DE102006046959A1

DE102006046959A1 - Producing a standardized thrombocyte concentrate comprises separating a thrombocyte-rich fraction (TRF) from pooled donor material, testing and/or standardizing the TRF, and dividing the TRF into standardized units

Info

Publication number: DE102006046959A1
Application number: DE102006046959A
Authority: DE
Inventors: Andreas Prof. Dr. Greinacher
Original assignee: Ernst Moritz Arndt Universitaet Greifswald
Current assignee: Universitaet Greifswald
Priority date: 2006-10-04
Filing date: 2006-10-04
Publication date: 2008-04-10

Abstract

Producing a standardized thrombocyte concentrate comprises separating thrombocytes from pooled donor material, collecting a thrombocyte-rich fraction (TRF), testing and/or standardizing the TRF, and dividing the TRF into standardized units. An independent claim is also included for a set of standardized thrombocyte concentrates, each comprising at least 2 x 101>1> thrombocytes, produced as above. ACTIVITY : Hemostatic. MECHANISM OF ACTION : None given.

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft standardisierte Thrombozytenkonzentrate, Verfahren zu ihrer Herstellung sowie die Verwendung solcher Thrombozytenkonzentrate als pharmazeutische Zusammensetzung.The The present invention relates to standardized platelet concentrates. Process for their preparation and the use of such platelet concentrates as a pharmaceutical composition.

Hintergrund der ErfindungBackground of the invention

Seit Anfang der 1990er Jahre hat sich in der Transfusionsmedizin die sogenannte Blutkomponententherapie durchgesetzt. Dabei erhält der Patient genau die Bestandteile des Vollblutes, die er benötigt. Im Sinne dieses Konzepts werden bei verschiedenen therapeutischen Anwendungen (wie z.B. Gerinnungsstörungen) heutzutage Thrombozytenkonzentrate eingesetzt.since In the early 1990s, in transfusion medicine enforced so-called blood component therapy. The patient receives exactly the components of the thoroughbred that he needs. In the spirit of this concept are used in various therapeutic applications (such as coagulation disorders) nowadays platelet concentrates are used.

Die Haltbarkeit dieser Thrombozytenpräparate liegt bei wenigen Tagen, so dass diese Blutkonserven, die besonders in der Transplantationsmedizin und der Tumortherapie von großer Bedeutung sind, nicht in großem Umfang bevorratet werden können, sondern möglichst frisch hergestellt werden müssen. Die bekannten Verfahren zur Isolierung von Thrombozytenkonzentraten aus Vollblut umfassen verschiedene Zentrifugations- und Filtrationsschritte.The Durability of these platelet preparations is a few days, so that these blood preserves, especially in transplant medicine and tumor therapy of great Meaning, not in big Extent can be stored, but possible must be freshly prepared. The known methods for the isolation of platelet concentrates from whole blood include various centrifugation and filtration steps.

Bei einem der gebräuchlichen Verfahren wird zunächst das Plasma von den zellulären Bestandteilen des Bluts durch Zentrifugation abgetrennt. Diese Zellfraktion enthält neben den Thrombozyten (Blutplättchen) auch Leukozyten und Erythrozyten. Dabei bilden die Erythrozyten den untersten Teil des Sediments und können mit Hilfe eines Abpressgeräts halbquantitativ von Thrombozyten und Leukozyten getrennt werden. Das verbliebene Material, das die Thrombozyten- und Leukozytenfraktion enthält, nennt man Buffy coat. Aus dem Buffy coat müssen anschließend Leukozyten und die verbliebenen Erythrozyten entfernt werden, um das Thrombozytenkonzentrat zu erhalten. Dazu werden zunächst 4–6 Buffy coats aus je einer Vollblutspende gepoolt und entweder Plasma oder eine Elektrolytlösung zugegeben. Dann werden die Erythrozyten und ein großer Teil der Leukozyten durch Zentrifugation entfernt. Anschließend wird, üblicherweise durch Filtration, eine Leukozytendepletion erreicht, und das Thrombozytenkonzentrat bleibt zurück. Ein solches aus 4–6 Buffy coats erhaltenes Thrombozytenkonzentrat stellt eine therapeutische Einheit dar und sollte mindestens ca. 2,0·10¹¹, 2,4·10¹¹ oder 3·10¹¹ Thrombozyten enthalten (Richtlinien der EU, der deutschen Ärztekammer und der USA).In one of the conventional methods, the plasma is first separated from the cellular components of the blood by centrifugation. In addition to the platelets (platelets), this cell fraction also contains leucocytes and erythrocytes. The erythrocytes form the lowest part of the sediment and can be separated semi-quantitatively from thrombocytes and leukocytes with the aid of a pressure-exerting device. The remaining material containing the platelet and leukocyte fraction is called buffy coat. From the buffy coat then leukocytes and the remaining erythrocytes must be removed to obtain the platelet concentrate. For this purpose, first 4-6 Buffy coats are pooled from a whole blood donation and either plasma or an electrolyte solution added. Then the erythrocytes and a large part of the leucocytes are removed by centrifugation. Subsequently, leukocyte depletion is achieved, usually by filtration, and the platelet concentrate remains. Such a platelet concentrate obtained from 4-6 buffy coats represents a therapeutic unit and should contain at least about 2.0 × 10 ¹¹ , 2.4 × 10 ¹¹ or 3 × 10 ¹¹ platelets (guidelines of the EU, the German Medical Association and the USA).

Der Stand der Technik umfasst außerdem Aphereseverfahren, bei denen die verschiedenen Sedimentfraktionen von Vollblut während der Zentrifugation abgenommen werden können (vgl. US 6, 022, 306 , US 6, 514, 189 , US 6, 354, 986 , US 6,334,842 ). Auf diese Weise wird die Herstellung von Thrombozytenkonzentrat aus Vollblut ermöglicht. Ein Vorteil, der sich aus diesen Verfahren ergibt, besteht darin, dass die nicht abgetrennten Bestandteile des Bluts dem Spender zurück transfundiert werden können. Das macht es möglich, einem Spender eine größere Menge Thrombozyten abzunehmen als bei der Entnahme von Vollblut. Es sind Aphereseverfahren bekannt, bei denen von einem Spender bis zu ca. 9·10¹¹ Thrombozyten gewonnen werden können (z.B. Picker et al., 2006, Transfusion 46:1601-1608 ).The prior art also includes apheresis methods in which the various sediment fractions of whole blood can be removed during centrifugation (cf. US 6, 022, 306 . US 6, 514, 189 . US 6,354,986 . US 6,334,842 ). In this way, the production of platelet concentrate from whole blood is made possible. An advantage that results from these procedures is that the unseparated components of the blood can be transfused back to the donor. This makes it possible to take a larger amount of platelets from a donor than when taking whole blood. Apheresis methods are known in which up to about 9 × 10 ¹¹ platelets can be obtained from a donor (eg Picker et al., 2006, Transfusion 46: 1601-1608 ).

Die mit den im Stand der Technik bekannten Verfahren hergestellten Thrombozytenkonzentrate sind hinsichtlich ihres Volumens, ihrer Qualität und der enthaltenen Thrombozytenzahl nur innerhalb relativ weiter Grenzen standardisiert, da die individuellen Besonderheiten des Spenders auch die Qualität des Thrombozytenkonzentrates beeinflussen.The are platelet concentrates prepared by methods known in the art in terms of volume, quality and platelet count standardized only within relatively wide limits, since the individual Special features of the donor and the quality of the platelet concentrate influence.

Es wäre wünschenswert, alle erhaltenen Thrombozytenkonzentrate vor der Verabreichung an den Patienten hinsichtlich verschiedener Qualitätsmerkmale zu untersuchen und sie gegebenenfalls derart zu modifizieren, dass sie bezüglich dieser Qualitätsmerkmale festgelegten Standards entsprechen. Diese Merkmale umfassen unter anderem die Thrombozytendichte des Konzentrats, die Verunreinigung des Konzentrats mit Erythrozyten und Leukozyten, die Funktion der Thrombozyten, die Menge an Antikörpern gegen Blutgruppenbestandteile, insbesondere Anti-A und Anti-B-Antikörper, und die Abwesenheit von Pathogenen. Das betrifft vor allem die Abwesenheit von Viren, Bakterien, Protozoen.It would be desirable all platelet concentrates obtained before administration to the To examine patients for different quality characteristics and If necessary, modify them so that they respect these quality characteristics comply with established standards. These features include under other, the platelet density of the concentrate, the impurity of the concentrate with erythrocytes and leucocytes, the function of Platelets, the amount of antibodies against blood group components, especially anti-A and anti-B antibodies, and the absence of pathogens. This concerns above all the absence of viruses, bacteria, protozoa.

Die Untersuchung eines Thrombozytenkonzentrats auf mehrere Qualitätsmerkmale führt jedoch dazu, dass dieses nicht mehr verwendet werden kann, da die Anzahl an Thrombozyten zur Transfusion dann zu gering ist. Zur Zeit ist damit eine Produktkontrolle Produkt-zerstörend.The Examination of a platelet concentrate for several quality characteristics however, leads to that this can no longer be used because the number of platelets then too low for transfusion. At the moment it is a product control Product destructive.

