DE102015101772A1 - Mobile phase profile with modification segment for sample modification - Google Patents

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Abstract

Fluidversorgungsvorrichtung (150) zum Versorgen eines Probentrenngeräts (10) zum Trennen einer fluidischen Probe mit mobiler Phase, in welche die fluidische Probe zu injizieren ist, wobei die Fluidversorgungsvorrichtung (150) eine Fluidfördereinrichtung (20), die zum Fördern der mobilen Phase mit einstellbarer Zusammensetzung eingerichtet ist, und eine Steuereinrichtung (70) aufweist, die eingerichtet ist, die Zusammensetzung der mobilen Phase in einem Modifizierungssegment (600) abschnittsweise so zu modifizieren, dass in dem Modifizierungssegment (600) im Vergleich zu erstem Lösungsmittel anderes zweites Lösungsmittel zugeführt wird, mit dem die in dem ersten Lösungsmittel enthaltene fluidische Probe, insbesondere vor Erreichen einer Probentrenneinrichtung (30) des Probentrenngeräts (10), modifiziert wird.A fluid supply device (150) for supplying a sample separator (10) for separating a mobile phase fluid sample into which the fluid sample is to be injected, the fluid supply device (150) having fluid delivery means (20) for delivering the mobile phase of adjustable composition and a control device (70) arranged to modify the composition of the mobile phase in a modification segment (600) in sections so that different second solvent is supplied in the modification segment (600) compared to the first solvent in which the fluidic sample contained in the first solvent, in particular before reaching a sample separation device (30) of the sample separation device (10), is modified.

Description

TECHNISCHER HINTERGRUNDTECHNICAL BACKGROUND

Die vorliegende Erfindung betrifft eine Fluidversorgungsvorrichtung, ein Verfahren zum Versorgen eines Probentrenngeräts zum Trennen einer fluidischen Probe mit mobiler Phase sowie ein Probentrenngerät. The present invention relates to a fluid supply device, a method for supplying a sample separation device for separating a fluid phase sample with a mobile phase and a sample separation device.

In einer HPLC wird typischerweise eine Flüssigkeit (mobile Phase) bei einer sehr genau kontrollierten Flussrate (zum Beispiel im Bereich von Mikrolitern bis Millilitern pro Minute) und bei einem hohen Druck (typischerweise 20 bis 1000 bar und darüber hinausgehend, derzeit bis zu 2000 bar), bei dem die Kompressibilität der Flüssigkeit spürbar sein kann, durch eine sogenannte stationäre Phase (zum Beispiel in einer chromatografischen Säule), bewegt, um einzelne Fraktionen einer in die mobile Phase eingebrachten Probenflüssigkeit voneinander zu trennen. Nach Durchlaufen der stationären Phase werden die getrennten Fraktionen der fluidischen Probe in einem Detektor detektiert. Ein solches HPLC-System ist bekannt zum Beispiel aus der EP 0,309,596 B1 derselben Anmelderin, Agilent Technologies, Inc.In an HPLC, a liquid (mobile phase) is typically run at a very precisely controlled flow rate (for example in the range of microliters to milliliters per minute) and at a high pressure (typically 20 to 1000 bar and beyond, currently up to 2000 bar). , in which the compressibility of the liquid can be felt, by a so-called stationary phase (for example, in a chromatographic column), moved to separate individual fractions of a sample liquid introduced into the mobile phase from each other. After passing through the stationary phase, the separated fractions of the fluidic sample are detected in a detector. Such an HPLC system is known, for example from the EP 0,309,596 B1 same Applicant, Agilent Technologies, Inc.

Häufig wird eine fluidische Probe in einem starken Lösungsmittel gelagert, damit die Bestandteile der fluidischen Probe während der Lagerung davor bewahrt ist, zu sedimentieren (auszufällen, oder sich abzusetzen) oder sich an einer Behälterwand eines Behälters, in dem die fluidische Probe samt dem Lösungsmittel enthalten ist, in unerwünschter Weise abzulagern. Allerdings führt dieses Erfordernis, die fluidische Probe in einem starken Lösungsmittel unterzubringen, dazu, dass nach dem Injizieren der fluidischen Probe in einen fluidischen Pfad zwischen der Fluidfördereinrichtung und einer Probentrenneinrichtung des Probentrenngeräts das starke Lösungsmittel, in dem sich die fluidische Probe befindet, mitunter zu einer Selbstablösung bzw. Desorption der fluidischen Probe in der Probentrenneinrichtung führen kann. Anders ausgedrückt kann das starke Lösungsmittel, in dem die fluidische Phase enthalten ist, infolge seiner starken Elutionskraft die fluidische Probe zumindest teilweise und/oder zeitweise von dem Trennmaterial der Probentrenneinrichtung in unerwünschter Weise ablösen. Dies führt zu einer Peak-Dispersion oder Verbreiterung bzw. Verschmierung von Peaks und damit zu einer Verringerung der Auflösung des Probentrenngeräts. Frequently, a fluidic sample is stored in a strong solvent so that the components of the fluidic sample during storage is prevented from sedimenting (precipitating or settling) or at a container wall of a container containing the fluidic sample together with the solvent is to deposit in an undesirable manner. However, this requirement to accommodate the fluidic sample in a strong solvent means that after injecting the fluidic sample into a fluidic path between the fluid delivery device and a sample separator of the sample separation device, the strong solvent in which the fluidic sample resides may sometimes become one Self-detachment or desorption of the fluidic sample in the sample separator can lead. In other words, due to its high elution power, the strong solvent in which the fluidic phase is contained can undesirably detach the fluidic sample at least partially and / or temporarily from the separation material of the sample separator. This leads to a peak dispersion or broadening or smearing of peaks and thus to a reduction in the resolution of the sample separation device.

OFFENBARUNGEPIPHANY

Es ist eine Aufgabe der Erfindung, mit Hilfe eines Fluidversorgungssystems durch Probenmatrix verursachte Artefakte zu unterdrücken. Die Aufgabe wird mittels der unabhängigen Ansprüche gelöst. Weitere Ausführungsbeispiele sind in den abhängigen Ansprüchen gezeigt. It is an object of the invention to suppress artefacts caused by sample matrix with the aid of a fluid supply system. The object is achieved by means of the independent claims. Further embodiments are shown in the dependent claims.

Gemäß einem exemplarischen Ausführungsbeispiel der vorliegenden Erfindung ist eine Fluidversorgungsvorrichtung zum Versorgen eines Probentrenngeräts zum Trennen einer fluidischen Probe mit mobiler Phase geschaffen, in welche mobile Phase die fluidische Probe zu injizieren ist, wobei die Fluidversorgungsvorrichtung eine Fluidfördereinrichtung, die zum Fördern der mobilen Phase mit einstellbarer Zusammensetzung eingerichtet ist, und eine Steuereinrichtung aufweist, die eingerichtet ist, die Zusammensetzung der mobilen Phase in einem Modifizierungssegment abschnittsweise so zu modifizieren, dass in dem Modifizierungssegment im Vergleich zu erstem (insbesondere stärkerem) Lösungsmittel anderes zweites (insbesondere gegenüber dem ersten Lösungsmittel schwächeres) Lösungsmittel zugeführt wird, mit dem dann die in dem ersten Lösungsmittel enthaltene fluidische Probe (insbesondere vor Erreichen einer Probentrenneinrichtung des Probentrenngeräts) modifiziert (insbesondere verdünnt) wird. According to an exemplary embodiment of the present invention, there is provided a fluid supply device for supplying a sample separator for separating a fluid phase fluid sample into which mobile phase the fluid sample is to be injected, the fluid supply device comprising a fluid delivery device for delivering the mobile phase of adjustable composition is set up, and has a control device which is adapted to modify the composition of the mobile phase in a Modifizierungssegment sections so that in the modification segment compared to the first (especially stronger) solvent other second (in particular compared to the first solvent weaker) supplied solvent is, then with the then contained in the first solvent fluidic sample (in particular before reaching a sample separator of the sample separation device) modified (in particular diluted nt).

Gemäß einem anderen exemplarischen Ausführungsbeispiel der Erfindung ist ein Probentrenngerät zum Trennen einer fluidischen Probe bereitgestellt, wobei das Probentrenngerät eine Fluidversorgungsvorrichtung mit den oben beschriebenen Merkmalen zum Bereitstellen einer mobilen Phase, in welche die fluidische Probe zu injizieren ist, und eine Probentrenneinrichtung aufweist, die zum Trennen der fluidischen Probe in Fraktionen eingerichtet ist (wobei die Probentrenneinrichtung insbesondere derart angeordnet sein kann, dass die fluidische Probe erst nach Modifizierung, insbesondere Verdünnung, mit dem zweiten, insbesondere schwächeren, Lösungsmittel einen Einlass der Probentrenneinrichtung erreicht). According to another exemplary embodiment of the invention, there is provided a sample separator for separating a fluidic sample, wherein the sample separator comprises a fluid supply device having the above-described features for providing a mobile phase into which the fluid sample is to be injected and a sample separator for separating the fluidic sample is arranged in fractions (wherein the sample separation device can be arranged in particular such that the fluidic sample reaches the inlet of the sample separation device only after modification, in particular dilution, with the second, in particular weaker, solvent).

Gemäß noch einem anderen exemplarischen Ausführungsbeispiel ist ein Verfahren zum Versorgen eines Probentrenngeräts zum Trennen einer fluidischen Probe mit mobiler Phase bereitgestellt, wobei bei dem Verfahren die mobile Phase mit einstellbarer Zusammensetzung gefördert wird, die fluidische Probe in die mobile Phase injiziert wird, und die Zusammensetzung der mobilen Phase in einem Modifizierungssegment derart abschnittsweise modifiziert wird, dass in dem Modifizierungssegment im Vergleich zu erstem (insbesondere stärkerem) Lösungsmittel anderes zweites (insbesondere im Vergleich zu dem ersten Lösungsmittel schwächeres) Lösungsmittel zugeführt wird, mit dem die in dem ersten Lösungsmittel enthaltene fluidische Probe (insbesondere vor Erreichen einer Probentrenneinrichtung des Probentrenngeräts) modifiziert, insbesondere verdünnt, wird.According to yet another exemplary embodiment, there is provided a method for providing a sample separator for separating a mobile phase fluid sample, the method conveying the adjustable composition mobile phase, injecting the fluid sample into the mobile phase, and the composition of the mobile phase in a Modifizierungssegment so modified in sections, that in the Modifizierungssegment compared to the first (especially stronger) solvent other second (in particular compared to the first solvent weaker) solvent is supplied with which the fluidic sample contained in the first solvent ( especially before reaching a sample separator of the sample separation device) modified, in particular diluted, is.

Im Rahmen der vorliegenden Anmeldung wird unter dem Begriff „stärkeres Lösungsmittel“ ein Lösungsmittel mit einer im Vergleich zu einem „schwächeren Lösungsmittel“ stärkeren Elutionskraft (d.h. Ablösekraft zum Ablösen einer fluidischen Probe von einem Trennmedium, insbesondere einer chromatografischen stationären Phase, einer Probentrenneinrichtung eines Probentrenngeräts) verstanden. Mit anderen Worten ist das stärkere Lösungsmittel besser geeignet als das schwächere Lösungsmittel, an einer Probentrenneinrichtung immobilisierte Fraktionen der fluidischen Probe von dem Trennmedium abzulösen. Bei einer Reversed Phase HPLC-Anwendung kann zum Beispiel das stärkere Lösungsmittel ein organisches Lösungsmittel (zum Beispiel Methanol oder Acetonitril, ACN) sein und das schwächere Lösungsmittel Wasser. Jedes Lösungsmittel eluiert (d.h. spült oder treibt adsorbierte Stoffe aus einem Adsorptionsmittel aus) die Probemoleküle unterschiedlich schnell. Ein Lösungsmittel, das die Probemoleküle schlecht von den aktiven Stellen der stationären Phase verdrängt, ist ein schwaches Lösungsmittel. Im umgekehrten Fall verdrängt bzw. löst ein starkes Lösungsmittel gut die Probemoleküle von den aktiven Stellen der stationären Phase. Die Stärke von Lösungsmitteln ist daher ein Maß für die Elutionskraft der verschiedenen Lösungsmittel. In the context of the present application, the term "stronger solvent" refers to a solvent having a stronger elution power (ie, detachment force for detaching a fluidic sample from a separation medium, in particular a chromatographic stationary phase, a sample separation device of a sample separation apparatus) compared with a "weaker solvent". Understood. In other words, the stronger solvent is more suitable than the weaker solvent to dislodge fractions of the fluidic sample immobilized on a sample separator from the separation medium. For example, in a reversed phase HPLC application, the stronger solvent may be an organic solvent (eg, methanol or acetonitrile, ACN) and the weaker solvent may be water. Each solvent elutes (ie, rinses or expels adsorbed material from an adsorbent) at different rates to the sample molecules. A solvent that poorly displaces the sample molecules from the active sites of the stationary phase is a weak solvent. Conversely, a strong solvent displaces well the sample molecules from the active sites of the stationary phase. The strength of solvents is therefore a measure of the elution power of the various solvents.

Im Rahmen der vorliegenden Anmeldung wird unter dem Begriff „Modifizierungssegment“ ein räumlicher Abschnitt einer strömenden mobilen Phase oder ein Mobilphasenpaket innerhalb eines Mobilphasenstroms oder innerhalb einer Sequenz von Mobilphasenpaketen verstanden, in dem lokal (bzw. in zeitlicher Hinsicht temporär) die Lösungsmittelstärke und/oder eine andere Fluideigenschaft gegenüber angrenzenden Bereichen mobiler Phase verändert (zum Beispiel verringert) ist. Somit ist das Modifizierungssegment, das auch als Probenmodifizierabschnitt der mobilen Phase bezeichnet werden kann, bei Inkontaktkommen mit der in dem anderen (insbesondere stärkeren) Lösungsmittel enthaltenen fluidischen Probe dazu geeignet, die fluidische Probe so zu verändern (insbesondere zu verdünnen) bzw. in entsprechend anderes (zum Beispiel abgeschwächtes) Lösungsmittel einzubetten, dass die fluidische Probe an einer bestimmten Stelle im Flusspfad (insbesondere spätestens an der Position des Einlasses der Probentrenneinrichtung) in ausreichend modifiziertem (insbesondere schwachem) Lösungsmittel enthalten ist (zum Beispiel, um eine Immobilisierung bzw. eine Adsorption der Probe am Trennmedium in einem ausreichenden Maße zu ermöglichen bzw. ein unerwünschtes Selbstablösen der immobilisierten oder adsorbierten fluidischen Probe von dem Trennmedium der Probentrenneinrichtung zu unterdrücken oder sogar zu verunmöglichen). Fließt mobile Phase entlang einer Fluidleitung bzw. eines fluidischen Pfads, so bildet das Modifizierungssegment einen vorzugsweise zusammenhängenden Abschnitt eines anderen (zum Beispiel schwächeren) Lösungsmittels aus, das an einer bestimmten Position der Fluidleitung bzw. des fluidischen Pfads vorbeizieht und beidseitig von Bereichen anderen (zum Beispiel stärkeren) Lösungsmittels flankiert wird. Insbesondere kann unter dem Modifizierungssegment ein begrenztes Volumenpaket mobiler Phase mit gegenüber beidseitig angrenzenden Volumenpaketen der mobilen Phase anderen (insbesondere schwächeren) Lösungsmitteleigenschaften verstanden werden. In the context of the present application, the term "modification segment" is understood to mean a spatial section of a flowing mobile phase or a mobile phase packet within a mobile phase stream or within a sequence of mobile phase packets in which the solvent strength and / or a local (temporally temporally) other fluid property is altered (e.g., decreased) from adjacent areas of the mobile phase. Thus, the modifying segment, which may also be referred to as the mobile phase sample modifying section, when in contact with the fluidic sample contained in the other (particularly stronger) solvent, is capable of altering (in particular diluting) the fluidic sample, or other accordingly embedded (for example, weakened) solvent, that the fluidic sample at a certain point in the flow path (in particular at the latest position of the inlet of the sample separator) in sufficiently modified (especially weak) solvent is included (for example, to immobilization or adsorption allow the sample on the separation medium to a sufficient extent or to suppress or even impossible unwanted Selbstablösen the immobilized or adsorbed fluidic sample from the separation medium of the sample separation device. When mobile phase flows along a fluid conduit, the modification segment forms a preferably contiguous portion of another (for example, weaker) solvent that passes by a particular position of the fluid conduit or path and is surrounded on both sides by portions (e.g. Example, stronger) solvent is flanked. In particular, under the modification segment, a limited volume package of mobile phase with respect to both sides adjacent volume packets of the mobile phase other (especially weaker) solvent properties are understood.

Gemäß einem Ausführungsbeispiel der Erfindung wird in einem ersten Lösungsmittel befindliche fluidische Probe während einer Fluidverarbeitung mit einem Modifizierungssegment aus anderem zweiten Lösungsmittel modifiziert, um für die Fluidverarbeitung gegebenenfalls unerwünschte, aber schwer oder nicht vermeidbare Eigenschaften des ersten Lösungsmittels gezielt zu verändern. Dadurch können Artefakte beim Probentrennen unterdrückt oder verhindert werden. According to one embodiment of the invention, a fluid sample located in a first solvent is modified during a fluid processing with a modification segment from another second solvent, in order to selectively modify undesired, but difficult or unavoidable properties of the first solvent for the fluid processing. This can suppress or prevent artifacts during sample separation.

