DD277126A1 - METHOD FOR THE PRODUCTION OF SUPPORTED ELECTROPHORETIC GEL - Google Patents
METHOD FOR THE PRODUCTION OF SUPPORTED ELECTROPHORETIC GEL Download PDFInfo
- Publication number
- DD277126A1 DD277126A1 DD32188688A DD32188688A DD277126A1 DD 277126 A1 DD277126 A1 DD 277126A1 DD 32188688 A DD32188688 A DD 32188688A DD 32188688 A DD32188688 A DD 32188688A DD 277126 A1 DD277126 A1 DD 277126A1
- Authority
- DD
- German Democratic Republic
- Prior art keywords
- gels
- gel
- electrophoretic
- polyester
- nonwoven fabric
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/416—Systems
- G01N27/447—Systems using electrophoresis
- G01N27/44704—Details; Accessories
- G01N27/44747—Composition of gel or of carrier mixture
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Electrochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Nonwoven Fabrics (AREA)
- Treatments For Attaching Organic Compounds To Fibrous Goods (AREA)
- Artificial Filaments (AREA)
Abstract
Verfahren zur Herstellung traegergestuetzter elektrophoretischer Gele. Das Verfahren bezieht sich auf die Herstellung elektrophoretischer Gele, mit denen sowohl Trenn- als auch Transfertechniken ausgefuehrt werden koennen. Man erzeugt ultraduenne Gele auf kalandrierten Polyestervliesstoffen, die durch hydrodynamische Faserstoffverwirbelung hergestellt sind. Solche Gele sind fuer Elektro-Blotting-Techniken geeignet.Process for the preparation of carrier-supported electrophoretic gels. The method relates to the preparation of electrophoretic gels with which both separation and transfer techniques can be performed. Ultraduenne gels are made on calendered polyester nonwovens made by hydrodynamic pulp entanglement. Such gels are suitable for electroblotting techniques.
Description
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung elektrophoretischer, trägergestützter Gele, mit dem sowohl Trenn- als auch Transfertechniken durchführbar sind.The invention relates to a process for the preparation of electrophoretic carrier-supported gels, with which both separation and transfer techniques can be carried out.
Moderne elektrophoretische Trennverfahren wie z. B. die isoeiektrische Fokussierung (IEF) und die Natriumdodecylsulfat (SDS)-Elektrophorese verwenden Flachgele. Dabei werden ultradünne Gele entweder auf Glasplatten oder haftvermittelnde Kunstoffolien (RADOLA, B. J., Electrophoresis 1 (1980), 43-56) aufgebracht, um die Gele während der weiteren Behandlung zu stabilisieren. Diese Trägermaterialien besitzen einen entscheidenden Nachteil. Sie sind f lüssigkeits- und stromundurchlässig und damit für Transfertechniken (Diffusions- und Elektroblotting) ungeeignet. Für diese Techniken mußte man daher auf Gele zurückgreifen, die durch Gewährleistung einer ausreichenden mechanischen Festigkeit in den Verarbeitungsbädern eine Schichtdicke von mindestens 1-2 mm aufweisen müssen. Diese Gele besitzen im Vergleich zu den ultraciünnen Gelen eine Reihe von Nachteilen:Modern electrophoretic separation methods such. Isoelectric focusing (IEF) and sodium dodecyl sulfate (SDS) electrophoresis use flat gels. Ultrathin gels are either applied to glass plates or adhesion-promoting Kunstoffolien (RADOLA, B. J., Electrophoresis 1 (1980), 43-56) to stabilize the gels during further treatment. These carrier materials have a decisive disadvantage. They are liquid and impermeable to electricity and thus unsuitable for transfer techniques (diffusion and electroblotting). For these techniques, therefore, had to resort to gels, which must have a layer thickness of at least 1-2 mm by ensuring a sufficient mechanical strength in the processing baths. These gels have a number of disadvantages compared to the ultra-thin gels:
- geringere Trennschärfe- lower selectivity
- geringere Nachweisempfindlichkeit- lower detection sensitivity
- erhöhter Zeitbedarf für Bearbeitungsschritte (Fixierung, Färbung, Entfärbung und Trocknung)- increased time required for processing steps (fixation, dyeing, decolorization and drying)
- erhöhter Reagenzienverbrauch von z.T. sehr kostenintensiven Reagenzien.- Increased reagent consumption of z.T. very expensive reagents.
