DD260996A5 - ANALYSIS ELEMENT FOR THE DETERMINATION OF SPINAL PARAMETERS - Google Patents
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- DD260996A5 DD260996A5 DD87303652A DD30365287A DD260996A5 DD 260996 A5 DD260996 A5 DD 260996A5 DD 87303652 A DD87303652 A DD 87303652A DD 30365287 A DD30365287 A DD 30365287A DD 260996 A5 DD260996 A5 DD 260996A5
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Abstract
Die Erfindung betrifft ein Analyseelement zur Bestimmung von Gerinnungsparametern mit Hilfe eines nachweisbaren oder eine Nachweisreaktion ausloesenden Substrats, einer Protease des Blutgerinnungssystems und mindestens eines Fektors und/oder Cofaktors des Blutgerinnungssystems und einer Puffersubstanz. Als Traegermaterial zumindest fuer den Faktor und/oder Cofaktor ist eine offene, flaechige Verbundstruktur vorgesehen, die aus einem Material besteht, das keinen stoerenden Einfluss auf den Ablauf der Gerinnungskaskade hat. Es ist mit einem wasserloeslichen nichtionogenen Polymer, das den Ablauf der Gerinnungskaskade nicht verfaelschend beeinflusst, und gegebenenfalls dem Substrat und dem Faktor und/oder Cofaktor impraegniert.The invention relates to an analysis element for the determination of coagulation parameters with the aid of a detectable or a detection reaction triggering substrate, a protease of the blood coagulation system and at least one factor and / or cofactor of the blood coagulation system and a buffer substance. As a carrier material at least for the factor and / or cofactor an open, flat composite structure is provided, which consists of a material that has no disturbing effect on the course of the coagulation cascade. It is impregnated with a water-soluble nonionic polymer which does not affect the course of the coagulation cascade, and optionally the substrate and the factor and / or cofactor.
Description
Hierzu 1 Seite ZeichnungFor this 1 page drawing
Die Erfindung betrifft ein Analyseelement zur Bestimmung von Gerinnungsparametern mit Hilfe von einem nachweisbaren oder eine Nachweisreaktion auslösenden Substrat, einer Protease des Blutgerinnungssystems und mindestens einem Faktor und/ oder Cofaktor des Blutgerinnungssystems und einer Puffersubstanz und/oder Cofaktor zusammen mit einem wasserlöslichen, nichtionogenen Polymer, das den Ablauf der Gerinnungskaskade nicht verfälschend beeinflußt, auf einer offenen, flächigen Verbundstruktur, die aus einem Material besteht, das keinen störenden Einfluß auf den Ablauf der Gerinnungskaskade hat, imprägniert ist.The invention relates to an analysis element for the determination of coagulation parameters with the aid of a detectable or a detection reaction triggering substrate, a protease of the blood coagulation system and at least one factor and / or cofactor of the blood coagulation system and a buffer substance and / or cofactor together with a water-soluble, non-ionogenic polymer does not adversely affect the course of the coagulation cascade, is impregnated on an open, flat composite structure which consists of a material which has no interfering influence on the course of the coagulation cascade.
Ein derartiges Analysesystem ist in der älteren, jedoch nicht vorpublizierten, deutschen Patentanmeldung P 3516579 beschrieben. Auf diese Anmeldung wird vollinhaltlich Bezug genommen. Dort wird als Trägermaterial bevorzugt Papier oder ein Vlies eingesetzt. In einer anderen Ausführungsform des dort beschriebenen Analyseelements befindet sich das Substrat und/ oder der Cofaktor in einem wasserlöslichen, filmbildenden Polymeren. Der reagentienhaltige Film wird auf eine Basisfolie aufgebracht.Such an analysis system is described in the older, but not vorpubliziert, German patent application P 3516579. This application is incorporated by reference. There is preferably used as a carrier paper or a fleece. In another embodiment of the analysis element described therein, the substrate and / or the cofactor is in a water-soluble, film-forming polymer. The reagent-containing film is applied to a base film.
Will man mit dem in der zitierten Patentanmeldung beschriebenen Analyseelement beispielsweise die Einphasengerinnungszeit nach Quick bestimmen, so enthält es Thromboplastin als Cofaktor (gelegentlich auch als Aktivator bezeichnet), Calciumionen und ein Substrat für Thrombin (eine Protease des Blutgerinnungssystems). Wird dieses Analyseelement mit Plasma in Kontakt gebracht, indem beispielsweise ein Tropfen Plasma aufgebracht wird, so wird durch die Anwesenheit des Thromboplastin und der Calciumionen die Gerinnungskaskade gestartet. Das beim Ablauf der Gerinnungskaskade entstehende Thrombin spaltet das Substrat. Das Substrat ist so ausgewählt, daß es nach der Spaltung entweder unmittelbar nachweisbar ist oder eine Nachweisreaktion auslöst. Im allgemeinen wird eine Farbbildung verwendet. Das Substrat ist in diesem Fall entweder selbst farbbildend oder das Spaltprodukt löst indirekt eine Farbbildung über eine Folgereaktion aus. Alternativ können für dieFor example, to determine the single phase clotting time according to Quick using the analysis element described in the cited patent application, it contains thromboplastin as cofactor (sometimes also referred to as activator), calcium ions and a substrate for thrombin (a protease of the blood clotting system). When this analysis element is brought into contact with plasma, for example by applying a drop of plasma, the coagulation cascade is started by the presence of the thromboplastin and the calcium ions. The thrombin formed at the end of the coagulation cascade splits the substrate. The substrate is selected so that it is either immediately detectable after cleavage or triggers a detection reaction. In general, color formation is used. In this case, the substrate is either color-forming itself or the cleavage product indirectly triggers color formation via a subsequent reaction. Alternatively, for the
Nachweisreaktionen beispielsweise auch solche Substrate verwendet werden, die fluoreszierende Farbstoffe erzeugen. Der Typ der Nachweisreaktion ist für die vorliegende Erfindung unwesentlich.Detection reactions, for example, those substrates are used which produce fluorescent dyes. The type of detection reaction is immaterial to the present invention.
