CZ9903552A3 - Léčení poruch centrální nervové soustavy selektivními modulátory receptorů estrogenů - Google Patents

Abstract

Tento vynález poskytuje způsob léčení depresí, náhlých změn nálad nebo Alzheimerovy choroby u pacienta, který potřebuje toto léčení, při kterém se podává sloučenina obecného vzorce a modulující receptory estrogenů, ve které R1 a R2 jsou navzájem nezávisle hydroxylová skupina nebo alkoxyskupina o jednom až čtyřech atomech uhlíku a R3 a R4 jsou nezávisle na sobě methylová nebo ethylová skupina nebo R3 a R4 spolu s atomem dusíku, ke kterému se připojují, vytvářejí pyrrolidinový, methylpyrrolidinový, dimethylpyrrolidinový, piperidinový, morfolinový nebo hexamethyleniminový kruh.

Description

Léčení poruch centrální nervové soustavy selektivními modulátory receptorů estrogenů

Oblast techniky

Tato přihláška se týká způsobu léčení. Konkrétněji se tento vynález týká použití skupiny substituovaných benzo(b)thiofenových sloučenin pro léčení deprese, náhlých změn nálad a Alzheimerovy choroby u pacientů, kteří tuto léčbu potřebuj i.

Dosavadní stav techniky

Navíc k dobře dokumentovaným účinkům estrogenů na reprodukční tkáně, kosti a metabolismus cholesterolu u postemenopausálních žen je známo, že estrogen vykazuje řadu účinků v centrální nervové soustavě se somatickými následky i s vlivem na chování.

U klimakterických žen úzkost, deprese, tenze a iritabilita začíná v průběhu perimenopausy a může se korelovat se sníženými hladinami estrogenů. Pro léčení těchto symptomů se doporučuje substituční estrogenová terapie [viz např. J. Malleson, Lancet, 2, 158 (1953) a R. Wilson a kol., J. Am. Geriatrie Soc., 11, 347 (1963)].

Mechanizmus ochranných účinků estrogenů proti depresím a náhlým změnám nálad není dobře znám, avšak může se vztahovat k potenciálním účinkům estrogenů na biogenní aminy, jako je serotonin [viz např. M. Aylward, Int. Res. Communications System Med. Sci., i, 30 (1973)].

V oblasti paměti a zlepšení vědomí S. Phillips a kol., Psychoneuroendocrinology, 17, 485-495 (1992) uvádějí, že u žen v menopause následkem chirurgického zákroku dostávajících estrogen jsou hodnotící skóre při testu krátkodobé i dlouhodobé paměti vyšší než u podobných žen, které nedostávaly estrogen. V prospektivní kohortové studii u postmenopauzálních žen A.H. Paganini-Hill a kol., Am. J. Epidemiol., 140 (3), 256-261 (1994), prokázali, že riziko Alzheimerovy choroby je nižší u žen užívajících estrogen ve srovnání se ženami, které jej neužívají. Dále se riziko Alzheimerovy choroby významně snižuje se vzrůstajícími dávkami estrogenu a s prodloužením trvání užívání estrogenu.

Veškeré tyto studie vedou k rostoucím úvahám v literatuře, že substituční estrogenová terapie je slibným způsobem léčby pro poruchy centrální nervové soustavy, jako jsou deprese a náhlé změny nálad, a Alzheimerovy choroby u postmenopauzálních žen. Tato slibná použití substituční estrogenové terapie jsou v rozporu s nevýhodami dlouhodobé estrogenové terapie spojenými s rizikem rozvoje rakoviny reprodukčních tkání.

Po šesti letech užívání se u žen na substituční estrogenové terapii vyvíjejí nádory endometria 3 krát až 6 krát rychleji než u těch, které estrogeny neužívají. Po 10 letech estrogenové substituční terapie vzrůstá riziko 10 krát. Stále rostoucí objem literatury ukazuje, že dlouhodobé podávání (to jest 10 až 15 let) způsobuje vzrůst rizika nádoru prsu o 30 až 50 %.

Proto je třeba vyvíjet sloučeniny, které jsou alternativou estrogenu a vykazují stejné příznivé účinky na depresi a náhlé změny nálad a na léčení Alzheimerovy choroby, avšak bez škodlivých účinků na reprodukční tkáň.

Podstata vynálezu

Podle tohoto vynálezu se poskytuje způsob léčby pacienta, který tuto léčbu potřebuje a který trpí poruchou centrální nervové soustavy, jako je deprese, náhlé změny nálady a Alzheimerova choroba, při které se podává terapeuticky účinné množství sloučeniny o struktuře

nebo její farmaceuticky přijatelné soli či prekurzoru léčiva

Ve výše popsané struktuře jsou R³· a R³ zvoleny nezávisle ze substituentů zahrnujících hydroxyskupinu a alkoxyskupinu o 1 až 4 atomech uhlíku. R³ a R⁴ jsou nezávisle zvoleny ze substituentů methylová skupina nebo ethylová skupina nebo R³ a R⁴ spolu s atomem dusíku, ke kterému jsou připojeny, vytvářejí pyrrolidino-, methylpyrrolidino-, dimethylpyrrolidino-, piperidino-, morfolino- nebo hexamethyleniminokruh.

Sloučenina podle tohoto vynálezu je selektivním modulátorem receptorů estrogenů (ŠERM), to jest sloučeninou, která poskytuje estrogenový agonismus v jedné • ·

či více cílových tkáních a přitom vede k estrogennímu antagonismu a/nebo minimálnímu (to jest klinicky nevýznamnému) agonismu v reprodukční tkáni, jako je tkáň prsu či dělohy.

Následuje podrobný popis vynálezu.

V celém tomto popisu a v připojených nárocích mají obecné pojmy své běžné významy.

Pojem alkylová skupina označuje monovalentní skupinu odvozenou odtržením atomu vodíku od molekuly ethanu nebo přímého či rozvětveného uhlovodíku a zahrnuje takové skupiny jako je methylová skupina, ethylová skupina, propylová skupina, isopropylová skupina, n-butylová skupina, sek.butylová skupina, isobutylová skupina, terč.butylová skupina apod.

Pojem alkoxyskupina znamená alkylovou skupinu, jak se definuje výše, připojenou k mateřskému molekulovému zbytku atomem uhlíku a zahrnuje takové skupiny, jako je methoxyskupina, ethoxyskupina, propoxyskupina, isopropoxyskupina, n-butoxyskupina, sek.butoxyskupina, isobutoxyskupina, terč.butoxyskupina apod. V tomto vynálezu je preferovanou alkoxyskupinou methoxyskupina.

Pojem prekurzor léku, jak se zde užívá, znamená sloučeninu podle tohoto vynálezu nesoucí skupinu, která se metabolicky štěpí v lidském organismu s poskytnutím terapeuticky účinné sloučeniny podle tohoto vynálezu. Takový prekurzor zejména zahrnuje ty sloučeniny, ve kterých buď jedna ze skupin R a R nebo obě tyto skupiny struktury popsané výše jsou hydroxylové skupiny chráněné • · farmaceuticky přijatelnou skupinou chránící hydroxylové skupiny, která se v těle metabolicky odštěpuje s poskytnutím odpovídající monohydroxy- nebo dihydroxysloučeniny podle tohoto vynálezu. Skupiny chránící hydroxylové skupiny se popisují v kapitole 2 monografie T.W. Greene a kol., Protective Groups in Organic Synthesis,, 2. vydání, John Wiley & Sons, lne., New York, 1991. Jako skupiny chránící hydroxylové skupiny v prekurzoru se preferují jednoduché etherové a esterové skupiny.

Pojem pacient se týká savce, který potřebuje léčbu ohledně náhlých změn nálad, depresí či Alzheimerovy choroby. Uvažuje se, že morčata, psi, kočky, krysy, myši křečci, králíci a primáti včetně člověka samčího i samičího pohlaví jsou příklady pacientů v rámci smyslu tohoto pojmu.

Preferované sloučeniny podle tohoto vynálezu zahrnují 6-hydroxy-2-(4-hydroxyfenyl)-3-[4-(2-piperidinoethoxy)fenoxy]benzo[b]thiofen a jeho farmaceuticky přijatelnou sůl či prekurzor a 6-hydroxy-2-(4-methoxyfenyl)-3-[4-(2-piperidinoethoxy)fenoxy]benzo[b] thiofen nebo jeho farmaceuticky přijatelnou sůl či prekurzor.

Příprava sloučenin podle tohoto vynálezu

Výchozí látka pro způsob přípravy sloučenin podle tohoto vynálezu se připraví v podstatě podle popisu C.D. Jonese v U.S.patentech č. 4 418 068 a 4 133 814. Výchozí látky mají obecný vzorec 1:

• · • ·

(1) ve kterém

R⁵ a R⁶ jsou nezávisle na sobě atom vodíku nebo skupina chránící hydroxylovou skupinu.

Skupiny R⁵ a R^ chránící hydroxylové skupiny jsou zbytky, které se záměrně zavádějí v určité části způsobu přípravy pro ochranu skupiny, která by jinak reagovala v průběhu chemických reakcí, a poté se odstraňují v pozdějším stupni úpravy. Jelikož sloučeniny nesoucí tyto ochranné skupiny jsou především důležité jako chemické meziprodukty (i když určité deriváty též vykazují biologickou účinnost), jejich přesná struktura nemá kritický význam. Četné reakce pro vytváření, odstraňování a přeměnu těchto ochranných skupin se popisují v řadě standardních prací včetně například, Protéctive Groups in Organic Chemistry, Plenům Press (Londýn a New York, 1973), Greene, T.W., Protéctive Groups in Organic Synthesís,

Wiley (New York, 1981), a The Peptides, sv.I, Schrooder and Lubke, Academie Press, (Londýn a New York, 1965) .

Reprezentativní skupiny ochraňující hydroxylové skupiny zahrnují například -C₁-C₄ alkylovou skupinu, “^cl^c4 alkoxyskupinu, -CO- (C-^-Cg alkylovou) skupinu, -SO2~(C₄~Cg alkylovou) skupinu a skupinu -CO-Ar, ve které Ar je benzylová skupina nebo případně substituovaná fenylová skupina. Pojem substituovaná fenylová skupina • ·

9* · ·· 9999 ···* • 9 99 9 9 · · « * · 99 · * ·· · · ⁹ μ · 9 9 · 999· .:.. ... .· ···· ·· ··

- 7 se týká fenylové skupiny mající jeden či více substituentů zvolených jako C₁-C₄ alkylová skupina, Cj-C^ alkoxyskupina, hydroxylová skupina, nitroskupina, atom halogenu a tri(chlor nebo fluor)methylová skupina. Pojem atom halogenu se týká atomu bromu, atomu chloru, atomu fluoru a atomu jodu.

Pro sloučeniny obecného vzorce 1 j sou preferovanými substituenty R⁵ a R⁶ methylová skupina, isopropylová skupina, benzylová skupina a methoxymethylová skupina. Sloučeniny, ve kterých R⁵ i R⁶ jsou methylové skupiny, se připraví způsobem popsaným ve výše citovaném Jonesově patentu.

Sloučeninu obecného vzorce lze též připravit tak, že se selektivně odstraní skupina chránící hydroxylovou skupinu R⁵ s ponecháním skupiny chránící hydroxylovou skupinu R jako části konečného produktu. Totéž platí v případě, ve kterém se odstraňuje selektivně skupina R⁶ chránící hydroxylovou skupinu s ponecháním skupiny R⁵ chránící hydroxylovou skupinu na místě. Například R⁵ může být isopropylová nebo benzylová skupina a R⁶ methylová skupina. Isopropylová či benzylová skupina se selektivně odstraní standardními způsoby a methylová skupina R⁶ se ponechá jako část konečného produktu.

