DE10009410A1 - Identifying agents that reduce presentation of antigens in liver sinus endothelial cells comprises identifying substances which inhibit major histocompatability complex (MHC)-1 in sinus endothelial cells - Google Patents

Identifying agents that reduce presentation of antigens in liver sinus endothelial cells comprises identifying substances which inhibit major histocompatability complex (MHC)-1 in sinus endothelial cells

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Abstract

Discovering substances (I) that reduce or inhibit major histocompatibility complex (MHC)-1 restricted presentation of antigens (Ag) in sinus endothelial cells (A) of the liver, is new. Discovering substances (I) which reduce or inhibit MHC-1 restricted presentation of antigens (Ag) in sinus endothelial cells (A) of the liver, comprises: (i) incubating (A) with ovalbumin, CD8+ T cells and a test compound, respectively, where the test substance is a known inhibitor of Ag; (ii) measuring the release of interleukin-2 (IL-2) caused by Ag-specific activation of the effector cells; and (iii) comparing the results with (A) that was incubated with an un-processed peptide. The effector cells are specific for the peptide SIINFEKL (II), which is used as a control antigen. The reference substance is a composition containing parapoxvirus ovis or CpG-containing oligonucleotide, reducing cross-presentation in (A). ACTIVITY : Cytoprotective; hepatic. No biological data was provided. MECHANISM OF ACTION : Inhibition of MHC-I restricted antigen presentation and thus reduction in release of interleukin-2. No biological data was provided.

Description

Es ist bekannt, dass die Leber die Entwicklung immunologischer Toleranz be­ günstigt. So führt z. B. die Applikation von Antigen über die Pfortader zur Leber im Gegensatz zur systemischen Applikation von Antigen schnell zu Toleranz oder Anergie [1, 2]. Eine organspezifische Immunantwort durch organresidente Zellen erklärt eine Reihe von Beobachtungen über unterschiedliche systemische und lokale Immunreaktionen [3, 4]. Der Mechanismus der Regulation der leberspezifischen Immunantwort ist jedoch weitgehend unbekannt, da wenig über die lokalen antigen­ präsentierenden Zellen in der Leber bekannt ist. Kürzlich konnte gezeigt werden, dass Zellen der Lebersinusendothelien (LSEC, Liver Sinusoidal Endothelial Cells) in der Lage sind, CD4+ T Zellen (CD4 positive T-Zellen) zu aktivieren und LSEC ebenfalls die Fähigkeit haben, als antigenpräsentierende Zellen zu wirken. [5, 6]. Neben der Fähigkeit, Antigen effektiv durch rezeptorvermittelte Endozytose aufzu­ nehmen, exprimieren LSEC alle notwendigen kostimulatorischen Moleküle, um CD4+ T Zellen antigenspezifisch zu aktivieren. Die Aktivierung von CD4+ T Zellen durch LSEC lässt darauf schließen, dass LSEC an der Überwachung der Leber durch das Immunsystem beteiligt ist. Die Präsentation eines viralen Antigens durch LSEC würde 1) spezifische CD4+ T Zellen aus dem Blut in die Leber rekrutieren und 2) die T Zellen aktivieren. Dies würde zu einer verstärkten Immunantwort in der Leber mit Ausbildung einer Nekroinflammation (einer Hepatitis) führen. Auf der anderen Seite haben LSEC die Fähigkeit, solche CD4+ T Zellen zu aktivieren, die bis dahin noch nie aktiviert worden sind und als naive T Zellen bezeichnet werden. Werden naive CD4+ T Zellen durch LSEC aktiviert, kommt es aber nicht wie nach Aktivierung durch konventionelle antigen-präsentierende Zellen zu einer Differenzierung zu Th 1 T Zellen [7]. Th 1 T Zellen verstärken die zelluläre Immunantwort durch Sekretion von Botenstoffen und auch durch Verbesserung der Aktivität von zytotoxischen CD8+ T Zellen. LSEC fördern also nicht die Entwicklung einer effizienten Immun­ antwort, wenn das Antigen dem Immunsystem zuerst in der Leber präsentiert wird. Vielmehr werden durch LSEC regulatorische T Zellen induziert, die zur Induktion von immunologischer Toleranz beitragen. Dies kann auf mehreren Ebenen durch Sekretion von negativ immunmodulatorisch wirksamen Botenstoffen, als auch durch bisher unbekannte Mechanismen erfolgen [8].The liver is known to develop immunological tolerance favorable. So z. B. the application of antigen via the portal vein to the liver in Contrary to the systemic application of antigen quickly to tolerance or Anergy [1, 2]. An organ-specific immune response from organ-resident cells explains a number of observations about different systemic and local Immune reactions [3, 4]. The mechanism of regulation of liver-specific However, immune response is largely unknown because little is known about the local antigen presenting cells in the liver is known. Recently it could be shown that cells of the liver sinus endothelial cells (LSEC, Liver Sinusoidal Endothelial Cells) in are able to activate CD4 + T cells (CD4 positive T cells) and LSEC also have the ability to act as antigen presenting cells. [5, 6]. In addition to the ability to effectively raise antigen through receptor-mediated endocytosis take, LSEC express all the necessary costimulatory molecules in order to To activate CD4 + T cells antigen-specific. Activation of CD4 + T cells by LSEC suggests that LSEC is involved in monitoring the liver the immune system is involved. The presentation of a viral antigen by LSEC would 1) recruit specific CD4 + T cells from the blood into the liver and 2) the Activate T cells. This would lead to an increased immune response in the liver Lead to the formation of necroinflammation (hepatitis). On the other hand LSEC have the ability to activate those CD4 + T cells that have so far have never been activated and are called naive T cells. Be naive CD4 + T cells activated by LSEC, but it does not come as after activation by conventional antigen-presenting cells to differentiate into Th 1 T cells [7]. Th 1 T cells increase the cellular immune response through secretion of messenger substances and also by improving the activity of cytotoxic CD8 + T cells. So LSEC do not promote the development of an efficient immune system answer if the antigen is first presented to the immune system in the liver. Rather, regulatory T cells are induced by LSEC, which are used for induction  contribute from immunological tolerance. This can be done on several levels Secretion of negative immunomodulatory messenger substances, as well previously unknown mechanisms occur [8].