Aufgrund der mit der Qualitätskontrolle verbundenen hohen Kosten und des Verlusts von Spendermaterial werden in Deutschland gegenwärtig nur ca. 1% der Thrombozytenkonzentrate hinsichtlich ihrer Qualitätsmerkmale untersucht ( Bundesgesundheitsblatt, 2000, 43:571 ).Due to the high costs associated with quality control and the loss of donor material, only about 1% of platelet concentrates in Germany are currently being examined for their quality characteristics ( Federal Health Gazette, 2000, 43: 571 ).

Gegenüber dem Stand der Technik stellt sich daher die Aufgabe, ein Verfahren bereitzustellen, das die kostengünstige Gewinnung von Thrombozytenkonzentraten erlaubt und bei dem jedes Produkt hinsichtlich seiner Qualität geprüft und möglichst standardisiert ist.Compared to the The prior art therefore has as its object to provide a method the cost-effective extraction allowed by platelet concentrates and in which each product in terms its quality checked and as possible standardized.

Diese Aufgabe wird durch die vorliegende Erfindung gelöst.These Problem is solved by the present invention.

Beschreibung der ErfindungDescription of the invention

Die vorliegende Erfindung betrifft, unter anderem, ein Verfahren zur Herstellung von standardisiertem Thrombozytenkonzentrat aus Spendermaterial, Schritte umfassend, bei denen man:

a) Thrombozyten enthaltendes Spendermaterial von einer Mehrzahl von Spendern mit Hilfe eines Zellseparationsverfahrens auftrennt,
b) die thrombozytenreiche Fraktion sammelt,
c) die thrombozytenreiche Fraktion untersucht und/oder standardisiert,
d) die thrombozytenreiche Fraktion in mehrere standardisierte Einheiten Thrombozytenkonzentrat aufteilt.

The present invention relates, inter alia, to a process for the preparation of standardized platelet concentrate of donor material comprising the steps of:

a) separates platelet-containing donor material from a plurality of donors using a cell separation method,
b) collecting the platelet-rich fraction,
c) examining and / or standardizing the platelet-rich fraction,
d) divides the platelet rich fraction into several standardized units of platelet concentrate.

Die Qualität der Thrombozyten in jeder nach dem erfindungsgemäßen Verfahren erhaltenen standardisierten Einheit einer Charge ist gleich. Vorzugsweise sind die standardisierten Einheiten untereinander auch in ihrer Menge gleich, es können jedoch auch, z.B. zur Qualitätskontrolle oder, je nach Bedarf, unterschiedlich große Mengen abgenommen werden.The quality the platelets in each standardized obtained by the method according to the invention Unit of a batch is the same. Preferably, the standardized Units in their quantity are the same, but it is also possible e.g. for quality control or, depending on requirements, different amounts are removed.

Vorzugsweise sind die in Schritt d erhaltenen standardisierten Einheiten Thrombozytenkonzentrat therapeutische Einheiten, die zur Transfusion bei Menschen geeignet sind und bevorzugt nach den Richtlinien der EU bzw. der deutschen Ärztekammer und der USA mindestens 2,0·10¹¹ Thrombozyten, oder mindestens 2,4·10¹¹ Thrombozyten, mehr bevorzugt mindestens 3·10¹¹ Thrombozyten umfassen.Preferably, the standardized units of platelet concentrate obtained in step d are therapeutic units which are suitable for transfusion in humans and preferably according to the guidelines of the EU or the German Medical Association and the USA at least 2.0 × 10 ¹¹ platelets, or at least 2.4 ×. 10 ¹¹ platelets, more preferably at least 3 x 10 ¹¹ platelets.

Um mehrere standardisierte therapeutische Einheiten an Thrombozytenkonzentrat zu erhalten, ist Voraussetzung, dass die thrombozytenreiche Fraktion in Schritt c eine ausreichende Zahl an Thrombozyten umfasst, so dass eine Aufteilung in mehrere therapeutische Einheiten (also vorzugsweise jeweils mindestes 2,0·10¹¹ Thrombozyten) Thrombozytenkonzentrat möglich ist und/oder Untersuchungen durchgeführt werden können und noch mindestens eine therapeutische Einheit zur Transfusion verwendet werden kann. Die Fraktion in Schritt c sollte daher mindestens 4·10¹¹ oder mindestens 4,8·10¹¹ Thrombozyten umfassen, bevorzugt mindestens 7,2·10¹¹, mindestens 1·10¹², mindestens 5·10¹² oder mindestens 1·10¹³ Thrombozyten. Bevorzugt erhält man mit dem Verfahren 3 oder mehr Einheiten, insbesondere 3 oder mehr therapeutische Einheiten Thrombozytenkonzentrat.In order to obtain several standardized therapeutic units of platelet concentrate, it is a prerequisite that the platelet-rich fraction in step c comprises a sufficient number of platelets, so that a division into several therapeutic units (ie, preferably at least 2.0 × 10 ¹¹ platelets) platelet concentrate possible and / or examinations can be carried out and at least one therapeutic unit can be used for transfusion. The fraction in step c should therefore comprise at least 4 × 10 ¹¹ or at least 4.8 × 10 ¹¹ platelets, preferably at least 7.2 × 10 ¹¹ , at least 1 × 10 ¹² , at least 5 × 10 ¹² or at least 1 × 10 ¹³ platelets , The method preferably comprises 3 or more units, in particular 3 or more therapeutic units, of platelet concentrate.

Um dies zu erreichen, werden in einer Ausführungsform der Erfindung vor der Untersuchung und Standardisierung in Schritt c eine Mehrzahl von in Schritt b erhaltenen thrombozytenreichen Fraktionen vereinigt.Around To achieve this, in one embodiment of the invention the investigation and standardization in step c a majority of platelet-rich fractions obtained in step b.

Dazu können Thrombozyten aus Spendermaterial von jeweils einem Spender einzeln aufgereinigt und vereinigt werden. Bevorzugt wird aber Material von mehreren Spendern gemeinsam aufgereinigt, z.B. nach den im Stand der Technik bekannten Verfahren, durch die aus Material von 4–6 Spendern eine therapeutische Einheit an Thrombozyten erhalten wird. Mehrere dieser therapeutischen Einheiten werden vereinigt. An dem erhaltenen Thrombozytenpool werden nun Untersuchung und Standardisierung durchgeführt (siehe 1).For this purpose, platelets from donor material can be individually purified and combined by one donor each. Preferably, however, material from several donors is purified together, for example by the methods known in the art, through which a therapeutic unit of platelets is obtained from material from 4-6 donors. Several of these therapeutic units are combined. Examination and standardization are now carried out on the obtained platelet pool (see 1 ).

Als Spendermaterial im Sinne der Erfindung können allgemein Vollblut oder Buffy coats verwendet werden. Wird Vollblut als Ausgangsmaterial verwendet, kann dieses in Blutbeuteln zusammengeführt und durchmischt werden. In einer besonders bevorzugten Ausführungsform der Erfindung geht man jedoch nicht von Vollblut aus, sondern von sogenannten Buffy coats, der beim Zentrifugieren von Vollblut entstehenden Schicht aus Leukozyten und Thrombozyten, die sich zwischen dem Plasmaüberstand und den sedimentierten Erythrozyten befindet. Nach der Zentrifugation von Vollblut können, z.B. in einer Blutbeutelpresse, Plasma und Erythrozyten durch Abpressen entfernt werden, so dass der Buffy coat erhalten wird, in dem Thrombozyten, Leukozyten und ein Restanteil von Erythrozyten enthalten sind.When Donor material according to the invention can generally whole blood or Buffy coats are used. Will be whole blood as a starting material used, this can be merged into blood bags and be mixed. In a particularly preferred embodiment However, the invention is not based on whole blood, but of so-called buffy coats, which arise when centrifuging whole blood Layer of leukocytes and platelets, extending between the plasma supernatant and the sedimented erythrocytes. After centrifugation of whole blood, e.g. in a blood bag press, plasma and erythrocytes by squeezing be removed so that the buffy coat is obtained in the platelets, Leukocytes and a residual portion of erythrocytes are included.

Zur Weiterverarbeitung können mehrere Blutbeutelinhalte Buffy coat z.B. durch Ausspülen mit Plasma oder mit Elektrolytlösung in einem Blutbeutel zusammengeführt werden. Dies erfolgt durch eine Schlauchverbindung zwischen dem Sammelgefäß und den Buffy coat-Blutbeuteln, z.B. über ein steriles Schlauch-Verschweißungsverfahren. Das Zusammenführen der Buffy coats kann entweder erfolgen, bevor eine weitere Auftrennung und Aufreinigung der Thrombozyten erfolgt, oder es können kontinuierlich Buffy coats angeschlossen und nachgefüllt werden, während der Separationsvorgang bereits erfolgt.to Further processing can several blood bag contents Buffy coat e.g. by rinsing with plasma or with electrolyte solution brought together in a blood bag become. This is done by a hose connection between the Collection vessel and the Buffy coat blood bags, e.g. above a sterile tube welding process. The merge The Buffy coats can either be done before further separation and purification of the platelets, or it may be continuous buffy coats connected and refilled be while the separation process has already taken place.