Gemäß einem bevorzugten exemplarischen Ausführungsbeispiel gelingt es, in einem Fluidversorgungssystem die durch zu starke Probenmatrix verursachte Artefakte zu unterdrücken. Insbesondere ist es simultan ermöglicht, eine fluidische Probe vorteilhaft in einem ausreichend starken Lösungsmittel lagern zu können als auch eine damit herkömmlich verbundene Gefahr einer unerwünschten Selbstablösung oder Desorption von an Trennmedium einer Probentrenneinrichtung adsorbierten Fraktionen der fluidischen Probe durch die parasitäre Eigenwirkung des starken Lösungsmittels selbst zu vermeiden. Dies kann dadurch erreicht werden, dass der mobilen Phase gezielt ein Modifizierungssegment mit ausreichend schwachem Lösungsmittel zugeführt wird (bzw. in einen Mobilphasenfluss an geeigneter Stelle eingebettet wird), so dass auf dem Weg der fluidischen Probe und der mobilen Phase zu einer Probentrenneinrichtung zumindest ein Teil des Modifizierungssegments vor oder spätestens bei Erreichen der Probentrenneinrichtung die fluidische Probe zumindest teilweise eingeholt hat und dadurch rechtzeitig vor dem Ort einer potentiellen unerwünschten Selbstdesorption verdünnt hat. Dadurch wird die Elutionskraft des Lösungsmittels, in dem die fluidische Probe am Ort der Probentrenneinrichtung befindlich ist, gegenüber einer höheren Elutionskraft des Lösungsmittels, in dem die fluidische Probe stromaufwärts der Probentrenneinrichtung (insbesondere in einem Injektor) befindlich war, gezielt reduziert. Hierbei kann von dem Effekt vorteilhaft Gebrauch gemacht werden, dass eine in einer Fluidleitung (zum Beispiel eine Kapillare) strömende Flüssigkeit in einem zentralen Bereich deutlich schneller fließt als in einem wandnahen Bereich, so dass zumindest der fluidleitungszentrale Bereich des Modifizierungssegments zumindest einen Teil der fluidischen Probe einholen kann und vor Erreichen der Probentrenneinrichtung so stark verdünnen kann, dass Selbstablöseeffekte unterdrückt oder ausgeschlossen werden. Dadurch ist es zum einen vorteilhaft möglich, dass die fluidische Probe in einem starken Lösungsmittel gelagert (und ggf. in einen Injektor eingeführt) werden kann, so dass ein unerwünschter Verlust durch Präzipitation von fluidischer Probe vermieden ist. Gleichzeitig kann aber auch ein unerwünschtes Verbreitern von eluierten Peaks, herkömmlich verursacht durch starkes Lösungsmittel im Bereich der fluidischen Probe während der Applikation dieser auf ein Trennmedium, vermieden werden, da das Modifizierungssegment schon vor dem Erreichen der Probentrenneinrichtung die fluidische Probe so stark verdünnt, dass die Selbstablösekräfte hinreichend abgeschwächt oder vollständig eliminiert werden. According to a preferred exemplary embodiment, it is possible in a fluid supply system to suppress the artifacts caused by an excessively large sample matrix. In particular, it is simultaneously possible to be able to advantageously store a fluidic sample in a sufficiently strong solvent and to avoid a danger of undesirable self-detachment or desorption of fractions of the fluidic sample adsorbed on separating medium of a sample separator due to the parasitic action of the strong solvent itself , This can be achieved by specifically supplying the mobile phase with a modification segment having sufficiently weak solvent (or being embedded in a mobile phase flow at a suitable location), so that at least a part of the way along the path of the fluidic sample and the mobile phase to a sample separation device the modification segment has at least partially overtaken the fluidic sample before or at the latest when the sample separation device has been reached, thereby diluting a potential undesired self-desorption in good time before the location. As a result, the elution force of the solvent in which the fluidic sample is located at the location of the sample separator is deliberately reduced in comparison with a higher elution force of the solvent in which the fluidic sample was located upstream of the sample separator (in particular in an injector). In this case, use can advantageously be made of the effect that a fluid flowing in a fluid line (for example a capillary) flows much faster in a central region than in a region near the wall, so that at least the fluid-line-central region of the modification segment at least a part of the fluidic sample can catch up and before reaching the Sample dilution can dilute so strong that Selbstablöseeffekte be suppressed or excluded. As a result, it is advantageously possible for the fluidic sample to be stored in a strong solvent (and possibly introduced into an injector) so that an undesirable loss due to precipitation of fluidic sample is avoided. At the same time, however, unwanted widening of eluted peaks, conventionally caused by strong solvent in the region of the fluidic sample during the application of these to a separation medium, can be avoided, since the modification segment dilutes the fluidic sample to such an extent even before reaching the sample separation device that the Selbstablösekräfte be sufficiently mitigated or completely eliminated.

Es ist allerdings nicht der einzig mögliche Zweck von Ausführungsbeispielen der Erfindung, eine Desorption von Probenkomponenten von einer Probentrenneinrichtung (zum Beispiel einer chromatografischen Trennsäule) unter dem Einfluss des Probenlösungsmittels zu verhindern. Allgemeiner ausgedrückt können Ausführungsbeispiele dazu dienen, es zu erreichen, das Probensegment mit einem in seiner Zusammensetzung von dem umgebenden Eluenten abweichenden Modifizierungssegment (das dann auch als Verdünnungssegment bezeichnet werden kann) zu vermischen (zum Beispiel zu verdünnen). However, it is not the only possible purpose of embodiments of the invention to prevent desorption of sample components from a sample separator (eg, a chromatographic separation column) under the influence of the sample solvent. More generally, embodiments may serve to accomplish mixing (eg, diluting) the sample segment with a modification segment (which may also be referred to as a diluent segment) different in composition from the surrounding eluent.

Im Weiteren werden zusätzliche Ausgestaltungen der Fluidversorgungsvorrichtung, des Verfahrens und des Probentrenngeräts beschrieben. In addition, additional embodiments of the fluid supply device, the method and the sample separation device will be described.

Gemäß einem Ausführungsbeispiel kann das erste Lösungsmittel ein stärkeres Lösungsmittel sein als das im Vergleich zu dem ersten Lösungsmittel schwächere zweite Lösungsmittel. Insbesondere kann das erste Lösungsmittel eine stärkere Elutionskraft (d.h. Ablösekraft zum Ablösen einer fluidischen Probe von einem Trennmedium, insbesondere einer chromatografischen stationären Phase, einer Probentrenneinrichtung eines Probentrenngeräts) als das zweite Lösungsmittel haben. According to one embodiment, the first solvent may be a stronger solvent than the second solvent which is weaker compared to the first solvent. In particular, the first solvent may have a stronger elution power (i.e., peel force for peeling off a fluidic sample from a separation medium, particularly a chromatographic stationary phase, a sample separator of a sample separator) than the second solvent.

Gemäß einem Ausführungsbeispiel kann die Steuereinrichtung eingerichtet sein, die Zusammensetzung der mobilen Phase zumindest in einem Teilbereich außerhalb des Modifizierungssegments, insbesondere beidseitig angrenzend an das Modifizierungssegment, so einzustellen, dass zumindest in dem Teilbereich die mobile Phase aus einem Lösungsmittel gebildet ist, das anders (insbesondere stärker) ist als das Lösungsmittel in dem Modifizierungssegment. Insbesondere kann das Lösungsmittel zumindest in dem Teilbereich schwächer sein als das Lösungsmittel, in dem die fluidische Probe vor dem Verdünnen enthalten ist. Dadurch ist ein dreistufiges System von Lösungsmittelstärke geschaffen, wobei die Lösungsmittelstärke der mobilen Phase außerhalb des Modifizierungssegments stärker als in dem Modifizierungssegment und schwächer als in der fluidischen Probe vor dem Verdünnen sein kann. Das Verdünnen durch Durchmischen kann durch partielle Diffusion der einzelnen Lösungsmittelkomponenten ineinander hinein erfolgen oder dadurch zumindest gefördert werden. Alternativ oder ergänzend ist es möglich, dass ein Mischer bzw. ein das Durchmischen (etwa durch eine erzwungene Konvektion, Flussturbularisierung oder -umwälzung) förderndes Element zum Mischen der einzelnen Lösungsmittelkomponenten vorgesehen wird. According to one embodiment, the control device may be configured to adjust the composition of the mobile phase at least in a partial area outside the modification segment, in particular adjacent to the modification segment on both sides, such that at least in the partial area the mobile phase is formed from a solvent which is different (in particular stronger) than the solvent in the modification segment. In particular, the solvent may be weaker at least in the partial area than the solvent in which the fluidic sample is contained before dilution. This provides a three-stage solvent strength system wherein the solvent strength of the mobile phase outside the modifying segment may be stronger than in the modifying segment and weaker than in the fluidic sample prior to dilution. Dilution by mixing can be effected by partial diffusion of the individual solvent components into one another or at least promoted thereby. Alternatively or additionally, it is possible for a mixer or mixing element (for example by forced convection, flow turbulization or circulation) to be provided for mixing the individual solvent components.

Gemäß einem Ausführungsbeispiel kann die Steuereinrichtung eingerichtet sein, das Fördern des Modifizierungssegments und der in dem ersten Lösungsmittel enthaltenen fluidischen Probe derart zeitlich zu steuern, dass vor dem Erreichen der Probentrenneinrichtung die in dem ersten Lösungsmittel enthaltene fluidische Probe und das Modifizierungssegment durchmischt werden. Anders ausgedrückt kann die Steuereinrichtung das Fördern des Modifizierungssegments samt angrenzender Lösungsmittelabschnitte mit der in dem stärkeren Lösungsmittel enthaltenen fluidischen Probe derart synchronisieren, dass beide diese Fluidsegmente die Probentrenneinrichtung oder eine andere vorgebbare Position in dem Flusspfad zur richtigen Zeit erreichen, mithin am richtigen Ort miteinander durchmischt sind. According to one embodiment, the controller may be configured to time the conveyance of the modifying segment and the fluidic sample contained in the first solvent such that prior to reaching the sample separator, the fluidic sample contained in the first solvent and the modifying segment are mixed. In other words, the control device can synchronize the conveying of the modification segment together with adjacent solvent sections with the fluidic sample contained in the stronger solvent in such a way that both these fluid segments reach the sample separator or another predeterminable position in the flow path at the right time, ie are mixed with each other in the right place ,

Gemäß einem Ausführungsbeispiel kann die Fluidfördereinrichtung eingerichtet sein, eine zeitlich variable Zusammensetzung der mobilen Phase für das Trennen der fluidischen Probe bereitzustellen, insbesondere ein Gradientenprofil. Das Bereitstellen des Modifizierungssegments kann mit dem Beaufschlagen des Probentrenngeräts mit einer zeitlich veränderlichen Zusammensetzung (in bezüglich des Modifizierungssegments voneinander getrennten, miteinander überlappenden oder vollständig identischen Intervallen) kombiniert werden, so dass die Verdünnung der fluidischen Probe durch das schwächere Lösungsmittel des Modifizierungssegments nicht entgegensteht. According to one embodiment, the fluid delivery device may be configured to provide a mobile phase composition variable in time for the separation of the fluidic sample, in particular a gradient profile. The provision of the modifying segment may be combined with subjecting the sample separator to a time varying composition (in intervals overlapping or completely identical with respect to the modifying segment) such that dilution of the fluidic sample by the weaker solvent of the modifying segment does not conflict.

Gemäß einem Ausführungsbeispiel kann die Fluidfördereinrichtung eingerichtet sein, das Modifizierungssegment zeitlich außerhalb des Trennens der fluidischen Probe anzuordnen, insbesondere nach einem erfolgten Trennen von fluidischer Probe. Bei dieser Ausgestaltung kann das Modifizierungssegment einem zeitlich davon getrennten sonstigen Mobilphasenprofil (zum Beispiel einer Rampe eines Gradientenverlaufs) nachgeschaltet und/oder vorgeschaltet werden, so dass jeweils fluidische Probe erst nach rechtzeitiger Verdünnung durch das Modifizierungssegment das Trennmedium der Probentrenneinrichtung erreicht und adsorbiert werden kann, bevor durch das Gradientenprofil nachfolgend eine fraktionsweise Desorption der Fraktionen der fluidischen Probe von der Probentrenneinrichtung erfolgt. Hierbei tritt im Wesentlichen keine unerwünschte vorzeitige Desorption fluidischer Probe, verursacht durch das Lösungsmittel der fluidischen Probe selbst auf.According to one embodiment, the fluid delivery device may be configured to arrange the modification segment in time outside of the separation of the fluidic sample, in particular after a successful separation of fluidic sample. In this embodiment, the modifying segment can be followed and / or connected upstream of a different mobile phase profile (for example a ramp of a gradient curve), so that in each case fluidic sample can be reached and adsorbed the separation medium of the sample separation device only after timely dilution by the modification segment before following the gradient profile a fractional desorption of the fractions of the fluidic Sample from the sample separator takes place. Essentially, there is no undesirable premature desorption of fluidic sample caused by the solvent of the fluidic sample itself.

Gemäß einem Ausführungsbeispiel kann die Fluidfördereinrichtung eingerichtet sein, über das gesamte Gradientenprofil hinweg die mobile Phase mit einem anderen, insbesondere stärkeren, Lösungsmittel bereitzustellen als innerhalb des gesamten Modifizierungssegments. Mit anderen Worten kann selbst in denjenigen Abschnitten des Gradientenprofils, in denen dieses die schwächste Lösungsmittelzusammensetzung innerhalb des Gradientenprofils aufweist, das Lösungsmittel immer noch stärker sein als während des Durchlaufens des Modifizierungssegments. Dadurch kann eine besonders effektive Verdünnung der fluidischen Probe mit dem Modifizierungssegment erfolgen. According to one embodiment, the fluid delivery device may be configured to provide the mobile phase with another, in particular stronger, solvent over the entire gradient profile than within the entire modification segment. In other words, even in those portions of the gradient profile where it has the weakest solvent composition within the gradient profile, the solvent may still be stronger than during the cycling of the modifying segment. As a result, a particularly effective dilution of the fluidic sample with the modification segment can take place.

Gemäß einem Ausführungsbeispiel kann über das gesamte Modifizierungssegment hinweg ein gleichbleibendes Lösungsmittel (d.h. ein Lösungsmittel von über das gesamte Modifizierungssegment hinweg konstanter Elutionskraft) bereitgestellt werden. Auf diese Weise kann die fluidische Probe mit einem homogen schwachen Lösungsmittel vermischt werden. In one embodiment, a consistent solvent (i.e., a solvent of constant elution force over the entire modification segment) can be provided throughout the modification segment. In this way, the fluidic sample can be mixed with a homogeneously weak solvent.

Gemäß einem Ausführungsbeispiel kann das Modifizierungssegment als zeitlich begrenzte Elutionsstärkeabsenkung (insbesondere mit einem gesteuerten Rechteckprofil) in einem Lösungsmittelzusammensetzungsprofil ausgebildet sein. Unmittelbar vor und unmittelbar nach dieser Elutionsstärkeabsenkung kann das Lösungsmittelzusammensetzungsprofil dieselben Werte bzw. dieselbe Zusammensetzung aufweisen. Dann wird die Kontinuität des Lösungsmittelzusammensetzungsprofils nur kurzzeitig durch das Modifizierungssegment unterbrochen und bleibt ansonsten gewahrt. According to one embodiment, the modification segment may be designed as a temporally limited elution intensity reduction (in particular with a controlled rectangular profile) in a solvent composition profile. Immediately before and immediately after this decrease in elution strength, the solvent composition profile may have the same values or composition. Then, the continuity of the solvent composition profile is interrupted only briefly by the modifying segment and otherwise maintained.

Gemäß einem Ausführungsbeispiel kann die Fluidfördereinrichtung mindestens zwei Lösungsmittelzuführkanäle zum Zuführen unterschiedlicher Lösungsmittel (zum Beispiel ein oder mehrere unterschiedliche organische Lösungsmittel und Wasser) zum Mischen der mobilen Phase mit unterschiedlicher Zusammensetzung innerhalb und außerhalb des Modifizierungssegments aufweisen. Gemäß der beschriebenen Ausgestaltung können mehrere Lösungsmittelzuführkanäle sowohl dafür vorgesehen werden, in einer ersten Mischzusammensetzung den Probenverdünnungsabschnitt auszubilden und in einer anderen zweiten Mischzusammensetzung den restlichen Bereich der mobilen Phase bereitzustellen. Hierfür kann an einer Mischeinrichtung die Zusammensetzung aus den verschiedenen Lösungsmittelkomponenten entsprechend angepasst bzw. zeitlich moduliert werden. Zum Bilden des Modifizierungssegments kann eine Lösungskomponente mit relativ schwacher Elutionskraft (zum Beispiel Wasser) verwendet werden, wohingegen in übrigen Bereichen der mobilen Phase eine stärkere Lösungsmittelkomponente mit relativ hoher Elutionskraft vorgesehen sein kann. Da ein separater Lösungsmittelkanal für die Bereitstellung des Modifizierungssegments gemäß der beschriebenen Ausgestaltung entbehrlich ist, da dieses aus den ohnehin vorhandenen Lösungsmittelkomponenten gebildet wird, führt die beschriebene Ausgestaltung zu einer besonders kompakten Fluidversorgungsvorrichtung. In one embodiment, the fluid delivery device may include at least two solvent delivery channels for delivering different solvents (eg, one or more different organic solvents and water) for mixing the mobile phase of different composition inside and outside the modification segment. According to the described embodiment, a plurality of solvent supply channels may be provided both for forming the sample dilution section in a first mixed composition and for providing the remaining region of the mobile phase in another second mixed composition. For this purpose, the composition of the various solvent components can be adapted or time modulated at a mixing device. For forming the modifying segment, a relatively weak elution force (for example, water) solution component may be used, whereas in other areas of the mobile phase, a stronger relatively high elution solvent component may be provided. Since a separate solvent channel for the provision of the modification segment according to the described embodiment is dispensable, since this is formed from the already existing solvent components, the embodiment described leads to a particularly compact fluid supply device.

Gemäß einem alternativen Ausführungsbeispiel kann die Fluidfördereinrichtung mindestens zwei Lösungsmittelzuführkanäle zum Zuführen unterschiedlicher Lösungsmittel zum Mischen der mobilen Phase außerhalb des Modifizierungssegments und mindestens einen separaten weiteren Lösungsmittelzuführkanal zum Zuführen der mobilen Phase innerhalb des Modifizierungssegments aufweisen. Gemäß dieser alternativen Ausgestaltung ist mindestens ein separater Fluidversorgungskanal zum Zuführen des Modifizierungssegments bereitgestellt, so dass keinerlei Einschränkungen bezüglich der freien Wahl der Lösungsmittelkanäle zum Zusammenmischen von übrigen Abschnitten der mobilen Phase bestehen. Vielmehr können die Lösungsmittelzuführkanäle zum Bereitstellen von übrigen Bereichen der mobilen Phase speziell und frei so konfiguriert werden, dass ein gewünschtes zeitliches Mobilphasenzusammensetzungsprofil erhalten werden kann. Das gezielt zum Verdünnen optimierte Modifizierungssegment kann sich gemäß der beschriebenen Ausgestaltung aus einem getrennten Lösungsmittelkanal speisen, der außerhalb der Zuführungsdauer des Modifizierungssegments inaktiv sein kann. According to an alternative embodiment, the fluid delivery means may comprise at least two solvent supply channels for supplying different solvents for mixing the mobile phase outside the modifying segment and at least one separate further solvent supply channel for supplying the mobile phase within the modifying segment. According to this alternative embodiment, at least one separate fluid supply channel is provided for supplying the modifying segment, so that there are no restrictions on the free choice of solvent channels for mixing together remaining portions of the mobile phase. Rather, the solvent delivery channels for providing remaining portions of the mobile phase can be specifically and freely configured to obtain a desired temporal mobile phase composition profile. The specifically optimized for dilution modification segment can feed according to the described embodiment of a separate solvent channel, which may be inactive outside the feeding period of the modification segment.

Gemäß einem Ausführungsbeispiel kann die Fluidfördereinrichtung aus einer Gruppe ausgewählt sein, die besteht aus einer sogenannten Binärpumpe und einer Mehrkanalpumpe. Eine Binärpumpe kann sich durch die Vermischung der Lösungsmittel auf der Hochdruckseite auszeichnen, während in einer Mehrkanalpumpe die Vermischung typischerweise auf der Niederdruckseite, d.h. vor dem eigentlichen Pumpelement, stattfinden kann. Eine Binärpumpe ist eine besonders einfache Ausgestaltung, die eine kompakte Fluidversorgungsvorrichtung ermöglicht. Beide Kanäle der Binärpumpe können sowohl zum Bilden des Modifizierungssegments als auch anderer Bereiche der mobilen Phase verwendet werden. Anders ausgedrückt kann aus den durch die zwei Kanäle der Binärpumpe geförderten fluidischen Komponenten mit einem ersten Mischungsverhältnis das Modifizierungssegment und kann mit einem anderen, zweiten Mischungsverhältnis die übrige für die Trennung einzusetzende mobile Phase zusammengesetzt werden. Dagegen hat eine Mehrkanalpumpe den Vorteil, dass einer oder mehrere separate Kanäle nur zum Bilden des Modifizierungssegments genutzt werden können, ohne dass in den anderen Kanälen vorhandene Lösungsmittel zum Bilden sonstiger Bereiche der mobilen Phase irgendwelchen Einschränkungen unterliegen würden. Anders ausgedrückt kann bei einer Quaternärpumpe ein Teil der Kanäle ausschließlich zum Bilden des Modifizierungssegments eingesetzt werden, wohingegen ein anderer Teil der Kanäle ausschließlich zum Bilden der übrigen mobilen Phase eingesetzt werden kann.According to one embodiment, the fluid delivery device may be selected from a group consisting of a so-called binary pump and a multi-channel pump. A binary pump can be characterized by the mixing of the solvents on the high-pressure side, while in a multi-channel pump mixing can typically take place on the low-pressure side, ie before the actual pumping element. A binary pump is a particularly simple design that enables a compact fluid supply device. Both channels of the binary pump can be used to both form the modifying segment and other areas of the mobile phase. In other words, from the fluidic components conveyed through the two channels of the binary pump with a first mixing ratio, the modifying segment can be composed and with another, second mixing ratio the remaining mobile phase to be used for the separation can be assembled. In contrast, a multi-channel pump has the advantage that one or more separate channels only for Forming the modifying segment can be used without any solvents present in the other channels for any other areas of the mobile phase would be subject to any restrictions. In other words, in a quaternary pump, part of the channels may be used exclusively to form the modifying segment, whereas another part of the channels may be used exclusively to form the remaining mobile phase.

