DE102012108599A1 - New peptide containing amino acid sequences and their homologues and polymers and their homologues, useful to inhibit fibril formation of amyloid-beta peptides and to bind aggregated amyloid beta peptides to treat Alzheimers disease - Google Patents

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Abstract

Peptide containing at least one amino acid sequence consisting of SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 and SEQ ID NO: 3 and its homologues, fragments and parts and polymers having SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 and SEQ ID NO: 3 and their homologues, is new, where the sequences are not defined. Independent claims are included for: (1) preparing the peptide; and (2) a kit comprising the peptide. ACTIVITY : Neuroprotective; Nootropic; Anabolic. MECHANISM OF ACTION : Vaccine.

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft neue A-Beta-Oligomer-bindende Peptide und deren Verwendung, insbesondere in der Medizin.The present invention relates to novel A-beta oligomer-binding peptides and their use, especially in medicine.

Aufgrund der demographischen Entwicklung in den nächsten Jahrzehnten wird sich die Zahl der Personen, die an altersbedingten Erkrankungen leiden, erhöhen. Hier ist insbesondere die sog. Alzheimer-Krankheit (AD, Alzheimersche Demenz, lateinisch = Morbus Alzheimer) zu nennen.Due to the demographic development in the next decades, the number of people suffering from age-related diseases will increase. In particular, the so-called Alzheimer's disease (AD, Alzheimer's dementia, Latin = Alzheimer's disease) should be mentioned here.

Ein Merkmal der Alzheimer-Erkrankung sind extrazelluläre Ablagerungen des Amyloid-Beta-Peptids (A-Beta-Peptid). Diese Ablagerung des A-Beta-Peptids in Plaques ist typischerweise in den Gehirnen von AD-Patienten post mortem festzustellen. Deshalb werden verschiedene Formen des A-Beta-Peptids – wie z. B. Fibrillen – für die Entstehung und das Fortschreiten der Krankheit verantwortlich gemacht. Zusätzlich werden seit einigen Jahren die kleinen, frei diffundierbaren A-Beta-Oligomere als hauptsächliche Verursacher der Entstehung und des Fortschritts der AD gesehen. A-Beta-Monomere, als Bausteine der A-Beta-Oligomere, entstehen im menschlichen Körper ständig und sind vermutlich per se nicht toxisch. Möglicherweise haben sie sogar eine neuroprotektive Funktion. A-Beta-Monomere können sich in Abhängigkeit von ihrer Konzentration zufällig zusammen lagern. Die Konzentration ist abhängig von ihrer Bildungs- und Abbaurate im Körper. Findet mit zunehmendem Alter eine Erhöhung der Konzentration an A-Beta-Monomeren im Körper statt, so ist eine spontane Zusammenlagerung der Monomere zu A-Beta-Oligomeren immer wahrscheinlicher. Die so entstandenen A-Beta-Oligomere könnten sich analog zu den Prionen vermehren und letztendlich zur Morbus Alzheimer-Krankheit führen.A hallmark of Alzheimer's disease is extracellular deposits of amyloid beta peptide (A beta peptide). This deposition of the A-beta peptide into plaques is typically found post mortem in the brains of AD patients. Therefore, various forms of the A-beta peptide - such. B. Fibrils - responsible for the onset and progression of the disease. In addition, the small, freely diffusible A-beta oligomers have been seen for some years as the main cause of AD formation and progression. A-beta monomers, as building blocks of the A-beta oligomers, are constantly evolving in the human body and are thought to be non-toxic per se. They may even have a neuroprotective function. A-beta monomers may co-store randomly depending on their concentration. The concentration depends on its rate of education and degradation in the body. If an increase in the concentration of A-beta monomers in the body takes place with increasing age, spontaneous assembly of the monomers into A-beta oligomers is more likely. The resulting A-beta oligomers could multiply analogously to the prions and ultimately lead to Alzheimer's disease.

Bisher existiert kein Wirkstoff oder Medikament, das gegen die Ursachen von AD wirkt. Die bisher eingesetzten und zugelassenen Medikamente mildern einige der bei der AD auftretenden Symptome. Sie sind aber nicht in der Lage, den Krankheitsfortschritt zu verlangsamen oder eine Heilung herbeizuführen. Es existieren einige Substanzen, die im Tierversuch Erfolge bei der Prävention, aber nicht (unbedingt) bei der Behandlung von AD gezeigt haben.So far, there is no drug or drug that works against the causes of AD. The previously used and approved medications alleviate some of the symptoms of AD. However, they are unable to slow the progression of the disease or bring about a cure. There are some substances that have been shown to be successful in animal testing but not (necessarily) in the treatment of AD.

Ein wichtiger Unterschied zwischen Prävention und Behandlung oder gar Heilung der AD liegt in der Tatsache, dass eine Prävention möglicherweise schon durch die Verhinderung der Bildung der ersten A-Beta-Oligomere erreicht werden kann. Zur Prävention sind einige, wenige A-Beta-Liganden ausreichend, die nicht notwendigerweise hochaffin und selektiv bezüglich der A-Beta-Oligomere sind.An important difference between prevention and treatment or even cure of AD lies in the fact that prevention may possibly be achieved by preventing the formation of the first A-beta oligomers. For prevention, few, few A-beta ligands are sufficient, which are not necessarily highly affine and selective with respect to the A-beta oligomers.

Die Bildung der A-Beta-Oligomere aus vielen Monomeren ist eine Reaktion hoher Ordnung und damit in hoher Potenz von der A-Beta-Monomer-Konzentration abhängig. Somit führt schon eine kleine Verringerung der aktiven A-Beta-Monomer-Konzentration zu einer Verhinderung der Bildung der ersten A-Beta-Oligomere. Auf diesem Mechanismus basieren die bisher sich in der Entwicklung befindlichen eher präventiven Therapiekonzepte und Substanzen. Bei der Behandlung von AD ist jedoch von einer völlig veränderten Situation auszugehen. Hier liegen A-Beta-Oligomere oder evtl. auch schon größere Polymere oder Fibrillen vor, die sich durch Prion-ähnliche Mechanismen vermehren. Diese Vermehrung ist jedoch eine Reaktion niederer Ordnung und ist somit kaum noch von der A-Beta-Monomer-Konzentration abhängig.The formation of the A-beta oligomers from many monomers is a high-order reaction, and thus highly dependent on the A-beta monomer concentration. Thus, even a small reduction in the active A-beta monomer concentration leads to a prevention of the formation of the first A-beta oligomers. This mechanism is based on the development of more preventive therapy concepts and substances. In the treatment of AD, however, a completely different situation can be assumed. Here are A-beta oligomers or possibly even larger polymers or fibrils that proliferate by prion-like mechanisms. However, this multiplication is a low-order reaction and is thus hardly dependent on the A-beta monomer concentration.