Üblicherweise erfolgt das Abtrennen und Einsammeln der Thrombozytenfraktion mittels Zellseparation nach der Zusammenführung der Spendermaterialien. Die Zellseparation kann direkt mit Hilfe eines Apheresegeräts erreicht werden. Ein Apheresegerät im Sinne der Erfindung ist dabei eine Vorrichtung, die dazu in der Lage ist, aus Spendermaterial, das durch die Vorrichtung hindurchgepumpt wird, automatisch eine in Bezug auf Thrombozyten angereicherte Fraktion abzutrennen. Geeignete Geräte sind z.B. Amicus (Baxter Transfusion Theraeies, Deerfield, IL), MCS Plus (Haemonetics Corp., Braintree, MA) oder Trima Accel (Gambro BCT, Lakewood, CO). Das Trennungsprinzip ist z.B. in Picker et al. (2006, Transfusion 46:1601-2608, mit weiteren Zitaten ) beschrieben.Usually, the separation and collection of the platelet fraction by means of cell separation after the merger of the donor materials. The cell separation can be achieved directly with the help of an apheresis device. An apheresis device in the sense of the invention is a device which is capable of automatically separating a fraction enriched in platelets from donor material which is pumped through the device. Suitable devices include Amicus (Baxter Transfusion Therapy, Deerfield, IL), MCS Plus (Haemonetics Corp., Braintree, MA) or Trima Accel (Gambro BCT, Lakewood, CO). The separation principle is eg in Picker et al. (2006, Transfusion 46: 1601-2608, with further citations ).

In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung wird Spendenmaterial, insbesondere Buffy coats, von einer Mehrzahl an Spendern kontinuierlich durch ein Apheresegerät aufgereinigt und die thrombozytenreiche Fraktion (die Überstände) werden gemeinsam gesammelt, wobei die in Schritt c des Verfahrens zu untersuchende Fraktion erhalten wird. Dazu können entweder eine Mehrzal an Buffy coats vor dem Anschluß an das Apherese-Gerät gepoolt werden (siehe 2), oder das Apherese-Gerät wird so ausgestaltet, dass eine Vielzahl von Buffy coats nacheinander verarbeitet werden kann, bevorzugt automatisiert. Dies kann z.B. mit Hilfe einer mit dem Apheresegerät verbundenen Stapelvorrichtung geschehen, die eine Mehrzahl von Buffy coats enthält und die nacheinander, jeweils unter Herstellung von Schlauchverbindungen, den Inhalt der Buffy coats der Apherese zuführt. Bevorzugt können mit dieser Vorrichtung mindestens 8, mindestens 10 oder mindestens 20 Buffy coats nacheinander automatisiert verarbeitet werden.In a preferred embodiment of the invention dispensing material, in particular Buffy coats, continuously purified from a plurality of donors by an apheresis machine and the platelet-rich fraction (the supernatants) are collected together to obtain the fraction to be tested in step c of the method. This can be done either by pooling several times more Buffy coats before connecting to the apheresis device (see 2 ), or the apheresis device is designed so that a plurality of buffy coats can be processed one after the other, preferably automatically. This can be done, for example, by means of a stacking device connected to the apheresis device which contains a plurality of buffy coats and which successively supplies the content of the buffy coats to the apheresis, in each case with production of hose connections. Preferably, at least 8, at least 10 or at least 20 Buffy coats can be processed automatically in succession with this device.

Alternativ dazu können zur Separation der Thrombozyten z.B. auch Zentrifugen eingesetzt werden, die die gleichzeitige Zentrifugation einer größeren Menge an Spendermaterial erlauben, so dass auch per Zentrifugation Material von mehr als 8 Spendern gleichzeitig gewonnen werden kann.alternative can do this for separation of platelets e.g. also used centrifuges be the simultaneous centrifugation of a larger amount allow to donor material, so that also by centrifugation material can be won by more than 8 donors at the same time.

Der in dem erfindungsgemäßen Verfahren nach Schritt b erhaltene Thrombozytenpool stammt daher von einer Mehrzahl von Spendern, insbesondere von mindestens 8 oder mindestens 10, vorzugsweise mindestens 20 oder mindestens 50 Spendern. Die Erfindung ermöglicht es jedoch, das Ausgangsmaterial von beliebig vielen Spenden zusammen zu führen, in Abhängigkeit von der Menge an zur Verfügung stehenden Blutspenden.Of the in the inventive method according to Step b obtained platelet pool therefore comes from a plurality of donors, in particular of at least 8 or at least 10, preferably at least 20 or at least 50 dispensers. The invention allows it however, the starting material of any number of donations together respectively, dependent on available from the amount standing blood donations.

Neben der Möglichkeit der Untersuchung und Standardisierung ist von Vorteil, dass in den erfindungsgemäßen standardisierten Thrombozytenkonzentraten individuelle Unterschiede in der Qualität des Spendermaterials ausgeglichen werden.Next The possibility The investigation and standardization is beneficial in that according to the invention standardized Platelet concentrates individual differences in the quality of the donor material be compensated.

Bevorzugt wird Spendenmaterial von Spendern der gleichen Blutgruppe (A, B, AB, O) verwendet. Vorzugsweise sind die Spender alle Rhesus-positiv oder alle Rhesus-negativ. Wird Material von Spendern mit unterschiedlichem Rhesus-Faktor verwendet, ist das erhaltene Konzentrat als Rhesus-positiv einzustufen.Prefers donation material from donors of the same blood type (A, B, AB, O). Preferably, the donors are all Rhesus positive or all Rhesus negative. Will material from donors with different Rhesus factor used, the concentrate obtained is Rhesus positive classified.

Ein potentieller Nachteil bei der Mischung von Material vieler Spender ist eine statistisch wahrscheinlichere mögliche Kontamination der ganzen erhaltenen Charge an Thrombozytenkonzentraten mit Pathogenen. Dies kann jedoch nach dem erfindungsgemäßen Verfahren ausgeschlossen werden, da mit diesem Verfahren eine Möglichkeit der Untersuchung auf Pathogene und der Inaktivierung der Pathogene in der ganzen Charge eröffnet wird. Damit wird für die Empfänger des Thrombozytenkonzentrats die Sicherheit vor Pathogeninfektion durch das erfindungsgemäße Verfahren erhöht.One potential disadvantage of mixing material from many dispensers is a statistically more likely potential contamination of the whole obtained batch of platelet concentrates with pathogens. This but can be excluded by the method according to the invention be there with this method a possibility of investigation Pathogens and inactivation of pathogens throughout the batch open becomes. This will be for the recipients of the platelet concentrate the security against pathogen infection by the method according to the invention elevated.

Im Rahmen des erfindungsgemäßen Verfahrens wird daher die thrombozytenreiche Fraktion vorzugsweise untersucht, z.B. auf Vorliegen von Kontaminationen oder im Hinblick auf die Einhaltung bestimmter, zur Standardisierung verwendeter Parameter. Erfindungsgemäß umfasst das Untersuchen und Standardisieren mindestens einen Schritt, ausgewählt aus den folgenden Schritten, bei denen man:

– die Thrombozytenmenge und/oder Thrombozytendichte des Thrombozytenkonzentrats bestimmt und gegebenenfalls einstellt,
– das Thrombozytenkonzentrat hinsichtlich der Anwesenheit von Pathogenen untersucht,
– Pathogene im Thrombozytenkonzentrat inaktiviert,
– die Menge an Antikörpern gegen Blutgruppenbestandteile untersucht,
– die Verunreinigung des Konzentrats mit Erythrozyten und Leukozyten untersucht,
– die Thrombozytenfunktion untersucht.

In the context of the method according to the invention, therefore, the platelet-rich fraction is preferably examined, for example for the presence of contaminants or with regard to the compliance with certain parameters used for the standardization. According to the invention, the examination and standardization comprise at least one step selected from the following steps, in which:

Determines and optionally stops the platelet amount and / or platelet density of the platelet concentrate,
- investigated the platelet concentrate for the presence of pathogens,
- inactivates pathogens in the platelet concentrate,
Investigated the amount of antibodies against blood group components,
- examines the contamination of the concentrate with erythrocytes and leukocytes,
- investigated the platelet function.

