DE10162187A1 - Detecting microorganisms (A) in a gas, useful for detecting anthrax spores, comprises passing the gas through a membrane filter, transferring collected (A) to a solution, concentrating (I), releasing genetic material from (A) and testing - Google Patents

Detecting microorganisms (A) in a gas, useful for detecting anthrax spores, comprises passing the gas through a membrane filter, transferring collected (A) to a solution, concentrating (I), releasing genetic material from (A) and testing

Info

Publication number
DE10162187A1
DE10162187A1 DE10162187A DE10162187A DE10162187A1 DE 10162187 A1 DE10162187 A1 DE 10162187A1 DE 10162187 A DE10162187 A DE 10162187A DE 10162187 A DE10162187 A DE 10162187A DE 10162187 A1 DE10162187 A1 DE 10162187A1
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
microorganisms
solution
collected
gas
filter
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
DE10162187A
Other languages
German (de)
Inventor
Elmar Herbig
Joerg Pfisterer
Reinhard Vogt
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sartorius Stedim Biotech GmbH
Original Assignee
Sartorius AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sartorius AG filed Critical Sartorius AG
Priority to DE10162187A priority Critical patent/DE10162187A1/en
Publication of DE10162187A1 publication Critical patent/DE10162187A1/en
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6806—Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D61/00—Processes of separation using semi-permeable membranes, e.g. dialysis, osmosis or ultrafiltration; Apparatus, accessories or auxiliary operations specially adapted therefor
    • B01D61/14—Ultrafiltration; Microfiltration
    • B01D61/145—Ultrafiltration
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/689—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for bacteria

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Water Supply & Treatment (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Detecting microorganisms (A) in a gas comprising: (a) passing the gas through a membrane filter; (b) transferring collected (A) to a solution; (c) concentrating (A); (d) releasing the genetic material from (A); and (e) subjecting the released genetic material to a rapid detection test, is new.

Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zum Nachweis von Mikroorganismen in Gasen, bei dem das Gas zur Sammlung der Mikroorganismen durch ein Membranfilter geströmt wird und die gesammelten Mikroorganismen in eine Lösung überführt werden. The invention relates to a method for the detection of Microorganisms in gases, in which the gas to collect the Microorganisms are flowed through a membrane filter and the collected microorganisms are converted into a solution.

Ein derartiges Verfahren ist beispielsweise aus der WO 99/51765 bekannt. Bei dem bekannten Verfahren zum schnellen Nachweis von Mikroorganismen in Gasen, insbesondere Luft, wird das Gas zur Sammlung der Mikroorganismen durch ein von Partikeln mit einem Durchmesser > 0,45 µm freies Gelatinemembranfilter geströmt und der Gelatinemembranfilter mit den gesammelten Mikroorganismen in einer wässrigen Lösung, die ein mit den Mikroorganismen Fluoreszenz hervorrufendes enzymatisches Markierungsmittel enthält, aufgelöst. Die erhaltene Lösung wird mit den Mikroorganismen durch eine Analysemembran filtriert und die auf der Analysenmembran verbleibenden fluoreszierenden Mikroorganismen ausgezählt. Such a method is, for example, from WO 99/51765 known. In the known method for quick Detection of microorganisms in gases, especially air the gas for collecting the microorganisms by one of Particles with a diameter> 0.45 µm free Flowed gelatin membrane filter and the gelatin membrane filter with the collected microorganisms in an aqueous solution containing a enzymatic agent which causes fluorescence to the microorganisms Contains marker, dissolved. The solution obtained is with the microorganisms through an analysis membrane filtered and the remaining on the analysis membrane fluorescent microorganisms counted.

