DE10008319A1

DE10008319A1 - Method for extending proliferation-promoting factors employing membranes and foil materials used particularly for filtration and storage of blood products

Info

Publication number: DE10008319A1
Application number: DE2000108319
Authority: DE
Inventors: Gerhard Bundschuh
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2000-02-17
Filing date: 2000-02-17
Publication date: 2001-08-23

Abstract

The method for extending proliferation-promoting factors employing membranes and foil materials used particularly for filtration and storage of blood products involves filters, filter membranes or foil material submitted to a washing process prior to use, particularly involving rinsing with watery solutions.

Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Abreicherung von proliferationsfördernden Stoffen/ Faktoren aus Membranen oder Folienmaterial, die insbesondere zur Filtration und Aufbewahrung von Blutprodukten Verwendung finden.The invention relates to a method for depleting proliferation-promoting substances / Factors from membranes or film material, particularly for filtration and Storage of blood products can be used.

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, eine Methode zu entwickeln, mit der es gelingt, nachteilige Folgen bei der Verwendung von Filtermembranen oder Folienmaterialien zu vermeiden. Die Aufgabe wurde dadurch gelöst, daß Membranen oder Weichfolien vor ihrer bestimmungsgemäßen Verwendung einer Waschprozedur unterworfen werden, durch die eine Freisetzung von proliferationsfördernden Stoffen verhindert wird.The object of the invention is to develop a method with which it is possible adverse consequences when using filter membranes or film materials avoid. The object was achieved in that membranes or soft films in front of them intended use be subjected to a washing procedure through which Release of proliferation-promoting substances is prevented.

Bei experimentellen Untersuchungen von potentiellen Mitteln zur Hemmung unerwünschten Zellwachstums und von Mitteln mit proliferationshemmender Wirkung auf Tumorzellen ist beobachtet worden, dass Flüssigkeiten, die mittels eines Spritzenvorsatzfilters keimfrei gemacht wurden, beim Passieren von Filtermembranen einen Stoff oder ein Stoffgemisch aus der Membran herauslösen, der/das eine proliferationsbegünstigende Wirkung auf kultivierte Tumorzellen ausübt.In experimental studies of potential means of inhibiting undesirable Cell growth and agents with anti-proliferative effects on tumor cells It has been observed that liquids are germ-free using a syringe filter were made when passing through filter membranes from a substance or a mixture of substances detach from the membrane, which cultivates a proliferation-promoting effect Exerts tumor cells.

Es hat sich überraschenderweise herausgestellt, dass proliferationsfördernde Faktoren aus Filtermembranen und/oder Weichfolien abgereichert bzw. entfernt werden, wenn die Membranen oder Folien einem Waschvorgang, z. B. mit Wasser, unterworfen werden. Dieses Ergebnis ist deshalb überraschend, weil bislang nicht bekannt war, daß Membranen oder Folien derartige proliferationsfördernde Faktoren enthalten.It has surprisingly been found that proliferation-promoting factors Filter membranes and / or soft films are depleted or removed when the Membranes or foils a washing process, e.g. B. with water. This The result is surprising because it was not previously known that membranes or Films contain such proliferation-promoting factors.

Für den Nachweis der Existenz solcher proliferationsbegünstigenden Mittel nach Filterpassage wurde folgendes Experimentalmodell verwendet:For the proof of the existence of such proliferation-promoting agents The following experimental model was used for the filter passage:

