DE10118706A1 - New nucleic acid encoding mutant factor 7 activating protease, useful for diagnosis, treatment and prevention of coagulation disorders, also related protein and antibodies - Google Patents

New nucleic acid encoding mutant factor 7 activating protease, useful for diagnosis, treatment and prevention of coagulation disorders, also related protein and antibodies

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Abstract

Mutant (A) of the DNA sequence, encoding the protease (FSAP) that activates blood coagulation factor 7 (F7) and single-chain plasminogen activator, has at least one of the base changes G to C at nucleotide (nt) 1177 and G to A at nt 1601. Independent claims are also included for the following: (1) mutant FSAP having at least one of the amino acid exchanges Glu393Gln and/or Gly534Glu; (2) identifying (M1) subjects with genetically related hetero- or homo-zygotic expression of the FSAP mutant by detecting the mutation in genomic DNA or derived mRNA; (3) mono- or poly-clonal antibodies (Ab) directed against FSAP, its proenzyme, cleavage products or mutants; (4) detecting (M2) FSAP, its proenzyme, cleavage products or mutants using Ab; (5) test system for methods (M1) and (M2); (6) preparing (A); (7) purifying, detecting and/or determining FSAP or its proenzyme, using monoclonal Ab or its Fab or F(ab')2 fragments; and (8) detecting (M3) antibodies to FSAP and/or its mutants with one or more amino acid changes.

Description

Die Erfindung betrifft ein diagnostisches Verfahren zum immunhistochemischen Nachweis der den Blutgerinnungsfaktor VII aktivierenden Protease mit Hilfe von markierten Antikörpern oder deren Fragmenten.The invention relates to a diagnostic method for immunohistochemical Detection of the protease activating the blood coagulation factor VII with the help of labeled antibodies or their fragments.

Aus der deutschen Patentanmeldung 199 03 693.4 ist eine aus dem Blutplasma isolierte Protease bekannt, die den Blutgerinnungsfaktor VII aktivieren kann. Auch ein Verfahren zu ihrer Gewinnung, zu ihrem Nachweis und zu ihrer Inaktivierung sowie Arzneizubereitungen, die diese Protease enthalten, sind dort bereits beschrieben. Entsprechend ihren Eigenschaften wird diese Protease als Faktor Sieben Aktivierende Protease (= FSAP) bezeichnet. In der deutschen Patentanmeldung 199 03 693.4 wird außerdem berichtet, dass die FSAP eine Plasminogen-Aktivatoren aktivierende und/oder verstärkende Wirkung aufweist, die durch die Aktivierung der Einketten-Urokinase (scu PA, single chain urokinase plasminogen activator) oder der Einketten tPA (sctPA, single chain tissue plasminogen activator) gemessen wird.From German patent application 199 03 693.4, one is from blood plasma isolated protease known that can activate blood coagulation factor VII. Also a process for their extraction, their detection and their inactivation as well as pharmaceutical preparations that contain this protease are already there described. According to its properties, this protease is used as a factor Seven activating protease (= FSAP) designated. In the German Patent application 199 03 693.4 is also reported that the FSAP a Plasminogen activators has activating and / or strengthening effect by activating the single chain urokinase (scu PA, single chain urokinase plasminogen activator) or the single-chain tPA (sctPA, single chain tissue plasminogen activator) is measured.

In der deutschen Patentanmeldung 199 03 693.4 sind auch bereits Verfahren und Testsysteme zum qualitativen und quantitativen Nachweis von FSAP beschrieben, die auf einer Messung, der die Blutgerinnungszeiten verkürzenden Wirkung und der Plasminogen-Akivatoren aktivierenden Wirkungen von FSAP beruhen. Derartige Testsysteme erlauben auch die Messung von FSAP in komplexen Proteinlösungen wie Plasma, wie es insbesondere in der deutschen Patentanmeldung 199 26 531.3 beschrieben ist.The German patent application 199 03 693.4 also includes processes and Test systems for the qualitative and quantitative detection of FSAP described, the on a measurement, the effect of shortening the blood clotting times and the Plasminogen activators are based on the activating effects of FSAP. such  Test systems also allow the measurement of FSAP in complex protein solutions like plasma, as is particularly the case in German patent application 199 26 531.3 is described.

