DE102012000956A1 - New rhizoxin derivatives useful as drugs, fungicides, cytostatic agents, and as cytotoxic agents - Google Patents

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Hans-Martin Dahse
Christian Hertweck
Heike Kirchner
Björn Kusebauch
Kirsten Scherlach
Heinz-Herbert Fiebig
Gerhard Kelter
Armin Maier
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Leibniz-Institut fur Naturstoff-Forschung und Infektionsbiologie
Leibniz Institut fuer Naturstoff Forschung und Infektionsbiol eVi
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Leibniz-Institut fur Naturstoff-Forschung und Infektionsbiologie
Leibniz Institut fuer Naturstoff Forschung und Infektionsbiol eVi
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    • C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
    • C07D493/02—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D493/08—Bridged systems

Abstract

Rhizoxin derivatives (I) are new. Rhizoxin derivatives of formula (I) or its salts or solvates are new. R1 : -CO 2-CH 2-CH(OH)-CH 2-OH or -CO-NR4R5; R2 : H or CH 3; and R4, R5 : H, 1-6C alkyl, 2-6C alkenyl, 3-8C carbocyclyl, aryl, 1-6C alkylaryl, 1-6C alkyl-3-8C carbocyclyl, 3-8C heterocyclyl or 1-6C alkyl-3-8C heterocyclyl. Independent claims are also included for: (1) preparation of (I); and (2) a combination preparation comprising (I), at least one further active substance, and optionally at least one carrier and/or at least one auxiliary. [Image] ACTIVITY : Fungicide; Cytostatic. The cytotoxic effect of (I) was tested in HeLa cells using an assay described in Krauth et al., Bioorg. Med. Chem. 2010, 18, 1816-1821 and Abdou et al. phytochemistry 2010, 71, 110-116. The results showed that 2,3-dihydroxypropyl-2-((1R,2S,4S,7E,10R,12R,13R,14E,16R)-2,12-dihydroxy-4-((2S,3R,4E,6E,8E)-3-methoxy-4,8-dimethyl-9-(2-methyloxazol-4-yl)nona-4,6,8-trien-2-yl)-1,13-dimethyl-6-oxo-5,17-dioxabicyclo[14.1.0]heptadeca-7,14-dien-10-yl)acetate exhibited (cytotoxicity concentration) 5 0value of 1x 10 -> 1> 0>+- 3.3x 10 -> 1> 1>mol/l. MECHANISM OF ACTION : None given.

Description

Gebiet der ErfindungField of the invention

Die Erfindung betrifft eine biologisch aktive Verbindung, nämlich ein Rhizoxinderivat, eine pharmazeutische Formulierung mit mindestens einer erfindungsgemäßen Rhizoxinverbindung, und deren Verwendung als Medikament, insbesondere als Antimykotikum (Fungizid), Zytostatikum oder zytotoxisches Mittel.The invention relates to a biologically active compound, namely a rhizoxine derivative, a pharmaceutical formulation with at least one rhizoxin compound according to the invention, and their use as medicaments, in particular as antimycotic (fungicide), cytostatic or cytotoxic agent.

Stand der TechnikState of the art

Das 16-gliedrige Makrolid Rhizoxin (1) ist eine Verbindung mit zellwachstumshemmender (antiproliferativer) Wirkung, welche zuerst aus Pilzen der Gattung Rhizopus isoliert wurde ( Iwasaki, S. et al. J. Antibiot., 1984, 37, 354–362 ).The 16-membered macrolide rhizoxin (1) is a compound with cell-growth-inhibiting (antiproliferative) activity, which was first isolated from fungi of the genus Rhizopus ( Iwasaki, S. et al. J. Antibiot., 1984, 37, 354-362 ).

Figure 00010001
Figure 00010001

Die Wirkung von Rhizoxin beruht auf der Hemmung der Mitose eukaryotischer Zellen, d. h. der Assemblierung von Mikrotubuli, durch Bindung an die β-Tubulin Untereinheit ( Takahashi, M. et al. Biochim. Biophys. Acta, 1987, 926, 215–223 ; Tsuruo, T. et al. Cancer Res., 1986, 46, 381–385 ). Partida-Martinez und Hertweck (Nature, 2005, 437, 884–888) zeigten, dass Rhizoxin nicht von Rhizopus gebildet wird, sondern vom bakteriellen Endosymbionten Burkholderia rhizoxinica des Pilzes, der im Cytosol des Pilzes lebt.The effect of rhizoxin is based on the inhibition of the mitosis of eukaryotic cells, ie the assembly of microtubules, by binding to the β-tubulin subunit ( Takahashi, M. et al. Biochim. Biophys. Acta, 1987, 926, 215-223 ; Tsuruo, T. et al. Cancer Res., 1986, 46, 381-385 ). Partida-Martinez and Hertweck (Nature, 2005, 437, 884-888) showed that Rhizoxin is not produced by Rhizopus, but by the bacterial endosymbiont Burkholderia rhizoxinica of the fungus, which lives in the cytosol of the fungus.

Rhizoxin und Derivate von Rhizoxin sind beispielsweise bekannt aus JP 06193186 A , JP 03101680 A und EP 1940848 B1 . DE 10 2005 026 417 B3 und EP 1940848 B1 offenbaren Verfahren zur Herstellung von Rhizoxin und Derivaten von Rhizoxin, in denen der Stamm Burkholderia rhizoxina DSM 17360 oder andere Endosymbionten der Gattung Burkholderia eingesetzt werden, um Rhizoxin und/oder Derivate von Rhizoxin aus dem Kulturüberstand der Bakterien zu isolieren oder durch Semisynthese herzustellen. Ein Problem von Rhizoxin bzw. der bekannten Derivate von Rhizoxin ist deren geringe Bioverfügbarkeit, insbesondere geringe Stabilität und Löslichkeit.Rhizoxin and derivatives of rhizoxin are known, for example JP 06193186 A . JP 03101680 A and EP 1940848 B1 , DE 10 2005 026 417 B3 and EP 1940848 B1 disclose processes for the production of rhizoxin and derivatives of rhizoxin in which the strain Burkholderia rhizoxina DSM 17360 or other endosymbionts of the genus Burkholderia are used to isolate or by semisynthesis produce rhizoxin and / or derivatives of rhizoxin from the culture supernatant of the bacteria. A problem of rhizoxin or of the known derivatives of rhizoxin is their low bioavailability, in particular low stability and solubility.

Das zunehmende Auftreten von Resistenzen gegenüber Antibiotika und Fungiziden stellt ein großes Problem dar. Auch gibt es trotz intensiver Forschung immer noch keine wirksame Behandlung für viele Krebsarten. Maligne Tumore sind nach wie vor eine der häufigsten Todesursachen. Entsprechend gibt es ein großes Bedürfnis für neue Verbindungen mit antimikrobieller Wirkung, insbesondere fungizider Wirkung, und/oder Antitumoraktivität.The increasing occurrence of resistance to antibiotics and fungicides is a major problem. Also, despite intensive research, there is still no effective treatment for many cancers. Malignant tumors are still one of the leading causes of death. Accordingly, there is a great need for new compounds with antimicrobial activity, in particular fungicidal activity, and / or antitumor activity.

Ziel der vorliegenden Erfindung war die Bereitstellung neuer Rhizoxinverbindungen mit verbesserten Eigenschaften, insbesondere verbesserter Stabilität und Löslichkeit.The aim of the present invention was to provide novel rhizoxin compounds having improved properties, in particular improved stability and solubility.

Beschreibung der ErfindungDescription of the invention

Die Erfindung betrifft neue Verbindungen von Rhizoxin mit verbesserten Eigenschaften.The invention relates to novel compounds of rhizoxin with improved properties.

Hierzu stellt die vorliegende Erfindung eine Verbindung der Formel (I):

Figure 00020001
oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz oder Solvat derselben bereit, wobei
R1 -CO2CH2CH(OH)CH2OH oder -CONR4R5 ist;
R2 ein Wasserstoffatom oder eine Methylgruppe ist; und
R4 und R5 jeweils unabhängig voneinander ausgewählt sind aus Wasserstoffatom, -C1-C6 Alkyl, -C2-C6 Alkenyl, -C3-C8 Carbocyclus, -Aryl, -C1-C6 Alkylaryl, -C1-C6 Alkyl-(C3-C8 Carbocyclus), -C3-C8 Heterocyclus, und -C1-C6 Alkyl(C3-C8 Heterocyclus).For this purpose, the present invention provides a compound of the formula (I):
Figure 00020001
or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof, wherein
R 1 is -CO 2 CH 2 CH (OH) CH 2 OH or -CONR 4 R 5 ;
R 2 is a hydrogen atom or a methyl group; and
R 4 and R 5 are each independently selected from hydrogen, -C 1 -C 6 alkyl, -C 2 -C 6 alkenyl, -C 3 -C 8 carbocyclic, -aryl, -C 1 -C 6 alkylaryl, -C C 1 -C 6 alkyl (C 3 -C 8 carbocycle), C 3 -C 8 heterocycle, and C 1 -C 6 alkyl (C 3 -C 8 heterocycle).

Der Ausdruck ”-C1-C5 Alkyl”, wie er hierin verwendet wird, bezeichnet eine gesättigte, geradkettige oder verzweigte, optional substituierte, Kohlenwasserstoffgruppe, die 1 bis 6 Kohlenstoffatome aufweist. Repräsentative ”-C1-C6 Alkyl” Reste sind, z. B. die Methyl-, Ethyl-, Propyl-, Isopropyl-, n-Butyl-, sec-Butyl-, Isobutyl-, tert-Butyl-, n-Pentyl-, -Isoperityl-, 2-Methylbutyl-, und die n-Hexyl-Gruppe.The term "-C 1 -C 5 alkyl" as used herein refers to a saturated, straight-chain or branched, optionally-substituted, hydrocarbon group having 1 to 6 carbon atoms. Representative "-C 1 -C 6 alkyl" radicals are, for. As the methyl, ethyl, propyl, isopropyl, n-butyl, sec-butyl, isobutyl, tert-butyl, n-pentyl, -Isoperityl-, 2-methylbutyl, and the n hexyl group.

Der Ausdruck ”-C2-C6 Alkenyl”, wie er hierin verwendet wird, bezeichnet eine zumindest teilweise ungesättigte, geradkettige oder verzweigte, optional substituierte Kohlenwasserstoffgruppe, die 2 bis 6 Kohlenstoffatome aufweist. Repräsentative ”-C2-C6 Alkenyl” Reste sind, z. B. die Vinyl-, Allyl-, 1-Butenyl, 2-Butenyl-, -Isobutylenyl-, 1-Pentenyl-, 2-Pentenyl-, 3-Methyl-1-butenyl-, 2-Methyl-2-butenyl-, 2,3-Dimethyl-2-butenyl-Ethenyl-, oder Hex-2-enyl-Gruppe. Bevorzugt weisen Alkenylgruppen eine oder zwei (besonders bevorzugt eine) Doppelbindungen auf.The term "-C 2 -C 6 alkenyl" as used herein refers to an at least partially unsaturated, straight-chain or branched, optionally-substituted hydrocarbon group having from 2 to 6 carbon atoms. Representative "-C 2 -C 6 alkenyl" radicals are, e.g. The vinyl, allyl, 1-butenyl, 2-butenyl, isobutylenyl, 1-pentenyl, 2-pentenyl, 3-methyl-1-butenyl, 2-methyl-2-butenyl, 2,3-dimethyl-2-butenyl-ethenyl, or hex-2-enyl group. Alkenyl groups preferably have one or two (particularly preferably one) double bonds.

Der Ausdruck ”-C3-C8 Carbocyclus”, wie er hierin verwendet wird, bezeichnet eine gesättigte oder teilweise ungesättigte (z. B. Cycloalkenyl), cyclische Gruppe, die einen oder mehrere Ringe (bevorzugt 1 oder 2) aufweist, und 3, 4, 5, 6, 7 oder 8 Ringkohlenstoffatome enthält. Repräsentative ”-C3-C8 Carbocyclus” Reste sind, z. B. die Cyclopropyl-, Cyclobutyl-, Cyclopentyl-, Cyclopentadienyl-, Cyclohexyl-, Cyclohexenyl, 1,3-Cyclohexadienyl-, und die 1,4-Cyclohexadienyl-Gruppe. Der Ausdruck ”-C3-C8 Carbocyclus” bezieht sich weiterhin auf Gruppen, bei denen ein oder mehrere Wasserstoffatom(e) durch ein oder mehrere Fluor-, Chlor-, Brom- oder Jodatom(e), OH, =O, SH, =S, NH2, =NH, NO2, -C(O)R', -OC(O)R', -C(O)OR', -C(O)NH2, -C(O)NHR', -C(O)N(R')2, -NHC(O)R', -S(O)2R', -S(O)R', -N3, -NH(R'), N(R')2 oder -CN ersetzt ist/sind, wobei jedes R' jeweils unabhängig ausgewählt ist aus -C1-C6 Alkyl. Weitere repräsentative ”-C3-C8 Carbocyclus” Reste sind also z. B. Fluorcyclohexyl oder cyclische Ketone, wie z. B. Cyclohexanon, 2-Cyclohexenon, und Cyclopentanon.The term "-C 3 -C 8 carbocycle" as used herein refers to a saturated or partially unsaturated (eg, cycloalkenyl), cyclic group having one or more rings (preferably 1 or 2), and 3 , 4, 5, 6, 7 or 8 ring carbon atoms. Representative "-C 3 -C 8 carbocyclic" radicals are, for. The cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclopentadienyl, cyclohexyl, cyclohexenyl, 1,3-cyclohexadienyl, and 1,4-cyclohexadienyl groups. The term "-C 3 -C 8 carbocycle" further refers to groups in which one or more hydrogen atoms are substituted by one or more fluorine, chlorine, bromine or iodine atom (s), OH, = O, SH , = S, NH 2 , = NH, NO 2 , -C (O) R ', -OC (O) R', -C (O) OR ', -C (O) NH 2 , -C (O) NHR ', -C (O) N (R') 2 , -NHC (O) R ', -S (O) 2 R', -S (O) R ', -N3, -NH (R'), N (R ') 2 or -CN is replaced, wherein each R' is independently selected from each of C 1 -C 6 alkyl. Further representative "-C 3 -C 8 carbocyclic" radicals are thus z. As fluorocyclohexyl or cyclic ketones, such as. As cyclohexanone, 2-cyclohexenone, and cyclopentanone.

