DD266117A1

DD266117A1 - METHOD FOR PRODUCING INVERT SUGAR

Info

Publication number: DD266117A1
Application number: DD85282417A
Authority: DD
Inventors: Udo Graefe; Frank Haenel; Guenther Reinhardt; Wolfgang Forberg; Heinz Fricke; Michael Menner; Waldemar Kuenkel; Ernst-Joachim Bormann; Marita Harnisch
Original assignee: Adw Ddr
Priority date: 1985-11-04
Filing date: 1985-11-04
Publication date: 1989-03-22

Abstract

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von Invertzucker mit Hilfe eines neuen Invertase-haltigen Biokatalysators, der kostenguenstig aus Abfallmycel der Penicillinfermentation durch Penicillium chrysogenum auf der Basis Saccharose-haltiger Naehrmedien gewonnen werden kann. Die Aufgabe wird in der Weise geloest, dass durch aerobe Fermentation Saccharose-verwertender Staemme von Penicillium chrysogenum, beispielsweise des Stammes Penicillium chrysogenum ZIMET 2, durch Fermentation auf Saccharose-haltigen Naehrmedien Biomasse erzeugt, durch Separation von der Antibiotikum-haltigen Fermentationsloesung abgetrennt und das in den Zellen enthaltene Enzym Invertase durch Suspension der Biomasse in dem fuenffachen Gewichtsanteil Aceton fixiert wird. Der solchermassen erhaltene Biokatalysator ATPM wird eingesetzt, um innerhalb von 10 bis 24 Stunden mindestens die 20fache Gewichtsmenge an Saccharose in ein Gemisch von Glucose- und Fructose (Invertzucker) umzuwandeln, das in der Nahrungsmittel- und Getraenkeindustrie verwendbar ist.The invention relates to a process for the preparation of invert sugar with the aid of a new invertase-containing biocatalyst, which can be obtained cost-effectively from waste mycelium of the penicillin fermentation by Penicillium chrysogenum on the basis of sucrose-containing nutrient media. The object is achieved in such a way that by aerobic fermentation sucrose-utilizing strain of Penicillium chrysogenum, for example of the strain Penicillium chrysogenum ZIMET 2, produced by fermentation on sucrose-containing nutrients biomass, separated by separation from the antibiotic-containing fermentation solution and the in Enzyme enzyme containing cells is fixed by suspension of the biomass in the five-fold weight fraction of acetone. The biocatalyst ATPM thus obtained is used to convert at least 20 times the weight of sucrose into a mixture of glucose and fructose (invert sugar) usable in the food and beverage industry within 10 to 24 hours.

Description

3. Verfahren nach Punkt 2, gekennzeichnet dadurch, daß3. The method according to item 2, characterized in that

— für die Inkubation eine mit Biokatalysator ATPM versetzte wäßrige Saccharoselösung, bestehend aus 0,5 Gewichtsteilen ATPM auf 10 Gewichtsteilen Saccharose in 100 Gewichtsteil en Wasser, eingesetzt,For the incubation, an aqueous sucrose solution mixed with biocatalyst ATPM, consisting of 0.5 parts by weight of ATPM per 10 parts by weight of sucrose in 100 parts by weight of water,

— die Inkubation bui einer Temperatur von 37°C bei pH 7,0 ± 0,5 für 20 Stunden durchgeführt undThe incubation was carried out at a temperature of 37 ° C. at pH 7.0 ± 0.5 for 20 hours and

— die entstandene invertzuckerhaltige Lösung durch Aktivkohle-Behandlung sowie Filtration gereinigt- The resulting inverted sugar-containing solution purified by charcoal treatment and filtration

Field of application of the invention

Die Erfindung betrifft din neues Verfahren zur Herstellung von Invertzucker aus Saccharoselösungen.The invention relates to a novel process for the preparation of invert sugar from sucrose solutions.

