DE102019117289A1

DE102019117289A1 - Carrier material, kit system and method for biological assays

Info

Publication number: DE102019117289A1
Application number: DE102019117289.6A
Authority: DE
Inventors: Anmelder Gleich
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2019-06-27
Filing date: 2019-06-27
Publication date: 2020-12-31
Also published as: WO2020260716A3; WO2020260716A2

Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft ein Trägermaterial (T) umfassend mindestens eine Komponente (K), wobei die Komponente (K) adhäsiv an das Trägermaterial (T) gebunden und/oder auf dem Trägermaterial (T) immobilisiert und/oder eingetrocknet ist, wobei das Trägermaterial (T) geeignet ist ein bestimmtes Volumen einer Flüssigkeit beinhaltend eine definierte Menge der Komponente (K) aufzunehmen und in Anwesenheit eines Elutionsfluids wieder freizugeben.Des Weiteren betrifft die vorliegende Erfindung ein Kitsystem (KS), die Verwendung eines Kitsystems (KS) für die Herstellung einer Antikörperlösung, sowie ein Verfahren zum Nachweis eines immobilisierten Analyten auf einer Membran.The present invention relates to a carrier material (T) comprising at least one component (K), the component (K) being adhesively bonded to the carrier material (T) and / or immobilized and / or dried on the carrier material (T), the carrier material (T) a certain volume of a liquid containing a defined amount of component (K) is suitable to be taken up and released again in the presence of an elution fluid. Furthermore, the present invention relates to a kit system (KS), the use of a kit system (KS) for the production an antibody solution, and a method for detecting an immobilized analyte on a membrane.

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft ein Trägermaterial umfassend mindestens eine Komponente, wobei die Komponente adhäsiv an das Trägermaterial gebunden und/oder auf dem Trägermaterial immobilisiert und/oder eingetrocknet Ist.The present invention relates to a carrier material comprising at least one component, the component being adhesively bound to the carrier material and / or immobilized and / or dried on the carrier material.

Insbesondere betrifft die vorliegende Erfindung ein Trägermaterial umfassend mindestens eine Komponente, wobei das Trägermaterial aufgrund seiner physikalischen Beschaffenheit geeignet ist die Komponente unter Laborbedingungen zu Trocknen und so vor Degradation und/oder Aggregation zu schützen.In particular, the present invention relates to a carrier material comprising at least one component, the carrier material, due to its physical nature, being suitable for drying the component under laboratory conditions and thus protecting it from degradation and / or aggregation.

Zudem betrifft die vorliegende Erfindung ein Kitsystem, umfassend ein Reaktionsgefäß und ein erfindungsgemäßes Trägermaterial, sowie die Verwendung eines erfindungsgemäßen Kitsystems für die Herstellung eines Analysefluids für den Nachweis biogener Makromoleküle.In addition, the present invention relates to a kit system comprising a reaction vessel and a carrier material according to the invention, as well as the use of a kit system according to the invention for the production of an analysis fluid for the detection of biogenic macromolecules.

Weiter betrifft die vorliegende Erfindung ein Verfahren zur Durchführung eines Bioassays.The present invention also relates to a method for performing a bioassay.

Weiter betrifft die vorliegende Erfindung ein Verfahren zum Nachweis eines immobilisierten Analyten auf einer festen Matrix (z.B. einer Membran).The present invention further relates to a method for the detection of an immobilized analyte on a solid matrix (e.g. a membrane).

Im naturwissenschaftlichen Bereich werden häufig polymere Stoffe verwendet, deren physikalisches Kennzeichen es ist, dass sie sich in Lösungen nicht so fein verteilen wie kleinere Moleküle, d.h. nicht monodispers in der Lösung verteilt sind. Eine nicht monodisperse Lösung aus polymere Stoffen, Insbesondere aus Makromolekülen stellt ein Problem dar, da zum einen die Lagerung zur Aggregation führen kann, welche die Quantität des Stoffs in der Lösung mindert, zum anderen auch die Durchmischung zur Entnahme Scherkraft induzierte Schädigung des Stoffes hervorrufen kann, welche die Qualität des Stoffes in der Lösung mindert.In the natural sciences, polymeric substances are often used, the physical characteristic of which is that they are not as finely distributed in solutions as smaller molecules, i.e. are not distributed monodisperse in the solution. A non-monodisperse solution made from polymeric substances, especially from macromolecules, poses a problem because, on the one hand, storage can lead to aggregation, which reduces the quantity of the substance in the solution, and on the other hand, mixing for removal can cause damage to the substance induced by shear forces which reduces the quality of the substance in the solution.

Da polymere Stoffe und insbesondere Makromoleküle oftmals kostenintensiv in der Herstellung und daher besonders schützenswert sind, werden solche Stoffe oftmals in Portionen kleiner Volumina oder in getrockneter Form gelagert und zur Anwendung in der Produktion und/oder der Verwendung z.B. als Nahrungsergänzungsmittel sowie als Pharmazeutikum, Diagnostikum oder Therapeutikum und/oder als Labor Analytikum dargereicht.Since polymeric substances and in particular macromolecules are often cost-intensive to produce and therefore particularly worth protecting, such substances are often stored in portions of small volumes or in dried form and are used in production and / or use e.g. presented as a dietary supplement and as a pharmaceutical, diagnostic or therapeutic and / or as a laboratory analytical.

Im Labor werden Makromoleküle häufig in Bioassays und insbesondere durch. immunologische Verfahren, zum Nachweis von Analyten verwendet.In the laboratory, macromolecules are often used in bioassays and in particular by. immunological methods, used for the detection of analytes.

Bei einem Bioassay beruht der Nachweis eines Analyten auf der Affinität eines für den Analyten spezifischen Bindungspartners zu einer bestimmten Eigenschaft des Analyten (z.B. Epitop), beispielsweise Im Rahmen einer Antikörper-Antigen-Reaktion. Über ein Markierungsmolekül, das mit dem Bindungspartner verbunden ist, kann das Vorhandensein des Analyten detektiert werden. Das Ziel ist es, ein Signal des markierten Bindungspartners, dabei indirekt des Analyten, in ausreichender Stärke zu erkennen.In a bioassay, the detection of an analyte is based on the affinity of a binding partner specific for the analyte to a certain property of the analyte (e.g. epitope), for example in the context of an antibody-antigen reaction. The presence of the analyte can be detected via a marker molecule that is linked to the binding partner. The aim is to recognize a signal from the labeled binding partner, indirectly from the analyte, in sufficient strength.

Der spezifische Bindungspartner, der an den zu detektierenden Analyten bindet, kann auch als Primärbindungspartner bezeichnet werden (z.B. ein Primärantikörper). In der Regel zeichnet sich der Primärbindungspartner durch eine hohe Spezifität und Affinität gegenüber dem Analyten, beispielsweise gegenüber einem bestimmten Epitop des Analyten aus. Dies kann auch beinhalten, dass keine Kreuzreaktionen mit ähnlichen Epitopen gezeigt werden und/oder vorliegen.The specific binding partner that binds to the analyte to be detected can also be referred to as the primary binding partner (e.g. a primary antibody). As a rule, the primary binding partner is characterized by a high specificity and affinity for the analyte, for example for a certain epitope of the analyte. This can also mean that no cross-reactions with similar epitopes are shown and / or are present.

Immunologische Verfahren, auch Immunassays, bezeichnen eine Reihe von Verfahren in der Analytik (insbesondere der Bioanalytik) zur Erkennung und damit zum Nachweis eines Analyten durch Bindung des Analyten an einen (spezifischen) Bindungspartner.Immunological methods, including immunassays, denote a number of methods in analysis (in particular bioanalytics) for the recognition and thus for the detection of an analyte by binding the analyte to a (specific) binding partner.

Gängige Immunassays umfassen unter anderem Verfahren wie Western-Bot, Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA), Radioimmunassay (RIA), Immunmarkierung, Immunhistochemie, Slot Blot und/oder Dot Blot, aber auch Lateral-Flow Immunoassays.Common immunassays include methods such as Western-Bot, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), radioimmunoassay (RIA), immunolabelling, immunohistochemistry, slot blot and / or dot blot, but also lateral flow immunoassays.

Bei einem Immunassay beruht der Nachweis eines Analyten auf der Affinität eines für den Analyten spezifischen Bindungspartners zu einer bestimmten Eigenschaft des Analyten (z.B. Epitop), beispielsweise im Rahmen einer Antikörper-Antigen-Reaktion. Über einen Marker, der mit dem Bindungspartner verbunden ist, kann das Vorhandensein des Analyten detektierbar gemacht werden. Das Ziel ist es, ein Signal des Markers, dabei indirekt des Analyten, in ausreichender Stärke zu erkennen.In an immunassay, the detection of an analyte is based on the affinity of a binding partner specific for the analyte for a certain property of the analyte (e.g. epitope), for example in the context of an antibody-antigen reaction. The presence of the analyte can be made detectable via a marker that is linked to the binding partner. The aim is to recognize a signal from the marker, indirectly from the analyte, with sufficient strength.

Der spezifische Bindungspartner, der an den zu detektierenden Analyten bindet, kann auch als Primärbindungspartner bezeichnet werden (z.B. ein Primärantikörper). In der Regel zeichnet sich der Primärblndungspartner durch eine hohe Spezifität und Affinität gegenüber dem Analyten, beispielsweise gegenüber einem bestimmten Epitop des Analyten aus. Dies kann auch beinhalten, dass keine Kreuzreaktionen mit ähnlichen Epitopen gezeigt werden und/oder vorliegen.The specific binding partner that binds to the analyte to be detected can also be referred to as the primary binding partner (e.g. a primary antibody). As a rule, the primary binding partner is characterized by a high specificity and affinity for the analyte, for example for a certain epitope of the analyte. This can also mean that no cross-reactions with similar epitopes are shown and / or are present.

In der Regel wird zwischen direkten Nachweisverfahren und indirekten Nachweisverfahren unterschieden. Bei direkten Nachweisverfahren wird der Analyt mit einem für den Analyten spezifischen Bindungspartner (Primärbindungspartner, z.B. Primärantikörper) zusammengebracht, welcher direkt mit einem Marker verbunden ist. Bei indirekten Nachweisverfahren wird in einem ersten Schritt der Analyt mit einem für den Analyten spezifischen ersten Bindungspartner (Primärbindungspartner, z.B. Primärantikörper) zusammengebracht. In einem zweiten Schritt wird ein zweiter Bindungspartner (Sekundärbindungspartner, z.B. Sekundärantikörper) verwendet, der sich gegen den ersten Bindungspartner richtet. Der zweite Bindungspartner ist mit einem Marker verbunden. Folglich kann über den markierten zweiten Bindungspartner, welcher an den ersten Bindungspartner bindet, welcher wiederum an den Analyten bindet, ein Analyt detektiert werden.As a rule, a distinction is made between direct verification processes and indirect verification processes. In the case of direct verification procedures the analyte is brought together with a binding partner specific for the analyte (primary binding partner, eg primary antibody), which is directly linked to a marker. In the case of indirect detection methods, in a first step the analyte is brought together with a first binding partner (primary binding partner, eg primary antibody) specific for the analyte. In a second step, a second binding partner (secondary binding partner, eg secondary antibody) is used, which is directed against the first binding partner. The second binding partner is linked to a marker. Consequently, an analyte can be detected via the labeled second binding partner, which binds to the first binding partner, which in turn binds to the analyte.

Üblicherweise sind bioanalytische Verfahren und vor allem immunologische Verfahren Mehrschrittverfahren, in welchen die einzelnen Komponenten des Nachweissystems einem Präparat, welches den Analyten beinhalten soll und/oder beinhaltet zugeführt werden. Aus diesem Grund sind immunologische Verfahren bzw. bioanalytische Nachweisverfahren relativ langwierig und fehleranfällig, weswegen die Verlässlichkeit der in diesen Assays bzw. Verfahren verwendeten Komponenten eine besondere Bedeutung zukommt.Bioanalytical methods and, above all, immunological methods are usually multi-step methods in which the individual components of the detection system are supplied to a preparation which is to contain and / or contains the analyte. For this reason, immunological methods or bioanalytical detection methods are relatively tedious and error-prone, which is why the reliability of the components used in these assays or methods is of particular importance.

Die beschriebenen Immunologischen Verfahren benötigen zur Durchführung zahlreiche Komponenten (beispielsweise Bindungspartner oder Markierungen), welche nicht selten temperaturempfindlich sind. In der Regel müssen eine Vielzahl der Komponenten, z.B. Antikörper, zumindest teilweise, bei Temperaturen niedriger als Raumtemperatur gelagert und/oder gehandhabt werden um stabil und/oder funktional zu bleiben und/oder gegen Proteolyse geschützt zu sein (z.B. gekühlt auf Eis, im Kühlschrank, bei 4°C bis 8°C oder niedriger als 0°C, insbesondere bei -20°C oder -80°C). Schon kaum vermeidbare Temperaturschwankungen während des Transports und/oder der Lagerung, insbesondere Temperaturerhöhungen (beispielsweise über -20°C, -80°C oder 4°C-8°C) können die Komponenten schädigen, Insbesondere sodass die Struktur und/oder Funktion der Komponenten zumindest teilweise verändert und/oder gestört ist. Besonders kritisch können auch die Entnahmen von Teilmengen der Komponenten sein, da hier neben den unweigerlichen Temperaturänderungen, insbesondere Temperaturerhöhungen, auch noch mögliche Kontaminationen mit ubiquitären Proteasen und/oder Mikroben schädigend auf die Struktur und/oder Funktion der Komponenten wirken können.The immunological methods described require numerous components (for example, binding partners or markings), which are not infrequently temperature-sensitive. As a rule, a large number of the components, e.g. Antibodies, at least partially, are stored and / or handled at temperatures lower than room temperature in order to remain stable and / or functional and / or to be protected against proteolysis (e.g. chilled on ice, in the refrigerator, at 4 ° C to 8 ° C or lower than 0 ° C, especially at -20 ° C or -80 ° C). Already hardly avoidable temperature fluctuations during transport and / or storage, in particular temperature increases (for example above -20 ° C, -80 ° C or 4 ° C-8 ° C) can damage the components, in particular so that the structure and / or function of the Components is at least partially changed and / or disturbed. The removal of partial quantities of the components can also be particularly critical, since in addition to the inevitable temperature changes, in particular temperature increases, possible contamination with ubiquitous proteases and / or microbes can have a damaging effect on the structure and / or function of the components.

Beispiele derartiger empfindlicher Komponenten sind unter anderem Antikörper oder Antikörperfragmente, Oligonukleotide, DNA-Sonden, RNA-Sonden, Nukleinsäurefragmente, Aptamere, Anticaline, Lektine, Affibodies, chemische Liganden, Nanopartikel, Enzyme (insbesondere Reporterenzyme) oder Farbstoffe, insbesondere auch Fluoreszenzfarbstoffe.Examples of such sensitive components include antibodies or antibody fragments, oligonucleotides, DNA probes, RNA probes, nucleic acid fragments, aptamers, anticalins, lectins, affibodies, chemical ligands, nanoparticles, enzymes (especially reporter enzymes) or dyes, especially also fluorescent dyes.

Bisher bekannte Verfahren und Komponenten sind zwar spezifisch für bestimmte Analyten, jedoch aufgrund der Komplexität der Verfahren und der Instabilität der Komponenten fehlerempfindlich. Den Komponenten ist nicht anzusehen, ob sie in ihrer Struktur und/oder Funktion geschädigt wurden, so dass falsch negative Ergebnisse von bioanalytischen und/oder Immunologischen Verfahren, in welchen die Komponenten verwendet wurden, aufgrund geschädigter, struktur- und/oder funktionsbeeinträchtigter Komponenten zum Forschungsalltag gehören.Methods and components known to date are specific to certain analytes, but are sensitive to errors due to the complexity of the methods and the instability of the components. It cannot be seen from the components whether their structure and / or function have been damaged, so that false negative results from bioanalytical and / or immunological processes in which the components were used due to damaged, structurally and / or functionally impaired components in everyday research belong.

Da die gängigen bioanalytischen und/oder Immunologischen Verfahren, für die diese Komponenten benötigt werden, aufwändig sind, wäre es wünschenswert die Komponenten in stabiler Formulierung und/oder mit geringer Anfälligkeit für Struktur- und/oder Funktionsschäden zur einfachen Anwendung darzureichen. Zudem sind die gängigen bioanalytischen und/oder immunologischen Verfahren von einer langen Dauer und einer Vielzahl an Verfahrensschritten (beispielsweise mehrere Bindungsreaktionen, mehrere Waschschritte, Blockieren unspezifischer Bindungsstellen und/oder enzymatische Reaktionen) gekennzeichnet, und stellen keine praktischen Anwendungsformen dar.Since the current bioanalytical and / or immunological methods for which these components are required are complex, it would be desirable to present the components in a stable formulation and / or with low susceptibility to structural and / or functional damage for simple use. In addition, the common bioanalytical and / or immunological methods are characterized by a long duration and a large number of process steps (for example several binding reactions, several washing steps, blocking of unspecific binding sites and / or enzymatic reactions) and do not represent any practical forms of application.

Integrierte trockenchemische Testelemente würden die Verfahrensdurchführung erleichtern, die Fehleranfälligkeit vermindern und/oder Zeiten für das Durchführen eines immunologischen Verfahrens verkürzen.Integrated dry chemical test elements would make the process easier to carry out, reduce the susceptibility to errors and / or shorten the times for carrying out an immunological process.

Die beschriebenen empfindlichen Komponenten können getrocknet werden und sind in getrockneter Form geschützt gegen Beschädigung, z.B. durch Proteolyse, Oxidation oder Hydrolyse und/oder Instabilität und/oder Funktionsverlust. So können vor allem ansonsten temperatursensitive und auch Degradations-empfindliche Komponenten auch ohne Kühlung stabil gelagert werden.The sensitive components described can be dried and, in the dried form, are protected against damage, e.g. by proteolysis, oxidation or hydrolysis and / or instability and / or loss of function. This means that otherwise temperature-sensitive and degradation-sensitive components can be stored in a stable manner even without cooling.

