DE102015209729B3 - Microfluidic, multi-parametric sensor system for the determination of biofilm formation in fluids - Google Patents
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Abstract
Die Erfindung betrifft ein System und ein Verfahren zur Bestimmung der Biofilmbildung an Oberflächen in Fluiden. Insbesondere betrifft die Erfindung ein mikrofluidisches, multiparametrisches Sensorsystem zur Bestimmung der Biofilmbildung, wobei die Bestimmung verschiedener Parameter unter standardisierten Bedingungen erfolgt, um eine genaue Aussage zur Biofilmbildung an Oberflächen treffen zu können.The invention relates to a system and method for determining biofilm formation on surfaces in fluids. In particular, the invention relates to a microfluidic multiparametric sensor system for determining biofilm formation, the determination of various parameters being carried out under standardized conditions in order to be able to make an accurate statement on biofilm formation on surfaces.
Description
Die Erfindung betrifft ein System und ein Verfahren zur Bestimmung der Biofilmbildung an Oberflächen in Fluiden. Insbesondere betrifft die Erfindung ein mikrofluidisches, multiparametrisches Sensorsystem zur Bestimmung der Biofilmbildung, wobei die Bestimmung verschiedener Parameter unter standardisierten Bedingungen erfolgt, um eine genaue Aussage zur Biofilmbildung an Oberflächen treffen zu können.The invention relates to a system and method for determining biofilm formation on surfaces in fluids. In particular, the invention relates to a microfluidic multiparametric sensor system for determining biofilm formation, the determination of various parameters being carried out under standardized conditions in order to be able to make an accurate statement on biofilm formation on surfaces.
Mikroorganismen adhärieren an Oberflächen und bilden dabei einen Biofilm aus. Dies ist insbesondere risikobehaftet bei Produkten, welche in direkten Kontakt mit Verbrauchern kommen, denn es besteht das Risiko eines unkontrollierten Ablösens des Biofilms und damit verbundener Freisetzung von Kontaminaten. Ein Beispiel für solche sensitiven Oberflächen sind etwa solche, die mit Trinkwasser in Berührung kommen. Auch im Bereich der Lebensmittelproduktion spielt die Hygiene eine besondere Rolle, wobei Kontaminationen in der Produktion frühzeitig erkannt werden müssen, um das Auftreten gesundheitlicher Risiken zu erkennen und zugleich größere Verluste zu vermeiden.Microorganisms adhere to surfaces and form a biofilm. This is particularly risky for products that come into direct contact with consumers, because there is a risk of uncontrolled detachment of the biofilm and concomitant release of contaminants. An example of such sensitive surfaces are, for example, those which come into contact with drinking water. Hygiene also plays a special role in the area of food production, whereby contamination in production must be recognized early in order to detect the occurrence of health risks and at the same time to avoid greater losses.
Um entsprechende gesundheitliche Risiken zu minimieren, wird daher ein hoher Aufwand zur Reinigung und Desinfektion betroffener Oberflächen betrieben, wobei es dabei zu Umweltbelastungen und reinigungsbedingten Stillstandszeiten kommt. Sie betragen etwa im Bereich der milchverarbeitenden Industrie 15 bis 40% der Gesamtproduktionszeit.In order to minimize the corresponding health risks, therefore, a high effort for the cleaning and disinfection of affected surfaces is operated, which leads to environmental pollution and cleaning-related downtime. In the milk processing industry, for example, they account for 15 to 40% of the total production time.
Um eine bessere Planung der notwendigen Reinigungsprozeduren und eine Überwachung hinsichtlich auftretender Kontaminationen in der Produktion vornehmen zu können, ist eine Bestimmung der Biofilmbildung notwendig.In order to be able to better plan the necessary cleaning procedures and to monitor contamination occurring in production, a determination of biofilm formation is necessary.