Um die Vorteile der ultradünnen Gele nutzen zu können und trotzdem entsprechendeTransfertechniken zu ermöglichen, wurden in der Fachliteratur eine Reihe von Verfahren vorgeschlagen. So werden zur Herstellung ultradünner trägergestützter Polyacrylamidgele unterschiedliche Polyestergewebe eingesetzt (Nishisawa et al., Electrophoresis 6 [1985), 349-350; Kinzkofer et al., Elektrophorese Forum 1986,253-257), die nach der Durchführung des olektrophoretischen Trennprozesses ein Elektroblotting gewährleisten. Nachteilig wirkt sich bei der Verwendung der Polyestergewebe die notwendige Vorbehandlung derselben aus, die zur Entfernung der zur Herstellung der Gewebe notwendigen Hilfsmittel (Präparationen, Schlichten) unverzichtbar ist. Diese Substanzen (Paraffine (CH2)n ä 4 Fluortenside, aliphatische Ester) besitzen stark ausgeprägte hydrophobe Eigenschaften, die das Benetzungs- und Färbeverhalten der Gewebe nachteilig beeinflussen. So wird ein mehrmaliges Waschen mit Wasser und eine Nachbehandlung mit Tensidlösung vorgeschrieben. Das angegebene Herstellungsverfahren kann darüber hinaus eine blasenfreie (frei von Lufteinschlüssen) Gel-Herstellung nicht garantieren. Bei den zum Teil verwendeten Polyestergeweben mit Porengrößen > 80>m bildet sich die Gewebestruktur im Gel ab, was zu Gelinhomogenitäten führt. Zu Gelinhomogenitäten führen weiterhin Gewebeanomalien, verursacht durch Qualitätsschwankungen der eingesetzten Seiden und Appretur, Faserstoffauspleißung der Seiden während der Flächenbildung und dgl. Nicht zu übersehen ist die Wirtschaftlichkeit, da die Polyestergewebe in der notwendigen Qualität äußerst preisintensiv sind.In order to take advantage of the ultrathin gels and still allow appropriate transfer techniques, a number of methods have been proposed in the literature. Thus, different polyester fabrics are used for the production of ultrathin support-supported polyacrylamide gels (Nishisawa et al., Electrophoresis 6 [1985], 349-350; Kinzkofer et al., Elektrophorese Forum 1986, 253-257), which ensure electroblotting after carrying out the electrophoretic separation process. The disadvantage of using the polyester fabric is the necessary pretreatment of the same, which is indispensable for the removal of the aids (preparations, sizes) necessary for producing the tissue. These substances (paraffins (CH 2 ) n 4 fluorosurfactants, aliphatic esters) have pronounced hydrophobic properties, which adversely affect the wetting and staining behavior of the tissues. Thus, a repeated washing with water and a post-treatment with surfactant solution is required. In addition, the specified preparation process can not guarantee a bubble-free (air-free) gel preparation. In the polyester fabrics with pore sizes>80> m used in some cases, the tissue structure in the gel is formed, which leads to Gelinhomogenitäten. Gel inhomogeneities continue to lead to fabric anomalies caused by variations in the quality of the silks used and finish, pulp splicing of the silks during sheet formation, and the like. Not to be overlooked is the economy, since the polyester fabrics are of the required quality extremely expensive.
Für konventionelle Agarosegele wurden 0,089mm dicke, hydrophile Polypropylenfolien mit 35-pm-Poren eingesetzt (Saravis et al. Elektrophoresis 4 [19831,367). Neben der durch das Haftverhalten limitierten Anwendung (nur für Agarosegele geeignet) sind besonders die notwendigen Vorbehandlungen der Folien nachteilig. So sind die Folienkanten mit speziellen Adhäsiven zu behandeln, um ein Durchsickern der Agarose zu verhindern oder ein mögliches Eintrocknen der Ränder des Flachgeles zu vermeiden. Weiterhin sind die Poren mittels Vakuumbehandlung luftfrei zu machen bzw. anschließend mit Agarose zu belegen, wobei überschüssige, erstarrte Agarose mit einem scharfen Messer entfernt werden muß. Es ist daher leicht einzusehen, daß diese Vorbehandlungen sehr zeitintensiv sind, zu mechanischen Defekten an der Folienoberfläche führen können und daher Gelinhomogenitäten nicht auszuschließen sind.For conventional agarose gels, 0.089 mm thick, hydrophilic polypropylene films with 35 pm pores were used (Saravis et al., Elektrophoresis 4 [19831,367]. In addition to limited by the adhesion behavior application (only suitable for agarose gels) are particularly the necessary pre-treatments of the films disadvantageous. Thus, the foil edges are to be treated with special adhesives in order to prevent the agarose from seeping or to avoid possible drying of the edges of the flat gel. Furthermore, the pores are to be made air-free by means of vacuum treatment or subsequently to be coated with agarose, wherein excess, solidified agarose must be removed with a sharp knife. It is therefore easy to see that these pretreatments are very time-consuming, can lead to mechanical defects on the film surface and therefore Gelinhomogenitäten can not be excluded.