Eine einfache Lösung des Problems wäre daher das Vakuumtrocknen empfindlicher Komponenten. Dieses Verfahren ist aber insofern problematisch, als dass es für jede Komponente gesondert optimiert werden muss. Kritisch ist dabei, dass sich beim Trocknen das Medium verändert, da auch die Stabilisatoren mit eingetrocknet und daher konzentriert werden. Wird dies nicht optimiert, können die Komponenten wiederum ihre Funktionalität und Stabilität durch den Trocknungsprozess verlieren. Auch die Lagerstabilität ist kritisch, da die Formulierungen in hoch konzentrierten Salzen und Hilfsstoffen hygroskopisch sind und bei Feuchtwerden (z.B. Kondenswasser, Luftfeuchtigkeit bei Probenentnahme und Lagerung) Aggregation und Degradation auftreten. So stabilisierte Komponenten neigen daher zur Aggregation, sodass eine homogene Rücklösung meist nicht erreicht wird. Es muss ein Verlust von Material in Kauf genommen werden, was insbesondere bei teuren und aufwendig hergestellten Komponenten vermieden werden soll.A simple solution to the problem would therefore be to vacuum dry sensitive components. However, this method is problematic in that it has to be optimized separately for each component. It is critical that the medium changes when it dries, since the stabilizers are also dried in and therefore concentrated. If this is not optimized, the components can in turn lose their functionality and stability due to the drying process. Storage stability is also critical, since the formulations in highly concentrated salts and auxiliaries are hygroscopic and if they become damp (e.g. Condensation, air humidity during sampling and storage) aggregation and degradation occur. Components stabilized in this way therefore tend to aggregate, so that homogeneous redissolution is usually not achieved. A loss of material must be accepted, which should be avoided in particular in the case of expensive and laboriously manufactured components.

Aus dem Stand der Technik sind bereits Trägermaterialien zur Freisetzung von Analysefluids, welche biogene analytischen Komponenten enthalten, für die Verwendung in immunologischen Verfahren bekannt.. Die Aufbringung und ggf. das Eintrocknen der Komponenten auf den Trägermaterialien ermöglichen eine besonders hohe Stabilität gegenüber degenerativen Einflüssen, wie z.B. Temperaturänderungen (insbesondere Temperaturanstiege), Änderungen (insbesondere ein Anstieg) der Luftfeuchtigkeit führen hier jedoch weiterhin zur Zersetzung der biogenen Komponenten. Neben einer verschweißten, luftdichten Verpackung ist die Zugabe von Trockensalzpäckchen erforderlich.Carrier materials for releasing analytical fluids containing biogenic analytical components for use in immunological processes are already known from the prior art. The application and, if necessary, drying of the components on the carrier materials enable particularly high stability against degenerative influences, such as e.g. However, changes in temperature (especially increases in temperature) and changes (especially an increase) in air humidity continue to lead to the decomposition of the biogenic components. In addition to a welded, airtight packaging, the addition of dry salt packets is required.

Der Erzeugung von Analysefluiden kommt das sogenannte Conjugate Pad, welches in diagnostischen immunologischen Anwendungen, wie z.B. Lateral-Flow-Immunoassays (LFIA), Verwendung findet am nächsten. Das Trägermaterial des Conjugate Pad besteht zumeist aus Glasfaser oder Cellulose Faser oder auch oberflächen-modifizierter Polymerfaser. Es ist in der Regel bis zu 1cm lang, 0,5cm breit und unter 0,5mm dick. Da das hauptsächliche Kriterium der Auswahl des Trägermaterials in der geringen Proteinbindung sowie dem niedrigen Rückhaltevolumen von maximal <50µL/cm2 liegt ist die Aufnahme der Flüssigkeit auf 25µL Flüssigkeit beschränkt. Zur Vermeidung von Randeffekten werden zumeist 10 bis 15µL Konjugat, welches zumeist Nanopartikel markierte Primärantikörper beinhaltet, aufgetragen. Die Trägermaterialien werden vorbehandelt, um eine möglichst schnelle Freisetzung der Komponenten auch bei nur geringer Proben- und/oder Analytmenge zu erhalten. Die Conjugate Pads werden im Vakuum getrocknet und müssen trocken gehalten werden, um die Integrität der Komponenten zu erhalten.The so-called conjugate pad, which is used in diagnostic immunological applications, e.g. Lateral flow immunoassays (LFIA), will be used next. The carrier material of the conjugate pad mostly consists of glass fiber or cellulose fiber or surface-modified polymer fiber. It is usually up to 1cm long, 0.5cm wide and less than 0.5mm thick. Since the main criterion for the selection of the carrier material is the low protein binding and the low retention volume of a maximum of <50µL / cm2, the uptake of the liquid is limited to 25µL of liquid. To avoid edge effects, mostly 10 to 15 µL conjugate, which mostly contains primary antibodies labeled with nanoparticles, are applied. The carrier materials are pretreated in order to obtain the fastest possible release of the components even with only a small amount of sample and / or analyte. The conjugate pads are vacuum dried and must be kept dry to maintain the integrity of the components.

Neben einer verschweißten, luftdichten Verpackung ist die Zugabe von Trockensalzpäckchen erforderlich. Diese Schritte sind Stand der Technik in diagnostischen, chromatographischen Anwendungen, wie Lateral-Flow-Immunoassays (LFIA), welche jeweils der Diagnose eines bestimmten Analyten dienen.In addition to a welded, airtight packaging, the addition of dry salt packets is required. These steps are state of the art in diagnostic, chromatographic applications, such as lateral flow immunoassays (LFIA), which each serve to diagnose a specific analyte.

Die US4366241B1 offenbart nicht-chromatographische Testvorrichtungen und Verfahren, die solche Vorrichtungen verwenden, für die Bestimmung von Mitgliedern eines immunologischen Paares (Mip). Die Testvorrichtung verfügt über eine immunsorbierende Zone, an der ein Mip (gegen diffuse Bewegungen) befestigt ist. Die immunsorbierende Zone dient als Eingang für die Proben- und Reagenzlösungen. In flüssigkeitsaufnehmender Beziehung, entweder direkt oder indirekt mit der immunsorbierenden Zone und normalerweise quer dazu verlaufend, befindet sich eine flüssigkeitsabsorbierende Zone, die dazu dient, Flüssigkeit durch die immunsorbierende Zone zu ziehen, Flüssigkeit zu speichern und dazu dienen kann, die Geschwindigkeit zu steuern, mit der die Flüssigkeit durch die immunsorbierende Zone gezogen wird.The US4366241B1 discloses non-chromatographic test devices and methods using such devices for the determination of members of an immunological pair (Mip). The test device has an immunosorbing zone to which a mip (against diffuse movements) is attached. The immunosorbing zone serves as an inlet for the sample and reagent solutions. In fluid-receiving relationship, either directly or indirectly with the immunosorbent zone and usually transverse to it, there is a fluid-absorbing zone which serves to draw fluid through the immunosorbent zone, store fluid and can serve to control the speed with which the liquid is drawn through the immunosorbent zone.

Die EP186799A1 offenbart ein festes diagnostisches Mittel, bestehend aus mehreren Funktionsfeldern, welches zum Nachweis und zur quantitativen Bestimmung von Substanzen oder Analyten in biologischen Flüssigkeiten dient. Die Erfindung betrifft weiterhin ein Verfahren unter Verwendung dieses Mittels, wobei nach Kontakt des Mittels mit der Flüssigkeit die Analyten mit spezifischen bioaffinen Bindungspartnern reagieren und mit Hilfe von Markierungsreagenzien nachgewiesen werden.The EP186799A1 discloses a solid diagnostic agent, consisting of several functional fields, which is used for the detection and quantitative determination of substances or analytes in biological fluids. The invention also relates to a method using this agent, the analytes reacting with specific bioaffine binding partners after the agent comes into contact with the liquid and being detected with the aid of labeling reagents.

Ferner offenbart die EP2395921 B1 eine Vorrichtung zum Bestimmen des Vorliegens und/oder der Menge eines oder mehrerer Analyten in einer Probe einer Körperflüssigkeit eines Menschen, ferner unter anderem zumindest einen Teststreifen mit einem saugfähigen Abschnitt sowie mit Reagenzien zum Bestimmen des Vorliegens und/oder der Menge eines oder mehrerer Analyten in der Probe. Furthermore, the EP2395921 B1 a device for determining the presence and / or the amount of one or more analytes in a sample of a human body fluid, further, among other things, at least one test strip with an absorbent section and with reagents for determining the presence and / or the amount of one or more analytes in the sample.

Ferner offenbart die EP1361436 A1 mehrschichtige Reagenzteststreifen zur Quantifizierung von glykosiliertem Protein in einer flüssigen Probe sowie Verfahren zu deren Verwendung. Bei der Verwendung der Teststreifen wird eine flüssige Probe auf den Teststreifen aufgebracht und ein Signal erzeugt, mit dem der Gehalt glykosilierten Proteins in der Probe quantifiziert werden kann.Furthermore, the EP1361436 A1 multilayer reagent test strips for quantifying glycated protein in a liquid sample and methods for using them. When using the test strips, a liquid sample is applied to the test strip and a signal is generated with which the content of glycosylated protein in the sample can be quantified.

Die WO2018203145A1 offenbart Verfahren zur Diagnose, Forschung und zum Screening von Chemikalien in biologischen Flüssigkeiten im Zusammenhang mit der Ethylenglykolverglftung. In einigen Ausführungsformen wird eine Testvorrichtung zum Messen von Glykolat/Glykolsäure beschrieben, umfassend: einen Teststreifen, umfassend a) ein Oxidase-Enzym (z.B. Glykolatoxidase (GOX oder GAX)), das Wasserstoffperoxid erzeugt, während das Glykolat mit Luftsauerstoff oxidiert wird; b) eine Peroxidase, zum Beispiel Meerrettichperoxidase, die in der Lage ist, geeignete Substrate mit dem erzeugten Wasserstoffperoxid zu oxidieren; und c) ein geeignetes Substrat für die Peroxidase, das als Vorläufer eines Indikatorfarbstoffs dient, der photometrisch durch Reflexphotometrie oder fluorimetrisch in einem speziell für diesen Zweck konstruierten Lesegerät oder visuell gelesen werden kann.The WO2018203145A1 discloses methods of diagnosis, research and screening of chemicals in biological fluids in connection with ethylene glycol ventilation. In some embodiments, a test device for measuring glycolate / glycolic acid is described, comprising: a test strip comprising a) an oxidase enzyme (e.g., glycolate oxidase (GOX or GAX)) that generates hydrogen peroxide while the glycolate is oxidized with atmospheric oxygen; b) a peroxidase, for example horseradish peroxidase, which is capable of oxidizing suitable substrates with the hydrogen peroxide generated; and c) a suitable substrate for the peroxidase which serves as a precursor of an indicator dye which can be read photometrically by reflex photometry or fluorimetrically in a reader specially designed for this purpose or visually.

Allgemein wurden die beschriebenen In-vitro Diagnostik Schnelltests für geringe Konzentrationen von Analyten In biologischen Proben entwickelt und optimiert. In den im Stand der Technik beschriebenen in-vitro-Diagnostik-Vorrichtungen und Verfahren wird eine über die für den eigentlichen Nachweis hinaus benötigte Menge an Reagenzien für die jeweiligen Teststreifen verwendet. Dies ist erforderlich, da die Anforderung der sehr hohen Fließfähigkeit durch die Größe der Reagenzien/Komponenten (z.B. Nanopartikel) limitiert ist und das geringe Volumen der zu analysierenden Probe das Herauslösen der Komponenten/Reagenzien aus dem Trägermaterial und/oder Filter erschwert. Diese Zusammensetzung der Schnelltests ist für die diagnostische Anwendung, bei der es um die Detektion kleinster Mengen eines Analyten aus biologischen Proben geht, optimiert. Die präzise hergestellten Reagenzien/Komponenten werden aufgrund ihrer Hochwertigkeit und des Bedarfs der gleichmäßigen Verteilung der eher geringen Mengen zumeist aufwändig auf das für das jeweilige Verfahren, z.B. LFIA, optimierte Trägermaterial aufgebracht und im Vakuum getrocknet. Die Trägermaterialien, insbesondere Teststreifen, werden dann in für die entsprechende Diagnostik individuell angefertigten Gehäuse eingebaut und dort verwendet.In general, the described in-vitro diagnostic rapid tests for low concentrations of analytes in biological samples were developed and optimized. In the in vitro diagnostic devices and methods described in the prior art, an amount of reagents that is required for the actual detection is used for the respective test strips. This is necessary because the requirement for very high flowability is limited by the size of the reagents / components (e.g. nanoparticles) and the small volume of the sample to be analyzed makes it difficult to remove the components / reagents from the carrier material and / or filter. This composition of the rapid tests is optimized for diagnostic use, which involves the detection of the smallest amounts of an analyte from biological samples. Due to their high quality and the need for even distribution of the rather small amounts, the precisely manufactured reagents / components are usually applied in a laborious manner to the carrier material optimized for the respective process, e.g. LFIA, and dried in a vacuum. The carrier materials, in particular test strips, are then built into housings that are individually made for the corresponding diagnostics and used there.

Derartige Verfahren sind für die wissenschaftliche Anwendung nicht geeignet, in Anwendungen im Laboralltag der Forschung im Bereich der Lebenswissenschaften (Biologie, Medizin, Biomedizin, Pharmazie, Biochemie, Chemie, Molekularbiologie, Biophysik, Bioinformatik, Humanbiologie, Forensik, Agrarwissenschaft, Agrartechnologle, Ernährungswissenschaft, Lebensmittelforschung, etc.), wie beispielsweise der Detektion eines Analyten, Insbesondere eines Proteins mittels eines Immunassays, stellen sich andere Anforderungen. In der Regel werden hier variable Mengen mehrerer Proben, jeweils mindestens einen Analyten umfassend, parallel analysiert. Dabei ist der Analyt auf einer Fläche wesentlich größer als die der aus dem Stand der Technik bekannten Teststreifen immobilisiert. Zur Benetzung der Gesamtfläche wird daher eine große Menge von Reagenzien/Komponenten in großem Volumen benötigt (Milliliter). Die aus dem Stand der Technik bekannten Trägermaterialien und/oder Verfahren sind zudem in der Regel nur auf die Detektion/Diagnose einen einzigen Analyten ausgelegt und daher sehr unflexibel in ihrer Anwendung.Such methods are not suitable for scientific use in everyday laboratory research in the life sciences (biology, medicine, biomedicine, pharmacy, biochemistry, chemistry, molecular biology, biophysics, bioinformatics, human biology, forensics, agricultural science, agricultural technology, nutritional science, food research , etc.), such as the detection of an analyte, in particular a protein by means of an immunassay, different requirements arise. As a rule, variable amounts of several samples, each comprising at least one analyte, are analyzed in parallel. The analyte is immobilized on an area much larger than that of the test strips known from the prior art. A large amount of reagents / components in large volume (milliliters) is therefore required to wet the entire surface. The carrier materials and / or methods known from the prior art are also generally only designed for the detection / diagnosis of a single analyte and are therefore very inflexible in their application.

Würden nach dem Stand der Technik hergestellte Trägermateriallen, insbesondere Teststreifen, für größere Nachweisflächen, Ansätze, eine größere Probenanzahl und/oder Probenmenge und/oder die Analyse verschiedener Analyten, wie es In der Forschung der Lebenswissenschaften in der Regel nötig ist, bereitgestellt werden, würde das eine entsprechend größere Menge an Komponenten/Reagenzien erfordern. Eine flexible und/oder wirtschaftliche Nutzung ist nach dem Stand der Technik nicht ermöglicht, daher sind die in der In-vitro-Diagnostik gängigen Produkte und/oder Verfahren für den Laboralltag in der Forschung nachteilig.If carrier materials produced according to the state of the art, in particular test strips, were to be made available for larger detection areas, approaches, a larger number of samples and / or sample quantities and / or the analysis of various analytes, as is usually necessary in research in the life sciences that require a correspondingly larger amount of components / reagents. A flexible and / or economical use is not possible according to the state of the art, which is why the products and / or processes common in in vitro diagnostics are disadvantageous for everyday laboratory work in research.

Es ist die Aufgabe der vorliegenden Erfindung, ein Trägermaterial umfassend mindestens eine Komponente, in vorteilhafter Weise weiterzubilden, insbesondere dahingehend, dass eine höhere Flexibilität und/oder Wirtschaftlichkeit in der Anwendung erreicht wird.It is the object of the present invention to develop a carrier material comprising at least one component in an advantageous manner, in particular to the effect that greater flexibility and / or economy is achieved in use.

Die Aufgabe wird erfindungsgemäß gelöst durch ein Trägermaterial mit den Merkmalen des Anspruchs 1. Danach ist vorgesehen, dass ein Trägermaterial bereitgestellt wird, umfassend mindestens eine Komponente, wobei die Komponente adhäsiv an das Trägermaterial gebunden und/oder auf dem Trägermaterial immobilisiert und/oder eingetrocknet ist, dadurch gekennzeichnet, dass das Trägermaterial geeignet ist ein bestimmtes Volumen einer Flüssigkeit beinhaltend eine definierte Menge der Komponente aufzunehmen und in Anwesenheit eines Elutionsfluids wieder freizugeben.The object is achieved according to the invention by a carrier material with the features of claim 1. It is provided that a carrier material is provided comprising at least one component, the component being adhesively bonded to the carrier material and / or immobilized and / or dried on the carrier material , characterized in that the carrier material is suitable to take up a certain volume of a liquid containing a defined amount of the component and to release it again in the presence of an elution fluid.

Die Erfindung basiert auf dem Grundgedanken, dass ein Binden einer Komponente auf einem Trägermaterial erfolgt, und zwar dahingehend, dass die Komponente eine adhäsive Bindung an das Trägermaterial eingeht und so eine einfache Wiederfreisetzung zu einem späteren Zeitpunkt ermöglicht wird. Dabei kann eine für eine bestimmte Anwendung angepasste Menge einer Komponente auf dem Trägermaterial immobilisiert und/oder eingetrocknet werden. Diese an das Trägermaterial adhäsiv gebundene und/oder immobilisierte und/oder eingetrocknete Komponente kann einerseits stabil ohne strukturelle und/oder funktionelle Schädigung gelagert und/oder transportiert werden. Durch das Eintrocknen der Komponente auf dem Trägermaterial kann eine besonders hohe Stabilität gegenüber degenerativen Einflüssen, wie z.B. Temperaturänderung, Einfrieren, Wärme, Luftfeuchte und biologische Zersetzung erreicht werden. Andererseits wird es ermöglicht, dass die Komponente durch ein Elutionsfluid zu einem gewünschten Zeitpunkt vom Trägermaterial in Form einer homogenen Lösung wieder freigegeben wird. Insgesamt muss kein relevanter Verlust von Funktion und/oder Struktur und/oder der Menge der Komponente in Kauf genommen werden, was insbesondere bei teuren und aufwendig hergestellten Komponenten, welche für teure und aufwendige Verfahren verwendet werden, vorteilig ist.The invention is based on the basic idea that a component is bound to a carrier material, to the effect that the component enters into an adhesive bond to the carrier material, thus enabling easy re-release at a later point in time. An amount of a component adapted for a specific application can be immobilized and / or dried on the carrier material. This component, which is adhesively bound and / or immobilized and / or dried to the carrier material, can be stored and / or transported in a stable manner without structural and / or functional damage. The drying of the component on the carrier material can provide a particularly high level of stability against degenerative influences, such as Temperature change, freezing, heat, humidity and biological decomposition can be achieved. On the other hand, it is made possible for the component to be released again from the carrier material in the form of a homogeneous solution at a desired point in time by an elution fluid. Overall, no relevant loss of function and / or structure and / or the quantity of the component has to be accepted, which is advantageous in particular in the case of expensive and laboriously manufactured components which are used for expensive and complex processes.

