DE10031122A1 - Composition for the treatment of malignant diseases comprises agents that reduce concentration of YB-1 protein or inhibit its translocation in tumor cells - Google Patents

Composition for the treatment of malignant diseases comprises agents that reduce concentration of YB-1 protein or inhibit its translocation in tumor cells

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DE10031122A1
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Abstract

Composition (A) for treating malignancy comprises substances (I) that reduce concentration of the YB-1 (Y-box) protein (II) or inhibit translocation of (II) in tumor cells, is new. Independent claims are also included for the following: (1) a composition (B) for diagnosis or prognosis of malignant diseases containing antibodies against (II) and/or protein P32; (2) a method for diagnosis, prognosis or treatment of malignant diseases by determining the level of YB-1 expression in tissue sections and using this as the basis for a targeted additional treatment or aftercare; (3) peptides (III) that are MSSEAETQQPPA (IIIa), its mutants or variants, or other YB-1-derived peptides with the same properties and able to inhibit tumor cells selectively; (4) antibodies (Ab1) specific for YB-1 and able to recognize (III); (5) use of (III) for preparing an antitumor agent; (6) antibodies (Ab2) specific for P32; (7) cell lines that constitutively over express YB-1, for screening or testing therapeutic agents; and (8) transgenic small mammals that express YB-1 in a tissue-specific manner for testing therapeutic substances.

Description

Die Erfindung betrifft Mittel zur Diagnose, Prognose und Therapie maligner Erkrankungen.The invention relates to means for diagnosis, prognosis and therapy malignant diseases.

Mit Hilfe der erfinderischen Lösung werden verschiedene Funktionen des für die Tumorprogression wichtigen Proteins YB-1 gehemmt. Die Tumorzellen werden dadurch in ihrer Proliferation gestört, werden sensitiv für die Behandlung mit den bekannten Chemotherapeutika und können durch das Immunsystem als entartet erkannt werden. Die Erfindung beinhaltet des weiteren die Verwendung des Nachweises von YB-1 für die Diagnose und Prognose maligner Erkrankungen. Die Erfindung betrifft weiterhin Peptide von YB-1, insbesondere das N-terminale Peptid, sowie Mutanten und Varianten des Peptids und andere von YB-1 abgeleitete Peptide, die die gleichen Eigenschaften aufweisen, und selektiv Tumorzellen hemmen sowie Mittel zur Diagnose und Therapie maligner Erkrankungen, die vorzugsweise diese Peptide, ggf. in Kombination untereinander und/oder mit weiteren Tumorhemmern enthalten. Darüber hinaus betrifft die Erfindung Substanzen, die die Peptide erkennen und YB-1 beeinflussen.With the help of the inventive solution, various functions of the protein YB-1, which is important for tumor progression. The Tumor cells are disturbed in their proliferation and become sensitive for treatment with the known chemotherapy drugs and can recognized by the immune system as degenerate. The invention also involves using the detection of YB-1 for the Diagnosis and prognosis of malignant diseases. The invention relates furthermore peptides from YB-1, in particular the N-terminal peptide, and Mutants and variants of the peptide and others derived from YB-1 Peptides that have the same properties and are selective Inhibit tumor cells and agents for diagnosis and therapy of malignant Diseases that prefer these peptides, possibly in combination with each other and / or with other tumor inhibitors. About that the invention also relates to substances which recognize the peptides and Affect YB-1.

Anwendungsgebiete sind die Medizin und die pharmazeutische Industrie.Areas of application are medicine and the pharmaceutical industry.

YB-1 ist ein Vertreter der Y-Box-Proteinfamilie in humanen Zellen. Y-Box- Proteine sind in der Lage, an ein bestimmtes DNA-Sequenzmotiv, die sogenannte Y-Box, zu binden. Das Y-Box-Motiv ist ein transkriptionell regulatorisches Element, das eine reverse CAAT-Box (ATTG) enthält und sich in den Promoter- oder Enhancerbereichen verschiedener Gene befindet. YB-1 is a member of the Y-Box family of proteins in human cells. Y box Proteins are able to bind to a specific DNA sequence motif so-called Y-box. The Y-Box motif is a transcriptional regulatory element containing a reverse CAAT box (ATTG) and in the promoter or enhancer areas of various genes located.  

Ein Teil der Proteine, die von diesen Genen kodiert werden, erfüllt wichtige Funktionen in der Regulation der Zellproliferation. Dazu zählen zum Beispiel der EGF-Rezeptor, die Thymidinkinase, PCNA sowie die DNA- Polymerase I (Ladomery, M. et al., 1995, Bioessays 17: 9-11).Some of the proteins encoded by these genes fulfill important ones Functions in the regulation of cell proliferation. These include the Example of the EGF receptor, the thymidine kinase, PCNA and the DNA Polymerase I (Ladomery, M. et al., 1995, Bioessays 17: 9-11).

Eine zweite Gruppe von Genen, an deren Regulation YB-1 beteiligt ist, beinhaltet verschiedene Resistenzgene. Gut untersucht ist die Bedeutung von YB-1 bei der Regulation von mdr1 in Mammakarzinomen. Das Produkt dieses Gens, das P-Glykoprotein, ist ein ABC-Transporter, der verschiedene Zytostatika wieder aus den Tumorzellen entfernt. Dadurch kommt es zur Entstehung der Multidrug-resistenz von Tumoren. Es konnte von H.-D. Royer et al. gezeigt werden, daß YB-1 die Transkription von mdr1 stimuliert. Bei allen untersuchten Mammakarzinomen, die eine nukleäre Lokalisation von YB-1 aufwiesen, konnte die Expression von P- Glykoprotein beobachtet werden (Bargou, R. C. et al. 1997, Nature Medicine 4: 447-450).A second group of genes, in whose regulation YB-1 is involved, contains different resistance genes. The meaning is well researched of YB-1 in the regulation of mdr1 in breast cancer. The The product of this gene, the P-glycoprotein, is an ABC transporter that various cytostatics removed from the tumor cells. Thereby multidrug resistance of tumors develops. It could from H.-D. Royer et al. are shown that YB-1 transcription stimulated by mdr1. In all breast cancers examined, the one nuclear location of YB-1, the expression of P- Glycoprotein can be observed (Bargou, R.C. et al. 1997, Nature Medicine 4: 447-450).

Weitere Untersuchungen zeigten, daß YB-1 die Expression von Genen der MHC-Klasse II repremieren kann (Didier et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 7322-7326). Diese Klasse von Genen erfüllt wichtige Aufgaben bei der Präsentation von Peptiden auf der Oberfläche von Zellen. Die Repremierung dieser Gene kann dazu führen, daß diese Tumorzellen nicht mehr vom Immunsystem als entartet erkannt und neutralisiert werden.Further investigation showed that YB-1 expression of genes of Can represent MHC class II (Didier et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 7322-7326). This class of genes fulfills important ones Tasks for the presentation of peptides on the surface of cells. The representation of these genes can lead to these tumor cells no longer recognized and neutralized by the immune system as degenerate become.