Durch die chemisch-hydrolytische Spaltung von Saccharose oder durch deren enzymatischer Umwandlung in äquimolekulare Gemische vcn Glucose und Fructose mit Hilfe des Enzyms Invertase worden in der Lebensmittel- und Getränkeindustrie violsoitig angewandte Süßungsmittel (Invertzucker) erhalten. Gegenüber dem Ausgangsstoff Saccharose zeichnet sich Invertzucker durch eine erhöhte Süßkraft sowie verbesserte Gebrauchseigenschaften hinsichtlich Aromastoffbeeinflussung aus.By the chemical-hydrolytic cleavage of sucrose or by their enzymatic conversion into equimolecular mixtures of glucose and fructose with the aid of the enzyme invertase, sweeteners (invert sugar) used in the food and beverage industry have been obtained. Invert sugar is distinguished from the starting material sucrose by an increased sweetening power as well as improved handling properties with regard to flavoring influence.

Das Anwendungsgebiet der Erfindung liegt somit in der pharmazeutischen sowie in der Getränke- und Lebensmittelindustrie.The field of application of the invention is thus in the pharmaceutical as well as in the beverage and food industry.

Characteristic of the known technical solutions

Bekannt ist seit wenigstens 50 Jahrer das Verfahren der chemisch-hydrolytischen Spaltung von Saccharose in Glucose-Fructo3e-Gemische (Invertzucker). Dieses chemisches Verfahren der Saccharosespaltung hat den Nachteil der Bildung vod Nebenprodukten.For at least 50 years, the process of the chemical-hydrolytic cleavage of sucrose into glucose-fructo3e mixtures (invert sugar) has been known. This chemical process of sucrose cleavage has the disadvantage of forming by-products.

Gegenwärtig wird Invertzucker überwiegend durch enzymatische Spaltung mit Hilfe von partiell gereinigter Invertase (ß-D-Fructofurenosidase) aus Bäckerhefe gewonnen, die entweder in löslicl sr Form in einem Batch-Prozeß oder in Bindung an einen festen Träger (immobilisierter Biokatalysator) diese Umwandlung bewirkt. Von Nachteil ist, daß der Katalysator beim Batch-Prozeß nach einem Umsatzzyklus ersetzt werde.ι muß. Der Nachteil der Herstellung von immobilisierter Invertase besteht in dem Aufwand, dor für Eniymreinigung und Immobilisation notwendig ist. Von Nachteil ist ferner, daß für die Enzymgewinnung die Herstellung von Bäckerhefe durch einen speziellen Fermentationsprozeß erforderlich ist. Die fermentative Produktion invertasehaltiger Hefezellen verursacht daher einen wesentlichen Teil der für die enzymatische Umwandlung von Saccharose in Inveitzucker aufzuwendenden Kosten (Römps, Chemie Lexikon, Bd.3, S. 1907 und 1908 Franckh'sche Verlagsbuchhandlung Stuttgart, 1983; S.A.BARKER: Immobilized enzymes. In: Economic Microbiology, Vol.5 (Ed. A. A. ROSE] S.331-369, Academic Press, 1980; S. A. BAR '«ER u. J. A. SHIRLEY: Glucose Oxidase, Glucose Dehydrogenase, Glucose Isomerase, ß-Glactosidaso and Invertase. In: Economic Microbiology, Vol.6 (Ed. A. A. ROSE) S. 173-228, Academic Press, 1980; R. D. SWEIGAHT: Industrial applications of immobilized enzymes: a commercial overview. In: Applied Biochom. and Bioeng., Vol.2. Enzyme Technology. (Eds. WINGARD, LB., KATCHALSKI-KATZIR, E. u. GOLDSTEIN, L.| 1979, S. 209-218; W.MARCONI and F. MORIST: Industrial applications of fiber-enhapped enzymes. In' Applied Biochern. and Bioeng., Vol. 2. Enzyme Technology (Eds. WINGAPD, L.B., KATCHALSKI-KATZIR, E. u. GOLDSTEIN, L.) 1979, S.219-258).At present, invert sugar is predominantly obtained by enzymatic cleavage with the aid of partially purified invertase (β-D-fructofurenosidase) from baker's yeast which effects this conversion either in soluble form in a batch process or in binding to a solid support (immobilized biocatalyst). The disadvantage is that the catalyst is replaced in the batch process after a sales cycle.ι must. The disadvantage of the production of immobilized invertase is the expense that is necessary for Eniymreinigung and immobilization. A further disadvantage is that the production of baker's yeast by a special fermentation process is required for enzyme recovery. The fermentative production of invertase-containing yeast cells therefore causes a substantial portion of the costs to be incurred for the enzymatic conversion of sucrose into invit sugar (Römps, Chemie Lexikon, Vol.3, p 1907 and 1908 Franckh'sche Verlagsbuchhandlung Stuttgart, 1983. SABARKER: Immobilized enzymes. In: Economic Microbiology, Vol.5 (Ed. AA ROSE) p.331-369, Academic Press, 1980; SA BAR "ER & JA SHIRLEY: Glucose oxidase, glucose dehydrogenase, glucose isomerase, β-galactosidase, and invertase. In: Economic Microbiology, Vol.6 (Ed AA ROSE) pp. 173-228, Academic Press, 1980; RD SWEIGAHT: Industrial applications of immobilized enzymes: a commercial overview In: Applied Biochome and Bioeng., Vol.2 Enzyme Technology (Eds. WINGARD, LB., KATCHALSKI-KATZIR, E. and GOLDSTEIN, L., 1979, pp. 209-218, W.MARCONI and F. MORIST: Industrial applications of fiber-hopped enzymes Applied Biochemistry and Bioeng., Vol. 2. Enzyme Technology (Eds. WINGAPD, LB, KATCHAL SKI-KATZIR, E. u. GOLDSTEIN, L.) 1979, p.219-258).