Der Ausdruck ”-C3-C8 Heterocyclus”, wie er hierin verwendet wird, bezeichnet einen aromatischen oder nicht-aromatischen C3-C8 Carbocyclus, wobei ein oder mehrere (bevorzugt 1, 2 oder 3) Ringkohlenstoffatome, unabhängig voneinander, durch ein Sauerstoff-, Stickstoff-, Silizium-, Selen-, Phosphor- oder Schwefelatom (bevorzugt Sauerstoff, Schwefel oder Stickstoff) ersetzt ist/sind. Der Ausdruck ”-C3-C8 Heterocyclus” bezieht sich weiterhin auf Gruppen, bei denen ein oder mehrere Wasserstoffatom(e) durch ein oder mehrere Fluor-, Chlor-, Brom- oder Jodatom(e), OH, =O, SH, =S, NH2, =NH, NO2, -C(O)R', -OC(O)R', -C(O)OR', -C(O)NH2, -C(O)NHR', -C(O)N(R')2, -NHC(O)R', -S(O)2R', S(O)R', -N3, -NH(R'), -N(R')2 oder -CN ersetzt ist/sind, wobei jedes R' jeweils unabhängig ausgewählt ist aus -C1-C6 Alkyl. Repräsentative ”-C3-C8 Heterocyclus” Reste sind z. B. Piperidyl, Piperazinyl, Morpholinyl, Urotropinyl, Pyrrolidinyl, Tetrahydrothiophenyl, Tetrahydropyranyl, Tetrahydrofuryl, 2-Pyrazolinyl, Lactame, Lactone, cyclische Imide, cyclische Anhydride, Benzofuranyl, Benzothiophen, Indolyl, Benzopyrazolyl, Coumarinyl, Isoquinolinyl, Pyrrolyl, Thiophenyl, Furanyl, Thiazolyl, Imidazolyl, Pyrazolyl, Triazolyl, Quinolinyl, Pyrimidinyl, Pyridinyl, Pyridonyl, Pyrazinyl, Pyridazinyl, Isothiazolyl, Isoxazolyl und Tetrazolyl.The term "-C 3 -C 8 heterocycle" as used herein refers to an aromatic or non-aromatic C 3 -C 8 carbocycle wherein one or more (preferably 1, 2 or 3) ring carbon atoms, independently of one another, are substituted by an oxygen, nitrogen, silicon, selenium, phosphorus or sulfur atom (preferably oxygen, sulfur or nitrogen) is / are replaced. The term "-C 3 -C 8 heterocycle" further refers to groups in which one or more hydrogen atoms are substituted by one or more fluorine, chlorine, bromine or iodine atom (s), OH, OO, SH , = S, NH 2 , = NH, NO 2 , -C (O) R ', -OC (O) R', -C (O) OR ', -C (O) NH 2 , -C (O) NHR ', -C (O) N (R') 2 , -NHC (O) R ', -S (O) 2 R', S (O) R ', -N3, -NH (R'), -N (R ') 2 or -CN is replaced, wherein each R' is independently selected from each of C 1 -C 6 alkyl. Representative "-C 3 -C 8 heterocycle" radicals are, for. B. piperidyl, piperazinyl, morpholinyl, urotropinyl, pyrrolidinyl, tetrahydrothiophenyl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuryl, 2-pyrazolinyl, lactams, lactones, cyclic imides, cyclic anhydrides, benzofuranyl, benzothiophene, indolyl, benzopyrazolyl, coumarinyl, isoquinolinyl, pyrrolyl, thiophenyl, furanyl, Thiazolyl, imidazolyl, pyrazolyl, triazolyl, quinolinyl, pyrimidinyl, pyridinyl, pyridonyl, pyrazinyl, pyridazinyl, isothiazolyl, isoxazolyl and tetrazolyl.

Der Ausdruck ”-C1-C6 Alkyl-(C3-C8 Carbocyclus)” und ”-C1-C6 Alkyl(C3-C8 Heterocyclus)”, wie er hierin verwendet wird, bezeichnet Gruppen, die entsprechend den vorstehenden Definitionen sowohl -C1-C6 Alkyl als auch C3-C8 Carbocyclus bzw. C3-C8 Heterocyclus Gruppen enthalten. The term "-C 1 -C 6 alkyl- (C 3 -C 8 carbocyclic)" and "-C 1 -C 6 alkyl (C 3 -C 8 heterocycle)" as used herein refers to groups corresponding to the above definitions contain both C 1 -C 6 alkyl and C 3 -C 8 carbocyclic or C 3 -C 8 heterocycle groups.

Der Ausdruck ”-Aryl”, wie er hierin verwendet wird, bezeichnet eine aromatische Gruppe, die einen oder mehrere Ringe aufweist, und 6 bis 14 Ringkohlenstoffatome, vorzugsweise 6 bis 10 (insbesondere 6) Ringkohlenstoffatome enthält. Der Ausdruck Aryl bezieht sich weiterhin auf Gruppen, bei denen ein oder mehrere Wasserstoffatom(e) durch ein oder mehrere Fluor-, Chlor-, Brom- oder Jodatom(e), OH, =O, SH, =S, NH2, =NH, NO2, -C(O)R', -OC(O)R', -C(O)OR', -C(O)NH2, -C(O)NHR', -C(O)N(R')2, -NHC(O)R', -S(O)2R', -S(O)R', -N3, -NH(R'), -N(R')2 oder -CN ersetzt ist/sind, wobei jedes R' jeweils unabhängig ausgewählt ist aus -C1-C6 Alkyl. Beispiele sind die Phenyl, Naphthyl, Biphenyl, 2-Fluorphenyl, Anilinyl, 3-Nitrophenyl und 4-Hydroxyphenyl.The term "-aryl" as used herein refers to an aromatic group having one or more rings and containing 6 to 14 ring carbon atoms, preferably 6 to 10 (especially 6) ring carbon atoms. The term aryl furthermore refers to groups in which one or more hydrogen atom (s) is replaced by one or more fluorine, chlorine, bromine or iodine atom (s), OH, OO, SH, SS, NH 2 ,. NH, NO 2 , -C (O) R ', -OC (O) R', -C (O) OR ', -C (O) NH 2 , -C (O) NHR', -C (O) N (R ') 2 , -NHC (O) R', -S (O) 2 R ', -S (O) R', -N3, -NH (R '), -N (R') 2 or - CN is replaced, each R 'is independently selected from -C 1 -C 6 alkyl. Examples are the phenyl, naphthyl, biphenyl, 2-fluorophenyl, anilinyl, 3-nitrophenyl and 4-hydroxyphenyl.

Der Ausdruck ”-C1-C6 Alkylaryl”, wie er hierin verwendet wird, bezeichnet Gruppen, die entsprechend den vorstehenden Definitionen sowohl Aryl- als auch Alkylgruppen enthalten. Beispiele sind Toluol, Xylol, Mesitylen, Benzylchlorid, o-Fluortoluol, 1H-Inden. The term "-C 1 -C 6 alkylaryl" as used herein refers to groups containing both aryl and alkyl groups as defined above. Examples are toluene, xylene, mesitylene, benzyl chloride, o-fluorotoluene, 1H-indene.

Der Ausdruck ”optional substituiert”, wie er hierin verwendet wird, bezeichnet Gruppen, in denen ein oder mehrere Wasserstoffatom(e) durch ein oder mehrere Fluor-, Chlor-, Brom- oder Jodatom(e), OH, =O, SH, =S, NH2, =NH, NO2, -C(O)R', -OC(O)R', -C(O)OR', -C(O)NH2, -C(O)NHR', -C(O)N(R')2, -NHC(O)R', -S(O)2R', -S(O)R', -N3, -NH(R'), -N(R')2 oder -CN ersetzt ist/sind, wobei jedes R' jeweils unabhängig ausgewählt ist aus unsubstituiertem C1-C6 Alkyl.The term "optionally substituted" as used herein refers to groups in which one or more hydrogen atom (s) is represented by one or more fluorine, chlorine, bromine or iodine atom (s), OH, = O, SH, = S, NH 2 , = NH, NO 2 , -C (O) R ', -OC (O) R', -C (O) OR ', -C (O) NH 2 , -C (O) NHR' , -C (O) N (R ') 2 , -NHC (O) R', -S (O) 2 R ', -S (O) R', -N3, -NH (R '), -N (R ') 2 or -CN is replaced, wherein each R' is independently selected from unsubstituted C 1 -C 6 alkyl.

Bevorzugt ist eine Verbindung oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz oder Solvat der Verbindung der Formel I, wobei R1 -CO2CH2CH(OH)CH2OH ist. Insbesondere eine Verbindung oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz oder Solvat der Verbindung, in der R1 -CO2CH2CH(OH)CH2OH und R2 eine Methylgruppe ist.Preferred is a compound or a pharmaceutically acceptable salt or solvate of the compound of formula I wherein R 1 is -CO 2 CH 2 CH (OH) CH 2 OH. In particular, a compound or a pharmaceutically acceptable salt or solvate of the compound wherein R 1 is -CO 2 CH 2 CH (OH) CH 2 OH and R 2 is a methyl group.

Ebenfalls bevorzugt ist eine Verbindung oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz oder Solvat der Verbindung der Formel (I), wobei R1 -CONR4R5 ist. Insbesondere eine Verbindung oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz oder Solvat der Verbindung, in der R1 -CONR4R5 und R2 eine Methylgruppe ist.Also preferred is a compound or pharmaceutically acceptable salt or solvate of the compound of formula (I) wherein R 1 is -CONR 4 R 5 . In particular, a compound or a pharmaceutically acceptable salt or solvate of the compound wherein R 1 -CONR 4 R 5 and R 2 is a methyl group.

Besonders bevorzugt ist eine Verbindung oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz oder Solvat der Verbindung der Formel (I), ausgewählt aus:

Figure 00050001
wobei
R4 H ist und R5 H, CH3, CH2CH3, CH2CH=CH2, oder CH2Ph ist; oder R4 und R5 jeweils CH3 oder CH2CH3 sind.Particularly preferred is a compound or a pharmaceutically acceptable salt or solvate of the compound of formula (I) selected from:
Figure 00050001
in which
R 4 is H and R 5 is H, CH 3 , CH 2 CH 3 , CH 2 CH = CH 2 , or CH 2 Ph; or R 4 and R 5 are each CH 3 or CH 2 CH 3 .

Bevorzugt ist auch eine Verbindung oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz oder Solvat der Verbindung der Formel (I), wobei die Verbindung ein NMR-Spektrum gemäß den Tabellen 1 bis 5 aufweist.Preference is also given to a compound or a pharmaceutically acceptable salt or solvate of the compound of the formula (I), the compound having an NMR spectrum according to Tables 1 to 5.

Darüber hinaus betrifft die Erfindung auch ein Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (I) gemäß den vorstehenden Ausführungen, umfassend den Schritt:

  • (i) einer Umesterung unter Verwendung von Kaliumcyanid als Katalysator zur Herstellung von Rhizoxinestern; oder
  • (ii) einer Aminolyse unter Verwendung von Kaliumcyanid als Katalysator zur Herstellung von primären und sekundären Rhizoxinamiden; oder
  • (iii) einer Amidierung unter Verwendung von 4-(Dimethylamino)pyridin, N-Hydroxysuccinimid, und 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid zur Herstellung von tertiären und ungesättigten Rhizoxinamiden.
Moreover, the invention also relates to a process for the preparation of a compound of the formula (I) according to the above statements, comprising the step:
  • (i) transesterification using potassium cyanide as a catalyst to produce rhizoxin esters; or
  • (ii) an aminolysis using potassium cyanide as a catalyst to produce primary and secondary rhizoxinamides; or
  • (iii) amidation using 4- (dimethylamino) pyridine, N-hydroxysuccinimide, and 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide to prepare tertiary and unsaturated rhizoxinamides.

Die therapeutische Verwendung der Verbindung der Formel (I), ihrer pharmakologisch akzeptablen Salze bzw. Solvate sowie Formulierungen und pharmazeutischen Zusammensetzungen liegen ebenfalls im Rahmen der vorliegenden Erfindung.The therapeutic use of the compound of formula (I), its pharmacologically acceptable salts or solvates as well as formulations and pharmaceutical compositions are also within the scope of the present invention.

Eine erfindungsgemäße pharmazeutische Formulierung umfasst mindestens eine Verbindung gemäß der Formel (I) und, optional, mindestens einen Träger und/oder mindestens einen Hilfsstoff.A pharmaceutical formulation according to the invention comprises at least one compound according to the formula (I) and, optionally, at least one carrier and / or at least one excipient.