Nachteilig bei dem grundsätzlich bewährten Verfahren ist, dass es schwierig ist, geringe Mengen von Mikroorganismen bzw. geringste Konzentrationen von Mikroorganismen nachzuweisen. Soweit auf eine Filterung mit einer Analysenmembran verzichtet werden soll, um bekannte Schnelltestsmethoden, wie beispielsweise die sogenannte Polymerase-Ketten-Reaktion (Polymerase chain reaction, PCR) anzuwenden, besteht das Problem, dass das Volumen der Lösung mit den gesammelten Mikroorganismen für derartige bzw. die meisten Schnelltests zu groß ist bzw. dass zur Auswertung zu große Flächen benötigt werden. A disadvantage of the generally proven method is that it is difficult to get small amounts of microorganisms or the lowest concentrations of microorganisms demonstrated. So much for filtering with an analysis membrane should be dispensed with known rapid test methods, such as for example the so-called polymerase chain reaction (Polymerase chain reaction, PCR), there is Problem that the volume of the solution with the collected Microorganisms too large for such or most rapid tests or that too large areas are required for evaluation become.

Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es daher, das bekannte Verfahren so zu verbessern, dass auch bei geringsten Konzentrationen von Mikroorganismen und daraus resultierenden Sammlungsvolumen auf eine Filterung durch eine Analysenmembran verzichtet werden kann, so dass bekannte schnelle Nachweistests, wie molekularbiologische Methoden und andere Techniken, durchgeführt werden können. The object of the present invention is therefore the known To improve procedures so that even the slightest Concentrations of microorganisms and resulting Collection volume on filtering through an analysis membrane can be dispensed with, so that known quick Detection tests, such as molecular biological methods and others Techniques that can be performed.

Diese Aufgabe wird in Verbindung mit dem Oberbegriff des Anspruches 1 dadurch gelöst, dass die Lösung mit den gesammelten Mikroorganismen konzentriert wird, dass das genetische Material der Mikroorganismen freigesetzt wird, und dass das genetische Material einem schnellen Nachweistest unterzogen wird. This task is done in conjunction with the preamble of Claim 1 solved in that the solution with the collected microorganisms is concentrated that the genetic Material of the microorganisms is released, and that the genetic material subjected to a rapid detection test becomes.

Durch die Konzentrierung bzw. Einengung der Lösung mit den gesammelten Mikroorganismen wird das Lösungsvolumen so eingeengt, dass auf eine Filtration durch eine zweite Membran bzw. Analysemembran verzichtet werden kann, und andere bekannte Schnelltests durchgeführt werden können. By concentrating or concentrating the solution with the collected microorganisms becomes the solution volume like this concentrated on filtration through a second membrane or Analysis membrane can be dispensed with, and other known ones Rapid tests can be carried out.

Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung sind die nachzuweisenden Mikroorganismen Sporen, vegetative Keime, Pilze oder Viren. So können die nachzuweisenden Mikroorganismen beispielsweise Milzbrandsporen (Bacillus anthracis) sein. According to a preferred embodiment of the invention the microorganisms to be detected spores, vegetative germs, Fungi or viruses. So the ones to be proven Microorganisms, for example, anthrax spores (Bacillus anthracis).

Mit dem erfindungsgemäßen Verfahren ist es möglich, Kontaminationswege (Ansteckungswege/-Möglichkeiten), z. B. über raumlufttechnische Anlagen, wie Klimaanlagen, Belüftungsschächte oder aber in der Raumluft, in relativ kurzer Zeit aufzudecken. Durch die Schnelltests kann beispielsweise eine eindeutige Identifizierung von Milzbrandsporen oder anderen Mikroorganismen und Viren durchgeführt werden, so dass mit Erregern in Berührung gekommenen Personen möglichst schnell mit wirksamen Medikamenten, in der Regel Antibiotika, geholfen werden kann und somit rechtzeitig reagiert und beispielsweise ein Ausbrechen von Infektionskrankheiten, insbesondere von- Milzbrand, verhindert werden kann. With the method according to the invention it is possible to Contamination routes (contagion routes / possibilities), e.g. B. about ventilation systems, such as air conditioning, ventilation shafts or in the air, in a relatively short time uncover. The rapid tests can, for example, clear identification of anthrax spores or others Microorganisms and viruses are carried out so that with People who come into contact with pathogens as quickly as possible effective medication, usually antibiotics, helped can be reacted to in good time and for example an outbreak of infectious diseases, especially Anthrax, can be prevented.