Hierzu werden zumeist Proben entnommen, welche aufwändig ex situ in Laboren analysiert werden. Die so gewonnenen Ergebnisse werden jedoch meist zeitverzögert erzielt. Zudem bietet die stichprobenhafte Entnahme von Proben kein realistisches Abbild der vor Ort herrschenden Bedingungen. Des Weiteren geben diese Stichproben keinerlei Aussagen über das Ausmaß der Biofilmbildung sondern nur über die aufgetretene mikrobiologische Verunreinigung im gesamten System.For this purpose, samples are usually taken, which are laboriously analyzed ex situ in laboratories. However, the results obtained are usually achieved with a time delay. In addition, sample sampling does not provide a realistic reflection of the local conditions. Furthermore, these samples give no information about the extent of biofilm formation but only about the occurrence of microbiological contamination throughout the system.
Alternativ hierzu werden auch Biofilmsensoren in den entsprechenden Anlagen direkt eingesetzt.Alternatively, biofilm sensors are used directly in the corresponding systems.
So offenbart die
Die
Die
Bekannt sind auch Biofilmsensoren wie etwa der Biofilm Sensor der Fa. Chemtract (Chemtract Inc. USA), welche eine Änderung des elektrischen Potentials bei Besiedlung des Sensors registrieren.Also known are biofilm sensors, such as the biofilm sensor from Chemtract (Chemtract Inc. USA), which register a change in the electrical potential when the sensor is colonized.
Das beschriebene, sensorbasierte Biofilm-Monitoring weist dabei jedoch entscheidende Nachteile auf. So sind zum einen die eingesetzten Sensoren kostenintensiv und erlauben zumeist nur die Bestimmung eines Parameters. Weiterhin sind die Sensoren entsprechend dimensioniert, sodass das Einbringen des Sensors in die Anlage zu einer Erzeugung einer künstlichen Störstelle und damit zu veränderten Strömungsverhältnissen führt. Dadurch wird zumeist eine Biofilmbildung begünstigt, sodass eine repräsentative Aussage zur Besiedlung an sensiblen Stellen nur schwer möglich ist.However, the described sensor-based biofilm monitoring has significant disadvantages. On the one hand, the sensors used are expensive and usually allow only the determination of one parameter. Furthermore, the sensors are dimensioned accordingly, so that the introduction of the sensor into the system leads to the generation of an artificial defect and thus to changed flow conditions. As a result, biofilm formation is usually favored, so that a representative statement on colonization at sensitive sites is difficult.
Es besteht daher die Aufgabe, ein System und ein Verfahren zur Überwachung der Biofilmbildung anzugeben, welches die im Stand der Technik benannten Nachteile überwindet.It is therefore the object to provide a system and a method for monitoring biofilm formation, which overcomes the disadvantages mentioned in the prior art.
Die Aufgabe wird durch ein System gemäß Anspruch 1 und ein Verfahren gemäß Anspruch 7 gelöst. Vorteilhafte Ausgestaltungen sind in den abhängigen Ansprüchen angegeben. The object is achieved by a system according to claim 1 and a method according to claim 7. Advantageous embodiments are specified in the dependent claims.
Ein erster Aspekt der Erfindung betrifft dabei ein System zur Bestimmung der Biofilmbildung in Fluiden mit einer modular aufgebauten Durchflusskammer umfassend zumindest eine Messanordnung, wobei die Messanordnung zumindest zwei Sensoreinrichtungen umfasst, welche ausgebildet sind zur Erfassung von Parametern ausgewählt aus Adhäsion, elektrischer Leitfähigkeit, Kapazität, Trübung, Sauerstoff-Gehalt, Impedanz, und Temperatur, wobei zumindest ein Parameter ausgewählt aus Adhäsion, elektrischer Leitfähigkeit, Kapazität und Trübung, Sauerstoff-Gehalt, Impedanz, und Temperatur, erfasst wird. Bevorzugt erfolgt zumindest die Erfassung der Adhäsion. Dabei gelangt das Fluid über einen Einlass in die definierte, fluidische Kammer. Es überströmt alle in der Kammer befindlichen Sensoren und Mikroorganismenadhäsion bzw. Biofilmbildung können stattfinden.A first aspect of the invention relates to a system for determining biofilm formation in fluids having a modular flow chamber comprising at least one measuring arrangement, wherein the measuring arrangement comprises at least two sensor devices which are designed to detect parameters selected from adhesion, electrical conductivity, capacitance, turbidity , Oxygen content, impedance, and temperature, wherein at least one parameter selected from adhesion, electrical conductivity, capacitance and turbidity, oxygen content, impedance, and temperature, is detected. Preferably, at least the detection of the adhesion takes place. The fluid passes through an inlet into the defined, fluidic chamber. It overflows all located in the chamber sensors and microorganism adhesion or biofilm formation can take place.
