DD143179B1 - METHOD FOR THE ELECTRONIC THROMBOZYTE PAYMENT - Google Patents
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Description
Titel der ErfindungTitle of the invention
Verfahren zur Probenvorbereitung für die elektronische ThrombozytenzählungMethod for sample preparation for the electronic platelet count
Anwendungsgebiet der ErfindungField of application of the invention
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Vorbereitung von Thrombozytenzählproben aus verdünntem Venenblut, Kapillarblut oder plattchenreichem Plasma für eiekt-ronische Zählgeräte, die nach dem Coulter-Prinzip arbeiten»The invention relates to a method for the preparation of platelet counts from dilute venous blood, capillary blood or platelet-rich plasma for eiect -ronic counting devices that work according to the Coulter principle »
Charakteristik der bekannten technischen LösungenCharacteristic of the known technical solutions
Die elektronische Zählung der Thrombozyten nach dem Coulter-Prinzip wurde anfangs ausschließlich aus verdünntem Blut durchgeführt. Dabei mußte vor der eigentlichen Zählung der Verfahrensschritt Probenvorbereitung erfolgen, der eine von allen störenden Einflüssen (Leukozyten, Erythrozyten) befreite Thrombozytenzählsuspension zum Ziel hato Hierzu entwickelte Verfahren über Sedimentation' (B.S. BULL et al, Amer.JoClin.Pathole 44 (1965), 678-685; J.JÜRGENS, irztloLabo 14 (1968) 3^7~354) oder Zentrifugati on (R.EHSE u. Mitarb., Blut 35 (1977), 253-259) verlangen einerseits einen hohen arbeitszeitmäßigen und verfahrenstechnischen Aufwand, zum anderen werden die sehr empfindlichen Blutzellen auch starker osmotischer und mechanischer Belastung ausgesetzt (Mo des BRUYERE et al, ThrombösoDiathes.haemorrh.(Stuttg.) 32, 232 (1974Oi H0GADNER u." Mitarb., Schweiz.medeWschr. 104 (1974), 138-140), so daß fehlerhafte Zählungen durch Volumenveränderung der Zellen nicht mehr ausgeschlossenThe electronic counting of the platelets according to the Coulter principle was initially performed exclusively from diluted blood. In this case had to be carried out sample preparation before the actual counting of the step, this end of the one of all interfering influences (leucocytes, erythrocytes) freed Thrombozytenzählsuspension aim hato developed methods sedimentation '(BS BULL et al, Amer.J o Clin.Pathol e 44 (1965 ), 678-685;.. J.JÜRGENS, irztl Lab o o 14 (1968) 3 ^ 7 ~ 354) or on Zentrifugati (u R.EHSE al, blood 35 (1977), 253-259) on the one hand require a high On the other hand, the very sensitive blood cells are also exposed to strong osmotic and mechanical stress (Mo BRUYERE et al, Thrombös o Diathes.haemorrh. (Stuttg.) 32, 232 (1974Oi H 0 GADNER u. "Mitarb. Schweiz.med e Wschr. 104 (1974), 138-140), so that erroneous counts by volume change of the cells are no longer excluded
werden können* Um diese Nachteile zu umgehen, wurden •in jüngster Zeit die elektronischen Zählgeräte derart vervollkommnet, daß die Bestimmung der Thrombozytenzahl direkt aus Vollblut möglich ist'(W.ADAM u, Mitarb0» Blut 32. (1976)·, DT-PS 28 12 517)» Der hierzu notwendige apparative Aufwand bedingt aber einen sehr hohen An-Schaffungspreis und ist auch in Wartungs- und Reparaturfragen von den meisten Anwendern nicht mehr zu bewältigen· So werden parallel zu diesen Entwicklungen wieder Anstrengungen unternommen, technisch einfache und leicht zu wartende Zählgeräte zu bauen, mit deren Hilfe eine Bestimmung der Thrombozytenzahl aus verdünntem Untersuchungsgut allgemein möglich ist (DL-PS 6,5 681) o Die Probleme der damit erneut notwendigen, umständlichen Probenvorbereitung blieben aber nach wie vor ungelöst. Beispiel hierfür ist das in der Bedienungsanleitung zum Teilchenzählgerät Picoscale (PS-4-) (MEDICOR-WerkeIn order to avoid these disadvantages, the electronic counting devices have recently been perfected in such a way that the determination of the platelet count directly from whole blood is possible (W.ADAM u, Mitarb. 0, Blut. 32 (1976). PS 28 12 517) »The equipment required for this, however, requires a very high purchase price and is also in maintenance and repair issues by most users can no longer cope · So parallel to these developments again made efforts, technically simple and easy to build waiting counters, with the help of a determination of the platelet count from diluted test material is generally possible (DL-PS 6.5 681) o The problems of this again necessary, laborious sample preparation but remained unsolved. An example of this is the instruction manual for the particle counter Picoscale (PS-4-) (MEDICOR-Werke
4-5 Budapest 1976) verfaßte Zollverfahren. Man geht dabei von der falschen Voraussetzung einer möglichen, vollkommenen Spont an se dime nt at ion der iirytb.ro zy ten und Leukozyten bei gleichzeitigem Erhalt der ursprünglichen Thrombozyten- . dichte aus« Das Verfahren liefert so keine akzeptablen, mit der Kammerzählung (H.STOBBE, Z.med,Labortechnik 1 (1960), 79 ff) vergleichbaren Werte. Zudem ist eine Probenvorbereitungszeit von über zwei Stunden im Routinebetrieb eines Labors nicht vertretbar.4-5 Budapest 1976). One proceeds from the false presumption of a possible, complete spontaneous identification of the cytoplasmic and leucocytes with simultaneous preservation of the original thrombocytes. density "The method thus provides no acceptable, comparable with the chamber count (H.STOBBE, Z. med, Laboratory Technique 1 (1960), 79 ff) values. In addition, a sample preparation time of over two hours in routine operation of a laboratory is not acceptable.