Das in der zitierten Patentanmeldung beschriebene Verfahren bedeutet einen erheblichen Fortschritt, weil erstmalig ein Analyseelement (das gelegentlich auch als Trockentest oder Testträger bezeichnet wird) zur Bestimmung von Parametern des Blutgerinnungssystems zur Verfügung gestellt wird. Es läßt jedoch noch bezüglich der Präzision der erhaltenen Meßergebnisse zu wünschen übrig. Im Rahmen der vorliegenden Erfindung wurde erkannt, daß die bei Analyseelementen üblichen Papiere oder Vliese den Ablauf der Gerinnungskaskade in vielen Fällen so beeinflussen, daß das Meßergebnis nicht den aus medizinischer Sicht wünschenswerten Grad von Genauigkeit erreicht.The method described in the cited patent application represents a significant advance because for the first time an analysis element (sometimes referred to as a dry test or test carrier) is provided for determining parameters of the blood coagulation system. However, it still leaves something to be desired with regard to the precision of the measurement results obtained. In the context of the present invention, it has been recognized that the papers or fleeces customary in analysis elements influence the course of the coagulation cascade in many cases in such a way that the measurement result does not reach the degree of accuracy which is desirable from a medical point of view.
Werden die Reagentien in einen wasserlöslichen Film inkorporiert, so wird eine Beeinflussung der Gerinnungskaskade im vorerwähnten Sinn bei geeigneter Wahl der Filmbildner zwar vermieden, dennoch läßt die Präzision der Messung zu wünschen übrig. Dies läßt sich, wie ebenfalls im Rahmen der vorliegenden Erfindung erkannt wurde, darauf zurückführen, daß die Filmschicht die Reagentien verhältnismäßig langsam freisetzt. Für den Gerinnungstest müssen die Reagentien aber möglichst kurzfristig freigesetzt werden, weil die Gerinnungseigenschaften der Probe über eine Zeitmessung ermittelt werden. Der Anfangspunkt dieses Zeitraums wird durch eine verzögerte Freisetzung der Reagentien unpräzise.If the reagents are incorporated into a water-soluble film, an influence on the coagulation cascade in the aforementioned sense, with a suitable choice of the film former, is indeed avoided, yet the precision of the measurement leaves something to be desired. As can also be seen in the context of the present invention, this can be attributed to the fact that the film layer releases the reagents relatively slowly. For the coagulation test, however, the reagents must be released as soon as possible, because the coagulation properties of the sample are determined by means of a time measurement. The starting point of this period becomes imprecise due to a delayed release of the reagents.
Ziel der Erfindung ist die Bereitstellung eines verbesserten Analyseelements zur Bestimmung von Gerinnungsparametern, welches die Nachteile der bekannten Analyseelemente nicht aufweist.The aim of the invention is to provide an improved analysis element for the determination of coagulation parameters, which does not have the disadvantages of the known analysis elements.
Darlegung des Wesens der Erfindung -Explanation of the essence of the invention
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein Analyseelement für Gerinnungstests zu Verfugung zu stellen, das ebenso leicht zu handhaben ist, wie das in der zitierten Patentanmeldung beschriebene, jedoch eine verbesserte Präzision aufweist.The invention has for its object to provide an analysis element for coagulation tests, which is just as easy to handle, as described in the cited patent application, but has an improved precision.
Die Aufgabe wird gelöst durch ein Analyseelement zur Bestimmung von Gerinnungsparametern mit Hilfe von einem nachweisbaren oder eine Nachweisreaktion auslösenden Substrat, einer Protease des Blutgerinnungssystems und mindestens einem Faktor und/oder Cofaktor des Blutgerinnungssystems und einer Puffersubstanz, derart, daß der Faktor und/oder Cofaktor zusammen mit einem wasserlöslichen, nichtionogenen Polymer, das den Ablauf der Gerinnungskaskade nicht verfälschend beeinflußt, auf einer offenen, flächigen Verbundstruktur, die aus einem Material besteht, das keinen störenden Einfluß auf den Ablauf der Gerinnungskaskade hat, imprägniert ist.The object is achieved by an analysis element for the determination of coagulation parameters by means of a detectable or a detection reaction triggering substrate, a protease of the blood coagulation system and at least one factor and / or cofactor of the blood coagulation system and a buffer substance, such that the factor and / or cofactor together with a water-soluble, non-ionogenic polymer, which does not adversely affect the course of the coagulation cascade, on an open, flat composite structure, which consists of a material which has no disturbing effect on the course of the coagulation cascade impregnated.
