DD244699A1

DD244699A1 - IMMUNOASSAY FOR THE DETECTION OF BLV TRANSMEMBRANP PROTEIN AND ITS ANTICO PERPER

Info

Publication number: DD244699A1
Application number: DD28536885A
Authority: DD
Inventors: Hildegard Bossmann; Helga Roessler; Sinaida Rosenthal; Hans-Alfred Rosenthal
Original assignee: Akad Wissenschaften Ddr
Priority date: 1985-12-24
Filing date: 1985-12-24
Publication date: 1987-04-15

Abstract

Die Erfindung betrifft einen Immunoassay zum Nachweis des BLV-Transmembranproteins und Derivate und seiner Antikoerper. Die Erfindung hat das Ziel, einen Immunoassay zum Nachweis des BLV-Transmembranproteins gp 30 und seiner synthetischen Analoga bzw. seiner Antikoerper auf der Basis markierter Proteine bzw. spezifischer Antiseren aufzubauen. Der erfindungsgemaesse Immunoassay ist gekennzeichnet durch Material a) ein elektrophoretisch reines Transmembranprotein bzw. ein in genetisch manipulierten Mikroorganismen synthetisiertes analoges Protein oder Derivat undMaterial b) ein monospezifisches Antiserum gegen das BLV-Transmembranprotein oder Teile davon bzw. einen spezifischen Antikoerper gegen BLV. Die Erfindung kann in der Veterinaermedizin, bei bestimmten Fragestellungen in der Humanmedizin, in der Virologie, Immunologie, Tumorforschung, Gentechnik und Peptidchemie sowie in der biotechnisch orientierten Industrie fuer Diagnostika- und Impfstoffentwicklung genutzt werden.The invention relates to an immunoassay for the detection of the BLV transmembrane protein and derivatives and its antibodies. The aim of the invention is to establish an immunoassay for the detection of the BLV transmembrane protein gp 30 and its synthetic analogues or its antibodies on the basis of labeled proteins or specific antisera. The immunoassay according to the invention is characterized by material a) an electrophoretically pure transmembrane protein or an analogous protein or derivative and material synthesized in genetically manipulated microorganisms b) a monospecific antiserum against the BLV transmembrane protein or parts thereof or a specific antibody against BLV. The invention can be used in veterinary medicine, in certain issues in human medicine, in virology, immunology, tumor research, genetic engineering and peptide chemistry as well as in the biotechnology-oriented industry for diagnostics and vaccine development.

Description

Field of application of the invention

Die Erfindung betrifft einen Immunoassay zum Nachweis des BLV-Transmembranproteins, seiner Derivate und Analoga und ihrer Antikörper.The invention relates to an immunoassay for the detection of the BLV transmembrane protein, its derivatives and analogs and their antibodies.

Die Erfindung kann in der Veterinärmedizin, bei bestimmten Fragestellungen in der Humanmedizin, in der Virologie, Immunologie, Tumorforschung, Gentechnik und Peptidchemie, sowie in der biotechnisch orientierten Industrie für Diagnostika- und Impfstoffentwicklung sowie in der Tierzucht genutzt werden. Die Möglichkeit des Nachweises des BLV-Transmembranproteins und seiner Antikörper ist für die Erforschung der Pathogenese der enzootischen Rinderleukose, für die Aufklärung der biologischen StrukturVFunktionseigenschaften des viralen Transmembranproteins und bei Fragestellungen, die die Wirksamkeit von Transmembranproteinen bzw.- peptiden und ihren Derivaten untersuchen, die auf natürlichem Wege oder durch gentechnisch manipulierte Zellkulturen oder auf chemisch-synthetischem Wege hergestellt werden, einschließlich ihrer Antikörper von großer Bedeutung. Die Möglichkeit des Nachweises des BLV-Transmembranproteins, seiner Derivate und Analoga und ihrer Antikörper erweitert das diagnostische Repertoiere für den Nachweis einer BLV-Infektion und für die Bekämpfung der enzootischen Rinderleukose.The invention can be used in veterinary medicine, in certain human medicine applications, in virology, immunology, tumor research, genetic engineering and peptide chemistry, as well as in the bioengineered industry for diagnostics and vaccine development and in animal breeding. The ability to detect the BLV transmembrane protein and its antibodies has been used to study the pathogenesis of enzootic bovine leukosis, to elucidate the biological structure functional properties of the viral transmembrane protein, and to investigate the efficacy of transmembrane proteins or peptides and their derivatives naturally or by genetically engineered cell cultures or chemically synthesized, including their antibodies of great importance. The ability to detect the BLV transmembrane protein, its derivatives and analogs, and its antibodies extends the diagnostic repertoire for the detection of BLV infection and for the control of enzootic bovine leucosis.