Gemäß einem Ausführungsbeispiel kann die Steuereinrichtung (zum Beispiel ein Prozessor oder mehrere zusammenwirkende Prozessoren) aus einer Gruppe ausgewählt sein, die besteht aus einer der Fluidfördereinrichtung zugeordneten Steuereinrichtung, einer einem Injektor des Probentrenngeräts zum Injizieren der fluidischen Probe in einen Flusspfad zwischen Fluidfördereinrichtung und einer Probentrenneinrichtung des Probentrenngeräts zugeordneten Steuereinrichtung, und einer zum Steuern des gesamten Probentrenngeräts ausgebildeten Steuereinrichtung. Gemäß einer Ausgestaltung kann eine Pumpensteuerung selbst die zeitlich veränderliche mobile Phase definieren und die Fluidfördereinrichtung entsprechend ansteuern. Gemäß einer anderen Ausgestaltung kann eine Steuerung eines Injektors die entsprechenden Steueraufgaben übernehmen. Es ist auch eine gemeinsame Steuereinrichtung von Injektor und Pumpe möglich. Ferner kann eine zentrale Steuereinrichtung eines gesamten Probentrenngeräts verwendet werden, um die vorzugsweise synchronisierte Steuerung von Injektor und Pumpe durchführen zu können. In one embodiment, the controller (eg, one or more processors) may be selected from a group consisting of controller associated with the fluid conveyor, an injector of the sample separator for injecting the fluid sample into a flow path between the fluid conveyor, and a sample separator Sample Separator associated control device, and formed for controlling the entire sample separation device control device. According to one embodiment, a pump control itself can define the time-variable mobile phase and control the fluid delivery device accordingly. According to another embodiment, a controller of an injector can take over the corresponding control tasks. It is also a common control device of injector and pump possible. Furthermore, a central control device of an entire sample separation device can be used in order to be able to carry out the preferably synchronized control of injector and pump.

Gemäß einem Ausführungsbeispiel kann die Fluidversorgungsvorrichtung ferner einen Injektor zum Injizieren der fluidischen Probe in einen Flusspfad zwischen der Fluidfördereinrichtung und einer Probentrenneinrichtung des Probentrenngeräts aufweisen, wobei der Injektor selektiv schaltbar ist in:

  • – einen Probenaufnahmemodus, in dem die fluidische Probe (zum Beispiel aus einem Probenbehälter, auch „vial“ genannt) in ein Probenaufnahmevolumen (zum Beispiel eine Probenschleife, auch „sample loop“ genannt) des Injektors aufgenommen wird; und
  • – einen Probentrennmodus, in dem zuvor aufgenommene fluidische Probe zum Trennen in einen Flusspfad zwischen die Fluidfördereinrichtung und eine Probentrenneinrichtung eingebracht bzw diesem zugeführt wird.
According to one embodiment, the fluid supply device may further include an injector for injecting the fluidic sample into a flow path between the fluid delivery device and a sample separator of the sample separation device, the injector being selectively switchable in:
  • A sample receiving mode in which the fluidic sample (for example, from a sample container, also called "vial") is taken up in a sample receiving volume (for example a sample loop, also called "sample loop") of the injector; and
  • A sample separation mode in which previously taken-up fluidic sample is introduced or supplied for separation into a flow path between the fluid delivery device and a sample separation device.

Die Steuereinrichtung kann eingerichtet sein, die Fluidfördereinrichtung und/oder den Injektor derart zu steuern, insbesondere miteinander zu synchronisieren, dass vor dem Schalten in den Probentrennmodus das Modifizierungssegment, insbesondere gemeinsam mit der fluidischen Probe, in dem Injektor eingeschlossen ist. The control device may be configured to control the fluid delivery device and / or the injector in such a way, in particular to synchronize with each other, that prior to switching to the sample separation mode, the modification segment, in particular together with the fluidic sample, is enclosed in the injector.

Vor dem Schalten in den Probenaufnahmemodus kann also mobile Phase von der Fluidfördereinrichtung in das Fluidleitungssystem (zum Beispiel Kapillarsystem) des Injektors eingefüllt werden, darunter auch der Probenmodifizierabschnitt. Nach einem Schalten des Injektorventils in den Probenaufnahmemodus befindet sich dann in den Fluidleitungen des Injektorventils zumindest auch das Modifizierungssegment. Besonders vorteilhaft ist eine Ausführung, in der ein Injektor mit einer innerhalb der Sample Loop befindlichen Nadel-Sitz-Kombination eingesetzt wird. Nun kann in dem Injektor eine Nadel aus ihrem Sitz gefahren werden, und in einen Probenbehälter eingetaucht werden, um durch nachfolgendes Zurückfahren eines Kolbens einer Dosierpumpe in dem Injektor fluidische Probe aus dem Probenbehälter durch die Nadel in das Probenaufnahmevolumen einzuziehen. Nach Abschluss dieses Vorgangs kann die Nadel in den Sitz zurückgefahren werden. Nun befindet sich in den Fluidleitungen des Injektors eingeschlossen die fluidische Probe und das Modifizierungssegment, vorzugsweise in hinreichender Nähe (d.h. in ausreichender geographischer bzw. räumlicher Nähe). Da vor dem Schalten in den Probentrennmodus die fluidische Probe und das Modifizierungssegment bereits räumlich nahe beisammen in dem Fluidleitungssystem des Injektors eingeschlossen sind, kann bei einem nachfolgenden Schalten in den Probentrennmodus die fluidische Probe ihren Weg zu der Probentrenneinrichtung antreten und kann dabei, z.B. verursacht durch ein poiseuillesches Flussprofil, zumindest von einem Teil des Modifizierungssegments eingeholt werden. Thus, prior to switching to the sample-taking mode, mobile phase may be introduced from the fluid delivery device into the fluid conduit system (eg, capillary system) of the injector, including the sample-modifying section. After a switching of the injector valve in the sample receiving mode is then in the fluid lines of the injector at least the Modifizierungssegment. Particularly advantageous is an embodiment in which an injector is used with a needle-seat combination located within the sample loop. Now, in the injector, a needle may be moved out of its seat and immersed in a sample container to draw fluid sample from the sample container through the needle into the sample receiving volume by subsequently returning a plunger of a metering pump to the injector. After completing this procedure, the needle can be returned to the seat. Now, the fluidic sample and the modifying segment are included in the fluid lines of the injector, preferably in sufficient proximity (i.e., in sufficient geographic proximity). Because prior to switching to the sample separation mode, the fluidic sample and the modifying segment are already confined spatially close together in the fluid conduit system of the injector, upon subsequent switching to the sample separation mode, the fluidic sample may make its way to the sample separator and may, e.g. caused by a poiseuille flow profile, at least part of the modification segment.

Gemäß einem Ausführungsbeispiel kann eine Summe aus einem Fluidvolumen des Modifizierungssegments und einem Fluidvolumen der fluidischen Probe gleich einem Innenvolumen des Injektors sein. Anders ausgedrückt kann das gesamte Innenvolumen des Injektors mit fluidischer Probe und mit dem Modifizierungssegment gefüllt sein. In one embodiment, a sum of a fluid volume of the modifying segment and a fluid volume of the fluidic sample may be equal to an internal volume of the injector. In other words, the entire internal volume of the injector may be filled with fluidic sample and with the modification segment.

Gemäß einem Ausführungsbeispiel kann die Fluidfördereinrichtung zum Fördern der mobilen Phase mit einem Druck von mindestens 500 bar, insbesondere mindestens 1200 bar, eingerichtet sein. Insbesondere bei hohen und höchsten Drücken kann die Geschwindigkeit eines wandfernen inneren Bereichs des Modifizierungssegments besonders hoch werden, so dass selbst bei kurzer Entfernung zwischen Injektor und Probentrenneinrichtung ein Einholen und somit ausreichend starkes Verdünnen der fluidischen Probe durch das Modifizierungssegment sichergestellt werden kann. According to one embodiment, the fluid delivery device for conveying the mobile phase with a pressure of at least 500 bar, in particular at least 1200 bar, be set up. Particularly at high and highest pressures, the velocity of a far wall inner region of the modification segment can become particularly high, so that even with a short distance between the injector and the sample separation device, recovery and thus sufficiently dilution of the fluidic sample by the modification segment can be ensured.

Gemäß einem Ausführungsbeispiel kann die Steuereinrichtung eingerichtet sein, die Zusammensetzung der mobilen Phase alternierend durch Gradientenabschnitte zum Trennen der fluidischen Probe und durch Modifizierungssegmente zum Verdünnen einer jeweiligen fluidischen Probe auszubilden oder deren Erzeugung zu steuern. Indem Probenverdünnungsabschnitte und Gradientenabschnitte alternierend abwechseln, stört die Verdünnung der fluidischen Probe vor Erreichen der Probentrenneinrichtung mit dem Modifizierungssegment den Gradientenlauf nicht, und umgekehrt. According to one embodiment, the control device may be configured to alternate the composition of the mobile phase by gradient sections for separating the fluidic sample and by modifying segments for Dilute a respective fluidic sample form or to control their generation. By alternately alternating sample dilution sections and gradient sections, dilution of the fluidic sample before reaching the sample separator with the modifying segment does not interfere with gradient cycling, and vice versa.

Insbesondere kann der Probenverdünnungsabschnitt jeweils in einen Post-Run-Abschnitt eines zeitlich veränderlichen Mobilphasenprofils eingebettet werden, so dass ohne Reduzierung der Durchsatzkapazität des Probentrenngeräts eine Beimengung eines ausreichend schwachen Lösungsmittelmilieus der fluidischen Probe vor Erreichen der Probentrenneinrichtung sichergestellt werden kann. In particular, the sample dilution section can each be embedded in a post-run section of a time-varying mobile phase profile, so that an admixture of a sufficiently weak solvent milieu of the fluidic sample can be ensured before the sample separation device is reached without reducing the throughput capacity of the sample separation device.

Gemäß einem Ausführungsbeispiel können aufeinanderfolgende Gradientenabschnitte und/oder aufeinanderfolgende Modifizierungssegmente unterschiedlich starke Extremwerte, insbesondere unterschiedlich starke Maxima und/oder unterschiedlich starke Minima im Bezug auf ihre Elutionskraft und/oder Zusammensetzung, aufweisen. Eine solche Ausgestaltung ist insbesondere bei zweidimensionalen Probentrennprozeduren, weiter insbesondere bei zweidimensionaler Flüssigkeitschromatographie (2D-LC), speziell in einer zweiten Dimension oder generell in einer nachgeschalteten Dimension, vorteilhaft. According to an embodiment, successive gradient sections and / or successive modification segments may have different extreme values, in particular different maximums and / or different minimums with respect to their elution force and / or composition. Such an embodiment is particularly advantageous in two-dimensional sample separation procedures, more particularly in two-dimensional liquid chromatography (2D-LC), especially in a second dimension or generally in a downstream dimension.

Gemäß einem Ausführungsbeispiel kann die Fluidversorgungsvorrichtung ein Injektorventil mit zwei Fluidaufnahmevolumina (insbesondere zwei Fluidaufnahmeschleifen, die auch Loops genannt werden können und jeweils zwischen zwei Ports des fluidischen Injektorventils angeschlossen sein können) aufweisen. Jeweils eines der zwei Fluidaufnahmevolumina kann zu einem bestimmten Zeitpunkt zum Aufnehmen fluidischer Probe ausgebildet sein, während das jeweils andere gerade zum Aufnehmen eines Modifizierungssegments fungiert. Nach einem jeweiligen Schalten des Injektorventils kann zunächst die fluidische Probe aus dem zugehörigen Probenaufnahmevolumen in einen angeschlossenen fluidischen Pfad (zum Beispiel einen Probentrennpfad) überführt werden und dann das Modifizierungssegment aus dem zugehörigen anderen Probenaufnahmevolumen in den angeschlossenen fluidischen Pfad (zum Beispiel den Probentrennpfad) überführt werden, oder vice versa (je nach Schaltalgorithmus). Dadurch ausgelöst kann eine Verdünnung der fluidischen Probe durch das Modifizierungssegment erfolgen (und zwar insbesondere noch stromaufwärts einer Probentrenneinrichtung zum Trennen der fluidischen Probe in dem Probentrennpfad). Die Funktionsweise der beiden Fluidaufnahmevolumina kann durch sukzessives Betätigen des Injektorventils (das auch als Modulatorventil bezeichnet werden kann) vertauscht werden. According to one embodiment, the fluid supply device may have an injector valve with two fluid receiving volumes (in particular two fluid intake loops, which may also be called loops and each connected between two ports of the fluidic injector valve). In each case one of the two fluid receiving volumes can be formed at a certain time for receiving fluidic sample, while the other one just acts to receive a modification segment. After a respective switching of the injector valve, first the fluidic sample from the associated sample receiving volume can be transferred into a connected fluidic path (for example a sample separation path) and then the modification segment transferred from the associated other sample receiving volume into the connected fluidic path (for example the sample separation path) , or vice versa (depending on the switching algorithm). This can trigger a dilution of the fluidic sample through the modification segment (and in particular still upstream of a sample separator for separating the fluidic sample in the sample separation path). The operation of the two fluid receiving volumes can be reversed by successive actuation of the injector valve (which can also be referred to as a modulator valve).

Bei zweidimensionaler Flüssigkeitschromatographie kann das beschriebene Injektorventil oder Modulatorventil im Bereich der Schnittstelle zwischen erster Trenndimension und zweiter Trenndimension angeordnet sein. An dem Injektorventil können zwei Probenaufnahmevolumina, zum Beispiel in Form von Sample Loops, vorgesehen sein. In einem dieser Probenaufnahmevolumina kann die fluidische Probe zwischengespeichert bzw. geparkt werden, in dem anderen das Modifizierungssegment. Dann kann zunächst die fluidische Probe parallel mit dem Modifizierungssegment in die zweite Dimension geschaltet werden, nachfolgend nur das nun aber entleerte Probenaufnahmevolumen. Aber es kann auch das Probenaufnahmevolumen mit dem Modifizierungssegment gefüllt gewesen sein, bevor es nun zum Teil mit dem Probensegment gefüllt ist, wenn das Modulatorventil geschaltet wird. Letzteres Segment kann ersteres dann auf dem Weg zur Probentrenneinrichtung der zweiten Dimension einholen und vor Beginn des Trennens in der zweiten Dimension so stark verdünnt sein, dass eine unerwünschte Selbstelution oder Desorption der Fraktion der fluidischen Probe, bedingt durch starkes Lösungsmittel der Probe selbst, ausgeschlossen ist. In the case of two-dimensional liquid chromatography, the described injector valve or modulator valve can be arranged in the region of the interface between the first separation dimension and the second separation dimension. Two sample volumes, for example in the form of sample loops, can be provided on the injector valve. In one of these sample volumes, the fluidic sample can be cached, in the other the modification segment. Then, first, the fluidic sample can be connected in parallel with the Modifizierungssegment in the second dimension, hereinafter only the now emptied sample receiving volume. However, the sample receiving volume may also have been filled with the modifying segment before it is partially filled with the sample segment when the modulator valve is switched. The latter segment may then catch up with the former on the way to the sample separator of the second dimension and be diluted to such an extent before the separation in the second dimension that unwanted self-elution or desorption of the fraction of the fluidic sample caused by strong solvent of the sample itself is precluded ,

Wie bereits oben angesprochen, ist es nicht der einzig mögliche Zweck von Ausführungsbeispielen der Erfindung, eine Desorption von Probenkomponenten von einer Probentrenneinrichtung unter dem Einfluss des Probenlösungsmittels zu verhindern. Im Weiteren werden andere Anwendungen beschrieben, die zu den zuvor beschriebenen Anwendungen alternativ oder ergänzend in einer Fluidversorgungseinrichtung, einem chromatographischen Trenngerät und/oder einem Verfahren gemäß einem exemplarischen Ausführungsbeispiel implementiert werden können: As previously stated, it is not the only possible purpose of embodiments of the invention to prevent desorption of sample components from a sample separator under the influence of the sample solvent. In the following, other applications will be described which, for the applications described above, can alternatively or additionally be implemented in a fluid supply device, a chromatographic separation device and / or a method according to an exemplary embodiment:

Gemäß einer Ausgestaltung kann das Modifizierungssegment derart ausgebildet sein, dass bei Modifizierung der fluidischen Probe mit dem Modifizierungssegment ein relatives Elutionsvermögen verändert (insbesondere gezielt reduziert oder erhöht) wird. According to one embodiment, the modification segment may be designed in such a way that upon modification of the fluidic sample with the modification segment a relative elution capacity is changed (in particular selectively reduced or increased).

Gemäß einer Ausgestaltung kann das Modifizierungssegment derart ausgebildet sein, dass bei Modifizierung der fluidischen Probe mit dem Modifizierungssegment eine Affinität der fluidischen Probe zu einer stationären Phase einer Probentrenneinrichtung erhöht wird. Die Modifizierung, insbesondere Verdünnung, kann auch die Eigenschaften der in der Probe beinhalteten Stoffe so beeinflussen, dass (zum Beispiel zusätzlich zur Änderung der Elutionskraft des Lösemittels) diese Stoffe aufgrund stärkerer Affinität zur stationären Phase am Säulenkopf fokussiert werden. D.h., dass das Elutionsvermögen des Lösemittels relativ gesehen zu den Inhaltsstoffen der Probe verstärkt abgesenkt werden kann, zum Beispiel aufgrund einer Veränderung des Probeninhaltes (z.B. eines oder mehrerer Analyten), zum Beispiel ausgelöst durch eine chemische Reaktion. Zum Beispiel kann eine Veränderung des relativen Elutionsvermögens aufgrund einer Veränderung der Analyten bewirkt werden (dies könnte als Beispiel eine Derivatisierung des Analyten sein).According to one embodiment, the modification segment may be designed such that upon modification of the fluidic sample with the modification segment, an affinity of the fluidic sample for a stationary phase of a sample separation device is increased. The modification, particularly dilution, may also affect the properties of the substances included in the sample such that (eg, in addition to changing the elution power of the solvent) these substances are focused on the column top due to greater affinity for the stationary phase. That is, the solvent's elution capacity can be lowered more in relative terms to the ingredients of the sample, for example Example due to a change in the sample content (eg one or more analytes), for example triggered by a chemical reaction. For example, a change in relative eluent power may be due to a change in the analytes (this could be exemplified by derivatization of the analyte).