Erfindungsgemäß ist das Substrat zusammen mit dem Faktor und/oder Cofaktor und dem wasserlöslichen nichtionogenen Polymer auf der offenen, flächigen Verbundstruktur imprägniert.According to the invention, the substrate is impregnated together with the factor and / or cofactor and the water-soluble nonionic polymer on the open, flat composite structure.
Insbesondere ist das Substrat zusammen mit einem wasserlöslichen nichtionogenen Polymer auf eine zweite offene, flächige Verbundstruktur imprägniert, welche von der den Faktor und/oder Cofaktor tragenden Verbundstruktur getrennt ist.In particular, the substrate, together with a water-soluble nonionic polymer, is impregnated onto a second open, sheet-like composite structure which is separate from the factor and / or cofactor-bearing composite structure.
Die flächige offene Verbundstruktur ist erfindungsgemäß mit Calciumionen imprägniert. Dabei kann die flächige Verbundstruktur ein Gewebe, Gewirke oder Netz sein. Bevorzugt besteht das Gewebe, Gewirke oder Netz aus monofilen Fäden.The planar open composite structure is impregnated according to the invention with calcium ions. In this case, the two-dimensional composite structure can be a woven, knitted or net. Preferably, the woven fabric, knitted or net consists of monofilament threads.
Bevorzugt weist die flächige Verbundstruktur eine Dicke von höchstens 0,25 mm und mindestens 20 Fäden pro cm auf.The flat composite structure preferably has a thickness of at most 0.25 mm and at least 20 threads per cm.
Das nichtionogene Polymer ist ein Filmbildner, der bei Temperaturen unter 50°C in Wasser löslich ist.The nonionic polymer is a film former that is soluble in water at temperatures below 50 ° C.
Bei einem Analyseelement, bei dem als Cofaktor Thromboplastin verwendet wird, wird ein das Thromboplastin auf der fläch igen Verbundstruktur stabilisierendes Polymer angewandt, beispielsweise ein Polyethylenoxid, ein Polyacrylamid oder ein Polyvinylalkohol.In an analysis element using cofactor thromboplastin, a polymer stabilizing the thromboplastin on the sheet-like composite structure is used, for example, a polyethylene oxide, a polyacrylamide or a polyvinyl alcohol.
Als offene flächige Verbundstruktur ist jede Struktur zu verstehen, die flächig ausgedehnt ist, d. h. sie hat eine geringe Dicke (von bevorzugt weniger als 0,5 mm, besonders bevorzugt weniger als 0,25 mm) in Relation zu ihrer Flächenausdehnung. Die Flächenausdehnung ist durch die Testfeldfläche innerhalb des Analyseelementes bestimmt. Mit „offen" ist gemeint, daß die Struktur geeignet sein soll, einer wäßrigen Flüssigkeit, wie beispielsweise einer Plasmaprobe, ein schnelles Eindringen zu ermöglichen, wobei die Struktur eine möglichst große Oberfläche haben soll, die in Kontakt mit der Probe gebracht werden kann.An open planar composite structure is any structure that is extended over a wide area, ie. H. it has a small thickness (preferably less than 0.5 mm, more preferably less than 0.25 mm) in relation to its surface area. The areal extent is determined by the test field area within the analysis element. By "open" it is meant that the structure should be capable of allowing an aqueous liquid, such as a plasma sample, to penetrate rapidly, the structure having the largest possible surface area that can be brought into contact with the sample.
Geeignet wäre beispielsweise eine siebartige Struktur aus einem Kunststoffmaterial, d. h. eine Kunststoffolie mit sehr vielen dicht beeinander angeordneten Löchern. Besonders bevorzugt ist jedoch ein Gewebe, ein Gewirke oder ein Netz, das aus Fäden besteht. Insbesondere sind monofile Fäden geeignet.For example, a sieve-like structure made of a plastic material would be suitable, i. H. a plastic film with many holes close together. However, particularly preferred is a woven fabric, a knitted fabric or a net consisting of threads. In particular, monofilament threads are suitable.
Als Material zur Herstellung der flächigen Verbundstruktur ist im Prinzip jedes Material geeignet, das keinen störenden Einfluß auf den Ablauf der Gerinnungskaskade hat und aus dem sich fertigungstechnisch eine Struktur der beschriebenen Art herstellen läßt. Außerdem muß das Material so beschaffen sein, daß das nichtionogene Polymer mit den Reagentien darauf haftet.As a material for producing the laminar composite structure, in principle, any material is suitable which has no disturbing effect on the course of the coagulation cascade and from which can produce a structure of the type described manufacturing technology. In addition, the material must be such that the non-ionic polymer with the reagents will adhere to it.
Besonders bevorzugte Materialien sind Polyamid, Polyester und Mischgewebe aus diesen Fasern. Die Fadenzahl pro cm liegt bevorzugt über 20.Particularly preferred materials are polyamide, polyester and blended fabrics of these fibers. The number of threads per cm is preferably over 20.
Die Frage, ob das für die Verbundstruktur gewählte Material den Ablauf der exogenen Gerinnungskaskade beeinflußt, läßt sich wie folgt testen: 40 mg des Materials werden mit 300 μΙ Citratplasma 60s bei 370C inkubiert. Danach wird das Plasma abzentrifugiert, die Gerinnbarkeit des Plasmas darf sich nicht statisch signifikant geändert haben.The question of whether the material chosen for the composite structure affects the flow of the exogenous coagulation cascade, can be tested as follows: 40 mg of the material are incubated with 300 μΙ citrate 60s at 37 0 C. Thereafter, the plasma is centrifuged off, the coagulability of the plasma must not have changed statically significant.
