DE102004037882A1 - Glass substrate used as an object support for fluorescence measurements on DNA molecules comprises a glass layer containing metal nano-particles in one or more surface regions of the glass - Google Patents

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Abstract

Glass substrate comprises a glass layer containing metal nano-particles in one or more surface regions of the glass.

Description

Die Erfindung betrifft ein Substrat aus Glas.The The invention relates to a glass substrate.

Das Substrat kann bevorzugt für laserbeheizbare Anwendungen sowie als Objektträger für Fluoreszenzmessungen, insbesondere für Fluoreszenzmessungen an DNS-Molekülen verwendet werden.The Substrate may be preferred for laser-heated applications and as slides for fluorescence measurements, in particular for fluorescence measurements on DNA molecules be used.

Zur Untersuchung von Proben von Körperflüssigkeiten werden zunächst mit Fluoreszenzfarbstoff markierte DNS-Moleküle auf ein Trägermaterial aufgebracht, das in der Regel aus Glas besteht. Die DNS-Moleküle werden mit einer körpereigenen Flüssigkeit, beispielsweise Blut, in Verbindung gebracht. Die bluteigene DNS verbindet sich mit der markierten, wodurch sich eine Änderung beziehungsweise Aktivierung des Fluoreszenzsignals ergibt. Dieses Signal wird beispielsweise mit Photomultipliern gemessen, nachdem die Fluoreszenz mittels Laserbestrahlung im mW-Bereich angeregt worden ist. Aus der Signalintensität können Rückschlüsse zum Beispiel auf Virenkonzentrationen in der Flüssigkeitsprobe gezogen werden.to Examination of samples of body fluids be first DNA molecules labeled with fluorescent dye are applied to a carrier material, which is usually made of glass. The DNA molecules are linked to the body's own Liquid, For example, blood, associated. The blood's own DNA connects with the marked, causing a change or activation of the fluorescence signal results. This Signal is measured with photomultipliers, for example, after the fluorescence is excited by laser irradiation in the mW range has been. From the signal intensity conclusions can be drawn, for example, on virus concentrations in the liquid sample to be pulled.

Im Stand der Technik sind Objektträger aus herkömmlichem Glas bekannt. Diese weisen jedoch den Nachteil einer starken Eigenfluoreszenz auf.in the The prior art are slides from conventional Glass known. However, these have the disadvantage of strong autofluorescence on.

Ferner ist es für verschiedene Anwendungen erforderlich, das Trägermaterial lokal zu erwärmen, um thermisch stimulierte Vorgänge in dem auf dem Träger liegenden Medium anzuregen.Further is it for various applications required to heat the substrate locally thermally stimulated processes in the on the carrier stimulate lying medium.

Weist das Trägermaterial eine Eigenfluoreszenz auf, so verschlechtert sich das Signal/Rausch-Verhältnis der Messung. Daher werden vorzugsweise fluoreszenzarme Trägermaterialien eingesetzt. Hierzu können Kunststoffe oder fluoreszenzarme Spezialgäser verwendet werden.has the carrier material a self-fluorescence, so the signal / noise ratio of the degraded Measurement. Therefore, preferably low-fluorescent carrier materials are used. You can do this Plastics or low-fluorescence special gauges are used.

Träger aus Kunststoff sind jedoch für Anwendungen nicht geeignet, in denen der Objektträger erwärmt werden muss, und in der Herstellung aufwändiger als Glas. Die Verwendung fluoreszenzarmer Spezialgläser ist ebenfalls sehr kostenintensiv.Carrier off Plastic are however for Applications are not suitable in which the slides are heated must, and in production more elaborate than glass. The usage low-fluorescence special glasses is also very expensive.

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein kostengünstiges Trägermaterial anzugeben, das nur eine geringe Eigenfluoreszenz aufweist und das auch für lokale Erwärmungen geeignet ist.Of the Invention is based on the object, a cost-effective support material indicate that has only a low intrinsic fluorescence and that too for local warming suitable is.