Beispiele für pharmakologisch akzeptable Salze der Verbindung der Formel (I) sind Salze von physiologisch akzeptablen Mineralsäuren wie Salzsäure, Schwefelsäure und Phosphorsäure oder Salze von organischen Säuren wie Methansulfonsäure, p-Toluolsulfonsäure, Milchsäure, Essigsäure, Trifluoressigsäure, Zitronensäure, Bernsteinsäure, Fumarsäure, Maleinsäure und Salicylsäure. Weitere Beispiele für pharmakologisch akzeptable Salze der Verbindungen der Formeln (I) sind Alkali- oder Erdalkalisalze wie z. B. Natrium, Kalium, Lithium, Calcium oder Magnesium Salze, Ammoniumsalze oder Salze von organischen Basen wie z. B. Methylamin, Dimethylamin, Triethylamin, Piperidin, Ethylendiamin, Lysin, Cholinhydroxid, Meglumin, Morpholin oder Arginin. Verbindungen der Formel (I) können solvatisiert, insbesondere hydratisiert sein. Die Hydratisierung kann z. B. während des Herstellungsverfahrens oder als Folge der hygroskopischen Natur der anfänglich wasserfreien Verbindungen der Formel (I) auftreten. Wenn die Verbindung der Formel (I) asymmetrische C-Atome enthält, kann sie entweder als achirale Verbindung Diastereomeren-Gemisch, Gemisch von Enantiomeren oder als optisch reine Verbindung vorliegen.Examples of pharmacologically acceptable salts of the compound of the formula (I) are salts of physiologically acceptable mineral acids such as hydrochloric acid, sulfuric acid and phosphoric acid or salts of organic acids such as methanesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid, lactic acid, acetic acid, trifluoroacetic acid, citric acid, succinic acid, fumaric acid, maleic acid and salicylic acid. Further examples of pharmacologically acceptable salts of the compounds of the formula (I) are alkali metal or alkaline earth metal salts, such as. For example, sodium, potassium, lithium, calcium or magnesium salts, ammonium salts or salts of organic bases such. As methylamine, dimethylamine, triethylamine, piperidine, ethylenediamine, lysine, choline hydroxide, meglumine, morpholine or arginine. Compounds of formula (I) may be solvated, in particular hydrated. The hydration can z. B. occur during the manufacturing process or as a result of the hygroscopic nature of the initially anhydrous compounds of formula (I). When the compound of the formula (I) contains asymmetric C atoms, it may be present either as an achiral compound diastereomeric mixture, a mixture of enantiomers or as an optically pure compound.

Auch die Verwendung der Verbindung gemäß der Formel (1) oder der erfindungsgemäßen pharmazeutischen Formulierung als Arzneimittel ist Gegenstand der vorliegenden Erfindung. Im allgemeinen wird die Verbindung der Formel (I) unter Anwendung der bekannten und akzeptablen Modi, entweder einzeln oder in Kombination mit einem beliebigen anderen therapeutischen Mittel verabreicht. Solche therapeutisch nützlichen Mittel können auf einem der folgenden Wege verabreicht werden: oral, z. B. als Dragees, überzogene Tabletten, Pillen, Halbfeststoffe, weiche oder harte Kapseln, Lösungen, Emulsionen oder Suspensionen; parenteral, z. B. als injizierbare Lösung oder Infusion; rektal als Suppositorien; durch Inhalation, z. B. als Pulverformulierung oder Spray, transdermal oder intranasal. Zur Herstellung solcher Tabletten, Pillen, Halbfeststoffe, überzogenen Tabletten, Dragees und harten Gelatinekapseln kann das therapeutisch verwendbare Produkt mit pharmakologisch inerten, anorganischen oder organischen Arzneimittelträgersubstanzen vermischt werden, z. B. mit Mannit, Lactose, Sucrose, Glucose, Gelatine, Malz, Silicagel, Stärke oder Derivaten derselben, Talkum, Stearinsäure oder ihren Salzen, Trockenmagermilch und dgl. Zur Herstellung von weichen Kapseln kann man Arzneimittelträgerstoffe wie z. B. pflanzliche Öle, Petroleum, tierische oder synthetische Öle, Wachs, Fett, Polyole einsetzen. Zur Herstellung von flüssigen Lösungen und Sirups kann man Arzneimittelträgerstoffe wie z. B. Wasser, Alkohole, wässrige Salzlösung, wässrige Dextrose, Polyole, Glycerin, pflanzliche Öle, Petroleum, tierische oder synthetische Öle verwenden. Für Suppositorien kann man Arzneimittelträgerstoffe wie z. B. pflanzliche Öle, Petroleum, tierische oder synthetische Öle, Wachs, Fett und Polyole verwenden. Für Aerosol-Formulierungen kann man komprimierte Gase, die für diesen Zweck geeignet sind, wie z. B. Sauerstoff, Stickstoff und Kohlendioxid einsetzen. Die pharmazeutisch verwendbaren Mittel können auch Zusatzstoffe zur Konservierung, Stabilisierung, Emulgatoren, Süßstoffe, Aromastoffe, Salze zur Veränderung des osmotischen Drucks, Puffer, Umhüllungszusatzstoffe und Antioxidantien enthalten.Also, the use of the compound according to the formula (1) or the pharmaceutical formulation of the invention as a pharmaceutical is the subject of the present invention. In general, the compound of formula (I) will be administered using the known and acceptable modes, either alone or in combination with any other therapeutic agent. Such therapeutically useful agents may be administered by one of the following routes: orally, e.g. As dragees, coated tablets, pills, semi-solids, soft or hard capsules, solutions, emulsions or suspensions; parenteral, e.g. As an injectable solution or infusion; rectally as suppositories; by inhalation, z. As a powder formulation or spray, transdermal or intranasal. For the preparation of such tablets, pills, semi-solids, coated tablets, dragees and hard gelatin capsules, the therapeutically useful product can be mixed with pharmacologically inert, inorganic or organic excipients, for. With mannitol, lactose, sucrose, glucose, gelatin, malt, silica gel, starch or derivatives thereof, talc, stearic acid or its salts, dry skimmed milk and the like. For the preparation of soft capsules, excipients such as. As vegetable oils, petroleum, animal or synthetic oils, wax, fat, use polyols. For the preparation of liquid solutions and syrups can be drug carriers such. As water, alcohols, aqueous salt solution, aqueous dextrose, polyols, glycerol, vegetable oils, petroleum, animal or synthetic oils use. For suppositories can be drug carriers such. As vegetable oils, petroleum, animal or synthetic oils, wax, fat and polyols use. For aerosol formulations can be compressed gases that are suitable for this purpose, such as. As oxygen, nitrogen and carbon dioxide use. The pharmaceutically acceptable agents may also contain preservatives, stabilizers, emulsifiers, sweeteners, flavoring agents, osmotic pressure varying salts, buffers, coating additives and antioxidants.

Die Verbindung der allgemeinen Formel (I) weist verbesserte Eigenschaften im Vergleich zu vergleichbaren Verbindungen auf, die im Stand der Technik bekannt sind. Besonders sind hier eine bessere Löslichkeit und verbesserte pharmakokinetische Eigenschaften zu nennen.The compound of the general formula (I) has improved properties as compared with comparable compounds known in the art. Particularly noteworthy here are better solubility and improved pharmacokinetic properties.

Die erfindungsgemäße pharmazeutische Formulierung kann auch als Kombinationspräparat vorliegen, welches mindestens eine erfindungsgemäße Verbindung und mindestens einen weiteren Wirkstoff enthält. Kombinationspräparate mit anderen Wirkstoffen können andere antimikrobielle, antifungale, sowie antitumorale Wirkstoffe beinhalten.The pharmaceutical formulation of the invention may also be present as a combination preparation which contains at least one compound according to the invention and at least one further active ingredient. Combination preparations containing other agents may include other antimicrobial, antifungal, and antitumour agents.

Die erfindungsgemäße Verbindung der allgemeinen Formal (I) besitzt eine sehr starke antiproliferative und zytotoxische Wirkung und eignet sich damit sehr gut zur Anwendung als Chemotherapeutikum zur Behandlung von Krebserkrankungen. Insbesondere kann die erfindungsgemäße Verbindung der allgemeinen Formel (I) als zytostatisches Mittel verwendet werden. Die erfindungsgemäße Verbindung der allgemeinen Formel (I) kann aber auch als zytotoxisches Mittel verwendet werden. Zytostatisches Mittel bezeichnet ein Mittel, dass das Wachstum von Zellen hemmt, während ein zytotoxisches Mittel die Zellen direkt schädigt bzw. tötet. The compound of the general formula (I) according to the invention has a very strong antiproliferative and cytotoxic action and is thus very well suited for use as a chemotherapeutic agent for the treatment of cancers. In particular, the compound of the general formula (I) according to the invention can be used as a cytostatic agent. However, the compound of the general formula (I) according to the invention can also be used as a cytotoxic agent. Cytostatic agent refers to an agent that inhibits the growth of cells while a cytotoxic agent directly kills or kills the cells.

Aufgrund ihrer antimykotischen Wirkung ist die erfindungsgemäße Verbindung der allgemeinen Formel (I) auch zur Verwendung als Fungizid zur Therapie von Pilzinfektionen geeignet.Because of its antifungal activity, the compound of the general formula (I) according to the invention is also suitable for use as a fungicide for the treatment of fungal infections.

Zur Vorbeugung und/oder Behandlung der oben beschriebenen Erkrankungen kann die Dosis der erfindungsgemäßen biologisch aktiven Verbindung innerhalb breiter Grenzen variieren und kann auf den individuellen Bedarf des zu behandelnden Patienten eingestellt werden.For the prevention and / or treatment of the diseases described above, the dose of the biologically active compound of the invention may vary within wide limits and may be adjusted to the individual needs of the patient to be treated.

Kurze Beschreibung der FigurenBrief description of the figures

1: Dosis-Wirkungskurve für die Aktivität des Glycerolesters 4, des primären Amids 13 und des Dimethylamids 16 gegen K-562 Zellen. Wie der 1 zu entnehmen ist, zeigen die erfindungsgemäßen Rhizoxinderivate eine antiproliferative Wirkung über einen großen Konzentrationsbereich. 1 : Dose-response curve for the activity of glycerol ester 4, primary amide 13 and dimethylamide 16 against K-562 cells. Again 1 it can be seen, the rhizoxine derivatives of the invention show an antiproliferative effect over a large concentration range.

2: Dosis-Wirkungskurven für die Aktivität des Glycerolesters 4. Wie der 2 zu entnehmen ist, zeigt der Glycerolester 4 eine antiproliferative Wirkung im nanomolaren Bereich. 2 : Dose-response curves for the activity of the glycerol ester 4. How the 2 can be seen, the glycerol ester 4 shows an antiproliferative effect in the nanomolar range.

Nachfolgend wird die vorliegende Erfindung anhand von Beispielen erläutert.Hereinafter, the present invention will be explained by way of examples.

BeispieleExamples

AllgemeinesGeneral

NMR-Spektren wurden aufgenommen mit Bruker Avance DRX 500 und 600 Instrumenten. Als interner Standard diente das verwendete Lösungsmittel. HPLC-MS Analysen wurden durchgeführt mit einem Gerät Agilent Technologies 1100 Series LC/MSD, ausgerüstet mit einem DAD (Diodenarray-Detektor), einer Elektrospray-Quelle, und einem Quadrupol-Massenanalysator (Eclipse Plus C18, 3.5 μm, 3.0 × 150 mm, Flußrate 0.6 mL min–1, Elutionsgradient MeCN/0.1% HCO2H-H2O 25/75 3 min, in 7 min bis MeCN/0.1% HCO2H-H2O 40/60, in 15 min bis MeCN/0.1% HCO2H-H2O 80/20, in 2 min bis MeCN/0.1% HCO2H-H2O 98/2). Präparative HPLC wurde durchgeführt mit einem HPLC-System, bestehend aus einem Shimadzu 20A ”Prominence DAD” und Shimadzu 8Avp Pumpen. HRESI-MS wurde durchgeführt mit einem Thermo Fisher TSQ Quantum Ultra AM sowie einem Thermo Fisher Exactive, beide ausgestattet mit einer Elektrospray-Quelle. Flash-Chromatographie wurde durchgeführt unter Verwendung von Silicagel 60 (0.015–0.04 mm). Kaliumcyanid und 4 Å Molekularsiebe wurden getrocknet im Hochvakuum bei 300°C. Dichlormethan wurde destilliert über Calciumhydrid. Alle anderen Chemikalien und Lösungsmittel wurden eingesetzt, wie vom Hersteller bezogen. Umsetzungen erfolgten in ausgeheizten Glasgefäßen unter Argon-Atmosphäre.NMR spectra were recorded on Bruker Avance DRX 500 and 600 instruments. The internal standard used was the solvent used. HPLC-MS analyzes were performed on an Agilent Technologies 1100 Series LC / MSD instrument equipped with a DAD (Diode Array Detector), an electrospray source, and a quadrupole mass analyzer (Eclipse Plus C18, 3.5 μm, 3.0 x 150 mm, Flow rate 0.6 mL min -1 , elution gradient MeCN / 0.1% HCO 2 HH 2 O 25/75 3 min, in 7 min to MeCN / 0.1% HCO 2 HH 2 O 40/60, in 15 min to MeCN / 0.1% HCO 2 HH 2 O 80/20, in 2 min to MeCN / 0.1% HCO 2 HH 2 O 98/2). Preparative HPLC was performed on an HPLC system consisting of a Shimadzu 20A "Prominence DAD" and Shimadzu 8Avp pumps. HRESI-MS was performed with a Thermo Fisher TSQ Quantum Ultra AM and a Thermo Fisher Exactive, both equipped with an electrospray source. Flash chromatography was performed using silica gel 60 (0.015-0.04 mm). Potassium cyanide and 4 Å molecular sieves were dried under high vacuum at 300 ° C. Dichloromethane was distilled over calcium hydride. All other chemicals and solvents were used as purchased from the manufacturer. Reactions were carried out in heated glass vessels under an argon atmosphere.