Nach einer weiteren bevorzugten Ausführungsform der Erfindung wird als Membranfilter ein Gelatinefilter verwendet, der mit den gesammelten Mikroorganismen in einer geeigneten sterilen Flüssigkeit aufgelöst wird. According to a further preferred embodiment of the invention a gelatin filter is used as the membrane filter the collected microorganisms in a suitable sterile Liquid is dissolved.

Es ist aber auch möglich, als Membran ein Polymerfilter zu verwenden, von dem die gesammelten Mikroorganismen mit einer geeigneten Flüssigkeit abgespült werden. However, it is also possible to add a polymer filter as the membrane use, from which the collected microorganisms with a suitable liquid are rinsed off.

So ist es möglich, die Membranfilter mit den gesammelten Mikroorganismen in geeigneten Beuteln und Behältern für ansteckungsgefährliche Stoffe zu verpacken und in ein entsprechendes Labor zu transportieren, in dem die Auflösung des Gelatinefilters oder das Herunterspülen der Mikroorganismen von der Polymermembran erfolgt. So it is possible to collect the membrane filter with the Microorganisms in suitable bags and containers for infectious substances to pack and in one appropriate laboratory to transport, in which the dissolution of the Gelatin filter or the flushing of the microorganisms from the Polymer membrane takes place.

Gemäß einer weiteren bevorzugten Ausführungsform der Erfindung wird die Lösung mit den gesammelten Mikroorganismen in geeigneten Zentrifugalkonzentratoren mit Membranmikrofiltern oder Ultrafiltern konzentriert. Als Konzentratoren sind besonders geeignet: Vivaspin® (EP 0 651 675 B1) und Vivacell® der Vivascience AG. According to a further preferred embodiment of the Invention is the solution with the microorganisms collected in suitable centrifugal concentrators with membrane microfilters or ultrafilter concentrated. As are concentrators particularly suitable: Vivaspin® (EP 0 651 675 B1) and Vivacell® from Vivascience AG.

Gemäß einer anderen Ausführungsform der Erfindung wird die Lösung mit den gesammelten Mikroorganismen durch Filtration über ein Polymerfilter in einem geschlossenen Filtrationsapparat konzentriert und gewaschen. Hierfür ist insbesondere eine Ultrasart® D20 Einheit der Sartorius AG geeignet. Es ist aber auch möglich, die Lösung mit den gesammelten Mikroorganismen über eine Zentrifugation mit geeigneten Geschwindigkeiten zu konzentrieren, wobei der Überstand verworfen und das Pellet in einer geeigneten Lösung aufgenommen wird. According to another embodiment of the invention, the Solution with the collected microorganisms by filtration over a polymer filter in a closed Filtration apparatus concentrated and washed. For this is special an Ultrasart® D20 unit from Sartorius AG. It is but also possible the solution with the collected Microorganisms by centrifugation with suitable Focus speeds, discarding the supernatant and the pellet is taken up in a suitable solution.

Die Mikroorganismen können mit Anfärbetechniken identifiziert werden oder auch mit molekularbiologischen Methoden, wie PCR oder sogenannten Gensonden (Nukleinsäure-Sequenzen, die in einzelsträngiger, markierter Form zur Hybridisierung mit homologen und verwandten Sequenzen führen und dadurch deren qualitative und quantitative Bestimmung ermöglichen). Auch ist eine Identifizierung mit immunologischen Methoden, wie Antikörpertests, möglich. The microorganisms can be identified using staining techniques or with molecular biological methods such as PCR or so-called gene probes (nucleic acid sequences that are in single-stranded, marked form for hybridization with homologous and related sequences and thereby their enable qualitative and quantitative determination). Also is an identification with immunological methods like Antibody tests, possible.