Das Ziel dieser Erfindung ist die Verwendung des Proteins YB-1 für die Diagnose, Prognose sowie die Therapie maligner Erkrankungen. Ihr liegt die Aufgabe zu Grunde, entsprechende Mittel zur Verfügung zu stellen.The aim of this invention is the use of the protein YB-1 for the Diagnosis, prognosis and the therapy of malignant diseases. You lie based on the task of providing appropriate funds.

Gemäß der Erfindung wird das Protein mit dem Namen DBPB ("DNA binding protein B"), welches fast identisch mit YB-1 ist, mit eingeschlossen. Die Unterschiede zwischen YB-1 und DBPB bestehen in einem Basenaustausch im Bereich der CSD ("cold shock domain") sowie in einer Verschiebung des Leserahmens ("frameshift") kurz vor dem C- Terminus. In der wissenschaftlichen Literatur hat sich die Bezeichnung YB-1 durchgesetzt. Die beiden Proteine gehören zur Familie der Y-Box- Proteine. Neben spezifischen Regionen besitzen Vertreter dieser Proteinfamilie auch identische Bereiche, welche somit auch zum Grundgedanken dieser Erfindung gehören.According to the invention, the protein is named DBPB ("DNA binding protein B "), which is almost identical to YB-1, with locked in. The differences between YB-1 and DBPB are in a base exchange in the area of CSD ("cold shock domain") and in a shift of the reading frame ("frameshift") shortly before the C- Term. In scientific literature the term has changed YB-1 prevailed. The two proteins belong to the family of the Y-box Proteins. In addition to specific regions, representatives of these  Protein family also identical areas, which therefore also for Principles of this invention belong.

Ausgangspunkt der Erfindung ist der überraschende Befund, daß die Reduktion der YB-1-Expression zur erhöhten Zytostatikasensivität der behandelten Tumorzellen führt. Darauf aufbauend enthalten die erfindungsgemäßen Mittel zur Therapie Substanzen, die die Funktionen von YB-1 in den Tumorzellen beeinflussen können. Dazu zählen Substanzen, die die intrazelluläre YB-1-Konzentration in Tumorzellen absenken. Desweiteren gehören dazu Substanzen, die an YB-1 binden und dadurch dessen Funktionen hemmen, sowie Substanzen, die die zelluläre Regulation von YB-1 beeinflussen.The starting point of the invention is the surprising finding that the Reduction of YB-1 expression to increase the cytostatic sensitivity of the treated tumor cells leads. Building on that, the Agents for therapy substances according to the invention that have the functions of YB-1 in the tumor cells. These include Substances affecting intracellular YB-1 concentration in tumor cells lower. It also includes substances that bind to YB-1 and thereby inhibit its functions, as well as substances that the affect cellular regulation of YB-1.

Die Absenkung der YB-1-Konzentration in Tumorzellen kann durch ein Mittel erfolgen, das entweder ein Antisense-Oligonukleotid oder ein Ribozym gegen die YB-1 mRNA enthält. Die Verwendung der Antisense- Oligonukleotide bzw. der Ribozyme können entweder direkt oder über einen gentherapeutischen Vektor (Adenoviren etc.) erfolgen. Als weiteres therapeutisches Mittel kommen Adenoviren mit konstitutiver YB-1- Antisense mRNA zur Anwendung. Dafür wird der Vektor pHVad2c/YB-1 as (Abbildung A) zur Verfügung gestellt. Mit beiden Mitteln wird das generelle Tumorwachstum gehemmt. Desweiteren können für die Absenkung der YB-1-Konzentration Mittel verwendet werden, die zu einem verstärkten Abbau von YB-1 führen, sowie Mittel, die die Biosynthese von YB-1 hemmen.The lowering of the YB-1 concentration in tumor cells can be caused by a Means that are either an antisense oligonucleotide or a Contains ribozyme against the YB-1 mRNA. The use of the antisense Oligonucleotides or the ribozymes can either be directly or via a gene therapy vector (adenoviruses etc.). As another therapeutic agents come adenoviruses with constitutive YB-1 Antisense mRNA for use. For this, the vector pHVad2c / YB-1 as (Figure A) provided. With both means the general becomes Tumor growth inhibited. Furthermore, for lowering the YB-1 concentration agents are used that lead to an enhanced Degradation of YB-1, as well as agents that biosynthesize YB-1 inhibit.

Mit gleicher Zielstellung ist auch der Einsatz von YB-1-Antikörpern zum Absenken der YB-1-Konzentration bzw. zur Hemmung von Funktionen von YB-1 durchführbar. Dabei wird mit Hilfe eines Gentransfers die Expression von intrazellulären Single chain Antikörpern realisiert.The use of YB-1 antibodies for the same purpose is also Decrease the YB-1 concentration or to inhibit functions feasible by YB-1. With the help of a gene transfer the Expression of intracellular single chain antibodies realized.

Die Erfindung basiert weiterhin auf der Erkenntnis, daß YB-1 einen Teil der dargestellten Funktionen nur im Zellkern erfüllen kann. Wird die Translokation von YB-1 in den Zellkern der Tumorzellen verhindert, kommt es zu einer Hemmung der Proliferation dieser Zellen sowie zu einer teilweisen oder vollständigen Hemmung der Expression der Resistenzgene. Dadurch werden die Tumorzellen zum einen in ihrem Wachstum gehemmt, zum anderen auch wieder sensitiv für die Behandlung mit bekannten Zytostatika. Eine weitere Folge ist die verstärkte Expression der Gene der MHC-Klasse II, wodurch das Immunsystem diese Zellen wieder als entartet erkennen und eliminieren kann. Nichtmalignes Gewebe wird auf Grund der Abwesenheit von YB-1 im Zellkern von dieser Behandlung nicht beeinflußt.The invention is further based on the finding that YB-1 is a part can only perform the functions shown in the cell nucleus. Will the Prevents translocation of YB-1 into the nucleus of the tumor cells, there is an inhibition of the proliferation of these cells and one partial or complete inhibition of the expression of the resistance genes. As a result, the tumor cells grow, on the one hand inhibited, on the other hand again sensitive to the treatment with  known cytostatics. Another consequence is the increased expression of genes of MHC class II, which causes the immune system to make these cells can recognize and eliminate them again as degenerate. Non-malignant tissue is due to the absence of YB-1 in the cell nucleus Treatment not affected.

Bis jetzt sind die genauen Mechanismen, die zur Translokation von YB-1 in den Zellkern führen, noch unbekannt, es wurde jedoch eine zellzyklusabhängige Translokation von YB-1 beobachtet. Dabei konnte festgestellt werden, daß YB-1 beim Übergang der Zellen von der G1- in die S-Phase des Zellzyklus aus dem Zytoplasma in den Zellkern transportiert wird. Im Verlauf der S-Phase ist dann ein Rücktransport von YB-1 in das Zytoplasma zu beobachten. Desweiteren wurde eine stressinduzierte Translokation von YB-1 in den Zellkern der untersuchten Zellen festgestellt. Daraus folgt, daß die Translokation von YB-1 in den Zellkern durch spezifische Signale induzierbar ist.So far, the exact mechanisms for translocation of YB-1 lead to the cell nucleus, still unknown, but it became one cell cycle-dependent translocation of YB-1 was observed. It could found that YB-1 at the transition of the cells from the G1 to the S-phase of the cell cycle is transported from the cytoplasm into the cell nucleus becomes. In the course of the S phase there is a return transport of YB-1 into the To observe cytoplasm. Furthermore, a stress-induced Translocation of YB-1 into the cell nucleus of the examined cells detected. It follows that the translocation of YB-1 into the cell nucleus can be induced by specific signals.