Kultivierte Tumorzellen - verwendet wurden im vorliegenden Modell Melanom- sowie Karzinomzellen - werden in geeigneten Kulturflaschen unter Verwendung von Kulturmedium angezüchtet und bis zur Teilungsfähigkeit des Kulturansatzes vermehrt. Danach werden sie mittels Trypsin abgelöst, in Aliquots aufgeteilt und in geeigneten Unterlagen (Plastikschalen) weitergezüchtet. Zum geeigneten Zeitpunkt wird das überstehende Kulturmedium vom Zellrasen entfernt, der zu testende proliferationshemmende Wirkstoff (im konkreten Fall das erfindungsgemäße Mittel zur Proliferationshemmung) auf den Zellrasen gegeben, dieser wieder mit Kulturmedium überschichtet und die Kultur anschließend für etwa 24 Stunden (h) bebrütet. Mitgeführte Leerwertkontrollen (ohne Wirkstoffzugabe) geben bei Abbruch des Versuches Auskunft über die regulär gewachsene, also zu erwartende Zellmenge.Cultivated tumor cells - melanoma and were used in the present model Carcinoma cells - are placed in suitable culture bottles using culture medium grown and propagated until the culture approach is able to divide. After that, they will detached using trypsin, divided into aliquots and in suitable documents (plastic trays) bred further. At the appropriate point in time, the supernatant culture medium from Removed cell turf, the anti-proliferative agent to be tested (in this specific case, the agents according to the invention for inhibiting proliferation) given on the cell turf, this again covered with culture medium and then the culture for about 24 hours (h) incubated. Carried-out blank value checks (without the addition of active ingredient) indicate when the Attempted information about the regularly grown, that is to say expected, amount of cells.

Bei Versuchsende werden alle Zellen mittels Trypsin abgelöst, in Kulturmedium aufgenommen und in einer Zählkammer ausgezählt. Die in den Leerwertkontrollen vorhandene Zellmenge wird als Erwartungsgröße gleich 100% gesetzt. Diejenigen Zellkonzentrationen, die mit dem erfindungsgemäßen Stoff behandelt wurden, werden analog den Leerwerten ausgezählt und zum Erwartungswert in Beziehung gesetzt. Höhere Konzentrationen als im Leerwert stehen für gesteigerte Proliferation, geringere für eine herabgesetzte Proliferation. Um die Ergebnisse aus verschiedenen Versuchsansätzen miteinander vergleichen zu können, werden nicht die absoluten Zellmengen, sondern die jeweiligen Prozentualwerte - bezogen auf den Kontrollansatz - verglichen.At the end of the experiment, all cells are detached using trypsin, in culture medium recorded and counted in a counting chamber. The in the blank value controls existing cell set is set to 100% as the expected quantity. Those Cell concentrations that have been treated with the substance according to the invention are analogous the blank values are counted and related to the expected value. Higher Concentrations than in the blank value stand for increased proliferation, lower ones for one decreased proliferation. To get the results from different experimental approaches To be able to compare with each other is not the absolute number of cells, but the respective percentage values - based on the control approach - compared.

Das Wesen der Erfindung liegt in einer Kombination bekannter Elemente - Membranen, Filter, Filtermembranen, Folien, Folienmaterialien - und neuer Lösungswege - Einschalten von Waschvorgängen vor ihrer bestimmungsgemäßen Verwendung - die sich gegenseitig beeinflussen und in ihrer neuen Gesamtwirkung einen Gebrauchsvorteil und den erstrebten Erfolg ergeben, der darin liegt, daß nunmehr an proliferationsfdrdernden Stoffen abgereicherte Membranen oder Folien zur Verfügung stehen.The essence of the invention lies in a combination of known elements - membranes, Filters, filter membranes, foils, foil materials - and new solutions - switch on of washing processes before their intended use - which are mutual influence and in their new overall effect a use advantage and the desired Success that lies in the fact that now depleted in substances that promote proliferation Membranes or foils are available.

Das erfindungsgemäße Verfahren zur Abreicherung von proliferationsfördernden Faktoren aus Membranen und Folien ist dadurch gekennzeichnet, dass Filter, Filtermembranen oder Folienmaterialien wie Weichfolien vor ihrer bestimmungsgemäßen Verwendung einer Waschprozedur unterworfen werden.The method according to the invention for depleting proliferation-promoting factors Membranes and foils are characterized in that filters, filter membranes or Foil materials such as soft foils prior to their intended use Wash procedure to be subjected.

