T lymphocytes. According to a particular embodiment of the invention shows that used polypeptide the sequence according to SEQ ID NO: 11. So far the Invention relates to the use of polypeptides that Sequence according to SEQ ID NO: 10 or SEQ ID NO: 11 or more homologous or derived sequences with the same or in essentially the same biological or immunological Contain properties as part of a longer amino acid sequence, are polypeptides with a length of up to 30 amino acids, in particular with a length of up to 15 amino acids, prefers.

Aufgrund seiner besonderen biologischen Eigenschaften eignen sich die erfindungsgemäßen Polypeptide zur in-vitro Hemmung der Interferon-gamma-Produktion in Lymphozyten, insbesondere in humanen, periphären T-Lymphozyten des Blutes. Suitable due to its special biological properties the polypeptides according to the invention for in vitro inhibition interferon gamma production in lymphocytes, in particular in human peripheral blood T lymphocytes.

Die Erfindung betrifft ferner eine pharmazeutische Zusammensetzung, die als Wirkstoff ein oder mehrere erfindungsgemäße Polypeptide und gegebenenfalls ferner einen oder mehrere pharmazeutisch verträgliche Hilfs- und/oder Trägerstoffe enthält. The invention further relates to a pharmaceutical Composition containing as active ingredient one or more of the invention Polypeptides and optionally one or more contains pharmaceutically acceptable auxiliaries and / or carriers.

Das aus SEB erhaltene Peptid ist dadurch erhältlich, daß man Enterotoxin B aus S. aureus mit Trypsin verdaut und man anschließend das 12 kD-Fragment aus dem Reaktionsansatz isoliert. Alternativ sind selbstverständlich auch gentechnische Methoden der Herstellung möglich, indem man die in SEQ ID NO: 9 gezeigte Nukleinsäuresequenz in einen Expressionsvektor einbringt, man diesen in geeignete Wirtszellen einführt, man die Wirtszellen unter Bedingungen kultiviert, die zur Proteinexpression geeignet sind und man das exprimierte Polypeptid, das von der Nukleinsäuresequenz kodiert wird, isoliert. The peptide obtained from SEB can be obtained by Enterotoxin B from S. aureus digested with trypsin and one then the 12 kD fragment from the reaction mixture isolated. Alternatives are of course also genetic engineering Manufacturing methods possible by following the procedures in SEQ ID NO: 9 shown nucleic acid sequence into an expression vector introduces this into suitable host cells, the Host cells are cultivated under conditions that lead to Protein expression are suitable and the expressed polypeptide that is encoded by the nucleic acid sequence.

Die Erfindung wird im folgenden anhand von Beispielen, einem Sequenzprotokoll und Figuren veranschaulicht. The invention is based on examples, one Sequence listing and figures illustrated.

EXAMPLES example 1 Immunoblot for the detection of specific IgE Antibodies against SEB