In den vorstehend genannten Patentanmeldungen sind auch Testsysteme zur qualitativen und quantitativen Bestimmung sowohl des FSAP-Antigengehalts als auch zur Bestimmung von dessen Aktivität beschrieben. Diese Testsysteme beruhen darauf, dass FSAP durch spezifische monoklonale Antikörper gebunden und/oder detektiert wird, wie es insbesondere in der deutschen Patentanmeldung 100 36 641.4 genauer ausgeführt ist. Dabei haben sich zwei monoklonale Antikörper als besonders effektiv und geeignet erwiesen, die von den Hybridomazelllinien DSM ACC 2453 und DSM ACC 2454 gebildet werden.In the patent applications mentioned above there are also test systems for qualitative and quantitative determination of both the FSAP antigen content and also described for determining its activity. These test systems are based on FSAP being bound by specific monoclonal antibodies and / or is detected, as is particularly the case in the German patent application 100 36 641.4 is executed in more detail. There are two monoclonal Antibodies proven to be particularly effective and suitable by those Hybridoma cell lines DSM ACC 2453 and DSM ACC 2454 are formed.

Es wurde nun ein diagnostisches Verfahren zum immunhistochemischen Nachweis der den Blutgerinnungsfaktor VII aktivierenden Protease, ihres Proenzyms oder ihrer Mutanten oder Spaltstücke gefunden, bei dem man auf eine Gewebeprobe einen gegen die Protease gerichteten markierten, monoklonalen oder polyklonalen Antikörper oder eines seiner Fragmente einwirken lässt, den nicht gebundenen Antikörper oder seine Fragmente auswäscht und das von dem gebundenen Antikörper oder einem seiner Fragmente ausgesendete Signal bestimmt.It has now become a diagnostic method for immunohistochemical detection the protease activating blood coagulation factor VII, its proenzyme or of their mutants or cleavage fragments, where one looks at a tissue sample a labeled, monoclonal or polyclonal directed against the protease Antibody or one of its fragments can act, the unbound Washed out antibody or its fragments and that of the bound Antibody or one of its fragments signal is determined.

Das Verfahren kann auch so durchgeführt werden, dass man auf die Gewebeprobe einen gegen die Protease, ihr Proenzym oder seine Mutanten oder Spaltstücke gerichteten unmarkierten monoklonalen oder polyklonalen Antikörper oder eines seiner Fragmente einwirken lässt, den nicht gebundenen Antikörper oder seine Fragmente auswäscht, dann einen markierten anti-Antikörper auf das Gewebe einwirken lässt und nach Auswaschen des nicht gebundenen, markierten anti- Antikörpers das von dem gebundenen anti-Antikörper oder seinen Fragmenten ausgesendete Signal bestimmt. The procedure can also be performed by looking at the tissue sample one against the protease, its proenzyme or its mutants or split pieces directed unlabelled monoclonal or polyclonal antibody or one of its fragments, the unbound antibody or its Fragments washed out, then a labeled anti-antibody on the tissue can act and after washing the unbound, labeled anti Antibody from the bound anti-antibody or its fragments emitted signal determined.  

Es wurde außerdem gefunden, dass gegen FSAP gerichtete monoklonale oder polyklonale Antikörper, wenn sie mit chromophoren oder lumineszierenden Gruppen markiert sind, hervorragend zum Nachweis von FSAP in Gewebeschnitten humanen Ursprungs geeignet sind. Für diesen Nachweis eignen sich polyklonale Antikörper gegen FSAP, die durch Immunisierung von Kaninchen, Schafen, Ziegen oder anderen Säugetieren gewonnen werden, ebenso wie monoklonale Antikörper. Besonders gut geeignet zum histologischen, spezifischen Nachweis von FSAP, die sowohl in der aktivierten Form, als auch in der Proenzymform oder als Spaltstück vorliegen kann, sind die monoklonalen Antikörper der Hybridomazelllinien DSM ACC 2453 und DSM ACC 2454. Auch Komplexe von aktivierter FSAP mit Inhibitoren, wie Antiplasmin, können so detektiert werden. Hierfür geeignet sind alle gängigen histologischen Nachweisverfahren wie die Licht-, Fluoreszenz- und Elektronenmikroskopie.It was also found to be monoclonal or anti-FSAP polyclonal antibodies when used with chromophoric or luminescent Groups are marked, excellent for the detection of FSAP in tissue sections are of human origin. Polyclonal are suitable for this detection Antibodies against FSAP by immunizing rabbits, sheep, goats or other mammals, as well as monoclonal antibodies. Particularly suitable for histological, specific detection of FSAP, the both in the activated form, as well as in the proenzyme form or as a split piece may be present are the monoclonal antibodies of the hybridoma cell lines DSM ACC 2453 and DSM ACC 2454. Also complexes with activated FSAP Inhibitors such as antiplasmin can be detected in this way. All are suitable for this common histological detection methods such as light, fluorescence and Electron microscopy.

