DE10120816A1 - New antibody specific for histamine receptor protein, useful for treating or preventing e.g. allergy or inflammation, also antigens for its preparation - Google Patents

New antibody specific for histamine receptor protein, useful for treating or preventing e.g. allergy or inflammation, also antigens for its preparation

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DE10120816A1
DE10120816A1 DE2001120816 DE10120816A DE10120816A1 DE 10120816 A1 DE10120816 A1 DE 10120816A1 DE 2001120816 DE2001120816 DE 2001120816 DE 10120816 A DE10120816 A DE 10120816A DE 10120816 A1 DE10120816 A1 DE 10120816A1
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies

Abstract

Antibody (Ab) that is specific for a histamine receptor protein (HRP), especially human, and able to inhibit binding of histamine to HRP, is new. Antibody (Ab) that is specific for a histamine receptor protein (HRP), especially human, and able to inhibit binding of histamine to HRP. Ab is produced by immunization with an antigenic polypeptide (I) that comprises: (i) an extracellular domain (ECD) having a sequence from the first extracellular loop (ECL) of HRP and optionally a transmembrane domain (TMD) having a sequence from the N-terminus of the third transmembrane region (TMR) of HRP; (ii) ECD having a sequence from the second ECL and optionally a TMD having a sequence from the C-terminus of the fourth TMR; or (iii) an ECD having a sequence from the second ECL and optionally a TMD having a sequence from the N-terminus of the 5th TMR. Independent claims are also included for: (1) preparing (M1) Ab; (2) hybridoma cells produced by (M1); (3) immunoassay for detecting HRP that uses at least one Ab; and (4) (I).

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft Antikörper, die spezifisch für eine Hista­ minrezeptorsubklasse (H1, H2, H3) sind und die die Histaminbindung an den spezifischen des Rezeptors inhibieren. Diese Antikörper zeigen agonistische Effekte und sind daher beispielsweise zur Prävention oder therapeutischen Behandlung von Inflammationserkrankungen und zum Nachweis von spezifischen Histaminrezeptorproteinen geeignet.The present invention relates to antibodies specific for Hista minreceptor subclass (H1, H2, H3) and which are the histamine binding inhibit the specific of the receptor. These antibodies show agonistic effects and are therefore, for example, for prevention or therapeutic treatment of inflammatory diseases and for Detection of specific histamine receptor proteins suitable.

Hintergrund der ErfindungBackground of the Invention

Histamin ist ein körpereigenes Amin, das rezeptorvermittelt pathophysiologische Veränderungen der Zellantwort induzieren kann.Histamine is an endogenous amine that mediates receptors can induce pathophysiological changes in cell response.

Zu Histamin induzierten pathophysiologischen Veränderungen gehören unter anderem allergische Reaktionen sowie der anaphylaktische Schock. In der Forschung werden Agonisten und Antagonisten eingesetzt, um die pathologische Wirkung von Histamin zu charakterisieren.Pathophysiological changes induced by histamine include including allergic reactions and anaphylactic shock. Research uses agonists and antagonists to control the characterize pathological effects of histamine.

Die Verwendung von Agonisten und Antagonisten in Therapie und Forschung hat entscheidende Nachteile. Bei diesen Substanzen handelt es sich um modifizierte chemische Verbindungen, die Histamin-ähnliche Strukturen aufweisen. Es gibt bisher keine Agonisten, für die eine 100%- Rezeptor-Spezifität nachgewiesen werden konnte. Histamin Rezeptor Agonisten binden häufig andere Rezeptoren und wirken dort aktivierend. In der Forschung bedeutet dies, dass die Histamin-induzierten Mechanismen, die über die Aktivierung der spezifischen Rezeptorsubklassen zur Entwicklung unterschiedlicher pathologischer Reaktionen führt, nicht eindeutig geklärt werden können.The use of agonists and antagonists in therapy and Research has major disadvantages. These substances are are modified chemical compounds that are histamine-like Have structures. So far there are no agonists for whom a 100% Receptor specificity could be demonstrated. Histamine receptor Agonists often bind other receptors and have an activating effect there. In research, this means that the histamine-induced Mechanisms that activate the specific Receptor subclasses for the development of different pathological Reactions, cannot be clearly clarified.

Die Bindung von Antikörpern an die Rezeptoren ist dagegen hochspezifisch, da Rezeptorsubklassen-spezifische antigene Regionen erkannt werden. Der spezifische Nachweis der Rezeptorsubklassen, die Inhibition der Histaminbindung an die spezifischen Rezeptorsubklassen und der hochspezifische agonistische Effekt der Antikörper kann zur Entschlüsselung der zugrundeliegenden Mechanismen Histamin vermittelter pathologischer Reaktionen entscheidend beitragen.The binding of antibodies to the receptors is against this highly specific because receptor subclass-specific antigenic regions be recognized. The specific detection of the receptor subclasses that  Inhibition of histamine binding to the specific receptor subclasses and the highly specific agonistic effect of the antibodies can lead to Deciphering the underlying mechanisms of histamine mediated pathological reactions contribute decisively.

Zu den medizinischen Forschungsgebieten, die den Histaminrezeptor vermittelten Veränderungen eine relevante Rolle zuschreiben, gehören die Gehirnforschung (der H3 Rezeptor scheint hauptsächlich auf Neuronen exprimiert zu werden), die Angiogeneseforschung, die Krebsforschung, die chirurgische Polytrauma und Sepsisforschung, sowie die Erforschung von Allergien.To the medical research areas that the histamine receptor attributed a relevant role to mediated changes belong to Brain research (the H3 receptor appears mostly on neurons to be expressed), angiogenesis research, cancer research, the surgical polytrauma and sepsis research, as well as research into Allergies.

In den letzten 5 Jahren wurden in der Medline über 2000 Veröffentlichungen registriert, die Histaminrezeptorergebnisse darstellten.In the past 5 years there have been over 2000 in the Medline Publications registered that presented histamine receptor results.

Ein therapeutischer Effekt wurde vor allen Dingen für H3 Rezeptor Agonisten beschrieben. In der Prävention der Inflammation konnten zudem H2 Agonisten protektive Effekte erzielen. Der Einsatz von hochspezifischen agonistisch wirkenden Antikörpern wären ein weiteres Anwendungsgebiet der beschriebenen Erfindung.A therapeutic effect was especially for H3 receptor Described agonists. In the prevention of inflammation H2 agonists also have protective effects. The use of highly specific agonistic antibodies would be another Field of application of the described invention.

Zwar sind Antikörper gegen Histaminrezeptorproteine bekannt (z. B. aus US Patent No. 5,817480 und WO 90/15878), bei diesen Antikörpern handelt es sich jedoch nicht um histaminrezeptor-spezifische Antikörper, die die Bindungsstelle der Histaminrezeptoren blockieren und damit die histamininduzierten Reaktionen inhibieren können. Daneben offenbart WO 00/20011 die DNA-Sequenz für den humanen Histamin-H3-Rezeptor und führt aus, dass hierdurch ein monospezifischer Antikörper zugänglich wäre, der die Aktivität des humanen Histaminrezeptors blockiere, ohne jedoch auszuführen, welche Untereinheiten des Rezeptorproteins für die Immunisierung einzusetzen wären. Antibodies against histamine receptor proteins are known (e.g. from US Patent No. 5,817480 and WO 90/15878), for these antibodies however, these are not histamine receptor-specific antibodies, which block the binding site of the histamine receptors and thus the can inhibit histamine-induced reactions. In addition, WO 00/20011 discloses the DNA sequence for the human histamine H3 receptor and states that this makes a monospecific antibody accessible that would block the activity of the human histamine receptor without however, specify which subunits of the receptor protein for the Immunization would be used.  