Die Erfindung beinhaltet in ihrem Wesen somit auch Mittel, enthaltend Substanzen, die diese Signalwege in Bezug auf YB-1 spezifisch inhibieren können.The essence of the invention thus also includes means containing Substances that specifically inhibit these signaling pathways with respect to YB-1 can.

Die Untersuchung von multidrug-resistenten MCF7-Zellen führte desweiteren zu der Identifizierung eines Proteins, das mit YB-1 spezifisch interagiert. Bei diesem Protein handelt es sich um P32/SF2 (auch bekannt unter dem Namen: P32/TAP, Hyaluronectin, gC1qR). Es konnte beobachtet werden, daß YB-1 und P32 nur in den resistenten MCF7- Zellen, die durch eine starke nukleäre Lokalisation von YB-1 gekennzeichnet sind, nicht jedoch in den sensitiven MCF-Zellen mit einander interagieren. Desweiteren konnte festgestellt werden, daß die Interaktion von YB-1 und P32 beim Übergang von HeLa-Zellen von der G1- in die S-Phase am stärksten ist. P32 ist offensichtlich an der Translokation von YB-1 in den Zellkern beteiligt.The investigation of multidrug-resistant MCF7 cells resulted furthermore for the identification of a protein specific for YB-1 interacts. This protein is P32 / SF2 (also known under the name: P32 / TAP, hyaluronectin, gC1qR). It could observed that YB-1 and P32 were found only in the resistant MCF7- Cells marked by a strong nuclear localization of YB-1 are marked, but not in the sensitive MCF cells interact with each other. Furthermore, it was found that the Interaction of YB-1 and P32 during the transition of HeLa cells from the G1- is strongest in the S phase. P32 is obviously on the Translocation of YB-1 involved in the cell nucleus.

Die Erfindung beinhaltet daher auch Substanzen, die die Interaktion von YB-1 und P32 teilweise oder vollständig hemmen. Zu diesen Substanzen gehören unter anderem Antisense-Oligonukleotide oder Ribozyme, die gegen die mRNA von P32 gerichtet sind, mit dem Ziel die zelluläre Konzentration von P32 zu senken. Ebenfalls zählen dazu Substanzen, die zu einem verstärkten Abbau von P32 führen. Desweiteren beinhaltet diese Erfindung auch Mittel, enthaltend Substanzen, die die jeweiligen Bindungsstellen von P32 und YB-1 blockieren können, sowie auch Substanzen, die für die Aktivierung notwendigen Modifikationen von P32 bzw. YB-1 durch Enzyme (Kinasen, Phosphatasen, Methylasen usw.) verhindern können.The invention therefore also includes substances that interact with one another Partially or completely inhibit YB-1 and P32. About these substances include, among others, antisense oligonucleotides or ribozymes are directed against the mRNA of P32, targeting the cellular Lower concentration of P32. This also includes substances that  lead to increased degradation of P32. Furthermore, this includes Invention also means containing substances that the respective Can block binding sites of P32 and YB-1, as well Substances that require modifications of P32 for activation or YB-1 by enzymes (kinases, phosphatases, methylases etc.) can prevent.

Ein weiterer Bestandteil der Erfindung ist ein Verfahren zur Diagnose sowie Prognose maligner Erkrankungen, beruhend auf dem Nachweis der Expression sowie ggf. der intrazellulären Lokalisation von YB-1 und ggf. von P32.Another component of the invention is a method for diagnosis and prognosis of malignant diseases, based on the detection of the Expression and possibly the intracellular localization of YB-1 and possibly from P32.

Insbesondere bei Mammakarzinomen gilt bisher der Nachweis von Metastasen in den benachbarten Lymphknoten als Marker für die weitere Behandlung. Bei Patientinnen, deren dem Tumor benachbarte Lymphknoten keine Metastasen aufweisen (sog. nodalnegativ) wird in der Regel auf eine weitere Therapie verzichtet, während bei Patientinnen mit Metastasen in den benachbarten Lymphknoten (sog. nodalpositiv) eine zusätzliche Behandlung durch eine Chemo- oder Strahlentherapie erfolgt. Die Erfahrung zeigt jedoch, das dieser Marker unzureichend für eine genaue Beurteilung der weiteren Behandlung ist. So kommt es bei einem hohen Prozentsatz der nodalnegativen Patientinnen zur Bildung von Metastasen bzw. Rezidiven, woran diese Patientinnen häufig versterben.In particular, breast cancer has so far been proven Metastases in the neighboring lymph nodes as markers for the further Treatment. In patients whose neighbors are adjacent to the tumor Lymph nodes have no metastases (so-called nodal negative) in the As a rule, further therapy is dispensed with, while in patients with Metastases in the neighboring lymph nodes (so-called nodal positive) additional treatment by chemotherapy or radiation therapy. Experience shows, however, that this marker is insufficient for one is accurate assessment of further treatment. So it happens with one high percentage of nodal negative patients for the formation of Metastases or recurrences, from which these patients often die.

Die Expression von YB-1 wurde immunhistochemisch bei einer hohen Anzahl von Mamma- und Ovarialkarzinomen analysiert. Dabei wurde gemäß der Erfindung festgestellt, daß die Expression von YB-1 mit der rezidivfreien Überlebenszeit der nodalnegativen Karzinompatientinnen signifikant korreliert. Alle Patientinnen, deren Tumorproben eine niedrige YB-1 Expression aufwiesen, hatten in dem Beobachtungszeitraum von über fünf Jahren keine Rezidive bzw. Metastasen. Im Gegensatz dazu traten bei allen Patientinnen mit einer hohen YB-1 Expression innerhalb dieses Zeitraumes (häufig schon im ersten Jahr nach der Behandlung) Rezidive bzw. Metastasen auf, woran ein großer Teil dieser Patientinnen auch verstarb. Desweiteren konnte auch bei den nodalpositiven Mammakarzinompatientinnen eine direkte Korrelation der YB-1- Expression mit dem Behandlungserfolg nachgewiesen werden. Auch hier konnten Patientinnen mit einer niedrigen YB-1 Expression erfolgreich therapiert werden, während Patientinnen mit einer hohen YB-1 Expression innerhalb kurzer Zeit Metastasen bzw. Rezidive bildeten.The expression of YB-1 was immunohistochemically at a high Number of breast and ovarian cancers analyzed. It was according to the invention found that the expression of YB-1 with the recurrence-free survival of the nodal negative carcinoma patients significantly correlated. All patients whose tumor samples were low YB-1 expression had in the observation period of no recurrences or metastases for more than five years. In contrast to occurred within all patients with high YB-1 expression this period (often in the first year after treatment) Relapses or metastases, which is a large part of these patients also died. Furthermore, the nodal positive Breast cancer patients have a direct correlation of YB-1- Expression can be demonstrated with the success of treatment. Here too succeeded in patients with a low YB-1 expression  be treated while patients with a high YB-1 Expression metastasized or relapsed within a short time.