Die Fermentation von Burkholderia rhizoxinica B4 sowie die Extraktion und Isolierung von Rhizoxin M2 und Rhizoxin S2 wurden durchgeführt, wie in Scherlach et al., J. Am. Chem. Soc. 2006, 128, 11529–11536 beschrieben.The fermentation of Burkholderia rhizoxinica B4 and the extraction and isolation of rhizoxin M2 and rhizoxin S2 were performed as described in Scherlach et al., J. Am. Chem. Soc. 2006, 128, 11529-11536 described.

Figure 00100001
Figure 00100001

Beispiel 1 example 1

Herstellung des Glycerolesters 4Preparation of the Glycerol Ester 4

Die Herstellung des Glycerolesters 4 erfolgt durch Kultivierung des endosymbiontischen Bakterienstammes Burkholderia rhizoxina DSM 17360 in Glycerol-haltigem Medium, anschließender Extraktion der Kultur und Isolation der Verbindung mittels eines chromatographischen Verfahrens. Die Kultivierung von Burkholderia rhizoxina DSM 17360 erfolgt durch Fermentation in einem Flüssigmedium (Zusammensetzung: Maisstärke 1%, Glycerol 0,5%, Hefeextrakt 1%, Maisquellwasser 1%, CaCO3 1%) als Schüttelkultur bei 30°C (4 d). Der gesamte Kulturansatz wird 3 Mal mit Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten Extrakte werden unter Verwendung von Natriumsulfat getrocknet und eingeengt. Der erhaltene Extrakt wird in Acetonitril gelöst und mittels Größenausschlußchromatographie an Sephadex LH-20 fraktioniert (Elutionsmittel 84% Acetonitril).The preparation of the glycerol ester 4 is carried out by cultivating the endosymbiotic bacterial strain Burkholderia rhizoxina DSM 17360 in glycerol-containing medium, subsequent extraction of the culture and isolation of the compound by means of a chromatographic method. The cultivation of Burkholderia rhizoxina DSM 17360 is carried out by fermentation in a liquid medium (composition: corn starch 1%, glycerol 0.5%, yeast extract 1%, corn steep liquor 1%, CaCO 3 1%) as a shaking culture at 30 ° C (4 d). The entire culture batch is extracted 3 times with ethyl acetate. The combined extracts are dried using sodium sulfate and concentrated. The resulting extract is dissolved in acetonitrile and fractionated by size exclusion chromatography on Sephadex LH-20 (eluant 84% acetonitrile).

Figure 00100002
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Die Reindarstellung des Glycerolesters 4 erfolgt durch präparative HPLC unter Verwendung einer RP-18 Phase und Acetonitril/Wasser-Gemischen (Methode: MeCN/H2O 25:75 5 min, dann in 35 min auf MeCN/H2O 80:20, dann in 5 min auf MeCN 100%, Detektion bei 311 nm). 1H NMR (500 MHz) und 13C NMR (125,8 MHz) in DMSO-d6 (siehe Tabellen 1 und 4).The purification of the glycerol ester 4 is carried out by preparative HPLC using an RP-18 phase and acetonitrile / water mixtures (method: MeCN / H 2 O 25:75 5 min, then in MeCN / H 2 O 80:20 in 35 min, then in 5 min on MeCN 100%, detection at 311 nm). 1 H NMR (500 MHz) and 13 C NMR (125.8 MHz) in DMSO-d 6 (see Tables 1 and 4).

Beispiel 2Example 2

Herstellung der Amide 13 und 14Preparation of amides 13 and 14

Die Herstellung der Rhizoxinamid-Derivate 13 und 14 erfolgte gemäß dem Reaktionsschema 1. Reaktionsschema 1

Figure 00110001
Rhizoxinamide Derivatives 13 and 14 were prepared according to Reaction Scheme 1. Reaction Scheme 1
Figure 00110001

2,3-Desepoxyrhizoxinamid (13): Rhizoxin M2 (20,9 mg, 32,6 μmol) wurde in einer Lösung aus Ammoniak in Methanol (7M, 10 mL) gelöst und mit Kaliumcyanid (10.6 mg, 163 μmol) behandelt. Nach 4-tägigem Rühren bei Raumtemperatur wurde die Reaktionsmischung bis zur Trockne eingedampft und der Rückstand in Ethylacetat (10 mL) und Wasser (10 mL) gelöst. Die organische Phase wurde abgetrennt und die wässrige Phase wurde mit Ethylacetat (3 × 10 mL) extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden über Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wurde mittels präparativer HPLC (Grom Saphir 110 C18 5 μm, 250 × 20 mm, Flußrate 12 mL min–1, Gradient 84% MeCN-H2O/H2O 45/55 in 30 min bis 80/20) aufgereinigt, um 13 als leicht graues Pulver (6,3 mg) zu erhalten. 1H NMR (500 MHz) und 13C NMR (125,8 MHz) in DMSO-d6 (siehe Tabellen 2 und 4). HRMS-ESI: m/z [M+H]+ berechnet für C35H51O8N2: 627,3640, gefunden: 627,3647.2,3-desepoxyrhizoxinamide (13): Rhizoxin M2 (20.9 mg, 32.6 μmol) was dissolved in a solution of ammonia in methanol (7M, 10 mL) and treated with potassium cyanide (10.6 mg, 163 μmol). After stirring at room temperature for 4 days, the reaction mixture was evaporated to dryness and the residue was dissolved in ethyl acetate (10 mL) and water (10 mL). The organic phase was separated and the aqueous phase was extracted with ethyl acetate (3 x 10 mL). The combined organic phases were dried over sodium sulfate and concentrated in vacuo. The residue was purified by preparative HPLC (grom sapphire 110 C18 5 μm, 250 x 20 mm, flow rate 12 mL min -1 , gradient 84% MeCN-H 2 O / H 2 O 45/55 in 30 min to 80/20) to obtain 13 as a light gray powder (6.3 mg). 1 H NMR (500 MHz) and 13 C NMR (125.8 MHz) in DMSO-d 6 (see Tables 2 and 4). HRMS-ESI: m / z [M + H] + calculated for C 35 H 51 O 8 N 2 : 627.3640, found: 627.3647.

2,3-Desepoxyrhizoxinmethylamid (14): Eine Lösung von Rhizoxin M2 (20,3 mg, 31,6 μmol) in methanolischem Methylamin (1M, 10 mL) wurde mit Kaliumcyanid (10.3 mg, 158 μmol) behandelt und für 19 h bei Raumtemperatur gerührt. Die Lösung wurde im Vakuum konzentriert und der Rückstand in Ethylacetat (10 mL) und Wasser (10 mL) gelöst. Die organische Phase wurde abgetrennt und mit Wasser (10 mL) gewaschen. Die wässrige Phase wurde mit Ethylacetat (3 × 10 mL) extrahiert und die vereinigten organischen Phasen wurden über Natriumsulfat getrocknet und unter reduziertem Druck konzentriert. Reines 14 (6,9 mg) wurde als gelb-ockerfarbenes Pulver nach Reinigung mittels präparativer HPLC (Grom Saphir 110 C18 5 μm, 250 × 20 mm, Flußrate 12 mL min–1, Gradient 84% MeCN-H2O/H2O 45155 in 30 min bis 80/20) erhalten. 1H NMR (500 MHz) und 13C NMR (125.8 MHz) in DMSO-d6 (siehe Tabellen 2 und 4). HRMS-ESI: m/z [M+H]+ berechnet für C38H53O8N2: 641,3796, gefunden: 641,3806. 2,3-desepoxyrhizoxin methylamide (14): A solution of rhizoxin M2 (20.3 mg, 31.6 μmol) in methanolic methylamine (1M, 10 mL) was treated with potassium cyanide (10.3 mg, 158 μmol) and added for 19 h Room temperature stirred. The solution was concentrated in vacuo and the residue was dissolved in ethyl acetate (10 mL) and water (10 mL). The organic phase was separated and washed with water (10 mL). The aqueous phase was extracted with ethyl acetate (3 x 10 mL) and the combined organic phases were dried over sodium sulfate and concentrated under reduced pressure. Pure 14 (6.9 mg) (as a yellow-ocher powder after purification by preparative HPLC Grom Saphir 110 C18 5 micron, 250 x 20 mm, flow rate 12 ml min -1, gradient of 84% MeCN-H 2 O / H 2 O 45155 in 30 minutes to 80/20). 1 H NMR (500 MHz) and 13 C NMR (125.8 MHz) in DMSO-d 6 (see Tables 2 and 4). HRMS-ESI: m / z [M + H] + calcd for C 38 H 53 O 8 N 2: 641.3796, found: 641.3806.

Beispiel 3Example 3

Herstellung der Amide 16 bis 19Production of amides 16 to 19

Die Herstellung der Rhizoxinamid-Derivate 16 bis 19 erfolgte gemäß dem Reaktionsschema 2. Reaktionsschema 2

Figure 00120001
The production of rhizoxinamide derivatives 16 to 19 was carried out according to reaction scheme 2. Reaction Scheme 2
Figure 00120001

2,3-Desepoxyrhizoxindimethylamid (16): Eine Lösung von Rhizoxin S2 (24,9 mg, 39,7 μmol) in Dichlormethan (5 mL) wurde mit N-Hydroxysuccinimid (9,2 mg, 79,8 μmol) und EDC (16,8 mg, 87,8 μmol) behandelt. Dimethylaminhydrochlorid (13,0 mg, 159,6 μmol) und Triethylamin (22 μl, 159,6 μmol) wurden bei 0°C zugegeben und die Reaktionsmischung wurde für 1 h bei dieser Temperatur gehalten. Nach 24-stündigem Rühren bei Raumtemperatur wurde die Reaktionsmischung mit 1M HCl neutralisiert, mit Wasser (5 mL) verdünnt und mit Dichlormethan (3 × 10 mL) extrahiert. Die organische Phase wurde über Natriumsulfat getrocknet und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wurde mittels präparativer HPLC (Synergi Fusion 4 μ RP-80A, 250 × 21.20 mm, Flußrate 12 mL min–1, Gradient 84% MeCN-H2O/H2O 35/65 in 40 min bis 90/10) aufgereinigt, um WF-1360F (15) (6,6 mg, 27%) und 16 als ockerfarben-gelbes Pulver zu erhalten (8,0 mg, 31%, 42% borsm). 1H NMR (500 MHz) und 13C NMR (125.8 MHz) in DMSO-d6 (siehe Tabellen 2 und 4). HRMS-ESI: m/z [M+H]+ berechnet für C37H55O8N2: 655,3953, gefunden: 655,3977.2,3-desepoxyrhizoxindine dimethylamide (16): A solution of rhizoxin S2 (24.9 mg, 39.7 μmol) in dichloromethane (5 mL) was treated with N-hydroxysuccinimide (9.2 mg, 79.8 μmol) and EDC ( 16.8 mg, 87.8 μmol). Dimethylamine hydrochloride (13.0 mg, 159.6 μmol) and triethylamine (22 μl, 159.6 μmol) were added at 0 ° C and the reaction mixture was held at this temperature for 1 h. After stirring at room temperature for 24 hours, the reaction mixture was neutralized with 1M HCl, diluted with water (5 mL), and extracted with dichloromethane (3 × 10 mL). The organic phase was dried over sodium sulfate and evaporated to dryness. The residue was purified by preparative HPLC (Synergi Fusion 4 μ RP-80A, 250 x 21.20 mm, flow rate 12 mL min -1 , gradient 84% MeCN-H 2 O / H 2 O 35/65 in 40 min to 90/10). to obtain WF-1360F (15) (6.6 mg, 27%) and 16 as an ocher yellow powder (8.0 mg, 31%, 42% borsm). 1 H NMR (500 MHz) and 13 C NMR (125.8 MHz) in DMSO-d 6 (see Tables 2 and 4). HRMS-ESI: m / z [M + H] + calcd for C 37 H 55 O 8 N 2: 655.3953, found: 655.3977.

2,3-Desepoxyrhizoxindiethylamid (17): N-Hydroxysuccinimid (7,5 mg, 65,2 μmol), Diethylamin (10,0 μl, 97,1 μmol) und EDC (13,7 mg, 71,5 μmol) wurden zu einer Lösung von Rhizoxin S2 (22,1 mg, 35,2 μmol) in Dichlormethan (5 mL) zugegeben und die resultierende Mischung wurde unter Argon-Atmosphäre bei Raumtemperatur gerührt. Nach 2 Tagen wurde die Reaktionsmischung zusätzlich mit N-Hydroxysuccinimid (3,7 mg, 32,1 μmol), EDC (6,9 mg, 36,0 μmol) und Diethylamin (5 μl, 48,6 μmol) behandelt und für weitere 24 h gerührt. Eine gesättigte wässrige Ammoniumchloridlösung (5 mL) wurde dann zugegeben, die organische Phase wurde abgetrennt und mit Wasser (5 mL) gewaschen. Die wässrigen Phasen wurden mit Dichlormethan (10 mL) extrahiert und die vereinigten organischen Phasen wurden über Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum konzentriert. Der ölige Rückstand wurde mittels präparativer HPLC (Grom Saphir 110 C18 5 μm, 250 × 20 mm, Flußrate 12 mL min–1, Gradient 84% MeCN-H2O/0.01% TFA-H2O 60/40 in 30 min bis 95/5) gereinigt, um WF-1360F (15) (8,6 mg, 40%) und 17 als ein blassgelbes Pulver (4,9 mg, 20%, 34% borsm) zu erhalten. 1H NMR (500 MHz) und 13C NMR (125.8 MHz) in DMSO-d6 (siehe Tabellen 3 und 5). HRMS-ESI: m/z [M+H]+ berechnet für C39H59O8N2: 683,4266, gefunden: 683,277. 2,3-desepoxyrhizoxine diethylamide (17): N-hydroxysuccinimide (7.5 mg, 65.2 μmol), diethylamine (10.0 μl, 97.1 μmol) and EDC (13.7 mg, 71.5 μmol) to a solution of rhizoxin S2 (22.1 mg, 35.2 μmol) in dichloromethane (5 mL) and the resulting mixture was stirred under argon atmosphere at room temperature. After 2 days, the reaction mixture was additionally treated with N-hydroxysuccinimide (3.7 mg, 32.1 μmol), EDC (6.9 mg, 36.0 μmol) and diethylamine (5 μl, 48.6 μmol) and for further Stirred for 24 h. A saturated aqueous ammonium chloride solution (5 mL) was then added, the organic phase was separated and washed with water (5 mL). The aqueous phases were extracted with dichloromethane (10 mL) and the combined organic phases were dried over sodium sulfate and concentrated in vacuo. The oily residue was purified by preparative HPLC (grom sapphire 110 C18 5 μm, 250 x 20 mm, flow rate 12 mL min -1 , gradient 84% MeCN-H 2 O / 0.01% TFA-H 2 O 60/40 in 30 min 95/5) to obtain WF-1360F (15) (8.6 mg, 40%) and 17 as a pale yellow powder (4.9 mg, 20%, 34% boron). 1 H NMR (500 MHz) and 13 C NMR (125.8 MHz) in DMSO-d 6 (see Tables 3 and 5). HRMS-ESI: m / z [M + H] + calcd for C 39 H 59 O 8 N 2: 683.4266, found: 683.277.