Das nichtionogene Polymer muß die Eigenschaft haben, daß es sich bei den bei der Anwendung üblichen Temperaturen hinreichend schnell im wäßrigen Medium löst. Es wurde gefunden, daß auch Materialien, die sich bei größerer Schichtstärke erst bei oberhalb der Raumtemperatur liegenden Temperaturen in Wasser ausreichend schnell lösen, noch geeignet sind, weil sie auf der erfindungsgemäßen Verbundstruktur in dünner Schicht vorliegen.The nonionic polymer must have the property that it dissolves sufficiently fast in the aqueous medium at the temperatures customary in the application. It has also been found that materials which dissolve sufficiently quickly in water at relatively high layer thickness only at temperatures above room temperature are still suitable because they are present on the composite structure according to the invention in a thin layer.
Weiterhin muß das nichtionogene Polymer die Eigenschaft haben, auf der flächigen Verbundstruktur eine haftende, dünne Schicht zu bilden. Im Gegensatz zu einer Beschichtung, wie sie beispielsweise bei der Herstellung regenabweisender Kleidung üblich ist, bei der ein Polymermaterial auf einer Gewebeschicht dergestalt aufgebracht wird, daß die Polymerschicht im wesentlichen auf einer Seite der Gewebestruktur bleibt und deren Öffnungen überspannt, wird die erfindungsgemäße Verbundstruktur mit dem nichtionogenen Polymer imprägniert, d. h. das Polymer umgibt die Verbundstruktur allseitig.Furthermore, the nonionic polymer must have the property of forming an adhesive, thin layer on the laminar composite structure. In contrast to a coating, such as is common in the manufacture of rain-repellent clothing in which a polymer material is applied to a fabric layer such that the polymer layer remains substantially on one side of the fabric structure and spans its openings, the composite structure according to the invention with the nonionic polymer impregnated, d. H. The polymer surrounds the composite structure on all sides.
Geeignete Polymere sind beispielsweise nichtionogene Cellulose-Derivate, Polyvinylpyrrolidone und Poiyxanthane.Suitable polymers are, for example, nonionic cellulose derivatives, polyvinylpyrrolidones and polyalkantanes.
Als besonders geeignet haben sich Polyethylenoxide, Polyacrylamide sowie teilweise oder vollständig zu Polyvinylalkohol verseifte Polyvinylacetate erwiesen. Innerhalb der letztgenannten Gruppe sind die teilweise verseiften Polyvinylacetate bevorzugt. Besonders bevorzugt sind Polyvinylacetate mit einem Verseifungsgrad zwischen 70 und 93Mol-%. Alle diese Polymere haben überraschenderweise den zusätzlichen Vorteil, daß sie das Thromboplastin stabilisieren. Auf diese Weise läßt sich ein Quick-Test herstellen, der sich durch ein besonders gutes Lagerverhalten auszeichnet. Gegebenenfalls können auch Gemische geeigneter nichtionogener Polymere zur Anwendung kommen. Zur Herstellu ng der erfindungsgemäßen Reagenzträger wird zu nächst eine Lösung des Faktors und/oder des Cofaktors und des nichtionogenen wasserlöslichen Polymeres hergestellt. Gegebenenfalls können noch andere Bestandteile, beispielsweise Weichmacher, zugegeben werden. Mit dieser Lösung wird die flächige Verbundstruktur bevorzugt durch Eintauchen, unter Umständen auch durch Besprühen imprägniert. Die geeignete Viskosität der Imprägnierungslösung kann nicht generell festgelegt werden, sondern ist für jedes nichtionogene Polymer bzw. Polymergemisch unterproduktionstechnischen Gesichtspunkten auf das jeweilige Gewebe abzustimmen. Gut bewährt haben sich Viskositäten zwischen 50 und 250 m Pa see. Das als Indikator wirkende Substrat kann zusammen mit dem Faktor und/oder dem Cofaktor und dem nichtionogenen wasserlöslichen Polymeren auf der flächigen Verbundstruktur imprägniert werden. Unter Umständen kann es jedoch problematisch sein, den Faktor und/oder Cofaktor zusammen mit dem Substrat zu verarbeiten. In diesem Falle hat es sich als zweckmäßig erwiesen, das Substrat auf einem separaten Trägermaterial unterzubringen. Für diesen Zweck kommen verschiedene bekannte Trägermaterialien in Betracht. Besonders bevorzugt wird jedoch auch in diesem Fall eine offene, flächige Verbundstruktur als Trägermaterial verwendet, welche analog dem vorbeschriebenen Verfahren mit einer Lösung imprägniert wird, welche neben dem Substrat ein nichtionogenes wasserlösliches Polymer enthält. Dadurch ergibt sich ein besonders gleichmäßiges Auflösungsverhalten der beiden Trägermaterialschichten, die einerseits den Faktor und/oder den Cofaktor und andererseits das als Indikator dienende Substrat enthalten.Polyethylene oxides, polyacrylamides and partly or completely saponified polyvinyl alcohols have proved to be particularly suitable. Within the latter group, the partially saponified polyvinyl acetates are preferred. Particularly preferred are polyvinyl acetates having a degree of saponification between 70 and 93 mol%. Surprisingly, all of these polymers have the added advantage of stabilizing the thromboplastin. In this way, a quick test can be produced, which is characterized by a particularly good storage behavior. Optionally, mixtures of suitable nonionic polymers may also be used. To produce the reagent carrier according to the invention, a solution of the factor and / or the cofactor and the non-ionogenic water-soluble polymer is first prepared. Optionally, other ingredients, such as plasticizers, may be added. With this solution, the two-dimensional composite structure is preferably impregnated by immersion, possibly also by spraying. The suitable viscosity of the impregnation solution can not generally be determined, but must be adapted to the respective fabric for each non-ionic polymer or polymer mixture from a production-technical point of view. Viscosities between 50 and 250 m Pa see are well proven. The indicator substrate may be impregnated with the factor and / or the cofactor and the nonionic water-soluble polymer on the sheet composite structure. However, it may be problematic to process the factor and / or cofactor together with the substrate. In this case, it has proven to be expedient to accommodate the substrate on a separate carrier material. For this purpose, various known support materials come into consideration. However, in this case as well, an open, flat composite structure is particularly preferably used as carrier material, which is impregnated analogously to the method described above with a solution which contains a nonionic water-soluble polymer in addition to the substrate. This results in a particularly uniform dissolution behavior of the two carrier material layers, which contain on the one hand the factor and / or the cofactor and on the other hand serving as the indicator substrate.