Antikörper, die die Histaminbindung an den spezifischen Rezeptor inhibieren, sind, wie vorstehend ausgeführt, für eine Vielzahl von Anwendungen höchst erstrebenswert.Antibodies that bind histamine to the specific receptor inhibit, as stated above, for a variety of Applications highly desirable.

Zusammenfassung der ErfindungSummary of the invention

Überraschenderweise wurde nun gefunden, dass durch Immunisierung ge­ eigneter Tiere mit speziellen Antigenen, die bestimmte Polypeptidfrag­ mente des jeweiligen Histaminrezeptorproteins enthalten, Antikörper, die die entsprechenden Histaminbindungsstelle blockieren und die agonistische Effekte zeigen, erhalten werden. Die vorliegende Erfindung betrifft somit
Surprisingly, it has now been found that by immunizing suitable animals with special antigens which contain certain polypeptide fragments of the respective histamine receptor protein, antibodies are obtained which block the corresponding histamine binding site and which show the agonistic effects. The present invention thus relates

  • 1. einen Antikörper, der spezifisch für ein Histaminrezeptorprotein (nachfolgend auch kurz "HRP"), insbesondere für ein humanes Histaminrezeptorprotein (h-HRP) ist, der die Histaminbindung an den Rezeptor inhibiert, und der erhältlich ist durch Immunisierung mit einem Antigen, das ausgewählt ist aus einem Polypeptid, das
    • a) eine extrazelluläre Domäne mit einer Polypeptidsequenz aus der ersten extrazellulären Schleife des HRP und optional eine trans­ membrane Domäne mit einer Polypeptidsequenz aus dem N- Terminus der dritten transmembranen Region des HRP umfasst,
    • b) eine extrazelluläre Domäne mit einer Polypeptidsequenz aus der zweiten extrazellulären Schleife des HRP und optional eine transmembrane Domäne mit einer Polypeptidsequenz aus dem C-Terminus der vierten transmembranen Region des HRP um­ fasst und
    • c) eine extrazelluläre Domäne mit einer Polypeptidsequenz aus der zweiten extrazellulären Schleife des HRP und optional eine transmembrane Domäne mit einer Polypeptidsequenz aus dem N-Terminus der fünften transmembranen Region des HRP um­ fasst;
    1. an antibody which is specific for a histamine receptor protein (hereinafter also abbreviated "HRP"), in particular for a human histamine receptor protein (h-HRP), which inhibits histamine binding to the receptor and which can be obtained by immunization with an antigen which is selected from a polypeptide that
    • a) comprises an extracellular domain with a polypeptide sequence from the first extracellular loop of the HRP and optionally a trans membrane domain with a polypeptide sequence from the N-terminus of the third transmembrane region of the HRP,
    • b) an extracellular domain with a polypeptide sequence from the second extracellular loop of the HRP and optionally a transmembrane domain with a polypeptide sequence from the C-terminus of the fourth transmembrane region of the HRP and
    • c) comprises an extracellular domain with a polypeptide sequence from the second extracellular loop of the HRP and optionally a transmembrane domain with a polypeptide sequence from the N-terminus of the fifth transmembrane region of the HRP;
  • 2. ein Verfahren zur Herstellung eines Antikörpers nach einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 12, umfassend
    • a) zur Herstellung polyklonaler Antikörper, die Immunisierung von ge­ eigneten Tieren mit den in (1) definierten Antigenen und Isolation der po­ lyklonalen Antikörper aus dem Serum der Tiere;
    • b) zur Herstellung monoklonaler Antikörper, das Verschmelzen von Milz­ zellen der unter (a) immunisierten Tiere mit geeigneten vermehrungsfähi­ gen Zeltlinien (?) unter Erhalt von Hybridomzellen und Kultivieren der er­ haltenen Hybridomzellen;
    2. A method for producing an antibody according to one or more of claims 1 to 12, comprising
    • a) for the production of polyclonal antibodies, the immunization of suitable animals with the antigens defined in (1) and isolation of the polyclonal antibodies from the serum of the animals;
    • b) for the production of monoclonal antibodies, the fusion of spleen cells of the animals immunized under (a) with suitable viable tent lines (?) while maintaining hybridoma cells and cultivating the hybridoma cells obtained;
  • 3. Hybridomzellen, erhältlich durch das Verfahren, wie in (2) definiert;3. Hybridoma cells obtainable by the method as defined in (2);
  • 4. eine pharmazeutische oder diagnostische Zusammensetzung, die einen oder mehrere Antikörper nach (1) enthält;4. a pharmaceutical or diagnostic composition that a or contains several antibodies according to (1);
  • 5. die Verwendung eines Antikörpers, wie in (1) definiert, zur Vorbeu­ gung vor oder Behandlung von allergischen Reaktionen, chronischen und/oder akuten Entzündungen und/oder anaphylaktischem Schock;5. the use of an antibody as defined in (1) for prevention before or treatment of allergic reactions, chronic and / or acute inflammation and / or anaphylactic shock;
  • 6. ein Verfahren zur Vorbeugung vor oder Behandlung von allergischen Reaktionen, chronischen und/oder akuten Entzündungen und/oder anaphylaktischem Schock bei Mensch und Tier, umfassend Verabreichen eines oder mehrerer der Antikörper, wie in (1) definiert;6. a method of preventing or treating allergic Reactions, chronic and / or acute inflammation and / or anaphylactic shock in humans and animals, extensive administration one or more of the antibodies as defined in (1);
  • 7. die Verwendung eines Antikörpers, wie in (1) definiert, zum Nachweis von Histaminrezeptorproteinen;7. the use of an antibody as defined in (1) for detection of histamine receptor proteins;
  • 8. ein Assayverfahren zum Nachweis von Histaminrezeptorprotein, um­ fassend ein Immunoassay mit einem oder mehreren Antikörper(n), wie in (1) definiert; und8. an assay procedure for the detection of histamine receptor protein summarizing an immunoassay with one or more antibodies as in (1) defined; and
  • 9. ein Antigen, wie in (1) definiert.9. an antigen as defined in (1).

Die erfindungsgemäßen Antikörper, die spezifisch für einen Histaminre­ zeptor (einschließlich des H1-, H2- und H3-Rezeptors und insbesondere des in SEQ ID Nos: 1 bis 3 und in Fig. 2 gezeigten humanen H1-, H2- und H3-Rezeptors) sind, inhibieren die Histaminbindung. Die Antikörper bewirken Zellreaktionen, die mit den histamininduzierten Reaktionen vergleichbar sind. Die Antikörper können zum quantitativen und qualitativen Nachweis der Rezeptorproteine und als Arzneimittel mit spezifischer (jedoch dosierungsabhängiger) agonistischer und/oder inhibitorischer Wirkung eingesetzt werden. The antibodies according to the invention which are specific for a histamine receptor (including the H1, H2 and H3 receptor and in particular the human H1, H2 and H3 receptor shown in SEQ ID Nos: 1 to 3 and in FIG. 2) inhibit histamine binding. The antibodies cause cell reactions that are comparable to the histamine-induced reactions. The antibodies can be used for the quantitative and qualitative detection of the receptor proteins and as a medicament with a specific (but dose-dependent) agonistic and / or inhibitory effect.

Kurzbeschreibung der FigurenBrief description of the figures

Fig. 1 zeigt die dreidimensionale Struktur des H2-Rezeptors (aus Del Valle et al., Am. J. Physiol. (1997)). FIG. 1 shows the three-dimensional structure of the H2 receptor (from Del Valle et al., Am. J. Physiol. (1997)).