Die Erfindung berücksichtigt ferner die besonderen Erfordernisse In der allgemein immunologischen, nicht diagnostischen Anwendung. Hier wird eine besondere Flexibilität in der Anwendung benötigt, da die Forscher häufig wechselnde Analyten nachweisen müssen.The invention also takes into account the special requirements in general immunological, non-diagnostic use. A particular flexibility in the application is required here, since the researchers frequently have to detect changing analytes.

Die beschriebene Erfindung sieht insbesondere vor, empfindliche Komponenten durch Einbringen auf das Trägermaterial in schonender Weise, portionsgerecht zu trocknen. Die Komponenten sind in der so getrockneten Form geschützt gegen Beschädigung, z.B. durch Proteolyse, Oxidation oder Hydrolyse und/oder Instabilität und/oder Funktionsverlust, sind einfach zu Solubilisieren und unterliegen keiner Lagerinstabilität unter Umgebungsbedingungen, da das Trägermaterial sie hinreichend auch vor dem Einfluss der Luftfeuchtigkeit schützt. So können vor allem ansonsten temperatursensitive und auch Degradatlons-empfindliche polymere Stoffe auch ohne Kühlung stabil gelagert werden.The described invention provides, in particular, for sensitive components to be dried in a careful manner by introducing them onto the carrier material in appropriate portions. In the dried form, the components are protected against damage, e.g. by proteolysis, oxidation or hydrolysis and / or instability and / or loss of function, are easy to solubilize and are not subject to storage instability under ambient conditions, as the carrier material also protects them sufficiently against the influence of atmospheric humidity protects. Above all, otherwise temperature-sensitive and degradation-sensitive polymeric substances can be stored in a stable manner even without cooling.

Zum Anwendungsbereich der Erfindung sind insbesondere die Erzeugung stabil lagerfähiger degradations- und aggregations-sensitiver Stoffe, wie beispielsweise biogene und abiogene Makromoleküle und/oder Polymere zu nennen.The field of application of the invention includes, in particular, the production of stable, storable substances that are sensitive to degradation and aggregation, such as biogenic and abiogenic macromolecules and / or polymers.

Ein „Molekül“ bezeichnet ein Teilchen, das aus zwei oder mehreren zusammenhängenden Atomen besteht, welche durch kovalente Bindungen verbunden sind.A “molecule” refers to a particle that consists of two or more atoms that are connected by covalent bonds.

Ein „Makromolekül“ bezeichnet, die aus vielen (bis zu mehreren Hunderttausend) gleichen oder unterschiedlichen Bausteinen (Atome oder Atomgruppen) bestehen und damit eine relativ große Molekülmasse (über 1000 Da; bzw. über 1000 g/mol) haben. Der Begriff Makromoleküle umfasst Proteine, Peptide, Polymere, Kolloide, Proteine und Nukleinsäuren.A “macromolecule” denotes that consist of many (up to several hundred thousand) identical or different building blocks (atoms or groups of atoms) and thus have a relatively large molecular mass (over 1000 Da; or over 1000 g / mol). The term macromolecules includes proteins, peptides, polymers, colloids, proteins and nucleic acids.

Ein „Polymer“ bezeichnet eine chemische Verbindung, die aus Ketten- oder verzweigten Molekülen besteht, die aus gleichen oder gleichartigen Einheiten (den sogenannten Monomeren) bestehen. Ein Polymer umfasst Makromoleküle, chemische Verbindungen, Salze und Metalle.A “polymer” refers to a chemical compound that consists of chain or branched molecules that consist of identical or similar units (called monomers). A polymer includes macromolecules, chemical compounds, salts, and metals.

Ein „Stoff“ bezeichnet Materie regelmäßiger Beschaffenheit, die sich durch die Elementareinheiten, aus denen sie zusammengesetzt ist, definiert. Diese Elementareinheiten können Atome, Moleküle oder Formeleinheiten (etwa bei Salzen) sein. Stoffe werden durch ihre physikalischen Eigenschaften, wie Dichte, Schmelzpunkt, elektrische Leitfähigkeit etc., charakterisiert.A "substance" denotes matter of regular nature, which is defined by the elementary units of which it is composed. These elementary units can be atoms, molecules or formula units (for example in the case of salts). Substances are characterized by their physical properties, such as density, melting point, electrical conductivity, etc.

Der Begriff „biogen“, bezeichnet Stoffe, die von biologischen Systemen abstammend oder durch solche bedingt.The term “biogenic” refers to substances that are derived from or caused by biological systems.

Der Begriff „abiogen“, bezeichnet Stoffe, die nicht von biologischen Systemen abstammend oder durch solche bedingt. Insbesondere bezeichnet der Begriff künstlich, bzw. synthetisch erzeugte Stoffe.The term "abiogenic" refers to substances that are not derived from or caused by biological systems. In particular, the term describes artificially or synthetically produced substances.

Ein „Nanopartikel“ bzw. „NanoteIlchen“ bezeichnet einen Verbund von wenigen bis einigen tausend Atomen oder Molekülen, dessen Größe typischerweise bei 1 bis 100 Nanometern liegt, ggf. aber auch bis 1000 Nanometer erweitert werden kann. Nanopartikel können sowohl auf natürlichem Wege (z. B. Vulkanausbruch oder Waldbrand), als auch durch anthropogene (vom Menschen verursachte) Einflüsse (z. B. Auto- und Industrieabgase) oder synthetisch Nanopartikel hergestellt sein.A “nanoparticle” or “nanoparticle” refers to a composite of a few to a few thousand atoms or molecules, the size of which is typically 1 to 100 nanometers, but can also be expanded to 1000 nanometers if necessary. Nanoparticles can be produced naturally (e.g. volcanic eruptions or forest fires), as well as through anthropogenic (man-made) influences (e.g. car and industrial emissions) or synthetically.

„Bioassays“ bezeichnen eine Reihe von Verfahren in der Analytik (insbesondere der Bioanalytik) zur Erkennung und damit zum Nachweis eines Analyten durch Bindung des Analyten an einen (spezifischen) Bindungspartner.“Bioassays” refer to a number of methods in analysis (especially bioanalytics) for recognizing and thus detecting an analyte by binding the analyte to a (specific) binding partner.

Gängige Bioassays umfassen unter anderem immunologische Verfahren wie Western-Bot, Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA), Radioimmunassay (RIA), Immunmarkierung, Immunhistochemie, Slot Blot und/oder Dot Blot, aber auch Lateral-Flow Immunoassays.Common bioassays include immunological methods such as western bot, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), radioimmunoassay (RIA), immunolabelling, immunohistochemistry, slot blot and / or dot blot, but also lateral flow immunoassays.

Eine „Komponente“, im Sinne der vorliegenden Erfindung, bezieht sich auf einen Stoff, der ein Molekül und/oder ein Makromolekül und/oder ein Polymer sein kann..A "component" in the sense of the present invention refers to a substance that can be a molecule and / or a macromolecule and / or a polymer ..

Ein „Analyt“, Im Sinne der vorliegenden Erfindung, bezieht sich auf ein Molekül, das über die Bindung eines Bindungspartners an eine Bindestelle des Analyten nachgewiesen werden kann.An “analyte”, in the sense of the present invention, refers to a molecule that can be detected via the binding of a binding partner to a binding site of the analyte.

Ein Analyt kann ein Protein umfassen, wobei die Bindungsstelle ein Teil des Proteins ist, an welche der Bindungspartner selektiv bindet. Der Analyt kann ein einzelnes Peptid und/oder Polypeptid sein, aber auch ein Komplex aus verschiedenen Polypeptiden.An analyte can comprise a protein, the binding site being a part of the protein to which the binding partner selectively binds. The analyte can be a single peptide and / or polypeptide, but also a complex of different polypeptides.

Denkbar ist auch, dass der Analyt einen Antikörper und/oder Fragment eines Antikörpers und/oder ein Epitop eines Antikörpers umfasst.It is also conceivable that the analyte comprises an antibody and / or fragment of an antibody and / or an epitope of an antibody.

Denkbar ist auch, dass der Analyt ein oder mehrere Kohlenhydrate, Lipide, DNA, RNA, komplexe organische Moleküle wie Enzymhemmer, Rezeptorbindemittel, Hormone und/oder pharmazeutische Verbindungen und/oder Verbindungen aus einem oder mehreren Stoffen umfasst.It is also conceivable that the analyte comprises one or more carbohydrates, lipids, DNA, RNA, complex organic molecules such as enzyme inhibitors, receptor binders, hormones and / or pharmaceutical compounds and / or compounds made from one or more substances.

Ein „Elutionsfluid“, im Sinne der vorliegenden Erfindung, bezieht sich auf ein Fluid, In welchem ein Stoff gelöst werden kann. Insbesondere kann ein Elutionsfluid eine Flüssigkeit sein. Insbesondere kann ein Elutionsfluid eine Lösung sein. Insbesondere kann eine Lösung ein polares oder unpolares Lösungsmittel sein. Insbesondere kann die Lösung eine Pufferlösung sein. Insbesondere kann die Pufferlösung eine im Labor gängige Pufferlösung sein, beispielsweise eine phosphatgepufferte Salzlösung (phosphate buffered saline, PBS) oder eine Tris-gepufferte Salzlösung (Tris-buffered saline, TBS). Insbesondere kann die Lösung eine klare Lösung sein.An “elution fluid” within the meaning of the present invention refers to a fluid in which a substance can be dissolved. In particular, an elution fluid can be a liquid. In particular, an elution fluid can be a solution. In particular, a solution can be a polar or non-polar solvent. In particular, the solution can be a buffer solution. In particular, the buffer solution can be a buffer solution commonly used in the laboratory, for example a phosphate-buffered saline (PBS) or a Tris-buffered saline (TBS). In particular, the solution can be a clear solution.

Im Übrigen kann vorgesehen sein, dass die mindestens eine Komponente eine Verbindung aus mindestens einem ersten Stoff und mindestens einem zweiten Stoff umfasst. Dadurch kann bewirkt werden, dass Eigenschaften, insbesondere verschiedene Eigenschaften, von mindestens zwei Stoffen, insbesondere mindestens zwei verschieden Stoffen, miteinander kombiniert vorliegen. Es kann vorgesehen sein, dass bei einer erfindungsgemäßen Komponente die Fähigkeit eines ersten Stoffes an einen Analyten zu binden und die Fähigkeit eines zweiten Stoffes ein detektierbares Signal zu geben vorliegt.Furthermore, it can be provided that the at least one component comprises a combination of at least one first substance and at least one second substance. This can have the effect that properties, in particular different properties, of at least two substances, in particular at least two different substances, are present combined with one another. Provision can be made for a component according to the invention to have the ability of a first substance to bind to an analyte and the ability of a second substance to give a detectable signal.

Werden mindestens zwei Stoffe mit einer gleichen Eigenschaft zu einer Komponente verbunden, so kann durch die Verbindung der mindestens zwei Stoffe mit der gleichen Eigenschaft eine stärkere Ausprägung der Eigenschaft der Komponente im Vergleich zur Ausprägung der Eigenschaft des ersten Stoffes und/oder des zweiten Stoffes alleine erzielt werden.If at least two substances with the same property are combined to form one component, the combination of the at least two substances with the same property can achieve a stronger expression of the property of the component compared to the expression of the property of the first substance and / or the second substance alone will.

Zudem ist denkbar, dass der erste Stoff einen spezifischen Bindungspartner eines Analyten umfasst, wobei der Bindungspartner mindestens einen monoklonalen Antikörper, polyklonalen Antikörper, affinitätsaufgereinigten Antikörper, Antikörperfragment, Nanobody, Nukleinsäurefragment, Aptamer, Anticalin, Lektin, Affibody und/oder chemischen Ligand umfasst und wobei der zweite Stoff einen Marker umfasst, wobei die Markierung mindestens einen Farbstoff, Fluorochrom, Fluorophor, Luminophor, Enzym, Peptid, Biotin, Ollgonukleotid, Protein-Tag, radioaktives Isotop, nicht radioaktives Nuklid, Nanopartikel, insbesondere Gold-Nanopartikel, fluoreszierendes Nanopartikel, magnetisches Nanopartikel und/oder Quantumdot umfasst. Dadurch kann bewirkt werden, dass bei der Komponente die Fähigkeit eines ersten Stoffes an einen Analyten zu binden und die Fähigkeit eines zweiten Stoffes ein detektierbares Signal zu geben kombiniert vorliegt. Insbesondere kann eine Verbindung eines spezifischen Bindungspartners eines Analyten mit einen Nanopartikel, z.B. einem Gold-Nanopartikel, den Vorteil haben, per bloßem Auge detektierbar zu sein.In addition, it is conceivable that the first substance comprises a specific binding partner of an analyte, the binding partner including at least one monoclonal antibody, polyclonal antibody, affinity-purified antibody, antibody fragment, nanobody, nucleic acid fragment, aptamer, anticalin, lectin, affibody and / or chemical ligand and where the second substance comprises a marker, the marking at least one dye, fluorochrome, fluorophore, luminophore, enzyme, peptide, biotin, oligonucleotide, protein tag, radioactive isotope, non-radioactive nuclide, nanoparticle, in particular gold nanoparticle, fluorescent nanoparticle, magnetic Includes nanoparticles and / or quantum dot. As a result, the component can combine the ability of a first substance to bind to an analyte and the ability of a second substance to give a detectable signal. In particular, a compound of a specific binding partner of an analyte with a nanoparticle, e.g. a gold nanoparticle, have the advantage of being detectable with the naked eye.

Das Fluorophor und/oder Fluorochrom kann beispielsweise ein Fluorescein, ein Fluoresceinderlvat, Fluoresceinisothiozyanat (FITC), 5(6)-Tetramethylrhodamine isothiocyanate ((5(6)-TRITC), Rhodamin Texas Red, Grün Fluorescierendes Protein (GFP), Gelb Fluoreszierendes Protein (yellow fluorescent protein, YFP), Rot Fluoreszierendes Protein (RFP) und/oder jedes beliebige andere Fluorophor und/oder Fluorochorm sein sein. Ein Fluorophor und/oder Fluorchrom kann auch ein Redox-abhängiges Protein, z.B. ein roGFP, rxYFT und/oder HyPer sein. Als fluoreszentes Protein-Tag kann auch das Flash-Tag verwendet werden.The fluorophore and / or fluorochrome can, for example, be a fluorescein, a fluorescein derivative, fluorescein isothiocyanate (FITC), 5 (6) -tetramethylrhodamine isothiocyanate ((5 (6) -TRITC), rhodamine Texas Red, green fluorescent protein (GFP), yellow fluorescent protein (yellow fluorescent protein, YFP), red fluorescent protein (RFP) and / or any other fluorophore and / or fluorochrome, a fluorophore and / or fluorochrome can also be a redox-dependent protein, for example a roGFP, rxYFT and / or The flash tag can also be used as a fluorescent protein tag.

Das Enzym kann ein Reporterenzym sein, beispielsweise eine Peroxidase (z.B. eine Meerrettichperoxidase) oder eine alkalische Phosphatase. Wird ein Enzym als Marker verwendet, kann durch das Enzym eine Farb- oder Chemolumineszenzreaktion (enhanced chemoluminescence, ECL) katalysiert werden.The enzyme can be a reporter enzyme such as a peroxidase (e.g. a horseradish peroxidase) or an alkaline phosphatase. If an enzyme is used as a marker, the enzyme can catalyze a color or chemiluminescence reaction (enhanced chemiluminescence, ECL).

Einer Peroxidase kann üblicherweise Wasserstoffperoxid als Substrat angeboten werden. Die freiwerdenden Protonen oxidieren ein chromogenes Substrat zu seinem farbigen Endprodukt unter Bildung von Wasser. Das chromogene Substrat kann beispielsweise 2,2'-Azino-di(3-ethylbenzthlazolin-6-sulfonsäure (ABTS), 3-Amino-9-ethylcarbazol (AEC), 4-Chlor-1-naphthol (CN), 3,3'-Diaminobenzidin (DAB), Luminol und andere Dextrane, Tetramethylbenzidin (TMB) und/oder andere chromogene Substrate sein.A peroxidase can usually be offered hydrogen peroxide as a substrate. The released protons oxidize a chromogenic substrate to its colored end product with the formation of water. The chromogenic substrate can be, for example, 2,2'-azino-di (3-ethylbenzthlazoline-6-sulfonic acid (ABTS), 3-amino-9-ethylcarbazole (AEC), 4-chloro-1-naphthol (CN), 3,3 - Diaminobenzidine (DAB), luminol and other dextrans, tetramethylbenzidine (TMB) and / or other chromogenic substrates.

Einer alkalischen Phosphatase können üblicherweise organische Phosphatverbindungen als Substrat angeboten werden. Die alkalische Phosphatase spaltet Phosphat ab und die freigesetzte Verbindung reagiert zu einem farbigen Endprodukt. Das Substrat kann beispielsweise 5-Brom-4-chlor-3-indoxylphosphat (BCIP) in Verbindung mit Nitroblau-Tetrazoliumchlorid (NBT), Tetrazolium-Salz mit Indoxyl, Naphthol-AS-MX-Phosphat, Naphthol AS mit Fast Red TR, Neufuchsin und/oder ein anderes Substrat sein.An alkaline phosphatase can usually be offered organic phosphate compounds as a substrate. The alkaline phosphatase splits off phosphate and the released compound reacts to a colored end product. The substrate can, for example, 5-bromo-4-chloro-3-indoxylphosphate (BCIP) in conjunction with nitro blue tetrazolium chloride (NBT), tetrazolium salt with indoxyl, naphthol-AS-MX-phosphate, naphthol AS with Fast Red TR, Neufuchsin and / or another substrate.

