DE102011084347A1 - Microscope for performing multi-position experiment of e.g. cell culture, has selection unit that provides determined sample positions to user, and control unit which provides the pre-specified range of sample positions - Google Patents
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Abstract
Description
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Mikroskop zur Durchführung eines Multipositionsexperimentes gemäß des Oberbegriffs des Anspruches 1 sowie ein Mikroskopierverfahren zur Durchführung eines Multipositionsexperimentes gemäß des Oberbegriffs des Anspruches 13. The present invention relates to a microscope for carrying out a multi-position experiment according to the preamble of
Naturwissenschaftliche Fragestellungen in der Mikroskopie erfordern zunehmend die Aufnahme einer großen Zahl von Bildern. Nur durch die Aufnahme und Analyse einer großen Zahl relevanter Proben können statistische Anforderungen erfüllt werden. Scientific questions in microscopy increasingly require the acquisition of a large number of images. Only by recording and analyzing a large number of relevant samples can statistical requirements be met.
Eine weit verbreitete Methode zur Handhabung einer Vielzahl von mikroskopisch-biologischen Proben, wie etwa Zellkulturen oder kleine Organismen, sind Probenträger mit mehreren abgeteilten Einheiten. Ein Beispiel eines solchen Probenträgers ist ein sogenannter Multiwell-Träger, wobei die abgeteilten Einheiten als Näpfchen bezeichnet werden. Es ist bekannt, daß Mikroskope die verschiedenen Formate der Multiwell-Träger erkennen und basierend darauf die gewünschten Aufnahmen durchführen. Dabei kann der Benutzer entweder den gesamten Probenträger und somit alle Näpfchen oder nur einen Teil davon für die Bildaufnahme definieren. Das Mikroskop führt dann in den ausgewählten Näpfchen die gewünschten Bildaufnahmen durch. Um Zeit zu sparen, werden dabei in der Regel aber nicht Bilder der gesamten Fläche jedes Näpfchens aufgenommen, sondern lediglich nur für einen gewissen Teil davon. Es werden also an verschiedenen Positionen im Näpfchen Aufnahmen durchgeführt, was auch als Multipositionsexperiment bezeichnet wird. Dabei ist für jeden Probenträger hinterlegt, an welchen Positionen die Aufnahmen durchzuführen sind. So kann z.B. hinterlegt sein, daß pro Näpfchen genau eine Aufnahme im Zentrum durchgeführt wird. Auch eine gleichmäßige Verteilung von beispielsweise vier bis sechs Positionen pro Näpfchen ist bekannt. One widely used method for handling a variety of microscopic-biological samples, such as cell cultures or small organisms, are multi-partitioned sample carriers. An example of such a sample carrier is a so-called multiwell carrier, wherein the divided units are referred to as wells. It is known that microscopes recognize the various formats of the multiwell carriers and perform the desired recordings based thereon. In this case, the user can either define the entire sample carrier and thus all cells or only a part thereof for the image recording. The microscope then performs the desired images in the selected wells. In order to save time, images of the entire surface of each well are generally not taken, but only for a certain part of it. In other words, images are taken at different positions in the well, which is also referred to as a multiposition experiment. It is deposited for each sample carrier, at which positions the recordings are to be performed. Thus, e.g. be deposited, that per well exactly one recording in the center is performed. A uniform distribution of, for example, four to six positions per well is known.
Ferner ist es möglich, daß der Benutzer manuell die Positionen in der Aufnahme definiert. Dies wird jedoch praktisch immer schwieriger und nahezu unmöglich, wenn viele dutzend bis hundert einzelne Näpfchen pro Probenträger vorhanden sind. Further, it is possible for the user to manually define the positions in the shot. However, this is becoming increasingly difficult and almost impossible if there are many dozens to hundreds of individual wells per sample carrier.