Object of the invention

Die Erfindung dient der Herstel'ung von Invertzucker, um die bisher bekannton Verfahren zur Spaltung von Saccharose in Gemische von Glucose und Fructose, kurz Inveitzucker genannt, durch einen neuartigen, besonders kostengünstigen Prozeß abzulösen.The invention serves for the production of invert sugar in order to replace the hitherto known process for the cleavage of sucrose in mixtures of glucose and fructose, in short, invit sugar, by a novel, particularly cost-effective process.

Explanation of the essence of the invention

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein tecl .nologisch einfaches Verfahren zu beschreiben, mit dessen Hilfe auf enzymatischem Wege die Umwandlung von Saccharoselösungen in Gemische von Glucose und Fructose (Invertzucker) unter Einsatz eines neuartigen invertasehaltigen Biokatalysators durchgeführt werden kann. Gleichzeitig liegt damit uc - Erfindung die Aufgabe zugrunde, das zugehörige Toilverfahcen zur Herstellung des hierzu heranzuziehenden neuartigen invertasehaltigen Biokatalysators anzugeben.The invention has for its object to describe a tecl .nologisch simple process by which enzymatically the conversion of sucrose in mixtures of glucose and fructose (invert sugar) using a novel invertase-containing biocatalyst can be performed. At the same time, it is therefore an object of the invention to specify the associated toiletry agent for the preparation of the novel invertase-containing biocatalyst to be used for this purpose.

Erfindungsgemäß wird diese Aufgabe dadurch gelöst, daß im ersten Schritt als Ausgangsprodukt für die Bereitung d^s bei der enzymatischen Gewinnung von Invertzucker einzusetzenden invertasehaltigen Biokatalysators ein Abfallprodukt dei Penicillin-Fermentation, nämlich die be der Kultivierung von saccharoseverwertendan und auf saccharosehaltigen Medien angezogenen Stämmen des Penicillin-Bildners Penicillium chrysogenum in großen Mengen anfallende und anderweitig nicht weiter verwendbare Biomesso (Abfallmyzoi/,^: .erangezogen wird.According to the invention, this object is achieved in that in the first step as a starting material for the preparation ds s in the enzymatic recovery of invert sugar to be used invertase-containing biocatalyst a waste product of the penicillin fermentation, namely be cultivated in the cultivation of saccharoseverwertendan and on sucrose-containing strains of penicillin -Bildners Penicillium chrysogenum in large quantities occurring and otherwise not usable Biomesso (Abfallmyzoi ^/,: is .erangezogen.