BAYPAMUN® ist eine Präparation von chemisch inaktiviertem Parapoxvirus ovis, Strain D1701. Es ist bekannt, dass Parapoxvirus ovis das Immunsystem in Vertebraten modulieren kann. Wie gezeigt worden ist, bewirkt BAYPAMUN® einen Schutz gegen Infektionen mit verschiedenen Viren. Dieser Schutz wird durch die Induktion von Zytokinen, die Aktivierung natürlicher Killerzellen, die Freisetzung von koloniestimulierenden Faktoren und die Stimulation der Lymphozytenproli­ feration bewirkt (DE 35 04 940). BAYPAMUN® wird für die Prophylaxe, Metaphy­ laxe und Therapie von Infektionserkrankungen sowie der Prävention von stressindu­ zierten Erkrankungen bei Tieren eingesetzt. Die Wirkung speziell gegen durch Viren hervorgerufene Infektionskrankheiten am Menschen, die Verwendung als Arznei­ mittel zum Schutz der Leber und die Anwendung am Menschen wird in DE 35 04 940 beschrieben.BAYPAMUN® is a preparation of chemically inactivated parapoxvirus ovis, Strain D1701. It is known that parapoxvirus ovis the immune system in Can modulate vertebrates. As has been shown, BAYPAMUN® does one Protection against infections with various viruses. This protection is provided by the Induction of cytokines, the activation of natural killer cells, the release of colony stimulating factors and stimulation of the lymphocyte proliferation feration causes (DE 35 04 940). BAYPAMUN® is used for prophylaxis, metaphy lax and treatment of infectious diseases and the prevention of stress indu graced diseases used in animals. The effect against viruses caused infectious diseases in humans, use as a medicine DE 35 04 940 describes agents for protecting the liver and use on humans described.