Ferner besitzen unterschiedliche Probenträger für biologische Präparate jeweils spezifische optische Eigenschaften hinsichtlich der Möglichkeiten, die sie für mikroskopische Aufnahmen bieten, und verhalten sich außerdem unterschiedlich im Hinblick auf das Zusammenspiel mit der Probe selbst. So kann die Fläche des Probenträgers oder einer Einheit darauf (z.B. Näpfchen) optisch nicht gleichmäßig gut für die Bildaufnahme geeignet sein. Je nach Probenträger und Probe ergeben sich z.B. am Rand oder im Zentrum Bereiche, die bei verschiedenen Mikroskopierverfahren (z.B. bei verschiedenen Kontrastverfahren, insbesondere Durchlichtverfahren) ungleichmäßig kontrastiert und/oder ausgeleuchtet werden. Werden hier Bilder aufgenommen, kann dies eine Analyse der Darstellung der Bilder unmöglich oder zumindest unpraktikabel machen. Furthermore, different sample carriers for biological preparations each have specific optical properties in terms of the possibilities they offer for microscopic images, and also behave differently with respect to the interaction with the sample itself. Thus, the surface of the sample carrier or a unit thereon (eg wells ) optically not equally well suited for image acquisition. Depending on the sample carrier and sample, e.g. at the edge or in the center, areas that are unevenly contrasted and / or illuminated in different microscopy methods (for example in different contrasting methods, in particular transmitted light methods). If images are taken here, this can make an analysis of the representation of the images impossible or at least impractical.
Des weiteren kann die Fläche des Probenträgers oder des Näpfchens nicht gleichmäßig gut von der z.B. biologischen Probe bedeckt sein. Probenspezifische Wachstumscharakteristika sowie andere Parameter (z.B. Bewegung der Mediums-Flüssigkeit in der Einheit oder Gas-Diffusion) beeinflussen die Art und Gleichmäßigkeit der Abdeckung. Es kann daher dazu kommen, daß einzelne Bildaufnahmen in Teilbereichen des Probenträgers oder der Näpfchen keine biologischen Präparate enthalten oder aber zu viele. In beiden Fällen kann wiederum die Analyse oder Darstellung der Bilder unmöglich werden. Furthermore, the area of the sample carrier or well can not be uniformly well away from the e.g. be covered by a biological sample. Sample-specific growth characteristics as well as other parameters (e.g., movement of the medium fluid in the unit or gas diffusion) affect the nature and uniformity of the coverage. It may therefore happen that individual image recordings in partial areas of the sample carrier or the wells contain no biological preparations or too many. In either case, analysis or presentation of the images may become impossible.
Regelmäßige, zumeist rechtwinklig in Reihen und Spalten angeordnete Aufnahmepositionen sind anfällig für die Artefakte, die durch regelmäßig wiederkehrende Strukturen verursacht werden. Herstellungsprozesse von Probenträgern und deren Beschichtungen resultieren oft in linien- oder gitterförmigen Strukturen, die einerseits Auswirkungen auf das Verhalten der biologischen Probe haben können oder aber direkt durch mikroskopisch-optische Verfahren sichtbar werden. Regular pick-up positions, usually arranged at right angles in rows and columns, are susceptible to artifacts caused by regularly recurring structures. Production processes of sample carriers and their coatings often result in linear or lattice-like structures which, on the one hand, can have an effect on the behavior of the biological sample or can be directly visualized by microscopic-optical methods.
Ausgehend hiervon ist es Aufgabe der Erfindung, ein Mikroskop zur Durchführung eines Multipositionsexperimentes der eingangs genannten Art so weiterzubilden, daß möglichst effizient nur dort Aufnahmen durchgeführt werden, wo sich mit hoher Wahrscheinlichkeit Untersuchungsobjekte befinden und andererseits auch die Bildqualität den gestellten Anforderungen genügt. Ferner soll ein Mikroskopierverfahren zur Durchführung eines Multipositionsexperimentes der eingangs genannten Art in der gleichen Art und Weise weitergebildet werden. Based on this, it is an object of the invention to develop a microscope for performing a Multipositionsexperimentes of the type mentioned so that as efficiently as possible recordings are carried out where there are high probability objects under investigation and on the other hand, the image quality meets the requirements. Furthermore, a microscopy method for carrying out a multi-position experiment of the type mentioned in the same way is to be developed.