Fig. 2 zeigt die Sequenzen der humanen H1- (Fig. 2A), H2- (Fig. 2B) und H3-Rezeptoren (Fig. 2C). Die transmembranen Bereiche sind fett einge­ zeichnet, die bevorzugten Antigene sind eingerahmt und der wichtigste Aminosäurerest der Histaminbindungsdomäne ist durch seine Größe her­ vorgehoben. Figure 2 shows the sequences of the human H1 ( Figure 2A), H2 ( Figure 2B) and H3 receptors ( Figure 2C). The transmembrane areas are shown in bold, the preferred antigens are boxed and the most important amino acid residue of the histamine binding domain is highlighted by its size.

Detaillierte Beschreibung der ErfindungDetailed description of the invention

Das zur Immunisierung verwendete Peptid gemäß Ausführungsformen (1) und (9) enthält eine extrazelluläre Domäne des Rezeptorproteins, wobei dieses die 1. oder 2. extrazelluläre Schleife des Rezeptorproteins ist. Die Zählweise der extrazellulären Schleifen und der transmembranen Bereiche ergibt sich aus Fig. 1.The peptide used for immunization according to embodiments (1) and (9) contains an extracellular domain of the receptor protein, this being the 1st or 2nd extracellular loop of the receptor protein. The way of counting the extracellular loops and the transmembrane regions is shown in FIG. 1.

Der obere Teil der Zeichnung zeigt ganz links den extrazellulären Amino- Terminus sowie die der extrazellulären Schlaufen, die von links nach rechts gezählt werden. Im mittleren Teil der Zeichnung sind die sieben transmembranen Regionen gezeigt, die ebenfalls von links nach rechts gezählt werden. Im unteren Bildteil befinden sich die drei intrazellulären Schlaufen und ganz rechts der intrazelluläre Carboxyterminus der Proteinkette. Die zweite extrazelluläre Schlaufe (umrandet) ist eine hochantigene Region der drei Histaminrezeptorsubklassen H1, H2 und H3. Es ist davon auszugehen, dass Histamin et an eine transmembrane α- helikale Tasche zwischen der ersten und zweiten extrazellulären Schlaufe bindet (rechteckiger Rahmen in Fig. 1).The upper part of the drawing shows on the far left the extracellular amino terminus and that of the extracellular loops, which are counted from left to right. In the middle part of the drawing the seven transmembrane regions are shown, which are also counted from left to right. In the lower part of the picture are the three intracellular loops and on the far right the intracellular carboxy terminus of the protein chain. The second extracellular loop (outlined) is a highly antigenic region of the three histamine receptor subclasses H1, H2 and H3. It can be assumed that histamine et binds to a transmembrane α-helical pocket between the first and second extracellular loops (rectangular frame in FIG. 1).

Die Histaminrezeptoren gehören zur Familie der G-Protein-gekoppelten Rezeptoren. G-Protein-gekoppelte Rezeptoren zeichnen sich durch eine stark konservierte dreidimensionale Struktur aus (Fig. 1). Neben den sieben transmembranen Domänen lassen sich die G-Protein-gekoppelten Re­ zeptoren durch den extrazellulären Amino-Terminus, drei extrazelluläre Schlaufen, drei intrazelluläre Schlaufen und den intrazellulären Carboxy- Terminus definieren.The histamine receptors belong to the family of G protein-coupled receptors. G protein-coupled receptors are characterized by a highly conserved three-dimensional structure ( FIG. 1). In addition to the seven transmembrane domains, the G protein-coupled receptors can be defined by the extracellular amino terminus, three extracellular loops, three intracellular loops and the intracellular carboxy terminus.

Durch eine computergestützte Analyse der Hydrophilität und Antigenität der verschiedenen Rezeptordomänen des H1-, H2- und H3-Rezeptors konnte die erste und die zweite, insbesondere die zweite extrazelluläre Schlaufe (siehe Fig. 1, grau umrandet) der drei Histaminrezeptorsubklassen als hochantigen identifiziert werden. Die Peptide wurden entsprechend der Aminosäuresequenz der ersten und zweiten extrazellulären Domäne der Histaminrezeptoren synthetisiert.By means of a computer-aided analysis of the hydrophilicity and antigenicity of the different receptor domains of the H1, H2 and H3 receptor, the first and the second, in particular the second, extracellular loop (see FIG. 1, outlined in gray) of the three histamine receptor subclasses could be identified as highly antigenic. The peptides were synthesized according to the amino acid sequence of the first and second extracellular domains of the histamine receptors.

Die Antigene der vorliegenden Erfindung sind insbesondere solche, in denen das vorstehend unter (1) definierte Polypeptid
The antigens of the present invention are in particular those in which the polypeptide defined under (1) above

  • - ein Polypeptid ist, das insgesamt wenigstens 12 Aminosäurereste, vorzugsweise wenigstens 15 Aminosäurereste, aufweist und/oderIs a polypeptide which has a total of at least 12 amino acid residues, preferably has at least 15 amino acid residues, and / or
  • - eine extrazelluläre Domäne mit wenigstens 8, vorzugsweise wenigstens 10 und besonders bevorzugt wenigstens 12 konsekutive Aminosäurereste der jeweiligen extrazellulären Schleife umfasst.An extracellular domain with at least 8, preferably at least 10 and particularly preferably at least 12 consecutive amino acid residues of the respective extracellular loop.

Zudem wurden optional Aminosäuren der angrenzenden transmembranen Domäne übernommen: Auf diese Weise werden Antikörper mit einer hohen Bindungsaffinität generiert, die zugleich die Bindungsstelle von Histamin blockieren. Es wird angenommen, dass Histamin an eine transmembrane α-helikale Tasche zwischen dem 1. und 2. extrazellulären Loop innerhalb der lipiden Doppelschicht der Zellmembran bindet (schwarzer Rahmen, Fig. 1). Antikörper sind in der Regel hydrophil, d. h., ein Eindringen der Antikörper in die lipide Doppelschicht der Zellmembran ist nur bedingt möglich, sodass es schwierig ist, Antikörper direkt gegen die Histaminbindungsdomäne zu generieren. Es ist daher bevorzugt, dass das Antigen eine transmembrane Domäne aufweist, wobei besonders bevorzugt ist, dass
In addition, amino acids from the adjacent transmembrane domain were optionally adopted: In this way, antibodies with a high binding affinity are generated, which at the same time block the binding site of histamine. It is believed that histamine binds to a transmembrane α-helical pocket between the 1st and 2nd extracellular loop within the lipid bilayer of the cell membrane (black frame, Fig. 1). Antibodies are generally hydrophilic, which means that penetration of the antibodies into the lipid double layer of the cell membrane is only possible to a limited extent, making it difficult to generate antibodies directly against the histamine binding domain. It is therefore preferred that the antigen has a transmembrane domain, with it being particularly preferred that

  • - die transmembrane Domäne wenigstens 2, vorzugsweise wenigstens 3 und besonders bevorzugt wenigstens 4 konsekutive Aminosäurereste der jeweiligen transmembranen Region umfasst,- The transmembrane domain at least 2, preferably at least 3 and particularly preferably at least 4 consecutive amino acid residues of the respective transmembrane region,
  • - die transmembrane Domäne schwach hydrophile Aminosäurereste, die insbesondere ausgewählt sind aus Tyr, Thr, Ser, Trp, His, Gly, Leu, Ile, Asn und Glu, umfasst,- The transmembrane domain weakly hydrophilic amino acid residues, the are particularly selected from Tyr, Thr, Ser, Trp, His, Gly, Leu, Ile, Asn and Glu, includes
  • - die extrazellulären Domäne mit der transmembranen Domäne durch eine direkte Amidbindung oder mittels eines Linkermoleküls, insbesondere eines hydrophilen, flexiblen Linkerpeptids z. B. -(Gly3Ser)n-, wobei n eine ganze Zahl von 1 bis 5 ist, verknüpft ist, und/oder- The extracellular domain with the transmembrane domain by a direct amide bond or by means of a linker molecule, in particular a hydrophilic, flexible linker peptide z. B. - (Gly 3 Ser) n -, where n is an integer from 1 to 5, is linked, and / or
  • - die N-/C-terminale Anordnung der extrazellulären Domäne und der transmembranen Domäne ihrer natürlichen Anordnung entspricht.- The N- / C-terminal arrangement of the extracellular domain and the transmembrane domain corresponds to their natural arrangement.