Die aus dem Stand der Technik bekannten Substanzen verringern die Konzentration von A-Beta-Monomeren und/oder Oligomeren auf verschiedenste Art und Weise. So sind z. B. Gamma-Sekretase-Modulatoren bekannt, die im Tierversuch zur Prävention eingesetzt wurden. Aus der WO 02/081505 sind verschiedene Sequenzen von D-Aminosäuren bekannt, die an A-Beta-Peptide binden. Diese Sequenzen aus D-Aminosäuren binden mit einer Dissoziationskonstante (KD-Wert) von 4 μmol an Amyloid-Beta-Peptide. Aus der WO 2011/147797 sind Hybridverbindungen bekannt, bestehend aus Aminopyrazolen und Peptiden, die A-Beta-Oligomerisation verhindern.The substances known from the prior art reduce the concentration of A-beta monomers and / or oligomers in various ways. So z. B. gamma-secretase modulators known that have been used in animal studies for the prevention. From the WO 02/081505 For example, various sequences of D-amino acids that bind to A-beta peptides are known. These sequences of D-amino acids bind with a dissociation constant (K D value) of 4 μmol to amyloid beta peptides. From the WO 2011/147797 are known hybrid compounds consisting of aminopyrazoles and peptides that prevent A-beta oligomerization.

Bei vielen Substanzen, die im Tierversuch positive Ergebnisse gezeigt haben, konnte diese Wirkung in klinischen Studien am Menschen nicht bestätigt werden. In klinischen Studien der Phase II und III dürfen nur Menschen behandelt werden, die eindeutig mit AD diagnostiziert wurden. Hier reicht eine geringe Verringerung der A-Beta-Monomerkonzentration nicht mehr aus, um zu verhindern, dass sich aus den bereits vorhandenen A-Beta-Oligomeren noch mehr bilden, z. B. durch einen Prion-ähnlichen Mechanismus. Die Vermehrung der A-Beta-Oligomere oder noch besser ihre Zerstörung oder Unschädlichmachung ist aber unbedingt erforderlich, um Einfluss auf den Krankheitsverlauf zu nehmen.In many substances that have shown positive results in animal studies, this effect could not be confirmed in human clinical trials. Phase II and III clinical trials should only treat people who have been clearly diagnosed with AD. Here, a small reduction in the A-beta monomer concentration is no longer sufficient to prevent the formation of even more from the existing A-beta oligomers, eg. By a prion-like mechanism. The proliferation of the A-beta oligomers or even better their destruction or harmlessness is absolutely necessary to influence the course of the disease.

Bisher wird die AD hauptsächlich durch neuropsychologische Tests diagnostiziert, durch Untersuchungen an Personen, bei denen bereits Demenzsymptome aufgetreten sind. Es ist jedoch bekannt, dass A-Beta-Oligomere und die zeitlich im Krankheitsverlauf darauf folgenden Fibrillen und Plaques bis zu 20 Jahre vor dem Auftreten der Symptome im Gehirn der Patienten entstehen, und schon irreversible Schäden verursacht haben können. Allerdings gibt es bisher in der Praxis noch keine Möglichkeit, die AD vor dem Ausbruch der Symptome zu diagnostizieren.Up to now AD has been diagnosed mainly by neuropsychological tests, by examinations on persons, in whom already dementia symptoms have occurred. However, it is known that A-beta oligomers and the subsequent fibrils and plaques occur over 20 years prior to the onset of symptoms in the patient's brain, and may have caused irreversible damage. However, in practice there is still no way to diagnose the AD before the onset of symptoms.

Es besteht somit weiterhin ein Bedarf an neuen Verbindungen (Wirkstoffen), die sehr spezifisch und mit hoher Affinität an A-Beta-Oligomere binden, und so deren Vermehrung verhindern. Diese Verbindungen sollten keine unerwünschten Nebenwirkungen zeigen, insbesondere keine Immunreaktion hervorrufen. Die Verbindungen sollen außerdem toxische A-Beta-Oligomere und damit auch die kleinen frei diffundierbaren Oligomere in kleinen Konzentrationen erkennen, vollständig vernichten und/oder deren (Prionen-ähnliche) Vermehrung verhindern. Thus, there remains a need for new compounds (drugs) that bind very specifically and with high affinity to A-beta oligomers, thus preventing their replication. These compounds should not show any unwanted side effects, in particular do not cause an immune reaction. In addition, the compounds should recognize, completely destroy, and / or prevent their (prion-like) multiplication of toxic A-beta oligomers and thus also the small, freely diffusible oligomers in small concentrations.

Des Weiteren besteht auch ein Bedarf an neuen Verbindungen, die als Sonden für die Erkennung und Markierung von A-Beta-Oligomeren einsetzbar sind, insbesondere, wenn die Krankheit noch nicht weit fortgeschritten ist und die Oligomere erst in geringen Konzentrationen auftreten.Furthermore, there is also a need for new compounds that can be used as probes for the recognition and labeling of A-beta oligomers, especially when the disease is not advanced and the oligomers are present at low concentrations.

Weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung war es, Substanzen zur Verfügung zu stellen, die nicht nur auf extrazelluläre A-Beta-Peptide fokussieren, wie die meisten aus dem Stand der Technik bekannten Verbindungen, sondern gezielt lösliche A-Beta-Oligomere binden. Ferner sollen die neuen Verbindungen die Fibrillenbildung von A-Beta-Peptiden hemmen oder verhindern.Another object of the present invention was to provide substances that focus not only on extracellular A-beta peptides, as most known from the prior art compounds, but selectively bind soluble A-beta oligomers. Furthermore, the new compounds are said to inhibit or prevent the fibril formation of A-beta peptides.