Gemäß einer weiteren bevorzugten Ausführungsform wird die offene, flächige Verbundstruktur bzw. soweit mehrere derartige Strukturen verwendet werden, mindestens eine davon gleichzeitig mit dem bei Gerinnungstests im allgemeinen zur Recalcifizierung des Plasmas erforderlichen Calciumionen imprägniert.According to a further preferred embodiment, the open, laminar composite structure or, if several such structures are used, at least one of them is simultaneously impregnated with the calcium ions generally required for clotting tests in order to recalcify the plasma.
Puffersubstanzen können ebenfalls zusammen mit dem Faktor und/oder Cofaktor imprägniert werden, sie können jedoch auch auf einem separaten Trägermaterial des Analyseelementes vorhanden sein.Buffer substances may also be impregnated together with the factor and / or cofactor, but they may also be present on a separate support material of the analysis element.
Die Erfindung wird im folgenden anhand einiger Beispiele näher erläutert. In der beiliegenden Zeichnung zeigt: Fig. 1: ein erfindungsgemäßes Analyseelement schematisch im Querschnitt.The invention will be explained in more detail below with reference to some examples. In the accompanying drawings: FIG. 1 shows an inventive analysis element schematically in cross section.
Man erkennt als tragenden Bestandteil des allgemein mit 10 bezeichneten Analyseelements eine Trägerfolie 1. Im dargestellten Ausführungsbeispiel hat sie eine längliche Form wie bei einem Teststreifen. Die Erfindung ist jedoch auch für andere Formen von Analyseelementen geeignet, die beispielsweise eine quadratische Form ähnlich der von fotografischen Diapositiven haben.A carrier film 1 can be seen as the supporting component of the analysis element, generally designated 10. In the exemplary embodiment shown, it has an elongated shape, as in the case of a test strip. However, the invention is also suitable for other forms of analysis elements, for example having a square shape similar to that of photographic slides.
Auf der Trägerfolie 1 ist mit einem Streifen Schmelzkleber 2 ein Erythrozytenabtrenn-und Plasmatransportvlies befestigt.On the carrier sheet 1 is fixed with a strip of hot melt adhesive 2 Erythrozytenabtrenn- and plasma transport fleece.
Besonders eignet sich ein Vlies aus einem gerinnungsneutralen Glasfasermaterial, wie es in den DE-Patentanmeldungen 3523969 und 3610429 beschrieben ist. Das im folgenden kurz als Transportvlies bezeichnete Vlies 4 ist teilweise mit einem ebenfalls mit dem Kleber 2 befestigten Abdecknetz 3 überdeckt. Hierfür ist ein Nylonnetz geeignet.Particularly suitable is a nonwoven made of a clotting-neutral glass fiber material, as described in DE patent applications 3523969 and 3610429. The fleece 4, referred to below briefly as a transport fleece, is partially covered by a cover net 3 which is likewise fastened to the adhesive 2. For this a nylon net is suitable.
Drei weitere flächenförmige Bestandteile des Analyseelements 10 sind mit einem Streifen Schmelzkleber 8 dargestellt auf der Trägerfolie 1 befestigt, daß sie das Transportvlies 4teiiweise überlappen. Da sie nur an einer ihrer Kanten aneinander und an der Trägerfolie 1 befestigt sind, haben sie über ihre verbleibende Fläche einen Abstand voneinander, solange sie nicht durch äußeren Druck aufeinander gedrückt werden. Näheres zu dieser Art des Testaufbaus ist beispielsweise der EP-Patentanmeldung mit der Publikationsnummer 45476 zu entnehmen.Three further sheet-like components of the analysis element 10 are shown with a strip of hot melt adhesive 8 on the carrier sheet 1 attached that they overlap the transport fleece 4teiiweise. Since they are attached to one another only at one of their edges and to the carrier film 1, they have a distance from each other over their remaining surface, as long as they are not pressed against each other by external pressure. Further details on this type of test setup can be found, for example, in EP Patent Application Publication No. 45476.