Die gelelektrophoretische Auftrennung von Proteinen (SDS/PAGE) wurde nach der Methode von Lughtenberg et al. (13) durchgeführt. Es wurden 12,5% Polyacrylamid-Trenngele verwendet. Zur Bestimmung der Molekulargewichte wurden Standardproteingemische (Fa. Biorad, MW-Standard, 203 kD-7,5 kD) parallel aufgetrennt. Die Färbung der Proteine erfolgte mit Coomassie-Blue G-250. Im Sammelgel standen 10 Taschen zur Probenaufnahme bereit, wobei die eingesetzte Proteinmenge zwischen 10 und 100 µg lag. Die aufzutrennende Proteinlösung (20 µl) wurde mit 20 µl Probenpuffer gemischt, in die Sammelgeltaschen gefüllt und anschließend mit Elektrodenpuffer überschichtet. Die Elektrophorese wurde in Elektrodenpuffer und bei einem konstanten Stromfluß von 20 mA durchgeführt. Wenn die Bromphenolblau- Bande das Ende des Trenngels erreicht hatte (Laufzeit bis zu 2 h), wurde die Elektrophorese beendet. Die zu untersuchenden Proteingemische wurden gelelektophoretisch (SDS/PAGE) aufgetrennt und im Western-Blot-Verfahren auf Nitrozellulose (Porengröße 0,45 Mm) transferiert. Der Transfer erfolgte unter Kühlung in einer Elektro-Blot-Kammer (BioRad, München) unmittelbar nach der Gelelektrophorese für 18-20 h bei einer konstanten Stromstärke von 0,2-0,3 A. Gel electrophoretic separation of proteins (SDS / PAGE) was carried out according to the method of Lughtenberg et al. (13) carried out. 12.5% polyacrylamide release gels were used. to Molecular weights were determined Standard protein mixtures (Biorad, MW standard, 203 kD-7.5 kD) in parallel separated. The proteins were stained with Coomassie-Blue G-250. There were 10 bags in the collection gel for sample collection ready, the amount of protein used between 10 and 100 µg was. The protein solution to be separated (20 µl) was mixed with 20 µl Sample buffer mixed, filled in the collection gel pockets and then covered with an electrode buffer. The Electrophoresis was carried out in electrode buffer and at a constant Current flow of 20 mA carried out. If the bromophenol blue Band had reached the end of the separating gel (running time up to 2 h), electrophoresis was ended. The ones to be examined Protein mixtures were gel electophoretically (SDS / PAGE) separated and in the Western blot method on nitrocellulose (Pore size 0.45 mm) transferred. The transfer took place under Cooling in an electro blot chamber (BioRad, Munich) immediately after gel electrophoresis for 18-20 h at one constant current of 0.2-0.3 A.

Die Nitrozellulose-Blots wurden mit humanem Serum für 4 h auf einem Schwenktisch bei RT inkubiert (Dianova, Hamburg). Anschließend wurden die Blots fünfmal gewaschen und dann erneut für 4 h bei RT mit einem sekundären Antikörper gegen humanes IgE (anti-human-IgE-Antikörper, Fa. Serva, Heidelberg) inkubiert und die Bindung durch eine enzymatische Farbreaktion sichtbar gemacht. The nitrocellulose blots were made up with human serum for 4 h incubated at a swivel table at RT (Dianova, Hamburg). The blots were then washed five times and then again for 4 h at RT with a secondary antibody against human IgE (anti-human-IgE antibody, Serva, Heidelberg) incubated and binding by an enzymatic color reaction made visible.

Das Ergebnis des Immunoblots ist in Fig. 1 dargestellt. Mit Hilfe des Immunoblots konnten in Seren von Patienten mit atopischem Ekzem spezifische IgE-Antikörper gegen SEB nachgewiesen werden. The result of the immunoblot is shown in FIG. 1. With the help of the immunoblot, specific IgE antibodies against SEB could be detected in sera from patients with atopic eczema.

In den Immunoblots wurden Peroxidase markierte Antikörper verwendet. Es ist darauf hinzuweisen, daß das in Fig. 1 dargestellte Ergebnis des Blots (in eingescannter Form) nicht den tatsächlichen, mit bloßem Auge erkennbaren Farbabstufungen entspricht. Die als Schatten zu erkennenden Banden sind auf dem Originalblot so schwach gegenüber den mit Atopikerseren inkubierten Banden, daß sie als unspezifische Reaktionen gewertet werden müssen. Peroxidase-labeled antibodies were used in the immunoblots. It should be pointed out that the result of the blot (in scanned form) shown in FIG. 1 does not correspond to the actual color gradations which can be seen with the naked eye. The bands to be recognized as shadows on the original blot are so weak compared to the bands incubated with atopic sera that they have to be considered as non-specific reactions.

Example 2 Cleavage of SEB with trypsin

SEB (100 µg/100 µl) wurde mit 10 µl Trypsin (4 mg/ml Aqua dest.) über 18 h bei 37°C enzymatisch verdaut. Die Lösung wurde anschließend auf SDS-Gele aufgetragen und die entsprechenden Spaltprodukte getrennt. Die Bedingungen für die Gelelektrophorese entsprachen den in Beispiel 1 angegebenen Bedingungen. Die Spaltprodukte wurden im Immunoblot mit Seren der in Beispiel 1 genannten Patienten mit atopischem Ekzem inkubiert. Als Kontrolle diente Serum von gesunden Kontrollpersonen. Das Ergebnis des Trypsinverdaus ist in Fig. 2 dargestellt. SEB (100 µg / 100 µl) was digested enzymatically with 10 µl trypsin (4 mg / ml aqua dest.) Over 18 h at 37 ° C. The solution was then applied to SDS gels and the corresponding cleavage products separated. The conditions for the gel electrophoresis corresponded to the conditions given in Example 1. The cleavage products were incubated in the immunoblot with sera from the patients with atopic eczema mentioned in Example 1. Serum from healthy control persons served as a control. The result of the trypsin digestion is shown in Fig. 2.