Erfindungsgemäß wird der Nachweis von YB-1 in Tumoren, insbesondere bei Karzinomen (Mamma-, Ovarial-, Prostatakarzinome etc.), Sarkomen (Osteosarkomen), malignen Melanomen, sowie Hirntumoren (Glioblastomen, etc.) als prognostischer Marker verwendet, um dadurch eine gezielte zusätzliche Behandlung und Nachsorge für die Patienten zu ermöglichen. Die erfindungsgemäßen Mittel können erfolgreich eingesetzt werden.According to the invention, the detection of YB-1 in tumors, in particular for carcinomas (breast, ovarian, prostate, etc.), sarcomas (Osteosarcomas), malignant melanomas, as well as brain tumors (Glioblastomas, etc.) used as a prognostic marker to thereby targeted additional treatment and aftercare for the patients enable. The agents according to the invention can be used successfully become.

Die Beteiligung von YB-1 an der Regulation der im Stand der Technik dargestellten Gene sowie die weiteren erfindungswesentlichen Erkenntnisse belegen, daß YB-1 bei den meisten Tumorerkrankungen eine wichtige Rolle im Zusammenhang mit der Tumorentstehung, Tumorprogression, Aggressivität, Metastasierung sowie Multidrug- Resistenz spielt. Daher können die erfindungsgemäßen Mittel bei den meisten Tumorerkrankungen, insbesondere bei Karzinomen (Mamma-, Ovarial-, Prostatakarzinome etc.), Sarkomen (Osteosarkomen), malignen Melanomen, sowie Hirntumoren (Glioblastomen, etc.) angewendet werden. Eine besondere Bedeutung besitzen die erfindungsgemäßen Mittel für die Diagnose, Prognose sowie die Therapie von resistenten Tumoren (Multi­ drug-Resistenz, Resistenz gegen Strahlung etc.).The participation of YB-1 in the regulation of the state of the art genes shown and the other essential to the invention Findings prove that YB-1 is a important role in connection with tumor development, Tumor progression, aggressiveness, metastasis and multidrug Resistance plays. Therefore, the agents of the invention most tumor diseases, especially carcinomas (breast, Ovarian, prostate, etc.), sarcomas (osteosarcomas), malignant Melanomas, as well as brain tumors (glioblastomas, etc.) can be used. The agents according to the invention are particularly important for Diagnosis, prognosis and the therapy of resistant tumors (multi drug resistance, resistance to radiation etc.).

Eine direkte Beteiligung von YB-1 an der Regulation von Cyklin A konnte nachgewiesen werden.A direct participation of YB-1 in the regulation of Cyklin A could be detected.

Der Nachweis von YB-1 für die Diagnose und Prognose maligner Erkrankungen ist mit allen an sich gängigen Techniken realisierbar:
The detection of YB-1 for the diagnosis and prognosis of malignant diseases can be realized with all common techniques:

  • - Immunhistochemie/Immunfluorescence mit Antikörpern (sowohl polyklonale als auch monoklonale) gegen YB-1 bzw. P32- Immunohistochemistry / immunofluorescence with antibodies (both polyclonal as well as monoclonal) against YB-1 or P32
  • - In-Situ-Hybridisierungen zum Nachweis der mRNA von YB-1 bzw. P32 in Tumorschnitten- In-situ hybridizations for the detection of the mRNA of YB-1 or P32 in tumor sections
  • - ELISA, RIA u. ä. zum quantitativen Nachweis von YB-1 bzw. P32 in Homogenaten- ELISA, RIA and others for the quantitative detection of YB-1 or P32 in Homogenates
  • - Westernblots für den Nachweis von YB-1 bzw. P32 in Homogenaten - Western blots for the detection of YB-1 or P32 in homogenates  
  • - RT-PCR (semiquantitative, Light-Cycler etc.) zum Nachweis der mRNA von YB-1 bzw. P32 in Homogenaten- RT-PCR (semi-quantitative, light cycler etc.) for the detection of the mRNA of YB-1 and P32 in homogenates
  • - Northern-Blot, Dot-Blots, Micro-Arrays oder ähnliche Hybridisierungstechniken zum Nachweis der mRNA von YB-1 bzw. P32 in Homogenaten.- Northern blot, dot blots, micro-arrays or the like Hybridization techniques for the detection of the mRNA of YB-1 or P32 in homogenates.

Erfindungsgemäße Antikörper gegen YB-1 und P32 sind dadurch gekenzeichnet, daß sie ein oder mehrere der Peptide von YB-1 bzw. P32 erkennen können, insbesondere die folgenden:
Antibodies according to the invention against YB-1 and P32 are characterized in that they can recognize one or more of the peptides of YB-1 and P32, in particular the following:

für YB-1 - Acetylierung-MSSEAETQQPPA-cys
für P32 - PPTFDGEEEPSQGQKfor YB-1 - acetylation-MSSEAETQQPPA-cys
for P32 - PPTFDGEEEPSQGQK

Ihre Herstellung erfolgt nach an sich bekannten Verfahren z. B. durch:
They are produced by methods known per se, for. B. by:

  • a) polyklonale Antikörper:
    • - Immunisierung von Kleinsäugern, vorzugsweise von Kaninchen, mit den an Trägern (KLH, BSA etc.) gekoppelten Peptiden
    • - Blutung und Gewinnung des Serums
    • - Affinitätsreinigung der Antikörper über eine Peptidsäule
    a) polyclonal antibodies:
    • - Immunization of small mammals, preferably rabbits, with the peptides coupled to carriers (KLH, BSA etc.)
    • - bleeding and serum collection
    • - Affinity purification of the antibodies via a peptide column
  • b) monoklonale Antikörper:
    • - Immunisierung von Kleinsäugern oder Immunisierung von Milzzellen in vitro mit den erfindungsgemäßen Peptiden
    • - Isolierung der Milzzellen und Fusionierung mit Krebszellen zu Hybridomzellen; Selektion positiver Klone
    • - Isolierung der Antikörper.
    b) monoclonal antibodies:
    • - Immunization of small mammals or immunization of spleen cells in vitro with the peptides according to the invention
    • - Isolation of the spleen cells and fusion with cancer cells to hybridoma cells; Selection of positive clones
    • - Isolation of the antibodies.

Diese Antikörper werden sowohl in verschiedenen immunologischen Testsystemen, in unterschiedlichen ELISA-Testsystemen, in der Durchflußcytometrie und im Western Blot eingesetzt.These antibodies are used in both different immunological Test systems, in different ELISA test systems, in the Flow cytometry and used in Western blot.

Überraschenderweise wurde festgestellt, daß das N-terminale Peptid von YB-1 mit der Sequenz (Acetylierung-MSSEAETQQPPA-cys) die Proliferation von HeLa-Zellen deutlich hemmt. Surprisingly, it was found that the N-terminal peptide of YB-1 with the sequence (acetylation-MSSEAETQQPPA-cys) the proliferation of HeLa cells significantly inhibited.  