Gängige Detektionsverfahren und/oder Detektionssysteme umfassen unter anderem Phosphoimager, Röntgenfilme, CCD Kameras und/oder Fluoreszenzdetektorsysteme.Common detection methods and / or detection systems include, inter alia, phosphoimagers, X-ray films, CCD cameras and / or fluorescence detector systems.

Das radioaktive Isotop kann beispielsweise ¹³¹Iod, ³²Phosphor ³Tritium und/oder ein anderes radioaktives Isotop sein.The radioactive isotope can be, for example, ¹³¹ iodine, ³² phosphorus ³ tritium and / or another radioactive isotope.

Es ist denkbar, dass ein Nanopartikel eine Größe von etwa 1-200nm hat. Der Nanopartikel kann auch eine Größe <1nm haben. Der Nanopartikel kann ein metallischer Nanopartikel sein, Insbesondere ein Gold-Nanopartikel. Generell ist es auch möglich, dass Gold-Nanopartikel kolloidale Gold-Nanopartikel sind.It is conceivable that a nanoparticle has a size of about 1-200nm. The nanoparticle can also have a size <1 nm. The nanoparticle can be a metallic nanoparticle, in particular a gold nanoparticle. In general, it is also possible that gold nanoparticles are colloidal gold nanoparticles.

Es ist auch vorstellbar, dass die Nanopartikel magnetische Nanopartikel sind bzw. umfassen, besonders superparamagnetische Nanopartikel und/oder Silika-Sphären gefüllt mit Farbstoffen, fluoreszierende Nanopartikel, besonders Quantum Dots und/oder Quantum Rods und/oder Nanopartikel beinhaltend seltene Erden sind bzw umfassen. Weiterhin ist vorstellbar, dass Nanopartikel, Stoffe umfasst, die als Einheit in Polymermizellen vorliegen, und/oder eingehüllt beispielsweise in Acrylat, Surfmer, Dendrimer und/oder Polymer, so diese direkt oder indirekt gebunden die Solubilisierung und Anheftung einer Komponente im Sinne dieser Schrift erlauben.It is also conceivable that the nanoparticles are or include magnetic nanoparticles, especially superparamagnetic nanoparticles and / or silica spheres filled with dyes, fluorescent nanoparticles, especially quantum dots and / or quantum rods and / or nanoparticles containing rare earths are or include. It is also conceivable that nanoparticles comprise substances that are present as a unit in polymer micelles and / or encased, for example, in acrylate, surfmer, dendrimer and / or polymer, if these directly or indirectly bound allow the solubilization and attachment of a component within the meaning of this document .

Weiter ist vorstellbar, dass die mindestens eine Komponente mindestens einen monoklonalen Antikörper, polyklonalen Antikörper, affinitätsaufgereinigten Antikörper, Antikörperfragment, Nanobody, Nukleinsäurefragment, Aptamer, Anticalin, Lektin, Affibody, chemischen Ligand, Farbstoff, Fluorochrom, Fluorophor, Luminophor, Enzym, Peptid, Biotin, Oligonukleotid, Protein-Tag, radioaktives Isotop, nicht radioaktives Nuklid, Nanopartikel, insbesondere Gold-Nanopartikel, fluoreszierenden Nanopartikel, magnetischen Nanopartikel und/oder Quantumdot umfasst.It is also conceivable that the at least one component has at least one monoclonal antibody, polyclonal antibody, affinity-purified antibody, antibody fragment, nanobody, nucleic acid fragment, aptamer, anticalin, lectin, affibody, chemical ligand, dye, fluorochrome, fluorophore, luminophore, enzyme, peptide, biotin , Oligonucleotide, protein tag, radioactive isotope, non-radioactive nuclide, nanoparticles, in particular gold nanoparticles, fluorescent nanoparticles, magnetic nanoparticles and / or quantum dot.

Im Übrigen kann vorgesehen sein, dass das Trägermaterial mindestens ein poröses Material umfasst, insbesondere ein Fasergewebe aus Zellulose, Glasfaser, Polymerfaser, Nylon, Seide, Wolle, Filz und/oder Baumwoll-Linter und/der einen Schwamm. Durch die poröse Beschaffenheit des Trägermaterials ist das Trägermaterial geeignet, Flüssigkeiten aufzunehmen und/oder zu speichern.Furthermore, it can be provided that the carrier material comprises at least one porous material, in particular a fiber fabric made of cellulose, glass fiber, polymer fiber, nylon, silk, wool, felt and / or cotton linter and / or a sponge. Due to the porous nature of the carrier material, the carrier material is suitable for absorbing and / or storing liquids.

Ein Schwamm kann ein synthetischer und/oder natürlicher Schwamm sein.A sponge can be a synthetic and / or natural sponge.

Generell kann das Trägermaterial aus jedem synthetischen und/oder nicht-synthetischen Material und/oder jeder synthetischen oder nicht-synthetischen Materialkombination hergestellt sein.In general, the carrier material can be made from any synthetic and / or non-synthetic material and / or any synthetic or non-synthetic material combination.

Generell kann das Trägermaterial eine Kombination aus mehreren Geweben und/oder Materialen und/oder Stoffen sein.In general, the carrier material can be a combination of several fabrics and / or materials and / or substances.

Generell kann das Trägermaterial aus Kohlehydraten aufgebaut sein.In general, the carrier material can be made up of carbohydrates.

Im Übrigen kann vorgesehen sein, dass das Trägermaterial mindestens ein poröses Material umfasst und in einem Elutionsfluid lösbar ist. Bei einem Trägermaterial, das in einem Elutionsfluid lösbar ist kann vermieden werden, dass nach Freigabe der Komponente in das Elutionsfluid möglicherweise ungewollt störendes Trägermaterial im Elutionfluid vorliegt. Insbesondere kann so auch vermieden werden, dass ein Verlust an Elutionsfluid verzeichnet werden muss, dadurch, dass ein Volumenanteil des Elutionsfluids im Trägermaterial gebunden ist.Furthermore, it can be provided that the carrier material comprises at least one porous material and is soluble in an elution fluid. In the case of a carrier material which is soluble in an elution fluid, it can be avoided that after the component has been released into the elution fluid, there may be unwanted interfering carrier material in the elution fluid. In particular, it can also be avoided in this way that a loss of elution fluid has to be recorded, because a volume fraction of the elution fluid is bound in the carrier material.

Denkbar ist Insbesondere, dass das Trägermaterial ein Zucker, Protein und/oder Polymer ist oder ein Gemisch aus diesen oder ähnlichen wasserlöslichen Materialien.In particular, it is conceivable that the carrier material is a sugar, protein and / or polymer or a mixture of these or similar water-soluble materials.

Denkbar ist insbesondere, dass das Trägermaterial eine lösbare Tablette ist.In particular, it is conceivable that the carrier material is a releasable tablet.

Weiter ist denkbar, dass das das Trägermaterial eine Dicke größer als 0,1 mm und einen Durchmesser von 0,5 cm bis 5 cm, insbesondere von 1 cm bis 5 cm aufweist.It is also conceivable that the carrier material has a thickness greater than 0.1 mm and a diameter of 0.5 cm to 5 cm, in particular 1 cm to 5 cm.

Diese Dimensionen des Trägermaterials ermöglichen die Aufnahme und/oder Bindung eines gewissen Flüssigkeitsvolumens.These dimensions of the carrier material enable the absorption and / or binding of a certain volume of liquid.

Weiter ist vorstellbar, dass das Trägermaterial eine weitgehend runde Form aufweist.It is also conceivable that the carrier material has a largely round shape.

Insbesondere ist es möglich, dass das Trägermaterial eine kreisrunde Form aufweist.In particular, it is possible for the carrier material to have a circular shape.

Denkbar Ist, dass eine runde Form des Trägermaterials das passgenaue einbringen des Trägermaterials in ein rundes Reaktionsgefäß ermöglicht.It is conceivable that a round shape of the carrier material enables the carrier material to be introduced into a round reaction vessel with an exact fit.

Es ist möglich, dass das Trägermaterial aus einem Rohling ausgestanzt und/oder ausgeschnitten wurde.It is possible that the carrier material was punched out and / or cut out from a blank.

Im Übrigen kann vorgesehen sein, dass das Trägermaterial ein Bindungsvolumen von bis zu 20 ml hat. Ein Bindungsvolumen von bis zu 20ml kann bewirkten, dass auch bei niedrig konzentrierten Flüssigkeiten eine ausreichende, definierte Menge einer Komponente aufgenommen wird.Furthermore, it can be provided that the carrier material has a binding volume of up to 20 ml. A binding volume of up to 20ml can ensure that a sufficient, defined amount of a component is absorbed even with low-concentration liquids.

Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ferner ein Kitsystem.The present invention also relates to a kit system.

Es ist denkbar, dass ein Kitsystem folgendes umfasst:

- ein Reaktionsgefäß, welches zur Aufnahme eines Fluids geeignet ist;
- ein Trägermaterial, wobei das Trägermaterial mindestens eine Komponente umfasst,

dadurch gekennzeichnet, dass das Trägermaterial geeignet ist ein bestimmtes Volumen einer Flüssigkeit beinhaltend eine definierte Menge der Komponente aufzunehmen und in Anwesenheit eines Elutionsfluids wieder freizugeben, und wobei das Trägermaterial in dem ansonsten leeren Reaktionsgefäß eingebracht Ist.It is conceivable that a kit system includes:

- A reaction vessel which is suitable for receiving a fluid;
- A carrier material, wherein the carrier material comprises at least one component,

characterized in that the carrier material is suitable to take up a certain volume of a liquid containing a defined amount of the component and to release it again in the presence of an elution fluid, and wherein the carrier material is introduced into the otherwise empty reaction vessel.

Ein erfindungsgemäßes Kitsystem ermöglicht eine einfache und schnelle Durchführung eines Versuches, zum Beispiel eines Bioassays. Ein erfindungsgemäßes Kitsystem erlaubt es einem Anwender bei Einsatz des Kitsystems genau definierte, standardisierte Bedingungen anzuwenden, sodass, mit dem Kitsystem durchgeführte Versuche und/oder Testreihen, sowie deren Ergebnisse untereinander direkt vergleichbar sind.A kit system according to the invention enables an experiment, for example a bioassay, to be carried out quickly and easily. A kit system according to the invention allows a user to use the kit system with precisely defined, to apply standardized conditions so that experiments and / or test series carried out with the kit system and their results are directly comparable with one another.

Ein Reaktionsgefäß kann generell jede Form von Behälter sein. Insbesondere ist es möglich, dass das Reaktionsgefäß ein Röhrchen ist.A reaction vessel can generally be any form of container. In particular, it is possible that the reaction vessel is a tube.

Generell ist es möglich, dass das Reaktionsgefäß zum Erfassen jedes erdenklichen Volumens ausgebildet sein kann (z.B. 100µl, 200µl, 1,0 ml, 1,5 ml, 2 ml, 5 ml, 15 ml, 25 ml, 50 ml, 100 ml, 200 ml, 500mL, 1L).In general, it is possible that the reaction vessel can be designed to measure any conceivable volume (e.g. 100µl, 200µl, 1.0 ml, 1.5 ml, 2 ml, 5 ml, 15 ml, 25 ml, 50 ml, 100 ml, 200 ml, 500mL, 1L).

Es ist generell möglich, dass auf dem Reaktionsgefäß eine Füllstandanzeige (z.B. in ml) angebracht ist. Dies ermöglicht das direkte Ablesen von in das Reaktionsgefäß eingebrachten Volumina von Flüssigkeiten, z.B. eines Elutionsfluids.It is generally possible for a level indicator (e.g. in ml) to be attached to the reaction vessel. This enables the direct reading of volumes of liquids introduced into the reaction vessel, e.g. an elution fluid.

Ferner Ist denkbar, dass die Komponente adhäsiv an das Trägermaterial gebunden und/oder auf dem Trägermaterial immobilisiert und/oder eingetrocknet ist.It is also conceivable that the component is adhesively bonded to the carrier material and / or immobilized and / or dried on the carrier material.

Weiter ist vorstellbar, dass das Reaktionsgefäß nahezu luftdicht verschließbar ist, Insbesondere mit einem Deckel.It is also conceivable that the reaction vessel can be closed in an almost airtight manner, in particular with a lid.

Der Deckel kann beispielsweise ein Schraubverschluss, ein Klickverschluss, eine Kapsel, ein Stopfen, eine Scheibe und/oder eine Folie sein. Ein nahezu luftdichter Verschluss des verschließbaren Reaktionsgefäßes ermöglicht eine Stabilisierung des Trägermaterials (und/oder der Komponente), insbesondere gegen Kontaminationen aller Art, z.B. mikrobielle Kontamination(en), z.B. durch Bakterien und/oder Pilze. Ferner ermöglicht der nahezu luftdichte Verschluss des Reaktionsgefäßes eine Stabilisierung des Trägermaterials gegen Umwelteinflüsse, z.B. hohe und/oder schwankende Luftfeuchtigkeit. Ein nahezu luftdichter Verschluss des verschließbaren Reaktionsgefäßes kann zudem das Halten von Schutzgasen In dem Reaktionsgefäß ermöglichen, was ebenso eine Stabilisierung des Trägermaterials (und/oder der Komponente) ermöglicht.The lid can be, for example, a screw cap, a click cap, a capsule, a stopper, a disk and / or a film. An almost airtight seal of the sealable reaction vessel enables the carrier material (and / or the component) to be stabilized, in particular against all types of contamination, e.g. microbial contamination (s), e.g. by bacteria and / or fungi. Furthermore, the almost airtight closure of the reaction vessel enables the carrier material to be stabilized against environmental influences, e.g. high and / or fluctuating humidity. A virtually airtight closure of the closable reaction vessel can also enable protective gases to be kept in the reaction vessel, which also enables the carrier material (and / or the component) to be stabilized.

Generell kann das Reaktionsgefäß wiederverschließbar sein.In general, the reaction vessel can be resealable.

Vorstellbar ist, dass das Trägermaterial im Deckel des Reaktionsgefäßes angebracht ist. Das Einbringen des Trägermaterials in den Deckel des Reaktionsgefäßes ermöglicht eine einfache Handhabung des Reaktionsgefäßes selbst, beispielsweise kann es so ermöglicht werden, dass ein Volumen einer sich in dem Reaktionsgefäß befindlichen Flüssigkeit mit Hilfe einer auf dem Reaktionsgefäß befindlichen Füllstandanzeige korrekt abgelesen werden kann, ohne dass das scheinbare Volumen der Flüssigkeit durch ein frei in der Flüssigkeit schwimmendes Trägermaterial verfälscht wird.It is conceivable that the carrier material is attached in the lid of the reaction vessel. The introduction of the carrier material into the lid of the reaction vessel enables easy handling of the reaction vessel itself, for example it can be made possible that a volume of a liquid located in the reaction vessel can be correctly read off with the aid of a level indicator located on the reaction vessel, without this apparent volume of the liquid is falsified by a carrier material floating freely in the liquid.

Insbesondere ist vorstellbar, dass das Trägermaterial in den Deckel des Reaktionsgefäßes hineingespannt und/oder geklickt wird.In particular, it is conceivable that the carrier material is clamped and / or clicked into the lid of the reaction vessel.

Es ist generell auch möglich, dass das Trägermaterial in den Deckel geklebt wird.It is generally also possible for the carrier material to be glued into the lid.

Des Weiteren betrifft die vorliegende Erfindung die Verwendung eines Kitsystems nach einem der Ansprüche 10-13 für die Herstellung eines Analysefluids für einen Bioassay. Die Verwendung eines erfindungsgemäßen Kitsystems für die Herstellung eines Analysefluids für einen Bioassay, wie zum Beispiel einer Antikörperlösung für einen Immunassay, hat den Vorteil, dass Assays mit möglichst geringem Zeitaufwand durchgeführt werden können. Insbesondere ist dies durch das Wegfallen und/oder Verkürzen von üblicherweise durchgeführten Blockler- und/oder Inkubations- und/oder Waschschritten zu erklären. Zudem können durch die Verwendung eines erfindungsgemäßen Kitsystems für die Herstellung eines Analysefluids, wie zum Beispiel einer Antikörperlösung für einen Immunassay, beispielsweise einen Western Blot, Dot Blot, Slot Blot, ELISA, Radioimmunassay, Immunmarkierung und/oder Immunhistochemie, standardisierte Bedingungen gewährleistet werden, sodass mit dem Kitsystem durchgeführte Versuche und/oder Testreihen, sowie deren Ergebnisse miteinander vergleichbar sind.Furthermore, the present invention relates to the use of a kit system according to one of claims 10-13 for the production of an analysis fluid for a bioassay. The use of a kit system according to the invention for the production of an analysis fluid for a bioassay, such as an antibody solution for an immunassay, for example, has the advantage that assays can be carried out in the least possible time. In particular, this can be explained by the omission and / or shortening of blocking and / or incubation and / or washing steps that are usually carried out. In addition, through the use of a kit system according to the invention for the production of an analysis fluid, such as an antibody solution for an immunassay, for example a Western blot, dot blot, slot blot, ELISA, radioimmunassay, immunolabelling and / or immunohistochemistry, standardized conditions can be ensured so that Experiments and / or test series carried out with the kit system and the results of which are comparable with one another.

Des Weiteren betrifft die vorliegende Erfindung ein Verfahren zum Nachweis eines immobilisierten Analyten auf einer Membran und/oder anderer, geeigneter Oberfläche, beispielsweise der Oberfläche einer ELISA-Platte.The present invention also relates to a method for detecting an immobilized analyte on a membrane and / or other suitable surface, for example the surface of an ELISA plate.

Das Verfahren kann mindestens die folgenden Schritte umfassen:

- Beladung eines Trägermaterials mit einem bestimmten Volumen einer Flüssigkeit beinhaltend eine definierte Menge einer Verbindung aus einem spezifischen Bindungspartner des Analyten und einem Marker;
- Adhäsive Bindung der Verbindung an das Trägermaterial;
- Trocknung des Trägermaterials;
- Einbringen des Trägermaterials in ein trockenes Reaktionsgefäß;
- Einbringen eines Elutionsfluids In das Reaktionsgefäß, wobei die Verbindung in Anwesenheit des Elutionsfluids aus dem Trägermaterial in das Elutionsfluid freigegeben wird und ein Analysefluid bildet;
- Aufbringen des Analysefluids auf die Membran;
- Nachweis der Bindung des spezifischen Bindungspartners des Analyten über den Marker.