Gelöst wird diese Aufgabe durch ein Peptid enthaltend eine Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO: 1 (DO 3), SEQ ID NO: 2 und/oder SEQ ID NO: 3 und/oder Homologe, Fragmente und Teile davon. Gelöst wird diese Aufgabe auch durch Polymere der SEQ ID NO: 1 (DO 3), SEQ ID NO: 2 und/oder SEQ ID NO: 3 und/oder deren Homologe. Fragmente und Teile zeigen eine ähnliche beziehungsweise identische Wirkung wie die erfindungsgemäßen Peptide. In einer Variante bestehen die Peptide gemäß SEQ ID NO: 1 (DO 3), SEQ ID NO: 2 und/oder SEQ ID NO: 3 und deren Homologe im Wesentlichen, bevorzugt mindestens 60%, 75%, 80%, besonders bevorzugt 85%, 90%, 95%, insbesondere 96%, 97%, 98%, 99%, 100% aus D-Aminosäuren. Ein Polymer im Sinne der Erfindung ist gebildet aus 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 oder mehr Monomeren ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID NO: 1 (DO 3), SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 und deren Homologe, die für sich bereits A-Beta-Oligomer. Erfindungsgemäß sind die Polymere aus einem Monomer aufgebaut oder aus einer Kombination von 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 unterschiedlichen oben genannten Monomeren. Monomere und Polymere werden im Folgenden als erfindungsgemäße Peptide bezeichnet.This object is achieved by a peptide containing an amino acid sequence according to SEQ ID NO: 1 (DO 3), SEQ ID NO: 2 and / or SEQ ID NO: 3 and / or homologues, fragments and parts thereof. This object is also achieved by polymers of SEQ ID NO: 1 (DO 3), SEQ ID NO: 2 and / or SEQ ID NO: 3 and / or their homologs. Fragments and parts show a similar or identical effect as the peptides according to the invention. In one variant, the peptides according to SEQ ID NO: 1 (DO 3), SEQ ID NO: 2 and / or SEQ ID NO: 3 and their homologs essentially, preferably at least 60%, 75%, 80%, particularly preferably 85 %, 90%, 95%, especially 96%, 97%, 98%, 99%, 100% of D-amino acids. A polymer within the meaning of the invention is selected from 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 or more monomers from the group consisting of SEQ ID NO: 1 (DO 3), SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 and their homologs, which in themselves is already A-beta oligomer. According to the invention, the polymers are composed of a monomer or of a combination of 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 different monomers mentioned above. Monomers and polymers are referred to below as peptides according to the invention.

In einer Variante der Erfindung handelt es sich um ein Peptid mit der Aminosäuresequenz gemäß SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 und/oder SEQ ID NO: 3 und/oder Homologe davon mit einer Identität von 50%. „Homologe Sequenzen” oder ”Homologe” bedeutet im Sinne der Erfindung, dass eine Aminosäuresequenz eine Identität mit einer der oben genannten Aminosäuresequenz der Monomere von mindestens 50, 55, 60, 65, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100% aufweist. Anstelle des Begriffs ”Identität” werden in der vorliegenden Beschreibung die Begriffe ”homolog” oder ”Homologie” gleichbedeutend verwendet. Die Identität zwischen zwei Nukleinsäuresequenzen oder Polypeptidsequenzen wird durch Vergleich mit Hilfe des Programms BESTFIT basierend auf dem Algorithmus von Smith, T. F. und Waterman, M. S (Adv. Appl. Math. 2: 482–489 (1981) ) berechnet unter Einstellung folgender Parameter für Aminosäuren: Gap creation penalty: 8 und Gap extension penalty: 2; und folgender Parameter für Nukleinsäuren: Gap creation penalty: 50 und Gap extension penalty: 3. Bevorzugt wird die Identität zwischen zwei Nukleinsäuresequenzen oder Polypeptidsequenzen durch die Identität der Nukleinsäuresequenz/Polypeptidequenz über die jeweils gesamte Sequenzlänge definiert, wie sie durch Vergleich mit Hilfe des Programms GAP basierend auf dem Algorithmus von Needleman, S. B. und Wunsch, C. D. (J. Mol. Biol. 48: 443–453) unter Einstellung folgender Parameter für Aminosäuren berechnet wird: Gap creation penalty: 8 und Gap extension penalty: 2; und die folgenden Parameter für Nukleinsäuren Gap creation penalty: 50 und Gap extension penalty: 3.In one variant of the invention is a peptide having the amino acid sequence according to SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 and / or SEQ ID NO: 3 and / or homologues thereof having an identity of 50%. "Homologous sequences" or "homologues" in the context of the invention means that an amino acid sequence has an identity with one of the abovementioned amino acid sequence of the monomers of at least 50, 55, 60, 65, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76 , 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100% , Instead of the term "identity", the terms "homologous" or "homology" are used synonymously in the present description. The identity between two nucleic acid sequences or polypeptide sequences is determined by comparison with the help of the program BESTFIT based on the algorithm of Smith, TF and Waterman, M.S. (Adv. Appl. Math. 2: 482-489 (1981) ) calculated by setting the following parameters for amino acids: gap creation penalty: 8 and gap extension penalty: 2; and the following parameter for nucleic acids: Gap creation penalty: 50 and Gap extension penalty: 3. Preferably, the identity between two nucleic acid sequences or polypeptide sequences is defined by the identity of the nucleic acid sequence / polypeptide sequence over the entire sequence length as determined by comparison using the GAP program based on the algorithm of Needleman, SB and Wunsch, CD (J. Mol. Biol. 48: 443-453) calculated by setting the following parameters for amino acids: gap creation penalty: 8 and gap extension penalty: 2; and the following parameters for nucleic acid gap creation penalty: 50 and gap extension penalty: 3.

Zwei Aminosäuresequenzen sind im Sinne der vorliegenden Erfindung identisch wenn sie die selbe Aminosäuresequenz besitzen.Two amino acid sequences are identical for the purposes of the present invention if they have the same amino acid sequence.

Unter Homologe sind in einer Variante die entsprechenden retro-inversen Sequenzen der oben genannten Monomere zu verstehen. Mit dem Begriff ”retro-inverse Sequenz” wird erfindungsgemäß eine Aminosäuresequenz bezeichnet, die sich aus Aminosäuren in der enantiomeren Form zusammensetzt (invers: Chiralität des alpha-C-Atoms invertiert) und bei der zusätzlich die Sequenzreihenfolge zur ursprünglichen Aminosäuresequenz umgekehrt wurde (retro = rückwärts).In a variant, homologs are to be understood as meaning the corresponding retro-inverse sequences of the abovementioned monomers. The term "retro-inverse sequence" according to the invention refers to an amino acid sequence which is composed of amino acids in the enantiomeric form (inverse: chirality of the alpha-C atom inverted) and in which in addition the sequence order was reversed to the original amino acid sequence (retro = backward).

In einer weiteren Variante binden die erfindungsgemäßen Peptide an Teile des Amyloid beta-Peptids.In a further variant, the peptides according to the invention bind to parts of the amyloid beta peptide.

In einer weiteren Variante weisen die erfindungsgemäßen Peptide Sequenzen auf, die sich von den angegebenen Sequenzen um bis zu drei Aminosäuren unterscheiden. Ferner werden als Peptide auch Sequenzen eingesetzt, die die oben genannten Sequenzen enthalten.In a further variant, the peptides according to the invention have sequences which differ from the stated sequences by up to three amino acids. Furthermore, as peptides, sequences are also used which contain the abovementioned sequences.

In einer weiteren Variante weisen die Peptide Fragmente der oben genannten Sequenzen auf oder weisen homologe Sequenzen zu den oben genannten Sequenzen auf.In a further variant, the peptides have fragments of the abovementioned sequences or have homologous sequences to the above sequences.

Erfindungsgemäß handelt es sich um ein Peptid zur Verwendung in der Medizin, bevorzugt zur Behandlung der Morbus Alzheimer.According to the invention, it is a peptide for use in medicine, preferably for the treatment of Alzheimer's disease.