Gemäß einer Ausgestaltung kann das Modifizierungssegment derart ausgebildet sein, dass Komponenten der fluidischen Probe zur besseren Detektierbarkeit modifiziert werden. Das Probensegment kann mit einem in seiner Zusammensetzung vom umgebenden Eluenten abweichenden Modifizierungssegment modifiziert werden, um die Probenkomponenten zwecks besserer Detektierbarkeit zu verändern bzw. zu modifizieren, insbesondere z.B. durch eine chemische Reaktion bzw. chemische Modifikation der Probenkomponenten. According to one embodiment, the modification segment may be designed such that components of the fluidic sample are modified for better detectability. The sample segment may be modified with a modification segment other than the surrounding eluent in order to alter or modify the sample components for better detectability, in particular e.g. by a chemical reaction or chemical modification of the sample components.

Gemäß einer Ausgestaltung kann das Modifizierungssegment derart ausgebildet sein, dass Retentionseigenschaften und/oder andere chromatographische Eigenschaften von Komponenten der fluidischen Probe modifiziert werden. Das Probensegment kann mit einem in seiner Zusammensetzung vom umgebenden Eluenten abweichenden Modifizierungssegment modifiziert werden, um die Probenkomponenten so zu verändern bzw. zu modifizieren, dass ihre Retentions- bzw. chromatografischen Eigenschaften verändert werden. According to one embodiment, the modification segment may be designed such that retention properties and / or other chromatographic properties of components of the fluidic sample are modified. The sample segment may be modified with a modification segment other than the surrounding eluent in order to modify or modify the sample components to alter their retention or chromatographic properties.

Gemäß einer Ausgestaltung kann das Modifizierungssegment derart ausgebildet sein, dass für das Trennen der fluidischen Probe nachteilige Eigenschaften, insbesondere Aggressivität und/oder Unverträglichkeit gegenüber Systemkomponenten, des ersten Lösungsmittels modifiziert werden. Das Probensegment kann mit einem in seiner Zusammensetzung vom dem umgebenden Eluenten abweichenden Modifizierungssegment modifiziert werden, um für die nachfolgende Trennung oder für das Trennsystem nachteilige Eigenschaften (wie Aggressivität oder Lösungsmittelunverträglichkeit gegenüber den Systemkomponenten) des Probenlösungsmittels zu beseitigen bzw. zu mindern, wie zum Beispiel den pH-Wert so zu verändern, dass die nachgeschalteten Systemkomponenten dadurch nicht beschädigt werden können (zum Beispiel eventuell in der Probe enthaltene Säure oder Lauge neutralisieren; durch Komplexbildung, chemische Reaktion, Zugabe eines Lösemittels oder eine Mizellenbildung eine Präzipitation der Teile der Probe – sowohl der Analyten als auch Pufferkomponenten – zu verhindern, oder Ähnliches). According to one embodiment, the modification segment can be designed such that disadvantageous properties, in particular aggressiveness and / or incompatibility with system components, of the first solvent are modified for the separation of the fluidic sample. The sample segment may be modified with a modifying segment other than the surrounding eluent in order to eliminate or reduce detrimental properties (such as aggressiveness or solvent incompatibility with the system components) of the sample solvent, for example, the subsequent separation or separation system pH value can be changed so that the downstream system components can not be damaged (eg neutralize any acid or alkali contained in the sample, precipitation of the parts of the sample by complexation, chemical reaction, addition of a solvent or micelle formation - both Analytes as well as buffer components - to prevent, or the like).

Somit kann einerseits mittels des Modifizierungssegments eine Absenkung der Lösekraft der mobilen Phase erreicht werden. Es ist aber auch möglich, eine Erhöhung der Affinität der Probensubstanzen zu erreichen (zum Beispiel durch eine Änderung direkt am Probenmolekül). Thus, on the one hand by means of the modification segment, a lowering of the release force of the mobile phase can be achieved. However, it is also possible to achieve an increase in the affinity of the sample substances (for example by a change directly on the sample molecule).

Somit kann der Begriff der Elutionskraft relativ gesehen werden, quasi als Gegengewicht zwischen Anhaftung und Ablösung. Der Begriff der Elutionskraft betrifft also eine Eigenschaft der Probenmatrix in Bezug auf die Oberfläche, bzw. eine Eigenschaft der Probenmatrix in Bezug zum Probenmolekül. Somit kann allgemeiner gesehen durch das Modifizierungssegment eine Vermeidung von technischen Schäden am Gerät oder eine Verbesserung der Geräteeigenschaften, wie zum Beispiel der Messempfindlichkeit, erreicht werden. Thus, the concept of elution force can be seen relatively, as a kind of counterweight between adhesion and detachment. The term elution force thus refers to a property of the sample matrix with respect to the surface, or a property of the sample matrix with respect to the sample molecule. Thus, more generally, the modification segment can avoid avoiding technical damage to the device or improving device characteristics, such as measurement sensitivity.

Eine Modifizierung bzw. Verdünnung gemäß einem exemplarischen Ausführungsbeispiel der Erfindung kann auch die Eigenschaften der in der Probe beinhalteten Stoffe so beeinflussen, dass die Elutionskraft des Lösemittels relativ gesehen zu den Inhaltsstoffen verstärkt abnimmt, zum Beispiel aufgrund einer stärkeren Affinität zur Trennphase. Modification or dilution, according to an exemplary embodiment of the invention, may also affect the properties of the materials included in the sample such that the solvent's elution force relatively decreases relative to the ingredients, for example due to a greater affinity for the separation phase.

Gemäß einem Ausführungsbeispiel kann die Zusammensetzung zumindest ein erstes Lösungsmittel, insbesondere Wasser, und ein zweites Lösungsmittel, insbesondere ein organisches Lösungsmittel, aufweisen. According to one embodiment, the composition may comprise at least a first solvent, in particular water, and a second solvent, in particular an organic solvent.

Das Probentrenngerät kann ein mikrofluidisches Messgerät, ein Life Science-Gerät, ein Flüssigkeitschromatographiegerät, eine HPLC (High Performance Liquid Chromatography), eine UHPLC-Anlage, ein SFC-(superkritische Flüssigkeitschromatographie)Gerät, ein Gaschromatographiegerät, ein Elektrophoresegerät und/oder ein Gelelektrophoresegerät sein. Allerdings sind viele andere Anwendungen möglich. The sample separation device may be a microfluidic measuring device, a life science device, a liquid chromatography device, a high performance liquid chromatography (HPLC), an UHPLC device, an SFC (supercritical fluid chromatography) device, a gas chromatography device, an electrophoresis device, and / or a gel electrophoresis device , However, many other applications are possible.

Gemäß einem Ausführungsbeispiel kann die Probentrenneinrichtung als chromatographische Trenneinrichtung, insbesondere als Chromatographietrennsäule, ausgebildet sein. Bei einer chromatographischen Trennung kann die Chromatographietrennsäule mit einem Adsorptionsmedium, versehen sein. An diesem kann die fluidische Probe aufgehalten werden und erst nachfolgend bei Anwesenheit einer spezifischen Lösungsmittelzusammensetzung fraktionsweise wieder abgelöst werden, womit die Trennung der Probe in ihre Fraktionen bewerkstelligt wird. According to one embodiment, the sample separation device can be designed as a chromatographic separation device, in particular as a chromatography separation column. In a chromatographic separation, the chromatographic separation column may be provided with an adsorption medium. At this, the fluidic sample can be stopped and only then fractionally dissolved again in the presence of a specific solvent composition, whereby the separation of the sample is accomplished in their fractions.

Das Pumpsystem kann zum Beispiel dazu eingerichtet sein, das Fluid bzw. die mobile Phase mit einem hohen Druck, zum Beispiel einige 100 bar bis hin zu 1000 bar und mehr, durch das System hindurch zu befördern. For example, the pumping system may be configured to deliver the fluid or mobile phase through the system at a high pressure, for example, from a few hundred bars up to 1000 bars or more.

Das Probentrenngerät kann den oben bereits angesprochenen Probeninjektor zum Einbringen der Probe in den fluidischen Trennpfad aufweisen. Ein solcher Probeninjektor kann eine mit einem Sitz koppelbare Injektionsnadel in einem entsprechenden Flüssigkeitspfad aufweisen, wobei die Nadel aus diesem Sitz herausgefahren werden kann, um Probe aufzunehmen, wobei nach dem Wiedereinführen der Nadel in den Sitz die Probe sich in einem Fluidpfad befindet, der, zum Beispiel durch das Schalten eines Ventils, in den Trennpfad des Systems hineingeschaltet werden kann, was zum Einbringen der Probe in den fluidischen Trennpfad führt.The sample separation device can introduce the above-mentioned sample injector having the sample in the fluidic separation path. Such a sample injector may comprise a syringe-dockable injection needle in a corresponding fluid path, which needle may be withdrawn from that seat to receive sample, wherein upon reintroduction of the needle into the seat, the sample is in a fluid path which, for Example, by switching a valve, can be switched into the separation path of the system, which leads to the introduction of the sample in the fluidic separation path.

Das Probentrenngerät kann einen Fraktionssammler zum Sammeln der getrennten Komponenten aufweisen. Ein solcher Fraktionssammler kann die verschiedenen Komponenten der aufgetrennten Probe zum Beispiel in verschiedene Flüssigkeitsbehälter führen. Die analysierte Probe kann aber auch einem Abflussbehälter zugeführt werden. The sample separator may include a fraction collector for collecting the separated components. Such a fraction collector may carry the various components of the separated sample, for example, into different liquid containers. The analyzed sample can also be fed to a drain tank.

Vorzugsweise kann das Probentrenngerät einen Detektor zur Detektion der getrennten Komponenten aufweisen. Ein solcher Detektor kann ein Signal erzeugen, welches beobachtet und/oder aufgezeichnet werden kann, und welches für die Anwesenheit und Menge der Probenkomponenten in dem durch das System fließenden Fluid indikativ ist. Preferably, the sample separation device may comprise a detector for detecting the separated components. Such a detector may generate a signal which can be observed and / or recorded and which is indicative of the presence and amount of sample components in the fluid flowing through the system.

KURZE BESCHREIBUNG DER FIGURENBRIEF DESCRIPTION OF THE FIGURES

Andere Ziele und viele der begleitenden Vorteile von Ausführungsbeispielen der vorliegenden Erfindung werden leicht wahrnehmbar werden und besser verständlich werden unter Bezugnahme auf die folgende detailliertere Beschreibung von Ausführungsbeispielen in Zusammenhang mit den beigefügten Zeichnungen. Merkmale, die im Wesentlichen oder funktionell gleich oder ähnlich sind, werden mit denselben Bezugszeichen versehen. Other objects and many of the attendant advantages of embodiments of the present invention will be readily appreciated and become better understood by reference to the following more particular description of embodiments taken in conjunction with the accompanying drawings. Features that are substantially or functionally the same or similar are given the same reference numerals.

1 zeigt ein HPLC-System gemäß einem exemplarischen Ausführungsbeispiel der Erfindung. 1 shows an HPLC system according to an exemplary embodiment of the invention.

2 zeigt ein Fluidversorgungssystem gemäß einem exemplarischen Ausführungsbeispiel der Erfindung. 2 shows a fluid supply system according to an exemplary embodiment of the invention.

3 zeigt ein zweidimensionales Probentrenngerät mit einem in einem ersten Schaltzustand befindlichen Injektorventil mit zwei Probenaufnahmevolumina, von denen jeweils eines zum zwischenzeitlichen Aufnehmen einer fluidischen Probe und das jeweils andere zum zwischenzeitlichen Aufnehmen eines Modifizierungssegments eingerichtet ist, wobei zuerst die fluidische Probe und nachfolgend das Modifizierungssegment in die nachgeschaltete Dimension injiziert wird und dabei eine zumindest teilweise Vermischung der beiden Fluide stromaufwärts einer Probentrennvorrichtung initiiert wird. 3 shows a two-dimensional sample separation device with an injector valve located in a first switching state with two sample volumes, one of which is arranged for temporarily receiving a fluidic sample and the other for temporarily receiving a Modifizierungssegments, first the fluidic sample and then the modifying segment in the downstream Dimension is injected while an at least partial mixing of the two fluids upstream of a sample separation device is initiated.

4 zeigt das zweidimensionale Probentrenngerät mit dem Injektorventil gemäß 3 in einem zweiten Schaltzustand. 4 shows the two-dimensional sample separator with the injector according to 3 in a second switching state.

5 zeigt einen Abschnitt eines Probentrenngeräts gemäß einem exemplarischen Ausführungsbeispiel, bei dem eine fluidische Probe und ein Probenverdünnungsabschnitt beide in ein Fluidleitungssystem des Injektors eingeschlossen werden. 5 FIG. 12 shows a portion of a sample separation apparatus according to an exemplary embodiment in which a fluidic sample and a sample dilution portion are both enclosed in a fluid conduit system of the injector.

6 zeigt ein Diagramm, das eine in Abhängigkeit von der Zeit veränderliche Lösungsmittelzusammensetzung gemäß einer Steuerlogik einer Steuereinrichtung einer Fluidversorgungsvorrichtung gemäß einem exemplarischen Ausführungsbeispiel der Erfindung veranschaulicht. 6 FIG. 12 is a diagram illustrating a time varying solvent composition according to control logic of a controller of a fluid supply device according to an exemplary embodiment of the invention. FIG.

7 zeigt ein zeitlich veränderliches Lösungsmittelzusammensetzungsprofil mit mehreren aufeinanderfolgenden Gradientenprofilen sowie ein zugehöriges Chromatogramm. 7 shows a time-varying solvent composition profile with several consecutive gradient profiles and an associated chromatogram.

8 zeigt eine zeitabhängige veränderliche Lösungsmittelzusammensetzung, wie sie gemäß einer Steuerlogik einer Steuereinrichtung einer Fluidversorgungsvorrichtung gemäß einem exemplarischen Ausführungsbeispiel der Erfindung vorgegeben wird. 8th shows a time-dependent variable solvent composition, as it is given according to a control logic of a control device of a fluid supply device according to an exemplary embodiment of the invention.

9 zeigt eine andere zeitabhängige veränderliche Lösungsmittelzusammensetzung, wie sie gemäß einer Steuerlogik einer Steuereinrichtung einer Fluidversorgungsvorrichtung gemäß einem anderen exemplarischen Ausführungsbeispiel der Erfindung vorgegeben wird. 9 shows another time-varying variable solvent composition as set in accordance with a control logic of a controller of a fluid supply device according to another exemplary embodiment of the invention.

Die Darstellung in der Zeichnung ist schematisch. The illustration in the drawing is schematic.

Bevor bezugnehmend auf die Figuren exemplarische Ausführungsbeispiele beschrieben werden, sollen einige grundlegende Überlegungen zusammengefasst werden, basierend auf denen exemplarische Ausführungsbeispiele der Erfindung abgeleitet worden sind.Before describing exemplary embodiments with reference to the figures, some basic considerations will be summarized based on which exemplary embodiments of the invention have been derived.

Gemäß einem exemplarischen Ausführungsbeispiel der Erfindung wird ein Matrixverdünnungsschema (wobei unter einer Matrix insbesondere ein Probenträger verstanden werden kann, in dem Probenbestandteile gelöst vorgelegt werden) durch Bilden einer Elutionsstärkeabsenkung in einer Lösungsmittelzusammensetzung während einem regulären Vorlaufzustand oder Nachlaufzustand (Pre-Run oder Post-Run) eines chromatographischen Probentrenngeräts bereitgestellt. Genauer gesagt wird ein zusätzliches Gradientenprogrammierschema zum Vorladen eines Probenaufnahmevolumens (zum Beispiel einer Sample Loop) mit einem Verdünnungsfluid bereitgestellt, das eine andere Lösungsmittelzusammensetzung hat als Lösungsmittel während eines Gradientenstartzustands.According to an exemplary embodiment of the invention, a matrix dilution scheme (wherein a matrix can be understood to mean in particular a sample carrier in which sample constituents are dissolved) is prepared by forming an elution strength reduction in a solvent composition during a regular pre-run or post-run state. a chromatographic sample separation device provided. More specifically, an additional gradient programming scheme is provided for pre-loading a sample collection volume (eg, a sample loop) with a dilution fluid that is another Solvent composition has as solvent during a gradient start state.

Um einen selektiven Verlust von sich absetzendem Probenmaterial oder dessen Anhaften an der Oberfläche eines Probenbehälters zu vermeiden, wird fluidische Probe häufig in Probenbehältern mit starken Lösungsmitteln (zum Beispiel hochkonzentriertes organisches Lösungsmittel wie z.B. Dimethylsulfoxid, DMSO) gelagert. Wenn orthogonale Probentrennstufen miteinander gekoppelt werden, wie in zweidimensionaler Trenntechnik (zum Beispiel zweidimensionaler Flüssigkeitschromatographie), kann es vorkommen, dass das Lösungsmittel aus der ersten Dimension, das für die zweite Dimension die Rolle der Matrix spielt, nicht mit der zweiten Dimension direkt kompatibel ist dadurch, dass es die Adsorption der gelösten Komponenten in der zweiten Dimension stark beeinflusst (zum Beispiel HILIC/Reversed Phase).  In order to avoid selective loss of settling sample material or its adherence to the surface of a sample container, fluidic sample is often stored in sample containers with strong solvents (for example, highly concentrated organic solvent such as dimethylsulfoxide, DMSO). If orthogonal sample separation steps are coupled together, as in two-dimensional separation techniques (for example, two-dimensional liquid chromatography), it may happen that the solvent from the first dimension, which plays the role of the matrix for the second dimension, is not directly compatible with the second dimension in that it strongly influences the adsorption of the dissolved components in the second dimension (for example HILIC / reversed phase).

Wenn die Matrix, in der die fluidische Probe angeliefert bzw. bereitgestellt wird, ein ausreichend starkes Lösungsmittel ist oder im Speziellen, wenn die Elutionsstärke der Matrix höher ist als jene der anfänglichen Zusammensetzung in dem Gradienten, kann es zu einer ausgeprägten Peakverbreiterung kommen, die auf das Verschmieren des initialen Injektionspfropfens entlang des Trennmediums über eine wesentliche Länge der Säule hinweg zurückzuführen ist; gelegentlich kann es sogar zu einem Aufspalten eines Injektionspfropfens, sogenannte Doppelpeaks, kommen. Wichtige Leistungsmerkmale wie Trenneffizienz, Peakkapazität und Auflösung können dadurch verschlechtert werden. If the matrix in which the fluidic sample is delivered is a sufficiently strong solvent or, in particular, if the elution strength of the matrix is higher than that of the initial composition in the gradient, pronounced peak broadening may occur smearing the initial injection plug along the separation medium over a substantial length of the column; occasionally it can even lead to a splitting of a Injektionspfropfens, so-called double peaks. Important performance features such as separation efficiency, peak capacity and resolution can be worsened.

Dieses Problem kann zwar durch die Verdünnung der fluidischen Probe gemeinsam mit der Matrix vor dem Beladen der fluidischen Probe auf einen Injektor adressiert werden. Allerdings kann dies zu partieller Adsorption oder Ablagerung der Probenkomponenten in dem Probenbehälter führen oder kann die Stabilität der Probe negativ beeinflussen. Ferner ist dies eine zusätzliche und häufig manuell durchzuführende Prozedur in der Probenpräparation. Although this problem can be addressed by diluting the fluidic sample together with the matrix prior to loading the fluidic sample onto an injector. However, this can lead to partial adsorption or deposition of the sample components in the sample container or can adversely affect the stability of the sample. Furthermore, this is an additional and often manually performed procedure in the sample preparation.