Der derzeitige Wissensstand erklärt allerdings noch nicht, weshalb BAYPAMUN® zwar einerseits hervorragend gegen virale Infektionen der Leber wirkt, jedoch andererseits selbst keine Schädigung der Leber als Folge der zellvermittelten Immunabwehr verursacht.However, the current state of knowledge does not yet explain why BAYPAMUN® on the one hand, has an excellent effect against viral infections of the liver, however on the other hand, no damage to the liver itself as a result of the cell-mediated Immune defense caused.

Dies erscheint zunächst überraschend, da man aufgrund der massiven Induktion der zellulär vermittelten Immunantwort durch BAYPAMUN® auch eine Immunantwort gegen die mit Antigenen bedeckte Leber erwarten müsste.This seems surprising at first, because due to the massive induction of the cellularly mediated immune response by BAYPAMUN® also an immune response against the liver covered with antigens.

Ausgehend von der Tatsache, dass BAYPAMUN® also einerseits hervorragend immunvermittelt antiviral Wirkt, andererseits aber noch nie leberschädigende Effekte durch BAYPAMUN® beobachtet wurden, wird gefolgert, dass BAYPAMUN® neben seiner antiviralen Wirkkomponente über eine spezifische immunologische, die Leberzelle schützende Wirkung, verfügt. Based on the fact that BAYPAMUN® is excellent on the one hand Immune-mediated, antiviral, but on the other hand never has liver-damaging effects observed by BAYPAMUN®, it is concluded that BAYPAMUN® in addition to its antiviral active component via a specific immunological, the Liver cell protective effect.  

Es stellt sich daher die Aufgabe, herauszufinden, worin der für dieses Phänomen ursächliche Mechanismus liegt, mit dem Ziel, ein neues Verfahren für das Auffinden von anderen, die Leber nach diesem Mechanismus schützenden Stoffen zur Ver­ fügung zu stellen um mit Hilfe dieses Verfahrens solche Stoffe zu finden.The task therefore is to find out what is the cause of this phenomenon The causal mechanism lies with the aim of finding a new method by other substances protecting the liver according to this mechanism to provide to find such substances with the help of this process.

Nachfolgend wird der dieser spezifischen Wirkungskomponente von BAYPAMUN® zugrundeliegende Mechanismus aufgeklärt und eine Methode aufgezeigt, nach der sich Stoffe, die nach diesem Mechanismus leberschützend wirken können, auffinden lassen.The following is the specific component of BAYPAMUN® underlying mechanism is elucidated and a method is shown according to which find substances that can protect the liver according to this mechanism to let.

Folgende neue Erkenntnisse wurden jetzt als Ergebnis der Untersuchungen erhalten: Sinusoidale Endothelzellen der Leber (LSEC) sind in der Lage, exogenes Antigen, z. B. Ovalbumin, auf MHC-I Molekülen für zytotoxische CD8+ T Zellen zu präsen­ tieren. Weiter wird erkannt, dass die Präsentation von Fremdantigen mittels MHC I auf LSEC durch BAYPAMUN® vermindert wird. BAYPAMUN® verhindert die Pro­ zessierung von Antigen in LSEC, behindert aber nicht die akzessorische Funktion der LSEC. Werden z. B. LSEC mit dem Peptid SIINFEKL beladen (Antigen-Pro­ zessierung ist in diesem Fall für eine T-Zellaktivierung nicht notwendig), beeinflußt BAYPAMUN® nicht die T-Zellaktivierung. Die Regulation der Antigen-Prozes­ sierung der LSEC durch BAYPAMUN® kann also die Leber vor dem schädlichen Einfluß aktivierter zytotoxischer T Zellen schützen und stellt deshalb ein Prinzip zur Verhinderung von Leberschäden dar. Die T-Zellen widerum können ihrerseits unabhängig von den LSEC durch BAYPAMUN® aktiviert werden.The following new findings have now been obtained as a result of the investigations: Sinusoidal endothelial cells of the liver (LSEC) are able to exogenous antigen, e.g. B. ovalbumin, on MHC-I molecules for cytotoxic CD8 + T cells animals. It is also recognized that the presentation of foreign antigen using MHC I is reduced to LSEC by BAYPAMUN®. BAYPAMUN® prevents the Pro cessation of antigen in LSEC, but does not hinder the accessory function of the LSEC. Are z. B. Load LSEC with the SIINFEKL peptide (Antigen-Pro In this case, cessation is not necessary for T cell activation) BAYPAMUN® does not activate T cells. The regulation of the antigen process The BECPAMUN® can therefore prevent the liver from harming the LSEC Protect the influence of activated cytotoxic T cells and therefore provides a principle Prevention of liver damage. The T cells can turn can be activated independently of the LSEC by BAYPAMUN®.