Nach Trypsinspaltung fand sich ein ca. 12 kD großes Spaltprodukt mit dem das IgE aus dem Serum der Patienten mit atopischem Ekzem eine im Immunoblot nachweisbare Bindung einging (Fig. 2). Der Nachweis erfolgte wie in Beispiel 1 beschrieben mit dem anti-human-IgE-Antikörper (Fa. Serva, Heidelberg). After trypsin cleavage, an approximately 12 kD cleavage product was found, with which the IgE from the serum of the patients with atopic eczema entered into a bond which was detectable in the immunoblot ( FIG. 2). The detection was carried out as described in Example 1 with the anti-human IgE antibody (from Serva, Heidelberg).

Example 3 Sequencing of the IgE-binding cleavage product

Das als IgE-bindend identifizierte Spaltprodukt mit einem Molekulargewicht von ca. 12 kD wurde aus dem Gel eluiert und anschließend maschinell nach der Methode von P. Edman (14) sequenziert, wobei die N-terminale Sequenz KVTAQELDYL ermittelt wurde. Die Sequenzanalyse ergab somit eine Sequenz, die an Position 181 (vom N-terminalen Ende) des SEB Moleküls beginnt. Fig. 3 zeigt das Ergebnis der Sequenzanalyse. The cleavage product with a molecular weight of approx. 12 kD identified as IgE-binding was eluted from the gel and then sequenced mechanically according to the method of P. Edman (14), the N-terminal sequence KVTAQELDYL being determined. Sequence analysis thus revealed a sequence starting at position 181 (from the N-terminal end) of the SEB molecule. Fig. 3 shows the result of sequence analysis.

Example 4 Synthesis of short pentides

Ausgehend von der ansequenzierten Sequenz des 12 kD- Spaltproduktes wurden mehrere Peptide mit überlappenden Sequenzen vor und nach dem ansequenzierten Bereich hergestellt:

[Amerkung: die verwendete "SEQ ID NO:" entspricht der Sequenzkennzahl <400> gemäß WIPO-Standard ST.25.] Starting from the sequenced sequence of the 12 kD cleavage product, several peptides with overlapping sequences were produced before and after the sequenced area:

[Note: the "SEQ ID NO:" used corresponds to the sequence number <400> according to WIPO standard ST.25.]

Die Peptide mit den Sequenzen (a) bis (h) wurden dann wie in Beispiel 4 beschrieben getestet. Das Peptid (c) zeigte neben dem 12 kD-Spaltprodukt als einziges eine IgE Bindung. The peptides with the sequences (a) to (h) were then as in Example 4 described tested. The peptide (c) showed next to the 12 kD cleavage product is the only one with an IgE binding.

Die sequenzierte Aminosäuresequenz des Peptids (c) wurde mit Hilfe einer Datenbank (SwissProt) auf mögliche Homologien mit anderen bekannten Molekülen verglichen. Dabei stellte sich heraus, daß zwischen der IgE-bindenden Sequenz des Peptids und einer Aminosäuresequenz der extrazellulären Domäne des humanen niedrig-affinen IgE-Rezeptors (CD23) eine Homologie von 89% besteht (vgl. Fig. 4). Mit Hilfe des Smith-Waterman Algorithmus konnte die Homologie zwischen SEB und CD23 als signifikant (p = 0.03) errechnet werden. The sequenced amino acid sequence of the peptide (c) was compared using a database (SwissProt) for possible homologies with other known molecules. It was found that there is 89% homology between the IgE-binding sequence of the peptide and an amino acid sequence of the extracellular domain of the human low-affinity IgE receptor (CD23) (cf. FIG. 4). Using the Smith-Waterman algorithm, the homology between SEB and CD23 could be calculated as significant (p = 0.03).