Zur verfahrensgemäßen Bereitung des neuartigen invertasehaltigen Biokatalysators wird das Myzel von Penicilliumchrysogenum nach Beendigung der Fermentation auf saccharosehaltigen Medien auf an sich bekannte Weise, vorzugsweise durch Separation, von der Kulturlösung abgetrennt. Anschließend wird das Myzel durch Rühren in Aceton suspendiert und ein Acetontrockenpulver hergestellt. Durch die Extraktion des frischen Myzels mit Aceton werden eventuell anhaftende Spuren Penicillin vollständig entfernt.For the preparation according to the method of the novel invertase-containing biocatalyst, the mycelium of penicillium chrysogenum is separated from the culture solution in a manner known per se, preferably by separation, after the end of the fermentation on sucrose-containing media. Subsequently, the mycelium is suspended by stirring in acetone and a Acetontrockenpulver prepared. By extracting the fresh mycelium with acetone, any adhering traces of penicillin are completely removed.

Das Acetontrockenpulver des Myzels von P. chrysogenum kann, wie gefunden wurde, zum einen bereits direkt, d. h. ohne zusätzliche Reinigungsschritto, als Biokatalysator in der Konversion von Saccharose zu Invertzucker eingesetzt werden: Dieses invenasehaltige Präparat in Form von Aceton-getrockneten Ganzzellen aus dom erwähnten Abfallmyzel verfügt über eine katalytische Aktivität, die im Bereich von 20 bis40μΜοΙ Umsatz Saccharose/min/g Acetontrockei^u'ver des Myzels liegt.The acetone dry powder of P. chrysogenum mycelium, it has been found, on the one hand directly, d. H. without additional purification step, to be used as a biocatalyst in the conversion of sucrose to invert sugar: This invenase-containing preparation in the form of acetone-dried whole cells from Dom mentioned waste mycelium has a catalytic activity in the range of 20 to 40μΜοΙ conversion sucrose / min / g Acetontrockei ^ u'ver of the mycelium lies.

Diesem neuartigen invertasehaltigen Präparat wurde die Bezeichnung „Biokatalysator ATPM" gegeben.This novel invertase-containing preparation was given the name "biocatalyst ATPM".

Zum anderen kann das Trockenpulver auch zur Herstellung von weiter gereinigten bzw. von weiter angereicherten Invertase-Präparaten dienen.On the other hand, the dry powder can also be used for the production of further purified or further enriched invertase preparations.

Als Mikroorganismus für die Gewinnung des Myzels (der Biomasse* kann jeder saccharoseverwertendü penicillinbildende Stamm von Penicillium chrysogenum, beispielsweise der in der ZIMET-Hinterlegungsstelle für Mikroorganismen des Zentralinstituts für Mikrobiologie und experimentelle Therapie der Akademie der Wissenschaften, DUR - Jena, 6900, Beutenbergstr. 11 hinterlegte Stamm Penicillium chrysogenum ZIMET 2, eingesetzt werden.As a microorganism for the recovery of the mycelium (the biomass * can each penicillin saccharoseverwertendü penicillium chrysogenum, for example, in the ZIMET depository for microorganisms of the Central Institute for Microbiology and Experimental Therapy of the Academy of Sciences, DUR - Jena, 6900, Beutenbergstr deposited strain Penicillium chrysogenum ZIMET 2, are used.