Gegenstand der Erfindung ist deshalb insbesondere das Peptid MSSEAETQQPPA sowie davon abgeleitete Mutanten und Varianten und andere von YB-1 abgeleitete Peptide, die die gleichen Eigenschaften aufweisen, und selektiv Tumorzellen hemmen. Unter der Bezeichnung Peptid werden im Sinne der Erfindung auch solche Aminosäureketten verstanden, die N-terminal und C-terminal Substitutionen aufweisen. Zu diesen Substitutionen können beispielsweise zählen:
Acetylierung, Anfügen eines c-terminale Cysteins zur vereinfachten Kopplung des Peptides an einen Träger, Veresterung mit Fettsäuren, Konjugation mit Zuckerresten, Alkylierungen etc.The invention therefore relates in particular to the peptide MSSEAETQQPPA and mutants and variants derived therefrom and other peptides derived from YB-1 which have the same properties and selectively inhibit tumor cells. Within the meaning of the invention, the term peptide also means those amino acid chains which have N-terminal and C-terminal substitutions. These substitutions can include, for example:
Acetylation, addition of a c-terminal cysteine to simplify coupling of the peptide to a carrier, esterification with fatty acids, conjugation with sugar residues, alkylations etc.

Eine Hemmung wurde schon nach der einmaligen Zugabe von nur 10 ng des Peptides zu 5.103 Hela-Zellen beobachtet. Die Erhöhung der verwendeten Peptidmenge führte zu einer dosisabhängigen verstärkten Hemmung. Diese Hemmung steht offensichtlich im Zusammenhang mit der Expression und der Funktion von YB-1. Das bedeutet, daß Zellen die eine hohe YB-1-Expression (Tumorzellen) aufweisen, eine hohe Sensitivität bei der Behandlung mit diesem Peptid besitzen, während Zellen mit wenig oder gar keinem YB-1 (normales, nichtmalignes Gewebe) von diesem Peptid nicht beeinflußt werden.Inhibition was already observed after the single addition of only 10 ng of the peptide to 5.10 3 Hela cells. Increasing the amount of peptide used led to increased dose-dependent inhibition. This inhibition is obviously related to the expression and function of YB-1. This means that cells with a high YB-1 expression (tumor cells) have a high sensitivity when treated with this peptide, whereas cells with little or no YB-1 (normal, non-malignant tissue) are not affected by this peptide become.

Daraus ergibt sich die erfindungsgemäße Ausführungsvariante mit Hilfe dieses Peptides selektiv Tumorzellen in ihrem Wachstum zu hemmen und dieses Peptid und davon abgeleitete Mutanten und Varianten und andere von YB-1 abgeleitete Peptide, die die gleichen Eigenschaften aufweisen, als therapeutische Mittel für die Tumorbehandlung zu verwenden.The embodiment variant according to the invention results from this this peptide selectively inhibit tumor cells in their growth and this peptide and mutants and variants derived therefrom and others Peptides derived from YB-1 which have the same properties as use therapeutic agents for tumor treatment.

Zum erfinderischen Grundgedanken gehört die Verwendung dieses Peptides in der vorliegenden Form sowie gegebenfalls mit zusätzlichen Modifikationen für die Therapie maligner Erkrankungen. Gleichfalls gehören dazu Peptide, die zusätzlich zu der dargestellten Sequenz noch weitere Aminosäuren enthalten, unabhängig davon, ob diese von YB-1 abgeleitet wurden oder nicht. Die Erfindung schließt ebenfalls die Verwendung weiterer, von der YB-1-Sequenz abgeleiteter Peptide mit ein. Desweiteren gehören Substanzen zum Wesen dieser Erfindung, die in der Lage sind, an das oben dargestellte Peptid oder davon abgeleitete Peptide zu binden, und damit die Funktion von YB-1 zu beeinflussen. Schließlich sind weiterhin auch Substanzen zum Gegenstand der Erfindung, die aufgrund der räumlichen Struktur dieses Peptides erstellt werden.The use of this is part of the inventive concept Peptides in the present form and possibly with additional ones Modifications for the therapy of malignant diseases. Likewise These include peptides that are in addition to the sequence shown contain other amino acids, regardless of whether they are from YB-1 were derived or not. The invention also includes Use of other peptides derived from the YB-1 sequence. Furthermore, substances belong to the essence of this invention, which in the Are able to the peptide shown above or peptides derived therefrom to bind, and thus affect the function of YB-1. Finally  are also subject of the invention substances that based on the spatial structure of this peptide.

Die Herstellung der Peptide erfolgt nach an sich bekannten Techniken entweder gentechnisch oder synthetisch.The peptides are produced by techniques known per se either genetically engineered or synthetic.

In einer weiteren Ausführungsvariante enthalten die erfindungsgemäßen Mittel zusätzlich Zytostatika. Als Zytostatika kommen alle bekannten Zytostatika in Betracht, beispielsweise Doxorubicin oder Adriblastin.In a further embodiment variant, the invention Additional cytostatics. All known cytostatics come Cytostatics, for example doxorubicin or adriblastin.

Eine weitere Ausführungsvariante dieser Erfindung beinhaltet die Verwendung von YB-1 für das Screening bzw. das Design neuer therapeutischer Substanzen. Dazu wird die gezielte Expression von YB-1 in kultivierten Zellen oder in einem Mausmodell genutzt.Another embodiment variant of this invention includes Use of YB-1 for the screening or the design of new ones therapeutic substances. For this purpose the targeted expression of YB-1 used in cultivated cells or in a mouse model.

Die Verwendung entsprechender Zelllinien gehört daher zum Grundgedanken dieser Erfindung. Ebenso gehört die Verwendung von Deletionsmutanten von YB-1, sowie die Verwendung von YB-1- Fusionsproteinen (YB-1 mit Kernlokalisationssequenz, GFP u. ä.) in diesem Zusammenhang zum Wesen dieser Erfindung.The use of appropriate cell lines is therefore part of the The principles of this invention. The use of Deletion mutants of YB-1, as well as the use of YB-1- Fusion proteins (YB-1 with nuclear localization sequence, GFP and the like) in this Connection to the essence of this invention.

Die Verwendung YB-1-transgener Mäuse als Tiermodell, allein oder nach Kreuzung mit anderen transgenen Mäusen gehört ebenfalls zum erfinderischen Grundgedanken. Desweiteren gehört die Verwendung dieser Mäuse zur Analyse neuer therapeutischer Substanzen zum Wesen dieser Erfindung. The use of YB-1 transgenic mice as an animal model, alone or after Crossing with other transgenic mice is also part of the inventive principles. The use also belongs of these mice to analyze new therapeutic substances to the essence of this invention.  

Die Erfindung soll nachfolgend durch Ausführungsbeispiele näher erläutert werden.The invention is intended to be explained in more detail below by means of exemplary embodiments are explained.