Jak ukazuje reakční schéma I, první kroky tohoto způsobu pro přípravu určitých sloučenin podle tohoto vynálezu zahrnují selektivní umístění odstupující skupiny R⁷ v poloze 3 sloučeniny obecného vzorce 1 s vytvořením sloučeniny obecného vzorce 2, připojení produktu této reakce s fenolem 3 majícím chráněnou hydroxylovou skupinu v poloze 4 s vytvořením sloučeniny obecného vzorce 4 • · • · a selektivní odstraněni skupiny R chránící hydroxylovou skupinu s vytvořením sloučeniny obecného vzorce 5.

V pořadí kroků ukázaných v reakčním schématu I se zvolí skupiny R , R a R° chránící hydroxylové skupiny takovým způsobem, že v konečném stavu lze skupinu R⁸ chránící hydroxylovou skupinu selektivně odstranit při zachování skupin R a R chránících hydroxylové skupiny.

Reakční schéma I

Při prvním kroku reakčního schématu I se příslušná odstupující skupina selektivně umístí v poloze 3 obecného vzorce 1 výchozí látky standardními způsoby. Příslušné ✓ *7 odstupující skupiny R zahrnuji sulfonaty, jako je • · methansulfonat, 4-brombenzensulfonat, toluensulfonat, ethansulfonat, isopropansulfonat, 4-methoxybenzensulfonat, 4-nitrobenzensulfonat, 2-chlorbenzensulfonat, triflat apod., atomy halogenu, jako je atom bromu, atom chloru a atom jodu a další příbuzné odstupující skupiny. Avšak pro zajištění správného umístění odstupujících skupin se preferují citované atomy halogenu a zvláště preferovaným je atom bromu.

Tato rekce se provádí standardními způsoby. Například při použití preferovaných halogenačních prostředků reaguje ekvivalent tohoto halogenačního prostředku, nejlépe bromu, s ekvivalentem substrátu obecného vzorce 1 ve vhodném rozpouštědle, jako je například chloroform nebo kyselina octová. Reakce obvykle probíhá při teplotě od zhruba 40 °C do zhruba 80 °C.

Reakční produkt z výše popsaného kroku, sloučenina obecného vzorce 2, poté reaguje s fenolem 3 majícím chráněnou hydroxylovou skupinu v poloze 4 s vytvořením sloučeniny obecného vzorce 4, ve kterém R⁸ je selektivně odstranitelná skupina chránící hydroxylovou skupinu.

Obecně může být fenolovým zbytkem chránícím hydroxylovou skupinu v poloze 4 kterákoliv známá ochranná skupina, kterou lze selektivně odstranit bez odstranění například skupiny R⁵ a, je-li přítomna, skupiny R⁶ sloučeniny obecného vzorce 3. Preferované chránící skupiny zahrnují methoxymethýlovou skupinu, jestliže R⁸ a/nebo R⁸ nejsou methoxymethýlové skupiny a benzylové skupiny. Benzylová skupina je zvláště preferovaná. Fenolové reakční složky s chráněnou hydroxylovou skupinou v poloze 4 jsou komerčně dostupné nebo se mohou připravit standardními způsoby.

♦

- 10 Spojovací reakce mezi sloučeninami obecného vzorce 2 a sloučeninami obecného vzorce 3 jsou v oboru známy jako Ullmanova rekce a obecně probíhají podle standardních způsobů [viz například Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, 4. -vydání, 3-16 (J.March, redakce, John Wiley & Sons, Inc.1992), C.D. Jones, J. Chem. Soc. Perk. Trans. I, 4, 407 (1992)] .

Obecně se ekvivalentní množství dvou arylových substrátů za přítomnosti až ekvimolárního množství katalyzátoru oxidu mědhého a příslušného rozpouštědla vaří pod zpětným chladičem pod inertní atmosférou. Přednostně reaguje ekvivalent sloučeniny obecného vzorce 2, ve které R je atom bromu, s ekvivalntním množstvím 4-benzyloxyfenolu za přítomnosti ekvivalentu oxidu měďného.

Příslušnými rozpouštědly pro tuto reakci jsou rozpouštědla či směsi rozpouštědel zůstávající inertní v průběhu reakce. Obvykle jsou preferovanými rozpouštědly organické báze, zejména bráněné báze, jako je například 2,4,6-kollidin.

Teplota používaná v tomto kroku obecně postačuje pro dokončení této spojovací reakce a ovlivní tak dobu jejího trvání. Když se reakční směs vaří pod zpětným chladičem pod inertní atmosférou, jako je dusík, je doba do dokončení zhruba 20 h až zhruba 60 h.

Po spojení sloučeniny obecného vzorce 2 se sloučeninou obecného vzorce 3 s vytvořením sloučeniny obecného vzorce se sloučenina obecného vzorce 5 připraví selektivním o odstraněním skupiny R chránící hydroxylové skupiny sloučeniny obecného vzorce 4 dobře známými • · • · » *» .:.. .:. ·;·· ··* *··’

- ii redukčními způsoby. Je naprosto nezbytné, aby zvolený způsob neovlivnil skupinu R⁵ a, je-li přítomna, skupinu R chránící hydroxylové skupiny.

Je-li R⁸ preferovaný benzylový zbytek a R⁵ a R⁶, je-li přítomna, jsou methylové skupiny, provede se tento krok standardní hydrogenolýzou. Obvykle se substrát obecného vzorce 4 přidává do vhodného rozpouštědla či směsi rozpouštědel s následným přídavkem donoru protonů pro zrychlení reakce a příslušného hydrogenačního katalyzátoru.

Příslušné katalyzátory zahrnují ušlechtilé kovy a oxidy, jako je palladium, platina a oxid rhoditý na podložce, jako je uhlík či uhličitan vápenatý. Z nich se zvláště preferuje palladium na uhlíku, zejména 10% palladium na uhlíku. Rozpouštědly pro tuto reakci jsou rozpouštědla či směsi rozpouštědel zůstávající inertní v průběhu reakce. Obvykle se preferuje ethylacetát a _Cl-C₄ alifatické alkoholy, zejména ethanol. Pro tuto rekci slouží kyselina chlorovodíková jako vhodný a preferovaný donor protonů.

Při průběhu při teplotě místnosti a tlaku od zhruba 206,8 kPa (30 psi) do zhruba 344,7 kPa (50 psi) probíhá tato reakce velmi rychle. Postup této reakce lze sledovat standardními chromatografickými způsoby, jako je chromatografie na tenké vrstvě.

Jak ukazuje reakční schéma II, sloučenina obecného vzorce 5 reaguje se sloučeninou obecného vzorce r⁴r⁵n-(ch₂)₂-q (6) • ·

- 12 ve které R⁴ a R⁵ jsou podle definice výše a Q je atom bromu nebo přednostně atom chloru, s vytvořením sloučeniny obecného vzorce 7. Sloučenina obecného vzorce 7 se potom zbaví chránících skupin s vytvořením sloučeniny obecného vzorce 1

Reakční schéma II

R³

la, R⁵ R⁶ = H lb, R⁵ = H lc, R⁶ = H

·

0

- 13 Při prvním kroku způsobu ukázaného v reakčním schématu II se reakce provádí standardními způsoby. Sloučenina obecného vzorce 6 je komerčně dostupná nebo se připraví prostředky dobře známými tomu, kdo má běžnou zkušenost v oboru. Přednostně se použije hydrochlorid sloučeniny obecného vzorce 6. Ve zvláště preferovaném případu sloučenin podle tohoto vynálezu se použije 2-chlorethylpiperidinhydrochlorid.

Obecně reaguje alespoň jeden ekvivalent substrátu obecného vzorce 5 s dvěma ekvivalenty sloučeniny obecného vzorce 6 za přítomnosti alespoň čtyř ekvivalentů uhličitanu alkalického kovu, přednostně uhličitanu česného a příslušného rozpouštědla.

Vhodnými rozpouštědly pro tuto reakci jsou rozpouštědla či směsi rozpouštědel zůstávající v průběhu reakce inertní. Preferuje se N,N-dimethylformamid, zejména jeho bezvodá forma. Teplota používaná v tomto kroku by měla být dostatečná pro dokončení této alkylační reakce. Obvykle je dostatečná a preferovaná teplota okolí. Tato reakce se přednostně provádí pod inertní atmosférou, zejména pod atmosférou vodíku.

Za preferovaných reakčních podmínek bude tato reakce probíhat do ukončení zhruba 16 až zhruba 20 h. Postup této reakce lze sledovat standardními chromatografickými způsoby.

Při alternativním způsobu přípravy sloučenin podle tohoto vynálezu ukázaném na reakčním schématu III níže reaguje sloučenina obecného vzorce 5 v akalickém roztoku • · • · • · ♦ • · • · • · ► 999 9

9 a · • 9 9 9 s přebytkem alkylačního prostředku obecného vzorce 8

Q-(CH₂)_n-Q' (8) ve kterém

Q ^a Q' jsou stejné či rozdílné odstupující skupiny.

Příslušné odstupující skupiny jsou ty, které se popisují výše

Reakční schéma III

la, R⁵ = R⁶ = h lb, R⁵ = H lc, R⁶ = H

- 15 Preferovaný alkalický roztok pro tuto alkylační reakci obsahuje uhličitan draselný v některém inertním rozpouštědle, jako je například methyl-ethylketon nebo dimethylformamid. V tomto roztoku se nechráněná hydroxylová skupina sloučeniny obecného vzorce 5 převádí na fenoxidový ion, který vytěsňuje jednu z odstupujících skupin alkylačního činidla.

Tato reakce probíhá nejlépe, jestliže se alkalický roztok obsahující reakční složky a činidla přivede k varu pod zpětným chladičem a reakce se ponechá probíhat do dokončení. Při použití methyl-ethylketonu jako preferovaného rozpouštědla jsou reakční doby v rozmezí od zhruba 6 h do zhruba 20 h.

Reakční produkt z tohoto kroku, sloučenina obecného vzorce 9 poté reaguje se sloučeninou obecného vzorce 10 zvolenou ze seznamu 1-piperidin, 1-pyrrolidin, methyl-1-pyrrolidin, dimethyl-1-pyrrolidin, 4-morfolin, dimethylamin, diethylamin, diisopropylamin nebo 1-hexamethylenimin standardními způsoby s vytvořením sloučenin obecného vzorce 7. Přednostně se používá hydrochlorid sloučeniny obecného vzorce 10, kde zvláště preferovanou sloučeninou je piperidinhydrochlorid. Reakce se obvykle provádí s alkylovanou sloučeninou obecného vzorce 9 v některém inertním rozpouštědle, jako je bezvodý dimethylformamid při zahřívání při teplotě v rozmezí od zhruba 60 °C do zhruba 110 °C. Když se směs zahřívá na preferovanou teplotu okolo 90 °C je doba reakce pouze okolo 30 min až okolo 1 h. Avšak změny reakčních podmínek ovlivní dobu této reakce potřebnou pro dokončení. Postup tohoto reakčního kroku lze sledovat standardními chromatografickými způsoby.

• ·

- 16 Určité preferované sloučeniny obecného vzorce 1 se obdrží odštěpením ochranné skupiny R⁵ a, je-li přítomna, ochranné skupiny R⁶ sloučeniny obecného vzorce 1 dobře známými způsoby. Četné reakce pro vytvoření a odstranění těchto chránících skupin se popisují v řadě standardních prací, např. Protective Groups in Organic Chemistry,

Plenům Press (Londýn a New York, 1973), T.W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley, (New York, 1981) a The Peptides, sv.I, Schrooder and Lubke, Academie Press (Londýn a New York, 1965) . Způsoby odstranění preferovaných skupin R⁷ a/nebo R⁸ chránících hydroxylová skupiny, zejména methylových a methoxymethylových skupin, se v podstatě popisují v příkladech popsaných níže.

Alternativní a preferovaný způsob přípravy sloučeniny podle tohoto vynálezu ukazuje reakční schéma IV. Ve způsobu, který se zde znázorňuje, se atom síry sloučeniny obecného vzorce 2 oxiduje s vytvořením sulfoxidu 11, který poté reaguje s nukleofilní skupinou pro zavedení spojovacího atomu kyslíku sloučenin obecného vzorce 1. Sulfoxidový zbytek sloučeniny obecného vzorce 12 se poté redukuje s obdržením určitých sloučenin podle tohoto vynálezu.