Daraufhin wurden zwei weitere Peptide synthetisiert, die die Sequenz QELDYLTRH (P1; SEQ ID NO: 10) und QEEDFLTLH (P2; SEQ ID NO: 11; entsprechend der homologen Sequenzabschnitt aus dem CD23-Molekül) aufwiesen. Thereupon two further peptides were synthesized, which the Sequence QELDYLTRH (P1; SEQ ID NO: 10) and QEEDFLTLH (P2; SEQ ID NO: 11; corresponding to the homologous sequence section from the CD23 molecule).

Diese beiden Peptide wurden dann in den weiteren Experimenten zur Stimulation der Lymphozyten eingesetzt (vgl. Beispiel 4). These two peptides were then used in the further experiments used to stimulate the lymphocytes (see Example 4).

Example 4 Immunomodulatory properties of the peptide

Periphere Blutlymphozyten (PBMC) von gesunden freiwilligen Spendern wurden über einen Ficollgradienten isoliert und in einer Konzentration von 10⁶ Zellen/ml in RPMI 1640 Medium + 10% FCS (Fötales Kälberserum) kultiviert. Als Stimuli wurden SEB (1 µg/10⁶ Zellen) und das Peptid (5 µg/10⁶ Zellen) verwendet. Die Proliferation der Zellen und die intrazelluläre Produktion von Interferon-gamma und Interleukin 4 wurde durchflußzytometrisch nach 2 Tagen Inkubation bei 37°C und 5% CO₂ gemessen. Nachdem die peripheren Blutlymphozyten über eine Ficoll-Paque Gradientenzentrifugation isoliert wurden, wurde die Zellzahl auf 2 × 10⁶ Zellen/ml eingestellt. Die Zellen wurden in konischen 15 ml Polypropylen Gefäßen aufgenommen und dann im Brutschrank für 2 Tage inkubiert. Für die Proliferation wurden die PBMC in den letzten 5 h der Inkubationszeit mit 60 µM Bromodeoxyuridin (BrdU) inkubiert. Für die Messung der intrazellulären Zytokine wurde für die letzten 5 h Brefeldin A (BFA, 20 µl/1 ml PBMC) hinzugegeben. Dann wurden 20 mM EDTA (100 µl/1 ml PBMC) hinzugegeben und dabach 10 ml kaltes PBS. Nach Zentrifugation wurden 3 ml "FACS Lysing Solution" (BD Bioscience, Heidelberg) zu den Zellen gegeben und nach einem Waschschritt die (FACS Pemeabilisierungs Lösung, BD Bioscience, Heidelberg). Anschließend wurden zum Zellpellet Anti-BrdU-FITC Antikörper mit DNase (Proliferation) oder anti-Zytokin Antikörper (intrazelluläre Zytokinbestimmung) hinzugegeben und für 30 min inkubiert. Anschließend wurden die Zellen gewaschen und mit 200 µl 1%igen Paraformaldehyd fixiert. Die Fluoreszenz wurde am Durchflußzytometer (FACScan, BD Bioscience) gemessen und ausgewertet. Peripheral blood lymphocytes (PBMC) from healthy voluntary donors were isolated via a Ficoll gradient and cultured in a concentration of 10 ⁶ cells / ml in RPMI 1640 medium + 10% FCS (fetal calf serum). SEB (1 ug / 10 ⁶ cells) and the peptide (5 ug / 10 ⁶ cells) were used as stimuli. The proliferation of the cells and the intracellular production of interferon-gamma and interleukin 4 were measured by flow cytometry after 2 days of incubation at 37 ° C. and 5% CO ₂ . After the peripheral blood lymphocytes were isolated by a Ficoll-Paque gradient centrifugation, the cell number was adjusted to 2 × 10 ⁶ cells / ml. The cells were taken up in conical 15 ml polypropylene tubes and then incubated in the incubator for 2 days. For proliferation, the PBMC were incubated with 60 µM bromodeoxyuridine (BrdU) in the last 5 h of the incubation period. For the measurement of the intracellular cytokines, Brefeldin A (BFA, 20 µl / 1 ml PBMC) was added for the last 5 h. Then 20 mM EDTA (100 µl / 1 ml PBMC) was added, followed by 10 ml of cold PBS. After centrifugation, 3 ml of "FACS Lysing Solution" (BD Bioscience, Heidelberg) were added to the cells and, after a washing step, the (FACS pemeabilization solution, BD Bioscience, Heidelberg). Anti-BrdU-FITC antibodies with DNase (proliferation) or anti-cytokine antibodies (intracellular cytokine determination) were then added to the cell pellet and incubated for 30 min. The cells were then washed and fixed with 200 μl of 1% paraformaldehyde. The fluorescence was measured and evaluated on the flow cytometer (FACScan, BD Bioscience).