In einer Ausführung der vorliegenden Erfindung besteht das Peptid im Wesentlichen aus D-Aminosäuren. Im Sinne der vorliegenden Erfindung bedeutet der Begriff „im Wesentlichen aus D-Aminosäuren”, dass die einzusetzenden Monomere mindestens 60%, bevorzugt 75%, 80%, besonders bevorzugt 85%, 90%, 95%, insbesondere 96%, 97%, 98%, 99%, 100% aus D-Aminosäuren aufgebaut sind.In one embodiment of the present invention, the peptide consists essentially of D-amino acids. For the purposes of the present invention, the term "essentially of D-amino acids" means that the monomers to be used at least 60%, preferably 75%, 80%, particularly preferably 85%, 90%, 95%, in particular 96%, 97%, 98%, 99%, 100% are composed of D-amino acids.

In einer weiteren Variante handelt es sich um ein erfindungsgemäßes Peptid zur Hemmung der Fibrillenbildung von Amyloid-Beta-Peptiden. Die erfindungsgemäßen Polymere enttoxifizieren die A-Beta-Oligomere oder daraus gebildete Polymere, sowie Fibrillen, indem sie daran binden und so in nicht toxische Verbindungen überführen. Demgemäß ist Gegenstand der vorliegenden Erfindung auch ein Verfahren zur Enttoxifizierung der A-Beta-Oligomeren, daraus gebildeten Polymeren oder Fibrillen.In a further variant, it is a peptide according to the invention for inhibiting fibril formation of amyloid beta peptides. The polymers of the invention detoxify the A-beta oligomers or polymers formed therefrom, as well as fibrils, by binding to and thus converting to nontoxic compounds. Accordingly, the present invention also provides a process for detoxifying the A-beta oligomers, polymers or fibrils formed therefrom.

Gegenstand der Erfindung sind in einer Ausführung auch erfindungsgemäße Peptide die mit einer weiteren Substanz verknüpft sind. Bei der Verknüpfung handelt es sich im Sinne der Erfindung um eine chemische Bindung wie sie in Römpp Chemie Lexikon, 9. Auflage, Band 1, Seite 650 ff, Georg Thieme Verlag Stuttgart definiert ist, bevorzugt um eine Hauptvelenz Bindung, insbesondere eine kovalente Bindung. Bei den Substanzen handelt es sich in einer Variante um Arzneimittel oder Wirkstoffe, definiert gemäß Arzneimittelgesetz §2 beziehungsweise. §4 (19), Stand September 2012. In einer Alternative sind Wirkstoffe therapeutisch aktive Stoffe die als arzneilich wirksame Stoffe verwendet werden. Bevorzugt werden Entzündungshemmer eingesetzt. Bei den Substanzen handelt es sich in einer weiteren Variante um Verbindungen die die Wirkung der Peptide verstärken. In einer Alternative sind solche Verbindungen Aminopyrazol und/oder Aminopyrazolderivate. Aminopyrazolderivate im Sinne der Erfindung ist 3-Aminopyrazo1-5-carbonsäure oder 3-Nitropyrazol-5-carbonsäure sowie alle Abkömmlinge, in denen die heterocyclische CH-Gruppe gegen -CR- oder -N- oder -O- oder -S- ausgetauscht wurde, sowie alle daraus abgeleiteten peptidischen Dimere, Trimere oder -Tetramere, bevorzugt Aminopyrazol-Trimer. In einer weiteren Alternative handelt es sich um Verbindungen die die Löslichkeit der Peptide und/oder die Passage der Blut-Hirn-Schranke verbessern.The invention also relates in one embodiment to peptides according to the invention which are linked to another substance. In the context of the invention, the linkage is a chemical bond as described in US Pat Römpp Chemie Lexikon, 9th edition, Volume 1, page 650 ff, Georg Thieme Verlag Stuttgart is defined, preferably by a Hauptvelenz bond, in particular a covalent bond. In one variant, the substances are drugs or active substances, defined in accordance with the Medicinal Products Act §2 respectively. §4 (19), as of September 2012. In one alternative, active substances are therapeutically active substances which are used as medicinally active substances. Anti-inflammatory agents are preferably used. The substances in another variant are compounds that enhance the action of the peptides. In an alternative, such compounds are aminopyrazole and / or aminopyrazole derivatives. Aminopyrazole derivatives for the purposes of the invention is 3-aminopyrazol-5-carboxylic acid or 3-nitropyrazole-5-carboxylic acid and all derivatives in which the heterocyclic CH group has been replaced by -CR- or -N- or -O- or -S- , as well as any derived peptidic dimers, trimers or tetramers, preferably aminopyrazole trimer. Another alternative is compounds which improve the solubility of the peptides and / or the passage of the blood-brain barrier.

In einer Alternative haben die Peptide erfindungsgemäß jede beliebige Kombination von mindestens zwei oder mehr Merkmalen der oben beschriebenen Varianten, Ausführungen und/oder Alternativen.In an alternative, the peptides according to the invention have any combination of at least two or more features of the variants, embodiments and / or alternatives described above.

Gegenstand der Erfindung ist auch ein erfindungsgemäßes Peptid zur Bindung an aggregierte A-Beta-Peptide.The invention also provides a peptide according to the invention for binding to aggregated A-beta peptides.

Weiterer Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung des erfindungsgemäßen Peptids durch Peptidsynthese, wie zum Beispiel dem Fachmann bekannt, organische Synthesemethoden für beliebige Verbindungen mit geringem Molekulargewicht (low-molecular weight compounds) und/oder Mutagenese und rekombinante Herstellung.Another object of the invention is a process for the preparation of the peptide of the invention by peptide synthesis, such as those skilled in the art, organic synthesis methods for any low molecular weight compounds (low-molecular weight compounds) and / or mutagenesis and recombinant production.

Die Erfindung betrifft ferner auch eine Zusammensetzung enthaltend das erfindungsgemäße Peptid, insbesondere zur Behandlung von Morbus Alzheimer. Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ferner eine Zusammensetzung enthaltend das erfindungsgemäße Peptid, insbesondere zur Verhinderung von toxischen A-Beta-Oligomeren, oder zur Zerstörung von daraus gebildeten Polymere oder Fibrillen. Die erfindungsgemäße „Zusammensetzung” kann z. B. ein Impfstoff, ein Medikament (z. B. in Tablettenform), eine Injektionslösung, ein Nahrungs- oder Nahrungsergänzungsmittel sein, enthaltend das erfindungsgemäße Peptid in einer aufgrund des Fachwissens herzustellenden Formulierung.The invention further relates to a composition comprising the peptide of the invention, in particular for the treatment of Alzheimer's disease. The present invention furthermore relates to a composition comprising the peptide according to the invention, in particular for the prevention of toxic A-beta oligomers, or for the destruction of polymers or fibrils formed therefrom. The "composition" of the invention may, for. A vaccine, a medicament (eg, in tablet form), an injection solution, a food or dietary supplement containing the peptide of the invention in a formulation to be prepared on the basis of expert knowledge.

