DD258855A1 - METHOD FOR DETERMINING HUMAN MONOCYTES - Google Patents
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Abstract
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur verbesserten schnellen und zuverlaessigen Bestimmung von Monozyten. Ziel der Erfindung ist der Einsatz eines neuen immunologischen Reagenz zur spezifischen Erkennung von Monozyten. Die Erfindung hat ein Verfahren zur zuverlaessigen Abgrenzung der Monozyten von anderen Blutzellen durch den Einsatz eines neuen monoklonalen Antikoerpers zur Aufgabe. Die Aufgabe wird erfindungsgemaess dadurch geloest, dass die Bestimmung von Monozyten im Zellgemisch unter Verwendung des monoklonalen Antikoerpers RoMo 1 erfolgt, wobei die Methoden der direkten und indirekten Immunfluoreszenz angewandt werden.The invention relates to a method for improved rapid and reliable determination of monocytes. The aim of the invention is the use of a new immunological reagent for the specific detection of monocytes. The invention has a method for the reliable delimitation of the monocytes from other blood cells by the use of a new monoclonal antibody to the task. The object is achieved according to the invention in that the determination of monocytes in the cell mixture is carried out using the monoclonal antibody RoMo 1, the methods of direct and indirect immunofluorescence are applied.
Description
Anwendungsgebiet der ErfindungField of application of the invention
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Bestimmung von humanen Monozyten für die medizinische Diagnostik und die medizinische Grundlagenforschung. .The invention relates to a method for the determination of human monocytes for medical diagnostics and basic medical research. ,
Monozyten können mit bekannten zytologischen Färbemethoden bestimmt werden. Bei bestimmten Untersuchungen, bei denen parallel Lymphozyten- oder Leukozytensubpopulationen mit monoklonalen Antikörpern mit der Immunfluoreszenztechnik bestimmt werden sollen, ist eine derartige Bestimmung der Monozyten nicht möglich. Hier ergibt sich die Notwendigkeit, die Monozyten ebenfalls mit monoklonalen Antikörpern zu bestimmen. Die Bestimmung mit monoklonalen Antikörpern ist außerdem eindeutiger und erlaubt Differenzierungen in Fällen, in denen die klassischen Methoden versagen. Es gibt andere Antikörper gegen menschliche Monozyten, die sich aber in wesentlichen Merkmalen vom verwendeten RoMo 1 unterscheiden (OKM1, Leu 15, BL M/G). Keines von ihnen erkennt ausschließlich Monozyten. Sie sind außerdem nicht in jedem Fall erhältlich. Ein Verfahren, das mit Hilfe eines monokionalen Antikörpers RoMo 1 eine eindeutige Klassifizierung von humanen Monozyten erlaubt, wäre eine Verbesserung des Standes der Technik.Monocytes can be determined by known cytological staining methods. In certain studies in which lymphocyte or leukocyte subpopulations with monoclonal antibodies are to be determined in parallel using the immunofluorescence technique, such a determination of the monocytes is not possible. Here, there is a need to also determine the monocytes with monoclonal antibodies. The determination with monoclonal antibodies is also clearer and allows differentiation in cases where the classical methods fail. There are other antibodies to human monocytes, but they differ in essential characteristics from the RoMo 1 used (OKM1, Leu 15, BL M / G). None of them only recognizes monocytes. They are not always available. A method that allows unambiguous classification of human monocytes with the aid of a monoclonal antibody RoMo 1 would be an improvement of the prior art.
Die Erfindung hat das Ziel, durch den Einsatz eines neuen immunologischen Reagenz' die spezifische Erkennung humaner Monozyten durch an sich bekannte Verfahrensweisen wesentlich zu verbessern und zu effektivieren.The aim of the invention is to significantly improve and to improve the specific recognition of human monocytes by methods known per se by using a novel immunological reagent.
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein Verfahren zur schnellen und eindeutigen Bestimmung humaner Monozyten anzugeben, das in einfacher Weise zu handhaben ist.The invention has for its object to provide a method for the rapid and clear determination of human monocytes, which is easy to handle.
Erfindungsgemäß wird die Aufgabe dadurch gelöst, daß die Bestimmung von humanen Monozyten in einem Zellgemisch unter Verwendung des monoklonalen Antikörpers RoMo 1 erfolgt.According to the invention the object is achieved in that the determination of human monocytes in a cell mixture using the monoclonal antibody RoMo 1 takes place.
Dieser Antikörper wird in vivo oder in vitro aus,dem entsprechenden Zellklon (Hybridom) am Institut für Immunologie des Bereiches Medizin der Wilhelm-Pieck-Universität Rostock hergestellt. Dieser monoklonale Antikörper reagiert auf Grund seiner besonderen strukturbedingten Eigenschaften mit hoher Affinität mit einem Membranantigen von humanen Monozyten und nicht mit anderen Zellen. Diese Reaktion kann durch an sich bekannte Verfahren für eine Nachweisreaktion genutzt werden. Zu diesem Zweck kann der monoklonale Antikörper direkt mit einem Marker gekoppelt werden.This antibody is produced in vivo or in vitro, the corresponding cell clone (hybridoma) at the Institute of Immunology of the Department of Medicine, Wilhelm-Pieck-University Rostock. This monoclonal antibody, due to its unique structural properties, reacts with high affinity with a membrane antigen of human monocytes and not with other cells. This reaction can be used by methods known per se for a detection reaction. For this purpose, the monoclonal antibody can be coupled directly to a marker.
Die Erfindung wird anhand mehrerer Anwendungsbeispiele näher erläutert:The invention will be explained in more detail with reference to several examples of use:
Bsp. 1 Erfassung von Monozyten in Zellsuspensionen mittels indirekter Immunfluoreszenz (Tubentest).Example 1 Detection of monocytes in cell suspensions by means of indirect immunofluorescence (tube test).