• ·

- 17 Reakční schéma IV

V prvním kroku tohoto způsobu se sloučenina obecného vzorce 2 selektivně oxiduje na sulfoxid 12. Pro tento krok je k dispozici řada známých metod [viz například M. Madesclaire, Tetrahedron, 42 (20), 5459-5495 (1986), B.M. Trošt a kol., Tetrahedron Letters, 22 (14), 1287-1290 ·· *

- 18 9

9999 · 9 ·

9 9 9

99 (1981), J. Drabowicz a kol., Synthetic Communications, 11 (12), 1025-1030 (1981), J.B. Kramer a kol., 34th National Organic Symposium, Williamsburg, VA., 11. až 15. června, 1995]. Avšak mnohá oxidační činidla zajišťují pouze nízkou konverzi na žádaný produkt při významné oxidaci až na sulfon. Preferovaný způsob však převádí sloučeninu obecného vzorce 2 na sulfoxid obecného vzorce s vysokým výtěžkem, s nízkou tvorbou nebo bez tvorby sulfonu. Tento způsob zahrnuje reakci sloučeniny obecného vzorce 2 s 1 až 1,5 ekvivalenty peroxidu vodíku ve zhruba 20% až zhruba 50% směsi kyseliny trichloroctové s methylenchloridem. Tato reakce probíhá při teplotě od zhruba 10 °C do zhruba 50 °C a obvykle vyžaduje čas od zhruba 1 do zhruba 2 h do dokončení.

Dále se vytvoří ochranná skupina R⁷ v poloze 3 žádaným nukleofilním derivátern obecného vzorce 13. Tyto nukleofilní deriváty se připraví standardními způsoby. Při tomto kroku se kyselý proton nukleofilní skupiny odstraňuje bází, přednostně slabým přebytkem hydridu sodného nebo kalium-terc.butoxidem v některém polárním aprotickém rozpouštědle, přednostně v dimethylformamidu nebo tetrahydrofuranu. Ostatní použitelné báze zahrnují uhličitan draselný a uhličitan česný. Navíc lze použít další rozpouštědla, jako je dioxan nebo dimethylsulfid. Deprotonace se obvykle provádí při teplotách zhruba 0 °C až zhruba 30 °C a obvykle vyžaduje do dokončení dobu 30 min. Poté se přidá sloučenina obecného vzorce 14 k roztoku nukleofilního činidla. Vytěsňovací reakce probíhá při teplotách mezi 0 °C a zhruba 50 °C a obvykle probíhá po dobu zhruba 1 až zhruba 2 h. Produkt se izoluje standardními způsoby.

• · ·; ζ » · .··· • : ·: : ·: :: :

.:.. ... ·· ···♦ ·· **

- 19 V dalším kroku tohoto způsobu se sulfoxid obecného vzorce 14 redukuje na benzothiofenovou sloučeninu obecného vzorce 1.

V případě požadavku lze skupiny chránící hydroxylovou skupinu nebo hydroxylové skupiny produktů reakce ukázaných v reakčním schématu IV odstranit a vytvořit sůl produktu v kterémkoliv kroku tohoto způsobu.

Prekurzorové esterové sloučeniny obecného vzorce 1 se připraví náhradou hydroxylových zbytků v poloze 6 a/nebo v poloze 4', pokud jsou přítomny, -OCCďC^-Cg alkylovou skupinou) nebo -OSO₂(C2-Cg alkylovou skupinou) dobře známými způsoby. Viz například U.S. patent č.4 358 593.

Jestliže se například požaduje -OCOÍC-L-Cg alkylová) skupina, ponechá se reagovat monohydroxysloučenina nebo dihydroxysloučenina obecného vzorce 1 s prostředkem, jako je akylchlorid, -bromid, -kyanid nebo -azid nebo s příslušným anhydridem či směsným anhydridem. Reakce se konvenčně provádějí v některém bázickém rozpouštědle, jako je pyridin, lutidin, chinolin nebo isochinolin nebo v terciárním aminovém rozpouštědle, jako je triethylamin, tributylamin, methylpiperidin apod. Reakce se též může provádět v inertním rozpouštědle, jako je ethylacetát, dimethylformamid, dimethylsulfoxid, dioxan, dimethoxyethan, acetonitril, aceton, methyl-ethylketon apod, ke kterému se přidá jeden ekvivalent prostředku zachycujícího kyselinu (vyjma případů popsaných níže), jako je terciární amin. V případě požadavku lze použít aktivační katalyzátory, jako je 4-dimethylaminopyridin nebo

4-pyrrolidinopyridin. Viz například Haslam a kol.,

Tetrahedron, 36, 2409-2433 (1980).

• ·

- 20 ·· ·· ·· « · * · • · · · • · · · • » · · «· ··

Tyto reakce se provádějí při mírných teplotách v rozmezí od zhruba 25 °C do zhruba 100 °C, často pod inertní atmosférou, jako je plynný dusík. Avšak teplota okolí je obvykle pro průběh reakce adekvátní.

Aktivace hydroxylové skupiny v poloze 6 a/nebo v poloze 4'se též může provést reakcemi kyselé katalýzy příslušných karboxylových kyselin v inertních organických rozpouštědlech. Používají se kyselé katalyzátory, jako je kyselina sírová, kyselina polyfosforečná, kyselina methansulfonová apod.

Výše popsané esterové prekurzorové sloučeniny se též můžou obdržet vytvořením aktivního esteru příslušné kyseliny, jako jsou estery vytvářené takovými známými prostředky, jako je dicyklohexylkarbodiimid, acylimidazoly, nitrofenoly, pentachlorfenol, N-hydroxysukei nimid a 1-hydroxybenzotriazol. Viz například Bull. Chem. Soc. Japan, 3 8, 1979 (1965) a Chem. Ber. 788 a 2024 (1970) .

Každý z výše popsaných způsobů poskytujících -OCO- (C-j^-Cg alyklové) skupiny se provádí v rozpouštědlech, jak se diskutuje výše. Tyto způsoby, které neposkytují v průběhu reakce kyselý produkt, ovšem nevyžadují použití prostředků pro odstraňování kyseliny z reakční směsi.

Pokud se požaduje sloučenina obecného vzorce I, ve které se hydroxylová skupina v poloze 6 a/nebo v poloze 4' převádí na -OSC>2(C2-Cg alkylovou) skupinu, reaguje monohydroxylová či dihydroxylová sloučenina například s anhydridem sulfonové kyseliny nebo derivátem příslušné sulfonové kyseliny, jako je sulfonylchlorid, • · · ·» ·«·· » » · • · • *

sulfonylbromid nebo sulfonylamonná sůl, jak popisuje King a Monoir, J. Am. Chem. Soc., 97, 2566-2567 (1975). Dihydroxylová sloučenina též může reagovat s příslušným anhydridem sulfonové kyseliny nebo se směsnými anhydridy sulfonových kyselin. Tyto reakce se provádějí za podmínek vysvětlených výše v diskusi reakce s halidy kyselin apod.

Příprava farmaceuticky přijatelných solí sloučeniny podle tohoto vynálezu

I když při lékařských způsobech ošetřování podle tohoto vynálezu lze použít sloučeninu obecného vzorce I, preferuje se příprava a použití formy farmaceuticky přijatelné soli. Sloučeniny používané ve způsobech tohoto vynálezu primárně vytvářejí farmaceuticky přijatelné adiční soli s řadou organických a anorganických kyselin. Tyto soli se též uvažují v tom smyslu, že patří do obsahu tohoto vynálezu.

Pojem farmaceuticky přijatelné soli, jak se užívá v celém tomto popisu a v připojených nárocích, znamená soli typů popsaných v článku Bergeho a kol., J. Pharmaceutical Sciences, 66., 1-19 (1977) . Vhodné farmaceuticky přijatelné soli zahrnují soli vytvářené obvyklými anorganickými kyselinami, jako je kyselina chlorovodíková, kyselina bromovodíková, kyselina jodovodíková, kyselina dusičná, kyselina sírová, kyselina fosforečná, kyselina fosforičitá apod., stejně tak jako soli odvozené od organických kyselin, jako jsou alifatické monokarboxylové a dikarboxylové kyseliny, alkanové kyseliny substituované fenylovou skupinou, hydroxyalkanové

- 22 ·· • · ···· fr·· ·· fr· ·· • · • e • · ··· ·· ·· kyseliny a hydroxyalkandiové kyseliny, aromatické kyseliny, alifatické a aromatické sulfonové kyseliny. Tyto farmaceuticky přijatelné soli organických kyselin zahrnují acetat, fenylacetat, trifluoracetat, akrylat, askorbat, benzoat, chlorbenzoat, dinitrobenzoat, hydroxybenzoat, methoxybenzoat, methylbenzoat, o-acetoxybenzoat, naftalen-2-benzoat, bromid, isobutyrat, fenylbutyrat, b-hydroxybutyrat, butin-1,4-dioat, hexin-1, 4-dioat, kaprat, kaprylat, chlorid, cinnamat, citrát, formiat, fumarat, glykolat, heptanoat, hippurat, laktat, malat, maleat, hydroxymaleat, malonat, mandelat, mesylat, nikotinat, isonikotinat, dusičnan, oxalat, ftalat, tereftalat, fosforečnan, monohydrogenfosforečnan, dihydrogenfosforečnan, metafosforečnan, pyrofosforečnan, propiolat, propionat, fenylpropionat, salicylat, sebakat, sukcinat, suberat, sulfát, bisulfat, pyrosulfat, sulfit, bisulfit, sulfonat, benzensulfonat, p-bromfenylsulfonat, chlorbenzensulfonat, ethansulfonat, 2-hydroxyethansulfonat, methansulfonat, naftalen-1-sulfonat, naftalen-2-sulfonat, p-toluensulfonat, xylensulfonat, tartarat apod. Preferované soli jsou hydrochloridy a oxalatové soli.

Farmaceuticky přijatelné kyselé adiční soli se obvykle vytvářejí reakcí sloučeniny obecného vzorce I s ekvimolárním množstvím nebo s malým molárním přebytkem kyseliny. Reakční složky se obvykle rozpustí ve společném rozpouštědle, jako je diethylether nebo ethylacetat. Sůl se normálně vysráží v roztoku v průběhu 1 h až 10 d a může se oddělit filtrací nebo se může rozpouštědlo odstranit konvenčními způsoby.

Farmaceuticky přijatelné soli jsou obecně rozpustnější než sloučeniny, od kterých se odvozují, a proto jsou často vhodnější pro přípravu kapalných prostředků či emulzi.

• ·

- 23 Farmaceutické prostředky

Sloučeniny podle tohoto vynálezu se podávají různými způsoby včetně perorálního, rektálního, transdermálního, subkutánního, intravenózního, intramuskulárního a intranasálního způsobu podávání. Tyto látky se přednostně připravují před podáváním a o jejich volbě rozhodne ošetřující lékař. Proto je dalším aspektem tohoto vynálezu farmaceutický prostředek obsahující účinné množství sloučeniny obecného vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelné soli, který může též obsahovat účinné množství estrogenů nebo progestinu a farmaceuticky přijatelný nosič, zřeďovací prostředek nebo pomocnou látku. Celkové množství účinných složek v těchto prostředcích činní od 0,1 hmotnostních % do 0,99 hmotnostních % přípravku.

Pojem farmaceuticky přijatelný znamená nosič, zřeďovací prostředek, pomocnou látku a sůl musí být kompatibilní s ostatními složkami přípravku a nesmí být škodlivá pro jeho příjemce.