2,3-Desepoxyrhizoxinallylamid (18): Eine Lösung von Rhizoxin 52 (25,3 mg, 40,3 μmol) in Dichlormethan (5 mL) wurde mit N-Hydroxysuccinimid (9,2 mg, 79,9 μmol), Allylamin (9,0 μL, 119,7 μmol) und EDC (18,1 mg, 94,4 μmol) behandelt. Nach 18-stündigem Rühren bei Raumtemperatur wurde eine gesättigte wässrige Ammoniumchloridlösung (5 mL) zugegeben, die organische Phase wurde abgetrennt und mit Wasser (5 mL) gewaschen. Die wässrigen Phasen wurden mit Dichlormethan (3 × 10 mL) extrahiert und die vereinigten organischen Phasen wurden über Natriumsulfat getrocknet und konzentriert. WF-1360F (15) (7,4 mg, 30%) und 18 als ein oranges Pulver (6,3 mg, 23%, 34% borsm) wurden nach Reinigung mittels präparativer HPLC (Synergi Fusion 4 μ RP-80A, 250 × 21.20 mm, Flußrate 12 mL min–1, Gradient 84% MeCN-H2O/H2O 35/65 in 40 min bis 90/10) erhalten. 1H NMR (600 MHz) und 13C NMR (151 MHz) in DMSO-d6 (siehe Tabellen 3 und 5). HRMS-ESI: m/z [M+H]+ berechnet für C38H55O8N2: 667,3953, gefunden: 667,3979.2,3-desepoxyrhizoxinallylamide (18): A solution of rhizoxin 52 (25.3 mg, 40.3 μmol) in dichloromethane (5 mL) was treated with N-hydroxysuccinimide (9.2 mg, 79.9 μmol), allylamine ( 9.0 μL, 119.7 μmol) and EDC (18.1 mg, 94.4 μmol). After stirring at room temperature for 18 h, a saturated aqueous ammonium chloride solution (5 mL) was added, the organic phase was separated and washed with water (5 mL). The aqueous phases were extracted with dichloromethane (3 x 10 mL) and the combined organic phases were dried over sodium sulfate and concentrated. WF-1360F (15) (7.4 mg, 30%) and 18 as an orange powder (6.3 mg, 23%, 34% borsm) were purified after purification by preparative HPLC (Synergi Fusion 4 μ RP-80A, 250 × 21.20 mm, flow rate 12 mL min -1 , gradient 84% MeCN-H 2 O / H 2 O 35/65 in 40 min to 90/10). 1 H NMR (600 MHz) and 13 C NMR (151 MHz) in DMSO-d 6 (see Tables 3 and 5). HRMS-ESI: m / z [M + H] + calcd for C 38 H 55 O 8 N 2: 667.3953, found: 667.3979.