1. 1-3 χ 106Zellen werden mit 50μΙ RoMoI in Gebrauchsverdünnung vermischt und für 20-30min. Bei+40C unter mehrmaligem Aufschütteln inkubiert.1. 1-3 χ 10 6 cells are mixed with 50μΙ RoMoI in working dilution and for 20-30min. Incubated at + 4 0 C with repeated shaking.
2. 2maliges Waschen der Zellen mit PBS (0,15 M NaCI, 0,01 M Phosphat; pH 7,4) unter Zusatz von 0,1 % Natriumazid und 1% Serum.2. Wash the cells 2 times with PBS (0.15 M NaCl, 0.01 M phosphate, pH 7.4) with the addition of 0.1% sodium azide and 1% serum.
3. Resuspendieren des Zellsediments mit 50 μΙ Fluoreszeinisothiocyanat-markiertem Anti-Maus-Immunglobulinantiserum in Gebrauchsverdünnung. Inkubation für 20-30 min bei +40C unter mehrmaligem Aufschütteln.3. Resuspend the cell sediment with 50 μΙ fluorescein isothiocyanate-labeled anti-mouse immunoglobulin antiserum in dilution of use. Incubate for 20-30 min at +4 0 C with repeated shaking.
4. 2maliges Waschen der Zellen (s. Punkt 2).4. Washing the cells twice (see point 2).
5. Eindecken der Präparate und anschließende fluoreszenzmikroskopische.Au-swertung.5. Covering the preparations and subsequent fluorescence microscopic evaluation.
Bsp. 2 Erfassung von Monozyten mittels indirekter Immunfluoreszenz (Objektträgertest).Example 2 Detection of monocytes by indirect immunofluorescence (slide test).
1. Beschichtung eines Objektträgers mit einer geeigneten polykationischen Substanz (z.B. mit Poly-dimethyldiallylammoniumchlorid) zur Vermittlung der Adhärenz lebender Zellen.1. Coating a slide with a suitable polycationic substance (e.g., poly (dimethyldiallyl ammonium chloride)) to mediate adherence of living cells.
2. Auf vorbeschichtete Objektträger werden 20 μΙ der zu untersuchenden Zellsuspension mit ca. 5 · 106 Zellen/ml aufgetropft. Die nach 10min noch nicht adhärenten Zellen werden durch kurzes Eintauchen in PBS abgespühlt. Die nachfolgenden Inkubationen erfolgen in einer feuchten Kammer bei +40C.2. 20 μΙ of the cell suspension to be examined are dropped on precoated slides at approximately 5 × 10 6 cells / ml. The cells which are not adherent after 10 minutes are rinsed off by brief immersion in PBS. Subsequent incubations are carried out in a humid chamber at +4 0 C.
3. 30min Inkubation der adhärenten Zellen mit 20μΙ RoMoI in Gebrauchsverdünnung.3. 30min Incubation of the adherent cells with 20μΙ RoMoI in dilution of use.
4. 3 χ 5min Spülender Präparate durch Einstellen in PBS mit 0,1% Azid bei+40C.4. 3 χ 5min rinsing preparations by adjusting in PBS with 0.1% azide at + 4 0 C.
5. 30 min Inkubation der Zellen mit 20 μΙ verdünntem Fluorescein-lsothiocyanat-markiertem Anti-Maus-Immunglobulin-Antiserum.5. Incubate the cells for 30 minutes with 20 μΙ diluted fluorescein isothiocyanate-labeled anti-mouse immunoglobulin antiserum.
6. 3 x 5 min Spülen der Präparate in PBS + 0,1 % Azid und anschließende fluoreszenzmikroskopische Auswertung.6. Rinsing of the preparations in PBS + 0.1% azide for 3 × 5 min. Subsequent fluorescence microscopic evaluation.
Bsp.3 Erfassung der Monozyten in Zellsuspensionen mittels direkter Immunfluoreszenz (Tubentest).Ex.3 Detection of monocytes in cell suspensions by direct immunofluorescence (tube test).
1. 1-3 x 106 Zellen werden mit50pl FITC-markiertem RoMoI resuspendiert und für 20-30min. bei +4CC unter mehrmaligem Aufschütteln der Zellen inkubiert.1-3x10 6 cells are resuspended with 50 μl FITC-labeled RoMoI and incubated for 20-30 min. incubated at +4 C C with repeated shaking of the cells.
2. Weiteres Vorgehen wie die Punkte 4 und 5 in Bsp. 1.2. Further procedure as in points 4 and 5 in example 1.
Bsp.4 Erfassung von Monozyten in Zellsuspensionen mittels direkter Immumfiuoreszenz (Objektträgertest).Example 4 Detection of monocytes in cell suspensions by means of direct immunofluorescence (slide test).
1. Arbeitsschritte wie 1 und 2 in Bsp.2.1st steps as 1 and 2 in Ex.2.
2. 20min Inkubation der adhärenten Zellen mit FITC-markiertem RoMoI in Gebrauchsverdünnung.2. 20min Incubation of the adherent cells with FITC-labeled RoMoI in dilution of use.
3. Arbeitsschritt 6 in Bsp.2.3rd step 6 in Ex.2.
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DD30089387A DD258855A1 (en) | 1987-03-18 | 1987-03-18 | METHOD FOR DETERMINING HUMAN MONOCYTES |
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Publications (1)
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|---|---|
| DD258855A1 true DD258855A1 (en) | 1988-08-03 |
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|---|---|
| DD (1) | DD258855A1 (en) |
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1987
- 1987-03-18 DD DD30089387A patent/DD258855A1/en not_active IP Right Cessation
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