Die Erfindung betrifft ferner auch ein KIT enthaltend das erfindungsgemäße Peptid. In einem solchen KIT können die erfindungsgemäßen Peptide in Behältern ggf. mit/in Puffern oder Lösungen verpackt sein. Alle Komponenten des KITs können in demselben Behälter oder getrennt voneinander verpackt sein. Ferner kann das KIT Anweisungen für dessen Gebrauch enthalten. Ein solches KIT kann beispielsweise die erfindungsgemäßenn einer Injektionsflasche mit Stopfen und/oder Septum enthalten. Ferner kann darin beispielsweise auch eine Einmal-Spritze enthalten sein. Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung des erfindungsgemäßen Peptids als Sonde zur Identifizierung, qualitativen und/oder quantitativen Bestimmung von Amyloid-Beta-Oligomeren oder Fibrillen. Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist auch eine Sonde, enthaltend das erfindungsgemäße Peptid zur Identifizierung, qualitativen und/oder quantitativen Bestimmung von Amyloid-Beta-Oligomeren.The invention further relates to a KIT containing the peptide according to the invention. In such a KIT, the peptides of the invention may be packaged in containers with / in buffers or solutions, if necessary. All components of the KIT can be packed in the same container or separately. Further, the KIT may contain instructions for its use. Such a KIT may contain, for example, the injection bottle with stopper and / or septum according to the invention. Furthermore, it may also contain, for example, a disposable syringe. Another object of the present invention is the use of the peptide according to the invention as a probe for the identification, qualitative and / or quantitative determination of amyloid beta oligomers or fibrils. The present invention also provides a probe containing the peptide according to the invention for the identification, qualitative and / or quantitative determination of amyloid beta oligomers.

Solche Sonden sind von großer Bedeutung, da damit eine frühe Diagnose der AD möglich wird. Mit der Frühdiagnose kann der Krankheit schon in einem sehr frühen Stadium entgegengewirkt werden. Solche molekularen Sonden enthalten das erfindungsgemäße Polymer und gegebenenfalls Farbstoffe, Fluoreszenzfarbstoffe, radioaktive Isotope, (PET etc.), Gadolinium (MRI), sowie alternative Stoffe geeignet für die Bildgebung der Sonden und können den Patienten z. B. intravenös injiziert werden. Nach Passage über die Bluthirnschranke können die Sonden an A-Beta-Oligomere und/oder Plaques binden. Die so markierten A-Beta-Oligomere und/oder Plaques können mittels bildgebender Verfahren wie z. B. SPECT, PET, CT, MRT, Protonen-MR-Spektroskopie usw. sichtbar gemacht werden.Such probes are of great importance because they allow an early diagnosis of AD. With the early diagnosis of the disease can be counteracted at a very early stage. Such molecular probes contain the polymer according to the invention and optionally dyes, fluorescent dyes, radioactive isotopes, (PET etc.), gadolinium (MRI), as well as alternative substances suitable for the imaging of the probes and can the patient z. B. injected intravenously. After passage across the blood-brain barrier, the probes can bind to A-beta oligomers and / or plaques. The thus labeled A-beta oligomers and / or plaques can be detected by means of imaging methods such. As SPECT, PET, CT, MRI, proton MR spectroscopy, etc. are made visible.

Ferner betrifft die Erfindung auch die Verwendung des Peptids zur Verhinderung von Amyloid-Beta-Oligomeren und/oder Amyloid-Beta-Peptid-Aggregaten und/oder Amyloid-Beta-Fibrillen.Furthermore, the invention also relates to the use of the peptide for the prevention of amyloid-beta-oligomers and / or amyloid-beta-peptide aggregates and / or amyloid-beta-fibrils.

Das erfindungsgemäße Peptid wird auch zur Enttoxifizierung von toxischen Amyloid-Beta-Oligomeren und/oder Aggregaten verwendet. Insbesondere wird es verwendet, um an Amyloid-Beta-Oligomere und/oder Aggregate zu binden und so amorphe, nicht toxische Aggregate zu bilden.The peptide of the invention is also used for the de-toxification of toxic amyloid-beta oligomers and / or aggregates. In particular, it is used to bind to amyloid beta oligomers and / or aggregates to form amorphous, non-toxic aggregates.

Weiterer Gegenstand ist die Verwendung des erfindungsgemäßen Peptids als Therapeutikum von Morbus Alzheimer.Another object is the use of the peptide of the invention as a therapeutic agent of Alzheimer's disease.

Die erfindungsgemäßen Peptide binden besonders gut an A-Beta-Oligomere, insbesondere an lösliche A-Beta-Oligomere. In einer Ausführung der Erfindung besitzen die Peptide gemäß SEQ ID NO: 2 und/oder SEQ ID NO: 3 durch die angefügten Sequenzen (und Arginine) eine erhöhte Bluthirnschrankengängigkeit und/oder Löslichkeit als das Peptid laut SEQ ID NO. 1.The peptides of the invention bind particularly well to A-beta oligomers, in particular to soluble A-beta oligomers. In one embodiment of the invention, the peptides according to SEQ ID NO: 2 and / or SEQ ID NO: 3 by the added sequences (and arginines) increased Bluthnirnschrankengängigkeit and / or solubility than the peptide according to SEQ ID NO. 1.

Eine besonders starke Bindung der erfindungsgemäßen Peptide an die Zielmoleküle wird durch eine hohe Spezifität und/oder Affinität zu dem Zielmolekül der erfindungsgemäßen Peptide hervorgerufen. Die gebildeten Komplexe haben eine geringe Dissoziationskonstante (KD-Wert). Komplexe gebildet aus A-Beta-Monomeren und den erfindungsgemäßen Peptiden haben eine KD-Wert von höchstens 3 μM, 2 μM, bevorzugt 1 μM, besonders bevorzugt 0,5 μM, insbesondere 0,4 μM, 0,3 μM. Komplexe gebildet aus A-Beta-Oligomeren und den erfindungsgemäßen Peptiden haben eine KD-Wert von höchstens 3 μM, 2 μM, 1 μM, bevorzugt 0,5 μM, 04 μM, 0,3 μM, besonders bevorzugt 0,2 μm, 0,1 μM, insbesondere 0,05 μM, 0,04 μM. Komplexe gebildet aus A-Beta-Fibrillen und den erfindungsgemäßen Peptiden haben eine KD-Wert von höchstens 3 μM, 2 μM, 1 μM, bevorzugt 0,8 μm, besonders bevorzugt 0,5 μM, 04 μM, 0,3 μM, insbesondere 0,2 μM.A particularly strong binding of the peptides according to the invention to the target molecules is caused by a high specificity and / or affinity for the target molecule of the peptides according to the invention. The complexes formed have a low dissociation constant (KD value). Complexes formed from A-beta monomers and the peptides according to the invention have a KD value of at most 3 μM, 2 μM, preferably 1 μM, particularly preferably 0.5 μM, in particular 0.4 μM, 0.3 μM. Complexes formed from A-beta oligomers and the peptides according to the invention have a KD value of at most 3 μM, 2 μM, 1 μM, preferably 0.5 μM, 04 μM, 0.3 μM, particularly preferably 0.2 μm, 0 , 1 μM, especially 0.05 μM, 0.04 μM. Complexes formed from A-beta fibrils and the peptides according to the invention have a KD value of at most 3 μM, 2 μM, 1 μM, preferably 0.8 μm, particularly preferably 0.5 μM, 04 μM, 0.3 μM, in particular 0.2 μM.