1. Senkung des YB-1 Levels zur Aufhebung von Zytostatikaresistenz und Hemmung des Tumorwachstums1. Lowering the YB-1 level to remove cytostatic resistance and inhibiting tumor growth A. Senkung der zellulären YB-1-Konzentration mittels Antisense- Oligonukleotiden gegen die YB-1 mRNAA. Lowering Cellular YB-1 Concentration Using Antisense Oligonucleotides against the YB-1 mRNA

Zur Senkung werden folgende YB-1 Antisense-Oligos eingesetzt:
The following YB-1 antisense oligos are used for lowering:

asOligo 1: 600-619 5'-TAT TCT GGT AAT TTT GCT GG-3'
asOligo 2: 1140-1159 5'-TTC ATA TTT CTT CTT GTT GG-3'
asOligo 3: 1160-1179 5'-TCA TTT CTT ATT GCT GGA AT-3'
asOligo 4: 1390-1409 5'-TAT TAC AAA TTA AAA ATG AA-3'
asOligo 5: 5'-CTC GCT GCT CAT GGT TGC GGT-3'asOligo 1: 600-619 5'-TAT TCT GGT AAT TTT GCT GG-3 '
asOligo 2: 1140-1159 5'-TTC ATA TTT CTT CTT GTT GG-3 '
asOligo 3: 1160-1179 5'-TCA TTT CTT ATT GCT GGA AT-3 '
asOligo 4: 1390-1409 5'-TAT TAC AAA TTA AAA ATG AA-3 '
asOligo 5: 5'-CTC GCT GCT CAT GGT TGC GGT-3 '

Es existiert allerdings darüberhinaus ein Adenovirus mit der YB-1 cDNA in antisense Orientierung (pHVad2c CMV/SV40 YB-1 as), der ebenfalls die endogene YB-1 Konzentration in den infizierten Zellen reduziert.However, there is also an adenovirus with the YB-1 cDNA in antisense orientation (pHVad2c CMV / SV40 YB-1 as), which is also the endogenous YB-1 concentration in the infected cells reduced.

B. Senkung der zellulären YB-1-Konzentration mittels Ribozymen gegen die YB-1 mRNAB. Reduction of cellular YB-1 concentration using ribozymes against the YB-1 mRNA

Folgende Ribozyme werden eingesetzt:
The following ribozymes are used:

  • 1. 5'-TGT ACA AA CTG ATG AGT CCG TGA GGA CGA AAC ATC TTC CT-3'1.5'-TGT ACA AA CTG ATG AGT CCG TGA GGA CGA AAC ATC TTC CT-3 '
  • 2. 5'-GTC TGG TG CTG ATG AGT CCG TGA GGA CGA ACC AAA TAC AT-3'2.5'-GTC TGG TG CTG ATG AGT CCG TGA GGA CGA ACC AAA TAC AT-3 '
  • 3. 5'-TGC GTT GG CTG ATG AGT CCG TGA GGA CGA ACC TTC CTG GG-3'3.5'-TGC GTT GG CTG ATG AGT CCG TGA GGA CGA ACC TTC CTG GG-3 '
  • 4. 5'-CAA TCT CC CTG ATG AGT CCG TGA GGA CGA ACC ACT GCG AA-3'4.5'-CAA TCT CC CTG ATG AGT CCG TGA GGA CGA ACC ACT GCG AA-3 '
  • 5. 5'-ACC ACC AG CTG ATG AGT CCG TGA GGA CGA ACC CTG TAA CA-3'5.5'-ACC ACC AG CTG ATG AGT CCG TGA GGA CGA ACC CTG TAA CA-3 '
2. Herstellung des YB-1 Antikörpers2. Preparation of the YB-1 antibody

Ein synthetisches Peptid (Acetyl-MSSESETQQPPA-cys), das dem N- Terminus von YB-1 entspricht, wurde an BSA und KLH gekoppelt und mehrfach in Kaninchen injiziert. Das gewonnene Antiserum wurde durch eine Peptidsäule affinitätsgereinigt.A synthetic peptide (acetyl-MSSESETQQPPA-cys) that YB-1 terminus was coupled to BSA and KLH and injected several times in rabbits. The antiserum obtained was obtained by affinity-purified a peptide column.

3. Anti-YB-1 Antikörper als diagnostische und prognostische Marker3. Anti-YB-1 antibodies as diagnostic and prognostic markers

Die Anti-YB-1 Antikörper werden in der immunhistochemischen Analyse von Gewebeschnitten verwendet. Auf Grund der Expression sowie der Verteilung von YB-1 können mehrere Rückschlüsse gezogen werden. Der Nachweis von YB-1 in Geweben, die normalerweise kein YB-1 expremieren, kann zur Unterstützung der Diagnose einer Tumorerkrankung verwendet werden. Die Expressionshöhe von YB-1 in den Tumorzellen und dem angrenzenden benignen Gewebe korreliert mit der rezidivfreien Überlebenszeit der Patienten. Daher kann dieser Nachweis zur Prognose sowie für die Verbesserung der Behandlung bzw. der Nachsorge verwendet werden. Der Nachweis von YB-1 in den Kernen der Tumorzellen ergibt einen zusätzlichen Hinweis auf die Expression von mdr 1 und damit auf die durch das P-Glycoprotein verursachte Multi-drug Resistenz.The anti-YB-1 antibodies are used in immunohistochemical analysis used by tissue sections. Due to the expression as well as the Distribution of YB-1, several conclusions can be drawn. The Detection of YB-1 in tissues that normally do not have YB-1 express, can help diagnose a Tumor disease can be used. The expression level of YB-1 in the tumor cells and the adjacent benign tissue correlates with the relapse-free survival of the patients. Therefore, this can Proof of the prognosis and for the improvement of the treatment or aftercare. The detection of YB-1 in the nuclei of the tumor cells gives an additional indication of the expression of mdr 1 and thus on the multi-drug caused by the P-glycoprotein Resistance.

4. Hemmung der Expression von P324. Inhibition of P32 Expression

Es werden synthetisch erzeugte Antisense-Oligonukleotide verwendet, um die Expression von P32 zu hemmen. Diese Oligonukleotide sind von der Antisense-Sequenz der mRNA von P32 abgeleitet, und führen zu einer Hemmung der Biosynthese von P32, wodurch die zelluläre Konzentration dieses Proteins erniedrigt wird. Es werden u. a. folgende Oligonukleotide verwendet (Aufzählung ist als Beispiel gedacht und nicht vollzählig).Synthetically generated antisense oligonucleotides are used to to inhibit the expression of P32. These oligonucleotides are from the Antisense sequence of the mRNA derived from P32, and lead to one Inhibiting the biosynthesis of P32, causing cellular concentration of this protein is lowered. There will be a. following oligonucleotides used (enumeration is intended as an example and not complete).

  • - 5'-GCA GCA GAG GCA GCA TCG CGG-3'- 5'-GCA GCA GAG GCA GCA TCG CGG-3 '
  • - 5'-CAT CAA ATG TTG GTG GGA TGC-3'- 5'-CAT CAA ATG TTG GTG GGA TGC-3 '

Zur Reduktion des Abbaus im Organismus werden chemisch modifizierte Oligonukleotide verwendet (zum Beispiel Thioate u. ä.)To reduce the breakdown in the organism, chemically modified Oligonucleotides used (for example thioates and the like)

5. Herstellung von Antikörpern gegen P325. Production of antibodies against P32

Es wird ein synthetisches Peptid (PPTFDGEEEPSQGQK) an einen Träger (BSA oder KLH) gebunden und für die Immunisierung von Kaninchen verwendet. Die aus dem Serum der Tiere gewonnenen Antikörper werden für den immunhistochemischen Nachweis von P32 in Tumorproben verwendet. Die Expression und Verteilung von P32 gibt Hinweise auf die intrazelluläre Regulation von YB-1 und ermöglicht damit eine entsprechende Prognose für die weitere Behandlung.It attaches a synthetic peptide (PPTFDGEEEPSQGQK) to a support (BSA or KLH) bound and for immunization of rabbits used. The antibodies obtained from the serum of the animals are for the immunohistochemical detection of P32 in tumor samples used. The expression and distribution of P32 provides information on the intracellular regulation of YB-1 and thus enables corresponding prognosis for further treatment.