Farmaceutické prostředky podle tohoto vynálezu se připraví postupy dobře známými v oboru s použitím dobře známých a snadno rozpustných složek. Například sloučenina obecného vzorce I, buď samotná či v kombinaci s některou estrogenovou či progestinovou sloučeninou, se formuluje s běžnými pomocnými látkami, zřeďovacími prostředky nebo nosiči a připravuje se ve formě tablet, tobolek, suspenzí, roztoků, injekčních forem, aerosolů, prášků apod.

Celkové množství účinných složek v těchto prostředcích činí od 0,1 hmotnostních % do 99,9 hmotnostních % • ·

prostředku. Pojem farmaceuticky přijatelný znamená nosič, zřeďovací prostředek, pomocné látky a sůl musí být kompatibilní s ostatními složkami prostředku a nesmí poškozovat příjemce.

Prostředky se mohou specificky formulovat pro perorální podávání v tuhé či kapalné formě pro parenterální injekce, pro lokální či aerosolové podávání nebo pro rektální či vaginální podávání pomocí čípků.

Farmaceutické prostředky podle tohoto vynálezu se mohou podávat lidem či jiným savcům perorálně, rektálně, intravaginálně, parenterálně, lokálně ( pomocí prášků, mastí, krémů či kapek), bukálně či sublingválně nebo jako perorální či nasální sprej. Pojem parenterální podávání se týká způsobů podávání, které zahrnují intravenózní, intramuskulární, intraperitoneální, intrasternální, subkutánní či intraartikulární injekci či infuzi.

Farmaceutické prostředky podle tohoto vynálezu pro parenterální podávání zahrnují sterilní vodné či nevodné roztoky, disperze, suspenze nebo emulze, stejně tak, jako sterilní prášky, které se převádějí bezprostředně před použitím na sterilní roztoky či suspenze. Příklady vhodných sterilních vodných a nevodných nosičů, zřeďovacích prostředků, rozpouštědel či vehikulí zahrnují vodu, fyziologický roztok, ethanol, polyoly (jako je glycerol, propylenglykol, polyethyleglykol apod.) a jejich vhodné směsi, rostlinné oleje (jako je olivový olej) a injekčně použitelné organické estery, jako je ethyloleat. Správná tekutost se udržuje například použitím povlakových materiálů, jako je lecithin, udržováním správné velikosti částic v případě disperzí a suspenzí a použitím povrchově aktivních látek.

• ·

Parenterální prostředky mohou též obsahovat adjuvantní prostředky, jako jsou konzervační látky, smáčecí látky, emulgačni prostředky a dispergačni prostředky. Prevence působení mikroorganismů se zajišfuje zavedením antibakteriálních a antifungálních prostředků, například parabenu, chlorbutanolu, kyseliny fenolsorbové apod. Může se též požadovat zařazení isotonických prostředků, jako jsou pukry, chlorid sodný apod. Prodloužená absorpce injekčních prostředků se může zajistit zavedením látek, které zpožďují absorpci, jako je monostearat hlinitý a želatina.

V některých případech se pro prodloužení účinku léku požaduje zpomalení absorpce léku po jeho subkutánní či intamuskulárni injekci. To se může uskutečnit použitím kapalné suspenze nebo krystalické či amorfní látky o nízké rozpustnosti ve vodě nebo rozpuštěním či suspendováním léku v olejovém vehikulu. V případě subkutánní či intramuskulární injekce suspenze obsahující lék s nízkou rozpustností ve vodě závisí rychlost absorpce léku na jeho rychlosti rozpouštění.

Injekční depotní prostředky sloučenin podle tohoto vynálezu se připraví vytvořením mikroopouzřených matrici léku v biodegradabilních polymerech, jako je póly(mléčná kyselina) póly(glykolová kyselina), kopolymery kyseliny mléčné a kyseliny glykolové, póly(orthoestery) a polyanhydridy, což jsou látky, které se v oboru popisují.

V závislosti na poměru léku k polymeru a charakteristikách určitého použitého polymeru lze kontrolovat rychlost uvolňování léku.

Injekční prostředky se sterilizují, například filtrací filtry zadržujícími bakterie nebo presterilizací složek

- 26 směsi před jejich smícháním, buď v době výroby nebo těsně před použitím (jako je tomu v případě balení, které má dvě oddělení a obsahuje injekční stříkačku).

Tuhé dávkové formy pro perorální podávání zahrnuj í tobolky, tablety, pilulky, prášky a granule. V těchto tuhých dávkových formách se účinná složka mísí s alespoň jedním inertním farmaceuticky přijatelným nosičem, jako je citrát sodný nebo dikalciumfosfat a/nebo (a) s plnidly či nastavovacími látkami, jako jsou škroby, laktosa, glukosa mannitol a kyselina křemičitá, (b) s pojivý, jako je karboxymethylcelulosa, alginaty, želatina, polyvinylpyrrolidon, sacharosa a akáciová klovatina, (c) se zvlhčovacími prostředky, jako je glycerol, (d) s rozvolňovadly, jako je agar, uhličitan vápenatý, bramborový nebo tapiokový škrob, kyselina alginová, křemičitany a uhličitan sodný, (e) s roztokem obsahujícím retardační prostředky, jako je parafin, (f) s prostředky zrychlujícími absorpci, jako jsou kvarterní amonné sloučeniny, (g) se smáčejícími prostředky, jako je cetylalkohol a glycerolmonostearat, (h) s absorbenty, jako je kaolin a bentonitová hlinka, a (i) s mazivy, jako je mastek, stearat vápenatý, stearat hořenatý, pevné polyethylenglykoly, laurylsulfat sodný a jejich směsi.

V případě tobolek, tablet a pilulek mohou dávkové formy též obsahovat pufry.

Pevné prostředky podobného typu mohou též zahrnovat náplň v měkčích či pevných želatinových tobolkách s použitím pomocných látek, jako je laktosa, stejně tak jako vícemolekulárních polyethylenglykolů apod.

• ·

- 27 Tuhé látkové formy, jako jsou tablety, dražé, tobolky, pilulky a granule, se mohou též připravit s povlaky či pouzdry, jako jsou enterické povlaky nebo jiné povlaky dobře známé v oboru přípravy farmaceutických látek. Povlaky mohou obsahovat zneprůhledňující prostředky nebo prostředky uvolňující účinnou složku (účinné složky) v dané části trávicího traktu, jako například povlaky rozpustné v kyselině pro uvolňování aktivní složky (složek) v žaludku nebo povlaky rozpustné v bázi pro uvolňování aktivní složky (složek) ve střevním traktu.

Aktivní složka (aktivní složky) mohou být též mikroopouzřené v povlaku s pozdrženým uvolňováním, kde mikrotobolky jsou částí prostředku ve formě pilulky či tobolky.

Kapalné dávkové formy pro perorální podávání sloučeniny podle tohoto vynálezu zahrnují roztoky, emulze, suspenze, sirupy a elixíry. Navíc k účinným složkám mohou kapalné prostředky zahrnovat inertní ředící látky obvykle užívané v oboru, jako je voda či jiná farmaceuticky přijatelná rozpouštědla, solubilizační prostředky a emulgátory, jako je ethanol, isopropanol, ethylkarbonat, ethylacetat, benzylalkohol, benzylbenzoat, propylenglykol, 1,3-butylenglykol, dimethylformamid, oleje ( zejména oleje ze semen bavlny, mletých ořechů, kukuřice, klíčků, oliv, ricinový olej a sezamový olej), glycerol, tetrahydrofurfurylalkohol, polyethylenklykoly, estery mastných kyselin a sorbitolu a jejich směsi.

Kromě inertních rozpouštědel mohou kapalné perorální prostředky též zahrnovat adjuvantní látky, jako jsou smáčedla, emulgační a suspenzační prostředky a sladidla, příchutě, a prostředky pro úpravu vůně.

• ·

- 28 Kapalná suspenze může navíc k účinné složce (účinným složkám) obsahovat suspenzační prostředky, jako jsou ethoxylované isostearylalkoholy, polyoxyethylensorbitol a sorbitanové estery, mikrokrystalická celulosa, metahydroxid hlinitý, bentonitová hlinka, agar a tragakant a jejich směsi.

Prostředky pro rektální či intravaginální podávání se připravují smísením jedné či více látek podle tohoto vynálezu s vodnými nedráždivými pomocnými látkami, jako je kakaové máslo, polyethylenglykol nebo jakýkoliv čípkový vosk, který je tuhý při teplotě místnosti, avšak kapalný při teplotě lidského těla, takže se rozpouští v rektu či vaginální dutině s uvolňováním účinné složky (účinných složek). Sloučeniny se rozpouštějí v roztaveném vosku, formují do požadovaného tvaru a ponechají se ztvrdnout do konečné formy čípku.

Sloučenina podle tohoto vynálezu se též může podávat ve formě liposomů. Jak je v oboru známo, odvozují se liposomy obecně od fosfolipidů či jiných lipidových látek. Liposomové prostředky se vytvářejí jako monolamelární či multilamelární hydratované kapalné krystaly dispergované ve vodném prostředí. Lze použít jakýkoliv netoxický farmaceuticky přijatelný a metabolizovatelný lipid schopný tvorby liposomů. Tyto prostředky ve formě liposomů mohou kromě jedné či více účinných složek podle tohoto vynálezu obsahovat stabilizační látky, pomocné látky, konzervační látky apod. Preferovanými lipidy jsou fosfolipidy a fosfatidylcholiny (lecithiny), přirozené i syntetické.

Způsoby přípravy liposomů jsou v oboru dobře známy, jak se popisuje, například v Prescott, redakce, Methods in Cell Biology, sv.XIV, Academie Press, New York, N.Y.

(1976), str. 33 a další.

• · .:.. .:. ..........

- 29 Způsob podle tohoto vynálezu

Jak se diskutuje výše, vykazuje estrogen prospěšný účinek na náhlé změny nálad a depresí u postmenopausálních žen a přisuzuje se mu též prospěšný účinek na paměť, a vědomí u starších pacientů. Pro použití jako léčebného prostředku při těchto stavech se může požadovat podávání léku pacientovi po delší období. Avšak rizika spojená s dlouhodobým užíváním etrogenu a riziko doprovodných nádorů reprodukčních tkání hovoří proti dlouhodobému užívání estrogenu. Náhrada za estrogen musí mít příznivé účinky estrogenu v mozku bez souvisejících škodlivých účinků na prs a dělohu. Avšak tato náhrada musí pro dosažení požadovaného účinku překonat cerebrovaskulární barieru.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu mají požadovaný profil selektivních modulátorů receptorů estrogenu (ŠERM) s účinky podobnými účinkům estrogenu, v některých tkáních a s chybějícími účinky (nebo s minimálním agonistickým účinkem) v prsu a děloze. Navíc, jak prokazují následující údaje, některé sloučeniny podle tohoto vynálezu přecházejí celebrovaskulární barierou a dosahují účinných hladin v mozku po perorálním podávání u laboratorních zvířat.

Distribuce sloučenin podle tohoto vynálezu v různých tkáních krysích samic kmene F344

Krysí samice Fischer 344 (stáří zhruba 12 dnů) dostávají sondou jednorázovou dávku 5 mg/kg (30 mCi/kg) 6-hydroxy-2-(4-methoxyfenyl)-3-[4-(piperidinoethoxy)fenoxy]benzo[b]thiofenhydrochloridu značeného radioaktivním uhlíkem ¹⁴C ve směsi 50 % PEG 300/50 % vody. Krev a tkáně se odebírají od tří krys v každém • ·

- 30 z následujících časů: těsně před podáním a 2, 4, 8 a 24 h po podání. V každém čase se zvířata usmrtí, odeberou se vzorky krve a heparinizovaná krev se centrifuguje s obdržením krevní plazmy. Po odběru vzorku krve se v každém případě provede perfuze zvířete 0,9% fyziologickým roztokem, vyjme se mozek, hypofýza, femury, vaječníky, děloha a játra a tyto tkáně se umístí do oddělených nádobek. Mozek se dále rozdělí na hypothalamus, hippokampus, mozeček a mozkovou kůru. Veškeré vzorky se uchovávají při -70 °C.