In zweidimensionaler Flüssigkeitschromatographie unter Anwendung des driftenden Gradientenmodus kann der Fußpunkt (Initialbedingung) des Elutionsgradienten der zweiten Dimension gemeinsam mit der Elutionsstärke der Matrix ansteigen, die von der ersten Dimension eluiert wird. Also kann, während ein erhöhter Bedarf an Verdünnung dessen besteht, was von einem Auslass der ersten Dimension erhalten wird, die Verdünnungskapazität der initialen Zusammensetzung in der zweiten Dimension reduziert sein.  In two-dimensional liquid chromatography using the drifting gradient mode, the base point (initial condition) of the second dimension elution gradient may increase along with the elution strength of the matrix eluted from the first dimension. Thus, while there is an increased need for dilution of what is obtained from an outlet of the first dimension, the dilution capacity of the initial composition in the second dimension may be reduced.

Indem gemäß einem exemplarischen Ausführungsbeispiel der Erfindung – insbesondere unter Verwendung derselben Hochdruckpumpe, die auch sonstige Abschnitte der mobilen Phase fördert – ein Modifizierungssegment in die mobile Phase eingefügt wird, wird durch Ausbilden einer zumindest teilweisen Vermischung zwischen dem Modifizierungssegment und der fluidischen Probe zwischen Injektor und Probentrenneinrichtung eine ausreichende Verdünnung der fluidischen Probe in dem ehemals starken Lösungsmittel hervorgerufen, so dass das Milieu der fluidischen Probe dann nicht mehr zu einer Selbstelution der fluidischen Probe von dem Trennmedium der Probentrenneinrichtung neigt. By inserting a modifying segment into the mobile phase, in particular using the same high pressure pump that also promotes other portions of the mobile phase, by forming at least partial mixing between the modifying segment and the fluidic sample between injector and sample separator caused sufficient dilution of the fluidic sample in the formerly strong solvent, so that the environment of the fluidic sample then no longer tends to self-elution of the fluidic sample from the separation medium of the sample separator.

Gemäß einem bevorzugten Ausführungsbeispiel kann die Elutionsstärkeabsenkung im Gradienten die sich auf den Abschnitt in dem Gradienten oder dem Zusammensetzungsprogramm bezieht, in einem Post-Run-Abschnitt einer vorangehenden Probentrennung angeordnet werden. Das Lösungsmittel der niedrigen bzw. niedrigeren Stärke (das heißt das schwächere Lösungsmittel) kann in ein Probenaufnahmevolumen (Sample Loop) oder ein Teil davon eingefüllt und mit Schalten eines Ventils dort eingesperrt werden, wobei zumindest teilweise dieses Probenaufnahmevolumen dann in einer nachfolgenden Trennung zum Aufnehmen der zu trennenden fluidischen Probe dienen kann. Auf diese Weise kann zunächst die Elutionsstärkeabsenkung im Gradienten bzw. das Modifizierungssegment in dem Probenaufnahmevolumen geparkt worden sein und nachfolgend durch eine koordinierte Ventilschaltung (zum Beispiel eines Autosamplerinjektionsventil) aus dem durchflossenen Teil des Flusspfads herausgenommen werden, um zumindest zum Teil nach Probenaufnahme wieder in den Probentrennpfad eingefügt zu werden. Dort kann das verbliebene Modifizierungssegment mit der fluidischen Probe in Kontakt geraten und somit eine Verdünnung der fluidischen Probe samt Matrix vor Erreichen der stationären Phase bzw. des Trennmaterials in der Probentrenneinrichtung bewerkstelligen.  According to a preferred embodiment, the elution severity reduction in the gradient relating to the portion in the gradient or the composition program may be arranged in a post-run portion of a preceding sample separation. The lower or lower strength solvent (ie, the weaker solvent) may be loaded into a sample loop or portion thereof and confined therewith by switching a valve, at least partially submitting that sample volume in a subsequent separation to receive the sample Serve to be separated fluidic sample. In this way, first the elution intensity reduction in the gradient or the modifying segment in the sample receiving volume may have been parked and subsequently taken out of the flow path through a coordinated valve circuit (for example an autosampler injection valve) to at least partially return to the sample separation path after sampling to be inserted. There, the remaining Modifizierungssegment can come into contact with the fluidic sample and thus accomplish a dilution of the fluidic sample including matrix before reaching the stationary phase or the separation material in the sample separation device.

All dies kann mit derselben Hochdruckpumpe erfolgen, die auch zum Fördern der übrigen Abschnitte der mobilen Phase verwendet wird. Somit ist eine weitere Pumpe zum separaten Bereitstellen von dem Probenverdünnungsabschnitt entbehrlich und gemäß einem exemplarischen Ausführungsbeispiel auch nicht vorhanden. All this can be done with the same high pressure pump that is also used to convey the remaining sections of the mobile phase. Thus, another pump is not necessary for separately providing the sample dilution section and, according to an exemplary embodiment, also absent.

Besonders bevorzugt enthält das Probenaufnahmevolumen (Sample Loop) einen Nadel-Sitz-Übergang derart, dass ein Teil des Probenaufnahmevolumens stromaufwärts des anderen Teils stromabwärts (zum Beispiel der Sitzkapillare) der Nadel angeordnet ist. Daher kann die fluidische Probe in natürlicher Weise zwischen den Mobilphasenabschnitten mit niedrigerer Elutionsstärke bzw. schwächerem Lösungsmittel eingeschlossen sein. Bei Bedarf kann hier auch ein Mischer oder eine Mischgeometrie eingebracht werden.More preferably, the sample loop volume includes a needle-seat transition such that a portion of the sample receiving volume is located upstream of the other portion downstream of the needle (eg, the seat capillary). Therefore, the fluidic sample may naturally be entrapped between the lower elution strength and lower solvent mobile phase portions. If necessary can Here also a mixer or a mixed geometry are introduced.

Andere Ausführungsbeispiele können zusätzliche Teilflusspfade enthalten, die mit Lösungsmittel niedriger Elutionsstärke gefüllt sein können, auf die beschriebene Weise. Diese zusätzlichen Flusspfade können parallel zu dem Probenpfad angeschlossen werden (wobei beide Pfade oder nur der Probenpfad durch ein Ventilschalten geschaltet werden kann/können, und zwar kombiniert oder unabhängig voneinander), so dass die Probe nicht oder nur seriell zwischen Zonen niedriger Elutionsstärke eingeschlossen wird, sondern auch durch einen parallelen Fluss auf ihrem Weg zu der Probentrenneinrichtung (zum Beispiel einer chromatographischen Säule) effizient verdünnt wird. Other embodiments may include additional partial flow paths that may be filled with low elution strength solvent in the manner described. These additional flow paths may be connected in parallel with the sample path (where both paths or only the sample path may be switched by valve switching, combined or independent) so that the sample is not or only serially confined between zones of low elution strength, but also efficiently diluted by a parallel flow on its way to the sample separator (eg, a chromatographic column).

1 zeigt den prinzipiellen Aufbau eines HPLC-Systems als Beispiel für ein Probentrenngerät 10 gemäß einem exemplarischen Ausführungsbeispiel der Erfindung, wie es zum Beispiel zur Flüssigkeitschromatographie verwendet werden kann. Ein Fluidpumpsystem bzw. eine Fluidfördereinrichtung 20, die mit Lösungsmitteln aus einer Zuführeinrichtung 25 versorgt wird, treibt eine mobile Phase durch eine Probentrenneinrichtung 30 (wie zum Beispiel eine chromatographische Säule), die eine stationäre Phase beinhaltet. Ein optionaler Entgaser 27 kann die Lösungsmittel entgasen, bevor diese der Fluidfördereinrichtung 20 zugeführt werden. Eine Probenaufgabeeinheit 40, die auch als Injektor bezeichnet werden kann, ist zwischen der Fluidfördereinrichtung 20 und der Probentrenneinrichtung 30 angeordnet, um eine Probenflüssigkeit in den fluidischen Trennpfad einzubringen. Hierfür kann ein Injektorventil 90 entsprechend geschaltet werden. Die stationäre Phase der Probentrenneinrichtung 30 ist dazu vorgesehen, Komponenten der Probe zu separieren. Ein Detektor 50, der eine Flusszelle aufweisen kann, detektiert separierte Komponenten der Probe, und ein Fraktionierungsgerät 60 kann dazu vorgesehen werden, separierte Komponenten der Probe in dafür vorgesehene Behälter auszugeben. Nicht mehr benötigte Flüssigkeiten können in einen Abflussbehälter bzw. in ein Waste (nicht gezeigt) ausgegeben werden. 1 shows the basic structure of an HPLC system as an example of a sample separator 10 according to an exemplary embodiment of the invention, as can be used for example for liquid chromatography. A fluid pumping system or a fluid delivery device 20 containing solvents from a feeder 25 supplied drives a mobile phase through a sample separator 30 (such as a chromatographic column) containing a stationary phase. An optional degasser 27 can degas the solvents before these the fluid conveyor 20 be supplied. A sample application unit 40 , which may also be referred to as an injector, is between the fluid delivery device 20 and the sample separator 30 arranged to introduce a sample liquid in the fluidic separation path. For this purpose, an injector valve 90 be switched accordingly. The stationary phase of the sample separator 30 is intended to separate components of the sample. A detector 50 which may comprise a flow cell, detects separated components of the sample, and a fractionating device 60 may be provided to dispense separated components of the sample in dedicated containers. Liquids no longer needed can be dispensed into a drain tank or into a waste (not shown).

Während ein Flüssigkeitspfad zwischen dem Fluidpumpsystem 20 und der Probentrenneinrichtung 30 typischerweise unter Hochdruck steht, wird die Probenflüssigkeit unter Normaldruck zunächst in einen vom Flüssigkeitspfad getrennten Bereich, eine so genannte Probenschleife (englisch: Sample Loop), der Probenaufgabeeinheit 40 bzw. des Injektors eingegeben, die dann wiederum die Probenflüssigkeit in den unter Hochdruck stehenden Flüssigkeitspfad einbringt. Während des Zuschaltens der zunächst unter Normaldruck stehenden Probenflüssigkeit in der Probenschleife in den unter Hochdruck stehenden Flüssigkeitspfad wird der Inhalt der Probenschleife auf den Systemdruck des als HPLC ausgebildeten Probentrenngeräts 10 gebracht. Eine Steuereinrichtung 70 steuert die einzelnen Komponenten 20, 25, 27, 30, 40, 50, 60 des Probentrenngeräts 10.While a fluid path between the fluid pumping system 20 and the sample separator 30 is typically under high pressure, the sample liquid under normal pressure is first in a separate area from the liquid path, a so-called sample loop (English: Sample Loop), the sample application unit 40 or the injector input, which then in turn introduces the sample liquid in the high-pressure liquid path. During the connection of the sample liquid, which is initially under normal pressure, in the sample loop into the high-pressure liquid path, the content of the sample loop becomes the system pressure of the sample separation device designed as HPLC 10 brought. A control device 70 controls the individual components 20 . 25 . 27 . 30 . 40 . 50 . 60 of the sample separator 10 ,

1 zeigt das Injektorventil 90 als Teil vom Injektor 40 im Flusspfad zwischen der als Hochdruckpumpe ausgebildeten Fluidfördereinrichtung 20 und der Probentrenneinrichtung 30. Mittels Schaltens des Injektorventils 90 kann fluidische Probe, die zunächst vom Injektor 40 in die Probenschleife überführt wurde (typischerweise maximal bis zur Hälfte des Schleifenvolumens), in den Flusspfad zwischen der Hochdruckpumpe 20 und der Probentrenneinrichtung 30 geschaltet werden. 1 shows the injector valve 90 as part of the injector 40 in the flow path between the formed as a high-pressure pump fluid delivery device 20 and the sample separator 30 , By switching the injector valve 90 can be fluidic sample, first from the injector 40 into the sample loop (typically up to half of the loop volume) into the flow path between the high pressure pump 20 and the sample separator 30 be switched.

In 1 ist zudem eine Verdünnungs-Zuführeinrichtung 25‘ gezeigt, mittels welcher – gesteuert durch die Steuereinrichtung 70 – nur während vorgebbaren Zeiträumen bereitgestellte und somit räumlich begrenzte Pakete schwachen Lösungsmittels mit geringer Elutionskraft in Form von unten näher beschriebenen Modifizierungssegmenten zugeführt werden können und mit der mittels des Injektors 40 in den Flusspfad eingebrachten fluidischen Probe (die in einem stärkeren Lösungsmittel gelöst geliefert sein kann) gemischt werden können. Die Steuereinrichtung 70 steuert die Zuführung der Modifizierungssegmente derart, dass die beschriebene Vermischung zwischen fluidischer Probe und Verdünnungsfluid stromaufwärts der oder spätestens am Einlass der Probentrenneinrichtung 30 hinreichend erfolgt ist, sodass die Matrix der fluidischen Probe noch vor der Trennprozedur an der Probentrenneinrichtung 30 verdünnt wird und Probe dadurch davor geschützt wird, durch eigenes starkes Lösungsmittel vom Trennmaterial der Probentrenneinrichtung 30 in unerwünschter und die Genauigkeit des Trennergebnisses reduzierender Weise desorbiert zu werden. Auch eine unerwünschte Adsorption kann dadurch vermieden werden. Dabei wird das von der Verdünnungs-Zuführeinrichtung 25‘ bereitgestellte Verdünnungsfluid ebenfalls von der Fluidfördereinrichtung 20 gefördert, ohne dass es hierfür dem Vorsehen einer separaten Pumpe bedarf. Das Verdünnungsfluid des Modifizierungssegments ist auf das stärkere Lösungsmittel, in dem die fluidische Probe enthalten ist, derart angepasst, dass eine Mischung des Verdünnungsfluids mit der fluidischen Probe und der Matrix (dem stärkeren Lösungsmittel) eine solch schwache Elutionskraft hat, dass die resultierende Mischung keine oder zumindest kaum eine Desorption der fluidischen Probe von der Probentrenneinrichtung 30 bewirkt und daher die Leistungsmerkmale des Probentrenngeräts 10 nicht signifikant nachteilig betroffen sind.In 1 is also a dilution feeder 25 ' shown by means of which - controlled by the control device 70 - Only provided for predetermined periods and thus spatially limited packets weak solvent can be supplied with low elution force in the form of Modifizierungssegmenten described in more detail below and with the means of the injector 40 in the flow path introduced fluidic sample (which may be supplied dissolved in a stronger solvent) can be mixed. The control device 70 controls the feeding of the modifying segments such that the described mixing between fluidic sample and dilution fluid upstream of or at the inlet of the sample separator 30 has been done sufficiently, so that the matrix of the fluidic sample before the separation procedure on the sample separator 30 is diluted and sample is protected by it, by its own strong solvent from the separation material of the sample separator 30 to be desorbed in unwanted and the accuracy of the separation result reducing manner. An undesirable adsorption can be avoided. In this case, that of the dilution feeder 25 ' provided dilution fluid also from the fluid conveyor 20 encouraged, without the need for the provision of a separate pump. The dilution fluid of the modification segment is adapted to the stronger solvent in which the fluidic sample is contained such that a mixture of the dilution fluid with the fluidic sample and the matrix (the stronger solvent) has such a weak elution force that the resulting mixture has no or at least hardly a desorption of the fluidic sample from the sample separator 30 causes and therefore the performance of the sample separator 10 are not significantly adversely affected.

Die Fluidfördereinrichtung 20, die Zuführeinrichtungen 25, 25‘ sowie die Steuereinrichtung 70 bilden ein Fluidversorgungssystem 150 gemäß einem exemplarischen Ausführungsbeispiel der Erfindung.The fluid delivery device 20 , the feeders 25 . 25 ' and the control device 70 form a fluid supply system 150 according to an exemplary embodiment of the invention.

2 zeigt ein Fluidversorgungssystem 150 zum Bereitstellen eines Fluids an einen Fluidabnehmer (im gezeigten Beispiel die Probentrenneinrichtung 30 bzw. der Detektor 50 gemäß 1) gemäß einem exemplarischen Ausführungsbeispiel der Erfindung. 2 shows a fluid supply system 150 for providing a fluid to a fluid collector (in the example shown, the sample separator 30 or the detector 50 according to 1 ) according to an exemplary embodiment of the invention.

Die Zuführeinrichtung 25 weist vier Zuführleitungen 104 bis 107 auf, von denen jede fluidisch mit einer jeweiligen von vier Fluidkomponentenquellen 100 bis 103 zum Bereitstellen einer jeweiligen fluidischen Komponente A bis D fluidisch gekoppelt ist. Ein Proportionierventil 108 ist zwischen den Zuführleitungen 104 bis 107 und einem Einlass 189 einer primären Kolbenpumpe 111 angeordnet. Das Proportionierventil 108 ist mittels der Steuereinrichtung 70 zum Modulieren der Zusammensetzung des Fluids aus Paketen der fluidischen Komponenten A bis D stromaufwärts der primären Kolbenpumpe 111 mittels sequenziellen Koppelns ausgewählter der Zuführleitungen 104 bis 107 mit der primären Kolbenpumpe 111 steuerbar. Dies bedeutet, dass die Steuereinrichtung 70 das Proportionierventil 108 (insbesondere gemäß einem Multiplexerschema) so ansteuert, dass nacheinander Sequenzen von Fluidpaketen einer oder einiger der Komponenten A, B, C und D durch eine Fluidleitung 109, durch ein Einlassventil 113 und durch den Einlass 189 der primären Kolbenpumpe 111 fließen.The feeder 25 has four supply lines 104 to 107 each of which fluidly communicates with a respective one of four fluid component sources 100 to 103 for providing a respective fluidic component A to D is fluidly coupled. A proportioning valve 108 is between the supply lines 104 to 107 and an inlet 189 a primary piston pump 111 arranged. The proportioning valve 108 is by means of the control device 70 for modulating the composition of the fluid from packets of the fluidic components A to D upstream of the primary piston pump 111 by sequentially coupling selected ones of the feed lines 104 to 107 with the primary piston pump 111 controllable. This means that the control device 70 the proportioning valve 108 (in particular according to a multiplexer scheme) so that successively sequences of fluid packets of one or some of the components A, B, C and D by a fluid line 109 , through an inlet valve 113 and through the inlet 189 the primary piston pump 111 flow.