Die Aufgabe wird bei einem Mikroskop zur Durchführung eines Multipositionsexperimentes der eingangs genannten Art dadurch gelöst, daß eine Bestimmungseinheit und eine eine graphische Benutzerschnittstelle aufweisende Auswahleinheit vorgesehen werden, wobei die Auswahleinheit dem Benutzer mehrere verschiedene Arten der Bestimmung von Probenpositionen zur Auswahl anbietet und die ausgewählte Bestimmungsart der Bestimmungseinheit mitteilt, wobei die Bestimmungseinheit gemäß der mitgeteilten Bestimmungsart Probenpositionen bestimmt und der Steuereinheit als die vorgegebenen Probenpositionen mitteilt. The object is achieved in a microscope for performing a Multipositionsexperimentes of the aforementioned type, characterized in that a determination unit and a graphic user interface having a selection unit are provided, wherein the selection unit offers the user several different ways of determining sample positions for selection and the selected type of determination Determining unit tells, wherein the determination unit determined according to the notified type determination sample positions and tells the control unit as the predetermined sample positions.
Damit ist es möglich, daß der Benutzer in Abhängigkeit der spezifischen Anforderung der vorliegenden Probe die Art der Bestimmung der Probenposition auswählt, die für den konkreten Fall am geeignetesten ist. Thus, it is possible for the user to determine the type of determination of the. According to the specific requirement of the present sample Sample position that is most appropriate for the particular case.
Insbesondere kann die Auswahleinheit dem Benutzer unterschiedliche Regionen (die sich z.B. in Größe und/oder Form bzw. Außenkontur unterscheiden) für ein Probenfeld zur Auswahl anbieten, in dem die Probenpositionen zu verteilen sind. Damit wird eine gute Anpassung an das abzuscannende bzw. zu untersuchende Probenfeld möglich. In particular, the selection unit may offer the user different regions (which differ, for example, in size and / or shape or outer contour) for a sample field for selection in which the sample positions are to be distributed. This allows a good adaptation to the sample field to be scanned or examined.
Die Auswahleinheit kann dem Benutzer unterschiedliche Arten der Gewichtung und der Verteilung der Probenpositionen in einem vorgegebenen Probenfeld zur Auswahl anbieten. So kann sie z.B. eine Gewichtung in der Mitte und/oder am Rand des Probenfeldes anbieten. Damit ist es möglich, in den Bereichen die Probenpositionen häufiger anzuordnen, in denen die Untersuchung der Proben am erfolgversprechensten ist. The selection unit may offer the user different types of weighting and distribution of sample positions in a given sample field for selection. So she can e.g. offer a weighting in the middle and / or at the edge of the sample field. This makes it possible to arrange the sample positions more frequently in the areas in which the examination of the samples is the most promising.
Ferner kann die Auswahleinheit dem Benutzer die Eingabeanzahl der zu verteilenden Probenpositionen ermöglich. Dabei kann es sich um eine absolute Anzahl von Probenpositionen oder um eine relative Anzahl von Probenpositionen handeln, wobei unter einer relativen Anzahl von Probenpositionen ein Flächenanteil verstanden wird, den die Summe der Flächen der aufzunehmenden Probenbereiche relativ zur Fläche des Probenfeldes, in dem die Probenpositionen zu verteilen sind, aufweist. Furthermore, the selection unit allows the user to enter the number of sample positions to be distributed. This may be an absolute number of sample positions or a relative number of sample positions, wherein a relative number of sample positions is understood to mean an area fraction equal to the sum of the areas of the sample areas to be recorded relative to the area of the sample field in which the sample positions distribute.
Insbesondere kann die Auswahleinheit dem Benutzer die Eingabe des Überlappungsverhältnisses der Probenbereiche benachbarter Probenpositionen ermöglich, wobei dieses Verhältnis dann bei der Bestimmung der Probenpositionen berücksichtigt wird. Dabei kann das Überlappungsverhältnis Null betragen, so daß keine Überlappung vorhanden ist und die Probenbereiche auch voneinander beabstandet sein können. Alternativ ist es möglich, daß das Überlappungsverhältnis größer Null ist und so festlegt, wie groß die Überlappung sein soll. In particular, the selection unit allows the user to enter the overlap ratio of the sample areas of adjacent sample positions, this ratio then being taken into account in the determination of the sample positions. In this case, the overlap ratio can be zero, so that no overlap is present and the sample areas can also be spaced from each other. Alternatively, it is possible that the overlap ratio is greater than zero and so determines how large the overlap should be.