Nach Bereitstellung des Biokatalysators ATPM wird das vorliegende Verfahren zur Gewinnung von Invertzucker zu Ende geführt, indem 7,5 bis 15,0, vorzugsweise 10,0, Gewichtsteile Saccharose bzw. saccharosehaltige Produkte wie beispielsweise Rohzucker oder Rübenzuckersirupe mit 0,5 Gewichtsteilen Biokatalysator ATPM in 100 Gewichtsteilen Wasser suspendiert werden (d. h.After providing the biocatalyst ATPM, the present process for obtaining invert sugar is completed by adding 7.5 to 15.0, preferably 10.0, parts by weight of sucrose or sucrose-containing products such as raw sugar or beet sugar syrups with 0.5 parts by weight of biocatalyst ATPM in 100 parts by weight of water are suspended (ie

Mischungsverhältnis KatalysatorSaccharose 1:15 bis 1.30, vorzugsweise 1:20, in wäßriger Lösung von 10% Saccharose); die Suspension wird anschließend für 10 Stunden bis 24 Stunden, vorzugsweise 20 Stunden, bei Temperaturen von 35⁰C bis 45⁰C, vorzugsweise bei 37°C, sowie neutralen pH-Werten, vorzugsweise pH 7,0 ± 0,5, inkubiert. Dabei erfolgt die quantitative Umwandlung des Disaccharide in Glucose und Fructose (Invertzucker), d. h. bei verfahrensgemäßem Vorgehen wird durch den bereitgestellten Biokatalysator innerhalb von 10 Stunden bis 24 Stunden wenigstens die 20fache Gewichtsmenge an Saccharose in Invertzucker umgewandelt.Mixing ratio of catalyst: sucrose 1:15 to 1.30, preferably 1:20, in aqueous solution of 10% sucrose); The suspension is then incubated for 10 hours to 24 hours, preferably 20 hours, at temperatures of 35 ⁰ C to 45 ⁰ C, preferably at 37 ° C, and neutral pH, preferably pH 7.0 ± 0.5, incubated. In this case, the quantitative conversion of the disaccharides into glucose and fructose (invert sugar), ie in accordance with the procedure is converted by the provided biocatalyst within 10 hours to 24 hours, at least 20 times the amount by weight of sucrose in invert sugar.

Nach Beendigung der Inkubation werden die Rückstände des Biokatalysators ATPM durch Zentrifugations- oder Filtrationsmethoden abgetrennt, und durch Behandlung mit an sich bekannten Adsorbentien, vor. jgsweise mit Aktivkohle, werden aus der entstandenen invertzuckerhaltigen Lösung Geruchsstoffe und färbende Bestandteil!) entfernt. Die nach eher anschließenden Filtration erhaltene färb- und geruchslose Lösung von Invertzucker kann durch Einengen gegebenenfalls noch weiter konzentriert werden.After completion of the incubation, the residues of the biocatalyst ATPM are separated by centrifugation or filtration methods, and by treatment with adsorbents known per se before. With activated charcoal, for example, odorants and coloring constituents are removed from the resulting invert sugar-containing solution. The colorless and odorless solution of invert sugar obtained after a subsequent filtration may optionally be further concentrated by concentration.

Die Vorteile der Erfindung werden wie folgt gesehen:The advantages of the invention are seen as follows:

— Das beschriebene Vorfahren erlaubt eine kostengünstige Umwandlung von Saccharose in Invertzucker, da für die Enzymbzw. Biokatalysatorherstellung kein gesondertes Fermentationsverfahren erforderlich ist.- The ancestor described allows a cost-effective conversion of sucrose into invert sugar, since for Enzymbzw. Biocatalyst production no separate fermentation process is required.

— Das beschriebene Verfahren erlaubt den Einsatz eines billigen invertasehaltigen Biokatalysators (Katalysator ATPM), der in einem Batch-Prozeß Verwendung finden kann und der wegen seiner niedrigen Herstellungskosten nicht wieder rückgewonnen werden muß.- The method described allows the use of a cheap invertase-containing biocatalyst (catalyst ATPM), which can be used in a batch process and which does not have to be recovered because of its low production costs.

— Das beschriebene Verfahren erlaubt die Produktion von Inveitzucker in einem einfachen Prozeß unter Verwendung billiger Einsatzstoffe.The process described allows the production of virgin sugar in a simple process using inexpensive feedstocks.