Basierend auf diesen Erkenntnissen wird ein neues Verfahren zur Auffindung von Substanzen, die die MHC-I restringierte Präsentation von Antigen in Sinusoidalen Endothelzellen der Leber (LSEC) vermindern oder verhindern, entwickelt.Based on these findings, a new method for finding Substances that restrict the MHC-I presentation of antigen in sinusoidals Endothelial cells of the liver (LSEC) reduce or prevent developed.

Dieses Verfahren basiert auf einem Testsystem, in dem Testsubstanzen, LSEC- Zellen, Effektorzellen, ein Indikatorsystem, eine Referenzsubstanz, und ein Kontrollpeptid, eingesetzt werden. Als Referenzsubstanz wird vorzugsweise BAYPAMUN® verwendet; als Referenzssubstanz gleichfalls geeignet sind Zubereitungen, die. Parapoxvirus ovis in aktiver oder inaktiver Form oder geeignete Teile davon verwenden. Gleichfalls können als Referenzsubstanz Zubereitungen, die CpG- Oligonukleotide enthalten, verwendet werden. Als Kontrollpeptid wird insbesondere SINFEKL verwendet. Die LSEC-Zellen und Effektorzellen müssen Spezifität für ein Peptid haben, das an MHC-I bindet, und nicht prozessiert werden muss.This procedure is based on a test system in which test substances, LSEC Cells, effector cells, an indicator system, a reference substance, and a control peptide,  be used. BAYPAMUN® is preferably used as the reference substance used; Preparations which are also suitable as reference substances. Parapoxvirus ovis in active or inactive form or suitable parts thereof use. Preparations containing CpG- Contain oligonucleotides can be used. As a control peptide in particular SINFEKL used. The LSEC cells and effector cells need specificity for one Have peptide that binds to MHC-I and does not need to be processed.

Wesentlich für das erfindungsgemässe Verfahren ist die Verwendung von LSEC, spezifischen Effektorzellen, adäquaten Spezifitätskontrollen, einem Indikatorsystem, das Informationen über T Zellfunktionen liefert, und einer die MHC-Klasse I restringierte Präsentation von Antigen in LSEC verhindernden Referenzsubstanz.The use of LSEC is essential for the method according to the invention, specific effector cells, adequate specificity controls, an indicator system, which provides information about T cell functions, and one of the MHC class I restricted presentation of antigen in LSEC-preventing reference substance.

Die Verwendung von leberspezifischen antigen-präsentierenden Zellen (LSEC) ist besonders wichtig, da gravierende funktionelle Unterschiede in der Funktion von antigen-präsentierenden Zellen aus anderen Organen bestehen.The use of liver-specific antigen-presenting cells (LSEC) is particularly important, since there are serious functional differences in the function of antigen-presenting cells consist of other organs.