Erfindungsgemäß wird die Aufgabe durch eine Anordnung, die die in Anspruch 1 aufgeführten Merkmale aufweist, gelöst.According to the invention Object by an arrangement having the features listed in claim 1 has dissolved.

Vorteilhafte Ausführungen sind in den Unteransprüchen angegeben.advantageous versions are in the subclaims specified.

Bei dem erfindungsgemäßen Trägermaterial bewirken die in der Glasschicht enthaltenen Metallnanopartikel, dass die Eigenfluoreszenz des Materials unmessbar gering ist. Zudem wird die Strahlungsabsorption durch die Partikel stark vergrößert.at cause the carrier material according to the invention the metal nanoparticles contained in the glass layer that the Intrinsic fluorescence of the material is immeasurably low. In addition, will greatly increases the radiation absorption by the particles.

Dabei reichen Metallnanopartikel in mindestens einem oberflächennahen Bereich des Glases, vorzugsweise bis in eine Tiefe von 50 μm, aus, um die Wirkung in diesem Bereich zu erzielen.there rich metal nanoparticles in at least one near-surface Area of the glass, preferably to a depth of 50 microns, out to the Effect in this area.

Umfasst ein mit Partikeln versehener, oberflächennaher Bereich eine gesamte Glasoberfläche, insbesondere eines Objektträgers, so ist die Herstellung des Glases möglichst einfach.includes a particulate, near-surface area a whole Glass surface, in particular a slide, so the production of the glass is as simple as possible.

Weisen verschiedene Bereiche derselben Glasoberfläche unterschiedliche Volumenkonzentrationen an Metallnanopartikeln auf, so kann dadurch eine unterschiedlich starke lokale Erwärmung je nach Konzentration erreicht werden, ohne dass hierzu unterschiedliche Beleuchtungen erforderlich sind. Die Herstellung derartiger Träger kann in einfacher und kostengünstiger Weise erfolgen, während es bei herkömmlichen Träger sehr aufwändig ist, verschiedenen Trägerabschnitten mit unterschiedlichen Eigenschaften zu erzeugen.Point different areas of the same glass surface different volume concentrations on metal nanoparticles, so it may be a different strong local warming be achieved depending on the concentration, without being different Illuminations are required. The preparation of such carriers can in easier and cheaper Done way while it at conventional carrier very expensive is, different vehicle sections to produce with different properties.

Damit wird es möglich, auf einer Oberfläche erwärmte und nicht erwärmte Proben zu untersuchen, beispielsweise dadurch, dass ein Bereich der Glasoberfläche eine Volumenkonzentration an Metallnanopartikeln von 0 aufweist.In order to will it be possible heated and heated on a surface unheated To examine samples, for example, that an area the glass surface has a volume concentration of metal nanoparticles of 0.

Wenn die Volumenkonzentration der Metallnanopartikel in mindestens einem Bereich des Glases mindestens 10–3 beträgt, ist die Wirkung der Partikel gewährleistet. Vorteilhaft ist es dabei, dass die Metallnanopartikel Radien zwischen 0,5 nm und 200 nm aufweisen.If the volume concentration of the metal nanoparticles in at least a portion of the glass is at least 10 -3 , the effect of the particles is ensured. It is advantageous that the metal nanoparticles have radii between 0.5 nm and 200 nm.

Die Metallnanopartikel können ellipsoidförmig und/oder kugelförmig ausgebildet sein. Von Vorteil ist dabei, dass für ellipsoidförmige Metallnanopartikel eine einheitliche Ausrichtung möglich ist.The Metal nanoparticles can ellipsoidal and / or spherical be educated. The advantage here is that for ellipsoidal metal nanoparticles a uniform orientation possible is.