— Das beschriebene Verfahren erlaubt die Gewinnung eines Schadstoff-finsbesondere Pe illin-)freien Invertzucker, so daß unter anderem die pharmakologisch-toxikologische Unoedenklichkeit des Verfahrensproduktes gewährleistet ist.- The method described allows the recovery of a pollutant finsbesondere Pe illin-) free invert sugar, so that, inter alia, the pharmacological-toxicological Unoedenklichkeit the process product is guaranteed.

— Das beschriebene Verfahren erlaubt die vorteilhafte Weiterverwertung eines ansonsten umweltbelastenden Abfallproduktes der Penicillin-Erzeugung.- The described method allows the advantageous further utilization of an otherwise polluting waste product of penicillin production.

embodiment

In einem Ausführungsbdispiel soll die Erfindung näher erläutert, jedoch dadurch nicht eingeschränkt werden:In an embodiment example, the invention is explained in more detail, but is not limited thereby:

a) Anzucht des Enzymbildnersa) cultivation of the enzyme-forming agent

Zur Anzucht vegetativer Myzelien von Penicillium chrysogenum ZIMET 2, hier das Ausgangsmaterial für die Herstellung des neuartigen Biokatalysators ATPM, wird wie folgt verfahren: In einem mit Sporen beimpften 4I-Laborfermentor wird eine Vorkultur durch 34st(indige aerobe Fermentation auf einem Medium folgender Zusammensetzung erhalten (g/l): Saccharose 20; Maisquellwasser 16,5; Sonnenblumenöl 5; Erdnußmehl 10; NaNO₃ 3; CaCO₃ 2; KHjPO₄ 0,5; MgSO,, 0,1; ZnSO₄ 0,02; MnSO₄ 0,007; PPG 0,1; pH (vor dem Sterilisieren) 6,0 bis 6,4; (Sterilisation 60 Minuten bei 120⁰C, Fermentationstemperatur 25"C).For the cultivation of vegetative mycelia of Penicillium chrysogenum ZIMET 2, here the starting material for the preparation of the novel biocatalyst ATPM, the following procedure is followed: In a sporulated inoculated 4I laboratory fermenter, a preculture is obtained by 34st (indigenous aerobic fermentation on a medium of the following composition ( g / l): sucrose 20; corn steep liquor 16.5; sunflower oil 5; peanut flour 10; NaNO ₃ 3; CaCO ₃ 2; KHjPO ₄ 0.5; MgSO ,, 0.1; ZnSO ₄ 0.02; MnSO ₄ 0.007; PPG 0.1; pH (before sterilization) 6.0 to 6.4 (sterilization 60 minutes at 120 ^° C., fermentation temperature 25 ° C.).

Die Hauptkultur wird durch Beimpfen mit 10% der Inokulumkultur auf einem Nährmedium folgender Zusammensetzung in 30-1- bis 500-l-Fermentoren angezogen (g/l): Erdnußmehl 30; CaCO₃ 9; PPG 0,2; Na₂SjO₃ χ 5H₂O 5; PES 0,5; Meisquellwasser 12; Sonnenblumenöl 5; Saccharose 5 (Zugabe nach der Sterilisation); (Sterilisation 30 Minuten bei 120°C; Fermentationstemperatur 25°C; Belüftung 1:1; pH geregelt bei 6,5 mit NH₃). Während derThe main culture is grown by inoculation with 10% of the inoculum culture on a nutrient medium of the following composition in 30-1 to 500 l fermentors (g / l): peanut flour 30; CaCO ₃ 9; PPG 0.2; Na ₂ SjO ₃ χ 5H ₂ O 5; PES 0.5; Seawater spring 12; Sunflower oil 5; Sucrose 5 (added after sterilization); (Sterilization for 30 minutes at 120 ° C, fermentation temperature 25 ° C, aeration 1: 1, pH regulated at 6.5 with NH ₃ ). During the

Fermentation wird entsprechend dem Nährstoffverbrauch Saccharose und (NH₄I₂SO₄ zur Gewährleistung einer hohen Penicillinprcduktion zudosiert. Als Antischaummittel wird Sonnenblumenöl eingesetzt. Der Abbau erfolgt zur 120sten Stunde, wobei die Kulturlö3ung einen Biomasse-Gehalt von 40g bis 60g Trockenmasse/l aufweist.Fermentation is dosed in accordance with the nutrient consumption of sucrose and (NH ₄ I ₂ SO ₄ to ensure high penicillin production.) The antifoam used is sunflower oil which is decomposed at the 120th hour, the culture solution having a biomass content of 40 g to 60 g dry mass / l.