Unter einem Fluid werden erfindungsgemäß Flüssigkeiten verstanden.Under a fluid liquids are understood according to the invention.
In einer ersten Ausführungsform der Erfindung ist die Sensoreinrichtung zur Bestimmung der Adhäsion eine Quarzkristall-Mikrowaage (QCM).In a first embodiment of the invention, the sensor device for determining the adhesion is a quartz crystal microbalance (QCM).
Quarzkristall-Mikrowaagen (QCM) sind Mikrowaagen, deren Sensor auf einem Schwingquarz basiert. Dabei wird die piezoelektrische Eigenschaft von Quarz genutzt. Die Resonanzfrequenz des Schwingquarzes ist abhängig von der Masse des auf der Oberfläche adsorbierten Materials. Die Frequenz der Schwingung des Quarzes ist dabei von der Dicke des Kristalls abhängig. Dabei ist die Frequenz zu der Dicke des Quarzes umgekehrt proportional. Durch Änderung der Dicke des Quarzes (bspw. durch Aufwachsen eines Biofilms) korreliert diese Änderung direkt mit einer Veränderung in der Frequenz. Diese Frequenzänderung kann dabei präzise quantifiziert und so zur exakten Massenbestimmung herangezogen werden (Sauerbrey-Gleichung). Vorliegend wird somit unter Verwendung der QCM quantitativ die Absorption des Biofilms auf dem Quarz erfasst, wodurch Rückschlüsse über die Menge an anhaftender Biomasse möglich sind.Quartz crystal microbalances (QCM) are microbalances whose sensor is based on a quartz crystal. The piezoelectric property of quartz is used. The resonant frequency of the quartz crystal is dependent on the mass of material adsorbed on the surface. The frequency of the vibration of the quartz depends on the thickness of the crystal. The frequency is inversely proportional to the thickness of the quartz. By changing the thickness of the quartz (eg, by growing a biofilm), this change correlates directly with a change in frequency. This frequency change can be precisely quantified and used for exact mass determination (Sauerbrey equation). In the present case, therefore, the absorption of the biofilm on the quartz is quantitatively detected using the QCM, whereby conclusions about the amount of adhering biomass are possible.
In einer weiteren Ausführungsform der Erfindung ist die Sensoreinrichtung zur Bestimmung der elektrischen Leitfähigkeit ein Leitfähigkeitsdetektor. Dazu wird der Stromfluss zwischen, in definierten Abständen angeordneten Elektroden gemessen.In a further embodiment of the invention, the sensor device for determining the electrical conductivity is a conductivity detector. For this purpose, the current flow is measured between electrodes arranged at defined intervals.
In einer weiteren Ausführungsform der Erfindung ist die Sensoreinrichtung zur Bestimmung der optischen Dichte ein optischer Sensor. Hierbei sind sich in einem definierten Abstand verschiedene LED’s gegenübergestellt, wobei eine als Detektor eingesetzt wird und über eine definierte Einschaltdauer der Dioden die Intensität variiert.In a further embodiment of the invention, the sensor device for determining the optical density is an optical sensor. In this case, different LEDs are compared in a defined distance, one being used as a detector and the intensity varies over a defined duty cycle of the diodes.