Weitere Einzelheiten der Erfindung ergeben sich aus der nachfolgenden ausführlichen Beschreibung, in der bevorzugte Ausführungsformen der Erfindung beispielsweise veranschaulicht sind. Further details of the invention emerge from the following detailed description, in the preferred Illustrated embodiments of the invention, for example are.

Versuche am CAMR Institut im Vereinigten Königreich zeigten, dass der Sartorius Gelatinemembranfilter sehr gut geeignet ist, Bacillus Sporen aus der Luft zu sammeln (Journal of Applied Bacteriology 1996, 80, 529-534). Trials at the CAMR Institute in the UK showed that the Sartorius gelatin membrane filter is very suitable is to collect Bacillus spores from the air (Journal of Applied Bacteriology 1996, 80, 529-534).

Sammlung der Mikroorganismen bzw. SporenCollection of microorganisms or spores

Andere als im Beispiel genannte Einstellungsdaten sind selbstverständlich auch möglich, ggf. muss der Luftdurchsatz bei polymeren Filtermaterialen reduziert werden:
Für MD8 airscan® mit Gelatinefilter (Sartorius AG):
Sammlungsdauer: 10 min
Luftdurchsatz: 6 m3/h
Daraus resultiert ein Sammlungsvolumen von 1 m3 in 10 Minuten. Settings data other than those mentioned in the example are of course also possible, if necessary the air throughput for polymeric filter materials must be reduced:
For MD8 airscan® with gelatin filter (Sartorius AG):
Collection time: 10 min
Air flow: 6 m 3 / h
This results in a collection volume of 1 m 3 in 10 minutes.

Für AirPort MD 8 mit Gelatinefiltern (Sartorius AG):
Sammlungsdauer: 5 min
Luftdurchsatz: 50 l/min
Daraus resultiert ein Sammlungsvolumen von 250 Litern in 5 Minuten. For AirPort MD 8 with gelatin filters (Sartorius AG):
Collection time: 5 min
Air flow: 50 l / min
This results in a collection volume of 250 liters in 5 minutes.

Nach der Sammlung wird das Gelatine-Membranfilter oder das Polymerfilter verpackt, z. B. im Falle der Gelatinefilter- Einwegeinheiten in den PE-Beuteln mit Zippverschluss und anschließend in Behälter für ansteckungsgefährliche Stoffe verpackt. So verpackt, kann das Material beispielsweise per Kurier in ein entsprechendes Labor transportiert werden. Hier erfolgt die Auflösung des Gelatinefilters oder Herunterspülen der Mikroorganismen von der Polymermembran. After the collection, the gelatin membrane filter or that Packaged polymer filters, e.g. B. in the case of gelatin filter Disposable units in the PE bags with zipper and then in containers for infectious substances packed up. Packaged in this way, the material can be sent via Courier can be transported to an appropriate laboratory. Here the gelatin filter is dissolved or washed down of the microorganisms from the polymer membrane.

Probenaufbereitungsample preparation

Das Gelatinefilter wird in einer sterilen, auf 40°C angewärmten Flüssigkeit, z. B. physiologische Kochsalzlösung oder Peptonwasser 0,1%ig (jeweils 100 ml) aufgelöst. Das Gelatinefilter sollte sich innerhalb 15 min. lösen. Rühren mit einem sterilen Magnetrührer kann ggf. die Auflösung beschleunigen. The gelatin filter is placed in a sterile, at 40 ° C warmed liquid, e.g. B. physiological saline or Peptone water 0.1% (100 ml each) dissolved. The Gelatin filter should change within 15 min. to solve. Stir with one sterile magnetic stirrers can accelerate the dissolution if necessary.