2,3-Desepoxyrhizoxinbenzylamid (19): N-Hydroxysuccinimid (5,7 mg, 49,5 μmol), Benzylamin (8,1 μl, 73,8 μmol) und EDC (11,1 mg, 57,9 μmol) wurden zu einer Lösung von Rhizoxin S2 (15,4 mg, 24,5 μmol) in Dichlormethan (5 mL) zugegeben. Nach 20-stündigem Rühren bei Raumtemperatur wurde die Reaktionsmischung zusätzlich mit Benzylamin (8,1 μl, 73,8 μmol) behandelt. Weiteres N-Hydroxysuccinimid (2,8 mg, 24,3 μmol), EDC (5,2 mg, 27,1 μmol) und Benzylamin (4,0 μl, 36,9 μmol) wurden nach 25 h zugegeben. Die Reaktionsmischung wurde über Nacht gerührt und mit gesättigter wässriger Ammoniumchloridlösung (5 mL) verdünnt. Die organische Phase wurde abgetrennt und mit Wasser (10 mL) extrahiert. Die wässrigen Phasen wurden mit Dichlormethan (3 × 10 mL) gewaschen. Die vereinigten organischen Phasen wurden über Natriumsulfat getrocknet und zur Trockne eingedampft. Nach Reinigung mittels präparativer HPLC (Synergi Fusion 4 μ RP-80A, 250 × 21.20 mm, Flußrate 12 mL min–1, Gradient 84% MeCN-H2O/H2O 35/65 in 40 min bis 90/10) wurden Rhizoxin S2 (1,5 mg, 10%), WF-1360F (15) (0,4 mg, 3%) und 19 als ein brauner amorpher Feststoff (9,9 mg, 56%, 63% borsm) erhalten. 1H NMR (500 MHz) und 13C NMR (125,8 MHz) in DMSO-d6 (siehe Tabellen 3 und 5). HRMS-ESI: m/z [M+H]+ berechnet für C42H57O8N2: 717,4109, gefunden: 717,4102. Tabelle 1. 1H NMR Daten des Rhizoxinglycerolesters 4 Position 4 1 - 2 5.75 d (15.5) 3 6.67 ddd (15.5, 8.8, 6.8) 4 2.40 m[a] 2.07 m 5 2.20 m 5a 2.37 m[a] 2.31 m 5b - 6 1.52 dd (13.8, 9.1) 0.94[a] 7 2.98 m 7-OH - 8 1.90 m[a] 8a 0.93 d (6.6) 9 5.31 dd (15.6, 9.2) 10 5.08 dd (15.6, 8.1) 11 2.83 d (8.2) 12 - 12a 1.18 s 13 2.75 m 13-OH - 14 1.85 m[a] 1.65 m 15 4.61 dd (10.0, 3.6) 16 1.92 m[a] 16a 0.90 d (6.8) 17 3.28 d (8.8) 17-OCH3 3.06 s 18 - 18a 1.75 s 19 6.11 d (10.9) 20 6.61 dd (15.2, 11.0) 21 6.41 d (15.2) 22 - 22a 2.15 s 23 6.25 s 24 - 25 8.03 s 26 - 26a 2.39 s 5b-OCH2 4.05 m 3.92 m CH(OH) 3.63 m CH2OH 3.33 m [a] Partiell überlappende Signale. Tabelle 2. 1H NMR Daten der Rhizoxin-Derivate 13, 14 und 16. Position 13 Position 14 Position 16 1 - 1 - 1 - 2 5.73 d (15.7) 2 5.73 d (15.7) 2 5.72 d (15.5) 3 6.69 ddd (15.7, 9.3, 6.3) 3 6.69 ddd (15.8, 9.5, 6.2) 3 6.70 td (15.6, 7.8) 4 2.34 m 4 2.34 m 4 2.40 m[a] 2.04 m[a] 2.03 m 2.04 m 5 2.21 m 5 2.23 m 5 2.17[a] 5a 2.08 d (7.4) 5a 2.10 d (7.4) 5a 2.42 m[a] - - 2.27 dd (15.5, 8.2) 5b - 5b - 5b - 6 1.49 dd (13.9, 9.6) 6 1.49 dd (13.9, 10.3) 6 1.54 dd (13.9, 8.3) 0.91[a] 0.91[a] 0.92[a] 7 2.98 t (10.0) 7 2.98 t (9.8) 7 2.96 m[a] 7-OH - 7-OH - 7-OH 4.62 d (6.0) 8 1.87 m[a] 8 1.87 m[a] 8 1.87 m[a] 8a 0.93 d (6.6)[a] 8a 0.94 d (6.7)[a] 8a 0.92 d (6.6)[a] 9 5.30 dd (15.7, 9.3) 9 5.30 dd (15.7, 9.4) 9 5.33 dd (15.6, 9.2) 10 5.07 dd (15.6, 8.0)[a] 10 5.08 dd (15.6, 7.8) 10 5.07 m[a] 11 2.83 d (8.1) 11 2.83 d (8.2) 11 2.82 d (8.2)[a] 12 - 12 - 12 - 12a 1.18 s 12a 1.19 s 12a 1.17 s 13 2.75 dd (10.8, 2.2) 13 2.76 dd (10.6, 2.2) 13 2.75 m[a] 13-OH - 13-OH - 13-OH 5.08 d (4.1)[a] 14 1.81 m[a] 14 1.84 m[a] 14 1.80 m[a] 1.66 m 1.67 m 1.66 m 15 4.62 dd (9.7, 3.5) 15 4.63 dd (10.1, 3.4) 15 4.58 dd (9.7, 3.3) 16 1.91 m[a] 16 1.92 m[a] 16 1.93 m[a] 16a 0.91 d (6.8)[a] 16a 0.92 d (6.8)[a] 16a 0.89 d (6.8)[a] 17 3.28 d (8.7) 17 3.29 d (8.9) 17 3.28 d (8.8) 17-OCH3 3.06 s 17-OCH3 3.07 s 17-OCH3 3.06 s 18 - 18 - 18 - 18a 1.75 s 18a 1.76 s 18a 1.76 s 19 6.11 d (11.0) 19 6.12 d (10.8) 19 6.11 d (10.8) 20 6.61 dd (15.2, 10.9) 20 6.62 dd (15.1, 10.9) 20 6.61 dd (15.2, 11.0) 21 6.41 d (15.1) 21 6.42 d (15.2) 21 6.41 d (15.2) 22 - 22 - 22 - 22a 2.15 s 22a 2.16 s 22a 2.15 s 23 6.25 s 23 6.26 s 23 6.25 s 24 - 24 - 24 - 25 8.03 s 25 8.04 s 25 8.02 s 26 - 26 - 26 - 26a 2.40 s 26a 2.40 s 26a 2.39 s NH2 7.36 s NH 7.83 m NCH3 2.95 s NH2 6.78 s NCH3 2.57 d (4.6) NCH3 2.81 s[a] [a] Partiell überlappende Signale. Tabelle 3. 1H NMR Daten der Rhizoxinderivate 17, 18 und 19. Position 17 Position 18 Position 19 1 - 1 - 1 - 2 5.70 d (15.5) 2 5.73 d (15.6) 2 5.73 d (15.6) 3 6.66 td (15.6, 7.8) 3 6.70 ddd (15.6, 9.6, 6.0) 3 6.71 ddd (15.5, 9.4, 6.0) 4 2.38 m[a] 4 2.33 m 4 2.34 m 2.04 m 2.03 m 2.04 m 5 2.16 m 5 2.25 m 5 2.27 m 5a 2.38 m[a] 5a 2.13[a] 5a 2.19 d (7.4) 2.22 dd (15.0, 8.3) - - 5b - 5b - 5b - 6 1.51 dd (13.8, 8.0) 6 1.49 dd (13.6, 10.3) 6 1.51 dd (13.7, 9.9) 0.90[a] 0.89[a] 0.93[a] 7 2.94 m 7 2.98 m 7 2.99 m 7-OH 4.58 m[a] 7-OH 4.53 d (5.0) 7-OH 4.50 d (6.5) 8 1.85 m[a] 8 1.85 m[a] 8 1.87 m[a] 8a 0.89 d (6.6)[a] 8a 0.93 (6.6)[a] 8a 0.94 d (6.6)[a] 9 5.30 dd (15.6, 9.2) 9 5.28 dd (15.7, 9.3) 9 5.29 dd (15.7, 9.2) 10 5.04 dd (15.6, 8.0)[a] 10 5.07 m[a] 10 5.07 dd (15.8, 8.2) 11 2.80 d (8.1) 11 2.82 d (8.1) 11 2.83 d (8.03) 12 - 12 - 12 - 12a 1.14 s 12a 1.18 s 12a 1.17 s 13 2.72 m 13 2.74 m 13 2.75 m 13-OH 5.06[a] 13-OH 5.16 bs 13-OH 5.10 d (3.8) 14 1.79 m[a] 14 1.81 m[a] 14 1.83 m[a] 1.63 m 1.65 m 1.65 m 15 4.56 m[a] 15 4.61 dd (9.8, 3.3) 15 4.62 dd (9.8, 3.5) 16 1.90 m 16 1.91 m[a] 16 1.90 m[a] 16a 0.86 d (6.8)[a] 16a 0.90 d (6.7)[a] 16a 0.90 d (6.8)[a] 17 3.26 m[a] 17 3.27 d (8.8) 17 3.27 d (8.7) 17-OCH3 3.04 s 17-OCH3 3.05 s 17-OCH3 3.06 s 18 - 18 - 18 - 18a 1.73 s 18a 1.75 s 18a 1.75 s 19 6.08 dd (10.9, 0.8) 19 6.11 d (10.9) 19 6.11 d (10.7) 20 6.59 dd (15.2, 10.9) 20 6.61 dd (15.2, 11.0) 20 6.61 dd (15.2, 10.9) 21 6.38 d (15.2) 21 6.41 d (15.1) 21 6.41 d (15.2) 22 - 22 - 22 - 22a 2.12 s 22a 2.14 s 22a 2.14 s 23 6.23 s 23 6.25 s 23 6.25 s 24 - 24 - 24 - 25 8.03 s 25 8.03 s 25 8.02 26 - 26 - 26 - 26a 2.37 s 26a 2.39 s 26a 2.39 s NCH2CH3 3.26 m[a] NH 8.12 t (5.6) NH 8.43 t (5.9) NCH2CH3 3.21 m[a] NHCH2 5.17 m NHCH2 4.27 d (5.9) NCH2CH3 1.05 t (7.1) CH=CH2 5.78 m o-CH 7.23 m NCH2CH3 0.97 t (7.1) CH=CH2 5.09 m[a] m-CH 7.28 m 5.03 m[a] p-CH 7.23 m [a] Partiell überlappende Signale. Tabelle 4. 13C NMR Daten der Rhizoxinderivate 4, 13, 14 und 16. Position 4 Position 13 Position 14 Position 16 1 164.6 1 164.6 1 164.6 1 164.6 2 124.7 2 124.6 2 124.7 2 124.5 3 145.7 3 146.0 3 146.0 3 146.6 4 34.7 4 34.4 4 34.3 4 35.8 5 30.9 5 30.5 5 30.7 5 30.8 5a 40.0 5a 41.1 5a 41.4 5a 38.7 5b 172.1 5b 173.5 5b 171.7 5b 171.4 6 37.7 6 38.2 6 38.2 6 38.3 7 70.8 7 70.4 7 70.4 7 71.3 8 44.9 8 44.9 8 44.9 8 44.9 8a 17.4 8a 17.5 8a 17.5 8a 17.5 9 140.3 9 140.2 9 140.2 9 140.7 10 125.9 10 125.9 10 126.0 10 125.4 11 60.7 11 60.6 11 60.6 11 60.8 12 64.7 12 64.6 12 64.6 12 64.7 12a 10.8 12a 10.8 12a 10.8 12a 10.7 13 76.9 13 76.9 13 77.0 13 76.9 14 33.2 14 33.2 14 33.2 14 33.2 15 72.9 15 72.8 15 72.9 15 72.7 16 38.9 16 38.9 16 38.9 16 38.8 16a 10.2 16a 10.1 16a 10.2 16a 10.1 17 88.3 17 88.2 17 88.3 17 88.3 17-OCH3 55.6 17-OCH3 55.6 17-OCH3 55.6 17-OCH3 55.6 18 136.2[b] 18 136.0[b] 18 136.1[b] 18 136.1[b] 18a 11.3 18a 11.3 18a 11.3 18a 11.3 19 128.9 19 128.8 19 128.9 19 128.9 20 124.0 20 124.0 20 124.0 20 124.0 21 137.5 21 137.5 21 137.5 21 137.5 22 136.1[b] 22 136.1[b] 22 136.2[b] 22 136.2[b] 22a 14.0 22a 14.0 22a 14.0 22a 14.0 23 120.3 23 120.3 23 120.3 23 120.3 24 138.2 24 138.1 24 138.2 24 138.2 25 137.3 25 137.3 25 137.3 25 137.3 26 160.6 26 160.5 26 160.6 26 160.6 26a 13.4 26a 13.4 26a 13.4 26a 13.4 5b-OCH2 65.5 NCH3 25.4 NCH3 36.9 CH(OH) 69.3 NCH3 34.8 CH2OH 62.6 [b] Austauschbare Zuordnungen. Tabelle 5. 13C NMR Daten der Rhizoxinderivate 17, 18 und 19. Position 17 Position 18 Position 19 1 164.6 1 164.7 1 164.6 2 124.5 2 124.8 2 124.7 3 146.5 3 146.0 3 145.9 4 35.6 4 34.2 4 34.2 5 31.0 5 30.7 5 30.8 5a 38.4 5a 41.3 5a 41.3 5b 170.4 5b 171.3 5b 171.3 6 38.3 6 38.2 6 38.2 7 71.3 7 70.3 7 70.3 8 44.9 8 45.0 8 44.9 8a 17.5 8a 17.5 8a 17.4 9 140.7 9 140.2 9 140.1 10 125.4 10 126.2 10 126.0 11 60.8 11 60.6 11 60.5 12 64.7 12 64.8 12 64.7 12a 10.7 12a 10.9 12a 10.8 13 76.9 13 77.0 13 77.0 14 33.2 14 33.2 14 33.2 15 72.7 15 72.9 15 72.9 16 38.8 16 39.0 16 38.9 16a 10.1 16a 10.3 16a 10.2 17 88.3 17 88.3 17 88.2 17-OCH3 55.6 17-OCH3 55.7 17-OCH3 55.7 18 136.1[b] 18 136.2[b] 18 136.1[b] 18a 11.3 18a 11.3 18a 11.3 19 128.9 19 129.0 19 128.9 20 124.0 20 124.1 20 124.0 21 137.5 21 137.6 21 137.5 22 136.2[b] 22 136.2[b] 22 136.1[b] 22a 14.0 22a 14.1 22a 14.0 23 120.3 23 120.4 23 120.3 24 138.2 24 138.2 24 138.2 25 137.3 25 137.5 25 137.3 26 160.6 26 160.7 26 160.5 26a 13.4 26a 13.5 26a 13.4 NCH2CH3 41.4 5b-NHCH2 40.8 NHCH2 42.0 NCH2CH3 39.4[a] CH=CH2 135.6 NHCH2C 139.6 NCH2CH3 14.3 CH=CH2 115.0 o-CH 127.2 NCH2CH3 13.1 m-CH 128.3 p-CH 126.8 [a] Überlappend mit Lösungsmittelsignal. [b] Austauschbare Zuordnungen.2,3-desepoxyrhizoxin benzylamide (19): N-hydroxysuccinimide (5.7 mg, 49.5 μmol), benzylamine (8.1 μl, 73.8 μmol) and EDC (11.1 mg, 57.9 μmol) to a solution of rhizoxin S2 (15.4 mg, 24.5 μmol) in dichloromethane (5 mL). After stirring at room temperature for 20 hours, the reaction mixture was additionally treated with benzylamine (8.1 μl, 73.8 μmol). Additional N-hydroxysuccinimide (2.8 mg, 24.3 μmol), EDC (5.2 mg, 27.1 μmol) and benzylamine (4.0 μl, 36.9 μmol) were added after 25 hours. The reaction mixture was stirred overnight and diluted with saturated aqueous ammonium chloride solution (5 mL). The organic phase was separated and extracted with water (10 mL). The aqueous phases were washed with dichloromethane (3 x 10 mL). The combined organic phases were dried over sodium sulfate and evaporated to dryness. After purification by preparative HPLC (Synergi Fusion 4 μ RP-80A, 250 x 21.20 mm, flow rate 12 mL min -1 , gradient 84% MeCN-H 2 O / H 2 O 35/65 in 40 min to 90/10) Rhizoxin S2 (1.5 mg, 10%), WF-1360F (15) (0.4 mg, 3%) and 19 as a brown amorphous solid (9.9 mg, 56%, 63% boron). 1 H NMR (500 MHz) and 13 C NMR (125.8 MHz) in DMSO-d 6 (see Tables 3 and 5). HRMS-ESI: m / z [M + H] + calcd for C 42 H 57 O 8 N 2 : 717.4109, found: 717.4102. Table 1. 1 H NMR data of rhizoxin glycerol ester 4 position 4 1 - 2 5.75 d (15.5) 3 6.67 ddd (15.5, 8.8, 6.8) 4 2.40 m [a] 2.07 m 5 2.20 m 5a 2.37 m [a] 2.31 m 5b - 6 1.52 dd (13.8, 9.1) 0.94 [a] 7 2.98 m 7-OH - 8th 1.90 m [a] 8a 0.93 d (6.6) 9 5.31 dd (15.6, 9.2) 10 5.08 dd (15.6, 8.1) 11 2.83 d (8.2) 12 - 12a 1.18 s 13 2.75 m 13-OH - 14 1.85 m [a] 1.65 m 15 4.61 dd (10.0, 3.6) 16 1.92 m [a] 16a 0.90 d (6.8) 17 3.28 d (8.8) 17-OCH 3 3.06 s 18 - 18a 1.75 s 19 6.11 d (10.9) 20 6.61 dd (15.2, 11.0) 21 6.41 d (15.2) 22 - 22a 2.15 s 23 6.25 s 24 - 25 8.03 s 26 - 26a 2.39 s 5b-OCH 2 4.05 m 3.92 m CH (OH) 3.63 m CH 2 OH 3.33 m [a] Partially overlapping signals. Table 2. 1 H NMR data of rhizoxin derivatives 13, 14 and 16. position 13 position 14 position 16 1 - 1 - 1 - 2 5.73 d (15.7) 2 5.73 d (15.7) 2 5.72 d (15.5) 3 6.69 ddd (15.7, 9.3, 6.3) 3 6.69 ddd (15.8, 9.5, 6.2) 3 6.70 td (15.6, 7.8) 4 2.34 m 4 2.34 m 4 2.40 m [a] 2.04 m [a] 2.03 m 2.04 m 5 2.21 m 5 2.23 m 5 2.17 [a] 5a 2.08 d (7.4) 5a 2.10 d (7.4) 5a 2.42 m [a] - - 2.27 dd (15.5, 8.2) 5b - 5b - 5b - 6 1.49 dd (13.9, 9.6) 6 1.49 dd (13.9, 10.3) 6 1.54 dd (13.9, 8.3) 0.91 [a] 0.91 [a] 0.92 [a] 7 2.98 t (10.0) 7 2.98 t (9.8) 7 2.96 m [a] 7-OH - 7-OH - 7-OH 4.62d (6.0) 8th 1.87 m [a] 8th 1.87 m [a] 8th 1.87 m [a] 8a 0.93 d (6.6) [a] 8a 0.94 d (6.7) [a] 8a 0.92 d (6.6) [a] 9 5.30 dd (15.7, 9.3) 9 5.30 dd (15.7, 9.4) 9 5.33 dd (15.6, 9.2) 10 5.07 dd (15.6, 8.0) [a] 10 5.08 dd (15.6, 7.8) 10 5.07 m [a] 11 2.83 d (8.1) 11 2.83 d (8.2) 11 2.82 d (8.2) [a] 12 - 12 - 12 - 12a 1.18 s 12a 1.19 s 12a 1.17 s 13 2.75 dd (10.8, 2.2) 13 2.76 dd (10.6, 2.2) 13 2.75 m [a] 13-OH - 13-OH - 13-OH 5.08 d (4.1) [a] 14 1.81 m [a] 14 1.84 m [a] 14 1.80 m [a] 1.66 m 1.67 m 1.66 m 15 4.62 dd (9.7, 3.5) 15 4.63 dd (10.1, 3.4) 15 4.58 dd (9.7, 3.3) 16 1.91 m [a] 16 1.92 m [a] 16 1.93 m [a] 16a 0.91 d (6.8) [a] 16a 0.92 d (6.8) [a] 16a 0.89 d (6.8) [a] 17 3.28 d (8.7) 17 3.29 d (8.9) 17 3.28 d (8.8) 17-OCH 3 3.06 s 17-OCH 3 3.07 s 17-OCH 3 3.06 s 18 - 18 - 18 - 18a 1.75 s 18a 1.76 s 18a 1.76 s 19 6.11 d (11.0) 19 6.12 d (10.8) 19 6.11 d (10.8) 20 6.61 dd (15.2, 10.9) 20 6.62 dd (15.1, 10.9) 20 6.61 dd (15.2, 11.0) 21 6.41 d (15.1) 21 6.42 d (15.2) 21 6.41 d (15.2) 22 - 22 - 22 - 22a 2.15 s 22a 2.16 s 22a 2.15 s 23 6.25 s 23 6.26 s 23 6.25 s 24 - 24 - 24 - 25 8.03 s 25 8.04 s 25 8.02 s 26 - 26 - 26 - 26a 2.40 s 26a 2.40 s 26a 2.39 s NH 2 7.36 s NH 7.83 m NCH 3 2.95 s NH 2 6.78 s NCH 3 2.57 d (4.6) NCH 3 2.81 s [a] [a] Partially overlapping signals. Table 3. 1 H NMR data of rhizoxin derivatives 17, 18, and 19. position 17 position 18 position 19 1 - 1 - 1 - 2 5.70 d (15.5) 2 5.73 d (15.6) 2 5.73 d (15.6) 3 6.66 td (15.6, 7.8) 3 6.70 ddd (15.6, 9.6, 6.0) 3 6.71 ddd (15.5, 9.4, 6.0) 4 2.38 m [a] 4 2.33 m 4 2.34 m 2.04 m 2.03 m 2.04 m 5 2.16 m 5 2.25 m 5 2.27 m 5a 2.38 m [a] 5a 2.13 [a] 5a 2.19 d (7.4) 2.22 dd (15.0, 8.3) - - 5b - 5b - 5b - 6 1.51 dd (13.8, 8.0) 6 1.49 dd (13.6, 10.3) 6 1.51 dd (13.7, 9.9) 0.90 [a] 0.89 [a] 0.93 [a] 7 2.94 m 7 2.98 m 7 2.99 m 7-OH 4.58 m [a] 7-OH 4.53 d (5.0) 7-OH 4.50 d (6.5) 8th 1.85 m [a] 8th 1.85 m [a] 8th 1.87 m [a] 8a 0.89 d (6.6) [a] 8a 0.93 (6.6) [a] 8a 0.94 d (6.6) [a] 9 5.30 dd (15.6, 9.2) 9 5.28 dd (15.7, 9.3) 9 5.29 dd (15.7, 9.2) 10 5.04 dd (15.6, 8.0) [a] 10 5.07 m [a] 10 5.07 dd (15.8, 8.2) 11 2.80 d (8.1) 11 2.82 d (8.1) 11 2.83 d (8.03) 12 - 12 - 12 - 12a 1.14 s 12a 1.18 s 12a 1.17 s 13 2.72 m 13 2.74 m 13 2.75 m 13-OH 5.06 [a] 13-OH 5.16 bs 13-OH 5.10 d (3.8) 14 1.79 m [a] 14 1.81 m [a] 14 1.83 m [a] 1.63 m 1.65 m 1.65 m 15 4.56 m [a] 15 4.61 dd (9.8, 3.3) 15 4.62 dd (9.8, 3.5) 16 1.90 m 16 1.91 m [a] 16 1.90 m [a] 16a 0.86 d (6.8) [a] 16a 0.90 d (6.7) [a] 16a 0.90 d (6.8) [a] 17 3.26 m [a] 17 3.27 d (8.8) 17 3.27 d (8.7) 17-OCH 3 3.04 s 17-OCH 3 3.05 s 17-OCH 3 3.06 s 18 - 18 - 18 - 18a 1.73 s 18a 1.75 s 18a 1.75 s 19 6.08 dd (10.9, 0.8) 19 6.11 d (10.9) 19 6.11 d (10.7) 20 6.59 dd (15.2, 10.9) 20 6.61 dd (15.2, 11.0) 20 6.61 dd (15.2, 10.9) 21 6.38 d (15.2) 21 6.41 d (15.1) 21 6.41 d (15.2) 22 - 22 - 22 - 22a 2.12 s 22a 2.14 s 22a 2.14 s 23 6.23 s 23 6.25 s 23 6.25 s 24 - 24 - 24 - 25 8.03 s 25 8.03 s 25 8:02 26 - 26 - 26 - 26a 2.37 s 26a 2.39 s 26a 2.39 s NCH 2 CH 3 3.26 m [a] NH 8.12 t (5.6) NH 8.43 t (5.9) NCH 2 CH 3 3.21 m [a] NHCH 2 5.17 m NHCH 2 4.27 d (5.9) NCH 2 CH 3 1.05 t (7.1) CH = CH 2 5.78 m o-CH 7.23 m NCH 2 CH 3 0.97 t (7.1) CH = CH 2 5.09 m [a] m-CH 7.28 m 5.03 m [a] p-CH 7.23 m [a] Partially overlapping signals. Table 4. 13 C NMR data of the rhizoxine derivatives 4, 13, 14 and 16. position 4 position 13 position 14 position 16 1 164.6 1 164.6 1 164.6 1 164.6 2 124.7 2 124.6 2 124.7 2 124.5 3 145.7 3 146.0 3 146.0 3 146.6 4 34.7 4 34.4 4 34.3 4 35.8 5 30.9 5 30.5 5 30.7 5 30.8 5a 40.0 5a 41.1 5a 41.4 5a 38.7 5b 172.1 5b 173.5 5b 171.7 5b 171.4 6 37.7 6 38.2 6 38.2 6 38.3 7 70.8 7 70.4 7 70.4 7 71.3 8th 44.9 8th 44.9 8th 44.9 8th 44.9 8a 17.4 8a 17.5 8a 17.5 8a 17.5 9 140.3 9 140.2 9 140.2 9 140.7 10 125.9 10 125.9 10 126.0 10 125.4 11 60.7 11 60.6 11 60.6 11 60.8 12 64.7 12 64.6 12 64.6 12 64.7 12a 10.8 12a 10.8 12a 10.8 12a 10.7 13 76.9 13 76.9 13 77.0 13 76.9 14 33.2 14 33.2 14 33.2 14 33.2 15 72.9 15 72.8 15 72.9 15 72.7 16 38.9 16 38.9 16 38.9 16 38.8 16a 10.2 16a 10.1 16a 10.2 16a 10.1 17 88.3 17 88.2 17 88.3 17 88.3 17-OCH 3 55.6 17-OCH 3 55.6 17-OCH 3 55.6 17-OCH 3 55.6 18 136.2 [b] 18 136.0 [b] 18 136.1 [b] 18 136.1 [b] 18a 11.3 18a 11.3 18a 11.3 18a 11.3 19 128.9 19 128.8 19 128.9 19 128.9 20 124.0 20 124.0 20 124.0 20 124.0 21 137.5 21 137.5 21 137.5 21 137.5 22 136.1 [b] 22 136.1 [b] 22 136.2 [b] 22 136.2 [b] 22a 14.0 22a 14.0 22a 14.0 22a 14.0 23 120.3 23 120.3 23 120.3 23 120.3 24 138.2 24 138.1 24 138.2 24 138.2 25 137.3 25 137.3 25 137.3 25 137.3 26 160.6 26 160.5 26 160.6 26 160.6 26a 13.4 26a 13.4 26a 13.4 26a 13.4 5b-OCH 2 65.5 NCH 3 25.4 NCH 3 36.9 CH (OH) 69.3 NCH 3 34.8 CH 2 OH 62.6 [b] Interchangeable assignments. Table 5. 13 C NMR data of rhizoxin derivatives 17, 18 and 19. position 17 position 18 position 19 1 164.6 1 164.7 1 164.6 2 124.5 2 124.8 2 124.7 3 146.5 3 146.0 3 145.9 4 35.6 4 34.2 4 34.2 5 31.0 5 30.7 5 30.8 5a 38.4 5a 41.3 5a 41.3 5b 170.4 5b 171.3 5b 171.3 6 38.3 6 38.2 6 38.2 7 71.3 7 70.3 7 70.3 8th 44.9 8th 45.0 8th 44.9 8a 17.5 8a 17.5 8a 17.4 9 140.7 9 140.2 9 140.1 10 125.4 10 126.2 10 126.0 11 60.8 11 60.6 11 60.5 12 64.7 12 64.8 12 64.7 12a 10.7 12a 10.9 12a 10.8 13 76.9 13 77.0 13 77.0 14 33.2 14 33.2 14 33.2 15 72.7 15 72.9 15 72.9 16 38.8 16 39.0 16 38.9 16a 10.1 16a 10.3 16a 10.2 17 88.3 17 88.3 17 88.2 17-OCH 3 55.6 17-OCH 3 55.7 17-OCH 3 55.7 18 136.1 [b] 18 136.2 [b] 18 136.1 [b] 18a 11.3 18a 11.3 18a 11.3 19 128.9 19 129.0 19 128.9 20 124.0 20 124.1 20 124.0 21 137.5 21 137.6 21 137.5 22 136.2 [b] 22 136.2 [b] 22 136.1 [b] 22a 14.0 22a 14.1 22a 14.0 23 120.3 23 120.4 23 120.3 24 138.2 24 138.2 24 138.2 25 137.3 25 137.5 25 137.3 26 160.6 26 160.7 26 160.5 26a 13.4 26a 13.5 26a 13.4 NCH 2 CH 3 41.4 5b-NHCH 2 40.8 NHCH 2 42.0 NCH 2 CH 3 39.4 [a] CH = CH 2 135.6 NHCH 2 C 139.6 NCH 2 CH 3 14.3 CH = CH 2 115.0 o-CH 127.2 NCH 2 CH 3 13.1 m-CH 128.3 p-CH 126.8 [a] Overlapping with solvent signal. [b] Interchangeable assignments.