Die unterste Schicht 5 kann ein Oxidationsmittelträger sein, der im folgenden auch als Oxidationsmatrix bezeichnet wird.The lowermost layer 5 can be an oxidant carrier, which is also referred to below as the oxidation matrix.
Darüber befindet sich der erfindungsgemäße Reagenzträger 6 in Form der imprägnierten offenen Verbundstruktur. Als oberste Schicht ist eine Abdeckfolie 7 vorgesehen.Above it is the reagent carrier 6 according to the invention in the form of the impregnated open composite structure. As the uppermost layer, a cover sheet 7 is provided.
Bevorzugt wird für die Schicht 6 ein Gewebe verwendet, das mit einer Lösung imprägniert ist, in der die Filmbildner, Puffer, Thromboplastin oder ein anderes Startreagenz für den Start der exogenen oder endogenen Gerinnungskaskade sowie ein zugleich als Indikator wirkendes Substrat für eine der beim Ablauf der Blutgerinnungenstehenden Proteasen, wie z. B. Faktor Ha, Faktor Xa usw., eventuell noch ein Kuppler, sowie Calcium-Ionen und eventuell noch ein Weichmacher für den Filmbildner im Wasser gelöst sind. Als Puffersubstanzen haben sich Tris und Verbindungen aus der Reihe der Good-Puffer bewährt. Als Substrate können alle Proteasesubstrate genommen werden, die aufgrund ihrer Aminosäuresequenz ausreichend spezifisch sind, wie z.B. Tos-gly-pro-arg-4-nitroanilid-acetat, oder Tos-gly-pro-arg-p-phenylendiamin-acetat und N-Methylanthranilsäure als Kuppler; andere Kuppler, wie N-(4-Fluorphenyl)-N-methylamino-methanphosphonsäure usw., können ebenfalls eingesetzt werden.Preferably, a tissue is used for the layer 6, which is impregnated with a solution in which the film former, buffer, thromboplastin or another starting reagent for the start of the exogenous or endogenous coagulation cascade and a simultaneously acting as an indicator substrate for one of the expiration of Blood-clotting proteases, such as. B. Factor Ha, Factor Xa, etc., possibly even a coupler, and calcium ions and possibly still a plasticizer for the film former are dissolved in the water. As buffer substances, tris and compounds from the series of good buffers have proven useful. As substrates all protease substrates can be taken which are sufficiently specific due to their amino acid sequence, e.g. Tos-gly-pro-arg-4-nitroanilide-acetate, or Tos-gly-pro-arg-p-phenylenediamine-acetate and N-methylanthranilic acid as coupler; other couplers such as N- (4-fluorophenyl) -N-methylamino-methanephosphonic acid, etc. can also be used.
Bei Indikatoren, die nach Spaltung durch die Protease über eine angeschlossene oxidative Kupplung eine Farbe geben, ist es notwendig, in der Schicht 5 ein Oxidationsmittel, wie z. B. Ka[Fe(CN)6] vorzusehen. Gegebenenfalls können in der Schicht 5 auch Calciumionen untergebracht werden. Bevorzugt wird für die Schicht 5 ebenfalls ein dünnes Gewebe verwendet, das imprägniert wurde. Soweit ein Indikator verwendet wird, bei dem keine Verstärkungsreaktion über eine oxidative Kupplung erforderlich ist, entfällt die Oxidationsmatrix 5. Die Schicht 5 kann bei der oben erwähnten alternativen Ausführungsform mit separater Unterbringung des Substrats auch eine flächige Verbundstruktur sein, auf die das Substrat getrennt von dem Faktor und/oder Cofaktor imprägniert ist.For indicators which give a color after cleavage by the protease via a connected oxidative coupling, it is necessary in the layer 5, an oxidizing agent, such as. B. Ka [Fe (CN) 6 ] provided. Optionally, calcium ions can also be accommodated in the layer 5. Preferably, for the layer 5 also a thin fabric is used which has been impregnated. Insofar as an indicator is used in which no amplification reaction via an oxidative coupling is required, the oxidation matrix 5 is omitted. In the abovementioned alternative embodiment with separate housing of the substrate, the layer 5 may also be a laminar composite structure to which the substrate is separated Factor and / or cofactor is impregnated.
Nähere Einzelheiten über die chemische Zusammensetzung verschiedener Gerinnungstests, die auch für die vorliegende Erfindung geeignet sind, sind der eingangs zitierten deutschen Patentanmeldung 3516579 zu entnehmen.Further details about the chemical composition of various coagulation tests, which are also suitable for the present invention, can be found in the German Patent Application 3516579 cited above.
In den folgenden Beispielen werden die Ergebnisse, wie sie mit Reagenzfilmen auf Folie gemäß der zitierten deutschen Patentanmeldung erzielt werden, verglichen mit Ergebnissen mit erfindungsgemäß imprägnierten Geweben.In the following examples, the results, as obtained with reagent films on film according to the cited German patent application, compared with results with inventively impregnated tissues.