Der erfindungsgemäße Träger zeichnet sich durch eine Reihe von Vorteilen aus. Hierzu zählen insbesondere:

  • 1. Die Eigenfluoreszenz des Glases wird erheblich gesenkt. Dadurch kann auch Floatglas, welches im Bereich der Badseite stark fluoresziert als Trägermaterial verwendet werden.
  • 2. Die Dotierung des Glases bewirkt eine zusätzliche Absorption bei Bestrahlungen im Wellenlängenbereich von ca. 300 nm bis etwa 1500 nm, da mit der Existenz der Silbernanopartikel im Glas die Anregung kollektiver Schwingungen der Leitungselektronen in den Partikeln möglich ist (Oberflächenplasmonenresonanz). Das Glas wirkt dadurch schwarz.
  • 3. Die genannten Vorteile ermöglichen die Verwendung des Glases als Substrat mit geringer Eigenfluoreszenz für Fluoreszenzmessungen an DNS-Molekülen. So wird aus einem sehr kostengünstigen, für die Fluoreszenzmessung eher ungeeignetem Glas, ein im Vergleich zu anderen Substraten kostengünstiges Substrat mit geringer Eigenfluoreszenz.
  • 4. Das Material kann ferner als laserheizbares Substrat verwendet werden, wobei die Wellenlänge des Lasers im Absorptionsbereich der Silbernanopartikel liegen muss. Damit kann ein Absorber-Material sehr definiert in eine oberflächennahe Glasschicht eingebracht wird, welches auf Grund seiner optischen Eigenschaften eine lokale Erwärmung durch Absorption von Laserlicht erlaubt ohne den Laser stark fokussieren zu müssen und ohne eine hohe Laserleistung einsetzen zu müssen. Dies ermöglicht den Einsatz preisgünstiger Laser mit Wellenlängen im sichtbaren Spektralbereich – für die übliches Glas transparent wäre. Vorteilhaft ist dabei auch, dass die Erwärmung auf Grund der geringen Tiefenausdehnung der Absorber-Schicht nur auf die Glasoberfläche beschränkt ist.
The carrier according to the invention is characterized by a number of advantages. These include in particular:
  • 1. The intrinsic fluorescence of the glass is significantly reduced. As a result, float glass, which fluoresces strongly in the area of the bath side, can also be used as the carrier material.
  • 2. The doping of the glass causes an additional absorption in the case of irradiations in the wavelength range from about 300 nm to about 1500 nm, since with the existence of the silver nanoparticles in the glass the excitation of collective oscillations of the conduction electrons in the particles is possible (surface plasmon resonance). The glass looks black.
  • 3. The above advantages allow the use of the glass as a substrate with low intrinsic fluorescence for fluorescence measurements on DNA molecules. Thus, from a very inexpensive, for the fluorescence measurement rather unsuitable glass, a low-cost compared to other substrates substrate with low intrinsic fluorescence.
  • 4. The material can also be used as a laser-heatable substrate, wherein the wavelength of the laser must be in the absorption range of the silver nanoparticles. Thus, an absorber material is very defined in a near-surface glass layer is introduced, which allows due to its optical properties, a local heating by absorbing laser light without having to focus the laser strong and without having to use a high laser power. This allows the use of low-cost lasers with wavelengths in the visible spectral range - for the usual glass would be transparent. It is also advantageous that the heating due to the small depth extent of the absorber layer is limited only to the glass surface.

Die Erfindung wird im Folgenden anhand eines Ausführungsbeispiels näher erläutert. Das Beispiel erläutert die Anwendung bei einem Glasobjektträger für Fluoreszenzmessungen an DNS-Molekülen.The Invention will be explained in more detail below with reference to an embodiment. The Example explained the application to a glass slide for fluorescence measurements on DNA molecules.

Dazu zeigenTo demonstrate

1 einen Objektträger, bei dem eine Glasschicht beidseitig mit Metallnanopartikeln dotiert ist und 1 a slide in which a glass layer is doped on both sides with metal nanoparticles, and

2 einen Objektträger, bei dem die Oberflächenschicht in mehreren oberflächennahen Bereichen unterschiedlich mit Metallnanopartikeln strukturiert ist. 2 a slide in which the surface layer is differently structured with metal nanoparticles in several regions near the surface.