Die Proliferation wurde durch den Einbau von BrdU in Lymphozyten am Durchflußzytometer bestimmt. Dabei zeigte sich, daß das Peptid alleine keine Proliferation der Lymphozyten induzieren konnte und auch nicht die SEB induzierte Proliferation hemmt (Fig. 5). Wie sich in Fig. 5 erkennen läßt, führt weder die Stimulation der Lymphozyten mit dem Peptid P1 alleine noch die Kostimulation mit SEB + Peptid P1 zu einer Veränderung der Lymphozytenproilferation. Das bedeutet, daß das Peptid P1 (ebenso wie die Peptide (c) und P2) keine Enterotoxin ähnlichen Effekte auf das Immunsystem induziert. The proliferation was determined by the incorporation of BrdU in lymphocytes on the flow cytometer. It was found that the peptide alone could not induce proliferation of the lymphocytes and also did not inhibit the SEB-induced proliferation ( FIG. 5). As can be seen in FIG. 5, neither stimulation of the lymphocytes with the peptide P1 alone nor costimulation with SEB + peptide P1 leads to a change in the lymphocyte proliferation. This means that peptide P1 (like peptides (c) and P2) does not induce enterotoxin-like effects on the immune system.

Der Nachweis der Interferon-gamma Produktion nach Inkubation mit dem Peptid ergab, daß das Peptid die Produktion von Interferon-gamma hemmt (Abb. 6), einem Zytokin, das eine Vielzahl von immunologischen Funktionen vermittelt. Zum Beispiel induziert Interferon-gamma bei der Psoriasis die Hyperproliferation der Epidermis. Insbesondere läßt sich der Graphik entnehmen, daß das Peptid sowohl die spontane als auch die SEB induzierte Interferon-gamma Synthese von Lymphozyten signifikant hemmt. Literaturhinweise 1. Marrack P, Kappler J (1990) The staphylococcal enterotoxins and their relatives. Science 248: 705
2. Fleischer B, Schrezenmeier H (1988) T cell stimulation by staphylococcal enterotoxins. Clonally variable response and requirement for major histocompatibility complex class II molecules an accessory or target cells. J Exp Med 167: 1697
3. Herrmann T, Baschieri S, Lees RK, MacDonald HR (1992) In vivo response of CD4+ and CD8+ cells to bacterial superantigens. Eur J Immunol 22: 1935
4. Fleischer B (1991) Stimulation des Immunsystems durch mikrobielle "Superantigene". Immun Infekt 19: 8
5. Choi Y, Lafferty JA, Clements JR, Todd JK, Gelfand EW, Kappler J, Marrack P, Kotzin BL (1990) Selective expansion of T cells expressing V_β2 in toxic shock syndrome. J Exp Med 172: 981
6. Zollner TM, Munk ME, Keller T, Nuber V, Boehncke W-H, Kaufmann SHE, Duijvestijn AM, Sterry W, Kaufmann R (1996) The superantigen exfoliative toxin induces cutaneous lymphocyte-associated antigen expression in peripheral human T lymphocytes. Immunol Letters 49: 111
7. Hafler DA, Duby AD, Lee SJ, Benjamin D, Seidman JG, Weiner HL (1988) Oligoclonal T lymphocytes in the cerebrospinal fluid of patients with multiple sclerosis. J Exp Med 167: 1313
8. Paliard X, West SG, Lafferty JA, Clements JR, Kappler JW, Marrack P, Kotzin BL (1991) Evidence for the effects of a superantigen in rheumatoid arthritis. Science 253: 325
9. Neuber K, König W, Ring J (1993) Staphylococcus aureus und atopisches Ekzem. Hautarzt 44: 135
10. Ring J, Abeck D, Neuber K (1992) Atopic eczema: role of microorganisms on the skin surface. Allergy 47: 265
11. Neuber K, Steinrücke K, Ring J (1995) Staphylococcal enterotoxin B affects in vitro IgE synthesis, interferon- γ, interleukin-4 and interleukin-5 production in atopic eczema. Int Arch Allergy Immunol 107: 179
12. Hofer MF, Harbeck RJ, Schlievert PM, Leung DYM (1999) Staphylococcal Toxins augment specific IgE responses by atopic patients exposed to allergen. J Invest Dermatol 112: 171
13. Lughtenberg B, Meijers J, Peters R, von der Hoek P, von Alphen I (1975) Electrophoretic resolution of the major outer membrane of Echeria coli K12 into four bands. FEBS Lett 58: 254
14. Edman P (1950) Method for determination of the amino acid sequence in peptides. Acta Chem Scand 4: 283 SEQUENZPROTOKOLL