Das Herauslösen der proliferationsfördernden Stoffe aus den Membranen bzw. Folien geschieht vorzugsweise durch Spülung mittels geeigneter, z. B. wässriger, Lösungen. Sie wird auch dadurch begünstigt, dass den Waschlösungen Stabilisatorlösungen zugesetzt werden. Die erfindungsgemäße Verwendung von an proliferationsbegünstigenden Faktoren auf kultivierte Tumorzellen abgereicherten Membranen und Folien liegt insbesondere in der Filtration und Aufbewahrung von Blutprodukten.The dissolution of the substances that promote proliferation from the membranes or foils is preferably done by rinsing using suitable, for. B. aqueous, solutions. she will also favored by the fact that stabilizer solutions are added to the washing solutions. The use according to the invention of factors which favor proliferation cultured tumor cell-depleted membranes and foils are especially in the Filtration and storage of blood products.

Die Erfindung soll anhand von Ausführungsbeispielen näher erläutert werden, ohne auf diese Beispiele beschränkt zu sein. The invention is to be explained in more detail with reference to exemplary embodiments, without referring to these Examples to be limited.

Embodiments

Bei "Spritzenvorsatzfiltern" (s. u.) handelt es sich um bakteriendichte Membranen, die in Plastikbehältnisse eingeschweißt sind und die im experimentellen Bereich verwendet werden; bei Leukozytenfiltern handelt es sich um analoge Produkte, die jedoch zur Filtration von Blutprodukten dienen. Das leukozytenfrei-gefilterte Blutplasma wird anschließend in Patienten übertragen (transfundiert). Aus der Filtermembran gelöste Produkte gelangen so in den Kreislauf von Patienten. Tragen diese (auch unerkannterweise) Tumorzellen in sich, so besteht auf Grund der oben beschriebenen und nachfolgend belegten Erkenntnis die Gefahr der Tumorbegünstigung."Syringe filters" (see below) are bacteria-proof membranes, which in Plastic containers are sealed and used in the experimental field; leukocyte filters are analog products, but they are used for the filtration of Serve blood products. The leukocyte-free filtered blood plasma is then in Transfer patient (transfused). Products released from the filter membrane thus enter the circulation of patients. They carry these (also unrecognized) tumor cells, so there is a danger due to the knowledge described above and documented below the tumor favor.

Tab. I Tab. I

Befunde durch Spritzenvorsatzfilter Findings from syringe filters

Tab. II Tab. II

Befunde durch Leukozytenfilter Findings from leukocyte filters

III

Werte nach ein- bzw. (unten) nach zweimaliger Behandlung Values after one or (below) after two treatments

Eine Behandlung (Dreifachansatz, Werte 1, 2,3) One treatment (triple approach, values 1, 2,3)

Zwei Behandlungen (Zweifachansatz, Werte 2, 3) Two treatments (double approach, values 2, 3)

Die Versuche belegen eine Steigerung von Zellwachstum durch proliferationsfördernde Faktoren aus Filtermembranen oder Folienmaterialien.The experiments demonstrate an increase in cell growth through proliferation-promoting Factors from filter membranes or film materials.

Von besonderer Brisanz müssen die Werte der Tabelle III jeweils untere Spalte gesehen werden: Med. = Medium (Kulturnährmedium) wurde über 12 h im Filter belassen, danach entnommen und 100 µl davon auf den Zellkulturrasen gegeben. Blutprodukte verbleiben nach der Filtration zwar nicht im Leukozytenfilter, wie hier im Experiment, sondern werden in Weichfolienbeutel überführt und in diesen Behältnissen gelagert. In Tab. II (vierte Zeile) ist ein solches Ergebnis nachgebildet: Untersucht wurde Stabilisatorlösung, die im Blutbeutel gelagert wurde, die Steigerung bezogen auf den "Erwartungswert" beträgt 5,1%. Der Wert wurde in der Tabelle in Klammern gesetzt, da als exakte Bezugsgröße die gleiche Stabilisatorlösung hätte untersucht werden müssen, die statt im Beutel gelagert aus Glasflaschen zu entnehmen gewesen wäre.The values in Table III in the lower column must be particularly explosive become: Med. = medium (culture medium) was left in the filter for 12 h, then removed and 100 ul of it placed on the cell culture lawn. Blood products remain the filtration is not in the leukocyte filter, as here in the experiment, but in Soft film bags transferred and stored in these containers. In Tab. II (fourth line) is simulated such a result: The stabilizer solution in the blood bag was examined was stored, the increase based on the "expected value" is 5.1%. The value was put in brackets in the table because the same reference value is the same Stabilizer solution should have been examined instead of being stored in the bag Glass bottles would have been removed.