Zur Ermöglichung des Transfers von Proteinen werden Polyacrylamidgele weiterhin mit thermisch bzw. adhäsiv gebundenen Polyestervliesstoffen stabilisiert (Starita-Goribaldi et al., Elektrophoresis 9 [19881,234-236). Dabei werden Polyacrylamidgele mit einer Dicke von 1,5mm auf Vliesstoffe mit einem Flächengewicht von 10g/m2 und einem Faserdurchmesser von 30μητι aufgebracht. Derartige Vliesstoffe sind sehr inhomogen und mechanisch instabil. Ihre Verbindung mit dem Gel ist ungleichmäßig ausgebildet. Dadurch treten u.a. erhebliche Schwierigkeiten bei der Herstellung der Gelküvetten und vor allem bei dor weiteren Vorarbeitung (Einrollen in Fixier-, Färbe- und Entfärbebädern) auf. EinTrocknen ist nur mit straff aufgespannten Gelen möglich, wonn Form- und Dimensionsstabilität angestrebt sind.To facilitate the transfer of proteins, polyacrylamide gels are further stabilized with thermally or adhesively bonded polyester nonwovens (Starita-Goribaldi et al., Elektrophoresis 9 [19881, 234-236]). In this case, polyacrylamide gels are applied with a thickness of 1.5 mm on nonwovens with a basis weight of 10 g / m 2 and a fiber diameter of 30μητι. Such nonwovens are very inhomogeneous and mechanically unstable. Their connection to the gel is uneven. As a result, inter alia, considerable difficulties in the preparation of the gel cuvettes and especially in dor further preparation (curling in fixing, dyeing and Entfärbebädern) on. Drying is only possible with taut gels for which dimensional and dimensional stability is desired.
Gleiche Schwierigkeiten in der Handhabung treten bei der Verwendung von Nylongeweben (Kopacek, Biomedical Application of Chromatography and Elektrophoresis, Zinkovy 1988) auf, die zusätzlich noch den Nachteil einer presistierenden blauen Untergrundfärbung bei der Verwendung sonst üblicher Färbeverfahren aufweisen und eine geringe Trichloressigsäure-Beständigkeit haben.Similar difficulties in handling occur with the use of nylon fabrics (Kopacek, Biomedical Application of Chromatography and Elektrophoresis, Zinkovy 1988), which additionally have the disadvantage of a presistent blue background coloration using otherwise customary dyeing methods and have low trichloroacetic acid resistance.
Die Erfindung hat das Ziel, ein vereinfachtes und ökonomisch günstiges Verfahren zu entwickeln, nach dem unter Verwendung eines spezifischen, stromdurchlässigen Trägermaterials elektrophoretische Gele herstellbar sind, die für Blottingverfahren vorteilhafte Eigenschaften aufweisen.The object of the invention is to develop a simplified and economically advantageous process according to which electrophoretic gels can be produced using a specific, current-transmitting carrier material which have advantageous properties for blotting processes.
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein Verfahren zur Herstellung mechanisch stabilisierter, elektrophoretischer Gele mit einem spezifischen stromdurchlässigen Trägermal erial zu entwickeln, das die Bildung beidseitig offener Gele ermöglicht, die für Blottingverfahren besonders geeignet sind. Erfindungsgemäß wurde die Aufgabe überraschenderweise dadurch gelöst, daß man ultradünne Gele auf einen bindemittelfreien, durch hydrodynamische Faseistoffverwirbelung verfestigten und kalandrierten Polyestervliessto'f erzeugt.The invention has for its object to develop a method for producing mechanically stabilized, electrophoretic gels with a specific current-permeable Trägermal erial, which allows the formation of bilaterally open gels, which are particularly suitable for Blottingverfahren. According to the invention, the object has surprisingly been achieved by producing ultra-thin gels on a binder-free polyester nonwoven fabric solidified and calendered by hydrodynamic fiber fabric swirling.