Die Antigenität eines synthetischen Peptids, das zur Immunisierung einge­ setzt wird, hängt unter anderem von der Hydrophilität der Aminosäuren ab, da hydrophile Aminosäuren eher an der Oberfläche eines Proteins ex­ poniert werden. Da es unser Ziel war, Antikörper gegen die Histaminre­ zeptoren herzustellen, die sowohl den extrazellulären Bereich der Proteine erkennen, als auch die Histaminbindungsstelle blockieren bzw. agonisti­ sche Effekte hervorrufen können, ist besonders bevorzugt, dass das Antigen im carboxyterminalen Bereich, angrenzend an die 4. transmembrane Region der Rezeptoren oder in die 4. transmembrane Region hineinreichend, nur schwach hydrophile Aminosäuren enthält, gefolgt von hydrophilen Aminosäuren der zweiten extrazellulären Schlaufe. Histamin scheint in einer transmembranen "Tasche" zu binden. Einer der essentiellen Aminosäurereste der Histaminbindung ist ein Asparaginsäurerest in der 3. transmembranen Region.The antigenicity of a synthetic peptide that is used for immunization depends, among other things, on the hydrophilicity of the amino acids since hydrophilic amino acids tend to be on the surface of a protein ex be posted. Since it was our goal to have antibodies against the histamine to produce receptors that cover both the extracellular area of proteins recognize, as well as block the histamine binding site or agonisti effects, it is particularly preferred that the Antigen in the carboxy-terminal area, adjacent to the 4th transmembrane region of the receptors or in the 4th transmembrane Sufficient region, contains only weakly hydrophilic amino acids, followed by hydrophilic amino acids of the second extracellular loop. Histamine appears to bind in a transmembrane "pocket". One of essential amino acid residues of histamine binding is a Aspartic acid residue in the 3rd transmembrane region.

Eine Verbesserung der Effekte (inhibitorisch, agonistisch) kann durch eine Verlängerung des carboxyterminalen Bereiches der Peptide erreicht werden (jeweils fünf Aminosäurereste der transmembranen Region an­ hängen).The effects (inhibitory, agonistic) can be improved by a Extension of the carboxy-terminal area of the peptides achieved  five amino acid residues of the transmembrane region hang).

Eine weitere Verbesserung kann erzielt werden, wenn das Antigen ein Polypeptid an dem Terminus der extrazellulären Domäne, das nicht mit der transmembranen Domäne verknüpft ist, mit einem Immunisierungs­ hilfsverbindung verknüpft ist. Hierbei ist besonders bevorzugt, wenn die Immunisierungshilfsverbindung durch eine direkte chemische Bindung oder mittels eines Linkermoleküls, vorzugsweise eines Linkerpeptids (wie das vorstehende zur Verknüpfung der beiden Domänen des Antigens eingesetzte) oder eines einzelnen Aminosäurerests, insbesondere Cystein, mit der transmembranene Domäne verknüpft ist. Geeignete Immunisie­ rungshilfsverbindungen umfassen Hemocyanine von Tieren wie Napfschnecken-Hemocyanin (Keyhole Limpet Hemocyanin - KLH), aus Ascaris extrahierte Proteine (JP-A 16,414/81), Polylysin, Polyglutaminsäure, Lysinglutaminsäure-Copolymere, Liphteria-Toxoid, Tantanus-Toxoid usw., wobei die am meisten bevorzugte Immunisierungshilfsverbindung KLH ist (weil es kein Analogon hierfür in Säugern gibt).A further improvement can be achieved if the antigen is a Polypeptide at the terminus of the extracellular domain that is not associated with the transmembrane domain is linked to an immunization auxiliary connection is linked. It is particularly preferred if the Immunization aid compound through a direct chemical bond or by means of a linker molecule, preferably a linker peptide (such as the above to link the two domains of the antigen used) or a single amino acid residue, especially cysteine, is linked to the transmembrane domain. Appropriate immunization Auxiliary compounds include animal hemocyanins such as Limp hemocyanin (Keyhole Limpet Hemocyanin - KLH), from Ascaris extracted proteins (JP-A 16,414 / 81), polylysine, Polyglutamic acid, lysine-glutamic acid copolymers, liphteria toxoid, Tantanus toxoid, etc., being the most preferred Immunization auxiliary compound KLH is (because there is no analogue for this in Mammals).

Besonders bevorzugte Antigene für die Herstellung von Antikörpern, die spezifisch für ein humanes H1-Rezeptorprotein sind, sind folgenden Antigene:
Cys Leu Leu Met Ser Lys Trp Ser Leu Gly Arg Pro Leu Cys Leu Phe Trp (SEQ ID NO: 4),
Trp Asn His Phe Met Gln Gln Thr Ser Val Arg Arg Glu Asp Lys Cys (SEQ ID NO: 5),
Cys Arg Glu Asp Lys Cys Glu Thr Asp Phe Tyr Asp Val Thr Trp Phe (SEQ ID NO: 6),
wobei die Antigene besonders bevorzugt am terminalen Cys mit KLH ver­ knüpft sind. The following antigens are particularly preferred antigens for the production of antibodies which are specific for a human H1 receptor protein:
Cys Leu Leu Met Ser Lys Trp Ser Leu Gly Arg Pro Leu Cys Leu Phe Trp (SEQ ID NO: 4),
Trp Asn His Phe Met Gln Gln Thr Ser Val Arg Arg Glu Asp Lys Cys (SEQ ID NO: 5),
Cys Arg Glu Asp Lys Cys Glu Thr Asp Phe Tyr Asp Val Thr Trp Phe (SEQ ID NO: 6),
the antigens are particularly preferably linked to KLH at the terminal Cys.

Besonders bevorzugte Antigene für die Herstellung von Antikörpern, die spezifisch für ein humanes H2-Rezeptorprotein sind, sind folgenden Antigene:
Cys Gln Leu Ser Cys Lys Trp Ser Phe Gly Lys Val Phe Cys Asn Ile Tyr Thr (SEQ ID NO: 7),
Asn Ser Arg Asn Glu Thr Ser Lys Gly Asn His Thr Thr Ser Lys Cys (SEQ ID NO: 8),
Cys Val Gln Val Asn Glu Val Tyr Gly Leu Val Asp Gly Leu Val Thr (SEQ ID NO: 9),
wobei die Antigene besonders bevorzugt am terminalen Cys mit KLH ver­ knüpft sind.The following antigens are particularly preferred antigens for the production of antibodies which are specific for a human H2 receptor protein:
Cys Gln Leu Ser Cys Lys Trp Ser Phe Gly Lys Val Phe Cys Asn Ile Tyr Thr (SEQ ID NO: 7),
Asn Ser Arg Asn Glu Thr Ser Lys Gly Asn His Thr Thr Ser Lys Cys (SEQ ID NO: 8),
Cys Val Gln Val Asn Glu Val Tyr Gly Leu Val Asp Gly Leu Val Thr (SEQ ID NO: 9),
the antigens are particularly preferably linked to KLH at the terminal Cys.