The method can include at least the following steps:

Loading of a carrier material with a certain volume of a liquid containing a defined amount of a compound from a specific binding partner of the analyte and a marker;
- Adhesive bonding of the connection to the carrier material;
- drying of the carrier material;
- Introducing the carrier material into a dry reaction vessel;
Introducing an elution fluid into the reaction vessel, the compound being released from the carrier material into the elution fluid in the presence of the elution fluid and forming an analysis fluid;
- Applying the analysis fluid to the membrane;
- Detection of the binding of the specific binding partner of the analyte via the marker.

Ferner ist vorstellbar, dass das Verfahren einen oder beide weitere folgende Schritte umfasst:

- Vorbehandlung des Trägermaterials mit einem Fluid und/oder
- Einbringung von Zusatzstoffen zur aufzutragenden Komponente

It is also conceivable that the method comprises one or both of the following further steps:

- Pretreatment of the carrier material with a fluid and / or
- Introduction of additives to the component to be applied

Das erfindungsgemäße Verfahren zum Nachweis eines immobilisierten Analyten auf einer Membran umfasst weniger Verfahrensschritte als nach dem Stand der Technik durchgeführte Verfahren. Beispielsweise sind im erfindungsgemäßen Verfahren Im Vergleich zu dem nach dem Stand der Technik durchgeführten Verfahren keine Wasch- und/oder Blockierungsschritte erforderlich, was den Vorteil einer Zeitersparnis mit sich bringt. Des Weiteren verringern sich die Prozessschritte des Verfahrens, da die nacheinander durchzuführende Inkubation von Primär- und Sekundärantikörper, wie es bei Indirekten Assays angewandt wird nicht erforderlich.The method according to the invention for detecting an immobilized analyte on a membrane comprises fewer method steps than methods carried out according to the prior art. For example, in the method according to the invention, compared to the method carried out according to the prior art, no washing and / or blocking steps are required, which has the advantage of saving time. Furthermore, the process steps of the method are reduced, since the successive incubation of primary and secondary antibodies, as is used in indirect assays, is not required.

Ferner wird durch das Trocknen des Trägermaterials die adhäsiv an das Trägermaterial gebundene Komponente stabilisiert, was zu einer geringeren Fehleranfälligkeit des erfindungsgemäßen Verfahrens gegenüber den nach dem Stand der Technik durchgeführten Verfahren führt. Insgesamt ist während des Verfahrens eine einfache Handhabung der Komponente möglich, da die Komponente portionsgerecht und stabilisiert vorliegt und nicht wie üblich auf Eis und/oder In einer Kühlung gearbeitet werden muss. Bei Verwendung Goldnanopartikel markierter Antikörper als Komponente ermöglicht das erfindungsgemäße Verfahren direkt den Nachweis der Bindung des spezifischen Bindungspartners des Analyten. In den üblichen Verfahren sind In der Regel aufwendige und/oder teure Detektionsverfahren und/oder Detektionssysteme nötig (unter anderem Phosphoimager, Röntgenfilme, CCD Kameras und/oder Fluoreszenzdetektorsysteme).Furthermore, the drying of the carrier material stabilizes the component adhesively bonded to the carrier material, which leads to a lower susceptibility to errors in the method according to the invention compared to the methods carried out according to the prior art. Overall, simple handling of the component is possible during the process, since the component is present in appropriate portions and in a stabilized manner and does not have to be carried out on ice and / or in a cooling system as is customary. When using gold nanoparticle-labeled antibodies as a component, the method according to the invention enables direct detection of the binding of the specific binding partner of the analyte. In the usual methods, complex and / or expensive detection methods and / or detection systems are usually necessary (including phosphoimagers, X-ray films, CCD cameras and / or fluorescence detector systems).

Das erfindungsgemäße Trägermaterial und/oder Kitsystem und/oder Verfahren kann generell für Bioassays und vor allem für direkte und indirekte Immunassays und/oder nicht kompetitive Immunassays oder kompetitive Immunassays verwendet werden.The carrier material and / or kit system and / or method according to the invention can generally be used for bioassays and especially for direct and indirect immunassays and / or non-competitive immunassays or competitive immunassays.

Mögliche Anwendungsgebiete des erfindungsgemäßen Trägermaterials und/oder Kitsystems und/oder Verfahrens umfassen beispielsweise die Diagnostik und/oder Analytik in den Lebenswissenschaften (Biologie, Medizin, Biomedizin, Pharmazie, Biochemie, Chemie, Molekularbiologie, Biophysik, Bioinformatik, Humanbiologie, Forensik, Agrarwissenschaft, Agrartechnologle, Ernährungswissenschaft, Lebensmittelforschung, etc.).Possible areas of application of the carrier material and / or kit system and / or method according to the invention include, for example, diagnostics and / or analysis in the life sciences (biology, medicine, biomedicine, pharmacy, biochemistry, chemistry, molecular biology, biophysics, bioinformatics, human biology, forensics, agricultural science, agricultural technology) , Nutritional science, food research, etc.).

Weitere Einzelheiten und Vorteile der Erfindung sollen nun anhand eines/der in den Zeichnungen dargestellten Ausführungsbeispiels/e näher erläutert werden.Further details and advantages of the invention will now be explained in more detail with the aid of one of the exemplary embodiments shown in the drawings.

Es zeigen:

1: eine schematische Darstellung eines ersten Ausführungsbeispiels eines erfindungsgemäßen Trägermaterials;
2: eine schematische Darstellung eines ersten Ausführungsbeispiels der Herstellung eines erfindungsgemäßes Trägermaterials;
3: eine schematische Darstellung eines ersten Ausführungsbeispiels eines erfindungsgemäßen Kitsystems umfassend ein erfindungsgemäßes Trägermaterial gemäß 1;
4: eine schematische Darstellung eines ersten Ausführungsbeispiels der erfindungsgemäßen Herstellung einer Antikörperlösung für einen Immunassay unter Verwendung des erfindungsgemäßen Kitsystems gemäß 3.
5: eine schematische Darstellung eines Ausführungsbeispiels eines gängigen Verfahrens nach dem Stand der Technik zum Nachweis eines immobilisierten Analyten auf einer Membran;
6: eine schematische Darstellung eines Ausführungsbeispiels eines erfindungsgemäßen Verfahrens zum Nachweis eines immobilisierten Analyten auf einer Membran;
7: eine Darstellung eines erfindungsgemäßen Ausführungsbeispiels mit einem Dot-Blot direkt;
8: eine Darstellung eines erfindungsgemäßen Ausführungsbeispiels mit einem Dot-Blot indirekt;
9; eine Darstellung eines erfindungsgemäßen Ausführungsbeispiels mit einem Western Blot direkt; und
10: eine Darstellung eines erfindungsgemäßen Ausführungsbeispiels mit einem Western Blot indirekt.

Show it:

1 : a schematic representation of a first embodiment of a carrier material according to the invention;
2 : a schematic representation of a first exemplary embodiment of the production of a carrier material according to the invention;
3 : a schematic representation of a first embodiment of a kit system according to the invention comprising a carrier material according to the invention according to FIG 1 ;
4th : a schematic representation of a first embodiment of the inventive production of an antibody solution for an immunassay using the inventive kit system according to FIG 3 .
5 : a schematic representation of an embodiment of a common method according to the prior art for detecting an immobilized analyte on a membrane;
6th : a schematic representation of an embodiment of a method according to the invention for detecting an immobilized analyte on a membrane;
7th : a representation of an embodiment according to the invention with a dot blot directly;
8th : a representation of an embodiment according to the invention with a dot blot indirect;
9 ; a representation of an embodiment of the invention with a Western blot directly; and
10 : a representation of an embodiment of the invention with a Western blot indirect.

Flg. 1 zeigt eine schematische Darstellung eines ersten Ausführungsbeispiels eines erfindungsgemäßen Trägermaterials T.Flg. 1 shows a schematic representation of a first exemplary embodiment of a carrier material according to the invention T .

In diesem Ausführungsbeispiel ist das Trägermaterial T ein poröses Material.In this embodiment, the carrier material is T a porous material.

In diesem Ausführungsbeispiel ist das Trägermaterial T ein Fasergewebe.In this embodiment, the carrier material is T a fiber fabric.

In diesem Ausführungsbeispiel ist das Trägermaterial T aus Baumwoll-Linter.In this embodiment, the carrier material is T made of cotton linter.

Alternativ und/oder zusätzlich kann das Trägermaterial T Zellulose, Glasfasern, Polymerfasern, Nylon, Seide, Wolle, Filz und/der einen Schwamm umfassen.Alternatively and / or additionally, the carrier material T Cellulose, glass fibers, polymer fibers, nylon, silk, wool, felt and / or a sponge.

In anderen Worten, generell kann das Trägermaterial T mindestens ein poröses Material umfassen, insbesondere ein Fasergewebe aus Zellulose, Glasfaser, Polymerfaser, Nylon, Seide, Wolle, Filz und/oder Baumwoll-Linter und/der einen Schwamm.In other words, generally the carrier material T comprise at least one porous material, in particular a fiber fabric made of cellulose, glass fiber, polymer fiber, nylon, silk, wool, felt and / or cotton linter and / or a sponge.

Generell ist es möglich, dass das Trägermaterial T mehrere poröse Materialien umfasst.Generally it is possible that the carrier material T comprises several porous materials.

Im Übrigen kann vorgesehen sein, dass das Trägermaterial mindestens ein poröses Material umfasst und in einem Elutionsfluid lösbar ist.Furthermore, it can be provided that the carrier material comprises at least one porous material and is soluble in an elution fluid.

Denkbar ist insbesondere, dass das Trägermaterial ein Zucker, Protein und/oder Polymer ist oder ein Gemisch aus diesen oder ähnlichen wasserlöslichen Materialien.It is especially conceivable that the carrier material is a sugar, protein and / or polymer or a mixture of these or similar water-soluble materials.

Denkbar ist insbesondere, dass das Trägermaterial eine lösbare Tablette ist.
In diesem Ausführungsbeispiel weist das Trägermaterial T eine weitgehend runde Form auf.In particular, it is conceivable that the carrier material is a releasable tablet.
In this exemplary embodiment, the carrier material T a largely round shape.

Alternativ kann das Trägermaterial T in jeder erdenklichen anderen Form vorliegen.Alternatively, the carrier material T in any other imaginable form.

Alternativ kann das Trägermaterial T in jede erdenkliche andere Form gebracht werden.Alternatively, the carrier material T can be brought into any other imaginable form.

Nicht gezeigt in 1 Ist, dass das Trägermaterial T eine Dicke von 0,75 mm hat.Not shown in 1 Is that the support material T has a thickness of 0.75 mm.

Nicht gezeigt in 1 ist, dass das Trägermaterial T einen Durchmesser von 13 mm hat.Not shown in 1 is that the support material T has a diameter of 13 mm.

Nicht gezeigt in 1 ist, dass es generell möglich ist, dass das Trägermaterial T eine Dicke größer als 0,1 mm aufweist.Not shown in 1 is that it is generally possible that the carrier material T has a thickness greater than 0.1 mm.

Nicht gezeigt in 1 ist, dass es generell möglich ist, dass das Trägermaterial T einen Durchmesser von 0,5 cm bis 5 cm, insbesondere von 1 cm bis 5 cm aufweist.Not shown in 1 is that it is generally possible that the carrier material T has a diameter of 0.5 cm to 5 cm, in particular 1 cm to 5 cm.

Nicht gezeigt in 1 ist, dass das Trägermaterial T ein Bindungsvolumen von 0,1 mL 0,5 ml hat.Not shown in 1 is that the support material T has a binding volume of 0.1 mL 0.5 mL.

Nicht gezeigt in 1 ist, dass es generell möglich ist, dass das Trägermaterial T ein Bindungsvolumen von bis zu 20 ml hat.Not shown in 1 is that it is generally possible that the carrier material T has a binding volume of up to 20 ml.

Nicht gezeigt in 1 ist, dass Trägermaterial T alternativ mindestens ein poröses Material umfassen kann und in einem Elutionsfluid lösbar sein kann.Not shown in 1 is that backing material T alternatively can comprise at least one porous material and can be soluble in an elution fluid.

Nicht gezeigt in 1 ist, dass das Trägermaterial T geeignet ist ein bestimmtes Volumen einer Flüssigkeit beinhaltend eine definierte Menge der Komponente K aufzunehmen und in Anwesenheit eines Elutionsfluids wieder freizugeben.Not shown in 1 is that the support material T a certain volume of a liquid containing a defined amount of the component is suitable K and to release again in the presence of an elution fluid.

Das Trägermaterial T umfasst eine Komponente K.The carrier material T includes a component K .

In diesem Ausführungsbeispiel ist die Komponente K adhäsiv an das Trägermaterial T gebunden.In this embodiment, the component is K adhesive to the carrier material T bound.

Alternativ kann die Komponente K auf dem Trägermaterial T immobilisiert und/oder Eingetrocknet sein.Alternatively, the component K on the carrier material T immobilized and / or dried out.

Generell ist es möglich, dass eine Komponente K adhäsiv an das Trägermaterial T gebunden und/oder auf dem Trägermaterial T immobilisiert und/oder eingetrocknet ist.Generally it is possible for a component K adhesive to the carrier material T bound and / or on the carrier material T immobilized and / or dried up.

Nicht gezeigt in 1 ist, dass die Komponente K eine Verbindung aus einem ersten Stoff und einem zweiten Stoff umfasst.Not shown in 1 is that the component K comprises a combination of a first substance and a second substance.

Nicht gezeigt in 1 ist, dass die Komponente K eine Verbindung aus mindestens einem ersten Stoff und mindestens einem zweiten Stoff umfassen kann.Not shown in 1 is that the component K may comprise a combination of at least one first substance and at least one second substance.

Nicht gezeigt in 1 ist, dass das Trägermaterial T auch mehr als eine Komponente K umfassen kann, wobei die mehr als eine Komponente K adhäsiv an das Trägermaterial T gebunden und/oder auf dem Trägermaterial T immobilisiert und/oder eingetrocknet sein kann.Not shown in 1 is that the support material T also more than one component K may include, the more than one component K adhesive to the carrier material T bound and / or on the carrier material T immobilized and / or dried up.

In diesem Ausführungsbeispiel ist der erste Stoff der Komponente ein Bindungspartner für einen Analyten.In this exemplary embodiment, the first substance of the component is a binding partner for an analyte.

In diesem Ausführungsbeispiel ist der erste Stoff der Komponente ein spezifischer Bindungspartner für einen Analyten.In this exemplary embodiment, the first substance of the component is a specific binding partner for an analyte.

In diesem Ausführungsbeispiel ist der spezifische Bindungspartner für den Analyten ein Antikörper.In this exemplary embodiment, the specific binding partner for the analyte is an antibody.

In diesem Ausführungsbeispiel ist der spezifische Bindungspartner für den Analyten ein polyklonaler Antikörper.In this embodiment, the specific binding partner for the analyte is a polyclonal antibody.

In diesem Ausführungsbeispiel ist der spezifische Bindungspartner für den Analyten ein polyklonaler Sekundärantikörper gegen in Maus erzeugte, Analyt-spezifische Erstantikörper.In this exemplary embodiment, the specific binding partner for the analyte is a polyclonal secondary antibody against analyte-specific primary antibodies generated in mice.

In diesem Ausführungsbeispiel ist der zweite Stoff ein Marklerungsmolekül.In this exemplary embodiment, the second substance is a marker molecule.

In diesem Ausführungsbeispiel ist das Markierungsmolekül ein Nanopartikel.In this exemplary embodiment, the marker molecule is a nanoparticle.

In diesem Ausführungsbeispiel ist der Nanopartikel ein Gold-Nanopartikel.In this exemplary embodiment, the nanoparticle is a gold nanoparticle.

Nicht gezeigt in 1 ist, dass es generell möglich ist, dass der erste Stoff der Komponente einen spezifischen Bindungspartner eines Analyten umfasst, wobei der Bindungspartner mindestens einen monoklonalen Antikörper, polyklonalen Antikörper, affinitätsaufgereinigten Antikörper, Antikörperfragment, Nanobody, Nukleinsäurefragment, Aptamer, Anticalin, Lektin, Affibody und/oder chemischen Ligand umfasst und wobei der zweite Stoff einen Marker umfasst, wobei die Markierung mindestens einen Farbstoff, Fluorochrom, Fluorophor, Luminophor, Enzym, Peptid, Biotin, Oligonukleotid, Protein-Tag, radioaktives Isotop, nicht radioaktives Nuklid, Nanopartikel, insbesondere Gold-Nanopartikel, fluoreszierenden Nanopartikel, magnetischen Nanopartikel und/oder Quantumdot umfasst.Not shown in 1 is that it is generally possible that the first substance of the component comprises a specific binding partner of an analyte, the binding partner at least one monoclonal antibody, polyclonal antibody, affinity-purified antibody, antibody fragment, nanobody, nucleic acid fragment, aptamer, anticalin, lectin, affibody and / or chemical ligand and wherein the second substance comprises a marker, the marker at least one dye, fluorochrome, fluorophore, luminophore, enzyme, peptide, biotin, oligonucleotide, protein tag, radioactive isotope, non-radioactive nuclide, nanoparticle, in particular gold Includes nanoparticles, fluorescent nanoparticles, magnetic nanoparticles and / or quantum dot.

Nicht gezeigt in 1 ist, dass alternativ die mindestens eine Komponente K keine Verbindung aus mindestens einem ersten Stoff und mindestens einem zweiten Stoff sein muss.Not shown in 1 is that alternatively the at least one component K does not have to be a combination of at least one first substance and at least one second substance.

Nicht gezeigt in 1 Ist, dass die mindestens eine Komponente K mindestens einen monoklonalen Antikörper, polyklonalen Antikörper, affinitätsaufgereinigten Antikörper, Antikörperfragment, Nanobody, Nukleinsäurefragment, Aptamer, Anticalin, Lektin, Affibody, chemischen Ligand, Farbstoff, Fluorochrom, Fluorophor, Luminophor, Enzym, Peptid, Biotin, Oligonukleotid, Protein-Tag, radioaktives Isotop, nicht radioaktives Nuklid, Nanopartikel, insbesondere Gold-Nanopartikel, fluoreszierenden Nanopartikel, magnetischen Nanopartikel und/oder Quantumdot umfassen kann.Not shown in 1 Is that the at least one component K at least one monoclonal antibody, polyclonal antibody, affinity-purified antibody, antibody fragment, nanobody, nucleic acid fragment, aptamer, anticalin, lectin, affibody, chemical ligand, dye, fluorochrome, fluorophore, luminophore, enzyme, peptide, biotin, oligonucleotide, protein isotope, radioact , non-radioactive nuclide, nanoparticles, in particular gold nanoparticles, fluorescent nanoparticles, magnetic nanoparticles and / or quantum dot.