Die Thrombozytendichte pro μl wird mit einem automatischen Partikelzählgerät untersucht, der Gehalt an Erythrozyten und Leukozyten z.B. mit einem Partikelzählgerät, mit einer Nageotte-Zählkammer oder mit dem Durchflusszytometer. Angestrebt wird eine Thrombozytenzahl von mindestens etwa 2,4·10¹¹ Thrombozyten pro standardisiertem Thrombozytenkonzentrat (Schritt d), bevorzugt jedoch mindestens 3·10¹¹ Thrombozyten oder 3–6·10¹¹ Thrombozyten pro Konzentrat. Das typische Volumen des standardisierten Thrombozytenkonzentrats liegt bei etwa 250–300 ml, die Thrombozytendichte also bei mindestens etwa 8·10⁸ Thrombozyten/ml.The platelet density per μl is examined with an automatic particle counting device, the content of erythrocytes and leucocytes eg with a particle counting device, with a Nageotte counting chamber or with the flow cytometer. The aim is a platelet count of at least about 2.4 x 10 ¹¹ platelets per standardized platelet concentrate (step d), but preferably at least 3 x 10 ¹¹ platelets or 3-6 x 10 ¹¹ platelets per concentrate. The typical volume of the standardized platelet concentrate is about 250-300 ml, ie the platelet density at at least about 8 × 10 ⁸ platelets / ml.

Die Thrombozytenfunktion wird z.B. mit der Aggregometrie nach Born bestimmt, mit der Durchflusszytometrie und/oder mit dem Plättchenfunktionsanalyzer oder anderen geeigneten Methoden. Funktionen, die in vitro untersucht werden können, sind z.B. Laktatproduktion, Glukoseverbrauch, P-Selektin-Expression, pH, pCO₂, pO₂ oder Antwort auf hypotonischen Schock ( Goodrich et al., Vox Sang. 90:279-285 ).The platelet function is determined, for example, by Born's aggregometry, by flow cytometry and / or by the platelet function analyzer or other suitable methods. Functions that can be studied in vitro include lactate production, glucose consumption, P-selectin expression, pH, pCO ₂ , pO ₂ or response to hypotonic shock ( Goodrich et al., Vox Sang. 90: 279-285 ).

Die Bakterienkontamination wird z.B. durch Bakterienkultur oder durch PCR (Polymerasekettenreaktion) untersucht, eine Kontamination mit Viren (z.B. HIV, Hepatitis A, B und oder C-Virus) oder Protozonen (z.B. Leishmanien) kann ebenfalls z.B. durch PCR festgestellt werden. Bevorzugt wird im Rahmen des erfindungsgemäßen Verfahrens die Anwesenheit von Bakterien geprüft. Eine Kontamination mit Viren wird im Allgemeinen schon bei dem verwendeten Spendermaterial (z.B. den Buffy coats) vor der Vereinigung der thrombozytenreichen Fraktionen aus dem Material untersucht.The bacterial contamination is investigated, for example, by bacterial culture or by PCR (polymerase chain reaction); contamination with viruses (eg HIV, hepatitis A, B and / or C virus) or protozones (eg Leishmania) can also be detected, for example by PCR. Preferably, the presence of bacteria is tested in the context of the method according to the invention. In general, contamination with viruses already starts with the donor material used (eg the buffy coats) before the union of the platelet-rich fractions examined the material.

Wird keine Kontamination festgestellt, wird das Konzentrat als pathogenfrei eingestuft und kann verwendet werden. Wird Anwesenheit von Pathogenen festgestellt, kann das Konzentrat verworfen oder Pathogene können inaktiviert werden. Auch nach einer Inaktivierung von Pathogenen wird das Konzentrat als pathogenfrei eingestuft.Becomes If no contamination is detected, the concentrate is considered pathogen free classified and can be used. Will presence of pathogens the concentrate may be discarded or pathogens may be inactivated become. Even after inactivation of pathogens, the concentrate becomes classified as pathogen-free.

Auch die Abwesenheit anderer Verunreinigungen des Thrombozytenkonzentrats, z.B. mit unerwünschten Antikörpern oder anderen Zellbestandteilen kann untersucht werden. Ist diese Verunreinigung zu hoch, kann ein Ausgleich mit anderen Chargen erfolgen, oder die zu stark verunreinigte Charge kann von der medizinischen Verwendung ausgeschlossen werden. Bevorzugt enthält das fertige Präparat weniger als 1·10⁶ Leukocyten und/oder weniger als 3·10⁹ Erythrocyten.The absence of other contaminants of the platelet concentrate, eg with unwanted antibodies or other cell components, can also be investigated. If this contamination is too high, balancing with other batches may occur or the overly contaminated batch may be excluded from medical use. Preferably, the finished preparation contains less than 1 x 10 ⁶ leukocytes and / or less than 3 x 10 ⁹ erythrocytes.

Die Untersuchung z.B. auf Pathogene oder Funktion und die weitere Behandlung z.B. Pathogeninaktivierung müssen nicht vor der Aufteilung in die einzelnen therapeutischen Einheiten erfolgen, sondern kann auch parallel oder danach stattfinden, solange gewährleistet ist, dass die in der Untersuchung gewonnenen Informationen allen Einheiten der Charge zugeordnet werden können.The Examination of e.g. on pathogens or function and further treatment e.g. Pathogen inactivation need not before splitting into the individual therapeutic units but can also take place in parallel or afterwards, as long as guaranteed is that the information obtained in the investigation all Units of the batch can be assigned.

Vorteilhafterweise werden im Rahmen der Standardisierung evtl. vorhandene Pathogene (Viren, Bakterien und/oder Protozoen) im Thrombozytenkonzentrat inaktiviert. Dies kann entweder standardmäßig bei allen Chargen geschehen oder nur bei solchen, bei denen eine Kontamination festgestellt wurde. Das Thromboyztenkonzentrat sollte zur Verwendung am Menschen keine vermehrungsfähigen Viren, Bakterien oder Protozoen enthalten.advantageously, in the context of standardization possibly existing pathogens (Viruses, bacteria and / or protozoa) in the platelet concentrate inactivated. This can either be done by default for all batches or only in those where contamination has been detected. The thrombocyte concentrate should not be used for human reproducible viruses, Contain bacteria or protozoa.

Verfahren zur Pathogeninaktivierung sind im Stand der Technik bekannt und werden ständig weiter verbessert. Beispiele sind etwa Bestrahlung mit gamma-Strahlung, UV B-Licht oder UV C-Licht, Behandlung mit Amotosalen HCl und UV A-Licht oder mit Riboflavin und UV Licht (wie z.B. erläutert in Slichter et al., Blood 105:4106-4114 ; Slichter et al., Transfusion 46: 731-740 ; Apelseth et al., 2006, Transfusion 46:800-810 ; Sandler, Curr Hematol Rep 5: 53–54 , Cardo et al., Vox Sang 90:85-81 und Goodrich et al., Vox Sang. 90:279-285 ).Methods for pathogen inactivation are known in the art and are constantly being improved. Examples are irradiation with gamma radiation, UV B light or UV C light, treatment with amotosal HCl and UV A light or with riboflavin and UV light (as explained, for example, in US Pat Slichter et al., Blood 105: 4106-4114 ; Slichter et al., Transfusion 46: 731-740 ; Apelseth et al., 2006, Transfusion 46: 800-810 ; Sandler, Curr Hematol Rep 5: 53-54 . Cardo et al., Vox Sang 90: 85-81 and Goodrich et al., Vox Sang. 90: 279-285 ).

Eine Inaktivierung von Pathogenen kann in einem Schritt mit der Aufteilung der Charge in mehrere therapeutische Einheiten erfolgen, z.B. durch Bestrahlung, wie Bestrahlung mit UV B-Licht, während des Abfüllens der Thrombozyten in einzelne Blutbeutel.A Inactivation of pathogens can be done in one step with the division the batch into several therapeutic units, e.g. by Irradiation, such as irradiation with UV B light, during filling of the Platelets in individual blood bags.

Bevorzugt wird sowohl die Thrombozytenkonzentration untersucht als auch mindestens einer der weiteren Standardisierungsschritte durchgeführt, insbesondere wird die Anwesenheit von Pathogenen, vor allem Bakterien, untersucht. Besonders bevorzugt ist die Untersuchung der Thrombozytenkonzentration, Untersuchung der Anwesenheit von Pathogenen, insbesondere Bakterien, und Inaktivierung von Pathogenen. Vorzugsweise werden alle genannten Untersuchungs- und Standardisierungsschritte durchgeführt.Prefers Both the platelet concentration is examined as well as at least one of the further standardization steps performed, in particular the presence of pathogens, especially bacteria, is investigated. Particularly preferred is the examination of the platelet concentration, Investigation of the presence of pathogens, in particular bacteria, and inactivation of pathogens. Preferably, all the above-mentioned examination and standardization steps performed.

Durch das beschriebene Verfahren ist es erstmals möglich, eine Charge von mehreren in ihrer Qualität gleichen, standardisierten Thromobozytenkonzentraten herzustellen, die bevorzugt vor der Anwendung am Patienten mit verschiedenen Verfahren auf Thrombozytenzahl, Thrombozytenfunktion und/oder Pathogenkontamination, insbesondere bakterielle Kontamination, getestet wurden.By the method described it is possible for the first time, a batch of several in their quality same to produce standardized thrombocyte concentrates, which preferably before application to the patient with various methods Platelet count, platelet function and / or pathogen contamination, especially bacterial contamination.