Besonders bevorzugte Antigene für die Herstellung von Antikörpern, die spezifisch für ein humanes H3-Rezeptorprotein sind, sind folgende Antigene:
Cys Leu Thr Gly Arg Trp Thr Phe Gly Arg Gly Leu Cys Lys Leu Trp Leu Val (SEQ ID NO: 10),
Ser Trp Glu Tyr Leu Ser Gly Gly Ser Ser Ile Pro Glu Gly His Cys (SEQ ID NO: 11),
Cys Ser Ser Ile Pro Glu Gly His Cys Tyr Ala Glu Phe Phe Tyr Asn (SEQ ID NO: 12),
wobei die Antigene besonders bevorzugt am terminalen Cys mit KLH ver­ knüpft sind.The following antigens are particularly preferred antigens for the production of antibodies which are specific for a human H3 receptor protein:
Cys Leu Thr Gly Arg Trp Thr Phe Gly Arg Gly Leu Cys Lys Leu Trp Leu Val (SEQ ID NO: 10),
Ser Trp Glu Tyr Leu Ser Gly Gly Ser Ser Ile Pro Glu Gly His Cys (SEQ ID NO: 11),
Cys Ser Ser Ile Pro Glu Gly His Cys Tyr Ala Glu Phe Phe Tyr Asn (SEQ ID NO: 12),
the antigens are particularly preferably linked to KLH at the terminal Cys.

Die Herstellung der polyklonalen Antikörper gegen die Histaminrezeptoren H1, H2 und H3 gemäß Ausführungsform (2) der Erfindung erfolgte durch Peptidimmunisierung in geeigneten Tieren (z. B. Meerschweinchen, Kaninchen, Ratte, Maus, Mensch etc.). Die Immunisierungslösung kann neben dem erfindungsgemäßem Antigen weiterhin übliche Immunisierungshilfsstoffe wie Freunds complete und incomplete Adjuvant, Alum Präzipitat, Öl in Wasser Emulsion usw. enthalten. Es können auch mehrere Peptide gleichzeitig zur Immunisierung eingesetzt werden (vorausgesetzt, dass sie aus dem gleichen Rezeptortyp stammen und sich z. B. durch ihre Länge unterscheiden).The production of the polyclonal antibodies against the histamine receptors H1, H2 and H3 according to embodiment (2) of the invention was carried out by Peptide immunization in suitable animals (e.g. guinea pigs, Rabbit, rat, mouse, human etc.). The immunization solution can besides the antigen according to the invention, it is also customary Immunization aids such as Freunds complete and incomplete adjuvant, Contain aluminum precipitate, oil in water emulsion, etc. It can too multiple peptides can be used simultaneously for immunization  (provided that they come from the same type of receptor and themselves z. B. differ by their length).

Zur Herstellung monoklonaler Antikörper gemäß Ausführungsform (2) der Erfindung wurden die Peptide, mit denen erfolgreich polyklonale Antikörper hergestellt worden waren, in einem parallelen Verfahren erneut zur Immunisierung von Tieren (z. B. Mäusen) eingesetzt. Die Milz erfolgreich immunisierter Tiere wird entnommen und monoklonale Antikörper nach dem üblichen Protokoll (Köhler G., Milstein C., Nature (London), 256, S. 495 (1975)) generiert. Die Herstellung monoklonaler Antikörper hat verschiedene Vorteile:
To produce monoclonal antibodies according to embodiment (2) of the invention, the peptides with which polyclonal antibodies had been successfully produced were used again in a parallel process for immunizing animals (e.g. mice). The spleen of successfully immunized animals is removed and monoclonal antibodies are generated according to the usual protocol (Koehler G., Milstein C., Nature (London), 256, p. 495 (1975)). The production of monoclonal antibodies has several advantages:

  • 1. Die Spezifität und das entsprechende Epitop des Antikörpers kann ge­ nau charakterisiert werden.1. The specificity and the corresponding epitope of the antibody can ge to be characterized exactly.
  • 2. Die Antikörper stehen in unbegrenzter Menge zur Verfügung.2. The antibodies are available in unlimited quantities.

Für die pharmakologische Anwendung im Menschen ist jedoch unabdingbar, dass es sich um menschliche bzw. sogenannte "humanisierte" Antikörper handelt. Verfahren zur Herstellung dieser Antikörper sind dem Fachmann geläufig. Die erhaltenen Antikörper zeigen agonistische Eigenschaften, was z. B. durch Veränderung der Genexpression (nachweisbar durch Assays wie RT-PCR (Reverse Transkription und Amplifikation von mRNA zur Quantifizierung der Histaminrezeptor-vermittelten Veränderung der spez. mRNA Konzentration in den Zellkulturen) und Quantifizierung durch HPLC), des cAMP-Gehalts (nachweisbar durch HPLC) und Ca2+-Ausschüttung (nachweisbar durch funktionelle Studien des Ca2+-Metabolismus) verfolgt kann.For pharmacological use in humans, however, it is essential that they are human or so-called "humanized" antibodies. Methods for producing these antibodies are known to the person skilled in the art. The antibodies obtained show agonistic properties, which, for. B. by changing the gene expression (detectable by assays such as RT-PCR (reverse transcription and amplification of mRNA to quantify the histamine receptor-mediated change in the specific mRNA concentration in the cell cultures) and quantification by HPLC), the cAMP content (detectable by HPLC) and Ca 2+ release (demonstrable by functional studies of the Ca 2+ metabolism).

Gemäß Ausführungsform (4) betrifft die vorliegende Erfindung auch phar­ mazeutische Zusammensetzungen. Diese sind insbesondere pharmazeuti­ sche Zusammensetzungen, die zur Vorbeugung vor oder Behandlung von allergischen Reaktionen, chronischen und/oder akuten Entzündungen und/oder anaphylaktischem Schock geeignet ist. Neben den erfindungsgemäßen Antikörpern enthalten diese Zusammensetzungen noch übliche pharmazeutische Zusatzstoffe, Verdünnungsmittel usw.According to embodiment (4), the present invention also relates to phar pharmaceutical compositions. These are in particular pharmaceutical compositions intended for the prevention or treatment of allergic reactions, chronic and / or acute inflammation and / or anaphylactic shock. In addition to the invention  Antibodies still contain these compositions in the usual way pharmaceutical additives, diluents, etc.

Die diagnostischen Zusammensetzungen sind insbesondere zum Nachweis von Histaminrezeptorprotein geeignet.The diagnostic compositions are particularly for detection of histamine receptor protein.