Zum Nachweis von FSAP in den vorstehend genannten Verfahren eignen sich sowohl die vollständigen polyklonalen und monoklonalen Antikörper als auch deren Fragmente wie F(ab)2 oder F(ab)-Fragmente, sofern sie mit einer detektierbaren Gruppe markiert sind. Dabei können die vorstehend genannten Antikörper oder ihre Fragmente allein oder als Mischung angewendet werden. Das ist besonders dann empfehlenswert, falls eines der erkannten Epitope verdeckt ist. Beispielsweise kann eine Proteindomäne durch Zellassoziation für einen Antikörper nicht zugänglich sein, wird jedoch durch einen anderen Antikörper mit der Spezifität für eine andere FSAP-Region gebunden. Auch Antikörper, die gegen die humane FSAP, deren Wildtyp und/oder gegen deren Mutanten gerichtet sind und die in der deutschen Patentanmeldung 100 52 319.6 näher beschrieben sind, können für den Nachweis von FSAP in Gewebeschnitten humanen Ursprungs eingesetzt werden.Both the complete polyclonal and monoclonal antibodies and their fragments such as F (ab) 2 or F (ab) fragments are suitable for the detection of FSAP in the abovementioned methods, provided that they are labeled with a detectable group. The abovementioned antibodies or their fragments can be used alone or as a mixture. This is particularly recommended if one of the recognized epitopes is covered. For example, a protein domain may not be accessible to an antibody by cell association, but will be bound by another antibody with specificity for a different FSAP region. Antibodies which are directed against human FSAP, its wild type and / or against its mutants and which are described in more detail in German patent application 100 52 319.6 can also be used for the detection of FSAP in tissue sections of human origin.

Die bisher gewonnenen Erkenntnisse über den immunhistochemischen Nachweis von FSAP lassen sich wie folgt zusammenfassen:
The knowledge gained so far about the immunohistochemical detection of FSAP can be summarized as follows:

  • - FSAP wird in fast allen der bisher untersuchten humanen Gewebe nachgewiesen;- FSAP is found in almost all of the human tissues examined to date detected;
  • - Endokrin-aktive Zellen wie die Leydig'schen Zwischenzellen oder die endokrin-aktiven Zellen der Langerhans'schen Inseln der Pankreas lassen sich mit Antikörpern, die chromophore Gruppen tragen, sehr stark intra­ zytoplasmatisch anfärben;- Endocrine-active cells such as Leydig's cells or the endocrine-active cells of the islets of Langerhans in the pancreas very intra with antibodies that carry chromophore groups stain cytoplasmic;
  • - Epithelien und Endothelien zeigen entsprechend ihrer Lokalisation eine mehr oder weniger starke intra-zytoplasmatische Immunreaktion mit Antikörpern gegen FSAP;- Epithelia and endothelia show one more depending on their location or less intra-cytoplasmic immune response with antibodies against FSAP;
  • - Ganglienzellen und Dendriten der Großhirnrinde zeigen eine hohe Konzentration von FSAP, was durch eine starke immunhistologische Farbreaktion mit chromophoren Antikörpern nachgewiesen wird;- Ganglion cells and cerebral cortex dendrites show high Concentration of FSAP, indicated by a strong immunohistological Color reaction with chromophoric antibodies is detected;
  • - Plasmazellen zeigen eine intensive intra-zytoplasmatische Verfärbung mit chromophoren Antikörpern;- Plasma cells show an intense intra-cytoplasmic staining chromophoric antibodies;
  • - mesenchymale Stromazellen zeigen in komplexen Geweben keine oder nur eine schwache Farbreaktion für FSAP.- Mesenchymal stromal cells show no or only in complex tissues a weak color reaction for FSAP.