Daher wird durch die Erfindung eine Charge mit einer Mehrzahl, grundsätzlich mit beliebig vielen, standardisierten Thrombozytenkonzentraten erhalten. Jedes einzelne Thrombozytenkonzentrat enthält vorzugsweise eine therapeutische Einheit Thrombozyten, also mindestens 2.0·10¹¹ Thrombozyten, bevorzugt mindestens 2.4·10¹¹ Thrombozyten oder mindestens 3.0·10¹¹ Thrombozyten. Die Mehrzahl standardisierter Thrombozytenkonzentrate umfasst dabei bevorzugt mindestens vier Thrombozytenkonzentrate, die kommerziellen Vorteile kommen jedoch bei größeren Chargen, z.B. bei mindestens 10, mindestens 20 oder mindestens 50 standardisierten Thrombozytenkonzentraten noch mehr zum tragen.Therefore, the invention provides a batch with a plurality, basically with any number, standardized platelet concentrates. Each individual platelet concentrate preferably contains one platelet therapeutic unit, ie at least 2.0 × 10 ¹¹ platelets, preferably at least 2.4 × 10 ¹¹ platelets or at least 3.0 × 10 ¹¹ platelets. The majority of standardized platelet concentrates preferably comprises at least four platelet concentrates, but the commercial advantages are even greater in the case of larger batches, for example at least 10, at least 20 or at least 50 standardized platelet concentrates.

Das durch die vorliegende Erfindung bereitgestellte Thrombozytenkonzentrat-Pool, das nach Ausführung der Schritte a, b und c des erfindungsgemäßen Verfahrens erhalten wird, umfasst damit mindestens 2 therapeutische Einheiten (also z.B. mindestens 4,8·10¹¹ Thrombozyten), bevorzugt mindestens 10 therapeutische Einheiten (z.B. mindestens 2,4·10¹² Thrombozyten), mindestens 20 therapeutische Einheiten (z.B. mindestens 4,8·10¹² Thrombozyten) oder mindestens 50 therapeutische Einheiten (z.B. mindestens 1,2·10¹³ Thrombozyten).The platelet concentrate pool provided by the present invention, which is obtained after carrying out steps a, b and c of the method according to the invention, thus comprises at least 2 therapeutic units (eg at least 4.8 × 10 ¹¹ platelets), preferably at least 10 therapeutic units (eg, at least 2.4 x 10 ¹² platelets), at least 20 therapeutic units (eg, at least 4.8 x 10 ¹² platelets), or at least 50 therapeutic units (eg, at least 1.2 x 10 ¹³ platelets).

Das hier offenbarte Verfahren, das die Herstellung von Thrombozytenkonzentrat mit standardisierten Eigenschaften ermöglicht, erleichtert die Vorhersage der Effizienz von Transfusionen und verbessert die Vergleichbarkeit der Ergebnisse von Transfusionsbehandlungen untereinander. Durch die erfindungsgemäß ermöglichte Vereinfachung der Trenn- und Qualitätskontrollschritte erlaubt das Verfahren ferner die Herstellung von Thrombozytenkonzentraten zu einem niedrigeren Preis und außerdem mit geringeren Verlusten des wertvollen Spendermaterials. Dabei ist die Kostenersparnis abhängig von der Chargengröße. Je mehr Thrombozytenkonzentrate eine Charge umfasst, desto günstiger ist das Verfahren.The method disclosed herein, which allows the preparation of platelet concentrate with standardized properties, facilitates the prediction of the efficiency of transfusions and improves the comparability of the results of transfusion treatments with each other. By simplifying the separation and quality control steps made possible according to the invention, the method also allows the production of platelet concentrates at a lower price and also with lower losses of the valuable donor material. The cost savings depend on the batch size. The more platelet concentrates a batch includes, the cheaper the process.

Die vorliegende Erfindung richtet sich außerdem auf pharmazeutische Zusammensetzungen, die die erfindungsgemäßen Thrombozytenkonzentrate umfassen. Derartige pharmazeutische Zusammensetzungen oder die Thrombozytenkonzentrate der Erfindung selbst können eingesetzt werden, um Gerinnungsstörungen zu behandeln, die auf einen verminderten Thrombozytengehalt im Blut zurückzuführen sind. Derartige Gerinnungsstörungen können z.B. durch Leukämien, Knochenmarkskarzinosen oder Zytostatikatherapie, durch Verlust oder Verbrauch bei großen Operationen, Gewebsverletzungen oder schweren Infektionen hervorgerufen werden. In der Regel werden die Präparate den Patienten durch Transfusion verabreicht.The The present invention is also directed to pharmaceutical Compositions comprising the platelet concentrates according to the invention. Such pharmaceutical compositions or the platelet concentrates of the invention itself used to treat coagulation disorders that occur on a reduced platelet content in the blood are due. Such clotting disorders can e.g. through leukemia, Bone marrow cancer or cytostatic therapy, by loss or Consumption at large Surgery, tissue injury or serious infections become. As a rule, the drugs pass through the patient Transfusion administered.

Die vorliegende Erfindung wird nachfolgend anhand von Beispielen näher erläutert. Diese Beispiele dienen der Illustration und sollen die Erfindung nicht beschränken.The The present invention will now be described in more detail by way of examples. These Examples serve to illustrate and not to the invention restrict.

BeispieleExamples

Fraktionierung: Herstellung von in-line filtriertem Erythrozytenkonzentrat (EK), gefrorenem Frischplasma und Thrombozytenkonzentrat aus Buffy coat, gepoolt, leukozytendepletiertFractionation: Preparation of in-line filtered erythrocyte concentrate (EC), frozen fresh plasma and Platelet concentrate of buffy coat, pooled, leukocyte-depleted

nach Standard Operating Procedure (SOP)according to Standard Operating Procedure (SOP)

from 4-fold pouches, 500 ml

1. Zusammenfassung1. Summary

Die Blutentnahme von max. 500 ml erfolgte in CPD/SAG-M (CPD: Natriumcitrat-Dihydrat 2,63 g/100 mL, Zitonensäure-Monohydrat 0,299 g/100 mL, Dextrose-Monohydrat 2,55 g/100 mL, Natriumbisphosphat-Monohydrat (monobasisch) 0,222 g; SAG-M: Dextrose-Monohydrat 0,9 g/100 mL, NaCl 0,877 g/100 mL, Adenin 0,0169 g/100 mL, D-Mannitol 0,525 g/100 mL), im 4-fach T/B(Top/Bottom) Beutelsystem mit integriertem Leukozytenfilter der Firma Maco Pharma (LQT 7290 PC; Wegener et al, 1997, Beitr Infusionsther Transfusionsmed 34:48-52 , andere Systeme können verwendet werden). Um die Buffy-Coats weiterverarbeiten zu können, wurden diese im Rahmen der Spende als Blutprodukt mit eigener Konservennummer erzeugt. Dazu trug der Primärbeutel neben der Primärbeutelnummer noch das Produktetikett des Buffy-Coats. Auf dem Produktetikett war die Blutgruppe in Kurzform (A+, A–, ...) ausgegeben, um eine manuelle Zusammenstellung der Pools zu ermöglichen.The blood collection of max. 500 ml took place in CPD / SAG-M (CPD: sodium citrate dihydrate 2.63 g / 100 ml, citric acid monohydrate 0.299 g / 100 ml, dextrose monohydrate 2.55 g / 100 ml, sodium bisphosphate monohydrate (monobasic) 0.222 g; SAG-M: dextrose monohydrate 0.9 g / 100 mL, NaCl 0.877 g / 100 mL, adenine 0.0169 g / 100 mL, D-mannitol 0.525 g / 100 mL), in 4-fold T / B (Top / Bottom) Bag system with integrated leukocyte filter from Maco Pharma (LQT 7290 PC; Wegener et al., 1997, Beitr Infusionsther Transfusionsmed 34: 48-52 other systems can be used). To be able to process the buffy coats, they were produced as part of the donation as a blood product with its own canned number. In addition the primary bag beside the primary bag number still carried the product label of the Buffy Coats. On the product label, the blood type was printed in short form (A +, A-, ...) to allow manual pooling.

Nach der Blutentnahme wurde das Vollblut mindestens eine Stunde bei Raumtemperatur gelagert und danach schnell in Komponenten aufgetrennt. Die Auftrennung erfolgte innerhalb von 4 Stunden.To Blood collection was the whole blood for at least one hour at room temperature stored and then quickly separated into components. The separation took place within 4 hours.

Plasma und EK wurden über das T/B-Verfahren, in diesem Fall mit der MacoPress, automatisch abgetrennt. Das EK wurde sofort mit der Additivlösung SAG-M resuspendiert.plasma and EK were over the T / B process, in this case with the MacoPress, automatically disconnected. The EK was immediately resuspended with the additive solution SAG-M.