2 zeigt eine schematische Darstellung eines ersten Ausführungsbeispiels der Herstellung eines erfindungsgemäßen Trägermaterials T. 2 shows a schematic representation of a first exemplary embodiment of the production of a carrier material according to the invention T .

In diesem Ausführungsbeispiel umfasst die Herstellung eines erfindungsgemäßen Trägermaterials T die Schritte S1-S4.In this exemplary embodiment, the production of a carrier material according to the invention comprises T the steps S1-S4 .

Es ist generell möglich, dass die Herstellung eines erfindungsgemäßen Trägermaterials T eine größere Anzahl an Schritten als die Schritte S1-S4 umfasst.It is generally possible that the production of a carrier material according to the invention T a greater number of steps than the steps S1-S4 includes.

Es ist generell möglich, dass die Herstellung eines erfindungsgemäßen Trägermaterials T eine kleinere Anzahl an Schritten als die Schritte S1-S4 umfasst.It is generally possible that the production of a carrier material according to the invention T a smaller number of steps than the steps S1-S4 includes.

In diesem Ausführungsbeispiel wird das Trägermaterial T in einem ersten Schritt S1 vorbehandelt.In this embodiment the carrier material T in a first step S1 pretreated.

Durch die Vorbehandlung wird ein Milieu geschaffen, dass die Komponenten vor allem während des Trocknungsvorgangs, aber auch bei der Lagerung stabilisiert.The pretreatment creates an environment that stabilizes the components, especially during the drying process, but also during storage.

In diesem Ausführungsbeispiel wird das Trägermaterial T mit einer Lösung vorbehandelt.In this embodiment the carrier material T pretreated with a solution.

In diesem Ausführungsbeispiel wird das Trägermaterial T mit einem Puffer vorbehandelt.In this embodiment the carrier material T pretreated with a buffer.

In diesem Ausführungsbeispiel wird das Trägermaterial T in einem Puffer inkubiert.In this embodiment the carrier material T incubated in a buffer.

Es ist generell möglich, dass das Trägermaterial T mit jeder Form von Fluid vorbehandelt wird.It is generally possible that the carrier material T is pretreated with any form of fluid.

Es ist generell möglich, dass das Trägermaterial T mit jeder Form von Fluid vorbehandelt wird, welches Proteine oder Peptide enthält.It is generally possible that the carrier material T is pretreated with any form of fluid containing proteins or peptides.

Es ist generell möglich, dass das Trägermaterial T mit einem Fluid vorbehandelt wird, welches Zusatzstoffe enthält.It is generally possible that the carrier material T is pretreated with a fluid which contains additives.

Generell ist es möglich, dass das Trägermaterial T mit mehreren Fluiden vorbehandelt wird.Generally it is possible that the carrier material T is pretreated with several fluids.

Es ist generell möglich, dass die Zusatzstoffe Kohlenhydrate, vor allem Zucker, vor allem Saccharose und/oder Trehalose, Tenside, vor allem Polysorbat 80, Proteine, vor allem Bovines Serum Albumin (BSA), Antioxidantien und/oder Polyethylenglycol (PEG) und/oder weitere Stoffe sind.It is generally possible that the additives carbohydrates, especially sugar, especially sucrose and / or trehalose, surfactants, especially polysorbate 80, proteins, especially bovine serum albumin (BSA), antioxidants and / or polyethylene glycol (PEG) and / or other substances.

In diesem Ausführungsbeispiel wird in einem zweiten Schritt S2 das Trägermaterial T nach der Vorbehandlung getrocknet.In this embodiment, in a second step S2 the carrier material T dried after pretreatment.

In diesem Ausführungsbeispiel wird das Trägermaterial T nach der Vorbehandlung luftgetrocknet.In this embodiment the carrier material T air-dried after pre-treatment.

Generell sind alternativ und/oder zusätzlich andere Trocknungsverfahren denkbar.In general, other drying methods are alternatively and / or additionally conceivable.

Es ist generell möglich, dass das Trocknungsverfahren in einem Inkubator stattfindet.It is generally possible for the drying process to take place in an incubator.

Es ist generell möglich, dass das Trägermaterial T vakuumgetrocknet wird.It is generally possible that the carrier material T is vacuum dried.

Alternativ Ist es möglich, dass keine Vorbehandlung des Trägermaterials T stattfindet.Alternatively, it is possible that there is no pre-treatment of the substrate T takes place.

Es ist generell möglich, dass keine Vorbehandlung des Trägermaterials T und/oder keine Trocknung nach der Vorbehandlung des Trägermaterials stattfindet.It is generally possible that there is no pretreatment of the carrier material T and / or no drying takes place after the pretreatment of the carrier material.

In anderen Worten, es ist generell möglich, dass die Schritte S3-S4 die Schritte S1-S4 ersetzten.In other words, it is generally possible to follow the steps S3-S4 the steps S1-S4 replace.

In diesem Ausführungsbeispiel wird in einem dritten Schritt S3 ein Trägermaterial T mit der Komponente K beladen.In this embodiment, in a third step S3 a carrier material T with the component K loaded.

In diesem Ausführungsbeispiel ist die Komponente K eine Verbindung aus mindestens einem ersten Stoff und mindestens einem zweiten Stoff, vgl. 1.In this embodiment, the component is K a combination of at least one first substance and at least one second substance, cf. 1 .

In diesem Ausführungsbeispiel wird das Trägermaterial T durch Auftropfen eines bestimmten Volumens einer Flüssigkeit beinhaltend eine definierte Menge der Komponente K mit der Komponente K beladen.In this embodiment the carrier material T by dropping on a specific volume of a liquid containing a defined amount of the component K with the component K loaded.

In diesem Ausführungsbeispiel wird das Trägermaterial T mit einem vorbestimmten Volumen einer Lösung einer bekannten Konzentration der Komponente K beladen.In this embodiment the carrier material T with a predetermined volume of a solution of a known concentration of the component K loaded.

In anderen Worten, in diesem Ausführungsbeispiel wird das Trägermaterial T mit einer definierten Menge der Komponente K beladen.In other words, in this exemplary embodiment the carrier material T with a defined amount of the component K loaded.

Generell sind alternativ und/oder zusätzlich andere Verfahren möglich, um das Trägermaterial T mit der Komponente K zu beladen.In general, other methods are possible as an alternative and / or in addition to the carrier material T with the component K to load.

Denkbar sind Verfahren wie Sprühen, Tauchen, Injizieren und/oder weitere Verfahren.Processes such as spraying, dipping, injecting and / or other processes are conceivable.

In diesem Ausführungsbeispiel wird die Komponente K adhäsiv an das Trägermaterial T gebunden.In this embodiment the component K adhesive to the carrier material T bound.

In diesem Ausführungsbeispiel ist das Trägermaterial T geeignet Ist ein bestimmtes Volumen einer Flüssigkeit beinhaltend eine definierte Menge der Komponente K aufzunehmen.In this embodiment, the carrier material is T suitable Is a certain volume of a liquid containing a defined amount of the component K record.

In einem vierten Schritt S4 wird das mit der Verbindung beladene Trägermaterial T getrocknet.In a fourth step S4 becomes the carrier material loaded with the compound T dried.

In diesem Ausführungsbeispiel wird das Trägermaterial T luftgetrocknet.In this embodiment the carrier material T air dried.

Generell sind alternativ und/oder zusätzlich andere Trocknungsverfahren denkbar.In general, other drying processes are alternatively and / or additionally conceivable.

Flg. 3 zeigt eine schematische Darstellung eines ersten Ausführungsbeispiels eines erfindungsgemäßen Kitsystems KS umfassend ein erfindungsgemäßes Trägermaterial T gemäß 1.Flg. 3 shows a schematic representation of a first exemplary embodiment of a kit system according to the invention KS comprising a carrier material according to the invention T according to 1 .

In diesem Ausführungsbeispiel umfasst das Kitsystem KS ein Reaktionsgefäß R.In this exemplary embodiment, the kit system comprises KS a reaction vessel R. .

In diesem Ausführungsbeispiel umfasst das Kitsystem KS ein erfindungsgemäßes Trägermaterial T.In this exemplary embodiment, the kit system comprises KS a carrier material according to the invention T .

Das in 1 dargestellte Ausführungsbeispiel des erfindungsgemäßen Trägermaterials T weist im Wesentlichen dieselben strukturellen und funktionalen Merkmale wie das Trägermaterial T des in 3 dargestellten Ausführungsbeispiels eines erfindungsgemäßen Kitsystems KS auf.This in 1 illustrated embodiment of the carrier material according to the invention T has essentially the same structural and functional characteristics as the carrier material T of the in 3 illustrated embodiment of a kit system according to the invention KS on.

In diesem Ausführungsbeispiel hat das Reaktionsgefäß R eine Öffnung.In this embodiment, the reaction vessel R. an opening.

In diesem Ausführungsbeispiel ist das Reaktionsgefäß R verschließbar.In this embodiment, the reaction vessel is R. lockable.

In diesem Ausführungsbeispiel ist das Reaktionsgefäß R wiederverschließbar.In this embodiment, the reaction vessel is R. resealable.

In diesem Ausführungsbeispiel ist das Reaktionsgefäß R verschlossen.In this embodiment, the reaction vessel is R. locked.

In diesem Ausführungsbeispiel ist das Reaktionsgefäß R nahezu luftdicht verschließbar.In this embodiment, the reaction vessel is R. almost airtight.

In diesem Ausführungsbeispiel ist das Reaktionsgefäß R nahezu luftdicht wiederverschließbar.In this embodiment, the reaction vessel is R. resealable almost airtight.

In diesem Ausführungsbeispiel ist das Reaktionsgefäß R nahezu luftdicht verschlossen.In this embodiment, the reaction vessel is R. almost airtight.

In diesem Ausführungsbeispiel ist das Reaktionsgefäß R mit einem Deckel D verschließbar.In this embodiment, the reaction vessel is R. with a lid D. lockable.

In diesem Ausführungsbeispiel ist das Reaktionsgefäß R mit einem Deckel D wiederverschließbar.In this embodiment, the reaction vessel is R. with a lid D. resealable.

In diesem Ausführungsbeispiel Ist das Reaktionsgefäß R mit einem Deckel D verschlossen.In this embodiment, the reaction vessel is R. with a lid D. locked.

In diesem Ausführungsbeispiel ist das Reaktionsgefäß R mit einem Deckel D nahezu luftdicht verschließbar.In this embodiment, the reaction vessel is R. with a lid D. almost airtight.

In diesem Ausführungsbeispiel ist das Reaktionsgefäß R mit einem Deckel D nahezu luftdicht verschlossen.In this embodiment, the reaction vessel is R. with a lid D. almost airtight.

In diesem Ausführungsbeispiel ist der Deckel D des Reaktionsgefäßes R ein Schraubverschluss.In this embodiment, the lid D. of the reaction vessel R. a screw cap.

Alternativ und/oder zusätzlich kann der Deckel D des Reaktionsgefäßes R ein Schraubverschluss, ein Klickverschluss, eine Kapsel, ein Stopfen, eine Scheibe, eine Folie und/oder ein anderes Verschlusssystem sein.Alternatively and / or in addition, the cover D. of the reaction vessel R. be a screw cap, a click cap, a capsule, a stopper, a disc, a foil and / or another closure system.

In diesem Ausführungsbeispiel hat das Reaktionsgefäß R ein Fassungsvolumen von 15 ml.In this embodiment, the reaction vessel R. a capacity of 15 ml.

Generell ist es möglich, dass das Reaktionsgefäß R zum Erfassen jedes erdenklichen Volumens ausgebildet Ist (z.B. 100 µl, 200µl, 1,0 ml, 1,5 ml, 2 ml, 5 ml, 15 ml, 25 ml, 50 ml, 100 ml, 200 ml, 500 ml, 11).Generally it is possible that the reaction vessel R. Designed to measure every imaginable volume (e.g. 100 µl, 200 µl, 1.0 ml, 1.5 ml, 2 ml, 5 ml, 15 ml, 25 ml, 50 ml, 100 ml, 200 ml, 500 ml, 11) .

In diesem Aufführungsbeispiel ist das Trägermaterial T in dem Reaktionsgefäß R eingebracht.In this performance example, the carrier material is T in the reaction vessel R. brought in.

In diesem Ausführungsbeispiel ist das Trägermaterial T in dem ansonsten leeren Reaktionsgefäß R eingebracht.In this embodiment, the carrier material is T in the otherwise empty reaction vessel R. brought in.

In diesem Ausführungsbeispiel ist das Trägermaterial T im Deckel D des Reaktionsgefäßes R angebracht.In this embodiment, the carrier material is T in the lid D. of the reaction vessel R. appropriate.

Alternativ und/oder zusätzlich kann das Trägermaterial T am Boden oder an der Wand des Reaktionsgefäßes R angebracht seinAlternatively and / or additionally, the carrier material T on the bottom or on the wall of the reaction vessel R. to be appropriate

Alternativ und/oder zusätzlich kann ein erfindungsgemäßes Trägermaterial T an jede beliebe Stelle eines Reaktionsgefäßes R eingebracht sein.Alternatively and / or in addition, a carrier material according to the invention can be used T at any point in a reaction vessel R. be brought in.

In diesem Ausführungsbeispiel ist das Reaktionsgefäß R zur Aufnahme eines Fluids geeignet.In this embodiment, the reaction vessel is R. suitable for taking up a fluid.

Nicht gezeigt in 3 ist, dass das Trägermaterial T geeignet ist, ein bestimmtes Volumen einer Flüssigkeit beinhaltend eine definierte Menge der Komponente K aufzunehmen und in Anwesenheit eines Elutionsfluids wieder freizugeben.Not shown in 3 is that the support material T is suitable, a certain volume of a liquid containing a defined amount of the component K and to release again in the presence of an elution fluid.

Nicht gezeigt in 3 ist, dass das Kitsystem KS für die Herstellung eines Analyseflulds für einen Bioassay verwendet werden kann.Not shown in 3 is that the kit system KS can be used for the preparation of an analysis fluid for a bioassay.

Nicht gezeigt in 3 ist, dass das Kitsystem KS für die Herstellung einer Antikörperlösung für einen Immunassay verwendet werden kann.Not shown in 3 is that the kit system KS can be used for the preparation of an antibody solution for an immunassay.

Flg. 4 zeigt eine schematische Darstellung eines ersten Ausführungsbeispiels der erfindungsgemäßen Herstellung einer Antikörperlösung für einen Immunassay unter Verwendung des erfindungsgemäßen Kitsystems KS gemäß 3.Flg. 4 shows a schematic representation of a first exemplary embodiment of the preparation according to the invention of an antibody solution for an immunassay using the kit system according to the invention KS according to 3 .

Das in 4 dargestellte erste Ausführungsbeispiel der erfindungsgemäßen Herstellung einer Antikörperlösung für einen Immunassay unter Verwendung des erfindungsgemäßen Kitsystems KS gemäß 3 umfasst zunächst die Schritte S1-S4 des in 2 dargestellten ersten Ausführungsbeispiels der erfindungsgemäßen Herstellung eines erfindungsgemäßen Trägermaterials T.This in 4th The illustrated first exemplary embodiment of the production according to the invention of an antibody solution for an immunassay using the kit system according to the invention KS according to 3 first includes the steps S1-S4 of the in 2 illustrated first embodiment of the inventive production of a carrier material according to the invention T .

In diesem Ausführungsbeispiel sind die Schritte S1-S4 des in 2 dargestellten Verfahrens die Schritte S11-S14.In this embodiment, the steps are S1-S4 of the in 2 the procedure illustrated, the steps S11-S14 .

In diesem Ausführungsbeispiel umfasst die Herstellung einer Antikörperlösung für einen Immunassay unter Verwendung des erfindungsgemäßen Kitsystems KS gemäß 3 die Schritte S11-S16.In this exemplary embodiment, the preparation of an antibody solution for an immunassay using the kit system according to the invention comprises KS according to 3 the steps S11-S16 .

Es ist generell möglich, dass die Herstellung einer Antikörperlösung für einen Immunassay unter Verwendung des erfindungsgemäßen Kitsystems KS gemäß 3 eine größere Anzahl an Schritten als die Schritte S11-S16 umfasst.It is generally possible to prepare an antibody solution for an immunassay using the kit system according to the invention KS according to 3 a greater number of steps than the steps S11-S16 includes.

Es ist generell möglich, dass die Herstellung einer Antikörperlösung für einen Immunassay unter Verwendung des erfindungsgemäßen Kitsystems KS gemäß 3 eine kleinere Anzahl an Schritten als die Schritte S11-S16 umfasst.It is generally possible to prepare an antibody solution for an immunassay using the kit system according to the invention KS according to 3 a smaller number of steps than the steps S11-S16 includes.

In einem fünften Schritt S15 wird in diesem Ausführungsbeispiel ein Reaktionsgefäß R mit dem Trägermaterial T umfassend die Komponente K bestückt.In a fifth step S15 becomes in this embodiment a reaction vessel R. with the carrier material T comprehensive the component K equipped.

In diesem Ausführungsbeispiel wird das Trägermaterial T in das ansonsten trockene Reaktionsgefäß R eingebracht.In this embodiment the carrier material T into the otherwise dry reaction vessel R. brought in.

Nicht gezeigt in 4 ist, dass es generell möglich ist, dass das Trägermaterial T schon vor der Vorbehandlung und/oder vor der Beladung mit der Komponente K in das Reaktionsgefäß eingebracht ist.Not shown in 4th is that it is generally possible that the carrier material T even before pretreatment and / or before loading the component K is introduced into the reaction vessel.

In diesem Ausführungsbeispiel wird in einem sechsten Schritt S16 das mit dem Trägermaterial T beladene Reaktionsgefäß R mit einem Elutionsfluid befüllt.In this embodiment, in a sixth step S16 the one with the carrier material T loaded reaction vessel R. filled with an elution fluid.

Nicht gezeigt in 4 ist, dass das Elutionsfluid ein Puffer ist.Not shown in 4th is that the elution fluid is a buffer.