Bei Polymerfiltern werden die auf dem Filter gesammelten Sporen mit einer ausreichenden Menge Flüssigkeit (die die folgenden Tests nicht stört) abgespült. With polymer filters, the collected on the filter Spores with a sufficient amount of fluid (which the the following tests).

Da 100 ml ein zu großes Volumen für die meisten der Schnelltests darstellt, wird das Volumen erfindungsgemäß eingeengt bzw. konzentriert. Because 100 ml is too large a volume for most of the Represents rapid tests, the volume is concentrated according to the invention or concentrated.

Verwendet werden beispielsweise Vivaspin®/Vivacell® Zentrifugalkonzentratoren der Vivascience AG mit Membranmikrofiltern von 0,2 µm Porengröße (PES) oder Ultrafiltern von 1.000.000 D MWCO (PES). Je nach zu untersuchendem Probenvolumen werden Konzentratoren von 20 ml, 70 ml oder 100 ml Kapazität eingesetzt. Die Proben werden nach Angaben des Herstellers zentrifugiert und dabei das Volumen bis zu 100fach eingeengt. Ein definiertes, minimales Restvolumen, das die gesammelten Mikroorganismen, Sporen, Partikel etc. enthält, wird aus dem Konzentratorspalt durch Pipettieren gewonnen. Typische Rückgewinnungsraten liegen über 90%. Bei Bedarf kann das Konzentrat durch Zugabe einer Pufferlösung zum Konzentrator und erneute Zentrifugation gewaschen und somit von unerwünschten Begleitstoffen befreit werden. For example, Vivaspin® / Vivacell® are used Centrifugal concentrators from Vivascience AG with Membrane microfilters of 0.2 µm pore size (PES) or ultrafilters from 1,000,000 D MWCO (PES). Depending on the one to be examined Sample volumes are 20 ml, 70 ml or 100 ml concentrators Capacity used. The samples are according to the Manufacturer centrifuged and the volume up to 100 times concentrated. A defined, minimal residual volume that the contains collected microorganisms, spores, particles etc., is obtained from the concentrator gap by pipetting. Typical recovery rates are over 90%. If necessary can the concentrate by adding a buffer solution to the Concentrator and re-centrifugation washed and thus by unwanted accompanying substances are freed.

Alternativ können die Sporen durch Filtration über ein 0,2 µm- Polymerfilter (Cellusoeacetat oder PES) in einem geschlossenem Filtrationsapparat (z. B. Ultrasart® D20 Einheit, der Sartorius AG) aufkonzentriert und gewaschen werden. Das gewaschene Retentat wird in einer kleinen Menge einer für die Schnelltests geeigneten Lösung aufgenommen. Das Volumen, das letztlich für die Schnelltests z. B. in den PCR-Tests eingesetzt wird, sollte zwischen 10 und 100 µl betragen (idealerweise für PCR 2-10 µl). Alternatively, the spores can be filtered through a 0.2 µm Polymer filter (celloacetate or PES) in one closed filtration apparatus (e.g. Ultrasart® D20 unit, the Sartorius AG) are concentrated and washed. The washed retentate is in a small amount one for the Rapid tests suitable solution added. The volume that ultimately for the quick tests z. B. in the PCR tests should be between 10 and 100 µl (ideally for PCR 2-10 µl).

Die Probenaufbereitung kann alternativ auch über eine Zentrifugation mit geeigneten Geschwindigkeiten geschehen. Der Überstand wird verworfen und das Pellet in wenig Volumen einer geeigneten Lösung aufgenommen. Ein Waschschritt kann angeschlossen werden und das entstandene Pellet wieder in bis zu 0,1 ml Lösung aufgenommen werden. Alternatively, sample preparation can also be carried out using a Centrifugation is done at appropriate speeds. The The supernatant is discarded and the pellet in a small volume suitable solution added. A washing step can be connected and the resulting pellet back in up to 0.1 ml of solution are added.