FSAP ist somit ein Protein, das als ein normaler Zellbestandteil anzusehen ist. Bislang wurde FSAP sowohl intra- als auch extrazellulär lokalisiert gefunden, wobei das erstere Kompartiment deutlich stärker anfärbbar ist. Durch die erfindungsgemäße Detektion von FSAP mit den genannten Antikörpern oder ihren Fragmenten können folgende pathologische Vorgänge erkannt werden:
FSAP is therefore a protein that can be regarded as a normal cell component. So far, FSAP has been found to be localized both intracellularly and extracellularly, although the former compartment can be stained much more strongly. The detection of FSAP according to the invention with the antibodies mentioned or their fragments enables the following pathological processes to be recognized:

  • - Endokrin-aktive Tumore und neuro-endokrine Tumore;- endocrine-active tumors and neuro-endocrine tumors;
  • - angiogene Endothelien und Endothelien des Kapillarendothels; sowie - angiogenic endothelia and endothelia of the capillary endothelium; such as  
  • - angiogenaktive Tumore wie Gliome und Glioblastome, aber auch beispielsweise Gefäßtumore wie das Hämangioendothelium oder - perizyotom und Angiosarkom;- Angiogenic tumors such as gliomas and glioblastomas, but also for example vascular tumors such as the hemangioendothelium or pericyotoma and angiosarcoma;
  • - Wundheilungsreaktionen, Granulationsgewebe und Kollagenosen;- wound healing reactions, granulation tissue and collagenosis;
  • - arteriosklerotische, (mikro)thrombosierte und nekrotisierende Areale;- arteriosclerotic, (micro) thrombosed and necrotizing areas;
  • - neurodegenerative Erkrankungen, wie Alzheimer'sche Krankheit, Morbus Parkinson aber auch spongiforme Enzephalitiden, beispielsweise ausgelöst durch Prionenproteine;- Neurodegenerative diseases, such as Alzheimer's disease, disease Parkinson's but also spongiform encephalitis, for example triggered through prion proteins;
  • - Gammopathien und Myelome.- gammopathies and myelomas.

Für den Nachweis der FSAP verwendet man vorzugsweise monoklonale Antikörper der Hybridomazelllinien DSM ACC 2453 oder DSM ACC 2454.Monoclonal antibodies are preferably used for the detection of FSAP the hybridoma cell lines DSM ACC 2453 or DSM ACC 2454.

Das erfindungsgemäße diagnostische Verfahren wird durch das nachfolgende Beispiel näher erläutert:
Zur Untersuchung der immunhistochemischen Reaktivität der für FSAP spezifischen monoklonalen Antikörper der Hybridomazelllinien DSM ACC 2453 und DSM ACC 2454 wurden aus adultem humanem Gewebe und malignen urologischen Tumoren 10 µm dicke Paraffinschnitte mit anschließender Endparaffinierung hergestellt, die im Zitratpuffer für 3 mal 5 Minuten in der Mikrowelle behandelt wurden. Auf diese Schnitte ließ man zunächst für 30 Minuten einen unmarkierten Antikörper der oben genannten Hybridomazelllinien einwirken. Nach Auswaschen des Gewebeschnittes ließ man auf das Gewebe einen markierten Anti-Maus-Detektionsantikörper für ebenfalls 30 Minuten einwirken und machte dann den gebundenen FSAP-Antikörper durch Bildung des APAAP- Komplexes (Alkalische Phosphatase-Anti-Alkalische-Phosphatase-Komplex) und durch Färbung mit Chromogen und Gegenfärbung mit Hämalaun sichtbar.The diagnostic method according to the invention is explained in more detail by the following example:
In order to investigate the immunohistochemical reactivity of the monoclonal antibodies of the hybridoma cell lines DSM ACC 2453 and DSM ACC 2454 specific for FSAP, 10 µm thick paraffin sections with subsequent final waxing were made from adult human tissue and malignant urological tumors, which were treated in the citrate buffer for 3 times 5 minutes in the microwave were. An unlabeled antibody from the above-mentioned hybridoma cell lines was first allowed to act on these sections for 30 minutes. After the tissue section had been washed out, a labeled anti-mouse detection antibody was allowed to act on the tissue for likewise 30 minutes and then the bound FSAP antibody was made by forming the APAAP complex (alkaline phosphatase-anti-alkaline phosphatase complex) and by staining with chromogen and counter staining with haemum visible.

Als negative Kontrolle wurde in jedem Gewebe separat eine Inkubation mit dem Detektionsantikörper - ohne vorherige Inkubation mit dem FSAP-Antikörper - durchgeführt, um potentielle unspezifische Reaktionen des Detektors sichtbar zu machen. Außerdem wurde als Positivkontrolle ein Antikörper gegen α-Keratin mitgeführt.As a negative control, an incubation with the Detection antibody - without previous incubation with the FSAP antibody - performed to visibly identify potential non-specific reactions of the detector do. In addition, an antibody against α-keratin was used as a positive control carried.