Radioaktivita každého vzorku se stanoví spektrometrií s kapalnými sintilátory. Plazma se měří přímo, zatímco ostatní tkáně se bud' homogenizují, rozloží či oxidují před měřením kapalným scintilátorem. Veškeré tkáně se před zpracováním zváží. Játra a mozek se homogenizují v 0,9% fyziologickém roztoku a alikvót homogenátu se oxyduje. Hypofýza, hippokampus, hypothalamus, vaječníky, děloha a mozeček se oxydují přímo po vysušení. Femur se rozloží směsí 30% peroxidu vodíku a koncentrované kyseliny chloristé (objemový poměr 2/1) před měřením kapalným sintilátorem.

Vzorky se oxidují na oxidačním zařízení Packard Model 1307 a výsledný ¹⁴CO₂ se zachytí pro měření kapalným sintilátorem. Radioaktivita v každém vzorku tkáně se převede na množství ekvivalentní ng na g tkáně (specifická aktivita = 16,3 rozpadů za min/ng). Pro každý vzorek se vypočítá plocha pod křivkou v intervalu 0 až 24 h (AUC„__24h).

Homogenáty jater a mozkové kůry se analyzují vysokovýkonnou kapalinovou chromatografií a detekcí ·» ·· • · · · • · · • · · • · · ·· ····

- 31 v ultrafialovém světle při 315 nm pro zjištěni, zda radioaktivita v těchto tkání skutečně odpovídá léku podanému na počátku, primárnímu metabilitu

6-hydroxy-2-(4-hydroxyfenyl)-3-[4-(piperidinoethoxy)fenoxy]-benzo[b]thiofenu nebo jejich glukuronidovým konjugátům. Vzorek mozkové kůry se obdrží 8 h po podáni a vzorky jater se odebírají 4 a 8 h po podáni. Proteiny v homogenátu se vysráží acetonitrilem a supernatant se odpaří do sucha. Zbytek se uvede do mobilní fáze a aplikuje se na sloupec SynChropak SCD-100 s iniciální mobilní fází složenou ze 60 % 0,05 M roztoku dihydrogenfosforečnanu draselného, pH 7/17 % methanolu/17 % acetonnitrilu (objemová %), retenční doby vrcholů z homogenátu se srovnávají s hodnotami obdrženými pro standardní vzorky 6-hydroxy-2-(4-methoxyfenyl)-3-[4-(piperidinoethoxy)-fenoxy]-benzo[b]thiofenu a jeho metabolitu 6-hydroxy-2-(4-hydroxyfenyl)-3-[4-(piperidinoethoxy) fenoxy]-benzo[b]thiofenu.

Hodnoty radioaktivity nalezené ve všech tkáních shrnuje tabulka 1

Tabulka 1

Střední farmakokinetické parametry radioaktivity po jednorázovém perorálním podání ^^C-6-hydroxy-2-(4-methoxy fenyl)-3-[4-(piperidinoethoxy)fenoxy]benzo[b]-thiofenu krysím samicím F 344

• ·

Tkáň	1 c, | (n< I	* nax 3/ml)	T max (h)	| AUC* | (ng h/ml) I
Krevní plasma	1 | 53	* 6	7	1 | 653 1 28
Mozeček	| 425	* 25	8	| 5442 ± 456
Mozek	| 488	A 37	8	| 6259 ± 560
Femur	| 523	* 193	8	| 6458 ± 1666
Hippokamus	| 517	A 37	8	| 7024 ± 660
Děloha	| 609	± 31	7	| 8093 A 311
Hypothalamus	| 689	A 112	8	| 8310 A 1295
Vaječníky	| 1321	A 187	7	| 16761 A 1785
Hypofýza	| 3203	A 608	8	| 37666 ± 8829
Játra	| 3839 1	A 669 1	7	| 51913 a 3126 1

Údaje v tabulce 1 ukazují přítomnost radioaktivních látek ve všech tkáních s dosažením vrcholových hladin 8 h po podání kromě jater, kde se dosahuje vrcholových hladin 4 h po podání. Nej nižší koncentrace jsou v krevní plazmě a nejvyšší v játrech. Hodnoty C_max a AUCQ_24h radioaktivity pro mozeček, mozek, hippokampus a hypothalamus jsou vyšší než hodnoty pozorované v krevní plazmě, což ukazuje na distribuci radioaktivity ¹⁴C-6-hydroxy-2-(4-methoxyfenyl)-3-[4-(piperidinoethoxy)fenoxy]-benzo [b]thiofenu do oblasti mozku po podání mateřské látky. Analýza homogenátu mozkové kůry (podle popisu výše) ukazuje, že radioaktivita odpovídá mateřské látce ³⁴C-6-hydroxy-2-(4-methoxyfenyl) -3-[4-(piperidinoethoxy) fenoxy]-benzo [b] thiofenu a jeho dihydroxy-metabolitu ¹⁴C-6-hydroxy-2-(4-hydroxyfenyl) -3-[4-(piperidinoethoxy) fenoxy]-benzo [b] thiofenu v poměru zhruba 4:1. Na chromatogramu získaném vysokovýkonnou kapalinovou chromatografii homogenátu mozkové kůry nejsou vrcholy t · · « ·· ··

- 33 odpovídající glukoronidovým konjugátům mateřské látky či jejího dihydroxymetabolitu. Chromatogram získaný vysokovýkonnou kapalinovou chromatografií homogenátu jater však ukazuje vrcholy, jejichž retenční časy odpovídají mateřské látce a jejímu glukuronidovému konjugátu.

Podobnost 6-hydroxy-2-(4-methoxyfenyl)-3-[2-(piperidinoethoxy)fenoxy]-benzo[b]thiofenu a estrogenu v hippokampu

Estrogeny, jako je 17b-estradiol, regulují genovou transkripci vazbou estrogenových receptorů přítomných v cytoplasmě některých buněčných populací. Aktivace ligandu ER je potřebná pro nukleární transport, kde vazba na pár o 13 bázích palindromní sekvence konsenzu DNA (prvek odpovídající na estrogen nebo ERE) začíná tvořit aparát pro transkripci, což kulminuje v aktivaci příslušných terčových cílových genů. Byla identifikována řada genů regulovaných estrogenem.

Ty zahrnují cytoskeletální proteiny, neurotransmiterové biosyntetické a metabolické enzymy a receptory stejně tak jako ostatní hormony a neuropeptidy. ERE byly identifikovány v mnohých genech vykazujících odpověď na estrogeny včetně vitellogeninu, c-fos, prolaktinu a luteinizačního hormonu.

Z hlediska významu pro centrální nervovou soustavu byly sekvence podobné ERE identifikovány v p75ⁿ9^rtrKA sloužících jako signální molekuly pro neurotrofiny: faktor růstu nervů (NGF) a faktor růstu nervů odvozený od mozku (BDNGF) a neurotrofin-3.

• · • · ί · · ’ > · » «

I « · ' »· ··

BDNGF stejně jako NGF podporuje přežíváni cholinergních neuronů v kultuře. Postuluje se, že pokud jsou interakce mezi neurotrofiny a estrogeny důležité pro rozvoj a přežívání bazálních neuronů prosencefalonu (které degenerují při Alzheimerově chorobě), mohou klinické stavy, při kterých dochází k nedostatku estrogenů (jako je tomu po menopause), přispívat ke ztrátě těchto neuronů.

Běžně používaným modelem ochuzených o estrogeny je dospělá ovariektomizovaná krysa. Experiment provedený na ovariektomizovaných krysách s použitím diferenciálního zobrazení mRNA ukazuje na podobnosti a/nebo rozdíly mezi reprezentativní sloučeninou podle tohoto vynálezu, 6-hydroxy-2-(4-methoxyfenyl)-3-[4-(2-piperidinoethoxy)-fenoxy]benzo[b]thiofenem a estrogenem při ovlivňování genové exprese v různých oblastech mozku. V pokusu slouží krysí samice Sprague-Dawley o stáří 6 týdnů ovariektomizované dodavatelem. Po jednom týdnu adaptace na podmínky labratorního ustájení se podávají denně subkutánní injekce estradiolbenzoatu (0,03 mg/kg) nebo 6-hydroxy-2-(4-methoxyfenyl-3- [4- (2-piperidinoethoxy)-fenoxy]benzo[b]thiofenu (1 mg/kg) či vehikula (kontrola).

Po 5 týdnech denního podávání se krysy utratí, mozky se vyjmou a hippokampy se odeberou pro mikroskopické vyšetření. Hippokampy se rychle zmrazí kapalným dusíkem a uloží při teplotě -70 °C. Celková RNA se připraví ze spojených vzorků z léčené skupiny a z kontrolní skupiny a podrobí se reverzní transkripci 3' oligonukleotidovým primerem, který vybírá specifické populace mRNA (poly-A+). Polymerasové řetězové reakce (PCR) se provedou ve směsi obsahující náhodné 5' oligonukleotidy (o délce 10 párů bází, celkem 150) , reakční pufr, Taq polymerasu a ³²PdTCP.

···· ♦ ♦ ·· • · * · • « * • · · « * · ·· «·«· ·

» t • · • I ··

- 35 Po 40 cyklech amplifikace se reakční produkty frakcionují podle délky na 6% gelu TBE-močovina, vysuší a použijí pro expozici rentgenového filmu. Výsledná zobrazení mRNA se porovnávají mezi jednotlivými skupinami. 6-Hydroxy-2-(4-methoxyfenyl)-3-[4-(2-piperidinoethoxy)fenoxy]benzo[b]thiofen poskytuje obdobný obraz aktivace či inaktivace genu v krysím hippokampu jako estrogen. Tyto údaje ukazují, že 6-hydroxy-2-(4-methoxyfenyl)-3-[4-(2-piperidinoethoxy)fenoxy]benzo[b]thiofen poskytuj e podobný účinek jako estrogen v hippokampu, který je klíčovou oblastí mozku při Alzheimerově chorobě u lidí.

Proto by podávání účinného množství sloučeniny podle tohoto vynálezu, zejména 6-hydroxy-2-(4-methoxyfenyl)-3-[4-(2-piperidinoethoxy)fenoxy]benzo[b]-thiofenu a jeho primárního metabolitu 6-hydroxy-2-(4-hydroxyfenyl)-3- [4-(2-piperidinoethoxy)fenoxy]benzo[b]-thiofenu mohlo být užitečné při léčení humánních pacientů s Alzheimerovou chorobou.

Příklady provedení vynálezu

Následující příklady se uvádějí pro další ilustraci přípravy sloučeniny podle tohoto vynálezu. Příklady nelze chápat jako omezení obsahu tohoto vynálezu, který se definuje v přiložených nárocích.

Data NMR pro následující příklady se obdrží na přístroji NMR GE 300 MHz a, pokud není uvedeno jinak, používá se jako rozpouštědlo dimethylsulfoxid s šesti atomy deuteria.

··

- 36 Příklad 1

Příprava oxalatové soli [6-methoxy-3-[4-[2-(1-piperidinyl)-ethoxy] fenoxy]-2-(4-methoxyfenyl)]benzo[b]thiofenu

Krok a

Příprava [6-methoxy-2-(4-methoxyfenyl)-3-brom]benzo[b]-thiofenu

K roztoku [6-methoxy-2-(4-methoxyfenyl)]benzo[b]-thiofenu (27,0 g, 100 mmol) v 1,10 litru chloroformu se při 60 °C přidává po kapkách brom (15,98 g, 100 mmol) jako • ·

- 37 roztok v 200 ml chloroformu. Po ukončení přidávání se reakční směs ochladí na teplotu místnosti a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu s obdržením 34,2 g (100 %) [6-methoxy-2-(4-methoxyfenyl)-3-brom]benzo[b]thiofenu ve formě bílé tuhé látky o teplotě tání 83 až 85 °C.

¹H NMR (DMSO-dg): 7,70-7,62 (m, 4H), 7,17 (dd, J =

8,6, 2,0 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 8,4 Hz, 2 H).