Ein erstes Thrombozytenpräparat wurde durch Leukozytenfiltration eines aus vier Buffy coats gepoolten Präparates hergestellt, anschließend wurden 4–6 derartige Präparationen zu einem zweiten Thrombozytenpool vereinigt. Es wurden Buffy-Coats von blutgruppen- und rhesusgleichen Spendern verwendet.One first platelet preparation was pooled by leukocyte filtration of one of four Buffy coats preparation produced, then were 4-6 such preparations united to a second platelet pool. Buffy coats of blood group and rhesus-like donors.

2. Verwendete Geräte:2. Used devices:

• Centrifuge "Roto Silenta RS "(company Hettich) or "Roto Silenta RP "(Fa. Hettich)
• plasma pressures MacoPress (Maco Pharma)
• Hose welder
• Extraction pliers
• detachable plastic hose clamps
• calibrated Libra Sartorius BP 2100
• Sterile welder (Terumo)
• Optidok system R7012 OptiPure PS
• double chambered centrifuge cups for platelet preparation

3. Herstellung von Buffy coats3. Making Buffy coats

Nach Vollblutentnahme erfolgte eine Zwischenlagerung des Blutes von einer Stunde bis zur Auftrennung durch Zentrifugation bei Raumtemperatur. Die Mindestruhezeit nach Entnahme ist die von der abnehmenden Schwester auf der Konserve dokumentierte Zeit + 60 Minuten, bei anschließender Warmfiltration entweder 1–18 Stunden oder über Nacht, bei anschließender Kaltfiltration 1–4 Stunden.To Whole blood was taken an intermediate storage of the blood of a Hour to separation by centrifugation at room temperature. The minimum resting time after removal is that of the waning sister on the preserve documented time + 60 minutes, followed by warm filtration either 1-18 Hours or overnight, at subsequent Cold filtration 1-4 Hours.

Das Schlauchende, das mit einer Schlauchklemme verschlossen ist, wurde vom mit Vollblut gefüllten Beutel auf eine Länge von ca. 5 cm abgeschweift.The Hose end that was closed with a hose clamp was from full blooded Bag on a length of about 5 cm digressed.

Zum Austarieren der Zentrifuge wurden Differenzen austariert. Dies kann allgemein mit PVC-Weichfolienstücken, bei größeren Differenzen mit mit sterilem Aqua dest. gefüllten Leerbeutel erfolgen. Die Differenz zwischen zwei gefüllten Beutelsystemen einschließlich Tariergewichten darf nicht größer als ein Gramm sein.To the Balancing the centrifuge, differences were balanced out. This can generally with PVC soft foil pieces, with larger differences with with sterile dist. filled Empty bags done. The difference between two filled bag systems including Tare weights must not exceed be a gram.

Zum Packen der Zentrifuge wurde Flüssigkeit (SAG-M) aus einem Filter durch Schwerkraft in Pfeilrichtung in einen SAG-M-Beutel laufen gelassen, wobei der Filter beim Zentrifugieren nicht prall gefüllt sein darf.To the Packing the centrifuge became liquid (SAG-M) from a filter by gravity in the direction of arrow into a SAG-M bags are running left, the filter during centrifugation may not be filled may.

Der SAG-M Beutel wurde flach auf einen Tisch gelegt, wobei die Schläuche vom Bearbeiter weg neben den Beutel gelegt wurden. Darüber wurden EK-Leerbeutel, darauf Filter, darauf Leerbeutel angeordnet, alle Schläuche wieder zur Seite, nicht zwischen die Beutel.Of the SAG-M bag was placed flat on a table, with the hoses of the Engineers were laid off beside the bag. About it were EK empty bag, on it filters, on it empty bag arranged, all hoses back to the side, not between the bags.

Der ganze Stapel wurde auf den gefüllten Primärbeutel angeordnet (die Seite ohne Etikett), die Schläuche zwischen Stapel und Primärbeutel. Der gesamten Stapel wurde in eine grüne OP-Haube platziert, der Primärbeutel nach unten. Die OP-Haube wurde über dem Stapel eingeschlagen.Of the whole pile was placed on the filled primary bag arranged (the side without label), the hoses between stack and primary bag. The entire stack was placed in a green surgical hood, the primary bag downward. The surgical hood was over hit the pile.

Der 4fach Beutel mit in-line Filter wurde in beiden Zentrifugen im äußeren Becherkranz des Doppelgehänges untergebracht, da sonst die Beutel an den Rotorarmen scheuern können.Of the 4-fold bag with in-line filter was used in both centrifuges in the outer cup of the double hanger otherwise the bags on the rotor arms can rub.

Es erfolgte eine Zentrifugation unter folgenden Bedingungen, die je nach Zentrifuge angepasst werden können:
Zentrifuge von der Firma Rettich, Roto Silenta/RS (4171), Rotor 4176, 2fach-Nutgehänge (4591), 2fach Kunststoffeinsätze für 4fach Blutbeutel 500 ml (4592), Rotordurchmesser 287 mm, Kapazität 12 Beutelsysteme
Programm 2: 22°C, 3530 U/min ≅ 4000 g, 10 min., Anlaufstufe 9 entspr. 1.18 min, Bremsstufe 3It was centrifuged under the following conditions, which can be adjusted depending on the centrifuge:
Centrifuge from the company Rettich, Roto Silenta / RS (4171), rotor 4176, 2-fold-Nutgehänge (4591), 2fach plastic inserts for 4fach blood bag 500 ml (4592), rotor diameter 287 mm, capacity 12 bag systems
Program 2: 22 ° C, 3530 rpm ≅ 4000 g, 10 min., Start-up stage 9 corresponds to 1.18 min, braking stage 3

Die MacoPressen wurden eingeschaltet, das Prüfgewicht nach jedem Programmwechsel (Prog. A für Vollblut, Programm C für Pool-TKs) gewogen und dokumentiert. Die Abweichungen lagen unter ±10 g von 500 g Prüfgewicht.The MacoPressen were switched on, the test weight after each program change (Prog. A for Thoroughbred, program C for Pool PCs) weighed and documented. The deviations were less than ± 10 g of 500 g test weight.

Nach Zentrifugenstillstand wurden die Beutel vorsichtig entnommen, ohne das Erythrozytensediment aufzuwirbeln, und mit dem Etikett vorne in die MacoPress eingehängt. Plasmabeutel wurden in die rechte Waage gehängt. SAG-M Beutel wurde an den Haken an der Presse in Augenhöhe aufgehängt. Die SAG-M-Lösung wurde durch den Filter in den Zwischenbeutel überführt, so dass die Erythrozyten beim Abpressvorgang direkt in SAG-M gelangten. Dazu wurde das am Zwischenbeutel befindliche Ventil geöffnet. Zwischen Filter und ursprünglichem SAG-M Beutel wurde dann eine Plastikklemme angelegt.To Centrifuge arrest, the bags were carefully removed without to stir up the erythrocyte sediment, and with the label in front hooked into the MacoPress. Plasma bags were hung in the right balance. SAG-M bag was attached hung the hook on the press at eye level. The SAG-M solution was transferred through the filter into the intermediate bag, so that the erythrocytes came directly into SAG-M during the pressing process. This was the am The intermediate bag valve is open. Between filters and original SAG-M bag was then put on a plastic clamp.

Der für das gefilterte Erythrozytenkonzentrat vorgesehene Beutel sowie der Zwischenbeutel (nun mit SAG-M gefüllt) wurden neben der MacoPress auf die externe Waage gelegt und der untere Überleitungsschlauch in die untere automatische Abklemmvorrichtung eingelegt. Der obere Überleitungsschlauch wurde in die oberen automatischen Abklemmvorrichtungen eingebracht. Die Verschlussventile zu den Transferbeuteln wurden geöffnet.Of the for the filtered packed red blood cells bag provided as well as the intermediate bag (now filled with SAG-M) were placed next to the MacoPress on the external scale and the lower transfer hose inserted in the lower automatic clamping device. The upper transfer hose was placed in the upper automatic clamping devices. The closing valves to the transfer bags were opened.

Das Erythrozytenkonzentrat wurde mit der SAG-M Lösung vorsichtig durchmischt und dicht an der Presse vom Primärbeutel abgeschweißt. Der Überleitungsschlauch zum Plasmabeutel wurde nach Sichtkontrolle der Entlüftung automatisch abgeschweißt. Gleichzeitig wurde Plasma in den oberen Beutel abgepresst.The RBC concentrate was gently mixed with the SAG-M solution and close to the press from the primary bag abgeschweißt. The transfer hose to the plasma bag after visual inspection of the vent was automatic abgeschweißt. At the same time plasma was pressed into the upper bag.

Im Primärbeutel verblieb der sog. Buffy-Coat. Dieser enthält neben Leukozyten über 90% der gespendeten Thrombozyten. Der Buffy-Coat diente als Zwischenprodukt bei der Herstellung von gepoolten Thrombozytenkonzentraten.in the primary bag remained the so-called Buffy coat. This contains in addition to leukocytes over 90% the donated platelets. The buffy coat served as an intermediate in the preparation of pooled platelet concentrates.