Nach der Aufkonzentrierung der Sporen werden diese anschließend zum Auskeimen in geeigneten Nährmedien gebracht (dauert in der Regel einige Tage) oder aber mit anderen geeigneten Mitteln (z. B. Ultraschall) aufgebrochen. After concentrating the spores, these become then germinated in suitable nutrient media (takes usually a few days) or with other suitable ones Medium (e.g. ultrasound) broken up.

Das freigesetzte genetische Material kann nun für die unterschiedlichen molekularbiologischen Schnelltests eingesetzt werden. The released genetic material can now be used for different molecular biological rapid tests become.

Nach einem anderen Beispiel wird das Gelatinefilter in 75 ml PBS (Phosphate buffered sahne, 20 mM Natriumsphosphat, 150 mM NaCl, pH 7.0) unter leichtem Erwärmen (bis 40°C) gelöst. According to another example, the gelatin filter is in 75 ml PBS (Phosphate buffered cream, 20 mM sodium phosphate, 150 mM NaCl, pH 7.0) dissolved with gentle heating (up to 40 ° C).

Zum Konzentrieren werden je 15 ml der Lösung in einem Vivaspin® 20 Zentrifugalkonzentrator (MWCO 1.000.000, der Vivascience AG) zwischen 4°C und Raumtemperatur bei 3.500 g 15 Minuten zentrifugiert. Dabei wird die Lösung auf etwa 1 ml eingeengt. Bei Bedarf kann das Konzentrat mit einigen ml PBS durch einen zweiten Zentrifugationsschritt gewaschen werden. Die im Konzentrat gesammelten Sporen können entweder zum Auskeimen gebracht oder durch Erhitzen bei 95°C für 15 Minuten aufgeschlossen werden, um das in ihnen enthaltene genetische Material freizusetzen. To concentrate, 15 ml of the solution in one Vivaspin® 20 centrifugal concentrator (MWCO 1,000,000, the Vivascience AG) between 4 ° C and room temperature at 3,500 g 15 Centrifuged for minutes. The solution is about 1 ml concentrated. If necessary, the concentrate can be mixed with a few ml PBS be washed by a second centrifugation step. The spores collected in the concentrate can either be used for Germinated or by heating at 95 ° C for 15 minutes be unlocked to the genetic content contained in them Release material.

Claims (14)