Die primäre Kolbenpumpe 111 (siehe auch Bezugszeichen „I“), der mittels der Zuführeinrichtung 25 zu pumpendes Fluid mit zeitlich variierender Lösungsmittelzusammensetzung (zum Beispiel entsprechend eines Gradientenlaufs mit an geeigneten Positionen zwischengeordneten Modifizierungssegmenten) packetweise zuführbar ist, weist einen zum Fördern des Fluids in einem primären Kolbenraum 117 reziprozierfähig angeordneten primären Kolben 115 auf. Der primäre Kolben 115 sowie ein zwischen der primären Kolbenpumpe 111 und einer sekundären Kolbenpumpe 112 (siehe auch Bezugszeichen „II“) angeordnetes Fluidventil 114 (in einer fluidischen Verbindungsleitung 187) zum Ermöglichen oder Verunmöglichen einer Fluidkommunikation zwischen den beiden Kolbenpumpen 111, 112 sind ebenfalls mittels der Steuereinrichtung 70 steuerbar. Das Fluidventil 114 kann jedoch auch passiv ausgebildet sein. Der sekundären Kolbenpumpe 112 ist mittels der primären Kolbenpumpe 111 gepumptes Fluid zuführbar, indem die Flüssigkeit das Fluidventil 114 öffnet. Die sekundäre Kolbenpumpe 112 weist einen zum Fördern des Fluids in einem sekundären Kolbenraum 120 reziprozierfähig angeordneten sekundären Kolben 118 auf, der ebenfalls mittels der Steuereinrichtung 70 steuerbar ist und stellt an ihrem Auslass 180 Fluid bereit, das durch eine Fluidleitung 121 zum Injektor 40 und schließlich in die Probentrenneinrichtung 30 und dann in den Detektor 50 fließt.The primary piston pump 111 (see also reference numeral "I"), by means of the feeder 25 fluid to be pumped with a time-varying solvent composition (for example, according to a gradient run with modifier segments interposed at suitable positions), has one for conveying the fluid in a primary piston space 117 Reciprocatable arranged primary piston 115 on. The primary piston 115 and one between the primary piston pump 111 and a secondary piston pump 112 (see also reference numeral "II") arranged fluid valve 114 (in a fluidic connection line 187 ) for enabling or disabling fluid communication between the two piston pumps 111 . 112 are also by means of the control device 70 controllable. The fluid valve 114 However, it can also be passive. The secondary piston pump 112 is by means of the primary piston pump 111 pumped fluid supplied by the fluid the fluid valve 114 opens. The secondary piston pump 112 has one for conveying the fluid in a secondary piston chamber 120 Reciprocatable arranged secondary piston 118 on, also by means of the control device 70 is controllable and puts at its outlet 180 Fluid ready through a fluid line 121 to the injector 40 and finally into the sample separator 30 and then into the detector 50 flows.

Die Fluidversorgungsvorrichtung 150 dient somit zum Versorgen des Probentrenngeräts 10 (das unter anderem die Probentrenneinrichtung 30 und den Detektor 50 umfasst) zum Trennen einer fluidischen Probe mit mobiler Phase. Die fluidische Probe wird mittels Injektor 40 durch eine entsprechende Schaltung eines Injektorventils 90 in die mobile Phase eingebracht/eingeführt. Die Fluidversorgungsvorrichtung 150 enthält insbesondere die Fluidfördereinrichtung 20, die zum Fördern der mobilen Phase mit einstellbarer Zusammensetzung eingerichtet ist. Die Steuereinrichtung 70 ist eingerichtet, die Zusammensetzung der mobilen Phase in einem Modifizierungssegment (siehe Bezugszeichen 600 in 6) abschnittsweise so zu modifizieren, dass in dem Modifizierungssegment im Vergleich zu stärkerem Lösungsmittel in einem zeitlich begrenzten Intervall schwächeres Lösungsmittel zugeführt wird, mit dem die in dem stärkeren Lösungsmittel enthaltene fluidische Probe vor Erreichen der Probentrenneinrichtung 30 des Probentrenngeräts 10 verdünnt wird.The fluid supply device 150 thus serves to supply the sample separation device 10 (including the sample separator 30 and the detector 50 includes) for separating a fluid phase sample with mobile phase. The fluidic sample is injected by means of an injector 40 by a corresponding circuit of an injector valve 90 introduced / introduced into the mobile phase. The fluid supply device 150 contains in particular the fluid delivery device 20 , which is set up to promote the mobile phase with adjustable composition. The control device 70 is set up, the composition of the mobile phase in a modification segment (see reference numeral 600 in 6 ) in sections such that in the modifying segment weaker solvent is supplied in a time-limited interval as compared to stronger solvent, with which the fluidic sample contained in the stronger solvent before reaching the sample separator 30 of the sample separator 10 is diluted.

Die Fluidfördereinrichtung 20 enthält vier Lösungsmittelzuführkanäle 104 bis 107 zum Zuführen unterschiedlicher Lösungsmittel A bis D zum Mischen der mobilen Phase mit unterschiedlicher Zusammensetzung innerhalb und außerhalb des Modifizierungssegments. Mit anderen Worten können die vier Lösungsmittel A bis D zum einen zum Zusammenmischen einer Lösungsmittelzusammensetzung zum Beispiel für ein chromatographisches Gradiententrennprofil verwendet werden als auch zum Bereitstellen einer anderen Lösungsmittelzusammensetzung zum Probenverdünnen. 2 zeigt somit, dass sowohl die fluidische Probe in Abschnitten, die einem Gradientenlauf entsprechen, als auch in dem Modifizierungssegment aus den vier Lösungsmitteln A, B, C und D in passender Weise zusammengemischt werden kann. Dies erfolgt unter Steuerung durch die Steuereinrichtung 70. Alternativ ist es auch möglich, zum Beispiel die Lösungsmittelzuführkanäle 104 bis 106 zum Zuführen unterschiedlicher Lösungsmittel zum Mischen des Gradientenprofils der mobilen Phase außerhalb des Modifizierungssegments und den weiteren Lösungsmittelzuführkanal 107 nur zum Zuführen der mobilen Phase innerhalb des Modifizierungssegments anzusteuern.The fluid delivery device 20 contains four solvent supply channels 104 to 107 for supplying different solvents A to D for mixing the mobile phase of different composition inside and outside the modifying segment. In other words, the four solvents A to D may be used for mixing together a solvent composition, for example, for a chromatographic gradient separation profile, as well as for providing another solvent composition for sample dilution. 2 shows that both the fluidic sample in sections corresponding to a gradient run, as well as in the modification segment of the four solvents A, B, C and D can be mixed together in a suitable manner. This is done under control of the controller 70 , Alternatively, it is also possible, for example, the solvent feed channels 104 to 106 for supplying different solvents for mixing the gradient profile of the mobile phase outside the modifying segment and the further solvent feed channel 107 only to supply the mobile phase within the modification segment.

Die Steuereinrichtung 70 dient gemäß 2 zum Steuern des gesamten Probentrenngeräts 10, insbesondere der Kolbenpumpen 111, 112, des Proportionierventils 108, der Ventile 113, 114 und des Injektorventils 90.The control device 70 serves according to 2 for controlling the entire sample separation device 10 , in particular the piston pumps 111 . 112 , the proportioning valve 108 , the valves 113 . 114 and the injector valve 90 ,

Die Fluidfördereinrichtung 20 ist gemäß 2 als Hochdruckpumpe zum Fördern der mobilen Phase mit einem Druck von zum Beispiel 1200 bar, eingerichtet.The fluid delivery device 20 is according to 2 as a high pressure pump for conveying the mobile Phase with a pressure of, for example, 1200 bar, set up.

Die Fluidversorgungsvorrichtung 150 kann optional eine Mischeinrichtung 166 zum Mischen des Modifizierungssegments 600 mit der in dem stärkeren Lösungsmittel enthaltenen fluidischen Probe vor Erreichen der Probentrenneinrichtung 30 des Probentrenngeräts 10 aufweisen.The fluid supply device 150 Optionally, a mixing device 166 for mixing the modification segment 600 with the fluidic sample contained in the stronger solvent before reaching the sample separator 30 of the sample separator 10 exhibit.

3 zeigt ein zweidimensionales Probentrenngerät 10 (gebildet aus einer ersten Probentrennstufe 310 und einer zweiten Probentrennstufe 320) mit einem in einem ersten Schaltzustand befindlichen Injektorventil 98 mit zwei Fluidaufnahmevolumina 300, 302, von denen jeweils eines zum zwischenzeitlichen Aufnehmen einer fluidischen Probe und das jeweils andere zum zwischenzeitlichen Aufnehmen eines Modifizierungssegments eingerichtet ist. Es werden die fluidische Probe als auch das Modifizierungssegment in die sekundäre Dimension injiziert, wodurch ein Kontakt der beiden Fluide noch stromaufwärts einer Probentrenneinrichtung 30‘ der zweiten Trenndimension initiiert wird. 4 zeigt das zweidimensionale Probentrenngerät 10 gemäß 3, hier jedoch mit dem Injektorventil 98 in einem zweiten Schaltzustand. 3 shows a two-dimensional sample separation device 10 (formed from a first sample separation stage 310 and a second sample separation stage 320 ) with an injector valve located in a first switching state 98 with two fluid receiving volumes 300 . 302 of which one each is set up for intermittent picking up of a fluidic sample and the other one for interim picking up of a modification segment. The fluidic sample as well as the modifying segment are injected into the secondary dimension, whereby contact of the two fluids is still upstream of a sample separator 30 ' the second separation dimension is initiated. 4 shows the two-dimensional sample separation device 10 according to 3 , but here with the injector valve 98 in a second switching state.

Das Injektorventil 98 ist aus einem Stator mit acht Ports 330 und einem Rotor mit vier Nuten 332 gebildet, die in den verschiedenen Schaltzuständen des Injektorventils 98 unterschiedliche fluidische Kopplungen zwischen unterschiedlichen der Ports 330 bewerkstelligen.The injector valve 98 is from a stator with eight ports 330 and a rotor with four grooves 332 formed in the various switching states of the injector valve 98 different fluidic couplings between different ports 330 accomplish.

Die erste Probentrennstufe ist in 3 mit Bezugszeichen 310 gekennzeichnet, wohingegen die zweite Probentrennstufe in 3 mit Bezugszeichen 320 gekennzeichnet ist.The first sample separation stage is in 3 with reference number 310 whereas the second sample separation step in FIG 3 with reference number 320 is marked.

In der ersten Probentrennstufe 310 fördert Fluidfördereinrichtung 20 mobile Phase, in die an dem Injektor 40 fluidische Probe eingebracht wird. In Probentrenneinrichtung 30 wird die fluidische Probe in Fraktionen getrennt. Als die mobile Phase kann solche gefördert werden, die gemäß einem Gradientenprofil zum Trennen der fluidischen Probe eingesetzt wird. In dem in 3 gezeigten Schaltzustand wird ein Paket der fluidischen Probe nach der Trennung in der ersten Dimension in das Fluidaufnahmevolumen 300 eingefüllt. Gleichzeitig fördert eine Fluidfördereinrichtung 20‘ der zweiten Trenndimension in das zweite Fluidaufnahmevolumen 302 ein Fluid, sowohl als die mobile Phase der zweiten Dimension (Probentrenneinrichtung 30‘) als auch später als Probenverdünnungsabschnitt zum Verdünnen der in das Fluidaufnahmevolumen 300 eingefüllten fluidischen Probe dienen wird.In the first sample separation stage 310 promotes fluid delivery device 20 mobile phase, in the on the injector 40 fluidic sample is introduced. In sample separator 30 the fluidic sample is separated into fractions. As the mobile phase, those used according to a gradient profile for separating the fluidic sample can be delivered. In the in 3 The switching state shown is a packet of the fluidic sample after the separation in the first dimension in the fluid receiving volume 300 filled. At the same time promotes a fluid conveyor 20 ' the second separation dimension into the second fluid receiving volume 302 a fluid, as well as the mobile phase of the second dimension (sample separator 30 ' ) and later as a sample dilution section for diluting into the fluid receiving volume 300 serve filled fluidic sample will serve.

Nach dem Durchlaufen eines Gradienten einer Analyse in der zweiten chromatographischen Trenndimension (Schaltstellung 3) wird der Modifizierungssegment bis hinter Loop 302 gefahren and dann wird das Injektorventil 98 von dem Schaltzustand gemäß 3 in einen anderen Schaltzustand überführt. Dadurch wird die zuvor gemäß 3 in das erste Fluidaufnahmevolumen 300 eingefüllte fluidische Probe mittels Fluidfördereinrichtung 20‘ gefördert, mittels Probentrenneinrichtung 30‘ weiter aufgetrennt und das Trennergebnis in Detektor 50‘ detektiert. Durch eine geeignete Ventilstellung bzw. ein abermaliges Umschalten des Injektorventils 98 wird das in dem zweiten Fluidaufnahmevolumen 302 befindliche Modifizierungssegment, jetzt zusammen mit dem mittlerweile zum Beispiel hälftig eingeflossenen Probensegment in Richtung der Probentrenneinrichtung 30‘ gepumpt und vermischt sich, noch bevor die fluidische Probe den Einlass der Probentrenneinrichtung 30‘ erreicht, mit dem verbliebenen Anteil des Modifizierungssegments. Dadurch verringert sich die Elutionskraft des Lösungsmittels (Matrix), in dem die fluidische Probe enthalten ist, sodass es an der Probentrenneinrichtung 30‘ zu keiner oder verringerten unerwünschten Selbstablösung der fluidischen Probe kommt.After passing through a gradient of an analysis in the second chromatographic separation dimension (switching position 3 ), the modification segment is past Loop 302 and then the injector valve 98 from the switching state according to 3 transferred to another switching state. As a result, the previously according to 3 in the first fluid receiving volume 300 filled fluidic sample by means of fluid delivery 20 ' promoted, by means of sample separation device 30 ' further separated and the separation result in the detector 50 ' detected. By a suitable valve position or a repeated switching of the injector valve 98 this will be in the second fluid receiving volume 302 located modification segment, now together with the meanwhile, for example, half-flowed sample segment in the direction of the sample separation device 30 ' pumped and mixed, even before the fluidic sample enters the inlet of the sample separator 30 ' reached, with the remaining portion of the modification segment. This reduces the elution power of the solvent (matrix) in which the fluidic sample is contained so that it attaches to the sample separator 30 ' there is no or reduced undesired self-detachment of the fluidic sample.

Dies passiert im Wechsel mit den Fluidaufnahmevolumina 300, 302, und so kann die Prozedur wiederholt werden und ein nächstes Paket fluidischer Probe in Kombination mit einem nächsten Modifizierungssegment verwendet werden, um weiteres Probenmaterial der Trennung in der zweiten Dimension zuzuführen.This happens in alternation with the fluid receiving volumes 300 . 302 and so the procedure may be repeated and a next set of fluidic sample in combination with a next modification segment used to deliver additional sample material to the separation in the second dimension.

Das Injektorventil 90 gemäß 3 ist also mit zwei Fluidaufnahmevolumina 300, 302 verbunden, von denen jeweils eines zum Aufnehmen fluidischer Probe in das vorhergehende Modifizierungssegment und das andere zum simultanen Aufnehmen des demnächstigen Modifizierungssegments ausgebildet sind. Nach einem jeweiligen Schalten des Injektorventils 98 erfolgt die Verdünnung der fluidischen Probe durch Durchmischen mit dem restlich Verbliebenen des vorhergehenden Modifizierungssegments, welches beim vorhergehenden Schalten übertragen wurde.The injector valve 90 according to 3 So it is with two fluid receiving volumes 300 . 302 each of which is adapted to receive fluid sample into the previous modifying segment and the other to simultaneously receive the next modifying segment. After a respective switching of the injector valve 98 Dilution of the fluidic sample is accomplished by mixing with the remainder of the previous modification segment transferred during the previous shift.

5 zeigt ein Probentrenngerät 10, das eine Fluidversorgungsvorrichtung beinhaltet, mit einer Binärpumpe (d.h. einer Pumpe mit zwei Kanälen gebildet aus vier Kolbenpumpeneinheiten) als Beispiel für die Fluidfördereinrichtung 20, die eine variable Mischung aus zwei Lösungsmitteln zu einem Injektorventil 90 befördern kann. 5 shows a sample separator 10 comprising a fluid supply device with a binary pump (ie, a dual channel pump formed of four piston pump units) as an example of the fluid delivery device 20 containing a variable mixture of two solvents to an injector valve 90 can carry.

In einer bestimmten Schaltposition des Injektorventils 90 kann, wie in 5 gezeigt, eine direkte fluidische Verbindung von der Fluidfördereinrichtung 20 durch das Injektorventil 90 zu der Probentrenneinrichtung 30 erfolgen. Der Probenaufnahmepfad des Injektors 40 ist in diesem Zustand von der Fluidfördereinrichtung 20 fluidisch abgekoppelt. In dem in 5 gezeigten Zustand kann durch Herausfahren einer Nadel 504 aus einem Sitz 502 eine fluidische Probe aus einem Probenbehälter 506 durch die Nadel 504 in ein Probenaufnahmevolumen 500 aufgenommen werden. Dies erfolgt durch Zurückfahren eines Kolbens einer Dosierpumpe 508 des Injektors 40.In a certain switching position of the injector valve 90 can, as in 5 shown a direct fluidic connection of the fluid conveyor 20 through the injector valve 90 to the Sample separator 30 respectively. The sample receiving path of the injector 40 is in this state of the fluid conveyor 20 fluidly decoupled. In the in 5 shown state can by moving out a needle 504 from a seat 502 a fluidic sample from a sample container 506 through the needle 504 in a sample receiving volume 500 be recorded. This is done by moving back a piston of a metering pump 508 of the injector 40 ,

Der Injektor 40 dient zum Einbringen der fluidischen Probe in einen Flusspfad zwischen der Fluidfördereinrichtung 20 und der Probentrenneinrichtung 30 des Probentrenngeräts 10. Der Injektor 40 ist selektiv schaltbar in:

  • – einen Verdünnsegment-Aufnahmemodus (Ventilstellung wie im Probentrennmodus), in dem nachfolgend zur vorhergehenden Analyse das Verdünnsegment aufgenommen und mit dem Schalten des Injektorventils 90 in einen Probenaufnahmemodus eingeschlossen wurde;
  • – den Probenaufnahmemodus, in dem die fluidische Probe in das Probenaufnahmevolumen 500 des Injektors 40 aufgenommen wird;
  • – einen Probentrennmodus, in dem zuvor aufgenommene fluidische Probe zum Trennen in einen Flusspfad zwischen die Fluidfördereinrichtung 20 und die Probentrenneinrichtung 30 injiziert wird.
The injector 40 serves to introduce the fluidic sample into a flow path between the fluid delivery device 20 and the sample separator 30 of the sample separator 10 , The injector 40 is selectively switchable in:
  • A dilute segment acquisition mode (valve position as in sample separation mode) in which the dilution segment is added subsequent to the previous analysis and with switching of the injector valve 90 was included in a sample-taking mode;
  • - The sample-taking mode in which the fluidic sample in the sample receiving volume 500 of the injector 40 is recorded;
  • A sample separation mode in the previously received fluidic sample for separation into a flow path between the fluid delivery device 20 and the sample separator 30 is injected.