4. Herstellung einer ersten gepoolten Thrombozytenpräparation4. Preparation of a first pooled platelet preparation

Buffy coats wurden mindestens 6 Stunden bei 22 ± 2°C zwischengelagert. Die Herstellung der Thrombozyten sollte aber spätestens 24 Std. nach Vollblutentnahme abgeschlossen sein.Buffy coats were stored at 22 ± 2 ° C for at least 6 hours. The production The platelets should, however, at the latest Completed 24 hours after whole blood collection.

4.1 Poolen von Buffy coats4.1 Pooling Buffy coats

Aus mindestens 4 blutgruppengleichen Buffy coats (BC) und einer Einheit Plasma- oder Elektrolyt-Lösung je 4 Buffy coats entstand ein Buffy coat-Pool. Es wurden Poole von 4 BC, sortiert nach Rh-Faktor verwendet.Out at least 4 blood type Buffy coats (BC) and one unit Plasma or electrolyte solution 4 buffy coats each gave rise to a buffy coat pool. There were poole of 4 BC sorted by Rh factor used.

Hinsichtlich AB0-Blutgruppe und RH-Faktor wurden folgende Regeln definiert:

a. AB0-Gleichheit, die Blutgruppe des ersten Produktes wird als Basis für den Vergleich herangezogen, Produkte mit einer abweichenden AB0-Blutgruppe werden abgewiesen.
b. RH-Faktor-Prüfung, das Endprodukt ist RH-pos, wenn mindestens eines der Produkte RH-pos. ist. Das Endprodukt ist RH-neg, wenn alle Produkte RH-neg. sind.

Regarding AB0 blood group and RH factor, the following rules were defined:

a. AB0 equality, the blood group of the first product is used as the basis for the comparison, products with a different AB0 blood group are rejected.
b. RH factor testing, the final product is RH-pos, if at least one of the products RH pos. is. The final product is RH-neg, if all products RH-neg. are.

Die vier BC und das Plasma wurden mit dem Sterilschweißgerät, z.B. mit dem OptiPure PS verbunden. Hierbei waren die am Sterilschweißgerät vorhandenen Markierungen zu beachten. Das Plasma wurde so an ein Pooling-Set, in diesem Fall das OptiPure-System (OptiPure PLT BC Pooling-Set zur Herstellung eines Thrombozytenkonzentrates, mit integriertem PLX5 Leukozytendepletionsfilter, Lagerungsbeutel 1000, Kunststoff PL2410 – PL1813/1, Baxter, München) angeschweißt, dass der Schlauch zwischen Plasma und OptiPure möglichst lang wurde.The Four BC and the plasma were washed with the sterile welder, e.g. connected to the OptiPure PS. These were the ones present on the sterile welder Note markings. The plasma was put on a pooling set, in this case the OptiPure system (OptiPure PLT BC Pooling Set for the preparation of a platelet concentrate, with integrated PLX5 leukocyte depletion filter, storage bag 1000, plastic PL2410 - PL1813 / 1, Baxter, Munich) welded, that the tube between the plasma and OptiPure became as long as possible.

Die Schlauchschweißverbindungen wurden auf Unversehrtheit geprüft, z.B. durch Rollen auf saugfähiger Unterlage.The Tube welds were checked for integrity, e.g. by rolling on absorbent Document.

Die BC wurden an einem Infusionsständer aufgehängt und das Plasma an einem anderen, ca. 20 cm höher als die BC. Die untere Robertsklemme (zum Verschließen der Verbindung zwischen Buffy Coats/Plasma und dem Poolingbeutel) und obere Robertsklemme (zum Verschließen der Verbindung zwischen Plasma und dem Poolingbeutel, oberhalb der unteren Klemme), sowie die Schiebeklemme und die Rollenklemme zum Probenentnahmebeutel, wurden geschlossen. Danach wurde die Verbindung zwischen BC und Optidoc bzw. Plasma und Optidoc durch seitlichen Druck auf die Schweißnähte an den Verbindungsstellen geöffnet. Durch Öffnen der unteren Robertsklemme wurden die BC in den Poolingbeutel entleert.The BC was suspended on an IV pole and the plasma was suspended on another, about 20 cm higher than the BC. The lower Robertsklemme (to seal the connection between Buffy Coats / Plasma and the pooling bag) and upper Robertsklemme (to close the connection between the plasma and the pooling bag, above the lower clamp), as well as the slide clamp and the roller clamp to the sampling bag were closed. Thereafter, the connection between BC and Optidoc or Plasma and Optidoc was opened by lateral pressure on the welds at the joints. Opening the lower Roberts Clamp drained the BC into the pool bag.

Die untere Klemme wurde geschlossen und die oberen Klemme geöffnet, bis ca. 1/3 des Plasmas in die BC-Beutel geflossen war. Danach wurde die obere Klemme wieder geschlossen. Die BC-Beutel wurden vorsichtig geschwenkt und das BC von einem Beutel in den anderen fließen gelassen, um möglichst alle Thrombozyten aus den BC-Beuteln zu spülen. Durch Öffnen der unteren Klemme wurde der Inhalt der BC-Beutel in den Pooling-Beutel entleert.The lower clamp has been closed and the upper clamp opened until about 1/3 of the plasma had flowed into the BC bag. After that was the upper clamp closed again. The BC bags were gently swirled and let the BC flow from one bag to the other, as much as possible flush all platelets out of the BC bags. By opening the lower clamp was the contents of the BC bag are emptied into the pooling bag.

Dieser Vorgang wurde noch zweimal wiederholt, bis ca. 230 g Plasma (vorher abwiegen, abschätzen) und der BC im Pooling-Beutel waren.This The procedure was repeated twice, until about 230 g of plasma (previously weigh, estimate) and the BC in the pooling bag were.

Der Pooling-Beutel wurde vom OptiPure-System zwischen der unteren Robertsklemme und dem Poolingbeutel und abgeschweißt.Of the Pooling bag was from the OptiPure system between the lower Robertsklemme and the pooling bag and welded off.

4.2 Thrombocytenpräparation4.2 Platelet preparation

Der Pooling-Beutel wurde mittels Beutelaufhänger in den Zentrifugeneinsatz gehängt, ein Leerbeutel in den anderen Zentrifugeneinsatz.Of the Pooling bag was placed in the centrifuge insert by means of bag hanger hanged, one empty bag in the other centrifuge insert.

Jeweils zwei so bestückte Zentrifugeneinsätze wurden mittels der Waage und PVC-Gewichten austariert und gegenüber in die Zentrifuge „Roto Silenta RP" gestellt. Der volle Beutel kam nach außen.Each two so stocked centrifuges inserts were balanced by the balance and PVC weights and compared to the Centrifuge "Roto Silenta RP ". The full bag came out.

Es folgte eine Zentrifugation (Programm 4: 450 g, Anlauf 720s, Plateau 6 min, Auslauf 8 min, Bremse 0, Temperatur 22°C). Die Zentrifugeneinsätze wurden anschließend vorsichtig entnommen, so dass die Thrombozyten nicht aufgewirbelt wurden.It followed by a centrifugation (program 4: 450 g, start 720s, plateau 6 min, outlet 8 min, brake 0, temperature 22 ° C). The centrifuge inserts were subsequently Carefully removed so that the platelets are not stirred up were.

Es folgte Einhängen in den Separator, z.B. MacoPress. Der TK Pool Beutel wurde auf die MacoPress gelegt und die Schläuche in die Schlauchklemmen der Optipress eingelegt. Die Rollenklemme und die Schiebeklemme zum Probenentnahmebeutel wurden geschlossen. Die Separation erfolgte mit Programm C, der Vorgang wurde mit <Start> begonnen, danach vorsichtig die Rollenklemme geöffnet, bis das TK in den Beutel strömte. Die Klemme schloß automatisch bei Erreichen der Erythrozytengrenzschicht. Mittels <SEAL> wurde der Vorgang beendet, der Thrombozytenkonzentrat-Pool wurde automatisch vom Poolingbeutel abgeschweißt.It followed by hanging into the separator, e.g. MacoPress. The TK pool bag was on the MacoPress placed and the hoses inserted into the hose clamps of the Optipress. The roller clamp and the slide clamp to the sampling bag were closed. The separation was carried out with program C, the process was started with <Start>, then carefully the roller clamp is open until the TK poured into the bag. The clamp closed automatically upon reaching the erythrocyte boundary layer. By means of <SEAL> the process became finished, the platelet concentrate pool was automatically from the pooling bag abgeschweißt.