Wesentlich ist weiter, LSEC-Zellen und Effektorzellen mit Spezifität für das Peptid SIINFEKL oder auch Peptide, die in diesem Zusammenhang gleichwirkend mit SIINFEKL sind, zu verwenden.It is also important to have LSEC cells and effector cells with specificity for the peptide SIINFEKL or peptides, which have the same effect in this context SIINFEKL are to be used.

Weiter ist es von Vorteil, als Effektorzellen CD8 positive T-Zellen, z. B. RF33-70, zu verwenden.It is also advantageous to use CD8 positive T cells, e.g. B. RF33-70, too use.

Ein in dem erfindungsgemässen Verfahren mit Vorteil verwendetes Indikatorsystem für die Messung der MHC-I restringierten Präsentation von Antigen in Sinus Endo­ thelzellen der Leber ist Interleukin 2.An indicator system used with advantage in the method according to the invention for the measurement of the MHC-I restricted presentation of antigen in sinus endo The cell of the liver is interleukin 2.

Das erfindungsgemässe Verfahren eignet sich insbesondere für Screeningunter­ suchungen zur Auffindung von Stoffen, die die MHC-I restringierte Präsentation von Antigen in LSEC vermindern oder verhindern. Unter verhindern oder vermindern ist in diesem Zusammenhang eine Senkung der Interleukin 2 Freisetzung zu verstehen, die zumindest der in dem jeweilig verwendeten System für BAYPAMUN® zu beob­ achtenden Wirkung entspricht. Stoffe, die in dem erfindungsgemässen Verfahren die MHC-I restringierte Präsentation von Antigen in Sinus Endothelzellen der Leber ver­ mindern oder verhindern, können entweder direkt oder in modifizierter Form zur Herstellung hepatoprotektiver Arzneimittel verwendet werden.The method according to the invention is particularly suitable for screening sub Searches to find substances that restrict the MHC-I presentation of Reduce or prevent antigen in LSEC. Under is prevent or diminish  in this context to understand a decrease in interleukin 2 release, to observe at least those in the system used for BAYPAMUN® equivalent effect. Substances that in the inventive method MHC-I restricted presentation of antigen in sinus endothelial cells of the liver ver reduce or prevent, either directly or in a modified form Production of hepatoprotective drugs can be used.

1. Testbeschreibung1. Test description

Murine sinusoidale Endothelzellen der Leber werden durch Perfusion der Leber und anschliessende Aufreinigung der Zellen durch Dichtegradientenzentrifugation und zentrifugale Elutriation gewonnen. Dafür erfolgt zunächst eine Kanülierung der V. portae und Perfusion der Leber mit 38°C warmer, Collagenase A (0.05%) haltiger, Ca++ freier Lösung, für 30 Sekunden. Danach wird die Leber mechanisch zerkleinert und bei 37°C im rotatorischen Schüttelwasserbad in Gegenwart von 0.05% Collagenase A in Gey's Balanced Salt Solution (GBSS) inkubiert. Die zerkleinerte Leber wird nun mehrfach in GBSS bei 300 g gewaschen. Es folgt eine Abtrennung der lebenden Zellen und Aufkonzentrierung der Nichtparenchym-Zellen gegenüber den Hepatozyten durch eine Dichtegradientenzentrifugation mit Metrizamid 1.089 g/cm3 für 25 Minuten bei 1300 g. Nach erneutem Waschen der bereits für Nicht­ parenchym-Zellen angereicherten Zellen wird eine Separation in sinusoidale Endothelzellen und Kupffer-Zellen durch zentrifugale Elutriation vorgenommen. Dies erfolgt bei einer mit einem JE-6B Rotor (Beckman) in einer für Elutriation ausgerüsteten Ultrazentrifuge (Avanti-J251, Beckman) bei einer Rotorgeschwindig­ keit von 2500 rpm. Das Laden der Zellen in die Elutriationskammer erfolgt bei einer Flussgeschwindigkeit der Membranpumpe von 12 ml/min. Sinusoidale Endothel­ zellen werden bei einer Geschwindigkeit von 23 ml/min gewonnen, Kupffer Zellen bei 55 ml/min. Die so gewonnenen Endothelzellen sind zu 95% rein gemessen an der Aufnahme von fluoreszenzmarkiertem, azetylietrtem LDL und der Expression von CD4. Murine sinusoidal endothelial cells of the liver are obtained by perfusion of the liver and subsequent purification of the cells by density gradient centrifugation and centrifugal elutriation. To do this, the portae is cannulated and the liver perfused with a 38 ° C warm, collagenase A (0.05%) containing Ca ++ free solution for 30 seconds. The liver is then broken up mechanically and incubated at 37 ° C. in a rotary shaking water bath in the presence of 0.05% collagenase A in Gey's Balanced Salt Solution (GBSS). The crushed liver is now washed several times in GBSS at 300 g. The living cells are separated and the non-parenchyma cells are concentrated in relation to the hepatocytes by density gradient centrifugation with metrizamide 1,089 g / cm 3 for 25 minutes at 1300 g. After washing the cells that have already been enriched for non-parenchyma cells, they are separated into sinusoidal endothelial cells and Kupffer cells by centrifugal elutriation. This is done with a JE-6B rotor (Beckman) in an ultracentrifuge equipped for elutriation (Avanti-J251, Beckman) at a rotor speed of 2500 rpm. The cells are loaded into the elutriation chamber at a membrane pump flow rate of 12 ml / min. Sinusoidal endothelial cells are obtained at a rate of 23 ml / min, Kupffer cells at 55 ml / min. The endothelial cells obtained in this way are 95% pure measured by the absorption of fluorescence-labeled, acetylated LDL and the expression of CD4.