Evidence of interferon-gamma production after incubation with the peptide showed that the peptide inhibits the production of interferon-gamma ( Fig. 6), a cytokine that mediates a variety of immunological functions. For example, interferon-gamma induces hyperproliferation of the epidermis in psoriasis. In particular, the graph shows that the peptide significantly inhibits both the spontaneous and the SEB-induced interferon-gamma synthesis of lymphocytes. References 1. Marrack P, Kappler J (1990) The staphylococcal enterotoxins and their relatives. Science 248: 705
2. Fleischer B, Schrezenmeier H (1988) T cell stimulation by staphylococcal enterotoxins. Clonally variable response and requirement for major histocompatibility complex class II molecules an accessory or target cells. J Exp Med 167: 1697
3. Herrmann T, Baschieri S, Lees RK, MacDonald HR (1992) In vivo response of CD4 + and CD8 + cells to bacterial superantigens. Eur J Immunol 22: 1935
4. Fleischer B (1991) Stimulation of the immune system by microbial "superantigens". Immune infection 19: 8
5. Choi Y, Lafferty JA, Clements JR, Todd JK, Gelfand EW, Kappler J, Marrack P, Kotzin BL (1990) Selective expansion of T cells expressing V _β 2 in toxic shock syndrome. J Exp Med 172: 981
6. Zollner TM, Munk ME, Keller T, Nuber V, Boehncke WH, Kaufmann SHE, Duijvestijn AM, Sterry W, Kaufmann R (1996) The superantigen exfoliative toxin induces cutaneous lymphocyte-associated antigen expression in peripheral human T lymphocytes. Immunol Letters 49: 111
7. Hafler DA, Duby AD, Lee SJ, Benjamin D, Seidman JG, Weiner HL (1988) Oligoclonal T lymphocytes in the cerebrospinal fluid of patients with multiple sclerosis. J Exp Med 167: 1313
8. Paliard X, West SG, Lafferty JA, Clements JR, Kappler JW, Marrack P, Kotzin BL (1991) Evidence for the effects of a superantigen in rheumatoid arthritis. Science 253: 325
9. Neuber K, König W, Ring J (1993) Staphylococcus aureus and atopic eczema. Dermatologist 44: 135
10. Ring J, Abeck D, Neuber K (1992) Atopic eczema: role of microorganisms on the skin surface. Allergy 47: 265
11. Neuber K, Steinrücke K, Ring J (1995) Staphylococcal enterotoxin B affects in vitro IgE synthesis, interferon-γ, interleukin-4 and interleukin-5 production in atopic eczema. Int Arch Allergy Immunol 107: 179
12. Hofer MF, Harbeck RJ, Schlievert PM, Leung DYM (1999) Staphylococcal Toxins augment specific IgE responses by atopic patients exposed to allergen. J Invest Dermatol 112: 171
13. Lughtenberg B, Meijers J, Peters R, von der Hoek P, von Alphen I (1975) Electrophoretic resolution of the major outer membrane of Echeria coli K12 into four bands. FEBS Lett 58: 254
14. Edman P (1950) Method for determination of the amino acid sequence in peptides. Acta Chem Scand 4: 283 SEQUENCE LIST

Claims

1. Polypeptide with that specified in SEQ ID NO: 10 Amino acid sequence.

2. polypeptide, characterized in that it is the N- has terminal amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 15 and by trypsin cleavage of S. aureus enterotoxin B is available as a 12 kD fragment.