Für jeden auf Antigen-Antikörper-Reaktion beruhenden Test wird reines Protein (Antigen) benötigt. Um einen Immunoassay zum Nachweis des BLV-Transmembranproteins bzw. seiner Derivate oder Analoga oder seiner Antikörper aufzubauen, ist gp'3O in ausreichender Menge und Reinheit entscheidende Voraussetzung. International ist keine Präparationsvorschrift für gp30, die zu einem Immunoassay führt, bekannt.For each test based on antigen-antibody reaction, pure protein (antigen) is needed. In order to establish an immunoassay for the detection of the BLV transmembrane protein or its derivatives or analogs or its antibodies, gp'3O in sufficient quantity and purity is a crucial prerequisite. Internationally, no preparation regimen for gp30 leading to an immunoassay is known.

In der von Schultz et al. (1984) publizierten Arbeit (Virol. 135,417-427: The Envelope Proteins of BLV: Purification and Sequence Analyses) über Aminosäuresequenzen von BLV-env-Proteinen wird als Reinigungsprozedur die Methode der RPLC benutzt. Deshayesetal. (1977) beschreibt (J. Virol. 21,1056-1060: Proteine of BLV I. Characterization and Reactioneswith Natural Antibodies) die elektrophoretische Trennung von 100/u.g BLV und die Verwendung der Proteineluate in einem Komplementfixations-Test, um die Reaktion natürlicher Antikörper mit den eluierten Virusproteinen zu zeigen. Die von Deshayesetal. (1980) gezeigte Möglichkeit der Immunpräzipitation von Proteinen aus radioaktiv markiertem lysiertem BLV mit Seren tumoröser Rinder (Int. J. Cancer, 25, 503-508: Spontaneus Immune Response of BLV-infected Cattle against Five Different Viral Proteins) belegt zusätzlich die Spezifität der Reaktion anhand von Molekulargewichtsmarkern. Für eine in größerem Umfang durchzuführende Diagnostikauf Antikörper bzw. Antigen sind die o.g. Methoden zu aufwendig und die zur Anwendung kommenden Tests zu unempfindlich.In the Schultz et al. (1984) (Virol 135, 417-427: The Envelope Proteins of BLV: Purification and Sequence Analyzes) on amino acid sequences of BLV env proteins, the method of RPLC is used as a purification procedure. Deshayesetal. (1977) (J. Virol., 21, 1056-1060: Proteins of BLV I. Characterization and Reactions with Natural Antibodies) describes the electrophoretic separation of 100 / »g BLV and the use of the protein eluates in a complement fixation assay to the reaction of natural antibodies to show with the virus proteins eluted. That of Deshayesetal. (1980), the possibility of immunoprecipitation of proteins from radiolabeled lysed BLV with tumor cell sera (Int. J. Cancer, 25, 503-508: Spontaneous Immune Response of BLV-infected Cattle against Five Different Viral Proteins) additionally demonstrates the specificity of the Reaction based on molecular weight markers. For more extensive diagnostics on antibody or antigen, the above mentioned. Methods too expensive and the tests used to insensitive.