Herstellung eines Analyseelements zur Bestimmung der Einphasengerinnungszeit nach QuickPreparation of an analysis element for determining the single-phase clotting time according to Quick
Herstellung von Reagenzfilmen (Reagenzmatrix) auf FoliePreparation of reagent films (reagent matrix) on foil
Auf Polycarbonatfolien der Dicke 200 μηπ werden mit einer Naßfilmdicke von 100 pm Filme in der Tab. 1 aufgeführten Zusammensetzungen aufgerakelt und bei 45°C getrocknet. Nach dem Trocknen werden die beschichteten Folienbahnen auf eine Breite von 15mm geschnitten.On Polycarbonatfolien the thickness of 200 μηπ films are tabbed in the compositions listed in Tab. 1 with a wet film thickness of 100 .mu.m and dried at 45 ° C. After drying, the coated film webs are cut to a width of 15mm.
Herstellung von imprägnierten Geweben (erfindungsgemäß)Production of impregnated fabrics (according to the invention)
Polyamidgewebe (Typ 75 HC) werden mit Imprägnierlösungen der in Tab. 1 aufgeführten Zusammensetzungen imprägniert und bei 450C getrocknet. Nach dem Trocknen werden die imprägnierten Gewebebahnen auf eine Breite von 15 mm geschnitten.Polyamide fabric (type 75 HC) are impregnated with impregnating solutions of the compositions listed in Tab. 1 and dried at 45 0 C. After drying, the impregnated fabric webs are cut to a width of 15 mm.
Herstellung der OxidationsmatrixPreparation of the oxidation matrix
Ein Nylonnetz (Type NY 20 HC Super) wird mit einer wäßrigen Lösung von 50 mmol K3[Fe(CN)6] !,öOmmolCalciumchlorid/i und 0,2g/1 Polyacrylamid (Rohagit700) imprägniert und bei 450C getrocknet. Nach dem Trocknen werden von dem imprägnierten Netz 15mm breite Bahnen geschnitten.A nylon mesh (Type NY 20 HC Super) is reacted with an aqueous solution of 50 mmol of K 3 [Fe (CN) 6]!, ÖOmmolCalciumchlorid / i and 0.2 g / 1 Polyacrylamide (Rohagit700) impregnated and dried at 45 0 C. After drying, 15mm wide webs are cut from the impregnated web.
Herstellung der Beschichtungs- bzw. ImprägniermassenProduction of the coating or impregnating compositions
In 1 Liter destilliertes Wasser werden Hepes lOOmmol; Tos-Gly-Pro-Arg-p-phenylendiamin 1 mmol; N-(4-fluorphenyl)-N-methylamino-methanphosphonsäure 15mmol; 2,5g Thromboplastin und die Polymere entsprechend den in Tabelle 1 gemachten Angaben gelöst. Diese Lösungen werden mit Natronlauge auf einen pH von 7,5 eingestellt.In 1 liter of distilled water Hepes are lOOmmol; Tos-Gly-Pro-Arg-p-phenylenediamine 1 mmol; N- (4-fluorophenyl) -N-methylamino-methanephosphonic acid 15mmol; 2.5 g thromboplastin and the polymers were dissolved according to the information given in Table 1. These solutions are adjusted to a pH of 7.5 with sodium hydroxide solution.
Polymerepolymers
1. Polyvinylalkohol Mowiol (26/88, Hoechst)1. Polyvinyl alcohol Mowiol (26/88, Hoechst)
2. Polyvinylalkohol Mowiol (18/88, Hoechst)2. Polyvinyl alcohol Mowiol (18/88, Hoechst)
3. Polyethylenoxid3. polyethylene oxide
(Polyox 301, Union Carbide) Polyacrylamid (Rohagit7Ö0, Röhm)(Polyox 301, Union Carbide) polyacrylamide (Rohagit7O0, Rohm)
4. Polyvinylalkohol Mowiol 18/88, Hoechst) Polyacrylamid (Rohagit 700, Röhm)4. polyvinyl alcohol Mowiol 18/88, Hoechst) polyacrylamide (Rohagit 700, Röhm)
Herstellen des AnalyseelementsCreate the analysis element
Auf eine 100 mm breite Polystyrolfolie (1 in Abb. 1) wird ein Glasfaservlies (4 in Abb. 1) gemäß der DE-Patentanmeldung 3523969 von einem Flächengewicht von 30-40g/m2in einer Breite von 15 mm gelegt, mit einem Nylonnetz (3 in Abb. 1) teilweise abgedeckt und an einem Ende mit einem Kleber (2 in Abb. 1) fixiert. Am freien Ende des Glasfaservlies werden die Oxidations- (5 in Abb. 1) und Reagenzmatrix (6 in Abb. 1) übereinandergelegt und mit einer 200 μπι dicken transparenten Polycarbonatfolie (7 in Abb. 1) von 15 mm Breite abgedeckt und mit einem Kleber 8 (2 in Abb. 1) festgeklebt. Die so hergestellten Bänder werden zu 6 mm breiten Streifen geschnitten.On a 100 mm wide polystyrene film (1 in Fig. 1) is a glass fiber fleece (4 in Fig. 1) according to DE patent application 3523969 of a basis weight of 30-40g / m 2 in a width of 15 mm laid, with a nylon net (3 in Fig. 1) partially covered and fixed at one end with an adhesive (2 in Fig. 1). At the free end of the glass fiber fleece, the oxidation (5 in Fig. 1) and reagent matrix (6 in Fig. 1) are superimposed and covered with a 200 μπι thick transparent polycarbonate film (7 in Fig. 1) of 15 mm width and with an adhesive 8 (2 in Fig. 1) glued. The strips thus produced are cut into 6 mm wide strips.