Hmotnostní spektrometrie FD: 349, 350.

Vypočítané množství pro 0₁₆Η₁₃0₂3Βγ (%): C 55,03 H 3,75. Nalezené množství (%) : C 54,79, H 3,76.

Krok b

Příprava [6-methoxy-2-(4-methoxyfenyl)-3-(4-benzyloxy)fenoxy]benzo[b]thiofenu

K roztoku [6-methoxy-2-(4-methoxyfenyl)-3-brom]benzo[b]thiofenu (34,00 g, 97,4 mmol) v 60 ml kollidinu pod atmosférou dusíku se přidá 4-benzyloxyfenol (38,96 g 194,8 mmol) a jodid měďný (14,5 g, 97,4 mmol). Výsledná směs se vaří pod zpětným chladičem po dobu 48 h. Při • · • · ochlazení na teplotu místnosti se směs rozpustí v acetonu (200 ml) a anorganické tuhé látky se odstraní filtrací. Filtrát se odpaří ve vakuu a zbytek se rozpustí v methylenchloridu (500 ml). Methylenchloridový roztok se promyje 3N roztokem kyseliny chlorovodíkové (3 x 300 ml), poté IN roztokem hydroxidu sodného (3 x 300 ml). Organická vrstva se vysuší síranem sodným a odpaří ve vakuu. Zbytek se vyjme 100 ml ethylacetátu a vytvořená bílá tuhá látka oddělená filtrací je [6-methoxy-2-(4-methoxyfenyl)]benzo[b]thiofen (4,62 g, 17,11 mmol). Filtrát se odpaří ve vakuu a ponechá se projít krátkou náplní silikagelu (s methylenchloridem jako elučním činidlem) pro odstranění výchozího materiálu. Filtrát se odpaří ve vakuu a zbytek se ponechá vykrystalovat z hexanu /ethylacetátu s obdržením 7,19 g [6-methoxy-2-(4-methoxyfenyl)-3-(4-benzyloxy)fenoxy]benzo[b]thiofenu ve formě bělavé krystalické tuhé látky. Matečný louh se odpaří a vyčistí chromatografií na silikagelu (hexan/ethylacetat 80:20) s obdržením dalších 1,81 g produktu. Celkový výtěžek [6-methoxy-2-(4-methoxyfenyl)-3-(4-benzyloxy)fenoxy]benzo[b]-thiofenu je 9,00 g (24 % vzhledem k výchozí látce). Bázický extrakt se okyselí na pH 4 5N roztokem kyseliny chlorovodíkové s obdržením 13,3 g 4-benzyloxyfenolu o teplotě tání 100 až 103 °C.

¹H NMR (CDC1₃): 7,60 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,39-7,24 (m, 7H), 6,90-6,85 (m, 7H), 4,98 (s,2H), 3,86 (s, 3H),

3,81 (s, 3H).

Hmotnostní spektrometrie FD: 468.

Vypočítané množství pro ^C29^H24°4^S (%): C 74,34, H 5,16. Nalezené množství (%): C 74,64, H 5,29.

• · « ·· ·«

- 39 Krok c

Příprava [6-methoxy-2-(4-methoxyfenyl)-3-(4-hydroxy)fenoxy]benzo[b]thiofenu

K roztoku [6-methoxy-2-(4-methoxyfenyl)-3-(4-benzyloxy)fenoxy]benzo[b]thiofenu (1,50 g, 3,20 mmol) v 50 ml ethylacetátu a 10 ml 1% koncentrované kyseliny chlorovodíkové v ethanolu se přidá 10% palladium na uhlíku (300 mg). Směs se hydrogenuje při tlaku 281 kPa (40 psi) po dobu 20 min a poté je reakce ukončena, jak lze posoudit na základě chromatografie na tenké vrstvě. Směs se ponechá projít Celitem pro odstranění katalyzátoru a filtrát se odpaří ve vakuu na bílou tuhou látku. Surový produkt se ponechá projít vrstvou silikagelu (s chloroformem jako elučním činidlem). Odpaření poskytuje 1,10 g (91 %) [6-methoxy-2-(4-methoxyfenyl)-3-(4-hydroxy)fenoxy]benzo[b]thiofenu ve formě bílé tuhé látky o teplotě tání 123 až 126 °C.

¹H NMR (DMSO-dg): 9,10 (s, 1H), 7,59 (d, J = 8,8 Hz,

2H), 7,52 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,14 (d, J = 8,8 Hz, 1H),

6,95 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,89 (dd, J = 8,8, 2,1 Hz, 1H), 6,72 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 6,63 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 3,78 (s, 3H), 3,72 (s, 3H).

• · • ·

- 40 Hmotnostní spektrometrie FD: 378.

Vypočítané 4,79. Nalezené množství množství pro C₂₂ ^Hi8°4^{s : c} (%): C 70,06, H 4,98

69,82, H

Krok d

Příprava oxalatové soli [6-methoxy-3-[4-[2-piperidinyl)ethoxy]fenoxy]-2-(4-methoxyfenyl)]benzo[b]thiofenu

K roztoku [6-methoxy-2-(4-methoxyfenyl)-3-(4-hydroxy)fenoxy]benzo[b]thiofenu (1,12 g, 2,97 mmol) v 7 ml bezvodého N,N-dimethylformamidu se pod atmosférou dusíku přidá uhličitan česný (3,86 g, 11,88 mmol). Po míchání po dobu 10 min se přidá 2-chlorethylpiperidinhydrochlorid (1, 10 g, 1,48 mmol). Výsledná směs se míchá po dobu 18 h při teplotě okolí. Provede se rozdělení mezi rozpouštědla chloroform/voda (100 ml každého z těchto rozpouštědel). Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje chloroformem (3 x 50 ml) . Organické vrstvy se spojí a promyjí vodou (2 x 10 0 ml) . Sušení organické vrstvy (síranem sodným) a odpařeni poskytuje olej ovitou kapalinu, která se rozpustí v 10 ml ethylacetátu a zpracuje kyselinou šúavelovou (311 mg, 3,4 mmol). Po míchání po dobu 10 min se vytvoří bílá sraženina, která se oddělí filtrací a vysuší s obdržením 1,17 g (70 %) [6-methoxy-3-[4-[2-(1-piperidinyl)ethoxy]fenoxy]-2-(4-methoxyfenyl)]benzo[b] thiofenu ve formě oxalatové soli o teplotě tání 197 až 200 °C (s rozkladem).

¹H NMR (DMSO-dg): 7,60 (d, J = 8,7 Hz, 2H) , 7,55 (d,

J = 1,1 Hz, 1H), 7,14 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,06 (d, J =

8,8 Hz, 2 H) , 6,91 (dd, J = 8,8 , 1,1 Hz, 1H) , 6,87 (s, • 9

- 41 3,32 (široký t, 2H), 3,12-3,06 (m, 4H), 1,69-1,47 (m, 4H), 1,44-1,38 (m, 2H).

Hmotnostní spektrometrie FD: 489.

Vypočítané množství pro C_2gH₃₁NO₄S.0,88 HO₂CCO₂H (%):

C 64,95, H 5,80, N 2,46. Nalezené množství (%) C 64,92, H 5,77, N 2,54.

Příklad 2

Příprava [6-methoxy-3-[4-[2-piperidinyl)ethoxy]fenoxy]-2-(4-methoxyfenyl)]benzo[b]thiofenhydrochloridu · HCI

Zpracování oxalatové soli z příkladu 1 vodnou bází s obdržením volné báze a následnou reakcí s diethyletherem nasyceným kyselinou chlorovodíkovou poskytuje sloučeninu podle nadpisu o teplotě tání 216 až 220 °C.

• · ·· ·

- 42 ^H NMR (DMSO-dg) : (10,20 (široký s, 1H) , 7,64 (d,

J = 8,7 Hz, 2H), 7,59 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,18 (d, J = 9, 0 Hz, 1H) , 7,00 (d, J = 8,7 Hz, 1H) , 6,96 (dd,

J = 9,0, 1,5 Hz, 1H), 6,92 (q, J_AB - 9,0 Hz, 4H), 4,31 (m, 2H), 3,83 (s, 3H), 3,77 (s, 3H), 3,43 (m, 4H), 2,97 (m,

2H) , 1,77 (m, 5H) , 1,37 (m, 1H) .

Hmotnostní spektrometrie FD: 489.

Vypočítané množství pro C₂₉H₃₁NO₄S.1,0 HCI (%): C 66,21, H 6,13, N 2,66. Nalezené množství (%): C 66,46, H 6, 16, N 2,74 .

Příklad 3

Příprava [6-methoxy-3- [4-[2-(1-pyrrolidinyl)ethoxy]fenoxy] -2- (4-methoxyfenyl) benzo [b] thiof enu

Sloučenina podle nadpisu se připraví stejným způsobem jako sloučenina z příkladu 1. Teplota tání je 95 až 98 °C.

· • · • · ·· ··· ¹H NMR J = 2,0 Hz, 9,0 Hz, 2H) 3,97 (t, J 2,73 (t, J (DMSO-dg): 7,64 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,58 (d,

1H), 7,18 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,00 (d, J = , 6,94 (dd, J = 9,0, 2,0 Hz, 1H) , 6,86 (s, 4H) , = 6,0 Hz, 2H), 3,83 (s, 3H), 3,76 (s, 3H), = 6,0 Hz, 2H), 2,51 (m, 4H), 1,66 (m, 4H).

Hmotnostní spektrometrie FD: 477.

Vypočítané množství pro C₂gH₂₉NO₄S (%) : C 70,71, H 6,15, N 2,99. Nalezené množství (%): C 70,59, H 6,15, N 3,01.

Příklad 4

Příprava [6-methoxy-3-[4-[2-(1-hexamethylenimino)ethoxy]fenoxy]-2-(4-methoxyfenyl)]benzo[b]thiofenhydrochloridu

H₃CO

N

OCH

Sloučenina podle nadpisu se připraví stejným způsobem jako sloučenina z příkladu 1. Její teplota tání je 189 až

192 °C.

		NMR	(DMSO-	dg):	10,55 (široký s,	1H), 7,64 (d,
J =	9,0	Hz,	2H) ,	7,58	(d, J = 2,0 Hz, 1H)	, 7,19 (d, J	=
9,0	Hz,	1H)	, 7,00	(d,	J = 9,0 Hz, 2H), 6,	95 (dd, J = 9	,0,
2,0	Hz,	Η) ,	6,86	(s,	4H), 3,94 (t, J = 6,	0 Hz, 2H), 3,	83
(s,	3H)	, 3,	76 (S,	3H)	, 2,80 (t, J = 6,0 H	z, 2H), 2,66	(m,
4H) ,	1,	53 (	m, 8H)

Vypočítané množství pro C₃qH₃₃NO₄S.1,0 HCl (%) C 66,71, H 6,35, N 2,59. Nalezené množství (%): C 66,43, H 6,46, N 2,84.

Příklad 5

Příprava [6-methoxy-3-[4-[2-(1-N,N diethylamino)ethoxyfenoxy]-2-(4-methoxyfenyl)]benzo[b]thiofenhydrochloridu

OCH

Sloučenina podle nadpisu se připraví stejným způsobem jako sloučenina v příkladu 1. Její teplota tání je 196 až

198 °C.

• * ····

		ΧΗ NMR (	DMSO-d	6^ :	10	,48	(široký s,	1H), 7,64	(d,
J	=	9,0	Hz,	2H) , 7	,59	(d,	J =	2,0 Hz, 1H)	, 7,19 (d	, J =
9,	0	Hz,	1H) ,	7,00	(d,	J =	9,0	Hz, 2H), 6,	97 (dd, J	= 9,0,
2,	0	Hz,	1H) ,	6,87	(q,	JAB	= 9,	. 0 Hz, 4H) ,	4,25 (m, :	2H) ,
3,	83	(s,	3H)	, 3,77	(s,	3H)	, 3,	,54 (m, 2H),	3,09 (m,	4H) ,
2,	00	(m,	3H)	, 1,88	(m,	3H)

Vypočítané množství pro ^C28^H31^NO4^S·¹'⁵ HCI (%) : C 63,18, H 6,15, N 2,63. Nalezené možství (%): C 63,46, H 5,79, N 2,85.