Object of the invention

Die Erfindung hat das Ziel, einen Immunoassay zum Nachweis des BLV-Transmembranprotein gp30 bzw. seiner natürlichen und gentechnisch hergestellten Derivate und seiner synthetischen Analoga bzw. seiner Antikörper auf der Basis markierter Proteine/ Peptide/Derivate bzw. spezifischer Antiseren aufzubauen.The aim of the invention is to establish an immunoassay for detecting the BLV transmembrane protein gp30 or its natural and genetically engineered derivatives and its synthetic analogues or its antibodies on the basis of labeled proteins / peptides / derivatives or specific antisera.

Dieser Immunoassay soll geeignet sein, neben dem Nachweis von Antikörpern in Seren natürlich oder experimentell mit BLV oder BLV-gp30 infizierter Rinder oder anderer Spezies auch den Nachweis von gp30 unter anderem in BLV, gentechnisch manipulierten Viren, in Zellkulturen und Zellkulturüberständen auch gentechnisch oder anderweitig manipulierten Kulturen in Antigenpräparaten, sowie den Nachweise gp30 analoger Proteinabzw. Derivate zellulär, mikrobiell oder chemisch synthetisierter Proteine zuzulassen.This immunoassay should be suitable, in addition to the detection of antibodies in serums naturally or experimentally with BLV or BLV-gp30 infected cattle or other species also the detection of gp30 among others in BLV, genetically engineered viruses, in cell cultures and cell culture supernatants also engineered or otherwise manipulated Cultures in antigen preparations, and the evidence gp30 analog protein Abzw. Allow derivatives of cellular, microbially or chemically synthesized proteins.

Explanation of the essence of the invention

Der erfindungsgemäße Immunoassay zum Nachweis des BLV-Transmembranproteins gp30 und seiner Antikörper ist durch folgende Bestandteile gekennzeichnet:The immunoassay according to the invention for the detection of the BLV transmembrane protein gp30 and its antibodies is characterized by the following constituents:

1. Elektrophoretisch reines BLV-Transmembranprotein gp30 oder analoge Proteine oder Derivate1. Electrophoretic pure BLV transmembrane protein gp30 or analog proteins or derivatives

2. Monospezifisches Antiserum gegen das BLV-Transmembranprotein gp30 oder gegen Teile davon bzw. ein gegen lysiertes Gesamt BLV gerichtetes Antiserum 2. Monospecific antiserum against the BLV transmembrane protein gp30 or against parts thereof or an antiserum directed against lysed whole BLV

Das Transmembranprotein wird aus in der Zellkultur produziertem BLV mittels bekannter Verfahren der Virusreinigung und Proteindarstellung gewonnen.The transmembrane protein is derived from BLV produced in cell culture by known methods of virus purification and protein presentation.