Die erfindungsgemäßen Sequenzen, insbesondere SEQ ID NO: 1, binden bevorzugt an aggregierte (oligomere) Formen des A-Beta-Peptids. Die Bindung ist stärker als die der aus dem Stand der Technik bekannten D1- und D3-Peptide. Die erfindungsgemäßen Peptide, insbesondere SEQ ID NO: 1, hemmt die Fibrillenbildung von A-Beta-Peptiden sehr effizient. Ferner binden die erfindungsgemäßen Peptide, insbesondere SEQ ID NO: 1, an A-Beta-Oligomere, wodurch amorphe Aggregate gebildet werden – wie durch dynamische Lichtstreuung bewiesen – die im ThT-Test negativ sind.The sequences of the invention, in particular SEQ ID NO: 1, preferentially bind to aggregated (oligomeric) forms of the A-beta peptide. The binding is stronger than that of the D1 and D3 peptides known from the prior art. The peptides according to the invention, in particular SEQ ID NO: 1, inhibits the fibril formation of A-beta peptides very efficiently. Furthermore, the peptides of the invention, in particular SEQ ID NO: 1, bind to A-beta oligomers, forming amorphous aggregates - as evidenced by dynamic light scattering - which are negative in the ThT assay.

Weiterer Gegenstand ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Peptide in einem Verfahren zur Behandlung (in vitro, ex vivo) von Blut, Blutprodukten und/oder Organen, dadurch gekennzeichnet, dass das Blut, die Blutprodukte und/oder Organe dem menschlichen oder tierischen Körper entnommen werden und A--Beta-Oligomere entfernt und/oder enttoxifiziert werden.Another object is the use of the peptides of the invention in a method for the treatment (in vitro, ex vivo) of blood, blood products and / or organs, characterized in that the blood, the blood products and / or organs are removed from the human or animal body, and A - Beta oligomers are removed and / or detoxified.

BeispieleExamples

Mittels Spiegelbild-Phagendisplay wurden Peptidsequenzen selektiert, die sich durch die Eigenschaft auszeichnen, spezifisch A-Beta-1-42 Oligomere zu binden. Momentan wird angenommen, dass frei diffundierende Oligomere für die Zellen am schädlichsten wirken. Für die Selektion wurden Oligomere von D-enantiomerem A-Beta-Monomeren mittels Gelfiltrationschromatographie präpariert und als Zielmoleküle im Spiegelbild-Phagendisplay eingesetzt. Im Verlauf der Phagendisplays wurde das Peptid mit der Aminosäuresequenz SEQ ID NO: 1 als selektierter Ligand identifiziert. Die D-enantiomere Form dieses Peptids, mit der Aminosäuresequenz SEQ ID NO: 1, das DO3 genannt wurde, wurde bezüglich seiner in vitro-Bindung an verschiedene A-Beta-Konformere (Monomere, -Oligomere, -Fibrillen) im ELISA getestet. Für DO3 wurden relativ hohe Affinitäten für sämtliche Konformere im ELISA nachgewiesen (1). Die Bindung an am Amino-Terminus biotinylierte Monomere war relativ schwach, während die „seedless”-Monomere (aggregationskeimfrei) mit der Carboxy-terminalen Biotinylierung stärker gebunden wurden. Dies kann als potentieller Hinweis auf eine am Amino-Terminus lokalisierte Bindeepitopstelle des Dodekamers interpretiert werden.By means of mirror image phage display, peptide sequences were selected which are characterized by the property of specifically binding A-beta-1-42 oligomers. Currently, it is believed that freely diffusing oligomers are most damaging to the cells. For the selection, oligomers of D-enantiomeric A-beta monomers were prepared by gel filtration chromatography and used as target molecules in the mirror image phage display. In the course of the phage displays, the peptide having the amino acid sequence SEQ ID NO: 1 was identified as a selected ligand. The D-enantiomeric form of this peptide, with the amino acid sequence SEQ ID NO: 1, which was called DO3, was tested for its in vitro binding to various A-beta conformers (monomers, oligomers, fibrils) by ELISA. For DO3, relatively high affinities for all conformers were detected in the ELISA ( 1 ). Binding to amino terminus-biotinylated monomers was relatively weak while seedless monomers were more strongly bound by carboxy-terminal biotinylation. This can be interpreted as a potential indication of an amino-terminal binding epitope site of the dodecamer.

Weiterhin wurde DO3 im Thioflavin T (ThT)-Aggregationstest eingesetzt. ThT ist ein Fluoreszenzfarbstoff, der an beta-Faltblatt-reiche Strukturen verschiedener amyloider Proteine bindet und nach der Anregung bei 440 nm fluoresziert. Die Emission kann auf diese Weise mit dem relativen Fibrillengehalt in der Probe korreliert werden. ThT-Tests werden zur Messung der Fibrillation von A-Beta-Monomeren genutzt und vor allem bei Liganden verwendet, um eine mögliche inhibitorische Wirkung dieser auf die A-Beta-Aggregation nachzuweisen. DO3 wurde in verschiedenen molaren Verhältnissen mit einer 10 μM A-Beta-Monomer-Lösung eingesetzt. Fünfzehn Stunden später, nach Erreichen der Sättigungsphase in der A-Beta-Kontrolle ohne Zusatz von Liganden, wurde die ThT-Fluoreszenz der Koinkubation von D-Peptiden und A-Beta-Monomeren ausgewertet und prozentual in Abhängigkeit von der A-Beta-Kontrollinkubation dargestellt. Dabei zeigt sich, das DO3 die A-Beta-Fibrillenbildung deutlich reduziert (2).Furthermore, DO3 was used in the thioflavin T (ThT) aggregation test. ThT is a fluorescent dye that binds to beta-sheet-rich structures of various amyloid proteins and fluoresces upon excitation at 440 nm. The emission can thus be correlated with the relative fibril content in the sample. ThT tests are used to measure the fibrillation of A-beta monomers and are used mainly in ligands to demonstrate their potential inhibitory effect on A-beta aggregation. DO3 was used in different molar ratios with a 10 μM A-beta monomer solution. Fifteen hours later, after reaching the saturation phase in the A beta control without the addition of ligands, the ThT fluorescence of the co-incubation of D-peptides and A-beta monomers was evaluated and expressed as a percentage of the A beta control incubation. It shows that DO3 significantly reduces A-beta fibril formation ( 2 ).