Příklad 6

Příprava [6-methoxy-3-[4-[2-(morfolino)ethoxy]-fenoxy]-2-(4-methoxyfenyl)] benzo [b]thiofenhydrochloridu

Sloučenina podle nadpisu se připraví stejným způsobem jako sloučenina z příkladu 1. Její teplota tání je 208 až 211 °C.

• ·

- 46 ¹HNMR (DMSO-dg): 10,6 (široký s, 1H), 7,63 (d,

J = 9,0 Hz, 2H), 7,60 (d, J - 2,0 Hz, 1H), 7,20 (J = 9,0 Hz, 1H), 7,00 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 6,97 (dd, J = 9,0, 2,0 Hz, 1H), 6,91 (q, J_AB = 9,0 Hz, 4H), 4,29 (m, 2H), 4,08-3,91 (m, 4H), 3,82 (s, 3H), 3,77 (s, 3H), 3,59-3,42 (m,

4H), 3,21-3,10 (m, 2H).

Vypočítané množství pro C2gH₂gNO₅S.1,0 HCl (%): C 63,09, H 5,73, N 2,65. Nalezené množství (%): C 63,39, H 5,80, N 2,40.

Příklad 7

Příprava [6-hydroxy-3-[4-[2-(piperidinyl)ethoxy]-fenoxy]-2-(4-hydroxyfenyl)]benzo[b]thiofenu

[6-Methoxy-3 - [4 - [2 -(piperidinyl)ethoxy]fenoxy]-2 -(4-methoxyfenyl)]benzo[b]thiofenhydrochlorid (10,00 g, 19,05 mmol) se rozpustí v 500 ml bezvodého methylenchloridu a ochladí na 8 °C. K tomuto roztoku se přidá bromid boritý (7,20 ml, 76,20 mmol). Výsledná směs se míchá při teplotě 8 °C po dobu 2,5 h. Reakce se ukončí • *

- 47 přídavkem 1 litru nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného do míchaného roztoku ochlazeného na 0 °C. Methylenchloridová vrstva se odstraní a zbývaj ící tuhé látky se rozpustí ve směsi methanol/ethylacetat. Vodná vrstva se poté extrahuje 5% směsí methanol/ethylacetat (3 x 500 ml). Veškeré organické extrakty (ethylacetatové a methylenchloridové) se spojí a vysuší síranem sodným. Provede se odpaření ve vakuu a hnědá tuhá látka se podrobí chromatgrafii (na silikagelu 1 až 7% směsí methanol/chloroform) s obdržením 7,13 g (81 %) [6-hydroxy-3-[4-[2 - (piperidiny) ethoxy] fenoxy] -2- (4-hydroxyfenyl) ] benzo [b] thiofenu ve formě bílé tuhé látky o teplotě tání 93 °C.

^H NMR (DMSO-dg) : 9,73 (široký s, 1H) , 9,68 (široký s, 1H) , 7,45 (d, J = 8,6 Hz, 2H) , 7,21 (d, J = 1,8 Hz,

1H) , 7,04 (d, J = 8,6 Hz, 1H) , 6,84 (dd, J = 8,6, 1,8 Hz,

1H, maskovaný), 6,81 (s, 4H), 6,75 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 3,92 (t, J = 5,8 Hz, 2H), 2,56 (t, J = 5,8 Hz, 2H), 2,36 (m, 4H) , 1,43 (m, 4H) , 1,32 (m, 2H) .

Hmotnostní spektrometrie FD: 462.

Vypočítané množství pro C₂₇H₂₇NO₄S (%) : C 70,20, H 5,90, N 3,03. Nalezené množství (%): C 69,96, H 5,90, N 3,14.

Příklad 8

Příprava oxalatové soli [6-hydroxy-3-[4-[2-(1-piperidinyl) ethoxy]fenoxy]-2 -(4-hydroxyfenyl) ] benzo[b]thiofenu • ·

Sloučenina podle nadpisu se připraví s 80% výtěžkem z volné báze. Její teplota tání je 246 až 249 °C (s rozkladem).

1H NMR	(DMSO	-d6): 7,45 (d, J =	8,6 Hz, 2H)	, 7,22 (d,
J = 1,8 Hz,	1H) ,	7,05 (d, J = 8,6 Hz,	1H), 6,87	(dd, J =
8,6, 1,8 Hz	, 1H,	maskovaný), 6,84 (s,	4H), 6,75	(d, J = 8,
6 Hz, 2H) ,	4,08	(široký t, 2H), 3,01	(široký t,	2H) , 2,79

(m, 4H), 1,56 (m, 4H), 1,40 (m, 2H).

Hmotnostní spektrometrie FD: 462.

Vypočítané množství pro ^C27^H27^NO4^S·°'⁷⁵ HO₂CCO₂H (%) .·

C 64,63, H 5,42, N 2,64. Nalezené množství (%): C 64,61, H 5,55, N 2,62.

Příklad 9

Příprava [6-hydroxy-3-[4-[2-(1-piperidinyl)ethoxy]fenoxy]-2-(4-hydroxyfenyl)]benzo[b]thiofenhydrochloridu

Sloučenina podle nadpisu se připraví s výtěžkem 91 % zpracováním odpovídající volné báze diethyletherem nasyceným kyselinou chlorovodíkovou. Její teplota tání je 158 až 165 °C.

¹H NMR (DMSO-dg): 9,79 (s, 1H) , 9,74 (s, 1H) , 7,40 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,23 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,04 (d,

J = 8,6 Hz, 1H), 6,86 (q, J_AB = 9,3 Hz, 4H), 6,76 (dd,

J = 8,6, 2,0 Hz, 1H), 6,74 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 4,26 (široký t, 2H), 3,37 (m, 4H), 2,91 (m, 2H) , 1,72 (m, 5H), 1,25 (m, 1H).

Hmotnostní spektrometrie FD: 461.

Vypočítané množství pro ^C27^H27^NO4^S·¹'⁰ HCl (%): C 65,11, H 5,67, N 2,81. Nalezené množství (%): C 64,84, H 5,64, N 2,91.

Příklad 10 ·· φ · φφ φ· • · • · ····

Příprava [6-hydroxy-3-[4-[2-(pyrrolidinyl)ethoxy]fenoxy]-2-(4-hydroxyfenyl)]benzo[b]thiofenu

příkladu 3 způsobem podobným způsobu použitému v příkladu

7 v	ýše. Její teplota tání je 99 až 113 °C.
	TH NMR (DMSO-dg): 9,75 (s, 1H), 9,71 (s, 1H), 7,50
(d,	J = 9,0 Hz, 2H), 7,25 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,09 (d,
J =	9,0 Ht, 1H), 6,85 (s, 1H), 6,80 (dd, J = 9,0, 2,0 Hz,
1H)	, 6,79 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 3,93 (m, 2H), 2,73 (m, 2H)

2,53 (m, 4H), 0,96 (t, J = 7,0 Hz, 4H).

Vypočítané množství pro C₂₆H₂₅NO₄S.0,5 H₂O (%): C 68,40, H 5,74, N 3,07. Nalezené množství (%) : C 68,52, H 6, 00, N 3,34.

Příklad 11

Příprava [6-hydroxy-3-[4-[2-(1-hexamethylenimino)ethoxy]fenoxy]-2 -(4-hydroxyfenyl)]benzo[b]thiofenu • ·

Sloučenina podle nadpisu se připraví z produktu příkladu 4 způsobem podobným způsobu použitému v příkladu 7 výše. Její teplota tání je 125 až 130 °C.

¹HNMR (DMSO-dg): 9,75 (s, 1H), 9,71 (s, 1H), 7,50 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,26 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,09 (d,

J = 9,0 Hz, 1H), 6,85 (s, 3H), 6,80 (dd, J = 9,0, 2,0 Hz, 1H), 6,79 (d, J = 9,0 Hz), 3,94 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,80 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,66 (m, 4H), 1,53 (m, 8H).

Vypočítané množství pro ^C28^H29^NO4^S (%): C 70,71, H 6,15, N 2,94. nalezené množství (%): C 70,67, H 6,31, N 2,93.

Příklad 12

Příprava [6-hydroxy-3-[4-[2-(1-N,N-diethylamino)ethoxy]fenoxy]-2-(4-hydroxyfenyl)]benzo[b]thiofenu • 9 • 999 • 9 ·· • · · · • · · • · · ♦ · · •9 ···«

Sloučenina podle nadpisu se připraví z produktu příkladu 5 způsobem podobným způsobu použitému v příkladu 7 výše. Její teplota tání je 137 až 141 °C.

¹H NMR (DMSO-dg): 9,75 (s, 1H), 9,71 (s, 1H), 7,49 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,25 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,09 (d,

J = 9,0 Hz, 1H), 6,85 (s, 4H), 6,80 (dd, J = 9,0, 2,0 Hz,

1H), 6,79 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 3,95 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,74 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,51 (m, 4H), 1,66 (m, 6H).

Vypočítané množství pro C_2gH₂₇NO₄S (%): C 69,46, H 6,05, N 3,12. Nalezené množství (%): C 69,76, H 5,85, N 3,40.

Příklad 13

Příprava [6-hydroxy-3- [4-[2-(morfolino)ethoxy]fenoxy-2 -(4-hydroxyfenyl)]benzo[b]thiofenhydrochloridu ·* • · ·· ···· • * · 2 • · · ί • · · · ;

«« ··

Sloučenina podle nadpisu se připraví z produktu přikladu 6 způsobem podobným způsobu použitému v příkladu 7 výše. Její teplota tání je 157 až 162 °C.

¹H NMR (DMSO-dg): 10,60 (široký s, 1H), 9,80 (s,

1H), 9,75 (s, 1H), 7,50 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,28 (d,

J = 2,0 Hz, 1H), 7,10 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,92 (q, J_Ag = 9,0 Hz, 4H) , 6,81 (dd, J = 9,0 Hz, 2,0 Hz, 1H), 6,80 (d, J = 9,0 Hz, 2H) , 4,30 (m, 2H) , 3,95 (m, 2H) , 3,75 (m, 2H) , 3,51 (m, 4H), 3,18 (m, 2H).

Vypočítané množství pro C₂gH₂^NOgS HCI (%): C 62,46,

H 5,24, N 2,80. Nalezené množství (%): C 69,69, H 5,43,

N 2,92.

Příklad 14

Příprava [6-hydroxy-3-[4 -[2 -(1-piperidinyl)ethoxy]fenoxy] - 2 -(4-methoxyfenyl)]benzo[b]thiofenu

Krok a

Příprava kyseliny 6-methoxybenzo[b]thiofen-2-boronové h_3Co^J^X^Ib-^oh

OH

K roztoku 6-methoxybenzo[b]thiofenu (18,13 g, 0,111 mol) ve 150 ml bezvodého tetrahydrofuranu se při teplotě 60 °C přidává po kapkách z injekční stříkačky n-butyllithium (76,2 ml, 0,122 mol, 1,6 M roztok v hexanu). Po míchání po dobu 30 min se injekční stříkačkou přidává triisopropylborat (28,2 ml, 0,122 mol). Výsledná směs se ponechá postupně ohřát na 0 °C a poté se rozdělí mezi IN roztok kyseliny chlorovodíkové a ethylacetat (po 300 ml). Vrstvy se oddělí a organická

vrstva se vysuší síranem sodným. Odpaření ve vakuu poskytuje bílou tuhou látku, která se zpracuje směsí ethyletheru a hexanu. Filtrace poskytuje 16,4 g (71 %) kyseliny 6-methoxybenzo[b]thiofen-2-boronové ve formě bílé tuhé látky o teplotě tání 200 °C. (s rozkladem).