BeispieleExamples Beispiel 1example 1 Herstellung von polyklonalen AntikörpernProduction of polyclonal antibodies

Die Herstellung polyklonaler Antikörper umfasste die folgenden Schritte:
The preparation of polyclonal antibodies involved the following steps:

  • 1. Herstellung der Antigene: Die Peptide mit den SEQ ID NOs: 5, 8 und 11 wurden über die Cysteingruppe am carboxyterminalen Ende an KLH (keyhole limpet hemocyanin) gekoppelt. KLH ist ein relativ großes Protein, das in Säugetierzellen nicht vorkommt, sodass Antikörper, die während der Immunisierung gegen dieses Protein generiert werden, in den immu­ nologischen Untersuchungen von Säugetierzellen oder Gewebe nicht zu unspezifischen Reaktionen führen.1. Preparation of the antigens: The peptides with SEQ ID NOs: 5, 8 and 11 were via the cysteine group at the carboxy terminal end to KLH (keyhole limpet hemocyanin) coupled. KLH is a relatively large protein, that does not occur in mammalian cells, so antibodies that the immunization against this protein are generated in the immu biological studies of mammalian cells or tissues cause unspecific reactions.
  • 2. Immunisierung von Tieren
    je zwei Tiere (im Falle von H1-Rezeptor-Peptid: SEQ ID NO: 5 Meer­ schweinchen;
    H2-Rezeptor-Peptid: SEQ ID NO: 8 Kaninchen;
    H3-Rezeptor-Peptid: SEQ ID NO: 11 Ratten)
    wurden mit dem gemäß 1. hergestellten Antigen immunisiert.    2. Immunization of animals
    two animals each (in the case of H1 receptor peptide: SEQ ID NO: 5 sea pigs;
    H2 receptor peptide: SEQ ID NO: 8 rabbits;
    H3 receptor peptide: SEQ ID NO: 11 rats)
    were immunized with the antigen prepared according to 1.

Als nicht-spezifischer Stimulus wurde Freund Adjuvants (complete Freund Adjuvants: CFA; incomplete Freund Adjuvants: IFA) eingesetzt. Immuni­ sierungsprotokoll:
Freund's adjuvants (complete Freund's adjuvants: CFA; incomplete Freund's adjuvants: IFA) were used as the non-specific stimulus. Immunization protocol:

  • 1. Injektion: 100 µg-1 mg KLH gekoppeltes Peptid + (CFA)
    • 1. Boos nach 3 Wochen: 100 µg-1 mg KLH gekoppeltes Peptid + (IFA)
    • 2. Boost nach 3 Wochen: 100 µg-1 mg KLH gekoppeltes Peptid + (IFA)
    • 3. Boost nach 3 Wochen: 100 µg-1 mg KLH gekoppeltes Peptid + (IFA)
      Entblutung nach 14 Tagen
    1st injection: 100 µg-1 mg KLH coupled peptide + (CFA)
    • 1. Boos after 3 weeks: 100 µg-1 mg KLH coupled peptide + (IFA)
    • 2. Boost after 3 weeks: 100 µg-1 mg KLH coupled peptide + (IFA)
    • 3. Boost after 3 weeks: 100 µg-1 mg KLH coupled peptide + (IFA)
      Bleeding after 14 days

Die Menge an gewonnenem Serum betrug:
H1-Serum: 20 ml
H2-Serum: 200 ml
H3-Serum: 4 mlThe amount of serum obtained was:
H1 serum: 20 ml
H2 serum: 200 ml
H3 serum: 4 ml

Die Spezifität der Seren wurde bereits durch eine Western-Blot-Analyse nachgewiesen.The specificity of the sera has already been determined by Western blot analysis demonstrated.

Beispiel 2Example 2 Herstellung von monoklonalen AntikörpernProduction of monoclonal antibodies

BALB/c-Mäuse werden dreimal immunisiert. Die erste Injektion i. p. bein­ haltet 100 µg synthetisches Peptid-KLH-Konjugat in CFA, die folgenden zwei Boosts werden mit derselben Antigendosis, jedoch in IFA, in Interval­ len von drei Wochen verabreicht. Drei Tage vor der Zellfusion wird den Mäusen 10 µg Peptid-KLH-Konjugat in Kochsalzlösung i. v. injiziert. Am Tag vor der Zellfusion werden SP2/0-Ag14-Maus-Myelompartnerzellen im Verhältnis 1 : 5 subkultiviert, und Mikrotiterplatten mit 96 Vertiefungen werden mit 100 µl/Vertiefung Zellaspirat aus der Bauchhöhle von BALB/c- Mäusen als Nährstoff vorbereitet.BALB / c mice are immunized three times. The first injection i. p. leg holds 100 µg synthetic peptide-KLH conjugate in CFA, the following two boosts are given at the same antigen dose, but in IFA, at intervals len of three weeks administered. Three days before cell fusion Mice 10 µg peptide-KLH conjugate in saline i. v. injected. At the Day before cell fusion, SP2 / 0-Ag14 mouse myeloma partner cells are in Ratio 1: 5 subcultured, and 96-well microtiter plates with 100 µl / well cell aspirate from the abdominal cavity of BALB / c- Prepared mice as a nutrient.

Milzzellen werden von immunisierten Mäusen durch mechanische Zerklei­ nerung gewonnen, und in einigen Experimenten werden potentiell kreuz­ reaktive Vorläuferzellen durch Panning entfernt (auf einer mit Peptid-KLH- Konjugat bedeckten Polystyroloberfläche, wobei das Peptid-KLH-Konjugat verschieden ist von dem, welches zur Immunisierung der jeweiligen Maus benutzt wurde). SP2/0-Zellen und isolierte Maus-Milzzellen werden drei­ mal in serumfreiem RPMI 1640 gewaschen, im Verhältnis 1 : 1 gemischt, und die Zellfusion wird mit 50% PEG-Lösung (Habri-Mase, SIGMA) durchgeführt. Die Zellen werden in RPMI/20% FCS ausgestrichen und vom nächsten Tag an mit einem HAT-haltigen Selektivmedium ernährt. Spleen cells are derived from immunized mice by mechanical cutting won, and in some experiments potentially cross reactive progenitor cells removed by panning (on a peptide-KLH- Conjugate covered polystyrene surface, the peptide-KLH conjugate is different from that which is used to immunize the respective mouse was used). SP2 / 0 cells and isolated mouse spleen cells become three times washed in serum-free RPMI 1640, mixed in a ratio of 1: 1, and the cell fusion is with 50% PEG solution (Habri-Mase, SIGMA) carried out. The cells are streaked in RPMI / 20% FCS and fed the next day with a HAT-containing selective medium.  

Die Überstände von einzelnen Vertiefungen werden mittels ELISA auf Anti­ körper getestet, die sowohl gegen das immunisierende Konjugat als auch ein irrelevantes Peptid-KLH-Konjugat reaktiv sind. Zellen, die Antikörper produzieren, die reaktiv sind gegen ein spezifisches Histaminrezeptorpep­ tid-Konjugat, jedoch nicht gegen andere Konjugate, werden im­ munocytochemisch weiter getestet auf die Erkennung von intaktem nativen Antigen.The supernatants from individual wells are checked for anti by ELISA body tested both against the immunizing conjugate as well an irrelevant peptide-KLH conjugate is reactive. Cells that have antibodies produce that are reactive to a specific histamine receptor pep tid conjugate, but not against other conjugates, are used in the Munocytochemically further tested for the detection of intact native antigen.

Ausgesuchte Zellen werden zweimal mit der limitierenden Verdünnungs­ technik kloniert. Falls notwendig werden mit einer ähnlichen Methode, wie oben beschrieben, außerdem Ratte/Maus-Hybridomas erzeugt. Selected cells are duplicated with the limiting dilution technology cloned. If necessary, use a similar method as described above, also generated rat / mouse hybridomas.  