Besonders vorteilhaft lassen sich trägergestützte (JeIe gemäß der Erfindung herstellen, wenn man bei der hydrodynamischen Faserstoffverwirbelung Polyesterfasern mit einerr. Einzelfaserdurchmesser von 10-18μΓη verwendet. Auf diesen Träger mit einem Flächengewicht von 1O-50g/m2 werden Gele auf Basis Polyacrylamid und/oder Agarose oder deren Derivate mit einer Schichtdicke von 0,1 bis 0,75 mm aufgebracht. Die so hergestellten Polyestervliese besitzen gutes Saugvermögen für die Gellösungen. Die trockenen Gele sind dimensionsstabil gegenüber mechanischer Beanspruchung und sind sehr widerstandsfähig. So hergestellte elektrophoretische trägergestützte Gele werden in nahezu idealer Weise allen Anforderungen, die im Zusammenhang mit der elektrophoretischon Trennung, den Verarbeitungsschritten hinsichtlich Immobilisierung, Visualisierung und Archivierung und dem Elektroolotting gestellt werden, gerecht. Für die Herstellung von lufteinschlußfreien (blasenfreien) Gelen ist das Benetzungsverhalten des Wirbelvliesstoffes von entscheidender Bedeutung. Es beruht auf dem strukturellen Aufbau des Vliesstoffes, insbesondere auf seiner geringen Dichte und der an der Vliesstoffoberfläche vorhandenen hohen Anzahl von freien, im Vliesstoff fest eingebundenen Faserenden, sowie darauf, daß die zur Verwirbelung eingesetzton, unter hohem Druck stehenden Wasserstrahlen de η Vliesstoff von allen Fremdbestandteilen, wie Präperationsmittel, Fett usw. sowie von losen Faserbruchstücken vollständig befreien. Der Vliesstoff ist schnittkantenfest.Depending on the invention, carrier-supported (JeIe) can be produced particularly advantageously if polyester fibers having a single-fiber diameter of 10-18 μm are used in the hydrodynamic fiber material swirling gels based on polyacrylamide and / or on these supports having a basis weight of 10 -50 g / m 2 The polyester gels produced in this way have good pumping speed for the gel solutions The dry gels are dimensionally stable against mechanical stress and are very resistant ideally meets all the requirements associated with electrophoretic separation, the steps of immobilization, visualization, and archival and electro-solotting processing. For the preparation of air-entrapped (bubble-free) gels, B is: entetzungsverhalten of the fluidized nonwoven fabric of crucial importance. It is based on the structural structure of the nonwoven fabric, in particular on its low density and the existing at the nonwoven surface high number of free, firmly bonded in the nonwoven fiber ends, as well as that used for turbulence, high pressure water jets de η nonwoven fabric of all Completely free foreign matter such as preparation, fat, etc. as well as loose fiber fragments. The nonwoven fabric is cut edge resistant.
Bei den mittels modifizierter Klapptechnik nach Radola hergestellten Gelen werden etwa vorhandene kleinere Luftblasen durch dieses Saugvermögen beim Schließen des Sandwiches eliminiert. Im einzelnen beinhaltet das erfindungsgemäße Verfahren folgende Teilschritte:In the gels made by means of modified Radola folding technique, any smaller air bubbles present are eliminated by this suction when closing the sandwich. In detail, the method according to the invention comprises the following substeps:
1. Das Aufziehen einer Deckfolie (Polyesterfolie, ΙΟΟμητι, unbehandelt) auf eine Trägerglasplatte.1. The application of a cover sheet (polyester film, ΙΟΟμητι, untreated) on a carrier glass plate.
2. Kantengenaues Auflegen des Wirbelvliesstoff ss aus Polyester auf die Deckfolio nach Pkt. 1.2. Precise application of the vortex nonwoven fabric ss made of polyester on the cover sheet according to item 1.
3. Befestigen von Spacern auf den zwei gegenüberliegenden längeren Seiten des Wirbelvliesstoffes, wodurch die Gelschichtdicke bestimmt wird.3. Attach spacers on the two opposite longer sides of the fluidized nonwoven fabric, thereby determining the gel layer thickness.
4. Aufziehen einer Deckfolie (Polyesterfolie, 100μηη, unbehandelt) auf eine Deckglasplatte. Im Falle einer SDS-Elektrophorese ist die Deckfolie mit Slotformern zu versehen.4. Applying a cover sheet (polyester film, 100μηη, untreated) on a coverslip. In the case of SDS electrophoresis, the cover foil is to be provided with slot shapers.
5. Aufgießen der Gelbeschichtungslösung auf den nach Pkt. 3 vorbereiteten Wirbelvliesstoff. Die Gelbeschichtungslösung sollte etwa die dreifache Menge der theoretisch berechneten betragen.5. pour the gel coating solution onto the vortex nonwoven prepared according to item 3. The gel coating solution should be about three times the theoretically calculated.