6. Verwendung des N-terminalen Peptids MSSEAETQQPPA von YB-1 als therapeutisches Mittel6. Use of the N-terminal peptide MSSEAETQQPPA from YB-1 as a therapeutic agent ZellkulturCell culture

Jeweils 5.103 HeLa-Zellen wurden einmalig mit der angegebenen Peptidmenge behandelt, und nach 36 Stunden mittels eines Prolifertionselisas analysiert. Die dargestellten Werte sind der Durchschnitt von jeweils drei Ansätzen.
In each case 5.10 3 HeLa cells were treated once with the specified amount of peptides and analyzed after 36 hours using a proliferation elisas. The values shown are the average of three approaches each.

Therapietherapy

Das Peptid (Acetylierung-MSSEAETQQPPA-cys) wird synthetisch oder gentechnisch hergestellt und gegebenenfalls zusätzlich modifiziert.The peptide (acetylation-MSSEAETQQPPA-cys) is synthetic or genetically engineered and modified if necessary.

Therapeutische Mengen dieses Peptides werden entweder direkt in einen gut lokalisierten Tumor injiziert, oder das Peptid wird über eine Infusion appliziert. Die Therapie wird je nach Bedarf wiederholt, bzw. mit den gängigen Chemotherapeutika oder anderen Therapien kombiniert.Therapeutic amounts of this peptide are either injected directly into one well-located tumor injected, or the peptide is infused applied. The therapy is repeated as required, or with the common chemotherapy drugs or other therapies combined.

7. Verwendung von YB-1-transfizierten Zelllinien für das Screening von therapeutischen Substanzen7. Use of YB-1 transfected cell lines for screening of therapeutic substances

Es wurden Zelllinien etabliert, die durch ein entsprechendes Plasmid YB-1 konstitutiv überexpremieren. Obwohl die Ausgangszelllinien (z. B. HBL100) nicht tumorigen waren, weisen die Transfektanten zahlreiche Merkmale von Tumorzellen auf (Deregulation einzelner Zellzyklusregulatoren, Expression von mdr1 und damit einen Multi-drug resistenten Phänotyp etc.). Diese Transfektanten sind daher gut für das Screening oder den Test neuer therapeutischer Substanzen geeignet.
siehe beigefügte Skizze:
(pCDN6/YB-1 HA) - Abbildung BCell lines have been established which constitutively overexpress through a corresponding plasmid YB-1. Although the starting cell lines (e.g. HBL100) were not tumorigenic, the transfectants have numerous features of tumor cells (deregulation of individual cell cycle regulators, expression of mdr1 and thus a multi-drug-resistant phenotype etc.). These transfectants are therefore well suited for screening or testing new therapeutic substances.
see attached sketch:
(pCDN6 / YB-1 HA) - Figure B

8. Verwendung von transgenen Mäusen als Tumormodell sowie für die Analyse therapeutischer Substanzen8. Use of transgenic mice as a tumor model and for the Analysis of therapeutic substances

Die Erfinder etablierten transgene Mäuse, die YB-1 durch die Verwendung bestimmter Promotoren gewebespezifisch expremieren (Brustepithel, Thymus). Da die Überexpression von YB-1 sowie die deregulierte Lokalisation entscheidende Schritte bei der Tumorentstehung- und progression sind, stellen diese Mäuse ein gutes Tiermodell für diese Prozesse dar. Diese Mäuse können als Tiermodell allein oder nach Kreuzung mit anderen transgenen Mäusen verwendet werden. Desweiteren können diese Mäuse für die Analyse neuer therapeutischer Substanzen genutzt werden.
siehe beigefügte Skizzen:
Brustepithel (BLG-YB-1 HA) - Abbildung C
T-Zellen (lck-YB-1 HA) - Abbildung DThe inventors established transgenic mice that express tissue-specific YB-1 through the use of certain promoters (breast epithelium, thymus). Since the overexpression of YB-1 and the deregulated localization are crucial steps in tumor development and progression, these mice are a good animal model for these processes. These mice can be used as an animal model alone or after crossing with other transgenic mice. Furthermore, these mice can be used for the analysis of new therapeutic substances.
see attached sketches:
Breast epithelium (BLG-YB-1 HA) - Figure C
T cells (lck-YB-1 HA) - Figure D

Zum Nachweis des transgenen Proteins wurde YB-1 mit einem HA-Tag versehen. To detect the transgenic protein, YB-1 was tagged with an HA Mistake.  

SEQUENZPROTOKOLL SEQUENCE LOG

Claims (25)