Nicht gezeigt In 4, ist, dass jede Lösung als Elutionsfluid eingesetzt werden kann.Not shown in 4th , is that any solution can be used as an elution fluid.

Nicht gezeigt in 4 ist, dass das Elutionfluid Proteine und/oder Peptide enthalten kann.Not shown in 4th is that the elution fluid can contain proteins and / or peptides.

Es ist generell möglich, dass das Elutionsfluid einen spezifischen Bindungspartner umfasst.It is generally possible for the elution fluid to include a specific binding partner.

Es ist generell möglich, dass das Elutionsfluid mit spezifischen Bindungsmolekülen versetzt ist.It is generally possible for the elution fluid to contain specific binding molecules.

In diesem Ausführungsbeispiel wird durch das Elutionsfluid die Komponente K von dem Trägermaterial T gelöst.In this embodiment, the elution fluid becomes the component K of the carrier material T solved.

In diesem Ausführungsbeispiel kann die erfolgreiche Solvatisierung der Komponente K durch eine Farbveränderung des Elutlonsfluids beurteilt werden.In this embodiment, the successful solvation of the component K can be assessed by a change in the color of the elution fluid.

Nicht gezeigt in 4 ist, dass zur Solvatisierung der Komponente K das Reaktionsgefäß R invertiert wird.Not shown in 4th is that to solvate the component K the reaction vessel R. is inverted.

Nicht gezeigt in 4 ist, dass die Solvatisierung der Komponente alternativ und/oder zusätzlich durch Vibration (Vortex) und/oder Schütteln und/oder andere Verfahren erreicht werden kann.Not shown in 4th is that the solvation of the component can alternatively and / or additionally be achieved by vibration (vortex) and / or shaking and / or other methods.

In diesem Ausführungsbeispiel ist das Trägermaterial T geeignet das bestimmte Volumen einer Flüssigkeit beinhaltend eine definierte Menge der Komponente K, das zuvor aufgenommen wurde, in Anwesenheit des Elutionsfluids wieder freizugeben.In this embodiment, the carrier material is T suitably the specific volume of a liquid containing a defined amount of the component K , which was previously recorded, in the presence of the elution fluid.

In diesem Ausführungsbeispiel wird durch den Schritt S16 ein Analysefluid gebildet.In this exemplary embodiment, step S16 an analysis fluid is formed.

In diesem Ausführungsbeispiel wird durch die erfolgreiche Solvatisierung der Komponente aus dem Elutionsfluid ein Analysefluid.In this exemplary embodiment, the successful solvation of the component from the elution fluid becomes an analysis fluid.

Nicht gezeigt in 4 ist, dass das Verfahren zur Herstellung einer Antikörperlösung für einen Immunassay mit dem erfindungsgemäßen Kitsystem ein funktionales Analysefluid bekannter Konzentration der Komponente hervorbringt.Not shown in 4th is that the method for producing an antibody solution for an immunassay with the kit system according to the invention produces a functional analysis fluid of known concentration of the component.

Das Analysefluid kann für den Nachweis von in Flüssigkeiten befindlichen Analyten genutzt werden.The analysis fluid can be used for the detection of analytes in liquids.

In diesem Ausführungsbeispiel enthält das Elutionsfluid Proteine.In this exemplary embodiment, the elution fluid contains proteins.

In diesem Ausführungsbeispiel enthält das Elutionsfluid einen Primärantikörper.In this embodiment, the elution fluid contains a primary antibody.

Der Primärantiköper ist geeignet spezifisch an einen Analyten zu binden.The primary antibody is suitable for binding specifically to an analyte.

In diesem Ausführungsbeispiel ist die Komponente K eine Verbindung eines Antikörpers mit einem Gold-Nanopartlkel.In this embodiment, the component is K a compound of an antibody with a gold nanoparticle.

In diesem Ausführungsbeispiel ist die Komponente K eine Verbindung eines Sekundärantikörpers mit einem Gold-Nanopartikel.In this embodiment, the component is K a compound of a secondary antibody with a gold nanoparticle.

In diesem Ausführungsbeispiel ist der Sekundärantikörper geeignet an den Primärantikörper zu binden.In this embodiment, the secondary antibody is suitable for binding to the primary antibody.

In diesem Ausführungsbeispiel bindet der Sekundärantikörper der Verbindung an den Primärantikörper.In this embodiment, the secondary antibody of the compound binds to the primary antibody.

In anderen Worten, es entsteht eine Verbindung zwischen dem mit dem Gold-Nanopartikel markierten Sekundärantikörper mit dem Primärantikörper.In other words, there is a connection between the secondary antibody marked with the gold nanoparticle and the primary antibody.

In diesem Ausführungsbeispiel ist das Analysefluid eine Antikörperlösung.In this embodiment, the analysis fluid is an antibody solution.

Das Analysefluid kann für den Nachweis von immobilisierten Analyten genutzt werden.The analysis fluid can be used for the detection of immobilized analytes.

In einem alternativen Ausführungsbeispiel ist es denkbar, dass das Elutionsfluid keinen Primärantikörper enthält.In an alternative embodiment it is conceivable that the elution fluid does not contain a primary antibody.

In einem alternativen Ausführungsbeispiel ist es denkbar, dass die Komponente K eine Verbindung aus einem Primärantikörper und einem Marker umfasst.In an alternative embodiment it is conceivable that the component K comprises a combination of a primary antibody and a marker.

In einem alternativen Ausführungsbeispiel ist es denkbar, dass das Analysefluid keinen Sekundärantikörper umfasst.In an alternative embodiment, it is conceivable that the analysis fluid does not include a secondary antibody.

Flg. 5 zeigt eine schematische Darstellung eines Ausführungsbeispiels eines gängigen Verfahrens nach dem Stand der Technik zum Nachweis eines immobilisierten Analyten auf einer Membran.Flg. 5 shows a schematic representation of an exemplary embodiment of a common method according to the prior art for detecting an immobilized analyte on a membrane.

In diesem Ausführungsbeispiel ist der Analyt ein Protein.In this embodiment the analyte is a protein.

Nach einem gängigen Verfahren werden Proteine umfassend den Analyten auf eine Membran transferiert.According to a common method, proteins are transferred to a membrane including the analyte.

In diesem Ausführungsbeispiel ist die Membran eine Nitrozellulosemembran.In this embodiment the membrane is a nitrocellulose membrane.

In diesem Ausführungsbeispiel werden in einem vorgelagerten Verfahren die Proteine durch das Verfahren Western Blot auf eine Membran transferiert.In this exemplary embodiment, the proteins are transferred to a membrane using the Western blot method in an upstream method.

Die Proteine liegen immobilisiert auf der Membran vor.The proteins are immobilized on the membrane.

Generell sind alternativ andere Verfahren zur Immobilisierung von Proteinen denkbar.In general, other methods of immobilizing proteins are conceivable as an alternative.

In diesem Ausführungsbeispiel umfasst das gängige Verfahren nach dem Stand der Technik zum Nachweis eines immobilisierten Analyten auf einer Membran die Schritte S21-S26.In this exemplary embodiment, the current method according to the prior art for detecting an immobilized analyte on a membrane comprises the steps S21-S26 .

Es ist generell möglich, dass das gängige Verfahren nach dem Stand der Technik zum Nachweis eines immobilisierten Analyten auf einer Membran eine größere Anzahl an Schritten als die Schritte S21-S26 umfasst.It is generally possible that the current method according to the prior art for the detection of an immobilized analyte on a membrane has a larger number of steps than the steps S21-S26 includes.

Es ist generell möglich, dass das gängige Verfahren nach dem Stand der Technik zum Nachweis eines immobilisierten Analyten auf einer Membran eine kleinere Anzahl an Schritten als die Schritte S21-S26 umfasst.It is generally possible that the current method according to the prior art for the detection of an immobilized analyte on a membrane has a smaller number of steps than the steps S21-S26 includes.

In einem ersten Schritt S21 wird eine Blockierungslösung zu der Membran gegeben.In a first step S21 a blocking solution is added to the membrane.

Durch die Blockierungslösung werden unspezifische Proteinbindestellen auf der Membran blockiert.The blocking solution blocks unspecific protein binding sites on the membrane.

In diesem Ausführungsbeispiel wird das Blockieren durch Inkubation der Membran in einer üblichen Blockierungslösung (z.B. 3-5% (oder andere) BSA in PBS, 3-5% (oder andere) BSA In TBS, Milchpuffer in PBS, oder andere gängige Blockierungslösungen, auch kommerzielle Blockierungslösungen) erreicht.In this embodiment, the blocking is accomplished by incubating the membrane in a common blocking solution (e.g. 3-5% (or other) BSA in PBS, 3-5% (or other) BSA in TBS, milk buffer in PBS, or other common blocking solutions, too commercial blocking solutions).

Die Blockierungslösung wird verworfen.The blocking solution is discarded.

In einem zweiten Schritt S22 wird eine erste Antikörperlösung umfassend einen Primärantikörper in Blockierungslösung gegen einen bestimmten Analyten zu der Membran gegeben.In a second step S22 a first antibody solution comprising a primary antibody in blocking solution against a specific analyte is added to the membrane.

Die Membran wird mit der ersten Antikörperlösung inkubiert.The membrane is incubated with the first antibody solution.

Die Inkubation der Membran mit der ersten Antikörperlösung findet üblicherweise bei etwa 4°C für 2 Stunden bis über Nacht statt.The incubation of the membrane with the first antibody solution usually takes place at about 4 ° C. for 2 hours to overnight.

Der Primärantikörper bindet spezifisch an den Analyten.The primary antibody binds specifically to the analyte.

Die erste Antikörperlösung wird verworfen.The first antibody solution is discarded.

In einem dritten Schritt S23 wird eine Waschlösung zu der Membran gegeben.In a third step S23 a washing solution is added to the membrane.

Die Membran wird mit der Waschlösung gewaschen.The membrane is washed with the washing solution.

Generell kann die Waschlösung ein Puffer sein.In general, the washing solution can be a buffer.

Die Waschlösung wird verworfen.The washing solution is discarded.

In diesem Ausführungsbeispiel wird die Membran 3 mal 5 Minuten mit der Waschlösung gewaschen.In this exemplary embodiment, the membrane is washed 3 times for 5 minutes with the washing solution.

Generell ist es möglich, dass die Membran länger oder kürzer und/oder mit weiteren Waschschritten gewaschen wird.In general, it is possible for the membrane to be washed longer or shorter and / or with further washing steps.

In einem vierten Schritt S24 wird eine zweite Antikörperlösung zu der Membran gegeben.In a fourth step S24 a second antibody solution is added to the membrane.

Die zweite Antikörperlösung umfasst einen Sekundärantikörper, welcher markiert ist und an den Primärantikörper bindet.The second antibody solution comprises a secondary antibody which is labeled and binds to the primary antibody.

Die Membran wird mit der zweiten Antikörperlösung Inkubiert.The membrane is incubated with the second antibody solution.

Der Sekundärantikörper bindet spezifisch an den Primärantikörper.The secondary antibody specifically binds to the primary antibody.

Die Inkubation der Membran mit der zweiten Antikörperlösung findet üblicherweise bei Raumtemperatur für etwa 1-2 Stunden statt.The incubation of the membrane with the second antibody solution usually takes place at room temperature for about 1-2 hours.

Die zweite Antikörperlösung wird verworfen.The second antibody solution is discarded.

In einem fünften Schritt S25 wird eine Waschlösung zu der Membran gegeben.In a fifth step S25 a washing solution is added to the membrane.

Die Waschlösung wird verworfen.The washing solution is discarded.

Generell ist es möglich, dass die Membran länger oder kürzer und/oder mit weiteren Waschschritten gewaschen wird.In general, it is possible for the membrane to be washed for a longer or shorter period and / or with further washing steps.

Die Markierung kann visualisiert werden.The marking can be visualized.

Gängige Visuallsierungsmethoden umfassen beispielsweise die Detektion von Fluoreszenz (Fluoreszenzmarkierung) und/oder Chemolumineszenz.Common visualization methods include, for example, the detection of fluorescence (fluorescence marking) and / or chemiluminescence.

In diesem Ausführungsbeispiel kann die spezifische Bindung des Primärantikörpers an den Analyten über die Markierung des Sekundärantikörpers visualisiert werden.In this exemplary embodiment, the specific binding of the primary antibody to the analyte can be visualized via the marking of the secondary antibody.

In einem sechsten Schritt S26 wird die Markierung durch ein gängiges Visualisierungsverfahren visualisiert.In a sixth step S26 the marking is visualized by a common visualization method.

In diesem Ausführungsbeispiel ist die Markierung ein Fluoreszenzfarbstoff.In this exemplary embodiment the marking is a fluorescent dye.

In diesem Ausführungsbeispiel wird ein Fluoreszenzdetektionsverfahren zur Visualisierung des Merkers benutzt.In this exemplary embodiment, a fluorescence detection method is used to visualize the flag.

Die Bindung des Primärantikörpers an den Analyten kann über den an den Sekundärantikörper gebundenen Marker quantifiziert werden.The binding of the primary antibody to the analyte can be quantified via the marker bound to the secondary antibody.

Die gestrichelt umrandeten Verfahrensschritte sind sowohl Bestandteil von Verfahren gemäß dem Stand der Technik als auch nach dem erfindungsgemäßen Verfahren, vgl. 6.The method steps outlined by dashed lines are part of both the prior art method and the method according to the invention, cf. 6th .

Flg. 6 eine schematische Darstellung eines Ausführungsbeispiels eines erfindungsgemäßen Verfahrens zum Nachweis eines immobilisierten Analyten auf einer Membran.Flg. 6 shows a schematic representation of an exemplary embodiment of a method according to the invention for detecting an immobilized analyte on a membrane.

Alternativ und/oder zusätzlich kann die Membran aus Nylon, Glasfaser oder Polyvinylidendifluorid (PVDF) oder anderen Materialien bestehen.Alternatively and / or additionally, the membrane can consist of nylon, glass fiber or polyvinylidene difluoride (PVDF) or other materials.

Die Proteine liegen immobilisiert auf einer Membran vor.The proteins are immobilized on a membrane.

Ein erfindungsgemäßes Analysefluid wird gemäß des in 4 dargestellten Verfahrens mit dem in 3 dargestellten Kitsystem hergestellt.An analysis fluid according to the invention is according to the in 4th procedure with the in 3 kit system shown.

Eine erfindungsgemäße Antikörperlösung wird gemäß des in 4 dargestellten Verfahrens mit dem in 3 dargestellten Kitsystem hergestellt.An antibody solution according to the invention is prepared according to the in 4th procedure with the in 3 kit system shown.

Der Primärantikörper ist geeignet, spezifisch an den Analyten zu binden.The primary antibody is suitable for specifically binding to the analyte.

Die Membran wird mit dem Analysefluid inkubiert.The membrane is incubated with the analysis fluid.

Diesem Schritt kann ein weiterer Schritt vorgelagert sein, der das Abspülen der Membran oder das Inkubieren In einem Waschpuffer oder einer Blockierungslösung umfasst. Die Blockierungslösung kann bzw. soll auch als Elutionsfluid benutzt werden.This step can be preceded by a further step, which comprises rinsing off the membrane or incubating in a washing buffer or a blocking solution. The blocking solution can or should also be used as an elution fluid.

Diesem Schritt liegt die Überlegung zu Grunde, dass nach dem Blotten die Membran vorteilhafter Weise von Detergenz befreit werden sollte bzw. ist dies in bestimmten Anwendungsfällen auch notwendig, bevor ein Reagenz darauf trifft. Das kann am einfachsten durch Abspülen unter Leitungswasser geschehen. Alternativ kann das das Inkubieren in einem Waschpuffer oder einer Blockierungslösung durchgeführt werden.This step is based on the consideration that, after the blotting, the membrane should advantageously be freed from detergent or, in certain applications, this is also necessary before a reagent hits it. The easiest way to do this is to rinse it off under tap water. Alternatively, the incubation can be carried out in a washing buffer or a blocking solution.

In diesem Ausführungsbeispiel wird in einem Schritt S31 die Membran mit dem Analysefluid inkubiert.In this embodiment, in one step S31 the membrane is incubated with the analysis fluid.

In diesem Ausführungsbeispiel wird in einem Schritt S31 die Membran für einen Zeitraum von 0,5h-2,0h mit dem Analysefluid Inkubiert.In this embodiment, in one step S31 the membrane is incubated with the analysis fluid for a period of 0.5h-2.0h.

Generell sind längere oder kürzere Inkubationszeiten möglich.In general, longer or shorter incubation times are possible.

Der Primärantikörper bindet spezifisch an einen Analyten.The primary antibody specifically binds to an analyte.

Das Analysefluid wird verworfen.The analysis fluid is discarded.

In diesem Ausführungsbeispiel kann die Bindung des Primärantikörpers an den Analyten über Markierung des Sekundärantikörpers nachgewiesen werden.In this exemplary embodiment, the binding of the primary antibody to the analyte can be detected by labeling the secondary antibody.

In diesem Ausführungsbeispiel kann die Bindung des Primärantikörpers an den Analyten über den an den Sekundärantikörper gebundenen Gold-Nanopartikel nachgewiesen werden.In this embodiment, the binding of the primary antibody to the analyte can be the gold nanoparticles bound to the secondary antibody can be detected.

Die Gold-Nanopartikel sind direkt sichtbar.The gold nanoparticles are directly visible.

In diesem Ausführungsbeispiel bedarf es keines weiteren Visualisierungsverfahrens, z.B. eines Chemolumineszenzdetektionsverfahren oder eines Fluoreszenzdetektionsverfahrens.In this embodiment there is no need for any further visualization method, e.g. a chemiluminescence detection method or a fluorescence detection method.

Die Bindung des Primärantikörpers an den Analyten über den an den Sekundärantikörper gebundenen Marker kann quantifiziert werden.The binding of the primary antibody to the analyte via the marker bound to the secondary antibody can be quantified.

Generell kann das erfindungsgemäße Verfahren zum Nachweis eines Immobilisierten Analyten auf einer Membran die Beladung eines Trägermaterials T mit einem bestimmten Volumen einer Flüssigkeit beinhaltend eine definierte Menge einer Verbindung aus einem spezifischen Bindungspartner des Analyten und einem Marker umfassen.In general, the method according to the invention for detecting an immobilized analyte on a membrane can load a carrier material T with a specific volume of a liquid containing a defined amount of a compound from a specific binding partner of the analyte and a marker.