Ferner kann die Auswahleinheit dem Benutzer eine Auswahl von verschiedenen Proben-Trägern anbieten. Bei den Proben-Trägern kann es sich z.B. um Petrischalen, Mehrfachobjekt-Träger, Multichamber-Platten, Multiwell-Platten bzw. Mikrotiterplatten, etc. handeln, wobei beispielsweise unterschiedliche Ausbildungen von Probenträgern gleichen Typs (z.B. Multiwell-Träger) mit einer unterschiedlichen Anzahl von Probenaufnahmeabschnitten oder unterschiedlichen Abmessungen und/oder unterschiedliche Typen von Proben-Träger zur Auswahl angeboten werden können. Damit kann schnell für unterschiedliche Proben-Träger die gewünschte Verteilung bestimmt werden. Furthermore, the selection unit may offer the user a selection of different sample carriers. The sample carriers may be e.g. to Petri dishes, multi-object carrier, multi-plating plates, multiwell plates or microtiter plates, etc., for example, different configurations of sample carriers of the same type (eg multiwell carrier) with a different number of sample receiving sections or different dimensions and / or different types can be offered by sample carriers for selection. This allows the desired distribution to be determined quickly for different sample carriers.
Insbesondere ist es möglich, daß die Auswahleinheit dem Benutzer die Auswahl einzelner Probenaufnahmeabschnitte des Proben-Trägers und/oder verschiedene Arten der Bestimmung der Probenpositionen pro Probenaufnahmeabschnitt des Proben-Trägers anbietet. In particular, it is possible for the selection unit to offer the user the selection of individual sample receiving sections of the sample carrier and / or different ways of determining the sample positions per sample receiving section of the sample carrier.
Ferner kann die Auswahleinheit dem Benutzer die Auswahl einer zufälligen Verteilung der Probenpositionen oder die Auswahl einer automatischen Verteilung der Probenpositionen anbieten. Wenn der Benutzer die automatische Verteilung auswählt, kann das Mikroskop das Probenfeld, in dem das Multipositionsexperiments durchzuführen ist, aufnehmen und anhand der Aufnahmen die Verteilung der Probenposition festlegen. Furthermore, the selection unit may offer the user the choice of a random distribution of the sample positions or the selection of an automatic distribution of the sample positions. When the user selects the automatic distribution, the microscope can record the sample field in which the multi-position experiment is to be performed and determine the distribution of the sample position based on the images.
Bei dem erfindungsgemäßen Mikroskop können die verschiedenen Arten der Bestimmung von Probenpositionen für ein Probenfeld, für die Probenaufnahmeabschnitte eines Proben-Trägers mit mehreren Probenaufnahmeabschnitte oder selektiv für jeden Probenaufnahmeabschnitt zur Auswahl angeboten werden. In the microscope according to the invention, the various ways of determining sample positions for a sample field, for the sample receiving sections of a sample carrier having a plurality of sample receiving sections or selectively for each sample receiving section may be offered for selection.
Ferner kann bei dem erfindungsgemäßen Mikroskop die Auswahleinheit dem Benutzer die Auswahl einer zweidimensionalen oder dreidimensionalen Verteilung der Probenpositionen anbieten, was dann bei der Bestimmung der Probenpositionen berücksichtigt wird. Bei der zweidimensionalen Verteilung werden die Probenpositionen in einer Ebene verteilt angeordnet und bei der dreidimensionalen Verteilung in einer vorbestimmten dreidimensionalen Region. Dabei ist es insbesondere möglich, daß unterschiedliche Arten der Verteilung in der Ebene einerseits und in der Richtung senkrecht dazu andererseits zur Auswahl angeboten werden. Natürlich ist es auch möglich, die Art der Verteilung über alle drei Raumrichtungen gleich zu wählen. Furthermore, in the microscope according to the invention, the selection unit can offer the user the choice of a two-dimensional or three-dimensional distribution of the sample positions, which is then taken into account in the determination of the sample positions. In the two-dimensional distribution, the sample positions are distributed in a plane and in the three-dimensional distribution in a predetermined three-dimensional region. It is particularly possible that different types of distribution in the plane on the one hand and in the direction perpendicular thereto on the other hand are offered for selection. Of course, it is also possible to choose the type of distribution over all three spatial directions.