1. Verfahren zum Nachweis von Mikroorganismen in Gasen, bei dem das Gas zur Sammlung der Mikroorganismen durch ein Membranfilter geströmt wird und die gesammelten Mikroorganismen in eine Lösung überführt werden, dadurch gekennzeichnet, dass die Lösung mit den gesammelten Mikroorganismen konzentriert wird, dass das genetische Material der Mikroorganismen freigesetzt wird, und dass das genetische Material einem schnellen Nachweistest unterzogen wird. 1. A method for the detection of microorganisms in gases, in which the gas for collecting the microorganisms is passed through a membrane filter and the collected microorganisms are converted into a solution, characterized in that the solution is concentrated with the collected microorganisms that the genetic material the microorganisms are released and that the genetic material is subjected to a rapid detection test. 2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die nachzuweisenden Mikroorganismen Sporen, vegetative Keime, Pilze oder Viren sind. 2. The method according to claim 1, characterized in that the microorganisms to be detected spores, vegetative germs, Are fungi or viruses. 3. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass die nachzuweisenden Mikroorganismen Milzbrandsporen sind. 3. The method according to claim 2, characterized in that the microorganisms to be detected are anthrax spores. 4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass als Membranfilter ein Gelatinefilter verwendet wird, der mit den gesammelten Mikroorganismen in einer geeigneten sterilen Flüssigkeit aufgelöst wird. 4. The method according to any one of claims 1 to 3, characterized characterized that a gelatin filter as a membrane filter is used with the collected microorganisms in one suitable sterile liquid is dissolved. 5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass als Membranfilter ein Polymerfilter verwendet wird, von dem die gesammelten Mikroorganismen mit einer geeigneten sterilen Flüssigkeit abgespült werden. 5. The method according to any one of claims 1 to 3, characterized characterized in that a polymer filter as a membrane filter is used by which the collected microorganisms a suitable sterile liquid. 6. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass die Lösung mit den gesammelten Mikroorganismen in geeigneten Zentrifugalkonzentratoren mit Membranmikrofiltern oder Ultrafiltern konzentriert wird. 6. The method according to any one of claims 1 to 5, characterized characterized that the solution with the collected Microorganisms in suitable centrifugal concentrators Membrane microfilters or ultrafilters is concentrated. 7. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass die Lösung mit den gesammelten Mikroorganismen durch Filtration über ein Polymerfilter in einem geschlossenen Filtrationsapparat konzentriert und gewaschen wird. 7. The method according to any one of claims 1 to 5, characterized characterized that the solution with the collected Microorganisms by filtration through a polymer filter in one closed filtration apparatus concentrated and washed becomes. 8. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass die Lösung mit den gesammelten Mikroorganismen über eine Zentrifugation mit geeigneten Geschwindigkeiten konzentriert wird, wobei der Überstand verworfen und das Pellet in einer geeigneten Lösung aufgenommen wird. 8. The method according to any one of claims 1 to 5, characterized characterized that the solution with the collected Microorganisms by centrifugation with suitable Speeds are concentrated, the supernatant being discarded and the pellet is taken up in a suitable solution. 9. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 8, dadurch gekennzeichnet, dass nach erfolgter Konzentrierung die Mikroorganismen zum Auskeimen in geeignete Nährmedien gebracht werden. 9. The method according to any one of claims 1 to 8, characterized characterized that after concentration the Microorganisms brought into suitable nutrient media for germination become. 10. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 8, dadurch gekennzeichnet, dass nach erfolgter Konzentrierung die Mikroorganismen mit geeigneten Mitteln aufgebrochen werden. 10. The method according to any one of claims 1 to 8, characterized characterized that after concentration the Microorganisms can be broken up with suitable agents. 11. Verfahren nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, dass die Mikroorganismen mit Ultraschall aufgebrochen werden. 11. The method according to claim 10, characterized in that the microorganisms are broken up with ultrasound. 12. Verfahren nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, dass die Mikroorganismen durch Erhitzen aufgeschlossen werden. 12. The method according to claim 10, characterized in that the microorganisms are disrupted by heating. 13. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 12, dadurch gekennzeichnet, dass die Mikroorganismen mit Anfärbetechniken identifiziert werden. 13. The method according to any one of claims 1 to 12, characterized characterized that the microorganisms using staining techniques be identified. 14. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 12, dadurch gekennzeichnet, dass Mikroorganismen mit molekularbiologischen Methoden, wie PCR oder Gensonden, oder immunologischen Methoden, wie Antikörpertests, identifiziert werden. 14. The method according to any one of claims 1 to 12, characterized characterized that microorganisms with molecular biological Methods such as PCR or gene probes, or immunological Methods such as antibody tests are identified.
DE10162187A 2001-12-17 2001-12-17 Detecting microorganisms (A) in a gas, useful for detecting anthrax spores, comprises passing the gas through a membrane filter, transferring collected (A) to a solution, concentrating (I), releasing genetic material from (A) and testing Withdrawn DE10162187A1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE10162187A DE10162187A1 (en) 2001-12-17 2001-12-17 Detecting microorganisms (A) in a gas, useful for detecting anthrax spores, comprises passing the gas through a membrane filter, transferring collected (A) to a solution, concentrating (I), releasing genetic material from (A) and testing

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE10162187A DE10162187A1 (en) 2001-12-17 2001-12-17 Detecting microorganisms (A) in a gas, useful for detecting anthrax spores, comprises passing the gas through a membrane filter, transferring collected (A) to a solution, concentrating (I), releasing genetic material from (A) and testing