1. Mittel zur Therapie maligner Erkrankungen, enthaltend Substanzen zur Absenkung der YB-1 Konzentration oder Substanzen zur Hemmung der Translokation von YB-1 in den Tumorzellen.1. Agent for the therapy of malignant diseases containing substances for lowering the YB-1 concentration or substances for Inhibition of translocation of YB-1 in the tumor cells. 2. Mittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß es zusätzlich an sich bekannte Zytostatika wie Doxorubicin, Adriablastin u. a. enthält.2. Composition according to claim 1, characterized in that it additionally well-known cytostatics such as doxorubicin, adriablastin u. a. contains. 3. Mittel nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß es ein Antisense-Oligonukleotid gegen die YB-1 mRNA enthält.3. Means according to claim 1 or 2, characterized in that it is a Antisense oligonucleotide against the YB-1 mRNA contains. 4. Mittel nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß es ein Ribozym gegen die YB-1 mRNA enthält.4. Means according to claim 1 or 2, characterized in that it is a Contains ribozyme against the YB-1 mRNA. 5. Mittel nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß es ein Adenovirus, das die YB-1-Antisense mRNA produziert, enthält.5. Composition according to claim 1 or 2, characterized in that it is a Adenovirus that produces the YB-1 antisense mRNA. 6. Mittel nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß es Substanzen, die die Interaktion von YB-1 mit P32 hemmen, enthält.6. Composition according to claim 1 or 2, characterized in that it Contains substances that inhibit the interaction of YB-1 with P32. 7. Mittel nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß es Substanzen enthält, die die jeweiligen Bindungsstellen von YB-1 bzw. P32 blockieren.7. Composition according to claim 6, characterized in that there are substances contains the respective binding sites of YB-1 and P32 To block. 8. Mittel nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß es synthetische oder rekombinante Peptide bzw. Polypeptide, die die jeweiligen Bindungsstellen von YB-1 bzw. P32 blockieren, enthält.8. Composition according to claim 7, characterized in that it is synthetic or recombinant peptides or polypeptides that the respective Block binding sites of YB-1 or P32, contains. 9. Mittel nach Anspruch 1, 2 oder 6, dadurch gekennzeichnet, daß es Substanzen, die die Modifikation von YB-1 bzw. P32 verhindert sowie ggf. an sich bekannte Zytostatika enthält.9. Composition according to claim 1, 2 or 6, characterized in that it Substances that prevent the modification of YB-1 or P32 as well possibly contains known cytostatics. 10. Mittel nach Anspruch 1, 2 oder 6, dadurch gekennzeichnet, daß es Substanzen zur Absenkung der zellulären Konzentration von P32 enthält. 10. Composition according to claim 1, 2 or 6, characterized in that it Substances for lowering the cellular concentration of P32 contains.   11. Mittel nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, daß es Antisense- Oligonukleotide gegen die mRNA von P32 sowie ggf. an sich bekannte Zytostatika enthält.11. A composition according to claim 10, characterized in that it is antisense Oligonucleotides against the mRNA of P32 and, if appropriate, known per se Contains cytostatics. 12. Mittel nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, daß es ein Ribozym gegen die mRNA von P32 sowie ggf. an sich bekannte Zytostatika enthält.12. Composition according to claim 10, characterized in that it is a Ribozyme against the mRNA of P32 and possibly known per se Contains cytostatics. 13. Mittel nach Anspruch 1 oder 2, enthaltend Anti-YB-1-Antikörper.13. Composition according to claim 1 or 2, containing anti-YB-1 antibody. 14. Mittel zur Diagnose und Prognose maligner Erkrankungen, dadurch gekennzeichnet, daß es Antikörper gegen YB-1 und/oder gegen P32 enthält.14. Means for the diagnosis and prognosis of malignant diseases, thereby characterized in that it has antibodies against YB-1 and / or against P32 contains. 15. Mittel nach Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet, daß sie in folgenden an sich bekannten Techniken angewandt werden:
  • a) Immunhistochemie/Immunfluoreszenz mit Antikörpern gegen YB-1 bzw. P32,
  • b) In-Situ-Hybridisierungen zum Nachweis der mRNA von YB-1 bzw. P32 in Tumorschnitten,
  • c) ELISA, RIA u. ä. zum quantitativen Nachweis von YB-1 bzw. P32 in Homogenaten,
  • d) Westernblots für den Nachweis von YB-1 bzw. P32 in Homogenaten,
  • e) RT-PCR (semiquantitative, Light-Cycler etc.) zum Nachweis der mRNA von YB-1 bzw. P32 in Homogenaten,
  • f) Northern-Blot, Dot-Blots, Micro-Arrays oder ähnliche Hybridisierungstechniken zum Nachweis der mRNA von YB-1 bzw. P32 in Homogenaten.
15. Composition according to claim 14, characterized in that they are used in the following techniques known per se:
  • a) immunohistochemistry / immunofluorescence with antibodies against YB-1 or P32,
  • b) in-situ hybridizations for the detection of the mRNA of YB-1 or P32 in tumor sections,
  • c) ELISA, RIA and others. for the quantitative detection of YB-1 or P32 in homogenates,
  • d) Western blots for the detection of YB-1 or P32 in homogenates,
  • e) RT-PCR (semiquantitative, light cycler etc.) for the detection of the mRNA of YB-1 or P32 in homogenates,
  • f) Northern blot, dot blots, micro-arrays or similar hybridization techniques for the detection of the mRNA of YB-1 or P32 in homogenates.
16. Mittel zur Therapie maligner Erkrankungen nach Anspruch 1 bis 14, dadurch gekennzeichnet, daß die aufgeführten Substanzen durch gentherapeutische Vektoren in die Tumorzellen eingebracht werden.16. Agent for the therapy of malignant diseases according to claim 1 to 14, characterized in that the substances listed by gene therapy vectors are introduced into the tumor cells. 17. Verfahren zur Diagnose, Prognose und Therapie maligner Erkrankungen, insbesondere bei Karzinomen (Mamma-, Ovarial-, Prostatakarzinome etc.), Sarkomen (Osteosarkomen), malignen Melanomen, sowie Hirntumoren (Glioblastomen, etc.), dadurch gekennzeichnet, daß die Höhe der YB-1 Expression in Gewebeschnitten ermittelt und als Grundlage einer gezielten zusätzlichen Behandlung bzw. Nachsorge verwendet wird.17. Methods for diagnosis, prognosis and therapy of malignant Diseases, especially in the case of carcinomas (breast, ovarian, Prostate cancer etc.), sarcomas (osteosarcomas), malignant Melanomas, as well as brain tumors (glioblastomas, etc.), thereby  characterized in that the level of YB-1 expression in Tissue sections determined and as the basis of a targeted additional treatment or aftercare is used. 18. Peptid MSSEAETQQPPA sowie davon abgeleitete Mutanten und Varianten und andere von YB-1 abgeleitete Peptide, die die gleichen Eigenschaften aufweisen, und selektiv Tumorzellen hemmen.18. Peptide MSSEAETQQPPA and mutants derived therefrom and Variants and other peptides derived from YB-1 that are the same Have properties and selectively inhibit tumor cells. 19. Peptid mit der Aminosäuresequenz MSSEAETQQPPA.19. Peptide with the amino acid sequence MSSEAETQQPPA. 20. Antikörper, die spezifisch für YB-1 sind und ein oder mehrere Peptide der Ansprüche 18 bis 19 erkennen.20. Antibodies specific for YB-1 and one or more peptides of claims 18 to 19 recognize. 21. Verwendung mindestens eines Peptides der Ansprüche 18 oder 19 ggf. in Kombination mit anderen Zytostatika zur Herstellung eines Antitumormittels.21. Use of at least one peptide of claims 18 or 19 possibly in combination with other cytostatics to produce a Antitumor agent. 22. Verwendung nach Anspruch 21 zur Generierung einer effektiven Tumorvakzine zur Bekämpfung von malignen Erkrankungen (insbesondere Karzinome (Mamma-, Ovarial-, Prostatakarzinome etc.), Sarkome (Osteosarkomen), maligne Melanome, sowie Hirntumore (Glioblastome, etc.)) im Sinne einer aktiven spezifischen Immunisierung im tumor-therapeutischen Kontext.22. Use according to claim 21 for generating an effective Tumor vaccine to fight malignant diseases (especially carcinomas (breast, ovarian, prostate carcinomas etc.), sarcomas (osteosarcomas), malignant melanomas, as well Brain tumors (glioblastomas, etc.) in the sense of an active specific Immunization in the context of tumor therapy. 23. Antikörper, die spezifisch für P32 sind.23. Antibodies specific for P32. 24. Zelllinien, die durch ein entsprechendes Plasmid YB-1 konstitutiv überexpremieren, zum Screening oder den Test von therapeutischen Substanzen.24. Cell lines constitutive by a corresponding plasmid YB-1 overexpress, for screening or testing therapeutic Substances. 25. Transgene Kleinsäuger, vorzugsweise Mäuse, die YB-1 gewebespezifisch exprimieren, zur Testung therapeutischer Substanzen.25. Transgenic small mammals, preferably mice, the YB-1 express tissue-specific, for testing therapeutic Substances.
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