Ferner wird die Aufgabe bei einem Mikroskopierverfahren zum Durchführen eines Multipositionsexperimentes der eingangs genannten Art dadurch gelöst, daß einem Benutzer mehrere verschiedene Arten der Bestimmung von Probenpositionen zur Auswahl angeboten werden und gemäß der ausgewählten Bestimmungsart Probenpositionen als die vorgegebenen Probenpositionen bestimmt werden. Furthermore, the object is achieved in a microscopy method for carrying out a multi-position experiment of the type mentioned above in that a plurality of different types of determination of sample positions are offered to a user for selection and determined according to the selected type of determination sample positions as the predetermined sample positions.
Das erfindungsgemäße Mikroskopierverfahren kann so weitergebildet werden, daß es die im Zusammenhang mit dem erfindungsgemäßen Mikroskop sowie seiner Weiterbildung beschriebenen Verfahrensschritte enthält. The microscopy method according to the invention can be developed in such a way that it contains the method steps described in connection with the microscope according to the invention and its further development.
Es versteht sich, daß die vorstehend genannten und die nachstehend noch zu erläuternden Merkmale nicht nur in den angegebenen Kombinationen, sondern auch in anderen Kombinationen oder in Alleinstellung einsetzbar sind, ohne den Rahmen der vorliegenden Erfindung zu verlassen. It is understood that the features mentioned above and those yet to be explained not only in the specified combinations, but also in other combinations or in Stand alone, without departing from the scope of the present invention.
Nachfolgend wird die Erfindung beispielsweise anhand der beigefügten Zeichnungen, die auch erfindungswesentliche Merkmale offenbaren, noch näher erläutert. Es zeigen: The invention will be explained in more detail for example with reference to the accompanying drawings, which also disclose characteristics essential to the invention. Show it:
Bei der in
Das Mikroskop
Das Mikroskop
Der Computer
Neben dem hier beschriebenen und dargestellten aufrechten Mikroskop ist die Erfindung auch für alle anderen Mikroskoptypen einsetzbar, wie z.B. bei einem inversen Mikroskop, einem konfokalen Mikroskop, etc. In addition to the upright microscope described and illustrated herein, the invention is also applicable to all other types of microscope, e.g. in an inverted microscope, a confocal microscope, etc.
In
In der nächsten Zeile "Array-Kontur" sind drei Auswahlpunkte zur Bestimmung der Außenkontur der zu bestimmenden Probenregion (nachfolgend auch als Probenfeld bezeichnet) angezeigt. Der Auswahlpunkt mit dem eingezeichneten Pfeil betrifft die Möglichkeit, eine beliebige Linie in einem dargestellten Probenbild einzuzeichnen und dadurch die Kontur des Probenfeldes für das Multipositionsexperimentes festzulegen. Ferner ist möglich, eine rechteckige Außenkontur (zweiter Auswahlpunkt) sowie eine ellipsenförmige Außenkontur (dritter Auswahlpunkt) festzulegen. Bei dem hier beschriebenen Beispiel wird von einer rechteckigen Außenkontur ausgegangen, daher ist das schematisch dargestellte Rechteck fett eingezeichnet. In the next line "array contour", three selection points are displayed for determining the outer contour of the sample region to be determined (also referred to below as the sample field). The selection point with the arrow marked concerns the possibility of drawing in any line in a sample image shown and thereby defining the contour of the sample field for the multi-position experiment. It is also possible to define a rectangular outer contour (second selection point) and an elliptical outer contour (third selection point). In the example described here is assumed by a rectangular outer contour, therefore, the schematically illustrated rectangle is bold.
Natürlich sind alternativ oder zusätzlich weitere Konturformen und somit verschiedene Regionen möglich, die dann in entsprechender Weise einem Benutzer zur Auswahl angeboten werden. Of course, alternatively or additionally, further contour shapes and thus different regions are possible, which are then offered in a corresponding manner to a user for selection.