Da für DO3 eine starke Inhibition der Fibrillation von A-Beta-1-42 beobachtet wurde, erfolgten zusätzliche Messungen mit dynamischer Lichtstreuung, um die Aggregatbildung im Allgemeinen, unabhängig von der Sekundärstruktur der Partikel, zu verfolgen. Hierfür wurden 5 μM A-Beta-1-42-Monomere und DO3 ebenfalls im Verhältnis 10:1, 2:1 sowie 1:1 untersucht. Es zeigte sich, dass eine Aggregatbildung in Anwesenheit von DO3 stattgefunden hat (3). Die Tatsache, dass bei den gleichen Konzentrationsverhältnissen im ThT-Test keine ThT-positiven Fibrillen detektiert werden konnten, deutet darauf hin, dass es sich bei den DO3-induzierten Partikeln nicht um fibrilläre Aggregate handelte, sondern um amorphe und wahrscheinlich nicht-toxische Aggregate. Ein ähnlicher Mechanismus wurde bereits für das Peptid D3 gezeigt, dass toxische Aβ-Oligomere in nicht toxische, amorphe Aggregate umwandelt. Somit ist DO3 sehr interessant im Hinblick auf die Therapie der AD.Since strong inhibition of A-Beta-1-42 fibrillation was observed for DO3, additional dynamic light scattering measurements were used to monitor aggregate formation, generally independent of the secondary structure of the particles. For this purpose, 5 μM A-Beta-1-42 monomers and DO3 were also tested in a ratio of 10: 1, 2: 1 and 1: 1. It was found that aggregate formation took place in the presence of DO3 ( 3 ). The fact that no ThT-positive fibrils could be detected at the same concentration ratios in the ThT assay indicates that the DO3-induced particles were not fibrillar aggregates but amorphous and probably non-toxic aggregates. A similar mechanism has already been demonstrated for peptide D3 to convert toxic Aβ oligomers into non-toxic, amorphous aggregates. Thus, DO3 is very interesting with regard to the treatment of AD.

Messungen mittels Oberflächenplasmonenresonanzspektroskopie weisen eine Bindung von DO3 an N-terminal biotinylierte A-Beta-Monomere, A-Beta-Oligomere und A-Beta-Fibrillen (letztere bestehend aus 10% N-terminal biotinyliertem A-Beta-Monomeren und 90% nicht-biotinyliertem A Beta-Monomeren nach (4). DO3 bindet an alle getesteten A-Beta-Konformere sehr affin (siehe 4). Im Falle der Bindung von DO3 an Monomere war es möglich, die erhaltenen Sensogramme mit Hilfe eines heterogenen Modells, bestehend aus zwei Teilreaktionen, zu beschreiben (KD1: 0,77 μM, KD2: 0,28 μM). Die Bindung an Oligomere lässt sich ausschließlich durch ein Modell, bestehend aus drei Teilreaktionen, beschreiben (KD1: 7,7 μM, KD2: 0,186 μM, KD3: 0,04 μM). Kongruent verhält sich die Bindung an Fibrillen, die sich ebenfalls durch drei Teilreaktionen beschreiben lässt (KD1: 12 μM, KD2: 0,76 μM, KD3: 0,119 μM). Momentan deutet sich demnach an, dass DO3 Monomere und besonders Oligomere sehr affin bindet.Measurements by surface plasmon resonance spectroscopy indicate binding of DO3 to N-terminally biotinylated A-beta monomers, A-beta oligomers and A-beta fibrils (the latter consisting of 10% N-terminally biotinylated A-beta monomer and 90% non-terminally biotinylated A beta monomer according to ( 4 ). DO3 binds very affinely to all tested A-beta conformers (see 4 ). In the case of binding of DO3 to monomers, it was possible to describe the resulting spectra using a heterogeneous model consisting of two partial reactions (KD1: 0.77 μM, KD2: 0.28 μM). The binding to oligomers can be described exclusively by a model consisting of three partial reactions (KD1: 7.7 μM, KD2: 0.186 μM, KD3: 0.04 μM). Congruent is the binding to fibrils, which can also be described by three partial reactions (KD1: 12 μM, KD2: 0.76 μM, KD3: 0.119 μM). At the moment it seems that DO3 binds monomers and especially oligomers very affinely.

Beschreibung der FigurenDescription of the figures

1: ELISA zur relativen Quantifizierung der Bindung von DO3-FITC an verschiedene Aβ1-42-Konformere. Seedless-Monomere aus Carboxy-terminal biotinyliertem Aβ, Monomere und Oligomere aus Aminoterminal biotinyliertem Aβ und Fibrillen, die aus 10% aminoterminal biotinyliertem Aβ und 90% nicht-biotinlyiertem Aβ bestehen, wurden zu je 5 μg/ml immobilisiert und das D-Peptid in einer Konzentration von 10 und 20 μg/ml appliziert. Dargestellt ist die relative Quantifizierung der Bindung der Peptide in einer zweifachen Bestimmung als Absorption (AU = absorption unit) bei 450 nm nach Abzug der Hintergrundabsorption. 1 : ELISA for the relative quantification of the binding of DO3-FITC to different Aβ1-42 conformers. Seedless monomers of carboxy-terminal biotinylated Aβ, monomers and oligomers of amino terminal biotinylated Aβ and fibrils consisting of 10% amino terminal biotinylated Aβ and 90% non-biotinylated Aβ were immobilized at 5 μg / ml each and the D-peptide in applied at a concentration of 10 and 20 ug / ml. The relative quantification of the binding of the peptides in a double determination as absorption (AU = absorption unit) at 450 nm after deduction of the background absorption is shown.