SEQUENZPROTOKOLL SEQUENCE LISTING

Claims (22)

1. Antikörper, der spezifisch für ein Histaminrezeptorprotein (HRP), insbesondere für ein humanes Histaminrezeptorprotein (h-HRP) ist, der die Histaminbindung an den Rezeptor inhibiert, und der erhältlich ist durch Immunisierung mit einem Antigen, das ausgewählt ist aus einem Polypeptid, das
  • a) eine extrazelluläre Domäne mit einer Polypeptidsequenz aus der ersten extrazellulären Schleife des HRP und optional eine trans­ membrane Domäne mit einer Polypeptidsequenz aus dem N- Terminus der dritten transmembranen Region des HRP umfasst,
  • b) eine extrazelluläre Domäne mit einer Polypeptidsequenz aus der zweiten extrazellulären Schleife des HRP und optional eine transmembrane Domäne mit einer Polypeptidsequenz aus dem C-Terminus der vierten transmembranen Region des HRP um­ fasst und
  • c) eine extrazelluläre Domäne mit einer Polypeptidsequenz aus der zweiten extrazellulären Schleife des HRP und optional eine transmembrane Domäne mit einer Polypeptidsequenz aus dem N-Terminus der fünften transmembranen Region des HRP um­ fasst.
1. antibody which is specific for a histamine receptor protein (HRP), in particular for a human histamine receptor protein (h-HRP), which inhibits histamine binding to the receptor and which is obtainable by immunization with an antigen selected from a polypeptide, the
  • a) comprises an extracellular domain with a polypeptide sequence from the first extracellular loop of the HRP and optionally a trans membrane domain with a polypeptide sequence from the N-terminus of the third transmembrane region of the HRP,
  • b) an extracellular domain with a polypeptide sequence from the second extracellular loop of the HRP and optionally a transmembrane domain with a polypeptide sequence from the C-terminus of the fourth transmembrane region of the HRP and
  • c) an extracellular domain with a polypeptide sequence from the second extracellular loop of the HRP and optionally a transmembrane domain with a polypeptide sequence from the N-terminus of the fifth transmembrane region of the HRP.
2. Antikörper nach Anspruch 1, wobei das HRP ein H1-, H2- oder H3-Re­ zeptorprotein, insbesondere eines der in SEQ ID Nos: 1 bis 3 gezeigten humanen H1-, H2- oder H3-Rezeptorproteine ist.2. Antibody according to claim 1, wherein the HRP is a H1, H2 or H3 Re zeptor protein, in particular one of those shown in SEQ ID Nos: 1 to 3 human H1, H2 or H3 receptor proteins. 3. Antikörper nach Anspruch 1 oder 2, der die durch Histamin induzierten Effekte inhibiert und der ein monoklonaler oder polyklonaler Antikörper ist.3. Antibody according to claim 1 or 2, which are those induced by histamine Effects inhibited and which is a monoclonal or polyclonal antibody. 4. Antikörper nach Anspruch 1, wobei
das Polypeptid insgesamt wenigstens 12, vorzugsweise wenigstens 15, jedoch maximal 20, Aminosäurereste aufweist,
die extrazellulären Domäne wenigstens 8, vorzugsweise wenigstens 10 und besonders bevorzugt wenigstens 12 konsekutive Aminosäurereste der jeweiligen extrazellulären Schleife umfasst,
das Polypeptid eine transmembrane Domäne umfasst, die insbesondere wenigstens 2, vorzugsweise wenigstens 3 und besonders bevorzugt wenigstens 4 konsekutive Aminosäurereste der jeweiligen trans­ membranen Region umfasst,
die transmembrane Domäne schwach hydrophile Aminosäurereste, die insbesondere ausgewählt sind aus Tyr, Thr, Ser, Trp, His, Gly, Leu, Ile, Asn und Glu, umfasst,
die extrazellulären Domäne mit der transmembranen Domäne durch eine direkte Amidbindung oder mittels eines Linkermoleküls, insbesondere eines hydrophilen, flexiblen Linkerpeptids, verknüpft ist, und/oder
die N-/C-terminale Anordnung der extrazellulären Domäne und der transmembranen Domäne ihrer natürlichen Anordnung entspricht.4. Antibody according to claim 1, wherein
the polypeptide has a total of at least 12, preferably at least 15, but at most 20, amino acid residues,
the extracellular domain comprises at least 8, preferably at least 10 and particularly preferably at least 12 consecutive amino acid residues of the respective extracellular loop,
the polypeptide comprises a transmembrane domain which comprises in particular at least 2, preferably at least 3 and particularly preferably at least 4 consecutive amino acid residues of the respective transmembrane region,
the transmembrane domain comprises weakly hydrophilic amino acid residues, which are selected in particular from Tyr, Thr, Ser, Trp, His, Gly, Leu, Ile, Asn and Glu,
the extracellular domain is linked to the transmembrane domain by a direct amide bond or by means of a linker molecule, in particular a hydrophilic, flexible linker peptide, and / or
the N- / C-terminal arrangement of the extracellular domain and the transmembrane domain corresponds to their natural arrangement. 5. Antikörper nach Anspruch 4, wobei das Polypeptid mit einem Immunisierungshilfsverbindung verknüpft ist und insbesondere mit einem freien Terminus der extrazellulären Domäne verknüpft ist.5. Antibody according to claim 4, wherein the polypeptide with a Immunization aid compound is linked and in particular with a free term of the extracellular domain is linked. 6. Antikörper nach Anspruch 5, wobei die Immunisierungshilfsverbindung durch eine direkte chemische Bindung oder mittels eines Linkermoleküls, vorzugsweise eines Linkerpeptids oder eines Aminosäurerests, insbeson­ dere Cystein, mit dem Polypeptid, insbesondere mit der transmembranen Domäne, verknüpft ist und/oder die Immunisierungshilfsverbindung insbesondere Napfschnecken-Hemocyanin ist.6. The antibody of claim 5, wherein the immunization aid compound by a direct chemical bond or by means of a linker molecule, preferably a linker peptide or an amino acid residue, in particular their cysteine, with the polypeptide, especially with the transmembrane Domain, is linked and / or the immunization auxiliary compound limpet hemocyanin in particular. 7. Antikörper nach einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 6, der spe­ zifisch für ein humanes H-1-Rezeptorprotein ist und insbesondere durch Immunisierung mit einem der folgenden Antigene:
Cys Leu Leu Met Ser Lys Trp Ser Leu Gly Arg Pro Leu Cys Leu Phe Trp (SEQ ID NO: 4),
Trp Asn His Phe Met Gln Gln Thr Ser Val Arg Arg Glu Asp Lys Cys (SEQ ID NO: 5),
Cys Arg Glu Asp Lys Cys Glu Thr Asp Phe Tyr Asp Val Thr Trp Phe (SEQ ID NO: 6),
wobei die Antigene besonders bevorzugt am terminalen Cys mit KLH ver­ knüpft sind, erhältlich ist.7. Antibody according to one or more of claims 1 to 6, which is specific for a human H-1 receptor protein and in particular by immunization with one of the following antigens:
Cys Leu Leu Met Ser Lys Trp Ser Leu Gly Arg Pro Leu Cys Leu Phe Trp (SEQ ID NO: 4),
Trp Asn His Phe Met Gln Gln Thr Ser Val Arg Arg Glu Asp Lys Cys (SEQ ID NO: 5),
Cys Arg Glu Asp Lys Cys Glu Thr Asp Phe Tyr Asp Val Thr Trp Phe (SEQ ID NO: 6),