Die Ergebnisse der immunhistochemischen Untersuchung normalen Humangewebes sind in Tabelle 1 zusammengefasst:The results of normal immunohistochemical examination Human tissues are summarized in Table 1:

Antikörper gegen FSAP, Klon DSMZ ACC2454 und DSMZ ACC 2453 Humanes Normalgewebe Antibodies against FSAP, clone DSMZ ACC2454 and DSMZ ACC 2453 human normal tissue

Bei endokrinen Zellen wie den Langerhans'schen Inseln des Pankreas, den Leidig'schen Zwischenzellen des Hodeninterstitiums, bei den Deziduazellen der Plazenta und dem beleghaltigen Drüsenkörper der Magenkardia sowie dem hochzylindrischen Epithel des Ductus cysticus zeigt sich eine starke, teils feingranuläre Reaktion. Stark positive Reaktionen wurden in Gewebeverbänden gelegenen Plasmazellen und gangligen Zellen und den Nervenzellen der Großhirnrinde beobachtet. Auch die dezidualen Zellen, das Amnioepithel, und die Fibroplasten der Eihäute zeigten eine sehr starke immunhistologische Anfärbbarkeit, wie auch das auskleidende Epithel der Samenbläschen und die Enterozyten des Dünndarms.In endocrine cells such as the Langerhans' islets of the pancreas, the Leidig 's intermediate cells of the testicular interstitium, in the decidual cells of the Placenta and the documented glandular body of the gastric cardia as well as the High cylindrical epithelium of the cystic duct shows a strong, in part fine granular response. Strongly positive reactions have been seen in tissue dressings located plasma cells and common cells and the nerve cells of the Cerebral cortex observed. The decidual cells, the amniotic epithelium, and the Fibroplasts of the egg membranes showed a very strong immunohistological Dyeability, as well as the lining epithelium of the seminal vesicles and the Enterocytes of the small intestine.

Untersuchungen Formalin-fixierten, in Paraffin eingebetten Tumormaterials urologischer Tumoren zeigten eine schwache bis mäßig starke intra­ zytoplasmatische Reaktion unterschiedlich differenzierter Adenokarzinome der Prostata. Tumorzellen seminomatöser Hodentumore zeigten nur eine schwache intra-zytoplasmatische Reaktion, während nicht-seminomatöse Tumore (Embryokarzinome und Chorionkarzinome) eine deutlich verstärkte Anfärbbarkeit der Tumorzellen aufwiesen, die auf erhöhte Konzentrationen von FSAP hinwiesen. Investigations of formalin-fixed tumor material embedded in paraffin urological tumors showed a weak to moderate intra cytoplasmic reaction of differently differentiated adenocarcinomas of the Prostate. Tumor cells from seminomatous testicular tumors showed only a weak one intra-cytoplasmic response during non-seminomatous tumors (Embryo carcinomas and chorionic carcinomas) a significantly increased stainability of the tumor cells, which indicated increased concentrations of FSAP.  

Das erfindungsgemäße diagnostische Verfahren erlaubt somit einen immunhistochemischen Nachweis von pathologischen Vorgängen in den verschiedensten Organen.The diagnostic method according to the invention thus allows one immunohistochemical detection of pathological processes in the various organs.

Claims (4)