Sinusoidale Endothelzellen werden in einer Konzentration von 500.000 Zellen in einer mit Collagen Typ I beschichteten 24 weil Platte in Dulbecco's Modified Eagle's Medium supplementiert mit 2% Glutamin, 10% fötalem Kälberserum und 1% Pen./Strep. kultiviert. Ein Mediumwechsel erfolgt alle 24 Stunden. Als Mess­ parameter für die funktionelle Analyse der Kreuzpräsentation dient die Aktivierung einer Ovalbumin-spezifischen MHC-I restringierten CD8+ T Zelllinie (RF33-70), die nach antigenspezifischer Aktivierung IL-2 sezerniert. Die Aufnahme von Antigen, in diesem Falle Ovalbumin, durch sinusoidale Endothelzellen, wurde im Durchfluss­ zytometer bestimmt. Hierzu wurde Fluoreszenzmarkiertes (Texas-Rot) Ovalbumin verwendet. Bereits nach wenigen Minuten wird Ovalbumin in geringen Konzen­ trationen spezifisch nur von sinusoidalen Endothelzellen, nicht aber von Kupffer- Zellen und Hepatozyten aufgenommen.Sinusoidal endothelial cells are found in a concentration of 500,000 cells one coated with Type I collagen 24 because plate in Dulbecco's Modified Eagle's Medium supplemented with 2% glutamine, 10% fetal calf serum and 1% Pen./Strep. cultured. The medium is changed every 24 hours. As a measurement Activation serves as a parameter for the functional analysis of the cross presentation an ovalbumin-specific MHC-I restricted CD8 + T cell line (RF33-70), which secreted after antigen-specific activation. The uptake of antigen, in In this case ovalbumin, through sinusoidal endothelial cells, was in flow cytometer determined. Fluorescence-labeled (Texas red) ovalbumin was used for this used. After just a few minutes, ovalbumin is produced in small concentrations specific only from sinusoidal endothelial cells, but not from Kupffer Cells and hepatocytes added.