6. Schließen der Sandwiches, wobei die mit der Deckfolie versehene Deckglasplatte (Pkt.4) langsam auf den nach Pkt. 5 vorbehandelten Wirbelvlie&r-toff abgesenkt wird, wodurch die Gelbeschichtungslösung zum anderen Ende hin keilförmig auseinandergedrückt wird.6. Close the sandwiches by slowly lowering the coverslip plate (section 4) provided with the coverslip onto the vortex tube pretreated in accordance with section 5, whereby the gel coating solution is pressed out wedge-shaped toward the other end.
7. Polymerisationsdauer: 1 Stunde.7. Polymerization time: 1 hour.
8. Nach der Polymerisation liegt ein durch zwei Deckfolien geschütztes, tragerstabilisiertes Gel vor, das zur Elektrophorese und für anschließende Blottingverfahren einsetzbar ist.8. After the polymerization there is a carrier-stabilized gel protected by two cover films which can be used for electrophoresis and for subsequent blotting processes.
Die wesentlichen Vorteile des erfindungsgemäßen Verfahrens sind in folgenden Punkten zu sehen:The main advantages of the method according to the invention can be seen in the following points:
Der erfindungsgemäß angewandte, hydrodynamisch verfestigte Wirbelvliesstoff ist ohne zusätzliche Vorbehandlung direkt für elektrophoretische Trennungen (IEF, SDS-Elektrophorese) und Blottingverfahren einsetzbar.The hydrodynamically consolidated fluidized nonwoven fabric used according to the invention can be used directly for electrophoretic separations (IEF, SDS electrophoresis) and blotting methods without additional pretreatment.
Die intensive Verbindung zwischen Gel und Wirbelvliesstoff ist bei den unterschiedlichsten Gelzusammensetzungen (C- und T-Werte) und während aller Teilverarbeitungsschritte gewährleistet.The intensive bond between gel and fluidized nonwoven fabric is guaranteed for a wide variety of gel compositions (C and T values) and during all partial processing steps.
Hinsichtlich der Restanfärbung, des Trennprozesses und Transfers verhält sich der Vliesstoff inert.With regard to the residual staining, the separation process and transfers, the nonwoven fabric behaves inertly.
Mit dem Verfahren sind ultradünne Gele (0,1 bis 0,75mm) problemlos herstellbar.Ultrathin gels (0.1 to 0.75mm) can be produced easily with this procedure.
Vliesstoffgestützte Gele sind während des gesamten Verarbeitungsprozesses sowie im trockenen Zustand form- und dimensionsstabil. Mittels Reflexionsmessung ist eine densitomotrische Auswertung möglich.Nonwoven-based gels are dimensionally and dimensionally stable during the entire processing process as well as in the dry state. By reflection measurement a densitomotrische evaluation is possible.
Die Erfindung soll durch nachstehende Ausführungsbeispiele näher erläutert werden:The invention will be explained in more detail by the following embodiments:
Schichtdicke: 0,2 mmLayer thickness: 0.2 mm
Gellösung: 2,5 ml einer Acrylamidlösung (20,0g Acrylamid undGel solution: 2.5 ml of an acrylamide solution (20.0 g acrylamide and
0,54 g N.N'-Methylenbisacrylamid in 100 ml H2O)0.54 g of N, N'-methylenebisacrylamide in 100 ml of H 2 O)
1,5 ml Glycerol (87%) 1,0mlServalytT4-9 1 ,Ornl einer Acriflavinlösung (10 mg Acriflavinhydrochlorid in 100 ml Wasser) 4,0 ml Wasser1.5 ml of glycerol (87%) 1.0 ml of servalyt T4-9 1, or of an acriflavine solution (10 mg of acriflavine hydrochloride in 100 ml of water) 4.0 ml of water
Die Polymerisation der im Wasserstrahlvakuum entgasten Lösung erfolgt durch einstündiges Belichten (weißes Neonlicht). Nach dem Aufziehen der Deckfolie mit dem armierten Gel mit n-Nonan auf den Kühlbock der Elektrophoresekammer schließt sich die IEF unter Benutzung folgender Spannungsführung an:The polymerization of the solution degassed in a water-jet vacuum is carried out by exposure for one hour (white neon light). After mounting the cover sheet with the armored gel with n-nonane on the chiller of the electrophoresis chamber, the IEF joins using the following voltage control:
Anolyt: 0,73mol PhosphorsäureAnolyte: 0.73 mol phosphoric acid
Katholyt: 0,51 mol Ethylendiaminlösung Als Strombrücken dienen „Elektrophoresis strips" von PHARMACIA.Catholyte: 0.51 mol of ethylenediamine solution "Electrophoresis strips" from PHARMACIA serve as current bridges.