1. Diagnostisches Verfahren zum immunhistologischen Nachweis der den Blutgerinnungsfaktor VII aktivierenden Protease, ihres Proenzyms oder ihrer Mutanten oder ihrer Spaltstücke, dadurch gekennzeichnet, dass man auf eine Gewebeprobe einen gegen die Protease gerichteten, markierten, monoklonalen oder polyklonalen Antikörper oder eines seiner Fragmente einwirken lässt, den nicht gebundenen Antikörper oder seine Fragmente auswäscht und das von dem gebundenen Antikörper oder einem seiner Fragmente ausgesendete Signal bestimmt.1. Diagnostic method for immunohistological detection of the protease activating blood coagulation factor VII, its proenzyme or its mutants or its cleavage pieces, characterized in that a tissue sample is exposed to a labeled, monoclonal or polyclonal antibody against the protease, or one of its fragments, rinses the unbound antibody or its fragments and determines the signal emitted by the bound antibody or one of its fragments. 2. Diagnostisches Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man auf die Gewebeprobe einen gegen die Protease oder eine seiner Mutanten gerichteten unmarkierten monoklonalen oder polyklonalen Antikörper oder eines seiner Fragmente einwirken lässt, den nicht gebundenen Antikörper oder seine Fragmente auswäscht, dann einen markierten Anti-antikörper auf das Gewebe einwirken lässt und nach Auswaschen des nicht gebundenen markierten Anti-antikörpers das von dem gebundenen Anti-antikörper oder seinen Fragmenten ausgesendete Signal bestimmt. 2. Diagnostic method according to claim 1, characterized in that that the tissue sample is one against the protease or one of its Mutant-directed unlabelled monoclonal or polyclonal Antibody or one of its fragments does not act bound antibody or its fragments, then one labeled anti-antibodies can act on the tissue and after Wash out the unbound labeled anti-antibody from that bound anti-antibody or its fragments signal certainly.   3. Diagnostisches Verfahren nach Ansprüchen 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, dass die zu untersuchende Gewebeprobe einem endokrinen Organ entnommen ist.3. Diagnostic method according to claims 1 and 2, characterized characterized that the tissue sample to be examined a endocrine organ is removed. 4. Diagnostisches Verfahren nach den Ansprüchen 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass man zum Nachweis der FSAP markierte, monoklonale Antikörper der Hybridomazelllinien DSM ACC 2453 oder DSM ACC 2454 einsetzt.4. Diagnostic method according to claims 1 to 3, characterized marked that you marked to prove the FSAP, monoclonal antibodies of the hybridoma cell lines DSM ACC 2453 or DSM ACC 2454 uses.
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DE50108974T DE50108974D1 (en) 2000-07-26 2001-07-05 Mutants of the factor VII activating protease and detection method with specific antibodies
ES01115691T ES2257361T3 (en) 2000-07-26 2001-07-05 MUTANTS OF THE ACTIVATING PROTEASE OF FACTOR VII AND DETECTION PROCEDURE WITH SPECIFIC ANTIBODIES.
AT01115691T ATE318315T1 (en) 2000-07-26 2001-07-05 MUTANTS OF THE FACTOR VII ACTIVATE PROTEASE AND DETECTION METHOD USING SPECIFIC ANTIBODIES
DE50115042T DE50115042D1 (en) 2000-07-26 2001-07-05 Mutants of the factor VII activating protease and detection method with specific antibodies
ES06001491T ES2330544T3 (en) 2000-07-26 2001-07-05 MUTANTS OF THE ACTIVATING PROTEASE OF FACTOR VII AND DETECTION PROCEDURES WITH SPECIFIC ANTIBODIES.
AT06001491T ATE439445T1 (en) 2000-07-26 2001-07-05 MUTANTS OF THE FACTOR VII ACTIVATE PROTEASE AND DETECTION METHOD USING SPECIFIC ANTIBODIES
DK06001491T DK1650305T3 (en) 2000-07-26 2001-07-05 Mutants of the protease activating factor VII and detection method with specific antibodies
EP01115691A EP1182258B1 (en) 2000-07-26 2001-07-05 Mutants of the factor VII activating protease and methods for their detection
EP06001491A EP1650305B1 (en) 2000-07-26 2001-07-05 Mutants of the factor VII activating protease and methods for their detection
AU55930/01A AU784441B2 (en) 2000-07-26 2001-07-24 Mutants of the factor VII-activating protease and detection methods using specific antibodies
KR1020010044918A KR100884487B1 (en) 2000-07-26 2001-07-25 Mutants of the factor VII-activating protease and a diagnostic composition comprising specific antibodies
JP2001224423A JP5080707B2 (en) 2000-07-26 2001-07-25 Detection method using variant of factor VII-activating protease and specific antibody
CA2353314A CA2353314C (en) 2000-07-26 2001-07-25 Mutants of the factor vii-activating protease and detection methods using specific antibodies
US09/912,559 US6831167B2 (en) 2000-07-26 2001-07-26 Mutants of the factor VII-activating protease and detection methods using specific antibodies
US10/391,215 US7153679B2 (en) 2000-07-26 2003-03-19 Marburg I mutant of factor VII activating protease (FSAP) as risk factor for arterial thrombosis
US10/930,754 US7442514B2 (en) 2000-07-26 2004-09-01 Mutants of the factor VII-activating protease and detection methods using specific antibodies
US11/633,501 US7803569B2 (en) 2000-07-26 2006-12-05 Marburg I mutant of factor VII activating protease (FSAP) as risk factor for arterial thrombosis and methods of detecting FSAP and FSAP mutations
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