Beispiel 4Example 4

Untersuchung der antiproliferativen und zytotoxischen WirkungInvestigation of antiproliferative and cytotoxic effects

Im Assay zur Bestimmung der zytotoxischen Wirkung wurden HeLa Zellen verwendet; HUVEC und K-562 Zellen wurden im Assay zur Bestimmung der antiproliferativen Wirkung eingesetzt. Die Assays wurden wie in der Literatur beschrieben durchgeführt ( Krauth et al., Bioorg. Med. Chem. 2010, 18, 1816–1821 ; Abdou et al. Phytochemistry 2010, 71, 110–116 ). Dosis-Wirkungskurven und IC50-Werte wurden ermittelt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 6 (GI50 (antiproliferative) und CC50 (zytotoxische) Konzentrationen) und 1 gezeigt. Die Rhizoxinderivate zeigen Aktivitäten im nanomolaren bzw. mikromolaren Bereich.In the assay for determining the cytotoxic effect, HeLa cells were used; HUVEC and K-562 cells were used in the assay to determine the antiproliferative effect. The assays were carried out as described in the literature ( Krauth et al., Bioorg. Med. Chem. 2010, 18, 1816-1821 ; Abdou et al. Phytochemistry 2010, 71, 110-116 ). Dose-response curves and IC 50 values were determined. The results are shown in Table 6 (GI 50 (antiproliferative) and CC 50 (cytotoxic) concentrations) and 1 shown. The rhizoxine derivatives show activities in the nanomolar or micromolar range.

Die zytotoxische Wirkung des Glycerolesters (4) wurde weiter an 42 humanen Tumorzelllinien geprüft. Der Assay wurde wie in der Literatur beschrieben durchgeführt ( Dengler et al. Anti-Cancer Drugs 1995, 6: 522–532 ). Die Ergebnisse sind in Tabelle 7 (IC50 Konzentrationen) und 2 gezeigt. Der Glycerolester (4) zeigt Aktivitäten im nanomolaren Bereich.The cytotoxic effect of the glycerol ester (4) was further tested on 42 human tumor cell lines. The assay was carried out as described in the literature ( Dengler et al. Anti-Cancer Drugs 1995, 6: 522-532 ). The results are shown in Table 7 (IC 50 concentrations) and 2 shown. The glycerol ester (4) shows activities in the nanomolar range.