Ziel der ErfindungObject of the invention
Ziel der Erfindung ist ein Verfahren zur Probenvorbereitung für die elektronische Thrombozytenzählung nach dem Coulter-Prinz-ip, das unter geringster Belastung der zu zählenden Zellen in kürzester Frist Zählproben liefert, aus denen die Konzentration an Thrombozyten auch mit einfachen Teilchenzählgeräten bestimmt werden kann·The aim of the invention is a method for sample preparation for the electronic platelet count according to the Coulter-Prinz-ip, which provides under the least burden of the cells to be counted in a short time count samples from which the concentration of platelets can be determined with simple particle counting ·
Darlegung des Wesens der ErfindungExplanation of the essence of the invention
Das Wesen der Erfindung besteht in der Ausführung des Verfahrens zur Probenvorbereitung als partielle Sedimentation bzw. partielle Zentrifugation von verdünntem Untersu'chungsgute Erfindungsgemäße Voraussetzung ist es, daß eine vollständige Abtrennung der Erythrozyten und • Leukozyten von den zu bestimmenden Thrombozyten ohne hohen technischen und methodischen Aufwand nicht nur nicht möglich, sondern auch in weitem Maße nicht" notwendig ist оThe essence of the invention is in the execution of the method for sample preparation as partial sedimentation or partial centrifugation of diluted Untersu'chungsgute inventive condition is that a complete separation of the erythrocytes and • leucocytes from the platelets to be determined without high technical and methodological effort not only not possible, but also to a great extent not necessary "
Die zur Anwendung gelangende Probenvorbereitungsart kann in einem sehr unvollkommenen Zustand abgebrochen werden. Dadurch wird bei der Sedimentation eine große Zeitersparnis erzielt, bei der Zentrifugation die sonst notwendige Anwendung spezieller, aufv/endiger Technik umgangenoThe sample preparation method used can be stopped in a very imperfect state. As a result, a great deal of time is saved in sedimentation, while centrifuging avoids the otherwise necessary use of special, open-ended technology
Der Zeitpunkt, an dem der Abbruch der Probenvorbereitung gerade schon möglich ist, hängt von der Empfindlichkeit des angewandten Zählgerätes ab, mit der es in der Lage ist, eine kleine Anzahl von Thrombozyten in einer ebenso großen oder größeren Anzahl von größeren Zellen (z.B.The point in time at which the termination of the sample preparation is just possible depends on the sensitivity of the counter used, with which it is able to detect a small number of platelets in an equally large or larger number of larger cells (e.g.
Erythrozyten) quantitativ exakt zu erfassen. Die Gesamtkonzentration aller in der Zählsuspension noch enthaltenen Zellen kann ohne Qualitätseinbuße bei der Zählung so hoch gewählt werden, daß die erzeugte Impulsdichte das maximale Impulstrennvermögen des Gerätes vpll in Anspruch nimmt« .Erythrocytes) quantitatively accurately detect. The total concentration of all the cells still contained in the counting suspension can be selected so high without any loss of quality in the counting that the pulse density generated requires the maximum pulse separation capability of the device.
Es ergeben sich bei der in verdünntem Untersuchungsgut ausgeführten partiellen Sedimentation bzw. partiellen Zentrifugation erfahrungsgemäß keine untersuchungsgut-Experience has shown that in the case of partial sedimentation or partial centrifugation carried out in diluted test specimens, no test material is available.