Zum Testen der Kreuzpräsentation, also der MHC-I restringierten Präsentation von exogenen Antigenen für CD8+ T Zellen werden sinusoidale Endothelzellen mit Ovalbumin in einer Konzentration von 100 µg/ml für zwei Stunden inkubiert. Danach werden die sinusoidalen Endothelzellen gründlich gewaschen, um nicht aufge­ nommenes Ovalbumin aus der Kultur zu entfernen. Dann werden 1 × 106 RF33-70 Zellen zu den mit Antigen vorbehandelten sinusoidalen Endothelzellen (SEC) gegeben und für 18 Stunden inkubiert. Im Überstand der Zellkultur wird mittels IL-2 spezifischem Sandwich ELISA die Konzentration an IL-2 quantitativ bestimmt, das als Folge der antigenspezifischen Aktivierung von RF33-70 sezerniert worden ist. Als Kontrolle wird stets das Peptid SIINFEKL benutzt, das von den CD8+ Zellen (RF33-70) erkannt wird. Damit kann zwischen der MHC I Expression der sinusoidalen Endothelzellen und der antigen-prozessierenden Funktion unterschieden werden. Das Kontroll-Peptid dagegen bindet direkt an der Oberfläche an MHC-I und muss nicht prozessiert werden. To test the cross presentation, ie the MHC-I restricted presentation of exogenous antigens for CD8 + T cells, sinusoidal endothelial cells are incubated with ovalbumin in a concentration of 100 µg / ml for two hours. The sinusoidal endothelial cells are then washed thoroughly in order to remove ovalbumin which has not been taken up from the culture. Then 1 × 10 6 RF33-70 cells are added to the antigen-treated sinusoidal endothelial cells (SEC) and incubated for 18 hours. In the supernatant of the cell culture, the concentration of IL-2, which has been secreted as a result of the antigen-specific activation of RF33-70, is quantified using an IL-2-specific sandwich ELISA. The SIINFEKL peptide, which is recognized by the CD8 + cells (RF33-70), is always used as a control. A distinction can thus be made between the MHC I expression of the sinusoidal endothelial cells and the antigen-processing function. The control peptide, on the other hand, binds to MHC-I directly on the surface and does not have to be processed.

Tabelle 1 Table 1

Aus Tabelle 1 lassen sich die folgende Erkenntnisse gewinnen:
Sinusoidale Endothelzellen der Leber (LSEC) sind in der Lage, exogenes Antigen auf MHC-I für CD8+ T Zellen zu präsentieren. Diese Fähigkeit der Kreuz­ präsentation von LSEC ist bisher nicht beschrieben worden.The following findings can be obtained from Table 1:
Sinusoidal endothelial cells of the liver (LSEC) are able to present exogenous antigen on MHC-I for CD8 + T cells. This ability of the cross presentation of LSEC has not been described so far.

Neu ist ebenfalls, dass BAYPAMUN® die Kreuzpräsentation durch sinusoidale Endothelzellen vermindert: Die Kreuzpräsentation wird bereits durch geringe Konzentrationen von BAYPAMUN® inhibiert.Also new is that BAYPAMUN® the cross presentation by sinusoidal Endothelial cells diminished: The cross presentation is already reduced Concentrations of BAYPAMUN® inhibited.

Die Aktivierung von T-Zellen durch peptidgepulste sinusoidale Endothelzellen wird durch BAYPAMUN® nicht beeinflusst, vielmehr kommt es eher zu einer Steigerung der T-Zell-Aktivierung. Dies belegt, dass die Prozessierung und MHC-I restringierte Präsentation von Antigen in sinusoidalen Endothelzellen durch BAYPAMUN® verhindert wird. The activation of T cells by peptide-pulsed sinusoidal endothelial cells is not influenced by BAYPAMUN®, rather there is one Increase in T cell activation. This proves that the processing and MHC-I restricted presentation of antigen in sinusoidal endothelial cells by BAYPAMUN® is prevented.  