Eine in 5 nicht dargestellte Steuereinrichtung 70 ist eingerichtet, die Fluidfördereinrichtung 20 und den Injektor 40 derart zu synchronisieren, dass vor dem Schalten in den Probentrennmodus ein Modifizierungssegment oder zumindest ein verbliebener Teil des Modifizierungssegments gemeinsam mit der fluidischen Probe in dem Injektor 40 eingeschlossen ist. Anders ausgedrückt können dabei alle Fluidleitungen im Inneren des Injektors 40 mit fluidischer Probe und mobiler Phase in Form des Modifizierungssegments gefüllt sein. Weiter bevorzugt kann die fluidische Probe und deren stärkeres Lösungsmittel in einem beidseitig eingeschlossenen Zustand sowohl vorderseitig als auch rückseitig durch das schwächere Lösungsmittel des Modifizierungssegments eingeschlossen und somit beidseitig begrenzt sein. In diesem Betriebszustand entspricht eine Summe aus einem verbliebenen Fluidvolumen des Modifizierungssegments und einem Fluidvolumen der fluidischen Probe im Wesentlichen einem Innenvolumen des Injektors 40. Gemäß einem exemplarischen Ausführungsbeispiel wird also zunächst vor dem Aufziehen neuer fluidischer Probe ein Modifizierungssegment mittels der Fluidfördereinrichtung 20 durch das Injektorventil 90 in die Fluidleitungen des Injektors 40 befördert. Anschließend wird das Ventil 90 umgeschaltet, so dass das Modifizierungssegment aus dem durchflossenen Pfad herausgenommen und im Teilpfad 508-500-504-502 eingesperrt wird. Nachfolgend wird die Nadel 504 in der beschriebenen Weise aus dem Sitz 502 gefahren, um fluidische Probe unter Steuerung der Dosierpumpe 508 in das Probenaufnahmevolumen 500 vorzugsweise bis maximal zur Hälfte des Probenaufnahmevolumens 500 aufgenommen. In diesem Zustand ist dann das gesamte fluidische System in dem Injektor 40 mit fluidischer Probe und mit dem Modifizierungssegment gefüllt.An in 5 not shown control device 70 is set up, the fluid conveyor 20 and the injector 40 in such a way that prior to switching into the sample separation mode, a modification segment or at least a remaining part of the modification segment together with the fluidic sample in the injector 40 is included. In other words, all fluid lines can be inside the injector 40 be filled with fluidic sample and mobile phase in the form of the modification segment. More preferably, the fluidic sample and its stronger solvent can be enclosed in a bilaterally enclosed state both on the front side and on the back side by the weaker solvent of the modification segment and thus be bounded on both sides. In this operating state, a sum of a remaining fluid volume of the modification segment and a fluid volume of the fluidic sample substantially corresponds to an internal volume of the injector 40 , Thus, according to an exemplary embodiment, a modification segment is firstly prepared by means of the fluid delivery device before the new fluidic sample is applied 20 through the injector valve 90 into the fluid lines of the injector 40 promoted. Subsequently, the valve 90 switched so that the modification segment removed from the traversed path and in the partial path 508 - 500 - 504 - 502 is locked up. Below is the needle 504 out of the seat in the manner described 502 driven to fluidic sample under control of the dosing pump 508 in the sample receiving volume 500 preferably up to a maximum of half of the sample receiving volume 500 added. In this state, then the entire fluidic system in the injector 40 filled with fluidic sample and with the modification segment.

Nach Umschalten des Injektorventils 90 wird bildlich die fluidische Probe von dem Probenaufnahmevolumen 500 in Richtung der Probentrenneinrichtung 30 befördert und auf diesem Weg mit dem Fluid des Probenverdünnungsabschnitts aus den fluidischen Kanälen, sowohl vor als auch hinter sich, des Injektors 40 verdünnt. Dadurch kann einerseits ermöglicht werden, dass die fluidische Probe in dem Probenbehälter 506 in starkem Lösungsmittel gelagert werden kann und somit ein Verlorengehen von wertvollem Probenmaterial bzw. eine Veränderung der Probenkonzentration durch Präzipitation vermieden werden kann. Gleichzeitig kann sichergestellt werden, dass andererseits durch die rechtzeitige Verdünnung der fluidischen Probe mit schwachem Lösungsmittel stromaufwärts der Probentrenneinrichtung 30 die fluidische Probe mit schwachem Lösungsmittel so stark verdünnt wird, dass keine unerwünschten Adsorptions- bzw. Desorptionseffekte an der Probentrenneinrichtung 30, verursacht durch das Lösungsmittel, in dem die fluidische Probe ursprünglich befindlich ist, zu befürchten sind. After switching the injector valve 90 Fig. 4 depicts the fluidic sample from the sample receiving volume 500 in the direction of the sample separator 30 transported and in this way with the fluid of the Probenverdünnungsabschnitts from the fluidic channels, both before and behind, the injector 40 diluted. As a result, on the one hand, it is possible to enable the fluidic sample in the sample container 506 can be stored in strong solvent and thus a loss of valuable sample material or a change in the sample concentration can be avoided by precipitation. At the same time it can be ensured that on the other hand, by the timely dilution of the fluid sample with weak solvent upstream of the sample separator 30 the fluidic sample is so diluted with weak solvent that no undesirable adsorption or desorption effects on the sample separator 30 , caused by the solvent in which the fluidic sample is originally located, are to be feared.

6 zeigt ein Diagramm 610 mit einer Abszisse 612, entlang derer die Zeit aufgetragen ist. Entlang einer Ordinate 614 ist eine Lösungsmittelzusammensetzung in %B aufgetragen. Dabei bezeichnet %B den Prozentsatz eines stärkeren Lösungsmittels B, das gemeinsam mit einem schwächeren Lösungsmittel A zum Zusammensetzen von mobiler Phase eingesetzt wird. Anders ausgedrückt reflektiert der Wert an der Ordinate 614 die Elutionsstärke der Lösungsmittelzusammensetzung aus A und B und somit ein Maß für die Elutionskraft dieser zum jeweiligen Zeitpunkt geförderten Lösungsmittelzusammensetzung. 6 shows a diagram 610 with an abscissa 612 along which time is plotted. Along an ordinate 614 a solvent composition in% B is applied. Here,% B denotes the percentage of a stronger solvent B used together with a weaker solvent A for assembling mobile phase. In other words, the value reflects on the ordinate 614 the elution strength of the solvent composition of A and B, and thus a measure of the elution force of this at the time promoted solvent composition.

Die Fluidfördereinrichtung 20 einer Fluidversorgungvorrichtung 150 gemäß einem exemplarischen Ausführungsbeispiel der Erfindung ist insbesondere eingerichtet, eine zeitlich variable Zusammensetzung der mobilen Phase für das Trennen der fluidischen Probe in Form eines Gradientenprofils (siehe Bezugszeichen 602 in 6) bereitzustellen. Dabei ist die Fluidfördereinrichtung 20 insbesondere auch eingerichtet, ein Modifizierungssegment 600 zum Verdünnen fluidischer Probe vor dem Erreichen einer Probentrenneinrichtung 30 außerhalb des Gradientenverlaufs zum Trennens der fluidischen Probe anzuordnen. Das Trennen erfolgt während des Durchlaufens des Gradientenprofils 602, wohingegen das Verdünnen durch das Modifizierungssegment 600 bewirkt wird, welches in Vorbereitung der folgenden Analyse in dem Probenaufnahmevolumen 500 befindlich ist. 6 zeigt, dass nach einem Gradientenprofil 602 ein Post-Run-Abschnitt durchfahren wird, in dem die Lösungsmittelzusammensetzung zurückgefahren wird und eigentlich konstant ist. Gemäß dem beschriebenen exemplarischen Ausführungsbeispiel wird in den Post-Run-Abschnitt jedoch das Modifizierungssegment 600 als zeitweise Absenkung der Lösungsmittelstärke eingeschoben, wobei die darin enthaltene besonders schwache Lösungsmittelzusammensetzung vor einem in 6 nicht mehr gezeigten nachfolgenden Gradientenlauf mit der fluidischen Probe anschließend zumindest zur teilweisen Vermischung gebracht wird. Dadurch wird die fluidische Probe so stark verdünnt, dass unter dem Einfluss des Lösungsmittels (eigene Matrix) an der Probentrenneinrichtung 30 keine unerwünschten Effekte auftreten können. The fluid delivery device 20 a fluid supply device 150 According to an exemplary embodiment of the invention, in particular, a time-variable composition of the mobile phase for the separation of the fluidic sample in the form of a gradient profile is set up (see reference numeral 602 in 6 ). In this case, the fluid delivery device 20 in particular also set up, a modification segment 600 for diluting fluidic sample prior to reaching a sample separator 30 outside the gradient curve for separating the fluidic sample. The separation occurs during the passage of the gradient profile 602 whereas dilution by the modification segment 600 which is in preparation for the following analysis in the sample receiving volume 500 is located. 6 shows that after a gradient profile 602 go through a post-run section, in which the solvent composition is reduced and actually constant. However, according to the described exemplary embodiment, the post-run section becomes the modification segment 600 as a temporary lowering of the solvent strength, wherein the particularly weak solvent composition contained therein before a in 6 Subsequent gradient run with the fluidic sample, which is no longer shown, is subsequently brought at least for partial mixing. As a result, the fluidic sample is diluted so much that under the influence of the solvent (own matrix) on the sample separator 30 no unwanted effects can occur.

Gemäß 6 bleibt über das gesamte Modifizierungssegment 600 hinweg, d.h. zwischen einem Anfangspunkt 604 und einem Endpunkt 606 des Modifizierungssegments 600, die Lösungsmittelzusammensetzung konstant unterhalb der Gradienten-Startbedingung (siehe Detail 620). Mitunter soll die Gradienten-Startbedingung nicht tiefer programmiert werden, weil ansonsten beim Konditionieren der Trennsäule das Packmaterial kollabieren könnte oder es zu anderen unerwünschten Effekten kommen könnte. In dem hier beschriebenen Fall aber wird Modifizierungssegment 600 ja in dem Probenaufnahmevolumen 500 gefangen und nur nach Vermischen mit der Probenmatrix auf die Säule als Probentrenneinrichtung 30 treffen. Es können also zeitweise auch tiefere Bedingungen dosiert werden. Am Anfangspunkt 604 des Modifizierungssegments kommt es gemäß dem hier beschriebenen Ausführungsbeispiel zu einem steilen Abfall der Elutionskraft der mobilen Phase und am Endpunkt 606 kommt es zu einem steilen Anstieg der Elutionskraft. Der Wert der Elutionskraft der mobilen Phase unmittelbar vor dem Anfangspunkt 604 und unmittelbar nach dem Endpunkt ist vorzugsweise gleich. Alternativ ist es jedoch auch möglich, dass sich auch während des Modifizierungssegments 600 die Lösungsmittelzusammensetzung ändert.According to 6 remains over the entire modification segment 600 away, ie between a starting point 604 and an endpoint 606 of the modification segment 600 , the solvent composition is constant below the gradient start condition (see detail 620 ). Occasionally, the gradient start condition should not be programmed lower because otherwise the packaging material could collapse during conditioning of the separation column or other undesirable effects could occur. In the case described here, however, becomes modification segment 600 yes in the sample receiving volume 500 and only after mixing with the sample matrix on the column as a sample separator 30 to meet. So it can be dosed at times even lower conditions. At the starting point 604 of the modification segment, according to the embodiment described here, there is a sharp drop in the elution force of the mobile phase and at the end point 606 there is a steep increase in the elution force. The value of the elution force of the mobile phase immediately before the starting point 604 and immediately after the end point is preferably the same. Alternatively, however, it is also possible that also during the modification segment 600 the solvent composition changes.

In 7 ist ein Diagramm 700 gezeigt, das eine Abszisse 702 aufweist, entlang derer die Zeit aufgetragen ist. Entlang einer Ordinate 704 sind diverse Größen aufgetragen: Insbesondere zeigt 7 einen Gradientenverlauf 706 einer ersten Trenndimension sowie einen zugehörigen, sich mehrfach wiederholenden Gradientenlauf 708 (auch als „drifting gradient“ bezeichnet, mit dem bestimmte benutzer- oder anwendungsdefinierte Trennanalysen durchgeführt werden können) einer zweiten Trenndimension eines zweidimensionalen Probentrenngeräts. Ein entsprechendes Chromatogramm ist mit Bezugszeichen 710 dargestellt.In 7 is a diagram 700 shown that an abscissa 702 along which the time is plotted. Along an ordinate 704 are various sizes applied: In particular shows 7 a gradient course 706 a first separation dimension and an associated, multiple repetitive gradient gradient 708 (also referred to as "drifting gradient", with which certain user or application-defined separation analyzes can be performed) of a second separation dimension of a two-dimensional sample separation device. A corresponding chromatogram is denoted by reference numerals 710 shown.

8 zeigt ein Diagramm 800, dessen Abszisse 612 und Ordinate 614 jenen von 6 zum Teil entsprechen. 8 zeigt, dass mehrere Gradientenprofile 602 jeweils von einem Modifizierungssegment 600 intermittiert, getrennt oder durchzogen sind. 8 zeigt ferner, dass sich die Tiefe der Elutionsstärkeabsenkungen oder Modifizierungssegmente 600 zeitlich nicht verändert, wohingegen die Maxima und Minima der Gradientenprofile 602 sukzessive ansteigen. Dies kann die Auflösung und/oder Genauigkeit der Trennergebnisse verbessern. Die Steuereinrichtung 70 kann demzufolge eingerichtet sein, die Zusammensetzung der mobilen Phase alternierend durch Gradientenabschnitte bzw. Gradientenprofile 602 zum Trennen der fluidischen Probe und durch Modifizierungssegmente 600 zum Verdünnen einer jeweiligen fluidischen Probe ausgebildet einzustellen, die als Einbuchtungen konstanter Tiefe realisiert werden können. 8th shows a diagram 800 whose abscissa 612 and ordinates 614 those of 6 partly correspond. 8th shows that several gradient profiles 602 each from a modification segment 600 intermittent, separated or crossed. 8th further indicates that the depth of elution strength subsidence or modification segments 600 temporally unchanged, whereas the maxima and minima of the gradient profiles 602 gradually increase. This can improve the resolution and / or accuracy of the separation results. The control device 70 can therefore be set up, the composition of the mobile phase alternately by gradient sections or gradient profiles 602 for separating the fluidic sample and by modifying segments 600 set for diluting a respective fluidic sample, which can be realized as indentations of constant depth.

9 zeigt eine ähnliche Darstellung wie 8 mit dem Unterschied, dass sich nun auch die Eluentenstärke in den Modifizierungssegmenten 600 mit Fortschreiten der Gradientenprofile 602 ändern. Anders ausgedrückt kann die Steuereinrichtung 70 ausgebildet sein, aufeinanderfolgenden Gradientenprofilen 602 und/oder aufeinanderfolgenden Modifizierungssegmenten 600 unterschiedlich starke Maxima bzw. unterschiedlich starke Minima aufzuprägen. Es kann zum Einfluss des Gradienten der ersten Trenndimension auf das Erfordernis von sogenanntem „gradient dipping“ in der zweiten Dimension kommen. In dem Maße, in dem die von der Probentrenneinrichtung der ersten Trenndimension eluierte Matrix stärker wird (aufgrund des Anstiegs des Gradienten der ersten Dimension), kann eine intensivere Verdünnung stromaufwärts der Probentrenneinrichtung der zweiten Dimension vorteilhaft werden. Allerdings, je nach Beschaffenheit und den Trennmechanismen der beiden Trennstufen, kann auch das Gegenteil der Fall sein. 9 shows a similar representation as 8th with the difference that now also the eluent strength in the modification segments 600 with progression of the gradient profiles 602 to change. In other words, the control device 70 be formed, successive gradient profiles 602 and / or successive modification segments 600 impose different strong maxima or different strong minima. It may come to the influence of the gradient of the first separation dimension on the requirement of so-called "gradient dipping" in the second dimension. As the matrix eluted from the sample separator of the first separation dimension becomes stronger (due to the gradient of the first dimension), more intense dilution upstream of the second dimension sample separator may become advantageous. However, depending on the nature and the separation mechanisms of the two separation stages, the opposite can also be the case.

Es sollte angemerkt werden, dass der Begriff „aufweisen“ nicht andere Elemente ausschließt und dass das „ein“ nicht eine Mehrzahl ausschließt. Auch können Elemente, die in Zusammenhang mit unterschiedlichen Ausführungsbeispielen beschrieben sind, kombiniert werden. Es sollte auch angemerkt werden, dass Bezugszeichen in den Ansprüchen nicht als den Schutzbereich der Ansprüche beschränkend ausgelegt werden sollen.It should be noted that the term "comprising" does not exclude other elements and that the "on" does not exclude a plurality. Also, elements described in connection with different embodiments may be combined. It should also be noted that reference signs in the claims should not be construed as limiting the scope of the claims.

ZITATE ENTHALTEN IN DER BESCHREIBUNG QUOTES INCLUDE IN THE DESCRIPTION

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Zitierte PatentliteraturCited patent literature

  • EP 0309596 B1 [0002] EP 0309596 B1 [0002]

Claims (20)