2: ThT-Aggregationstest von A-Beta-1-42 zur Quantifizierung des relativen Fibrillengehalts in Gegenwart von DO3. Die Konzentration von A-Beta-Monomer betrug 10 μM, DO3 wurde im Verhältnis von 10:1, 2:1 und 1:1 (A-Beta-Monomere: DO3) sowie als Kontrolle einzeln in einer 1, 5 und 10 μM Konzentration gemessen. Die Fluoreszenz von 10 μM A-Beta-Monomer wurde als 100% gesetzt und die Werte und Standardabweichungen der übrigen Inkubationen sind als prozentuale Anteile dieses Maximalwerts angegeben. RFU: relative Fluoreszenzeinheiten 2 : ThT aggregation assay of A-beta-1-42 to quantify the relative fibril content in the presence of DO3. The concentration of A-beta monomer was 10 μM, DO3 was in the ratio of 10: 1, 2: 1 and 1: 1 (A-beta monomers: DO3) and as a control individually in a 1, 5 and 10 uM concentration measured. The fluorescence of 10 μM A-beta monomer was set at 100% and the values and standard deviations of the remaining incubations are given as percentages of this maximum value. RFU: relative fluorescence units

3: Zeitabhängige Messung der dynamischen Lichtstreuung von Aβ1-42 in Gegenwart von DO3. Dargestellt ist der hydrodynamische Radius der Partikel in Abhängigkeit von der Zeit. Rechts angegeben sind molare Verhältnisse von Aβ1-42 und DO3. 3 : Time-Dependent Measurement of Dynamic Light Scattering of Aβ1-42 in the Presence of DO3. Shown is the hydrodynamic radius of the particles as a function of time. On the right are molar ratios of Aβ1-42 and DO3.

4: Messung der Bindung von DO3 an A-Beta-Monomere (4a), Oligomere (4b) und Fibrillen 4c). Auf verschiedenen Flusszellen wurden jeweils N-terminal biotinylierte A-Beta-1-42-Monomere und Oligomere/Fibrillen (bestehend aus 10% N-terminal biotinyliertem A-Beta-Monomeren und 90% nicht-biotinyliertem A-Beta-Monomeren) immobilisiert. 4 : Measurement of the Binding of DO3 to A-Beta Monomers ( 4a ), Oligomers ( 4b ) and fibrils 4c ). N-terminally biotinylated A-beta-1-42 monomers and oligomers / fibrils (consisting of 10% N-terminally biotinylated A-beta monomer and 90% non-biotinylated A-beta monomer) were immobilized on different flow cells.

Die Messung erfolgte unter nativen Pufferbedingungen und bei 25°C bei einer Flussrate von 30 μl/min.The measurement was carried out under native buffer conditions and at 25 ° C at a flow rate of 30 μl / min.

ZITATE ENTHALTEN IN DER BESCHREIBUNG QUOTES INCLUDE IN THE DESCRIPTION

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Zitierte PatentliteraturCited patent literature

  • WO 02/081505 [0007] WO 02/081505 [0007]
  • WO 2011/147797 [0007] WO 2011/147797 [0007]

Zitierte Nicht-PatentliteraturCited non-patent literature

  • Smith, T. F. und Waterman, M. S (Adv. Appl. Math. 2: 482–489 (1981) [0014] Smith, TF and Waterman, M.S. (Adv. Appl. Math. 2: 482-489 (1981) [0014]
  • Needleman, S. B. und Wunsch, C. D. (J. Mol. Biol. 48: 443–453) [0014] Needleman, SB and Wunsch, CD (J. Mol. Biol. 48: 443-453). [0014]
  • Römpp Chemie Lexikon, 9. Auflage, Band 1, Seite 650 ff, Georg Thieme Verlag Stuttgart [0023] Römpp Chemie Lexikon, 9th edition, volume 1, page 650 ff, Georg Thieme Verlag Stuttgart [0023]

Claims (15)

Peptid, enthaltend mindestens eine Aminosäuresequenz ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus SEQ ID-Nr. ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 und Homologe, Fragmente und Teile davon und Polymere der SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 und deren Homologe.A peptide containing at least one amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO. ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 and homologs, fragments and parts thereof and polymers of SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 and their homologues. Peptide nach Anspruch 1 dadurch gekennzeichnet, dass diese mit einer weiteren Substanz verknüpft sind.Peptides according to claim 1, characterized in that they are linked to another substance. Peptid nach einem der vorangehenden Ansprüche zur Verwendung in der Medizin.A peptide according to any one of the preceding claims for use in medicine. Peptid nach einem der vorangehenden Ansprüche zur Behandlung der Morbus Alzheimer.Peptide according to one of the preceding claims for the treatment of Alzheimer's disease. Peptid nach einem der vorangehenden Ansprüche dadurch gekennzeichnet, dass es im Wesentlichen aus D-Aminosäuren besteht.Peptide according to one of the preceding claims, characterized in that it consists essentially of D-amino acids. Peptid nach einem der vorangehenden Ansprüche zur Hemmung der Fibrillenbildung von Amyloid-Beta-Peptiden.A peptide according to any one of the preceding claims for inhibiting fibril formation of amyloid beta peptides. Peptid nach einem der vorangehenden Ansprüche zur Bindung an aggregierte Amyloid-Beta-Peptide.A peptide according to any one of the preceding claims for binding to aggregated amyloid beta peptides. Verfahren zur Herstellung eines Peptids nach einem Ansprüche 1–7, dadurch gekennzeichnet, dass das Peptid durch Peptid-Synthese oder Mutagenese hergestellt wird.A process for the preparation of a peptide according to any one of claims 1-7, characterized in that the peptide is prepared by peptide synthesis or mutagenesis. KIT, enthaltend ein Peptid nach einem der Ansprüche 1–7.KIT containing a peptide according to any one of claims 1-7. Zusammensetzung enthaltend ein Peptid nach einem der Ansprüche 1–7.Composition containing a peptide according to any one of claims 1-7. Verwendung eines Peptids nach einem der Ansprüche 1–7 als Sonde zur Identifizierung, quantitativen und/oder qualitativen Bestimmung von Amyloid-Beta-Fibrillen und/oder Amyloid-Beta-Oligomeren.Use of a peptide according to any one of claims 1-7 as a probe for the identification, quantitative and / or qualitative determination of amyloid beta fibrils and / or amyloid beta oligomers. Verwendung eines Peptids nach einem der Ansprüche 1–7 zur Verhinderung von Amyloid-Beta-Oligomeren und/oder Amyloid-Beta-Peptidaggregaten.Use of a peptide according to any one of claims 1-7 for the prevention of amyloid beta oligomers and / or amyloid beta peptide aggregates. Verwendung eines Peptids nach einem der Ansprüche 1–7 zur Enttoxifizierung von toxischen Amyloid-Beta-Oligomeren und/oder Aggregaten.Use of a peptide according to any one of claims 1-7 for the de-toxification of toxic amyloid beta oligomers and / or aggregates. Verwendung nach Anspruch 13 dadurch gekennzeichnet, dass Amyloid-Beta-Oligomere und/oder Aggregate mit dem Peptid nach einem der Ansprüche 1–7 amorphe, nicht toxische Aggregate bilden.Use according to claim 13, characterized in that amyloid-beta-oligomers and / or aggregates with the peptide according to one of claims 1-7 form amorphous, non-toxic aggregates. Verwendung des Peptids nach einem der Ansprüche 1–7 als Therapeutikum und zur Prävention von Morbus Alzheimer.Use of the peptide according to any one of claims 1-7 as a therapeutic and for the prevention of Alzheimer's disease.
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