In der nächsten Zeile "Verteilungs-Bias" kann durch einen Schieberegler
Ferner gibt es noch die Auswahlfelder "zufällig" und "auto", die nicht gleichzeitig ausgewählt werden können. Wenn eines von diesen ausgewählt ist, kann kein Verteilungs-Bias eingestellt werden, da dann eine zufällige Verteilung (bei Auswahl des Auswahlfeldes "zufällig") oder eine nachfolgend noch beschriebene automatische Verteilung (bei Auswahl des Auswahlfeldes "auto") der Probenpositionen im festgelegten Probenfeld durchgeführt wird. There are also the selection fields "random" and "auto", which can not be selected at the same time. If one of these is selected, no distribution bias can be set, then a random distribution (if the selection field is "random") or an automatic distribution described below (if the selection field "auto" is selected) of the sample positions in the specified sample field is carried out.
In der letzten Zeile "Verteilung durch" kann die Anzahl der Probenpositionen vorgegeben werden. Alternativ kann der Prozentbereich vorgegeben werden, wobei dieser Prozentbereich die Summe aller Flächen in allen Aufnahmen an den einzelnen Probenpositionen relativ zur Gesamtfläche des festgelegten Feldes angibt, wobei davon ausgegangen wird, daß sich die einzelnen Aufnahmen nicht überlappen. In dem hier beschriebenen Beispiel wurde die Anzahl gewählt (durch Fettdruck hervorgehoben), wobei 16 Probenpositionen ausgewählt wurden. In the last line "Distribution by" the number of sample positions can be specified. Alternatively, the percentage range may be specified, this percentage range indicating the sum of all areas in all recordings at the individual sample positions relative to the total area of the specified field, assuming that the individual recordings do not overlap. In the example described here, the number was selected (highlighted in bold) with 16 sample positions selected.
In
Nach Festlegung der Region sowie der Verteilung der Probenpositionen durch den Benutzer werden diese in der beschriebenen Art und Weise vom Computer
In
In
In
In
Der Verteilungs-Bias kann in gleicher Weise wie bei den bisher beschriebenen Ausführungsformen ausgewählt werden, so daß sich die in
In
Ferner ist es möglich, für jedes Näpfchen eine andere Verteilung in der beschriebenen Art und Weise vorzugeben, so daß z.B. die in
In
Der Verteilalgorithmus, der in Abhängigkeit der über die graphische Benutzerschnittstelle
Das Seitenverhältnis des Bildfeldes wird so skaliert, daß das n-fache seiner Fläche gleich der Fläche des Probenfeldes (= Abtastgebiet) ist, in dem das Multipositionsexperiment durchgeführt werden soll. Im Idealfall passen dann alle so skalierten Bildfelder genau in das Abtastgebiet. Andernfalls werden mit einem kombinatorischen Generator alle zulässigen Anordnungen von n skalierten Bildfeldern erzeugt und für jede Anordnung dasjenige skalierte Abtastgebiet berechnet, welches gerade eben alle n skalierten Bildfelder einschließt. Ausgewählt wird diejenige Anordnung, für welche die Fläche seines skalierten Abtastgebietes minimal wird, die also die dichteste Packung aufweist. Das Ergebnis ist eine Liste mit n Abtastgebiet-Koordinaten, die jeweils den Mittelpunkt des entsprechenden Bildfeldes angeben. Dieses Ergebnis weist in etwa gleiche Bildfelddichten im ganzen Abtastgebiet auf. Der Verteilalgorithmus kann als ein Verfahren der kleinsten Fläche bezeichnet werden. The aspect ratio of the image field is scaled such that n times its area is equal to the area of the sample field (= sampling area) in which the multiposition experiment is to be performed. Ideally, then all scaled image fields fit exactly in the scanning area. Otherwise, all permissible arrangements of n scaled image fields are generated with a combinatorial generator and, for each arrangement, that scaled scanning region is calculated which just now includes all n scaled image fields. The choice is made for that arrangement for which the area of its scaled scanning area becomes minimal, that is, which has the densest packing. The result is a list of n scan area coordinates, each indicating the center of the corresponding image field. This result has approximately the same field densities throughout the scan area. The distribution algorithm may be referred to as a least area method.
Um eine ungleichmäßige Dichte zu erzeugen, werden die Punkte der Liste einer nicht-linearen Transformation unterworfen, wobei die Ableitung der Transformation gerade die Dichte an einer Stelle ist. Da die relative Dichte für alle Punkte des Abtastgebietes durch den eingestellten Verteilungs-Bias vorgegeben ist, kann die Transformation durch Integration der Dichte gewonnen werden. To create a non-uniform density, the points in the list are subjected to a non-linear transformation, the derivation of the transformation being the density in one place. Since the relative density for all points of the scanning area is given by the set distribution bias, the transformation can be obtained by integration of the density.