Fixierung: 30min mit Trichloressigsäure (20%)Fixation: 30min with trichloroacetic acid (20%)
Färbung: 30 min mit Serva Blau G 250(0,1%) in „Universalgemisch" (Wasser:Methanol:Eisessig wie 5:4:1)Staining: 30 min with Serva Blue G 250 (0.1%) in "universal mixture" (water: methanol: glacial acetic acid as 5: 4: 1)
Entfärbung: „Universalgemisch" bis zur Farblosigkeit des UntergrundesDecolorization: "universal mixture" until the colorlessness of the substrate
Trocknung: Lufttrocknung der aufgehängten armierten GeleDrying: Air drying of the suspended reinforced gels
Gel-Schichtdicke: 0,4 mmGel layer thickness: 0.4 mm
Gellösung: 15 ml einer Acrylamidlösung (siehe IEF)Gel solution: 15 ml of an acrylamide solution (see IEF)
10 ml eines SDS-Puffers pH 8,8 (193,7g Tris, 60g Glycin, 4,0 g EDTA-Natrium und 4,0 g SDS in 800 ml Wasser lösen, pH-Wert auf 8,8 einstellen und auf 1000 ml auffüllenDissolve 10 ml of an SDS buffer pH 8.8 (193.7 g Tris, 60 g glycine, 4.0 g EDTA sodium and 4.0 g SDS in 800 ml water, adjust the pH to 8.8 and to 1000 ml fill up
8,4 ml Glycerol (87%) 100μΙ TEMED 100 μΙ Ammoniumpersulfatlösung (50,0 g/l)8.4 ml glycerol (87%) 100 μM TEMED 100 μM ammonium persulfate solution (50.0 g / l)
Die Polymerisation erfolgt 30min bei Raumtemperatur und 30min bei etwa 5O0C.The polymerization takes 30min at room temperature and 30 min at about 5O 0 C.
Die Deckfolie ist mit Slotformer für die Probenapplikation versehen.The cover foil is provided with slot former for the sample application.
Elektrophoresepuffer: 100ml eines Stammpuffers (24g Tris, 115,2g Glycin, 2,0g EDTA-Natrium, 2,0g SDA und 0,5g Natriumazid in Wasser zu 1000 ml lösen) werden auf 800 ml verdünnt.Electrophoresis buffer: Dilute 100 ml of a stock buffer (24 g Tris, 115.2 g glycine, 2.0 g EDTA sodium, 2.0 g SDA and 0.5 g sodium azide in water to 1000 ml) to 800 ml.
Nach Aufziehen der Deckfolie mit dem armierten Gel auf den Kühlbock der Elektrophoresekammer (n-Nonan als Kontaktflüssigkeit) erfolgt der Probenauftrag. Danach wird der elektrische Kontakt zwischen Puffer und Gel hergestellt. Nach einer 5minütigen Vorelektrophorese bei 100V wird die Spannung auf etwa 300 V erhöht. Wenn die Bromphenolblaubande 4cm zurückgelegt hat, wird die Elektrophorese abgebrochen.After applying the cover sheet with the armored gel on the cooling block of the electrophoresis chamber (n-nonane as a contact liquid), the sample is applied. Thereafter, the electrical contact between buffer and gel is made. After 5 minutes of pre-electrophoresis at 100V, the voltage is increased to about 300V. When the bromophenol blue leaves have traveled 4cm, the electrophoresis is stopped.
Fixierung: 30 min in Trichloressigsäure (20%) Färbung: 60 min in einer 0,1%igen Servablaulösung in Universalgemisch (siehe IEF) Entfärbung: Mit Universalgemisch bis zur Farblosigkeit des Untergrundes. Zusatz von 2% Glycerol (87 %)Fixation: 30 min in trichloroacetic acid (20%) Staining: 60 min in a 0.1% Servablaulösung in universal mixture (see IEF) Decolorization: With universal mixture to the colorlessness of the substrate. Addition of 2% glycerol (87%)
zum letzten Entfärbebad Trocknung: Lufttrocknung der aufgehängten armierten Geleto the last decolorizing bath Drying: Air drying of the suspended reinforced gels
Ein Material gemäß StaritaGeribaldi (Elektrophoresis 2 [1988] 234-236) wird wie beschrieben mit Gel beschichtet und anschließend entsprechend Durchführungsvorschrift isoelektrisch fokussiert bzw. zum Erhalt des Pherogramms den beschriebenen Vorarbeitungsschritten unterworfen.A material according to StaritaGeribaldi (Elektrophoresis 2 [1988] 234-236) is coated as described with gel and then isoelectrically focused in accordance with the procedure or subjected to the preparatory steps described to obtain the pherogram.