Beispiel 5Example 5

Untersuchung der LipophilieExamination of lipophilicity

Zur Bestimmung der Lipophilie der erfindungsgemäßen Rhizoxinderivate wurden log KOW Werte mittels KOWWIN unter Verwendung eines Atom/Fragment Verteilungsverfahrens berechnet (Estimation Programs Interface Suite for Microsoft Windows, v 4.10, United States Environmental Protection Agency, Washington, DC, USA, 2011). Der Verteilungskoeffizient KOW zwischen n-Octanol und Wasser gibt die Wasserlöslichkeit und die Eigenschaften für den Membrantransport organischer Verbindungen an und ist ein wesentlicher pharmakokinetischer Parameter. Gemäß den Lipinski-Regeln (”Rule of 5”) kann mit einer schlechten Absorption oder Permeation gerechnet werden, wenn der log KOW größer als 5 ist ( Lipinski et al., Adv. Drug Deliv. Rev. 2001, 46, 3–26 ). Die Ergebnisse sind in Tabelle 6 gezeigt. Insbesondere die Rhizoxinderivate 4, 13, 14 und 16 erfüllen das Kriterium eines log KOW kleiner 5. Tabelle 6. Antiproliferative und zytotoxische Wirkungen und berechnete log KOW-Werte von Rhizoxinderivativen.[a] Verbindung GI50 ± SD [mol/L] CC50 ± SD [mol/L] log KOW HUVEC K-562 HeLa 4 6.3 × 10–9 ± 1.9 × 10–9 9.3 × 10–10 ± 1.4 × 10–10 1,0 × 10–10 ± 3.3 × 10–11 3.76 13 8.8 × 10–8 ± 1.6 × 10–8 1.5 × 10–8 ± 4.5 × 10–9 7.8 × 10–8 ± 1.1 × 10–8 4.24 14 2.2 × 10–8 ± 3.1 × 10–7 1.6 × 10–7 ± 4.4 × 10–8 1.2 × 10–6 ± 1.6 × 10–7 4.71 16 2.2 × 10–5 ± 4.6 × 10–7 1.2 × 10–5 ± 2.1 × 10–7 1.6 × 10–5 ± 1.5 × 10–7 4.92 17 6.3 × 10–7 ± 8.9 × 10–8 3.2 × 10–7 ± 4.1 × 10–8 3.8 × 10–7 ± 1.2 × 10–7 5.90 18 4.5 × 10–7 ± 1.5 × 10–7 1.5 × 10–7 ± 4.2 × 10–8 6.0 × 10–7 ± 1.5 × 10–7 5.55 19 7.0 × 10–7 ± 1.4 × 10–7 1.4 × 10–7 ± 2.0 × 10–8 1.5 × 10–6 ± 5.6 × 10–7 6.42 [a] Die angegebenen Werte stellen Mittelwerte von 4 wiederholten Bestimmungen dar. Tabelle 7. Zytotoxische Wirkungen des Rhizoxinglycerolesters (4).[a] Histotyp Zelllinie IC50 (nM) Blase BXF 1218L 0,184 BXF 1352L 0,377 T-24 0,274 Darm CXF 269L 0,23 DIFI 0,216 HCT-116 0,254 HT-29 0,116 RKO 0,0425 Magen GXF 251L 0,916 MKN45 0,165 Kopf & Hals CAL-27 0,139 Leber LIXF 575L 0,335 Lung, nicht LXFA 289L 0,87 Kleinzellig LXFA 526L 0,136 LXFA 629L 0,214 LXFL 1121L 0,220 LXFL 529L 0,137 NCI-H460 0,190 Brust MAXF 401NL 0,0469 MCF-7 0,094 MDA-MB-231 0,159 Melanom MEXF 1341L 0,451 MEXF 276L 0,173 MEXF 462NL 0,288 Ovar OVXF 899L 0,150 NIH:OVCAR-3 0,150 Pankreas PAXF 1657L 0,740 PAXF 546L 0,412 PANC-1 0,550 Prostata 22Rv1 0,277 DU-145 0,254 LNCaP 0,368 PC-3M 0,271 Mesotheliom PXF 1118L 5,12 PXF 1752L 0,285 PXF 698L 0,357 Niere RXF 1781L 0,195 RXF 393NL 0,328 RXF 486L 0,193 Sarkom Saos-2 0,600 TE671 1,19 Uterus UXF 1138L 0,142 Mittlerer IC50 0,261 [a] Die angegebenen Werte stellen Mittelwerte von 4 wiederholten Bestimmungen dar.To determine the lipophilicity of the rhizoxin derivatives of the invention, log K OW values were calculated using KOWWIN using an atom / fragment distribution method (Estimation Programs Interface Suite for Microsoft Windows, v. 4.10, United States Environmental Protection Agency, Washington, DC, USA, 2011). The distribution coefficient K OW between n-octanol and water indicates the water solubility and the membrane transport properties of organic compounds and is an important pharmacokinetic parameter. According to the rules of Lipinski ("Rule of 5"), a poor absorption or permeation can be expected if the log K OW is greater than 5 ( Lipinski et al., Adv. Drug Deliv. Rev. 2001, 46, 3-26 ). The results are shown in Table 6. In particular, the Rhizoxinderivate 4, 13, 14 and 16 meet the criterion of a log K OW smaller 5. Table 6. Antiproliferative and cytotoxic effects and calculated log K OW values of Rhizoxinderivativen. [a] connection GI 50 ± SD [mol / L] CC 50 ± SD [mol / L] log K OW HUVEC K-562 HeLa 4 6.3 × 10 -9 ± 1.9 × 10 -9 9.3 × 10 -10 ± 1.4 × 10 -10 1.0 × 10 -10 ± 3.3 × 10 -11 3.76 13 8.8 × 10 -8 ± 1.6 × 10 -8 1.5 × 10 -8 ± 4.5 × 10 -9 7.8 × 10 -8 ± 1.1 × 10 -8 4.24 14 2.2 x 10 -8 ± 3.1 × 10 -7 1.6 × 10 -7 ± 4.4 × 10 -8 1.2 × 10 -6 ± 1.6 × 10 -7 4.71 16 2.2 × 10 -5 ± 4.6 × 10 -7 1.2 × 10 -5 ± 2.1 × 10 -7 1.6 × 10 -5 ± 1.5 × 10 -7 4.92 17 6.3 × 10 -7 ± 8.9 × 10 -8 3.2 × 10 -7 ± 4.1 × 10 -8 3.8 × 10 -7 ± 1.2 × 10 -7 5.90 18 4.5 × 10 -7 ± 1.5 × 10 -7 1.5 × 10 -7 ± 4.2 × 10 -8 6.0 × 10 -7 ± 1.5 × 10 -7 5:55 19 7.0 × 10 -7 ± 1.4 × 10 -7 1.4 × 10 -7 ± 2.0 × 10 -8 1.5 × 10 -6 ± 5.6 × 10 -7 6:42 [a] The values given represent averages of 4 repeated determinations. Table 7. Cytotoxic effects of rhizoxin glycerol ester (4). [a] histotype cell line IC 50 (nM) bladder BXF 1218L 0.184 BXF 1352L 0.377 T-24 0.274 intestine CXF 269L 0.23 DIFI 0,216 HCT-116 0,254 HT-29 0.116 RKO 0.0425 stomach GXF 251L 0.916 MKN45 0,165 Head Neck CAL-27 0,139 liver LIXF 575L 0.335 Lung, not LXFA 289L 0.87 small cell LXFA 526L 0,136 LXFA 629L 0.214 LXFL 1121L 0,220 LXFL 529L 0,137 NCI-H460 0,190 chest MAXF 401NL 0.0469 MCF-7 0.094 MDA-MB-231 0,159 melanoma MEXF 1341L 0,451 MEXF 276L 0.173 MEXF 462NL 0,288 ovary OVXF 899L 0,150 NIH: OVCAR-3 0,150 pancreas PAXF 1657L 0,740 PAXF 546L 0.412 PANC-1 0,550 prostate 22Rv1 0.277 DU-145 0,254 LNCaP 0.368 PC-3M 0,271 mesothelioma PXF 1118L 5.12 PXF 1752L 0.285 PXF 698L 0,357 kidney RXF 1781L 0.195 RXF 393NL 0.328 RXF 486L 0.193 sarcoma Saos-2 0,600 TE671 1.19 uterus UXF 1138L 0,142 Middle IC 50 0.261 [a] The values given represent averages of 4 repeated determinations.

Beispiel 6Example 6

Untersuchung der fungiziden WirkungExamination of the fungicidal action

Die Bestimmung der fungiziden Wirkung der erfindungsgemäßen Rhizoxinderivate erfolgte mittels Agardiffusionstest. Die Rhizoxinderivate wurden jeweils in Acetonitril in einer Konzentration von 1 mg/mL gelöst. 50 μl der jeweiligen Lösung des Rhizoxinderivats wurde in den Assays gegen ausgewählte Stämme verwendet. Nach 24 stündiger Inkubation konnten Bereiche mit gehemmten Wachstum für Sporobolomyces salmonicolor 549, Glomerella cingulata, Penicillium notatum JP 36, Penicillium avellaneum UC 4376, und Aspergillus fumigatus ATCC 46645 beobachtet werden.The determination of the fungicidal activity of the rhizoxine derivatives according to the invention was carried out by means of agar diffusion test. The rhizoxine derivatives were each dissolved in acetonitrile at a concentration of 1 mg / ml. 50 μl of the respective solution of the rhizoxin derivative was used in the assays against selected strains. After incubation for 24 hours, areas of inhibited growth could be observed for Sporobolomyces salmonicolor 549, Glomerella cingulata, Penicillium notatum JP 36, Penicillium avellaneum UC 4376, and Aspergillus fumigatus ATCC 46645.

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  • EP 1940848 B1 [0004, 0004] EP 1940848 B1 [0004, 0004]
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Claims (14)

Verbindung der Formel (I):
Figure 00230001
oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz oder Solvat derselben bereit, wobei R1 -CO2CH2CH(OH)CH2OH oder -CONR4R5 ist; R2 ein Wasserstoffatom oder eine Methylgruppe ist; und R4 und R5 jeweils unabhängig voneinander ausgewählt sind aus Wasserstoffatom, -C1-C6 Alkyl, -C2-C6 Alkenyl, -C3-C8 Carbocyclus, -Aryl, -C1-C6 Alkylaryl, -C1-C6 Alkyl-(C3-C8 Carbocyclus), -C3-C8 Heterocyclus, und -C1-C6 Alkyl(C3-C8 Heterocyclus).Compound of the formula (I):
Figure 00230001
or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof, wherein R 1 is -CO 2 CH 2 CH (OH) CH 2 OH or -CONR 4 R 5 ; R 2 is a hydrogen atom or a methyl group; and R 4 and R 5 are each independently selected from hydrogen, -C 1 -C 6 alkyl, -C 2 -C 6 alkenyl, -C 3 -C 8 carbocyclic, -aryl, -C 1 -C 6 alkylaryl, C 1 -C 6 alkyl (C 3 -C 8 carbocycle), -C 3 -C 8 heterocycle, and -C 1 -C 6 alkyl (C 3 -C 8 heterocycle). Verbindung oder pharmazeutisch akzeptables Salz oder Solvat der Verbindung nach Anspruch 1, wobei R1 -CO2CH2CH(OH)CH2OH ist.A compound or pharmaceutically acceptable salt or solvate of the compound of claim 1 wherein R 1 is -CO 2 CH 2 CH (OH) CH 2 OH. Verbindung oder pharmazeutisch akzeptables Salz oder Solvat der Verbindung nach Anspruch 2, wobei R2 eine Methylgruppe ist.A compound or pharmaceutically acceptable salt or solvate of the compound of claim 2 wherein R 2 is a methyl group. Verbindung oder pharmazeutisch akzeptables Salz oder Solvat der Verbindung nach Anspruch 1, wobei R1 -CONR4R5 ist.A compound or pharmaceutically acceptable salt or solvate of the compound of claim 1 wherein R 1 is -CONR 4 R 5 . Verbindung oder pharmazeutisch akzeptables Salz oder Solvat der Verbindung nach Anspruch 4, wobei R2 eine Methylgruppe ist.A compound or pharmaceutically acceptable salt or solvate of the compound of claim 4 wherein R 2 is a methyl group. Verbindung oder pharmazeutisch akzeptables Salz oder Solvat der Verbindung nach Anspruch 1, 3 oder 5, ausgewählt aus:
Figure 00240001
wobei R4 H ist und R5 H, CH3, CH2CH3, CH2CH=CH2, oder CH2Ph ist; oder R4 und R5 jeweils CH3 oder CH2CH3 sind.A compound or pharmaceutically acceptable salt or solvate of the compound of claim 1, 3 or 5 selected from:
Figure 00240001
wherein R 4 is H and R 5 is H, CH 3 , CH 2 CH 3 , CH 2 CH = CH 2 , or CH 2 Ph; or R 4 and R 5 are each CH 3 or CH 2 CH 3 . Verbindung oder pharmazeutisch akzeptables Salz oder Solvat der Verbindung nach Anspruch 1, 3 oder 5, wobei die Verbindung ein NMR-Spektrum gemäß der Tabellen 1 bis 5 aufweist.A compound or pharmaceutically acceptable salt or solvate of the compound of claim 1, 3 or 5, wherein the compound has an NMR spectrum according to Tables 1 to 5. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (I) gemäß irgendeinem der Ansprüche 1 bis 7, umfassend den Schritt: (i) einer Umesterung unter Verwendung von Kaliumcyanid als Katalysator zur Herstellung von Rhizoxinestern; oder (ii) einer Aminolyse unter Verwendung von Kaliumcyanid als Katalysator zur Herstellung von primären und sekundären Rhizoxinamiden; oder (iii) einer Amidierung unter Verwendung von 4-(Dimethylamino)pyridin, N-Hydroxysuccinimid, und 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid zur Herstellung von tertiären und ungesättigten Rhizoxinamiden.A process for the preparation of a compound of formula (I) according to any one of claims 1 to 7, comprising the step: (i) transesterification using potassium cyanide as a catalyst to produce rhizoxin esters; or (ii) an aminolysis using potassium cyanide as a catalyst to produce primary and secondary rhizoxinamides; or (iii) amidation using 4- (dimethylamino) pyridine, N-hydroxysuccinimide, and 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide to prepare tertiary and unsaturated rhizoxinamides. Pharmazeutische Formulierung, umfassend mindestens eine Verbindung gemäß irgendeinem der Ansprüche 1 bis 7 und, optional, mindestens einen Träger und/oder mindestens einen Hilfsstoff.A pharmaceutical formulation comprising at least one compound according to any one of claims 1 to 7 and, optionally, at least one carrier and / or at least one excipient. Kombinationspräparat, umfassend mindestens eine Verbindung gemäß irgendeinem der Ansprüche 1 bis 7; mindestens einen weiteren Wirkstoff und, optional, mindestens einen Träger und/oder mindestens einen Hilfsstoff.A combination preparation comprising at least one compound according to any one of claims 1 to 7; at least one further active ingredient and, optionally, at least one carrier and / or at least one excipient. Verbindung oder pharmazeutisch akzeptables Salz oder Solvat der Verbindung gemäß irgendeinem der Ansprüche 1 bis 7, pharmazeutische Formulierung gemäß Anspruch 9, oder Kombinationspräparat gemäß Anspruch 10 zur Verwendung als Arzneimittel.A compound or pharmaceutically acceptable salt or solvate of the compound of any one of claims 1 to 7, the pharmaceutical formulation of claim 9, or the combination preparation of claim 10 for use as a pharmaceutical. Verbindung oder pharmazeutisch akzeptables Salz oder Solvat der Verbindung gemäß irgendeinem der Ansprüche 1 bis 7, pharmazeutische Formulierung gemäß Anspruch 9, oder Kombinationspräparat gemäß Anspruch 10 zur Verwendung als Fungizid.A compound or pharmaceutically acceptable salt or solvate of the compound of any one of claims 1 to 7, the pharmaceutical formulation of claim 9, or the combination preparation of claim 10 for use as a fungicide. Verbindung oder pharmazeutisch akzeptables Salz oder Solvat der Verbindung gemäß irgendeinem der Ansprüche 1 bis 7, pharmazeutische Formulierung gemäß Anspruch 9, oder Kombinationspräparat gemäß Anspruch 10 zur Verwendung als zytostatisches Mittel. A compound or pharmaceutically acceptable salt or solvate of the compound of any one of claims 1 to 7, the pharmaceutical formulation of claim 9, or the combination preparation of claim 10 for use as a cytostatic agent. Verbindung oder pharmazeutisch akzeptables Salz oder Solvat der Verbindung gemäß irgendeinem der Ansprüche 1 bis 7, pharmazeutische Formulierung gemäß Anspruch 9, oder Kombinationspräparat gemäß Anspruch 10 zur Verwendung als zytotoxisches Mittel.A compound or pharmaceutically acceptable salt or solvate of the compound of any one of claims 1 to 7, the pharmaceutical formulation of claim 9, or the combination preparation of claim 10 for use as a cytotoxic agent.
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