Literaturliterature

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Claims (4)

1. Verfahren zur Auffindung von Substanzen, die die MHC-I restringierte Präsentation von Antigen in Sinus-Endothelzellen der Leber (LSEC-Zellen) vermindern oder verhindern, gekennzeichnet dadurch, dass sinusoidale Endothelzellen der Leber zunächst mit Ovalbumin inkubiert werden und diese LSEC-Zellen danach zusammen mit CD8-positiven T-Zellen als Effektor­ zellen und einer Testsubstanz oder einer Referenzsubstanz, die die MHC- Klasse I restringierte Präsentation von Antigen in LSEC verhindert, und einem Kontrollpeptid, das nicht prozessiert werden muss, inkubiert werden, und dass die in Folge der antigenspezifischen Aktivierung der CD8-positiven T-Zellen erfolgende Interleukin-2 Ausschüttung im Vergleich von Testsub­ stanz, Referenzsubstanz und Kontrollantigen gemessen wird, und dass LSEC- Zellen und Effektorzellen (letztere mit Spezifität für das Peptid SIINFEKL) verwendet werden und SIINFEKL als Kontrollantigen verwendet wird, und dass als Referenzsubstanz für die Verwendung oder Verminderung der Kreuzpräsentation des LSEC Parapoxvirus ovis oder CpG-Oligonucleotid enthaltende Zubereitungen verwendet werden.1. A method for the detection of substances that reduce or prevent the MHC-I restricted presentation of antigen in sinus endothelial cells of the liver (LSEC cells), characterized in that sinusoidal endothelial cells of the liver are first incubated with ovalbumin and these LSEC cells then incubated together with CD8 positive T cells as effector cells and a test substance or a reference substance which prevents the MHC class I restricted presentation of antigen in LSEC and a control peptide which does not have to be processed, and that the in As a result of the antigen-specific activation of the CD8-positive T cells, interleukin-2 secretion is measured in comparison of the test substance, reference substance and control antigen, and that LSEC cells and effector cells (the latter with specificity for the peptide SIINFEKL) are used and SIINFEKL as control antigen is used, and that as a reference substance for use ode r Reduction of the cross presentation of the LSEC parapoxvirus ovis or preparations containing CpG oligonucleotide can be used. 2. Verfahren gemäss Anspruch 1, bei dem LSEC-Zellen und Effektorzellen mit Spezifität für ein Peptid, das an MHC-I bindet, und nicht prozessiert werden muss, in Verbindung mit einer Referenzsubstanz die in diesem Zusammen­ hang gleichwirkend ist mit Parapoxvirus ovis oder CpG-Oligonucleotid ent­ haltende Zubereitungen, einer Testsubstanz, einem funktionellen Indikator­ system und einem die MHC-I restringierende Präsentation von Antigen in LSEC-Zellen verhindernden Kontrollantigen, das in diesem Zusammenhang gleichwirkend ist mit SIINFEKL, verwendet werden.2. The method according to claim 1, in which the LSEC cells and effector cells Specificity for a peptide that binds to MHC-I and not to be processed must, in conjunction with a reference substance that in this combination hang is equivalent to parapoxvirus ovis or CpG oligonucleotide holding preparations, a test substance, a functional indicator system and a presentation of antigen restricting the MHC-I in LSEC cells prevent control antigen in this context has the same effect as SIINFEKL. 3. Verwendung von Verfahren nach Anspruch 1-2 in Screeninguntersuchungen. 3. Use of methods according to claims 1-2 in screening examinations.   4. Verwendung von Substanzen, die in Verfahren gemäss Anspruch 1-2, die MHC-I restringierte Präsentation von Antigen in Sinus Endothelzellen (LSEC-Zellen) der Leber vermindern oder verhindern, als hepatoprotektive Arzneimittel.4. Use of substances in the process according to claims 1-2, the MHC-I restricted presentation of antigen in sinus endothelial cells (LSEC cells) reduce or prevent the liver as a hepatoprotective Drug.
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CN109416929A (en) * 2016-04-29 2019-03-01 奥克尔姆内特公司 It include the machine learning algorithm that the peptide of positively related feature is presented with native endogenous or exogenous cells processing, transhipment and major histocompatibility complex (MHC) for identifying
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