Boispiol 1 wird wiodorholt unter Verwendung des erfindungsgemäßen Vliesmaterials, wobei das Trägermaterial ein kalandrierter Wirbelvliesstoff aus Polyester (PE-F-bt-0,16tex, 38mm) mit einem Plächongowicht von 30g/m2 ist.Boispiol 1 is biodegraded using the nonwoven material according to the invention, wherein the support material is a calendered nonwoven spunbonded polyester (PE-F-bt-0.16tex, 38 mm) with a sheet weight of 30 g / m 2 .
Ein Nylongewebe nach Kopacek (Biomedical Applications of Chromatography and Elektrophoresis, Zinkovy 1988) wird als Trägormatorial zur Durchführung oinor SDS-Trennung verwendet.A Kopacek nylon fabric (Biomedical Applications of Chromatography and Electrophoresis, Zinkovy 1988) is used as a support material for carrying out an SDS separation.
Beispiel 3 wird wiederholt unter Verwendung eines erfindungsgemäßen Vliesmaterials, wobei das Trägermaterial ein kalandrierter Wirbelvliesstoff aus Polyester (PE-F-bt-0,13tex, 38mm) mit einem Flächengewicht von 35g/m2 ist. Mit den Trägermaterialien der Beispiele 1-4 wurden folgende Ergebnisse erreicht:Example 3 is repeated using a nonwoven material according to the invention, wherein the support material is a calendered nonwoven spunbonded polyester (PE-F-bt-0.13tex, 38 mm) with a basis weight of 35 g / m 2 . The support materials of Examples 1-4 gave the following results:
elektroph. Trennungelektroph. separation
Verarbeitung nach elektrophoret. TrennungProcessing according to electrophoret. separation
Blotting-transferBlotting transfer
Beispiel 2 Beispiel 3Example 2 Example 3
keine Beanstandungno complaint
keine Beanstandung keine Beanstandungno complaint no complaint
keine Beanstandungno complaint
keine Dimensionsstabilität nach Färbe- und Entfärbebadno dimensional stability after dyeing and Entfärbebad
keine Beanstandungno complaint
partiell Gewebeaufiösung im Trichlor-partial tissue dissolution in the trichloro
essigsäurebad starke RestanfärbungAcetic acid bath strong residual staining
keine Beanstandungno complaint
bei dimensionsstabilen armierten Gelen keine Beanstandung keine Beanstandung keine Beanstandung bei dimensionsstabilen armierten Gelen keine Beanstandung keine Beanstandungwith dimensionally stable reinforced gels no complaint no complaint no complaint with dimensionally stable reinforced gels no complaint no complaint
Aus der Tabelle ist ersichtlich, daß der erfindungsgemäße Vliesstoff in der Anwendbarkeit den Materialien des Standes der Technik deutlich überlegen ist.From the table it can be seen that the nonwoven fabric according to the invention is clearly superior in applicability to the materials of the prior art.
Claims (3)
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DD32188688A DD277126A1 (en) | 1988-11-17 | 1988-11-17 | METHOD FOR THE PRODUCTION OF SUPPORTED ELECTROPHORETIC GEL |
| DE19893914579 DE3914579A1 (en) | 1988-11-17 | 1989-05-03 | Ultra-thin polyacrylamide and/or agarose electrophoretic gel - on support of consolidated and calendered binder-free polyester mat |
| FR8913700A FR2639116A1 (en) | 1988-11-17 | 1989-10-19 | PROCESS FOR PREPARING GELS ON SUPPORTS FOR ELECTROPHORESIS |
| SE8903781A SE8903781L (en) | 1988-11-17 | 1989-11-10 | PROCEDURES FOR MANUFACTURING OF SUPPORTED ELECTROPHORETIC GELS |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DD32188688A DD277126A1 (en) | 1988-11-17 | 1988-11-17 | METHOD FOR THE PRODUCTION OF SUPPORTED ELECTROPHORETIC GEL |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DD277126A1 true DD277126A1 (en) | 1990-03-21 |
Family
ID=5604012
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DD32188688A DD277126A1 (en) | 1988-11-17 | 1988-11-17 | METHOD FOR THE PRODUCTION OF SUPPORTED ELECTROPHORETIC GEL |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| DD (1) | DD277126A1 (en) |
| DE (1) | DE3914579A1 (en) |
| FR (1) | FR2639116A1 (en) |
| SE (1) | SE8903781L (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1680665A1 (en) * | 2003-09-19 | 2006-07-19 | Invitrogen Corporation | Composite compositions for electrophoresis |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5019232A (en) * | 1990-06-01 | 1991-05-28 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Medium for electrophoresis |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5651295B2 (en) * | 1974-11-15 | 1981-12-04 | ||