In einer weiteren Ausführungsform der Erfindung weist die Durchflusskammer einen transparenten Bereich zur mikroskopischen Inspektion auf. Der transparente Bereich dient dabei der Möglichkeit der mikroskopischen Beobachtung der Adhäsion. Dies ist insbesondere vorteilhaft bei der Verwendung von Mikroorganismen mit fluoreszierenden Eigenschaften, welche die Beobachtung erleichtern. In der Regel wird eine Fluorochromierung der visuellen Inspektion vorgeschaltet.In a further embodiment of the invention, the flow chamber has a transparent region for microscopic inspection. The transparent area serves the possibility of microscopic observation of the adhesion. This is particularly advantageous in the use of microorganisms having fluorescent properties which facilitate observation. As a rule, fluorochromatization is connected upstream of the visual inspection.
In einer weiteren Ausführungsform der Erfindung weist die Sensoreinrichtung zumindest zwei Elektroden mit definiertem Abstand zur Messung elektrischer Parameter auf. Durch den fest definierten Abstand der Elektroden können eine Vielzahl von elektrischen Parametern ermittelt werden, wie Widerstand, Leitfähigkeit, Kapazität und dergleichen.In a further embodiment of the invention, the sensor device has at least two electrodes with a defined distance for the measurement of electrical parameters. By the well-defined distance of the electrodes, a variety of electrical parameters can be determined, such as resistance, conductivity, capacity and the like.
Ein weiterer Aspekt der Erfindung betrifft ein Verfahren zur Bestimmung der Biofilmbildung in Fluiden unter Verwendung eines erfindungsgemäßen Systems umfassend:
- – Kontaktieren der Messordnung mit dem Fluid, wobei über die Sensoreinrichtung die zu bestimmenden Parameter gemessen werden,
- – Zeitgleiches Erfassen von zumindest zwei Parametern ausgewählt aus Adhäsion, elektrischer Leitfähigkeit, Kapazität, Trübung, Redoxpotential, O2-Gehalt, Impedanz und Temperatur, wobei zumindest ein Parameter ausgewählt aus Adhäsion, elektrischer Leitfähigkeit, Kapazität und Trübung, O2-Gehalt, Impedanz und Temperatur, bevorzugt Adhäsion, erfasst wird,
- – Korrelation der erfassten Parameter,
- – Ausgabe der berechneten Biofilmbildung.
- Contacting the measurement order with the fluid, wherein the parameters to be determined are measured via the sensor device,
- Simultaneously detecting at least two parameters selected from adhesion, electrical conductivity, capacitance, turbidity, redox potential, O 2 content, impedance and temperature, wherein at least one parameter selected from adhesion, electrical conductivity, capacitance and turbidity, O 2 content, impedance and temperature, preferably adhesion, is detected,
- Correlation of the detected parameters,
- - Output of the calculated biofilm formation.
Die Kontaktierung der Messanordnung kann dabei kontinuierlich oder diskontinuierlich erfolgen. Bei einer kontinuierlichen Kontaktierung wird das Fluid mit den enthaltenen Mikroorganismen mittels einer Pumpeinrichtung kontinuierlich im Kreislauf gepumpt. Bei einer diskontinuierlichen Kontaktierung wird zunächst das Fluid, wie etwa ein Medium der Messanordnung zugeführt und nachfolgend die Mikroorganismen zugegeben. The contacting of the measuring arrangement can be carried out continuously or discontinuously. In a continuous contacting the fluid is continuously pumped with the microorganisms contained by means of a pumping device in the circulation. In a discontinuous contacting, the fluid, such as a medium, is first fed to the measuring arrangement and subsequently the microorganisms are added.
Die Ausgabe der berechneten Biofilmbildung kann dabei beispielsweise grafisch über die Bedienoberfläche der Software erfolgen.The output of the calculated biofilm formation can take place, for example, graphically via the user interface of the software.
In einer Ausführungsform der Erfindung werden die Messsignale der Quarzkristallmikrowaage mittels der Sensoreinrichtung über die Messung der Impedanz erfasst.In one embodiment of the invention, the measurement signals of the quartz crystal microbalance are detected by means of the sensor device via the measurement of the impedance.