-7^ bedingten Ausnahmen, ebenso besteht keine Abhängigkeit von hämatokrit-spezifischen Korrekturfaktorene - 7 ^ conditional exceptions, there is no dependence on hematocrit-specific correction factors e
Ausführungsbeispielembodiment
Verfahren zur Thrombozytenzählung am ungarischen .Teilchenzählgerät PS-4Method for platelet counting on the Hungarian Particle Counter PS-4
- ц. - - ц. -
Probenvorbereitung:Sample preparation:
Zu 6,100 ml filtrierter HPJ-Lösung (MEDICOR-Werke Budapest, Bedienungsanleitung zum Teilchenzählgerät PS-4, 1976), die in einem silikonisiertem Glasröhrchen vorgelegt sind, werden 0.200 ml EDTA-Blut pipettiert„ Wach gründlicher Durchmischung des Inhalts wird das Röhrchen um 45° geneigt und offen zur Sedimentation abgestellt. Ist die Sedimentationszeit von einer halben Stunde abgelaufen, pipettiert man vom klaren Überstand in ein weiteres silikonisiertes Glasröhrchen oder Plastgefäß ab. Hieraus werden zur Messung am PS-4 O.O5O ml entnommen und in 9о950 ml mehrmals filtrierter HPJ-Lösung pipettiert (Endverdünnung 1:6 30O)0 0.200 ml of EDTA blood are pipetted into 6.100 ml of filtered HPJ solution (MEDICOR-Werke Budapest, PS-4 Particle Calculator User Manual, 1976), placed in a siliconized glass tube. "Wake up thoroughly by mixing the tube 45 ° inclined and open turned off for sedimentation. When the sedimentation time of half an hour has elapsed, pipette from the clear supernatant into another siliconized glass tube or plastic vessel. From this are taken for measurement on PS-4 O.O5O ml and pipetted in 9о950 ml several times filtered HPJ solution (final dilution 1: 6 30O) 0
Messung:Measurement:
Alle Messungen für eine bestimmte Patientenprobe erfolgen aus ein und derselben Endverdünnung und werden mit einer Meßöffnung '(Meßrohr) vom Durchmesser 60yum durchgeführt. In der ErstVerdünnung sind die Thrombczyten mindestens 8 h haltbarβ Innerhalb dieser Frist muß die Messung 'erfolgen,,All measurements for a particular patient sample are made from one and the same final dilution and are carried out with a measuring opening (measuring tube) with a diameter of 60 μm. In the initial suspension, the Thrombczyten are at least 8 h Stable β Within this period, the measurement 'must take place ,,
Meßvorgang Diskriminator st ellung MeßergebnisMeasurement Discriminator setting Measurement result
1o Leerwertbestimmung1o blank determination
der Gesamtteilchen- PBC / 400 lwgt7 ' zählungthe total particle PBC / 400 lw gt7 'count
2. Le'erwertbestimmung der Erythrozytenzählung RBC / 400 LVL117 3o Bestimmung der2. Determination of the erythrocyte count RBC / 400 LVL 117 3o Determination of the erythrocyte count
Erythrozytenzahl RBC / 400 EZErythrocyte count RBC / 400 EZ
4. Bestimmung der mittleren4. Determination of the mean
Gesamtteilchenzahl PBC / 400 GTZ Total particle number PBC / 400 GTZ
ІЗО Beide LeerwertbeStimmungen erfolgen bei Einzelbestimmungen generell j bei der Durchführung von Serien entscheidet die Qualität der filtrierten Verdünnungslösung über die notwendige Häufigkeit dieser Meßvorgänge. Zur Bestimmung der mittleren Gesamtteilchenzahl.wird der 4O Meßvorgang solange wiederholt, bis zwei aufeinanderfolgende Werte nichtLeerО Both blank value determinations are generally made for individual determinations. When performing series, the quality of the filtered dilution solution determines the necessary frequency of these measurements. To determine the average total particle count, the 4 O measurement is repeated until two consecutive values are not
mehr als 10 % des kleineren Wertes voneinander abweichen. Diese beiden Werte werden dann zur Mittelwertbildung herangezogen» Berechnung der Thrombozytenzahl:more than 10% of the smaller value differ. These two values are then used for averaging »Calculation of the platelet count:
Die Zahl der Thrombozyten pro 1 Blut (X) wird nach folgender Formel berechnet:The number of platelets per 1 blood (X) is calculated according to the following formula:
X = GTZ - (EZ - LWBZ) - LWGT2 X = GTZ - (EZ - LW BZ ) - LW GT2
Eine Berücksichtigung des Hämatokritwertes der Blutprobe ist bei der vorgegebenen Erstverdünnung von І 1:31j5 und dem unvollkommenen Stand der Sedimentation zur Zeit der Überstandsentnahme nicht erforderlich»Consideration of the hematocrit value of the blood sample is not necessary at the given initial dilution of І 1: 31j5 and the imperfect level of sedimentation at the time of supernatant removal »
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