| JPS60164242A (en) * | 1984-02-06 | 1985-08-27 | Hideyuki Nishizawa | Polyacrylamide gel film for electrophoresis |
| EP0167373A3 (en) * | 1984-06-30 | 1989-06-14 | Fuji Photo Film Co., Ltd. | Element for electrophoresis |
| FR2614907B1 (en) * | 1987-05-06 | 1989-06-23 | Geribaldi Mireille | METHOD OF INCORPORATING TEXTILES DURING THE COPOLYMERIZATION OF ACRYLAMIDE AND A COPOLYMERIZING AGENT FOR THE PLATE ELECTROPHORESIS TECHNIQUE |
-
1988
- 1988-11-17 DD DD32188688A patent/DD277126A1/en not_active IP Right Cessation
-
1989
- 1989-05-03 DE DE19893914579 patent/DE3914579A1/en not_active Withdrawn
- 1989-10-19 FR FR8913700A patent/FR2639116A1/en active Pending
- 1989-11-10 SE SE8903781A patent/SE8903781L/en not_active Application Discontinuation
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1680665A1 (en) * | 2003-09-19 | 2006-07-19 | Invitrogen Corporation | Composite compositions for electrophoresis |
| EP1680665A4 (en) * | 2003-09-19 | 2010-06-16 | Life Technologies Corp | Composite compositions for electrophoresis |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2639116A1 (en) | 1990-05-18 |
| DE3914579A1 (en) | 1990-06-07 |
| SE8903781L (en) | 1990-05-18 |
| SE8903781D0 (en) | 1989-11-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE4244082C2 (en) | Process for high-resolution two-dimensional electrophoresis and device for carrying out the process | |
| DE60106053T2 (en) | METHOD AND DEVICES FOR CAPILLARY ELECTROPHORESIS USING A NORBORN-SUSTAINED SURFACE COATING | |
| DE2721735C2 (en) | Variable light-modulating device based on an electrochromic material and method for producing a counter electrode in such a device | |
| DE2613248A1 (en) | PROCESS FOR SEALING BREAKS IN ULTRA-TUBE COMPOSITE MEMBRANES COMPOSED OF A MULTIPLE LAYERS | |
| DE2365284C2 (en) | Chamber and method for performing the second cross-electrophoresis step | |
| DE2005260A1 (en) | Ultrafiltration process | |
| DE3736087C2 (en) | Fabrics for the production of electrophoresis gels | |
| EP0045435A1 (en) | Polyamide membrane suitable for ultrafiltration and process for producing some | |
| DE3616338C2 (en) | ||
| DE3024288A1 (en) | METHOD AND DEVICE FOR PRODUCING THIN LAYERS | |
| DE1773234C3 (en) | Method for tempering a transparent tube intended for optical analysis devices | |
| DD277126A1 (en) | METHOD FOR THE PRODUCTION OF SUPPORTED ELECTROPHORETIC GEL | |
| DE2505254A1 (en) | POROESE MEMBRANE AND METHOD FOR MANUFACTURING IT | |
| DE3046565C2 (en) | ||
| EP0305803A2 (en) | Apparatus and method for separating blood cells from erythrocyte containing body fluids and its use | |
| DE4135545C2 (en) | Capillary gels that are formed by spatially progressing polymerization using a migrating initiator | |
| WO1992004625A1 (en) | Protein separation by sds electrophoresis in a homogenous gel using a tris-formiate-taurinate buffer system and suitable homogenous electrophoresis plates therefor | |
| DE3540104A1 (en) | DIAGNOSTIC STRIP | |
| DE3103936C2 (en) | Process for the production of light harvesting systems from fluorescent dye-doped polymer materials | |
| WO1991005598A1 (en) | Improved fabric supported electrophoresis agarose gels for electrophoresis | |
| DE19935028C2 (en) | Methods and devices for the electrophoretic separation of particles, in particular macromolecules | |
| DE2934479A1 (en) | Electrophoretic analyser for protein and nucleic acid size determn. - with planar transport in first and transverse transport in second gel layer of diminishing pore size | |
| DE2510337A1 (en) | POLYCARBONATE MEMBRANE AND METHOD FOR MANUFACTURING IT | |
| DE3232685A1 (en) | Process for horizontal one- and two-dimensional electrophoresis in thin or ultrathin gel layers | |
| EP0288529B1 (en) | Process for separating and decanting colloids by exclusion chromatography |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| ENJ | Ceased due to non-payment of renewal fee |