Der in 1 dargestellt Objektträger besteht aus einer Glasschicht 1, welche an ihren Oberflächen mit Metallnanopartikeln 2 aus Silber versehen ist. Das so dotierte Glas weist eine 40 μm dicke Oberflächenschichten auf. Diese Schichten bewirken eine hohe Absorption im ultravioletten und sichtbaren Spektralbereich sowie im nahen Infrarot-Bereich, wobei eine Eigenfluoreszenz nicht messbar ist.The in 1 The slide shown consists of a glass layer 1 , which at their surfaces with metal nanoparticles 2 made of silver. The thus doped glass has a 40 micron thick surface layers. These layers cause a high absorption in the ultraviolet and visible spectral range as well as in the near infrared range, whereby an intrinsic fluorescence is not measurable.

Als Ausgangsmaterial für die Dotierung mit Metallnanopartikeln 2 kann beispielsweise ein Glas verwendet werden, bei dem durch Ionenaustausch Metallionen, beispielsweise Silberionen, gegen glaseigene Natriumionen ausgetauscht werden.As starting material for the doping with metal nanoparticles 2 For example, a glass can be used in which metal ions, for example silver ions, are exchanged for glass-containing sodium ions by ion exchange.

Die Metallnanopartikel 2 sind vorzugsweise in oberflächennahen Bereichen bis zu einer Tiefe von etwa 50 μm angeordnet. Befinden sich die Metallnanopartikel 2 jedoch nicht nur in einem oberflächennahen Bereich, sondern durchdringen das Glasvolumen 1 vollständig, so ist selbstverständlich dennoch die erfindungsgemäße Wirkung gegeben.The metal nanoparticles 2 are preferably located in near-surface regions to a depth of about 50 microns. Are the metal nanoparticles 2 however, not only in a near-surface area, but penetrate the glass volume 1 complete, it is of course still given the effect of the invention.

Die Konzentration der Metallnanopartikel 2 ist im allgemeinen nicht konstant in Abhängigkeit von der Tiefe in der Glasschicht 1. Die Konzentration kann aber konstant eingestellt werden.The concentration of metal nanoparticles 2 is generally not constant depending on the depth in the glass layer 1 , However, the concentration can be set constant.

Üblicherweise sind die Metallnanopartikel 2 vollständig von der Glasschicht 1 umschlossen, was jedoch nicht zwingend erforderlich ist. Sie weisen Radien von 0,5 nm bis etwa 200 nm auf, die Größenverteilung ist dabei in der Regel nicht monodispers. Dies kann jedoch eingestellt werden.Usually, the metal nanoparticles are 2 completely from the glass layer 1 enclosed, which is not mandatory. They have radii of 0.5 nm to about 200 nm, the size distribution is not monodisperse in the rule. However, this can be set.

Zur Erwärmung von Trägermaterial wird das mit Metallnanopartikel 2 dotierte Glas mit Laserlicht bestrahlt. Die Erwärmung findet infolge der Absorption des Lichtes durch die Metallnanopartikel 2 statt. Ursache ist die Oberflächenplasmonresonanz der Partikel 2, also die Anregung kollektiver Schwingungen der Leitungselektronen in den Metallnanopartikeln 2. Die angeregten Partikel übertragen Ihre Energie auf die Glasmatrix, welche sich dadurch erwärmt. Aufgrund der starken, wellenlängenunabhängigen Absorption des Lichtes erwärmt sich nur ein oberflächennaher Bereich des Glases 1.For heating of carrier material with metal nanoparticles 2 doped glass irradiated with laser light. The heating takes place as a result of the absorption of light by the metal nanoparticles 2 instead of. The cause is the surface plasmon resonance of the particles 2 That is, the excitation of collective oscillations of the conduction electrons in the metal nanoparticles 2 , The excited particles transfer their energy to the glass matrix, which heats up. Due to the strong, wavelength-independent absorption of the light, only a near-surface region of the glass heats up 1 ,

2 zeigt einen Objektträger, bei dem das Glas-Trägermaterial nur lokal erwärmt werden soll. Hierzu ist die Oberfläche der Glasschicht 1 in strukturierter Form mit Metallnanopartikeln dotiert. Bei einer Bestrahlung diese Trägers erwärmen sich nur die dotierten Bezirke. 2 shows a slide in which the glass substrate is to be heated only locally. For this purpose, the surface of the glass layer 1 doped in structured form with metal nanoparticles. Upon irradiation of this carrier, only the doped districts heat up.