Es ist erfindungsgemäß möglich, für den Immunoassay auch aus dem Zellkulturüberstand virusproduzierender Zellen gewonnenes BLV-Transmembranprotein gp30 oder gp30-Fragmente einzusetzen. Für die Präparation aus Zellkulturüberstand sind vorzugsweise affinitätschromatographische Methoden einzusetzen. Es ist erfindungsgemäß möglich, für diesen Immunoassay dem BLV-Transmembranprotein gp30 analoge Proteine oder Derivate einzusetzen. Diese können Proteine, oder Fusionsproteine oder andere Derivate mit natürlichen oder abgewandelten Sequenzen sein, die aus gentechnisch manipulierten Mikroorganismen oder geeigneten Zellinien gewonnen werden oder synthetisierte Peptide. Nicht zuletzt ist auch ein Einsatz kreuzreagierender Transmembranantigene zum Nachweis von gp30-Antikörpern und analoger Antikörper möglich. Das monospezifische Antiserum wird durch Immunisierung mit elektrophoretisch reinem BLV-Transmembranproteinen gp30 gewonnen. Es ist erfindungsgemäß möglich, in diesem Immunoassay auch durch Immunisierung mit gp30 analogen Proteinen gewonnene Antikörper einzusetzen. Weiterhin ist die Anwendung von natürlichen Antikörpern gegen das BLV-Transmembranprotein gp30 in diesem Immunoassay erfindungsgemäß möglich. Außerdem können in dem erfindungsgemäßen Immunoassay durch Affinitätschromatographie erhaltene Antikörper und monoklonale Antikörper verwendet werden. Der Einsatz gegen ein Transmembranprotein anderer Virusspezies gerichteter und mit BLV-gp30 kreuzreagierender Antikörper ist ebenfalls möglich.It is possible according to the invention to use BLP transmembrane protein gp30 or gp30 fragments obtained from the cell culture supernatant of virus-producing cells for the immunoassay. For the preparation of cell culture supernatant preferably affinity chromatography methods are to be used. It is possible according to the invention to use analog proteins or derivatives of the BLV transmembrane protein gp30 for this immunoassay. These may be proteins, or fusion proteins or other derivatives having natural or modified sequences derived from genetically engineered microorganisms or suitable cell lines, or synthesized peptides. Last but not least, it is also possible to use cross-reacting transmembrane antigens for the detection of gp30 antibodies and analogous antibodies. The monospecific antiserum is obtained by immunization with electrophoretically pure BLV transmembrane protein gp30. It is possible according to the invention to use in this immunoassay also antibodies obtained by immunization with gp30 analog proteins. Furthermore, the use of natural antibodies against the BLV transmembrane protein gp30 in this immunoassay according to the invention is possible. In addition, antibodies and monoclonal antibodies obtained by affinity chromatography can be used in the immunoassay of the present invention. The use of antibodies directed against a transmembrane protein of other virus species and cross-reactive with BLV-gp30 is also possible.

Der erfindungsgemäße Immunoassay kann zum Nachweis und zur Quantifizierung von BLV-Transmembranproteinen gp30 und dessen Analoga sowie Derivate sowie deren Antikörpern genutzt werden.The immunoassay according to the invention can be used for the detection and quantification of BLV transmembrane proteins gp30 and its analogues as well as derivatives and their antibodies.

Bei unterschiedlichen Fragestellungen können die oben genannten Bestandteile des Immunoassays entsprechend modifiziert und in verschiedenen Testsystemen eingesetzt werden. Bei einer radioaktiven Markierung des BLV-Transmembranproteins oder dessen Analoga bzw. Derivate ist ein Einsatz zum Beispiel in einem Fest-Phasen-RIA, Flüssig-Phasen-RIA oder zur Radioimmunpräzipitation verschiedenster Antikörper geeignet. Das erfindungsgemäß präparierte monospezifische Antiserum ist zum Proteinnachweis in der Analyse und im Festphasen-RIA auf CCA-Papier und anderen Trägern einsetzbar. Die erfindungsgemäßen Bestandteile des Immunoassays können in Kombinationen mit geeigneten POD-Konjugaten in einem EIA auf CCA-Papier und anderen Trägern je nach Fragestellung zum Antikörper- oder Proteinnachweis eingesetzt werden. Mit dem erfindungsgemäßen Immunoassay ist erstmals der Nachweis auch nicht-virusgebundenen BLV-Transmembranproteins gp30 und seiner Fragmente und seiner Antikörper möglich. Der Test ist empfindlich, spezifisch und reproduzierbar. Der Probendurchsatz ist hoch.For different questions, the above-mentioned components of the immunoassay can be modified accordingly and used in different test systems. When radiolabeling the BLV transmembrane protein or its analogs or derivatives, it is suitable for use, for example, in a solid phase RIA, liquid phase RIA or for the radioimmunoprecipitation of a wide variety of antibodies. The monospecific antiserum prepared according to the invention can be used for protein detection in analysis and in solid-phase RIA on CCA paper and other supports. The components of the immunoassay according to the invention can be used in combinations with suitable POD conjugates in an EIA on CCA paper and other carriers, depending on the question for antibody or protein detection. With the immunoassay according to the invention, the detection of non-virus-bound BLV transmembrane protein gp30 and its fragments and its antibodies is also possible for the first time. The test is sensitive, specific and reproducible. The sample throughput is high.