Der Aufbau des Analyseelements mit einem Reagenzfilm auf Folie entspricht im wesentlichen dem beschriebenen Aufbau gemäß Abb. 1. Er unterscheidet sich jedoch dadurch, daß statt der Schichten 6 und 7 eine einzige Schicht vorgesehen ist. Diese besteht aus einer durchsichtigen Folie, die mit dem Film beschichtet ist. Sie ist so angeordnet, daß die Folie in der Figur nach oben weist.The structure of the analysis element with a reagent film on film substantially corresponds to the structure described in FIG. 1. However, it differs in that instead of the layers 6 and 7, a single layer is provided. This consists of a transparent film which is coated with the film. It is arranged so that the film has in the figure upwards.
Vergleich der mit Filmbeschichtung auf Folie und dem erfindungsgemäßen Verfahren zu erreichenden Präzisionen bei der Bestimmung der Einphasengerinnungszeit nach QuickComparison of the precision to be achieved with film coating on film and the method according to the invention in the determination of the single-phase clotting time according to Quick
Dazu wird wie folgt vorgegangen:The procedure is as follows:
Auf die oben beschriebenen Teststreifen werden 32 μΙ Poolplasma von einem Quickwert von 100% und einem durch Verdünnung mit physiologischer Kochsalzlösung hergestelltem Plasma von 12,5% pipettiert. Der mit den Plasmaproben beschickte Reagenzträger wird im Remissionsphotometer „Reflotron" vermessen. Es wird die Zeit gemessen, die vergeht, bis eine Remissionsabnahme von 10% stattgefunden hat, d. h. die Zeit, bis die exogene Gerinnungskaskade soweit abgelaufen ist, daß eine bestimmte Menge an Thrombin (Faktor Ha) entstanden ist.The test strips described above are pipetted with 32 μM of pool plasma of 100% Quick and 12.5% plasma prepared by dilution with physiological saline. The reagent carrier charged with the plasma samples is measured in the remission photometer "Reflotron." The time is measured, which passes until a remission decrease of 10% has taken place, ie the time until the exogenous coagulation cascade has run so far that a certain amount of thrombin (Factor Ha) has arisen.
Bei den Meßreihen wurden jeweils 25 Bestimmungen je Testvariante und % Quick durchgeführt.In the series of measurements 25 determinations per test variant and% Quick were carried out.
Die Meßergebnisse sind in Tabelle 2 dargestellt.The measurement results are shown in Table 2.
Die vier Zeilen der Tabelle beziehen sich auf die vier verschiedenen Polymere bzw. Polymergemische der Tabelle 1. In den ersten beiden Spalten sind die Meßergebnisse für den zum Vergleich herangezogenen Film auf Folie dargestellt. Die letzten beiden Spalten zeigen die Meßergebnisse für die erfindungsgemäße Aüsführungsform.The four lines of the table refer to the four different polymers or polymer mixtures of Table 1. The first two columns show the measurement results for the film used for comparison on film. The last two columns show the measurement results for the Aüsführungsform invention.
Für jede der Ausführungsformen sind die gemessenen Zeiten für das 100%-Plasma und für das 12,5%-Plasma angegeben.For each of the embodiments, the measured times are given for the 100% plasma and for the 12.5% plasma.
Wesentlich für die Beurteilung der Erfindung sind insbesondere die ebenfalls angegebenen Variatjonskoeffizienten (VK) in Prozent.Essential for the assessment of the invention are in particular the Variatjonskoeffizienten also indicated (VK) in percent.
Die in der Tabelle wiedergegebenen Meßergebnisse zeigen deutlich, daß mit der erfindungsgemäßen Ausführung statistisch signifikant bessere Variationskoeffizienten erhalten werden. Im Bereich von niedrigen Quickprozenten, im wichtigen therapeutischen Bereich, tritt die verbesserte Präzision besonders deutlich hervor.The measurement results reproduced in the table clearly show that with the embodiment according to the invention statistically significantly better coefficients of variation are obtained. In the area of low percentages, in the important therapeutic area, the improved precision is particularly evident.
Claims (10)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DD87303652A DD260996A5 (en) | 1986-05-16 | 1987-06-10 | ANALYSIS ELEMENT FOR THE DETERMINATION OF SPINAL PARAMETERS |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19863616496 DE3616496A1 (en) | 1986-05-16 | 1986-05-16 | ANALYZING ELEMENT FOR DETERMINING COAGLING PARAMETERS |
| DD87303652A DD260996A5 (en) | 1986-05-16 | 1987-06-10 | ANALYSIS ELEMENT FOR THE DETERMINATION OF SPINAL PARAMETERS |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DD260996A5 true DD260996A5 (en) | 1988-10-12 |
Family
ID=25748149
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DD87303652A DD260996A5 (en) | 1986-05-16 | 1987-06-10 | ANALYSIS ELEMENT FOR THE DETERMINATION OF SPINAL PARAMETERS |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| DD (1) | DD260996A5 (en) |
-
1987
- 1987-06-10 DD DD87303652A patent/DD260996A5/en not_active IP Right Cessation
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| ENJ | Ceased due to non-payment of renewal fee |