Vorteilhaft ist es dabei, dass verschiedene Bezirke des Objektträgers 1 unterschiedliche Konzentrationen von Metallnanopartikel 2 aufweisen können. Es können auch Bereiche mit völliger Partikelfreiheit erzeugt werden. Unter Bestrahlung erwärmen sich die Bezirke in Abhängigkeit von der jeweiligen Partikelkonzentration.It is advantageous that different districts of the slide 1 different concentrations of metal nanoparticles 2 can have. It can also be generated areas with complete freedom from particles. Under irradiation, the districts heat up depending on the respective particle concentration.

Durch die Wahl der Laserparameter Intensität und Bestrahlungsdauer kann die maximale Temperatur sowie der zeitliche Verlauf der Erwähnung der Glasoberfläche eingestellt werden.By the choice of laser parameters intensity and irradiation time can the maximum temperature as well as the chronology of the mention of the glass surface be set.

Claims (10)

Substrat aus Glas, dadurch gekennzeichnet, dass das Substrat aus einer Glasschicht (1) besteht, welche Metallnanopartikel (2) enthält, wobei die Metallnanopartikel (2) in einem oder in mehreren oberflächennahen Bereichen des Glases (1) enthalten sind.Substrate made of glass, characterized that the substrate consists of a glass layer ( 1 ), which metal nanoparticles ( 2 ), wherein the metal nanoparticles ( 2 ) in one or more near-surface areas of the glass ( 1 ) are included. Substrat nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass das Substrat aus Floatglas besteht.Substrate according to claim 1, characterized in that that the substrate is made of float glass. Substrat nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass ein oberflächennaher Bereich ein Volumen von einer Oberfläche des Glases (1) bis in eine maximale Tiefe von 50 μm umfasst.Substrate according to Claim 1 or 2, characterized in that a region close to the surface comprises a volume from a surface of the glass ( 1 ) to a maximum depth of 50 μm. Substrat nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass der die Metallnanopartikel (2) enthaltende oberflächennahe Bereich sich über die gesamte Glasoberfläche erstreckt.Substrate according to one of the preceding claims, characterized in that the metal nanoparticles ( 2 ) containing the near-surface region extends over the entire glass surface. Substrat nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass verschiedene oberflächennahe Bereiche des Glases (1) unterschiedliche Volumenkonzentrationen an Metallnanopartikeln (2) aufweisen.Substrate according to one of claims 1 to 3, characterized in that different near-surface regions of the glass ( 1 ) different volume concentrations of metal nanoparticles ( 2 ) exhibit. Substrat nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Volumenkonzentration der Metallnanopartikel (2) in mindestens einem Bereich des Glases (1) mindestens 10–3 beträgt.Substrate according to one of the preceding claims, characterized in that the volume concentration of the metal nanoparticles ( 2 ) in at least one region of the glass ( 1 ) is at least 10 -3 . Substrat nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Metallnanopartikel (2) aus Silber bestehen.Substrate according to one of the preceding claims, characterized in that the metal nanoparticles ( 2 ) consist of silver. Substrat nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Metallnanopartikel (2) ellipsoidförmig und/oder kugelförmig sind.Substrate according to one of the preceding claims, characterized in that the metal nanoparticles ( 2 ) are ellipsoidal and / or spherical. Substrat nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, dass ellipsoidförmige Metallnanopartikel (2) eine einheitliche Ausrichtung aufweisen.Substrate according to Claim 8, characterized in that ellipsoidal metal nanoparticles ( 2 ) have a uniform orientation. Substrat nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Metallnanopartikel (2) Radien zwischen 0,5 nm und 100 nm aufweisen.Substrate according to one of the preceding claims, characterized in that the metal nanoparticles ( 2 ) Have radii between 0.5 nm and 100 nm.
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