Als Eingabeparameter für den Verteilalgorithmus können folgende Parameter berücksichtigt werden: die Form des Abtastgebietes (z.B. ein Rechteck oder Ellipse/Kreis), die Größe des Abtastgebietes (Breite und Höhe), die Größe des Bildfeldes (Breite und Höhe), die Angabe, ob die Anzahl der Bildfelder absolut oder relativ ist, die Anzahl der gewünschten Bildfelder, falls die Anzahl der Bildfelder absolut ist, der relative Füllgrad in Prozent (falls die Anzahl der Bildfelder relativ ist) sowie ein Verteilungsparameter. Der Verteilungsparameter ist entweder der Bias-Parameter, der bestimmt, wie die Bildfeldverteilung gewichtet ist (z.B. gleichverteilt, Rand, Mitte oder beides) oder die Option, die bestimmt, daß die Bildfelder zufällig verteilt werden sollen. The following parameters can be taken into account as input parameters for the distribution algorithm: the shape of the scanning area (eg a rectangle or ellipse / circle), the size of the scanning area (width and height), the size of the image field (width and height), the specification of whether the The number of image fields is absolute or relative, the number of image fields you want, if the number of image fields is absolute, the relative percent fill level (if the number of image fields is relative), and a distribution parameter. The distribution parameter is either the bias parameter that determines how the image field distribution is weighted (e.g., equally spaced, edge, center, or both) or the option that determines that the image fields should be randomly distributed.
Die beschriebene Bestimmung der Verteilung der Aufnahmepositionen kann z.B. auch mit der Aufnahme eines z-Stapels bzw. der Aufnahme von Bildserien in der z-Richtung kombiniert werden. In diesem Fall erhält man eine Positionsverteilung in dreidimensionaler Ausdehnung. Die Gewichtung (Gleichverteilung, Rand und/oder Mitte) kann dann auch in der z-Dimension unabhängig angewendet werden. So kann man für die z-Richtung einerseits und die x- und y-Richtung andererseits die gewünschte Verteilungsgewichtung unabhängig bestimmen. Die Gewichtung in z-Richtung kann man z.B. einsetzen, um sphärische oder geometrische Verzerrungen auszugleichen. The described determination of the distribution of the pickup positions may be e.g. can also be combined with the inclusion of a z-stack or the recording of image series in the z-direction. In this case, one obtains a position distribution in three-dimensional extent. The weighting (equal distribution, edge and / or center) can then be applied independently in the z-dimension. Thus, for the z direction on the one hand and the x and y directions on the other hand, one can independently determine the desired distribution weighting. The weighting in the z-direction can e.g. use to compensate for spherical or geometric distortions.
Neben der beschriebenen Gewichtung durch Einstellung über die graphische Benutzerschnittstelle
Als Bildanalyseverfahren ist z.B. eine Analyse des Kontrastmaßes möglich. Dabei wird das Übersichtsbild in hinreichend kleine Rechtecke zerlegt und für jedes dieser Rechtecke das Kontrastmaß bestimmt. So erhält man eine Häufigkeitsverteilung des Kontrastmaßes (Anzahl der Rechtecke mit einem bestimmten Kontrastmaß). Damit läßt sich ermitteln, in welchen Bereichen der Probe hohe Kontrastwerte vorliegen. Dies sind die bevorzugten Bereiche zur Festlegung von Probenpositionen. As an image analysis method, e.g. an analysis of the contrast measure possible. The overview image is split into sufficiently small rectangles and the contrast dimension is determined for each of these rectangles. Thus one obtains a frequency distribution of the contrast measure (number of rectangles with a certain contrast measure). This can be used to determine in which areas of the sample high contrast values are available. These are the preferred ranges for specifying sample positions.
In
Natürlich kann bei allen beschriebenen Ausführungsbeispielen die berechnete Verteilung vom Benutzer noch geändert werden. So kann er die Probenpositionen, die durch die Pluszeichen
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