Fluidversorgungsvorrichtung (150) zum Versorgen eines Probentrenngeräts (10) zum Trennen einer in einem ersten Lösungsmittel enthaltenen fluidischen Probe mit mobiler Phase, in welche die fluidische Probe zu injizieren ist, wobei die Fluidversorgungsvorrichtung (150) aufweist: eine Fluidfördereinrichtung (20), die zum Fördern der mobilen Phase mit einstellbarer Zusammensetzung eingerichtet ist; eine Steuereinrichtung (70), die eingerichtet ist, die Zusammensetzung der mobilen Phase in einem Modifizierungssegment (600) abschnittsweise so zu modifizieren, dass in dem Modifizierungssegment (600) ein im Vergleich zu dem ersten Lösungsmittel anderes, zweites Lösungsmittel zugeführt wird, mit dem die in dem ersten Lösungsmittel enthaltene fluidische Probe, insbesondere vor Erreichen einer Probentrenneinrichtung (30) des Probentrenngeräts (10), modifiziert wird.Fluid supply device ( 150 ) for supplying a sample separating device ( 10 ) for separating a mobile phase fluid sample contained in a first solvent into which the fluidic sample is to be injected, the fluid supply device ( 150 ) comprises: a fluid delivery device ( 20 ) set up to promote the mobile phase with adjustable composition; a control device ( 70 ), which is set up, the composition of the mobile phase in a modification segment ( 600 ) in sections such that in the modification segment ( 600 ) is supplied to a second solvent, in comparison with the first solvent, with which the fluid sample contained in the first solvent, in particular before reaching a sample separator ( 30 ) of the sample separation device ( 10 ), is modified. Fluidversorgungsvorrichtung (150) gemäß Anspruch 1, wobei das erste Lösungsmittel ein stärkeres Lösungsmittel ist als das im Vergleich zu dem ersten Lösungsmittel schwächere zweite Lösungsmittel.Fluid supply device ( 150 ) according to claim 1, wherein the first solvent is a stronger solvent than the second solvent weaker compared to the first solvent. Fluidversorgungsvorrichtung (150) gemäß Anspruch 1 oder 2, wobei die Fluidfördereinrichtung (20) eingerichtet ist, eine zeitlich variable Zusammensetzung der mobilen Phase für das Trennen der fluidischen Probe bereitzustellen, insbesondere ein Gradientenprofil (602).Fluid supply device ( 150 ) according to claim 1 or 2, wherein the fluid delivery device ( 20 ) is arranged to provide a time-variable composition of the mobile phase for the separation of the fluidic sample, in particular a gradient profile ( 602 ). Fluidversorgungsvorrichtung (150) gemäß Anspruch 3, wobei die Fluidfördereinrichtung (20) eingerichtet ist, das Modifizierungssegment (600) in einem Mobilphasenprofil in Bezug auf einen Flussverlauf außerhalb des Trennens der fluidischen Probe anzuordnen, insbesondere nach einem erfolgten Trennen von fluidischer Probe.Fluid supply device ( 150 ) according to claim 3, wherein the fluid conveying device ( 20 ), the modification segment ( 600 ) in a mobile phase profile with respect to a flow path outside the separation of the fluidic sample, in particular after a successful separation of fluidic sample. Fluidversorgungsvorrichtung (150) gemäß Anspruch 4, wobei die Fluidfördereinrichtung (20) eingerichtet ist, über das gesamte Gradientenprofil (602) hinweg die mobile Phase mit einem stärkeren Lösungsmittel bereitzustellen als während des gesamten Modifizierungssegments (600). Fluid supply device ( 150 ) according to claim 4, wherein the fluid conveying device ( 20 ) over the entire gradient profile ( 602 ) to provide the mobile phase with a stronger solvent than during the entire modifying segment ( 600 ). Fluidversorgungsvorrichtung (150) gemäß einem der Ansprüche 1 bis 5, wobei das Modifizierungssegment (600) als zeitlich und/oder räumlich begrenzte Elutionsstärkeabsenkung in einem Lösungsmittelzusammensetzungsprofil ausgebildet ist.Fluid supply device ( 150 ) according to any one of claims 1 to 5, wherein the modification segment ( 600 ) is designed as temporally and / or spatially limited Elutionsstärkeabsenkung in a solvent composition profile. Fluidversorgungsvorrichtung (150) gemäß einem der Ansprüche 1 bis 6, wobei die Fluidfördereinrichtung (20) mindestens zwei Lösungsmittelzuführkanäle (104 bis 107) zum Zuführen unterschiedlicher Lösungsmittel (A bis D) zum Mischen der mobilen Phase mit unterschiedlicher Zusammensetzung innerhalb und außerhalb des Modifizierungssegments (600) aufweist.Fluid supply device ( 150 ) according to one of claims 1 to 6, wherein the fluid delivery device ( 20 ) at least two solvent feed channels ( 104 to 107 for supplying different solvents (A to D) for mixing the mobile phase of different composition inside and outside the modification segment ( 600 ) having. Fluidversorgungsvorrichtung (150) gemäß einem der Ansprüche 1 bis 6, wobei die Fluidfördereinrichtung (20) mindestens zwei Lösungsmittelzuführkanäle (104 bis 106) zum Zuführen unterschiedlicher Lösungsmittel zum Mischen der mobilen Phase außerhalb des Modifizierungssegments (600) und mindestens einen weiteren separaten Lösungsmittelzuführkanal (107) zum Zuführen der mobilen Phase innerhalb des Modifizierungssegments (600) aufweist.Fluid supply device ( 150 ) according to one of claims 1 to 6, wherein the fluid delivery device ( 20 ) at least two solvent feed channels ( 104 to 106 ) for supplying different solvents for mixing the mobile phase outside the modification segment ( 600 ) and at least one further separate solvent supply channel ( 107 ) for delivering the mobile phase within the modification segment ( 600 ) having. Fluidversorgungsvorrichtung (150) gemäß einem der Ansprüche 1 bis 8, wobei die Steuereinrichtung (70) aus einer Gruppe ausgewählt ist, die besteht aus: einer der Fluidfördereinrichtung (20) zugeordneten und die Fluidfördereinrichtung (20) steuernden Steuereinrichtung (70); einer einem Injektor (40) des Probentrenngeräts (10) zum Injizieren der fluidischen Probe in einen Flusspfad zwischen Fluidfördereinrichtung (20) und Probentrenneinrichtung (30) des Probentrenngeräts (10) zugeordneten und den Injektor (40) steuernden Steuereinrichtung (70); und einer zum Steuern des gesamten Probentrenngeräts (10) ausgebildeten Steuereinrichtung (70).Fluid supply device ( 150 ) according to one of claims 1 to 8, wherein the control device ( 70 ) is selected from a group consisting of: one of the fluid delivery devices ( 20 ) and the fluid delivery device ( 20 ) controlling control device ( 70 ); an injector ( 40 ) of the sample separation device ( 10 ) for injecting the fluidic sample into a flow path between the fluid delivery device ( 20 ) and sample separation device ( 30 ) of the sample separation device ( 10 ) and the injector ( 40 ) controlling control device ( 70 ); and one for controlling the entire sample separation device ( 10 ) trained control device ( 70 ). Fluidversorgungsvorrichtung (150) gemäß einem der Ansprüche 1 bis 9, ferner aufweisend einen Injektor (40) zum Einführen oder Einbringen der fluidischen Probe in einen Flusspfad zwischen der Fluidfördereinrichtung (20) und der Probentrenneinrichtung (30) des Probentrenngeräts (10), wobei der Injektor (40) selektiv schaltbar ist in: einen Vorbereitungsmodus, in dem das Modifizierungssegment (600) in einem Innenvolumen des Injektors (40) eingeschlossen wird; einen Probenaufnahmemodus, in dem die fluidische Probe in ein Probenaufnahmevolumen (500) des Injektors (40) aufgenommen wird; einen Probentrennmodus, in dem zuvor aufgenommene fluidische Probe zum Trennen in einen Flusspfad zwischen die Fluidfördereinrichtung (20) und die Probentrenneinrichtung (30) injiziert wird; wobei die Steuereinrichtung (70) eingerichtet ist, die Fluidfördereinrichtung (20) und/oder den Injektor (40) derart zu steuern, insbesondere zu synchronisieren, dass vor dem Schalten in den Probentrennmodus das Modifizierungssegment (600) in dem Injektor (40) eingeschlossen ist, insbesondere so, dass die fluidische Probe mit dem Modifizierungssegment (600) oder zumindest mit Teilen davon gemeinsam eingeschlossen ist.Fluid supply device ( 150 ) according to one of claims 1 to 9, further comprising an injector ( 40 ) for introducing or introducing the fluidic sample into a flow path between the fluid delivery device ( 20 ) and the sample separation device ( 30 ) of the sample separation device ( 10 ), the injector ( 40 ) is selectively switchable into: a preparation mode in which the modification segment ( 600 ) in an internal volume of the injector ( 40 ) is included; a sample taking mode in which the fluidic sample is placed in a sample receiving volume ( 500 ) of the injector ( 40 ) is recorded; a sample separation mode in the previously received fluidic sample for separation into a flow path between the fluid delivery device (10); 20 ) and the sample separation device ( 30 ) is injected; the control device ( 70 ), the fluid delivery device ( 20 ) and / or the injector ( 40 ), in particular to synchronize, that prior to switching to the sample separation mode the modification segment ( 600 ) in the injector ( 40 ), in particular so that the fluidic sample with the modification segment ( 600 ) or at least part of it together. Fluidversorgungsvorrichtung (150) gemäß Anspruch 10, wobei eine Summe aus einem Fluidvolumen des Modifizierungssegments (600) und einem Fluidvolumen der fluidischen Probe im Wesentlichen gleich dem Innenvolumen des Injektors (40) ist.Fluid supply device ( 150 ) according to claim 10, wherein a sum of a fluid volume of the modification segment ( 600 ) and one Fluid volume of the fluidic sample substantially equal to the internal volume of the injector ( 40 ). Fluidversorgungsvorrichtung (150) gemäß einem der Ansprüche 1 bis 11, wobei die Steuereinrichtung (70) eingerichtet ist, die Zusammensetzung der mobilen Phase alternierend durch Gradientenabschnitte (602) zum Trennen der fluidischen Probe und durch Modifizierungssegmente (600) zum Verdünnen einer jeweiligen fluidischen Probe einzustellen.Fluid supply device ( 150 ) according to one of claims 1 to 11, wherein the control device ( 70 ), the composition of the mobile phase is alternated by gradient sections ( 602 ) for separating the fluidic sample and by modifying segments ( 600 ) for diluting a respective fluidic sample. Fluidversorgungsvorrichtung (150) gemäß Anspruch 12, wobei aufeinanderfolgende Gradientenabschnitte (602) und/oder aufeinanderfolgende Modifizierungssegmente (600) unterschiedlich starke Extremwerte, insbesondere unterschiedlich starke Maxima und/oder unterschiedlich starke Minima, in der Zusammensetzung der mobilen Phase aufweisen. Fluid supply device ( 150 ) according to claim 12, wherein successive gradient sections ( 602 ) and / or successive modification segments ( 600 ) have different strong extreme values, in particular different maximums and / or different minimums, in the composition of the mobile phase. Fluidversorgungsvorrichtung (150) gemäß einem der Ansprüche 1 bis 13, wobei die Steuereinrichtung (70) eingerichtet ist, die Zusammensetzung der mobilen Phase zumindest in einem Teilbereich außerhalb des Modifizierungssegments (600), insbesondere beidseitig angrenzend an das Modifizierungssegment (600), so einzustellen, dass zumindest in dem Teilbereich die mobile Phase aus einem Lösungsmittel gebildet ist, das anders, insbesondere stärker, ist als das Lösungsmittel in dem Modifizierungssegment (600).Fluid supply device ( 150 ) according to one of claims 1 to 13, wherein the control device ( 70 ), the composition of the mobile phase at least in a partial area outside the modification segment ( 600 ), in particular on both sides adjacent to the modification segment ( 600 ), so that, at least in the partial region, the mobile phase is formed from a solvent which is different, in particular stronger, than the solvent in the modification segment (US Pat. 600 ). Fluidversorgungsvorrichtung (150) gemäß Anspruch 14, wobei das Lösungsmittel zumindest in dem Teilbereich schwächer ist als das Lösungsmittel, in dem die fluidische Probe vor dem Modifizieren enthalten ist.Fluid supply device ( 150 ) according to claim 14, wherein the solvent is at least in the partial area weaker than the solvent in which the fluidic sample is contained before the modification. Fluidversorgungsvorrichtung (150) gemäß einem der Ansprüche 1 bis 15, aufweisend zumindest eines der folgenden Merkmale: wobei das Modifizierungssegment (600) derart ausgebildet ist, dass bei Modifizierung der fluidischen Probe mit dem Modifizierungssegment (600) ein relatives Elutionsvermögen verändert wird; wobei das Modifizierungssegment (600) derart ausgebildet ist, dass bei Modifizierung der fluidischen Probe mit dem Modifizierungssegment (600) eine Affinität der fluidischen Probe zu einer stationären Phase einer Probentrenneinrichtung (30) modifiziert, insbesondere erhöht, wird; wobei das Modifizierungssegment (600) derart ausgebildet ist, dass Komponenten der fluidischen Probe zur besseren Detektierbarkeit modifiziert werden; wobei das Modifizierungssegment (600) derart ausgebildet ist, dass Retentionseigenschaften von Komponenten der fluidischen Probe modifiziert werden; wobei das Modifizierungssegment (600) derart ausgebildet ist, dass chromatographische Eigenschaften von Komponenten der fluidischen Probe modifiziert werden; wobei das Modifizierungssegment (600) derart ausgebildet ist, dass für das Trennen der fluidischen Probe nachteilige Eigenschaften, insbesondere Aggressivität und/oder Unverträglichkeit gegenüber Systemkomponenten, des ersten Lösungsmittels modifiziert werden. Fluid supply device ( 150 ) according to one of claims 1 to 15, comprising at least one of the following features: wherein the modification segment ( 600 ) in such a way that upon modification of the fluidic sample with the modification segment ( 600 ) a relative elution capacity is changed; where the modification segment ( 600 ) in such a way that upon modification of the fluidic sample with the modification segment ( 600 ) an affinity of the fluidic sample to a stationary phase of a sample separator ( 30 ) is modified, in particular increased, is; where the modification segment ( 600 ) is designed such that components of the fluidic sample are modified for better detectability; where the modification segment ( 600 ) is designed such that retention properties of components of the fluidic sample are modified; where the modification segment ( 600 ) is configured such that chromatographic properties of components of the fluidic sample are modified; where the modification segment ( 600 ) is designed such that, for the separation of the fluidic sample, disadvantageous properties, in particular aggressiveness and / or incompatibility with system components, of the first solvent are modified. Fluidversorgungsvorrichtung (150) gemäß einem der Ansprüche 1 bis 16, aufweisend zumindest eines der folgenden Merkmale: die Fluidversorgungsvorrichtung (150) weist ein Injektorventil (98) mit zwei Fluidaufnahmevolumina (300, 302) auf, von denen eines zum Aufnehmen fluidischer Probe und das andere zum Aufnehmen des Modifizierungssegments (600) ausgebildet ist, und wobei nach einem Schalten des Injektorventils (90) die Modifizierung der fluidischen Probe durch das Modifizierungssegment (600) erfolgt; die Steuereinrichtung (70) ist eingerichtet, das Fördern des Modifizierungssegments (600) und der in dem ersten Lösungsmittel enthaltenen fluidischen Probe derart zeitgesteuert zu steuern, dass vor dem Erreichen der Probentrenneinrichtung (30) die in dem ersten Lösungsmittel enthaltene fluidische Probe und das Modifizierungssegment (600) zumindest teilweise durchmischt werden; die Fluidfördereinrichtung (20) ist zum Fördern der mobilen Phase mit einem Druck von mindestens 500 bar, insbesondere mindestens 1200 bar, eingerichtet; die Fluidfördereinrichtung (20) ist aus einer Gruppe ausgewählt, die besteht aus einer Binärpumpe, einer Pumpe mit Hochdruckmischung, einer Mehrkanalpumpe und einer Pumpe mit Niederdruckmischung; über das gesamte Modifizierungssegment (600) hinweg wird ein gleichbleibendes Lösungsmittel bereitgestellt; die Fluidversorgungsvorrichtung (150) weist eine Mischeinrichtung (166) zum Mischen des Modifizierungssegments (600) mit der in dem ersten Lösungsmittel enthaltenen fluidischen Probe vor Erreichen der Probentrenneinrichtung (30) des Probentrenngeräts (10) auf.Fluid supply device ( 150 ) according to one of claims 1 to 16, comprising at least one of the following features: the fluid supply device ( 150 ) has an injector valve ( 98 ) with two fluid receiving volumes ( 300 . 302 of which one for receiving fluidic sample and the other for receiving the modifying segment ( 600 ), and wherein after a switching of the injector valve ( 90 ) the modification of the fluidic sample by the modification segment ( 600 ) he follows; the control device ( 70 ) is set up, the promotion of the modification segment ( 600 ) and the fluidic sample contained in the first solvent so timed to control that before reaching the sample separation device ( 30 ) the fluidic sample contained in the first solvent and the modification segment ( 600 ) are at least partially mixed; the fluid delivery device ( 20 ) is arranged to convey the mobile phase at a pressure of at least 500 bar, in particular at least 1200 bar; the fluid delivery device ( 20 ) is selected from a group consisting of a binary pump, a high pressure mixing pump, a multichannel pump and a low pressure mixing pump; over the entire modification segment ( 600 ), a constant solvent is provided; the fluid supply device ( 150 ) has a mixing device ( 166 ) for mixing the modification segment ( 600 ) with the fluidic sample contained in the first solvent before reaching the sample separation device ( 30 ) of the sample separation device ( 10 ) on. Probentrenngerät (10) zum Trennen einer fluidischen Probe, wobei das Probentrenngerät (10) aufweist: eine Fluidversorgungsvorrichtung (150) gemäß einem der Ansprüche 1 bis 17 zum Bereitstellen einer mobilen Phase, in welche die fluidische Probe zu injizieren ist; eine Probentrenneinrichtung (30), die zum Trennen der fluidischen Probe in Fraktionen eingerichtet ist, und vorzugsweise derart angeordnet ist, dass die fluidische Probe erst nach Modifizierung mit dem zweiten Lösungsmittel einen Einlass der Probentrenneinrichtung (30) erreicht. Sample Separator ( 10 ) for separating a fluidic sample, wherein the sample separation device ( 10 ): a fluid supply device ( 150 ) according to any one of claims 1 to 17 for providing a mobile phase into which the fluidic sample is to be injected; a sample separator ( 30 ), which is set up for separating the fluidic sample into fractions, and is preferably arranged such that the fluidic sample, after being modified with the second solvent, forms an inlet of the sample separator ( 30 ) reached. Probentrenngerät (10) gemäß Anspruch 18, ferner aufweisend zumindest eines der folgenden Merkmale: die Probentrenneinrichtung (30) ist als chromatographische Trenneinrichtung, insbesondere als Chromatographietrennsäule, ausgebildet; das Probentrenngerät (10) ist als zweidimensionales Probentrenngerät (10) ausgebildet; das Probentrenngerät (10) ist zum Analysieren von zumindest einem physikalischen, chemischen und/oder biologischen Parameter von zumindest einer Fraktion der fluidischen Probe konfiguriert; das Probentrenngerät (10) weist zumindest eines aus der Gruppe auf, die besteht aus einem Gerät zur chemischen, biologischen und/oder pharmazeutischen Analyse, einem Flüssigkeitschromatografiegerät und einem HPLC-Gerät; eine Fluidfördereinrichtung (20) der Fluidversorgungsvorrichtung (150) ist zum Antreiben der mobilen Phase mit einem hohen Druck eingerichtet; eine Fluidfördereinrichtung (20) der Fluidversorgungsvorrichtung (150) ist zum Antreiben der mobilen Phase mit einem Druck von mindestens 100 bar, insbesondere von mindestens 500 bar, weiter insbesondere von mindestens 1000 bar, eingerichtet; das Probentrenngerät (10) ist als mikrofluidisches Gerät konfiguriert; das Probentrenngerät (10) ist als nanofluidisches Gerät konfiguriert; das Probentrenngerät (10) weist einen Detektor (50) zum Detektieren der getrennten Fraktionen auf; das Probentrenngerät (10) weist einen Injektor (40) zum Injizieren der fluidischen Probe in die mobile Phase auf; das Probentrenngerät (10) weist einen Probenfraktionierer zum Fraktionieren der getrennten Fraktionen auf.Sample Separator ( 10 ) according to claim 18, further comprising at least one of the following features: the sample separator ( 30 ) is designed as a chromatographic separation device, in particular as a chromatography separation column; the sample separator ( 10 ) is a two-dimensional sample separation device ( 10 ) educated; the sample separator ( 10 ) is configured to analyze at least one physical, chemical and / or biological parameter of at least one fraction of the fluidic sample; the sample separator ( 10 ) comprises at least one of the group consisting of a chemical, biological and / or pharmaceutical analysis apparatus, a liquid chromatography apparatus and an HPLC apparatus; a fluid delivery device ( 20 ) of the fluid supply device ( 150 ) is set up to drive the mobile phase at a high pressure; a fluid delivery device ( 20 ) of the fluid supply device ( 150 ) is arranged to drive the mobile phase at a pressure of at least 100 bar, in particular of at least 500 bar, more particularly of at least 1000 bar; the sample separator ( 10 ) is configured as a microfluidic device; the sample separator ( 10 ) is configured as a nanofluidic device; the sample separator ( 10 ) has a detector ( 50 ) for detecting the separated fractions; the sample separator ( 10 ) has an injector ( 40 ) for injecting the fluidic sample into the mobile phase; the sample separator ( 10 ) has a sample fractionator for fractionating the separated fractions. Verfahren zum Versorgen eines Probentrenngeräts (10) zum Trennen einer in einem ersten Lösungsmittel enthaltenen fluidischen Probe mit mobiler Phase, in welche die fluidische Probe eingebracht wird, wobei das Verfahren aufweist: Fördern der mobilen Phase mit einstellbarer Zusammensetzung; abschnittsweises Modifizieren der Zusammensetzung der mobilen Phase in einem Modifizierungssegment (600) derart, dass in dem Modifizierungssegment (600) im Vergleich zu dem ersten Lösungsmittel ein anderes, zweites Lösungsmittel zugeführt wird, mit dem die in dem ersten Lösungsmittel enthaltene fluidische Probe, insbesondere vor Erreichen einer Probentrenneinrichtung (30) des Probentrenngeräts (30), modifiziert wird.Method for supplying a sample separating device ( 10 ) for separating a mobile phase fluid sample contained in a first solvent into which the fluidic sample is introduced, the method comprising: delivering the mobile phase of adjustable composition; sectionally modifying the composition of the mobile phase in a modification segment ( 600 ) such that in the modification segment ( 600 ) is supplied to another, second solvent compared with the first solvent, with which the fluidic sample contained in the first solvent, in particular before reaching a sample separator ( 30 ) of the sample separation device ( 30 ), is modified.
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DE102018211281A1 (en) * 2018-07-09 2020-01-09 Robert Bosch Gmbh Microfluidic device and method for diluting and separating particles of a sample
GB2593478A (en) * 2020-03-24 2021-09-29 Agilent Technologies Inc Bracketing fluidic sample using strong solvent

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