b) Herstellung des invertgashaltigen Katalysators ATPMb) Preparation of the invert gas-containing catalyst ATPM

Zur Herstellung von invertgashaltigen Myzelion in Form von Acetontrockenpulver wird die Biomasse einer voranstellend gewonnenen 120-Stunden-Kultur durch Separatoren bzw. Drehzellenfilter abgetrennt. 1 kg Feuchtmycel werden dann unter Rühren in 51 Aceton eingetragen. Nach 15minütigem Rühren bei Raumtemperatur wird das Aceton abfiltriert und der Myzelrückstand im Vakuumtrockenschrank bei einer Temperatur von 30°C bis 46⁰C getrocknet (Ausbeute (bezogen auf 1 kg Feuchtmyzelmasse]: 0,3kg Acetontrockenpulver bzw. Katalysator ATPM; katalytische Aktivität: 20 bis 40μΜοΙ Umsatz Saccharose/mi"/g Acetontrockenpulver des Myzelrückstandes).To produce invertase-containing mycelia in the form of acetone dry powder, the biomass of a 120 hour culture obtained in advance is separated by separators or rotary cell filters. 1 kg moist mycelium are then added with stirring in 51 acetone. After 15 minutes of stirring at room temperature, the acetone is filtered off and the mycelial residue dried in a vacuum oven at a temperature of 30 ° C to 46 ⁰ C (yield (based on 1 kg wet mycelial mass): 0.3 kg acetone dry powder or catalyst ATPM, catalytic activity: 20 to 40μΜοΙ turnover sucrose / mi "/ g acetone dry powder of mycelial residue).

c) Herstellung vr η Invertzuckerc) Preparation vr η invert sugar

6kg Saccharose werden in 601 Wasser glöst und mit 0,3kg des in obigem Verfahrensschritt hergestellten Katalysators A ΓΡΜ versetzt. Nach 20stündiger Inkubation bei pH 7,0 ± 0,5 und bei 37 ⁰C unter Rühren ist die völlige Umwandlung von Saccharose in Glucoje und Fructose beendet. Nach dem Einrühren von 200g Aktivkohle (gepulvert) und Erwärmen auf 80⁰C für 10 bis 15 Minuten wird die Lösung filtriert.6kg of sucrose are dissolved in 60 l of water and mixed with 0.3 kg of the catalyst prepared in the above process step A ΓΡΜ. After 20 hours of incubation at pH 7.0 ± 0.5 and at 37 ⁰ C with stirring the complete conversion of sucrose into Glucoje and fructose is completed. After stirring in 200 g activated carbon (powdered) and heating to 80 ⁰ C for 10 to 15 minutes, the solution is filtered.

Die erhaltene färb- und geruchlose Lösung kann direkt für Süßungszwecke eingesetzt oder zwecks Gewinnung von Lösungen mit erhöhtem Zuckeranteil (Sirup) weiter eingeengt werden.The resulting colorless and odorless solution can be used directly for sweetening purposes or further concentrated for the purpose of obtaining solutions with an increased sugar content (syrup).

Claims

1. A process for the preparation of invert sugar by enzymatic cleavage of sucrose, characterized in that the sucrose is incubated in aqueous solution in the presence of the new biocatalyst ATPM.

2. The method according to item 1, characterized in that

For the incubation, an aqueous sucrose solution mixed with biocatalyst ATPM, consisting of 0.5 parts by weight of ATPM per 7.5 to 15.0 parts by weight of sucrose in 100 parts by weight of water,

- The incubation at temperatures of 35 ° C to 45 ° C for 10 hours to 24 hours and carried out at neutral pH and

- The resulting invert sugar-containing solution by treatment with known adsorbents and filtration purified