example 1

Nachweis von anti-gp30-Antikörpern in Seren an eRL erkrankter Rinder mit dem gp30-lmmonoassay (Material a) BLV wird in BLV/FLK-Zellen nach den von Scholz et al. (1984,1986) angegebenen Methoden produziert und gereinigt (Scholz etal., Mh. Vet.-Med. 39 [1984], 733-737; Scholz etal., Mh. Vet.-Med. 41 [1986], 37-42). Mittels SDS-PAGE ( La e m m I i Nature [London], 277 [1970], 680-685) wird gp30 von anderen BLV-Strukturproteinen getrennt; das mit Coomassie Brillant Blue gefärbte Protein wird aus dem Gel eluiert, über AMICONPM 10-Filter konzentriert und in PBS umgepuffert. Die Ergebnisse der Reelektrophorese eines Aliquotes des isolierten Proteins und der partiellen NH₂-terminalen Aminosäuresequenzanalyse bestätigen die Reinheit und Identität des Transmembranproteins gp30. 20^g des präparierten Proteins werden nach der Chloramin-T-Methode (Greenwood etal., Biochem. J. 89 [1963], 114-123) mit ^12Slod markiert und in einem Flüssigphasen-RIA eingesetzt. Zum Antikörpernachweis befinden sich im Testansatz das zu prüfende Serum in Verdünnungen von 1:100-1:25000 und ca. 15000cpm ¹²⁵lod-gp30 in einem Totalvolumen von 400μΙ RIA-Puffer (O,05M Phosphat pH7,2; 0,5% HSA; 0,02% Natriumazid; 0,02% Triton X-100). Nach der Inkubation (48 h, 4°C) erfolgt der Zusatz von 50-100μ\ Kaninchen Anti-Rind Serum.Detection of anti-gp30 antibodies in sera from eRL of diseased bovines with the gp30 immunoassay (material a) BLV is used in BLV / FLK cells according to the methods described by Scholz et al. (1984, 1986), and Scholz et al., Mh. Vet.-Med. 39 [1984], 733-737; Scholz et al., Mh. Vet. Med. 41 [1986], 37-42 ). SDS-PAGE (La emm i i Nature [London], 277 [1970], 680-685) separates gp30 from other BLV structural proteins; the Coomassie Brilliant Blue stained protein is eluted from the gel, concentrated over AMICONPM 10 filter and rebuffered in PBS. The results of re-electrophoresis of an isolated protein aliquot and partial NH ₂ -terminal amino acid sequence analysis confirm the purity and identity of the transmembrane protein gp30. 20 g of the prepared protein are labeled with ^12S iodine according to the chloramine-T method (Greenwood et al., Biochem J.89 [1963], 114-123) and used in a liquid-phase RIA. For antibody detection, the test sample contains the serum to be tested in dilutions of 1: 100-1: 25,000 and about 15,000 cpm of ¹²⁵ iodine gp30 in a total volume of 400 μl RIA buffer (O, 05M phosphate pH7.2, 0.5% HSA 0.02% sodium azide, 0.02% Triton X-100). After incubation (48 h, 4 ° C), the addition of 50-100 μ \ rabbit anti-bovine serum is carried out.

Die Proben werden für weitere 20h bei 4°C inkubiert. Die Immunpräzipitate werden mit ca. 5 ml PBS-Triton X-100 0,02% gewaschen, durch Zentrifugation (3000U/min)sedimentiertund im gamma-Strahlungsmeßgerät gemessen.The samples are incubated for a further 20h at 4 ° C. The immunoprecipitates are washed with about 5 ml of PBS-Triton X-100 0.02%, sedimented by centrifugation (3000 rpm) and measured in the gamma-ray meter.

Das in diesem Immunoassay eingesetzte jodierte Transmembranprotein gp30 wird durch Serum BLV-infizierter Rinder spezifisch präzipitiert. Die Immunreaktion ist durch nichtmarkiertes gp30 hemmbar.The iodinated transmembrane protein gp30 used in this immunoassay is specifically precipitated by serum of BLV-infected cattle. The immune response is inhibited by unlabelled gp30.