In einer weiteren Ausführungsform der Erfindung werden elektrische Parameter ausgewählt aus Widerstand, Leitfähigkeit und Kapazität zwischen den Elektroden ermittelt, wobei bevorzugt der Widerstand zwischen zwei, in einem definierten Abstand liegenden Elektroden gemessen wird. Durch den definierten Abstand lassen sich nachfolgend konkrete Aussagen hinsichtlich der elektrischen Parameter treffen, da die Messbedingungen für die Parameter sich aufgrund des definierten Abstands nicht verändern. Unter einem definierten Abstand wird dabei vorliegend ein fest vorgegebener Abstand der Elektroden verstanden, welcher über die Messdauer konstant verbleibt.In a further embodiment of the invention, electrical parameters selected from resistance, conductivity and capacitance between the electrodes are determined, wherein the resistance is preferably measured between two electrodes lying at a defined distance. Due to the defined distance, specific statements regarding the electrical parameters can be made below, since the measurement conditions for the parameters do not change due to the defined distance. In the present case, a defined distance is understood to mean a fixedly predetermined distance of the electrodes, which remains constant over the duration of the measurement.
Ein weiterer Aspekt der Erfindung betrifft die Verwendung eines erfindungsgemäßen Systems und Verfahrens zur Bestimmung der Biofilmbildung in Fluiden.Another aspect of the invention relates to the use of a system and method of the invention for determining biofilm formation in fluids.
Die in der Beschreibung und den Ansprüchen offenbarten Merkmale der Erfindung können sowohl einzeln als auch in beliebiger Kombination für die Verwirklichung der Erfindung in ihren verschiedenen Ausführungsformen von Bedeutung sein.The features of the invention disclosed in the specification and the claims may be of importance both individually and in any combination for the realization of the invention in its various embodiments.
Weitere Merkmale und Vorteile der Erfindung sollen anhand folgender Ausführungsbeispiele näher erläutert werden, ohne die Erfindung auf diese zu beschränken.Further features and advantages of the invention will become apparent from the following embodiments, without limiting the invention to these.
Dabei zeigen die The show
In einem ersten Ausführungsbeispiel ist in den
Die Durchflusskammer
Im Fall einer kontinuierlichen Probenführung werden diesem Minimalmedium von Beginn an Mikroorganismen, wie etwa E. coli SM2029 Genotyp: ara, (lacpro), thi attb::bla-Pa1/04/03-gfp*-T0/pOX38km traD411 (Wagner et al., Eng. Life Sci. 2013,00, 1–9) zugesetzt, wobei das Medium mit den Mikroorganismen die ganze Zeit im Kreislauf mittels einer nicht näher dargestellten Pumpeinrichtung gepumpt wird. Alternativ kann bei einer diskontinuierlichen Probenführung anfangs zunächst nur das Medium in die Kammer
Im weiteren Verlauf wird die Probe durch die gesamte Messkammer
Vorteilhaft ist dabei beispielsweise die Verwendung von Mikroorganismen mit fluoreszierenden Eigenschaften, wodurch eine Überwachung vereinfacht werden kann. It is advantageous, for example, the use of microorganisms with fluorescent properties, whereby monitoring can be simplified.
Während eines Messintervalls (ca. 3 min) werden erst die Messsignale der QCM-Daten über die Messung der Impedanz erfasst und dann der Widerstand zwischen den nicht näher dargestellten Elektroden
Aufgrund von vorherigen Simulationsuntersuchungen konnten die Geometrie der einzelnen Sensoren
BezugszeichenlisteLIST OF REFERENCE NUMBERS
- 11
- System zur Bestimmung der Biofilmbildung System for the determination of biofilm formation
- 22
- Durchflusskammer Flow chamber
- 33
- Einlassventil intake valve
- 44
- Sensoreinrichtungen sensor devices
- 55
- Sensoreinrichtung für QCM Sensor device for QCM
- 66
- transparenter Bereich transparent area
- 77
- Elektroden electrodes
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