the antigens are particularly preferably linked to KLH at the terminal Cys. 8. Antikörper nach Anspruch 7, der durch Immunisierung mit einem Anti­ gen(SEQ ID NO: 5)-KLH erhältlich ist und insbesondere ein monoklonaler Antikörper ist.8. Antibody according to claim 7, which by immunization with an anti gene (SEQ ID NO: 5) -KLH is available and in particular a monoclonal Is antibody. 9. Antikörper nach einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 6, der spe­ zifisch für ein humanes H-2-Rezeptorprotein ist und insbesondere durch Immunisierung mit einem der folgenden Antigene:
Cys Gln Leu Ser Cys Lys Trp Ser Phe Gly Lys Val Phe Cys Asn Ile Tyr Thr (SEQ ID NO: 7),
Asn Ser Arg Asn Glu Thr Ser Lys Gly Asn His Thr Thr Ser Lys Cys (SEQ ID NO: 8),
Cys Val Gln Val Asn Glu Val Tyr Gly Leu Val Asp Gly Leu Val Thr (SEQ ID NO: 9),
wobei die Antigene besonders bevorzugt am terminalen Cys mit KLH ver­ knüpft sind, erhältlich ist.9. Antibody according to one or more of claims 1 to 6, which is specific for a human H-2 receptor protein and in particular by immunization with one of the following antigens:
Cys Gln Leu Ser Cys Lys Trp Ser Phe Gly Lys Val Phe Cys Asn Ile Tyr Thr (SEQ ID NO: 7),
Asn Ser Arg Asn Glu Thr Ser Lys Gly Asn His Thr Thr Ser Lys Cys (SEQ ID NO: 8),
Cys Val Gln Val Asn Glu Val Tyr Gly Leu Val Asp Gly Leu Val Thr (SEQ ID NO: 9),
the antigens are particularly preferably linked to KLH at the terminal Cys. 10. Antikörper nach Anspruch 9, der durch Immunisierung mit einem Anti­ gen(SEQ ID NO: 8)-KLH erhältlich ist und insbesondere ein monoklonaler Antikörper ist.10. Antibody according to claim 9, which by immunization with an anti gene (SEQ ID NO: 8) -KLH is available and in particular a monoclonal Is antibody. 11. Antikörper nach einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 6, der spe­ zifisch für ein humanes H-3-Rezeptorprotein ist und insbesondere durch Immunisierung mit einem der folgenden Antigene:
Cys Leu Thr Gly Arg Trp Thr Phe Gly Arg Gly Leu Cys Lys Leu Trp Leu Val (SEQ ID NO: 10),
Ser Trp Glu Tyr Leu Ser Gly Gly Ser Ser Ile Pro Glu Gly His Cys (SEQ ID NO: 11),
Cys Ser Ser Ile Pro Glu Gly His Cys Tyr Ala Glu Phe Phe Tyr Asn (SEQ ID NO: 12),
wobei die Antigene besonders bevorzugt am terminalen Cys mit KLH ver­ knüpft sind, erhältlich ist.11. Antibody according to one or more of claims 1 to 6, which is specific for a human H-3 receptor protein and in particular by immunization with one of the following antigens:
Cys Leu Thr Gly Arg Trp Thr Phe Gly Arg Gly Leu Cys Lys Leu Trp Leu Val (SEQ ID NO: 10),
Ser Trp Glu Tyr Leu Ser Gly Gly Ser Ser Ile Pro Glu Gly His Cys (SEQ ID NO: 11),
Cys Ser Ser Ile Pro Glu Gly His Cys Tyr Ala Glu Phe Phe Tyr Asn (SEQ ID NO: 12),
the antigens are particularly preferably linked to KLH at the terminal Cys. 12. Antikörper nach Anspruch 11, der durch Immunisierung mit einem Antigen(SEQ ID NO: 11)-KLH erhältlich ist und insbesondere ein monoklonaler Antikörper ist.12. Antibody according to claim 11, which by immunization with a Antigen (SEQ ID NO: 11) -KLH is available and especially one is a monoclonal antibody. 13. Verfahren zur Herstellung eines Antikörpers nach einem oder mehre­ ren der Ansprüche 1 bis 12, umfassend
  • a) zur Herstellung polyklonaler Antikörper, die Immunisierung von ge­ eigneten Tieren mit den in Ansprüchen 1 bis 12 definierten Antigenen und Isolation der polyklonalen Antikörper aus dem Serum der Tiere;
  • b) zur Herstellung monoklonaler Antikörper, das Verschmelzen von Milz­ zellen der unter (a) immunisierten Tiere mit geeigneten vermehrungsfähi­ gen Zelllinien (?) unter Erhalt von Hybridomzellen und Kultivieren der er­ haltenen Hybridomzellen.
13. A method for producing an antibody according to one or more of claims 1 to 12, comprising
  • a) for the production of polyclonal antibodies, the immunization of ge suitable animals with the antigens defined in claims 1 to 12 and isolation of the polyclonal antibodies from the serum of the animals;
  • b) for the production of monoclonal antibodies, the fusion of spleen cells of the animals immunized under (a) with suitable viable cell lines (?) while maintaining hybridoma cells and cultivating the hybridoma cells obtained.
14. Hybridomzellen, erhältlich durch das Verfahren gemäß Anspruch 14.14. Hybridoma cells obtainable by the method according to claim 14. 15. Pharmazeutische oder diagnostische Zusammensetzung, die einen oder mehrere Antikörper nach einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 12 enthält.15. Pharmaceutical or diagnostic composition that a or more antibodies according to one or more of claims 1 to 12 contains. 16. Pharmazeutische Zusammensetzungen nach Anspruch 15, die zur Vorbeugung vor oder Behandlung von allergischen Reaktionen, chroni­ schen und/oder akuten Entzündungen und/oder anaphylaktischem Schock geeignet ist. 16. Pharmaceutical compositions according to claim 15, which for Prevention or treatment of allergic reactions, chronic and / or acute inflammation and / or anaphylactic shock suitable is.   17. Diagnostische Zusammensetzung nach Anspruch 15, die zum Nach­ weis von Histaminrezeptorproteinen geeignet ist.17. Diagnostic composition according to claim 15, which after of histamine receptor proteins. 18. Verwendung eines Antikörpers nach einem oder mehreren der Ansprü­ che 1 bis 12 zur Vorbeugung vor oder Behandlung von allergischen Reak­ tionen, chronischen und/oder akuten Entzündungen und/oder anaphylak­ tischem Schock.18. Use of an antibody according to one or more of the claims che 1 to 12 for the prevention or treatment of allergic reak tion, chronic and / or acute inflammation and / or anaphylactic table shock. 19. Verfahren zur Vorbeugung vor oder Behandlung von allergischen Re­ aktionen, chronischen und/oder akuten Entzündungen und/oder anaphy­ laktischem Schock bei Mensch und Tier, umfassend Verabreichen eines oder mehrerer der Antikörper nach einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 12.19. Procedure for the Prevention or Treatment of Allergic Re actions, chronic and / or acute inflammation and / or anaphy lactic shock in humans and animals, comprising administering one or more of the antibodies according to one or more of claims 1 until 12. 20. Verwendung eines Antikörpers nach einem oder mehreren der Ansprü­ che 1 bis 12 zum Nachweis von Histaminrezeptorproteinen.20. Use of an antibody according to one or more of the claims che 1 to 12 for the detection of histamine receptor proteins. 21. Assayverfahren zum Nachweis von Histaminrezeptorprotein, umfas­ send ein Immunoassay mit einem oder mehreren Antikörper(n) nach einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 12.21. Assay method for the detection of histamine receptor protein send an immunoassay with one or more antibodies one or more of claims 1 to 12. 22. Antigen wie in einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 12 definiert.22. Antigen as defined in one or more of claims 1 to 12.
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