Bei dem in der Literatur beschriebenen immunologischen Test konnten Antikörper gegen das Transmembranprotein nur bei einzelnen an Tumoren erkrankten Rindern nachgewiesen werden. Mit dem hier ausgearbeiteten Immunoassay können Antikörper gegen gp30 bereits vor dem Auftreten hämatologischer und klinischer Symptome der eRL sicher nachgewiesen werden.In the immunological test described in the literature antibodies against the transmembrane protein could only be detected in individual bovine animals affected by tumors. With the immunoassay developed here, antibodies to gp30 can be reliably detected even before hematological and clinical symptoms of the eRL are detected.

Der von uns etablierte Test ergänzt das diagnostische Repertoire zum Nachweis einer BLV-Infektion im Rind und ist für die Erforschung der Pathogenese der eRL in großem Umfang einsetzbar.The test we have established complements the diagnostic repertoire for the detection of bovine BLV infection and is widely used in the study of the pathogenesis of eRL.

Example 2

Immunologische Charakterisierung des natürlichen viralen Transmembranproteins gp30 und mikrobiell synthetisierter gp30-Derivate mit Hilfe des gp30-lmmunoassay (Material b)Immunological characterization of the natural viral transmembrane protein gp30 and microbially synthesized gp30 derivatives using the gp30 immunoassay (material b)

Das erfindungsgemäß präparierte monospezifische Antiserum gegen das Transmembranprotein gp30 kann zum qualitativen und quantitativen Nachweis von viralem Transmembranprotein, seiner Derivate und Analoga, sowie zu deren immunologischen Charakterisierung eingesetzt werden.The monospecific antiserum prepared against the transmembrane protein gp30 according to the invention can be used for the qualitative and quantitative detection of viral transmembrane protein, its derivatives and analogues, as well as for its immunological characterization.

Monospezifisches Antiserum wurde durch Immunisierung von Kaninchen mit insgesamt 300μg elektrophoretisch gereinigtem Transmembranprotein gp30 in Freundschem Adjuvants gewonnen.Monospecific antiserum was obtained by immunization of rabbits with a total of 300 μg electrophoretically purified transmembrane protein gp30 in Freund's adjuvant.

Gentechnisch manipulierte Bakterien (E.coli/pEX-Rekombinanten), die ein aus/3-Galaktosidase und gp30-Derivate bestehendes Fusionsprotein exprimieren, werden lysiert. 10⁷ Zellen in 10μ.Ι Lysat werden einer SDS-PAGE und einem Elektrotransfer auf Nitrozellulose unterworfen (0,025M TRIS, 0,15M Glycin, pH 8,3 + 20% Methanol; 4h, 40OmA). Je 10μΙ Lysat von E.coli/pEX-Rekombinanten, die kein oder ein anderes, der gp30 Sequenz nicht analoges, Insert enthalten, werden als Kontrollen mitgeführt. Anschließend wird der Nitrozellulosefilter im PBS-0,1 % TWEEN 80, pH 7,2, für 30 min geblockt. Mit dem monospezifischen anti-gp30 Antiserum in einer Verdünnung von 1:50 in PBS-0,1 % TWEEN wird der Nitrozellulosefilter 16h bei Raumtemperatur inkubiert. Nach einstündigem Waschen mit 4-6maligem Pufferwechsel erfolgt die Inkubation des Nitrozellulosefilters mit Peroxidase markiertem Antikaninchen-Immunglobulin (KOVID) in einer Verdünnung von 1:500. Nach sorgfältigem Waschen in PBS-0,1 % TWEEN und PBS wird die Immunreaktion durch Inkubation in 2-Brom-1-Naphtol-Lösung sichtbaar gemacht. Diese Substratlösung setzt sich zusammen aus 23 ml PBS, 6 mg/2 ml Methanol.Substrat und 10/xg H₂O₂ (30%). Nach erfolgter Reaktion (15-30 min) wird kräftig mit H₂O bidest. gewaschen-und der Träger getrocknet.Genetically manipulated bacteria (E.coli / pEX recombinants) expressing a fusion protein consisting of / 3-galactosidase and gp30 derivatives are lysed. 10 ⁷ cells in 10 μL of lysate are subjected to SDS-PAGE and electrotransfer to nitrocellulose (0.025M TRIS, 0.15M glycine, pH 8.3 + 20% methanol, 4h, 40OmA). 10 μl of E. coli / pEX recombinant lysate containing no or another insert not analogous to the gp30 sequence are included as controls. Subsequently, the nitrocellulose filter in PBS-0.1% TWEEN 80, pH 7.2, is blocked for 30 min. The nitrocellulose filter is incubated at room temperature for 16 h with the monospecific anti-gp30 antiserum at a dilution of 1:50 in PBS-0.1% TWEEN. After washing for one hour with 4-6 buffer changes, the incubation of the nitrocellulose filter with peroxidase-labeled anti-rabbit immunoglobulin (KOVID) is carried out in a dilution of 1: 500. After careful washing in PBS-0.1% TWEEN and PBS, the immune reaction is visualized by incubation in 2-bromo-1-naphthol solution. This substrate solution is composed of 23 ml PBS, 6 mg / 2 ml methanol. Substrate and 10 / xg H ₂ O ₂ (30%). After the reaction (15-30 min) is vigorously redistilled with H ₂ O. washed and the carrier dried.