Bis zum Beweis des Gegenteils muß weiterhin davon ausgegangen werden, daß auch andere Weichfolienbehältnisse, wie sie z. B. in der Verpackungsindustrie für Lebensmittel (insbesondere für fetthaltige) umfangreich verwendet werden, während der Lagerung der so verpackten Lebensmittel analoge Stoffe freigesetzt werden und in die Nahrungskette gelangen.Until proven otherwise, it must still be assumed that others Soft film containers, such as those used for. B. in the packaging industry for food (especially for fatty ones) can be used extensively while storing the sun packaged food analog substances are released and into the food chain reach.

Das Herauslösen des proliferationsfördernden Stoffes aus den Membranen bzw. Weichfolien durch Spülung mittels geeigneter, z. B. wässriger Lösungen (wie in den Tab. I-III gezeigt), zeichnet einen erfindungsgemäßen Weg vor. Durch Waschprozeduren der Membranen und Folien bzw. Verpackungsmaterialien vor der Verarbeitung zu den gewünschten Endprodukten in geeigneten Spüllösungen können die proliferationsfördernden Stoffe entfernt werden.The dissolution of the proliferation-promoting substance from the membranes or soft foils by rinsing using a suitable, e.g. B. aqueous solutions (as shown in Tab. I-III), draws a way according to the invention. By washing procedures of the membranes and Films or packaging materials before processing to the desired end products The proliferation-promoting substances can be removed in suitable rinsing solutions.

Aus Tabelle 1 ist ersichtlich, dass nach der Filtration mit einem Spritzenvorsatzfilter mehr Tumorzellen gezählt werden als ohne Filtration.From Table 1 it can be seen that after filtration with a syringe filter more Tumor cells are counted as without filtration.

Aus Tabelle 2 geht hervor, dass nach der Filtration mit einem Leukozytenfilter mehr Tumorzellen gezählt werden als ohne Filtration, d. h., aus den Tabellen 1 und 2 ist ersichtlich, dass die Filter Faktoren mit einer proliferationsbegünstigenden Wirkung auf kultivierte Tumorzellen enthalten.Table 2 shows that after filtration with a leukocyte filter more Tumor cells are counted as without filtration, i.e. that is, Tables 1 and 2 show that the filter cultivated factors with a proliferation-promoting effect on Contain tumor cells.

Des weiteren geht aus Tabelle 2 hervor, dass die proliferationsfördernde Wirkung auf kultivierte Tumorzellen durch Stabilisatoren vermindert wird. Auch die Verwendung von Wasser anstelle des Kulturmediums weist nach der Filtration eine erhöhte Zellzahl auf.Furthermore, Table 2 shows that the proliferation-promoting effect cultured tumor cells is reduced by stabilizers. Even the use of Water instead of the culture medium has an increased number of cells after filtration.

Claims

1. Process for the depletion of proliferation-promoting factors from membranes and films, characterized in that they are subjected to a washing procedure before they are used as intended.

2. The method according to claim 1, characterized in that filter membranes or Foil materials are subjected to rinsing with aqueous solutions.

3. The method according to claim 1 and 2, characterized in that the washing solutions Stabilizer solutions are added.

4. Use of factors favoring proliferation on cultured tumor cells depleted membranes and foils for the filtration and storage of Blood products.