Generell kann das erfindungsgemäße Verfahren zum Nachweis eines immobilisierten Analyten auf einer Membran die adhäsive Bindung der Verbindung an das Trägermaterial T umfassen.In general, the method according to the invention for the detection of an immobilized analyte on a membrane can involve the adhesive binding of the compound to the carrier material T include.

Generell kann das erfindungsgemäße Verfahren zum Nachweis eines Immobilisierten Analyten auf einer Membran die Trocknung des Trägermaterials T umfassen.In general, the method according to the invention for detecting an immobilized analyte on a membrane can involve drying the carrier material T include.

Generell kann das erfindungsgemäße Verfahren zum Nachweis eines immobilisierten Analyten auf einer Membran das Einbringen des Trägermaterials T in ein trockenes Reaktionsgefäß R umfassen.In general, the method according to the invention for detecting an immobilized analyte on a membrane can involve the introduction of the carrier material T into a dry reaction vessel R. include.

Generell kann das erfindungsgemäße Verfahren zum Nachweis eines immobilisierten Analyten auf einer Membran das Einbringen eines Elutionsfluids in das Reaktionsgefäß R umfassen, wobei die Verbindung in Anwesenheit des Elutionsfluids aus dem Trägermaterial T in das Elutionsfluid freigegeben wird und ein Analysefluid bildet.In general, the method according to the invention for detecting an immobilized analyte on a membrane can involve introducing an elution fluid into the reaction vessel R. wherein the compound is in the presence of the elution fluid from the carrier material T is released into the elution fluid and forms an analysis fluid.

Generell kann das erfindungsgemäße Verfahren zum Nachweis eines immobilisierten Analyten auf einer Membran das Aufbringen des Analysefluids auf die Membran umfassen.In general, the method according to the invention for detecting an immobilized analyte on a membrane can include applying the analysis fluid to the membrane.

Generell kann das erfindungsgemäße Verfahren zum Nachweis eines immobilisierten Analyten auf einer Membran den Nachweis der Bindung des spezifischen Bindungspartners des Analyten über die Markierungumfassen.In general, the method according to the invention for detecting an immobilized analyte on a membrane can comprise the detection of the binding of the specific binding partner of the analyte via the label.

Ferner kann das Verfahren zum Nachweis eines immobilisierten Analyten auf einer Membran weitere Schritte umfassen.Furthermore, the method for detecting an immobilized analyte on a membrane can comprise further steps.

Ferner kann das Verfahren eine Vorbehandlung des Trägermaterials T mit einem Fluid umfassen.Furthermore, the method can be a pretreatment of the carrier material T include with a fluid.

Flg. 7 zeigt eine Darstellung eines erfindungsgemäßen Ausführungsbeispiels mit einem Dot-Blot direkt.Flg. 7 shows an illustration of an exemplary embodiment according to the invention with a dot blot directly.

Beim Dot-Blot direkt ist der markierte Primärantikörper die Komponente auf dem Träger und wird mit Elutionsfluid (Puffer + Schutzprotein) solubilisiert. Das so entstandene Analysefluld wird auf die Membran aufgebracht, die den Analyten trägt.In the direct dot blot, the marked primary antibody is the component on the carrier and is solubilized with elution fluid (buffer + protective protein). The resulting analysis fluid is applied to the membrane that carries the analyte.

Zu sehen ist die nach 10-minütiger Inkubation sichtbare Markierung des Analyten (vgl. die Punkte auf der Membran), nämlich die erfindungsgemäße Färbung verschiedener poly-Histidin markierter Zielproteine aufgetropft auf einer Nitrocellulose Membran.What can be seen after incubation for 10 minutes is the marking of the analyte (cf. the dots on the membrane), namely the staining according to the invention of various poly-histidine-marked target proteins dropped onto a nitrocellulose membrane.

Die Färbung der Membran erfolgt mit erfindungsgemäßem Analysefluid bestehend aus mit Goldnanopartikeln markiertem Anti-HIS Epitop-Tag Antikörper solubilisiert aus erfindungsgemäßem Kit mit 3%BSA in 1xPBS als Elutionsfluid.The membrane is stained with an analysis fluid according to the invention consisting of anti-HIS epitope tag antibodies labeled with gold nanoparticles, solubilized from the kit according to the invention with 3% BSA in 1xPBS as elution fluid.

Flg. 8 zeigt eine Darstellung eines erfindungsgemäßen Ausführungsbeispiels mit einem Dot-Blot indirekt.Flg. 8 shows an illustration of an exemplary embodiment according to the invention with a dot blot indirectly.

Beim Dot-Blot Indirekt ist der markierte Sekundärantikörper die Komponente auf dem Träger und wird mit Elutionsfluid (Puffer + Schutzprotein +zusätzllch Primärantikörper) solubilisiert. Das so entstandene Analysefluid wird auf die Membran aufgebracht, die den Analyten trägt. Zu sehen ist die nach 10-minütiger Inkubation sichtbare Markierung des Analyten (vgl. die Punkte auf der Membran).In the indirect dot blot, the marked secondary antibody is the component on the carrier and is solubilized with elution fluid (buffer + protective protein + additional primary antibodies). The resulting analysis fluid is applied to the membrane that carries the analyte. The marking of the analyte, which is visible after 10 minutes of incubation, can be seen (see the points on the membrane).

Zu sehen ist die erfindungsgemäße Färbung verschiedener poly-Histidin markierter Zielproteine aufgetropft auf einer Nitrocellulose Membran.The staining according to the invention of various poly-histidine-labeled target proteins can be seen dropped onto a nitrocellulose membrane.

Die Färbung der Membran erfolgt mit erfindungsgemäßem Analysefluid bestehend aus mit Goldnanopartikeln markiertem Anti-Maus Sekundärantikörper und Anti-HIS Epitop-Tag Antikörper aus Maus solubilisiert aus erfindungsgemäßem Kit mit 3%BSA In 1xPBS und Anti-HIS Epitop-Tag Antikörper aus Maus als Elutionsfluid.The membrane is stained with analysis fluid according to the invention consisting of anti-mouse secondary antibodies labeled with gold nanoparticles and anti-HIS epitope tag antibodies from mouse solubilized from the kit according to the invention with 3% BSA in 1xPBS and anti-HIS epitope tag antibodies from mouse as elution fluid.

Flg. 9 zeigt eine Darstellung eines erfindungsgemäßen Ausführungsbeispiels mit einem Western Blot direkt.Flg. 9 shows an illustration of an exemplary embodiment according to the invention with a Western blot directly.

Zu sehen ist links eine ECL-Färbung (ECL = enhanced chemiluminescence) des poly-Histidin markierten Zielproteins (His6-Kin1 L) auf einer Nitrocellulose Membran nach Blottransfer. Die Färbung der Membran erfolgt mit ECL Chemiluminescent Substrate nach Inkubation mit Antikörpergegen Penta Histidin als HRP Konjugat (HRP = horseradish peroxidase).On the left is an ECL staining (ECL = enhanced chemiluminescence) of the poly-histidine-labeled target protein (His6-Kin1 L) on a nitrocellulose membrane after blot transfer. The coloring the membrane is made with ECL chemiluminescent substrates after incubation with antibodies against penta histidine as HRP conjugate (HRP = horseradish peroxidase).

Rechts Ist eine erfindungsgemäße Färbung des poly-Histidin markierten Zielproteins (His6-Kin1L) auf einer Nitrocellulose Membran nach Blottransfer zu sehen. Die Färbung der Membran erfolgt mit erfindungsgemäßem Analysefluid bestehend aus mit Goldnanopartikeln markiertem Anti-HIS Epitop-Tag Antikörper solubilisiert aus erfindungsgemäßem Kit mit 3%BSA in 1xPBS als Elutionsfluid.On the right is a staining according to the invention of the poly-histidine-labeled target protein (His6-Kin1L) on a nitrocellulose membrane after blot transfer. The membrane is stained with an analysis fluid according to the invention consisting of anti-HIS epitope tag antibodies labeled with gold nanoparticles, solubilized from the kit according to the invention with 3% BSA in 1xPBS as elution fluid.

Flg. 10 zeigt eine Darstellung eines erfindungsgemäßen Ausführungsbeispiels mit einem Western Blot indirekt.Flg. 10 shows a representation of an embodiment according to the invention with a Western blot indirectly.

Zu sehen ist links eine ECL-Färbung des poly-Histidin markierten Zielproteins (ATX1) auf einer PVDF Membran (PVDF = Polyvinylidenfluorid (auch Polyvinylidendifluorid)) nach Blottransfer. Die Färbung der Membran erfolgt mit ECL Chemiluminescent Substrate nach Inkubation mit Antikörpergegen Penta Histidin als HRP Konjugat.On the left, you can see an ECL staining of the poly-histidine-labeled target protein (ATX1) on a PVDF membrane (PVDF = polyvinylidene fluoride (also polyvinylidene difluoride)) after blot transfer. The membrane is stained with ECL chemiluminescent substrates after incubation with antibodies against penta-histidine as HRP conjugate.

Rechts ist eine erfindungsgemäße Färbung des poly-Histidin markierten Zielproteins (ATX1) auf einer PVDF Membran nach Blottransfer zu sehen. Die Färbung der Membran erfolgt mit erfindungsgemäßem Analysefluid bestehend aus mit Goldnanopartikeln markiertem Anti-Maus Sekundärantikörper und Anti-HIS Epitop-Tag Antikörper aus Maus solubilisiert aus erfindungsgemäßem Kit mit 3%BSA in 1xPBS und Anti-HIS Epitop-Tag Antikörper aus Maus als Elutionsfluid.On the right is a staining according to the invention of the poly-histidine-labeled target protein (ATX1) on a PVDF membrane after blot transfer. The membrane is stained with analysis fluid according to the invention consisting of anti-mouse secondary antibodies labeled with gold nanoparticles and anti-HIS epitope tag antibodies from mouse solubilized from the kit according to the invention with 3% BSA in 1xPBS and anti-HIS epitope tag antibodies from mouse as elution fluid.

BezugszeichenlisteList of reference symbols

DD.: Deckelcover
KK: Komponentecomponent
KSKS: KitsystemKit system
RR.: ReaktionsgefäßReaction vessel
TT: Trägermaterial Carrier material
S1S1: Schritt in der Herstellung eines erfindungsgemäßen TrägermaterialsStep in the production of a carrier material according to the invention
S2S2: Schritt in der Herstellung eines erfindungsgemäßen TrägermaterialsStep in the production of a carrier material according to the invention
S3S3: Schritt in der Herstellung eines erfindungsgemäßen TrägermaterialsStep in the production of a carrier material according to the invention
S4S4: Schritt in der Herstellung eines erfindungsgemäßen Trägermaterials Step in the production of a carrier material according to the invention
S11S11: Schritt in der Herstellung eines erfindungsgemäßen KitsystemsStep in the production of a kit system according to the invention
S12S12: Schritt in der Herstellung eines erfindungsgemäßen KitsystemsStep in the production of a kit system according to the invention
S13S13: Schritt in der Herstellung eines erfindungsgemäßen KitsystemsStep in the production of a kit system according to the invention
S14S14: Schritt in der Herstellung eines erfindungsgemäßen KitsystemsStep in the production of a kit system according to the invention
S15S15: Schritt in der Herstellung eines erfindungsgemäßen KitsystemsStep in the production of a kit system according to the invention
S16S16: Schritt in der Herstellung eines erfindungsgemäßen Kitsystems Step in the production of a kit system according to the invention
S21S21: Schritt eines gängigen Verfahrens nach dem Stand der Technik zum Nachweis eines immobilisierten Analyten auf einer MembranStep of a common method according to the prior art for detecting an immobilized analyte on a membrane
S22S22: Schritt eines gängigen Verfahrens nach dem Stand der Technik zum Nachweis eines immobilisierten Analyten auf einer MembranStep of a common method according to the prior art for detecting an immobilized analyte on a membrane
S23S23: Schritt eines gängigen Verfahrens nach dem Stand der Technik zum Nachweis eines immobilisierten Analyten auf einer MembranStep of a common method according to the prior art for detecting an immobilized analyte on a membrane
S24S24: Schritt eines gängigen Verfahrens nach dem Stand der Technik zum Nachweis eines immobilisierten Analyten auf einer MembranStep of a common method according to the prior art for detecting an immobilized analyte on a membrane
S25S25: Schritt eines gängigen Verfahrens nach dem Stand der Technik zum Nachweis eines immobilisierten Analyten auf einer MembranStep of a common method according to the prior art for detecting an immobilized analyte on a membrane
S26S26: Schritt eines gängigen Verfahrens nach dem Stand der Technik zum Nachweis eines immobilisierten Analyten auf einer MembranStep of a common method according to the prior art for detecting an immobilized analyte on a membrane
S31S31: Schritt eines erfindungsgemäßen Verfahrens zum Nachweis eines immobilisierten Analyten auf einer Membran.Step of a method according to the invention for detecting an immobilized analyte on a membrane.

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Zitierte PatentliteraturPatent literature cited

US 4366241 B1 [0027]
EP 186799 A1 [0028]
EP 2395921 B1 [0029]
EP 1361436 A1 [0030]
WO 2018203145 A1 [0031]

Claims

Carrier material (T) comprising at least one component (K), the component (K) being adhesively bonded to the carrier material (T) and / or immobilized and / or dried on the carrier material (T), characterized in that the carrier material (T ) a certain volume of a liquid containing a defined amount of component (K) is suitable to be taken up and released again in the presence of an elution fluid.

Carrier material (T) Claim 1 , characterized in that component (K) comprises at least one substance.

Carrier material (T) Claim 2 , characterized in that the substance is or comprises a biogenic macromolecule.

Carrier material (T) Claim 3 , characterized in that the biogenic macromolecule comprises a specific binding partner of an analyte, the binding partner at least one monoclonal antibody, polyclonal antibody, affinity-purified antibody, an antibody fragment, nanobody, nucleic acid fragment, aptamer, anticalin, lectin, affibody, peptide, enzyme and / or comprises chemical ligand and / or comprises a marker molecule, preferably wherein the marker molecule comprises at least one nanoparticle, in particular gold nanoparticle, fluorescent nanoparticle, magnetic nanoparticle and / or quantum dot.

Carrier material (T) according to one of the preceding claims, characterized in that the at least one component (K) comprises a combination of at least one first substance and at least one second substance.

Carrier material (T) according to one of the preceding claims, characterized in that the carrier material (T) comprises at least one material which, due to its physical nature, is suitable for drying the component (K) under laboratory conditions and thus protecting it from degradation and / or aggregation , the carrier material (T) in particular comprising a fiber fabric made of cellulose, glass fiber, polymer fiber, nylon, silk, wool, felt and / or cotton, a solid foam, a porous material and / or a sponge.

Carrier material (T) according to one of the preceding claims, characterized in that the carrier material (T) comprises at least one porous material and is soluble in an elution fluid.

Carrier material (T) according to one of the preceding claims, characterized in that the carrier material (T) has a thickness greater than 0.1 mm and a diameter of 0.5 cm to 5 cm, in particular from 1 cm to 5 cm.

Carrier material (T) according to one of the preceding claims, characterized in that the carrier material (T) has a largely round shape.

Carrier material (T) according to one of the preceding claims, characterized in that the carrier material (T) has a binding volume of up to 20 ml.

Kit system (KS) comprising: - a reaction vessel (R) which is suitable for receiving a fluid; -a carrier material (T), wherein the carrier material (T) comprises at least one component (K), characterized in that the carrier material (T) is suitable for receiving a certain volume of a liquid containing a defined amount of the component (K) and is in the presence to release an elution fluid again, and wherein the carrier material (T) is introduced into the otherwise empty reaction vessel (R).

Kit system (KS) according to Claim 11 , characterized in that the component (K) is adhesively bonded to the carrier material (T) and / or immobilized and / or dried on the carrier material (T),

Kit system (KS) according to Claim 11 or Claim 12 , characterized in that the reaction vessel (R) can be closed almost airtight, in particular with a lid (D).

Kit system (KS) according to Claim 13 , characterized in that the carrier material (T) is attached in the lid (D) of the reaction vessel (R).

Use of a kit system (KS) according to one of the Claims 11 to 14th for the production of an analysis fluid for a bioassay.

Use of a kit system (KS) according to one of the Claims 11 to 14th for the preparation of an antibody solution for an immunoassay.

A method for providing a biogenic macromolecule and / or a marker molecule, comprising at least the steps: - loading a carrier material (T) with a specific volume of a liquid containing a defined amount of at least one component from a biogenic macromolecule and / or a marker molecule; - Binding of the component (K) to the carrier material (T); - Drying of the carrier material (T); - Release of component (K) from the carrier material (T).

A method for using a biogenic macromolecule and / or a marker molecule in a bioassay, comprising at least the steps: - Loading a carrier material (T) with a specific volume of a liquid containing a defined amount of at least one component (K) comprising at least one biogenic macromolecule and / or marker molecule; - Binding of the component (K) to the carrier material (T); - drying of the carrier material (T); - releasing the component (K) from the carrier material (T) by adding an elution fluid, the component (K) being released into the elution fluid in the presence of the elution fluid from the carrier material (T) and forming an analysis fluid; - Introduction of the analysis fluid, consisting of the component in the elution fluid and the released component (K), in a bioassay.

A method for the detection of an analyte, comprising at least the steps: - Loading a carrier material (T) with a specific volume of a liquid containing a defined amount of a component (K) comprising a compound of a specific binding partner of the analyte and a marker molecule; - Binding of the compound to the carrier material (T); - drying of the carrier material (T); - Introducing the carrier material (T) into a dry reaction vessel (R); - Introducing an elution fluid into the reaction vessel (R), the compound being released from the carrier material (T) into the elution fluid in the presence of the elution fluid and forming an analysis fluid; - applying the analysis fluid to the membrane; - Detection of the binding of the specific binding partner of the analyte via the marker molecule.

A method for the detection of an immobilized analyte on a solid matrix, comprising at least the steps: - Loading a carrier material (T) with a specific volume of a liquid containing a defined amount of a component from a specific binding partner of the analyte and a marker molecule; - Adhesive bonding of the connection to the carrier material (T); - drying of the carrier material (T); - Introducing the carrier material (T) into a dry reaction vessel (R); - Introducing an elution fluid into the reaction vessel (R), the compound being released from the carrier material (T) into the elution fluid in the presence of the elution fluid and forming an analysis fluid; - applying the analysis fluid to the membrane; - Detection of the binding of the specific binding partner of the analyte via the marker molecule.

Procedure according to Claim 20 , further comprising the step: - pretreatment of the carrier material (T) with a fluid.