3. polypeptide, characterized in that it is a homolog or a derivative of the polypeptide according to claim 1 or 2 that binds to IgE.

4. Polypeptide according to claim 3, characterized in that it does not induce T lymphocyte proliferation.

5. Polypeptide according to claims 2 to 4, characterized characterized in that it synthesizes in vitro Interferon gamma inhibits stimulated T lymphocytes.

6. Polypeptide according to claims 2 to 5, characterized characterized in that it is the one specified in SEQ ID NO: 11 Has amino acid sequence.

7. nucleic acid molecule, characterized in that it is a encoding a polypeptide according to claims 1 to 6 Has nucleic acid sequence.

8. Nucleic acid molecule according to claim 7, characterized characterized that it is the one specified in SEQ ID NO: 9 Has nucleic acid sequence.

9. Use of a polypeptide that has the sequence according to SEQ ID NO: 10, a homologous one or a derivative thereof Contains sequence, wherein the polypeptide binds to IgE for Manufacture of a pharmaceutical composition for Immunomodulation.

10. Use of a polypeptide according to claims 1 to 6 for the preparation of a pharmaceutical composition for immune modulation.

11. Use of a polypeptide that has the sequence according to SEQ ID NO: 10, a homologous one or a derivative thereof Contains sequence, wherein the polypeptide binds to IgE for Manufacture of a pharmaceutical composition for Inhibition of cytokine production by lymphocytes.

12. Use of a polypeptide according to claims 1 to 6 for the preparation of a pharmaceutical composition to inhibit cytokine production by lymphocytes.

13. Use according to claim 11 and 12, characterized characterized in that the lymphocytes are T-lymphocytes.

14. Use according to claim 13, characterized in that the cytokine interferon-gamma, interleukin-4 (IL-4), Interleukin-5 (IL-5), Interleukin-10 (IL-10), Interleukin 12 (IL-12) and / or interleukin-13 (IL-13).

15. Use of a polypeptide which has the sequence according to SEQ ID NO: 10, a homologous one or a derivative thereof Contains sequence, wherein the polypeptide binds to IgE for Manufacture of a pharmaceutical composition for Treatment of diseases that are exacerbated Production of cytokines and / or an elevated level of IgE antibodies.

16. Use of a polypeptide according to claims 1 to 6 for the preparation of a pharmaceutical composition for the treatment of diseases with a increased production of cytokines and / or an increased IgE antibody levels are associated.

17. Use according to claim 15 and 16, characterized characterized in that the cytokine interferon-gamma, interleukin-4 (IL- 4), Interleukin-5 (IL-5), Interleukin-10 (IL-10), Interleukin-12 (IL-12) and / or Interleukin-13 (IL-13).

18. Use according to claim 15 and 16, characterized characterized that the disease atopic eczema, asthma bronchial, allergic rhinoconjunctivitis, psoriasis, Rheumatoid arthritis or multiple sclerosis.

19. Use of a polypeptide which has the sequence according to SEQ ID NO: 10, a homologous one or a derivative thereof Contains sequence, wherein the polypeptide binds to IgE, in in vitro inhibition of interferon gamma production in human, peripheral blood T lymphocytes.

20. Use of a polypeptide according to claims 1 to 6 for in vitro inhibition of interferon gamma production in human peripheral T lymphocytes of the blood.

21. Pharmaceutical composition, characterized in that they are a polypeptide according to claims 1 to 6 contains.

22. Pharmaceutical composition, characterized in that they also have one or more pharmaceutical contains compatible auxiliaries and / or carriers.

23. A method for producing a polypeptide according to claim 1, characterized in that the in SEQ ID NO: 9 shown nucleic acid sequence into an expression vector introduces it into suitable host cells, one cultivates the host cells under conditions which lead to Protein expression are suitable and the one expressed Polypeptide encoded by the nucleic acid sequence isolated.

24. A method for producing a polypeptide according to claim 2, characterized in that enterotoxin B from S. digested aureus with trypsin and then the 12 kD Fragment isolated from the reaction mixture.