5. Vereinigung von Thombozyten-Pools5. Union of platelet pools

4–6 TK Pools wurden nun in einen TK Pool Beutel zusammengeführt, wobei das für die Vereinigung von Buffy Coats beschriebene Verfahren (siehe 4.1) genutzt wurde. Hierbei wurden die TK über einen Leukozytenfilter gepresst.4-6 TK pools have now been merged into a TK pool bag, which is for the association used by Buffy Coats (see 4.1). Here, the TK were over a leukocyte filter pressed.

6. Untersuchung des Thrombozyten-Pools6. Investigation of the platelet pool

Aus dem prozessierten TK Pool Beutel wurde eine kleine Probe in einen Probenbeutel abgepresst. Dann wurden über eine Schlauchspinne, wie oben beschrieben, mehrere Lagerbeutel angeschweißt.Out The processed TK pool bag was a small sample in one Sample bag pressed. Then were over a hose spider, as above described, welded several storage bags.

Die Thrombozyten im Probenbeutel wurden mit einem automatischen Partikelzählgerät gezählt. Das erhaltene Pool enthielt, je nach Präparation, ca. 1,5 – 2,4·10¹² Thrombozyten.The platelets in the sample bag were counted with an automatic particle counter. Depending on the preparation, the resulting pool contained approximately 1.5-2.4 × 10 ¹² platelets.

Im TK Pool Beutel kann die Pathogeninaktivierung erfolgen. Alternativ kann diese bereits in dem Beutel erfolgen, der nur Thrombozyten aus 4 Buffy coats enthält.in the TK pool bag can be made pathogen inactivation. alternative This can already be done in the bag, the only platelets contains 4 Buffy coats.

In jeden TK-Lagerbeutel wurden 2.4 × 10¹¹ bis 3.0 × 10¹¹ Thrombozyten abgepresst. In einem extra Analysebeutel wurde Material für weitere Funktionsuntersuchungen und Sterilitätskontrollen abgepresst.In each TK storage bag, 2.4 × 10 ¹¹ to 3.0 × 10 ¹¹ platelets were pressed. Material was squeezed out for further functional examinations and sterility checks in an extra analysis bag.

Die Haltbarkeit betrug bis zu 9 Tagen, ausgehend vom Entnahmetag des ältesten Buffy coats.The Shelf life was up to 9 days, starting from the extraction date of the oldest Buffy coats.

Figuren:Characters:

1: Herstellung von Thrombocytenkonzentrat aus Buffy coats mittels Zentrifugation 1 : Preparation of platelet concentrate from buffy coats by centrifugation

Die gepoolten, mit Plasma oder Elektrolytlösung versetzten Buffy coats werden auf Einzelblutbeutel verteilt. Diese werden so zentrifugiert, dass die Thrombozyten im Plasma-/Elektrolytüberstand verbleiben, Erythrozyten und Leukozyten sedimentieren. Dann werden die thrombozytenreichen Überstände an den Poolbeuteln über einen Leukozytenfilter in einem Sammelbeutel gepresst. In diesem Sammelbeutel können die Thrombozytenkonzentrate weiter behandelt werden, z.B. mit einem Verfahren zur Pathogeninaktivierung, oder die Thrombozyten können entsprechend den Anforderungen des Verfahrens zur Pathogeninaktivierung nochmals in andere Beutel gefüllt werden. Nach der Behandlung wird die Thrombozytenzahl im Thrombozytenpool bestimmt und dieser so auf therapeutische Einheiten aufgeteilt, dass alle Einheiten eine vorher definierte Menge Thrombozyten enthalten. Es können weiter Untersuchungen der Qualität und Funktion der Thrombozyten durchgeführt werden.
bc: Buffy coat, TK: Thrombozytenkonzentrat, QS: Qualitätssicherung, Ery: Erythrozyten, Leuko: LeukozytenThe pooled, plasma or electrolyte solution staggered buffy coats are distributed on single blood bags. These are centrifuged so that the platelets remain in the plasma / electrolyte supernatant, erythrocytes and leukocytes sediment. Then, the platelet-rich supernatants are pressed against the pool bags via a leukocyte filter in a collection bag. In this collection bag, the platelet concentrates can be further treated, for example, with a method for pathogen inactivation, or the platelets can be filled again in other bags according to the requirements of the method for pathogen inactivation. After treatment, the platelet count in the platelet pool is determined and this is divided into therapeutic units so that all units contain a predefined amount of platelets. It can continue Untersu quality and function of the platelets.
bc: Buffy coat, TK: platelet concentrate, QA: quality assurance, Ery: erythrocytes, Leuko: leukocytes

2: Herstellung von Thrombocytenkonzentrat aus Buffy coats mittels Apherese 2 : Preparation of platelet concentrate from buffy coats by apheresis

Werden die Buffy coats über einem Zellseparator aufgetrennt, werden sie zunächst gepoolt, mit Plasma bzw. Elektrolytlösung versetzt und der beliebig große Pool dann an den Zellseparator angehängt. Im Zellseparator werden die Thrombozyten von den anderen zellulären Bestandteilen getrennt und in einem Sammelbeutel als TK (Thrombocytenkonzentrat) Pool gesammelt. Alternativ können die Buffy coats sequentiell mit einem Beutel, der Plasma/Elektrolytlösung enthält, verbunden, ausgespült und der Inhalt in einen Reservoirbeutel überführt werden, aus dem dann das Blutzellgemisch in den Zellseparator läuft. In beiden Fällen kann die gewünschte Zelldichte an Thrombozyten über die Einstellparameter des Zellseparators vorgewählt werden. Die Menge der pro Charge zu verarbeitenden Buffy coats hängt dabei nur von der Größe der Sammelbeutel ab. Das entstandene TK-Pool wird dann weiter verarbeitet, wie für die Zentrifugatonsmethode beschrieben (siehe z.B. 1), wobei in der Abbildung beispielhaft nur zwei therapeutische Einheiten Thrombozytenkonzentrat dargestellt sind, bevorzugt aber mehr als zwei Einheiten erhalten werden.
bc: Buffy coat, TK: Thrombozytenkonzentrat, QS: Qualitätssicherung, Ery: Erythrozyten, Leuko: LeukozytenIf the Buffy coats are separated over a cell separator, they are first pooled, mixed with plasma or electrolyte solution, and the arbitrarily large pool is then attached to the cell separator. In the cell separator, the platelets are separated from the other cellular components and collected in a collection bag as a TK (platelet concentrate) pool. Alternatively, the buffy coats may be sequentially attached to a bag containing plasma / electrolyte solution, rinsed, and the contents transferred to a reservoir bag, from which the blood cell mixture then passes into the cell separator. In both cases, the desired cell density of platelets can be preselected via the setting parameters of the cell separator. The amount of buffy coats to be processed per batch depends only on the size of the collection bags. The resulting TK-pool is then further processed as described for the Zentrifugatonsmethode (see, eg 1 In the figure, only two therapeutic units of platelet concentrate are shown by way of example, but preferably more than two units are obtained.
bc: Buffy coat, TK: platelet concentrate, QA: quality assurance, Ery: erythrocytes, Leuko: leukocytes

Claims

Method for producing a standardized Platelet concentrate of donor material comprising steps, where you can: a) platelet-containing donor material a plurality of donors using a cell separation method separates, b) collecting the platelet-rich fraction, c) investigated and / or standardized the platelet rich fraction, d) the platelet-rich fraction into several standardized units Platelet concentrate is divided.

The method of claim 1, wherein all units of the standardized platelet concentrate in step d are therapeutic units comprising at least 2.0 x 10 ¹¹ platelets.

The method of claim 1 or 2, wherein the platelet rich fraction in step c comprises at least 4.0 x 10 ¹¹ platelets.

Process according to claims 1 to 3, wherein the method comprises the investigation and standardization in step c a majority of platelet-rich fractions obtained in step b.

Process according to claims 1 to 4, wherein in Step a Separate dispenser material from at least 8 dispensers.

Process according to claims 1 to 5, wherein the donor material a buffy coat is.

Process according to claims 1 to 6, wherein the Separation with an apheresis device performs.

Process according to claims 1 to 7, wherein the examination and / or standardization comprises at least one step selected from following steps, where you can: The platelet density of the Platelet concentrate, - the platelet concentrate investigated for the presence of pathogens, - pathogens inactivated in the platelet concentrate, - the amount of antibodies against Examined blood group components, - the contamination of the concentrate examined with erythrocytes and leukocytes, - the platelet function examined.

A plurality of standardized platelet concentrates each comprising at least 2.0 x 10 ¹¹ platelets obtainable by a method according to claims 1 to 8.

Platelet concentrates according to claim 9, wherein a plurality of at least 4 standardized platelet concentrates includes.

Platelet concentrates according to claim 9 or 10, which are classified as pathogen-free.

A pharmaceutical composition comprising platelet concentrates according to the claims 9 to 11.

Use of platelet concentrates after the claims 9 to 12 for the treatment of coagulation disorders, based on a decreased platelet content are due in the blood.

Use according to claim 13, characterized that the coagulation disorders through leukemia, Bone marrow cancer, cytostatic therapy, loss or consumption at big Surgery, tissue injury and / or serious infections are.