Das erfindungsgemäß präparierte monospezifische ANTI-gp30 Antiserum reagiert ausschließlich mit dem aus /3-Galaktosidase und gp30-Derivat bestehenden Fusionsprotein. Demnach ist das monospezifischeAnti-gp30 Antiserum geeignet zum Nachweis des viralen Transmembranproteins gp30 und mikrobiell oder peptidchemisch syntetisierter Derivate.The monospecific ANTI-gp30 antiserum prepared according to the invention reacts exclusively with the fusion protein consisting of / 3-galactosidase and gp30 derivative. Thus, the monospecific anti-gp30 antiserum is useful for detection of the viral transmembrane protein gp30 and microbial or peptidochemically synthezed derivatives.

Claims

Invention claim:

1. Immunoassay for the detection of BLV transmembrane protein and its antibodies, characterized by

Material a) an electrophoretically pure transmembrane protein or in genetically engineered microorganisms or suitable cell lines or chemically synthesized homologous protein or derivative and

Material b) a monospecific antiserum against the BLV transmembrane protein or parts thereof or a specific antibody against BLV.

2. Immunoassay according to item 1, characterized by using a obtained by virus breakdown in sine structural proteins BLV transmembrane protein.

3. Immunoassay according to item 1, characterized by using a cell culture supernatant virusproduzierender cells preferably obtained by affinity chromatography BLV transmembrane protein.

4. Immunoassay according to item!, Characterized by use of an obtained by genetic engineering and cultivation of microorganisms or suitable cell lines analog protein.

5. A method for the use of the immunoassay for the detection of material a) according to item 1, characterized in that the material to be examined in increasing dilution with a defined amount of radioactively-labeled Materiaisa) and a defined amount b) is incubated.

6. A method for using the immunoassay for the detection of material b) according to item 1, characterized in that the material to be examined with radioactively labeled material a) is incubated.

7. A method for using the immunoassay for the detection of material a) according to item 1, characterized in that the material to be examined in the Westem Blott or a dot test (dot test) on CCA paper or other carriers subjected and monospecific antiserum to BLV transmembrane protein or parts thereof.

8. A method for using the immunoassay for the detection of material a) according to item 1, characterized in that the material to be examined is incubated in an EIA with POD-conjugated material b).

9. Method for using the immunoassay for detecting material b) according to item 1, characterized in that the material to be investigated is coupled in an EIA to material a) and then incubated with POD-antispecies conjugate.