Publications (1)

Publication Number Publication Date
DE10162187A1 true DE10162187A1 (en) 2003-06-18

Family

ID=7709679

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE10162187A Withdrawn DE10162187A1 (en) 2001-12-17 2001-12-17 Detecting microorganisms (A) in a gas, useful for detecting anthrax spores, comprises passing the gas through a membrane filter, transferring collected (A) to a solution, concentrating (I), releasing genetic material from (A) and testing

Country Status (1)

Country Link
DE (1) DE10162187A1 (en)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005040761A1 (en) * 2003-10-16 2005-05-06 Smiths Detection Inc. Fully continuous bioaerosol identifier
CN114659994A (en) * 2022-05-23 2022-06-24 武汉大学 Tobacco foreign matter extraction and detection system

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005040761A1 (en) * 2003-10-16 2005-05-06 Smiths Detection Inc. Fully continuous bioaerosol identifier
US7998410B2 (en) 2003-10-16 2011-08-16 Smiths Detection Inc. Fully continuous bioaerosol identifier
CN114659994A (en) * 2022-05-23 2022-06-24 武汉大学 Tobacco foreign matter extraction and detection system
CN114659994B (en) * 2022-05-23 2022-08-05 武汉大学 Tobacco foreign matter extraction and detection system

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20200224242A1 (en) Liquid to Liquid Biological Particle Concentrator
WO2006087220A2 (en) Receptacle for the separation of tumor cells
DE212013000295U1 (en) Devices for capturing target molecules
EP2711685A2 (en) Detection device and method for the automatic detection of particles
DE60105288T2 (en) PROCESS FOR PREPARING A SAMPLE FOR ANALYSIS FROM A SAMPLE OF VERY LARGE VOLUME
EP2419707B1 (en) Up-concentration of organic microobjects for microscopic imaging
CN113329820B (en) Method and apparatus for selectively extracting components from biological samples
DE60035977T2 (en) FTA-COATED CARRIER FOR USE AS A MOLECULAR DIAGNOSTIC
DE10162187A1 (en) Detecting microorganisms (A) in a gas, useful for detecting anthrax spores, comprises passing the gas through a membrane filter, transferring collected (A) to a solution, concentrating (I), releasing genetic material from (A) and testing
US20090103086A1 (en) Portable sample preparation and analysis system for micron and sub-micron particle characterization using light scattering and absorption spectroscopy
EP1498492B1 (en) Apparatus for the preparation of samples
EP0126019A2 (en) High resolution method of measuring ATP, and concentrating and measuring unicellular organisms
EP3914388B1 (en) Methods and apparatus to selectively extract constituents from biological samples
EP3190184B1 (en) Pretreatment method and nucleic acid extraction kit used in said method
WO2017116695A1 (en) Assembly and method for field filtration of water samples
WO2002022866A2 (en) Method and sampling kit for analysing material containing nucleic acid
EP3111220B1 (en) Procedures for molecular diagnostics for enriching a nucleic acid from a biological sample
WO2023138793A1 (en) Device for receiving samples
WO1998048045A2 (en) Method for non-invasive identification of malignant lung tumors
DE10247430A1 (en) Method for determining the level of endotoxins in liquids
DE10118446A1 (en) Test for microbiological toxins, e.g. for testing gases, comprises using a flow vessel with a separator, to incubate separated toxins similar to whole blood incubation, for study on a mediator

Legal Events

Date Code Title Description
8127 New person/name/address of the applicant

Owner name: SARTORIUS BIOTECH GMBH, 37079 GOETTINGEN, DE

8127 New person/name/address of the applicant

Owner name: SARTORIUS STEDIM BIOTECH GMBH, 37079 GOETTINGE, DE

8110 Request for examination paragraph 44
8139 Disposal/non-payment of the annual fee