¹H NMR (DMSO-dg): 7,83 (s, 1H), 7,78 (d, J = 8,6 Hz,

1H), 7,51 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 6,97 (dd, J = 8,6, 2,0 Hz,

1H) , 3,82 (s, 3H) .

Hmotnostní spektrometrie FD: 208.

Krok b

Příprava [6-methoxy-2 -(4-methansulfonyloxyfenyl]benzo[b]-thiofenu

OSO₂CH₃

K roztoku kyseliny 6-methoxybenzo[b]thiofen-2-boronové (3,00 g, 14,4 mmol) ve 100 ml toluenu se přidá 4-(methansulfonyloxy)fenylbromid (3,98 g, 15,8 mmol) a poté 16 ml 2,0 N roztoku uhličitanu sodného. Po míchání po dobu 10 min se přidá tetrakistrifenylfosfinpalladium (0,60 g, 0,52 mmol) a výsledná směs se vaří pod zpětným chladičem po dobu 5 h. Reakční směs se poté ponechá ·

ochladit na teplotu místnosti, při které se produkt vysráží z organické fáze. Vodná fáze se odstraní a organická vrstva se odpaří ve vakuu na tuhou látku. Triturace z ethyletheru poskytuje tuhou látku, která se odfiltruje a odpaří ve vakuu s obdržením 3,70 g (77 % [6-methoxy-2-(4-methansulfonyloxyfenyl)]benzo[b]thiofenu ve formě hnědé tuhé látky o teplotě tání 197 až 201 °C.

¹H NMR (DMSO-d₆): 7,82-7,77 (m, 3H), 7,71 (d, J =

8,8 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,40 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 6,98 (dd, J = 8,7, 1,5 Hz, 1H), 3,80 (s, 3H), 3,39 (s, 3H).

Hmotnostní spektrometrie FD: 334.

Vypočítané množství pro ^16^14^4^2 (¾)^{: c} 57,46, H

4,21. Nalezené množství (%): C 57,76, H 4,21.

Krok c

Příprava [6-hydroxy-2-(4-methansulfonyloxyfenyl)]benzo[b]thiofenu

HO S

OSO₂CH₃

K roztoku [6-methoxy-2-(4-methansulfonyloxyfenyl)]benzo[b]thiofenu (9,50 g, 28,40 mmol) v bezvodém methylenchloridu (200 ml) se při teplotě místnosti pod atmosférou dusíku přidává bromid boritý (14,20 g, 5,36 ml, 56,8 mmol). Výsledná směs se míchá při teplotě okolí po dobu 3 h. Reakce se ukončí pomalým nalitím do přebytku ledové vody. Po energickém míchání po dobu 30 min se bílá sraženina oddělí filtrací, promyje několikrát vodou a poté se vysuší ve vakuu s obdržením 8,92 g (98 %) [6-hydroxy-2 -(4-methansulfonyloxyfenyl)]benzo[b]thiofenu ve formě bílé tuhé látky o teplotě tání 239 až 243 °C.

¹H NMR (DMSO-dg): 9,70 (s, 1H), 7,76 (d, J = 8,7 Hz,

2H), 7,72 (s, 1H), 7,62 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,38 (d,

J = 8,7 Hz, 2H), 7,24 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 6,86 (dd, J =

8,7, 1,7 Hz, 1H), 3,38 (s, 3H).

Hmotnostní spektrometrie FD: 320.

Vypočítané množství pro ^ci5^H-]_2^O4^S2 ^{: c} 56,23, H

3,77. Nalezené množství (%): C 56,49, H 3,68.

Krok d

Příprava [6-benzyloxy-2-(4-methansulfonyloxyfenyl)]benzo[b]thiofenu

oso₂ch₃ • · · · • ·

K roztoku [6-hydroxy-2-(4-methansulfonyloxyfenyl)]benzo[b]thiofenu (3,20 g, 10,0 mmol) v 75 ml bezvodého dimethylformamidu se přidá uhličitan česný (5,75 g, 17,7 mmol) a poté benzylchlorid (1,72 ml, 11,0 mmol). Výsledná směs se energicky míchá po dobu 24 h. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a tuhý zbytek se suspenduje ve 200 ml vody. Bílá sraženina se oddělí filtrací a několikrát se promyje vodou. Po vysušení ve vakuu se surový produkt suspenduje ve směsi hexan/ethylether 1:1. Tuhá látka se oddělí s obdržením 3,72 g (91 %) [6-benzyloxy-2-(4-methansulfonyloxyfenyl)benzo[b]thiofenu ve formě bílé tuhé látky o teplotě tání 198 až 202 °C.

^ΤΗ NMR (DMSO-dg): 7,81-7,78 (m, 3H), 7,72 (d, J =

8,7 Hz, 1H), 7,64 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,47-7,30 (m, 7H), 5,15 (s, 2H), 3,39 (s, 3H).

Hmotnostní spektrometrie FD: 410.

Krok e

Příprava [6-benzyloxy-2-(4-hydroxyfenyl)]benzo[b]thiofenu

OH

« ·

- 59 K roztoku [6-benzyloxy-2-(4-methansulfonyloxyfenyl)]benzo[b]thiofenu (12,50 g, 30,50 mmol) ve 300 ml bezvodého tetrahydrofuranu se pod atmosférou vodíku přidává při teplotě místnosti lithium-aluminiumhydrid (2,32 g, 61,0 mmol) po malých dílech. Poté se směs míchá při teplotě okolí po dobu 3 h a reakce se ukončí opatrným nalitím směsi do přebytku chladného 1,0 N roztoku kyseliny chlorovodíkové. Vodná fáze se extrahuje ethylacetatem. Organická vrstva se poté promyje několikrát vodou a vysuší (síranem sodným) a odpaří va vakuu s obdržením tuhé látky. Chromatografie (chloroformem na silikagelu) poskytuje 8,75 g (87 %) [6-benzyloxy-2-(4-hydroxyfenyl)]benzo[b]thiofenu ve formě bílé tuhé látky o teplotě tání 212 až 216 °C.

¹H NMR (DMSO-dg): 9,70 (s, 1H) , 7,63 (d, J =

8,7 Hz, 1H) , 7,56 (d, J = 2,2 Hz, 1H) , 7,51-7,30 (m, 8H) ,

7,00 (dd, J = 8,7, 2,2 Hz, 1H), 6,80 (d, J = 8,6 Hz, 2H),

5,13 (s, 2H).

Hmotnostní spektrometrie FD: 331.

Vypočítané množství pro ^C21^H16°2^{1 * * * S} (%): C 75,88, H 4,85. Nalezené množství (%): C 75,64, H 4,85.

Krok f

Příprava [6-benzyloxy-2-(4-methoxyfenyl)]benzo[b]thiofenu

K roztoku [6-benzyloxy-2-(4-hydroxyfenyl)]benzo[b]thiofenu (8,50 g, 26,40 mmol) ve 200 ml bezvodého dimethylformamidu se pod proudem dusíku při teplotě místnosti přidává po malých částech hydrid sodný (1,66 g, 41,5 mmol). Když skončilo vyvíjení plynu, přidává se po kapkách jodmethan (3,25 ml, 52,18 mmol). Reakční směs se míchá po dobu 3 h při teplotě okolí. Poté se rozpouštědlo odpaří ve vakuu a zbytek se rozdělí mezi vodu a ethylacetat. Vrstvy se oddělí a organická vrstva se promyje několikrát vodou. Poté se organická vrstva vysuší síranem sodným a odpaří ve vakuu s obdržením 9,00 g (98 %) [6-benzyloxy-2-(4-methoxyfenyl)]benzo[b]thiofenu ve formě bílé tuhé látky o teplotě tání 180 až 185 °C.

³H NMR (DMSO-dg): 7,67-7,58 (m, 5H), 7,46-7,29 (m,

5H), 7,02 (dd, J = 8,8, 2,2 Hz, 1H), 6,98 (d, J = 8,7 Hz,

2H), 5,13 (s, 2H), 3,76 (s, 3H).

Hmotnostní spektrometrie FD: 346.

Vypočítané množství pro ^C22^H18°2^{3 * S : c} 76,27, H

5,24. Nalezené množství (%): C 76,54, H 5,43.

- 61 Krok g

Příprava [6-benzyloxy-2-(4-methoxyfenyl)-3-brom]benzo[b] thiofenu

OCH [6-Benzyloxy-2-(4-methoxyfenyl)]benzo[b]thiofen (10,0 g, 28,9 mmol) se přidá do 200 ml chloroformu spolu s 10,0 g pevného hydrogenuhliČitanu sodného při teplotě okolí.

K této suspenzi se po kapkách přidává brom (1,50 ml, 29,1 mmol) v průběhu 30 min ve formě roztoku ve 100 ml chloroformu. Poté se přidá voda (200 ml) a vrstvy se oddělí. Organická fáze se vysuší síranem sodným a odpaří ve vakuu na bílou tuhou látku. Krystalizace ze směsi methylenchlorid/methanol poskytuje 10,50 g (85 %) [6-benzyloxy-2-(4-methoxyfenyl)-3-brom]benzo[b]thiofenu ve formě bílé tuhé látky o teplotě tání 146 až 150 °C.

¹H NMR (DMSO-dg): 7,70 (d, J= 2,2 Hz, 1H), 7,65-7,60 (m, 3H), 7,47-7,30 (m, 5H), 7,19 (dd, J = 8,8, 2,2

Hz, 1H) , 7,06 (d, J = 8,7 Hz, 2H) , 5,17 (s, 2H) , 2,78 (s,

3H) .

Hmotnostní spektrometrie FD: 346.

• β

- 62 Vypočítané množství pro ^C22^H17°2^SBr (%): C 62,13, H 4,03. Nalezené množství (%): C 61,87, H 4,00.

Krok h

Příprava [6-benzyloxy-2-(4-methoxyfenyl)-3-brom]benzo[b]thiofen-(S-oxidu)

OCH

Sloučenina podle nadpisu se připraví oxidací produktu z kroku g s 1,5 ekvivalenty peroxidu vodíku ve směsi kyseliny trifluoroctové s methylenchloridem. Produkt se oddělí jako žlutá tuhá látka krystalizací z ethylacetátu a jeho teplota tání je 202 až 205 °C.

¹H NMR (DMSO-dg) : 7,80 (d, J = 2,2 Hz, 1H) , 7,68 (d,

J = 8,7 Hz, 2H), 7,55 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7-47-7,32 (m,

6H) , 7,10 (d, J = 8,7 Hz, 2H) , 5,23 (s, 2H) , 3,80 (s, 3H) .

Hmotnostní spektrometrie FD: 441.

Vypočítané množství pro C₂₂H₁₇O₂SBr (%): C 59,87, H 3,88. Nalezené množství (%): C 59,59, H 3,78.

• β · ♦ · ·· · · « «·· · « * · · · · • · · · ···· • · · · · ··· · · • · ··« · · · · ···· ··· ·· ···· ·· ·»

- 63 Krok ί

Příprava [6-benzyloxy-3-[4-[2-(1-piperidinyl)ethoxy] fenoxy]-2-4 -(methoxyfenyl)]benzo[b]thiofen-(S-oxidu)

Reakce produktu z kroku i) výše s 4-(2-piperidinoethoxy)fenolem v bázi poskytuje sloučeninu podle nadpisu ve formě žluté olej ovité kapaliny.

^TH NMR (DMSO-dg): 7,76 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,62 (d,

J = 8,8 Hz, 2H), 7,44-7,30 (m, 5H), 7,12 (dd, J = 8,6,

2,2 Hz, 1H), 7,03-6,93 (m, 5H), 6,85 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 5,18 (s, 2H), 3,94 (široký t, J = 5,8 Hz, 2H), 3,73 (s,

3H), 2,56 (široký t, J = 5,8 Hz, 2H), 2,37-2,34 (m, 4H), 1,45-1,32 (m, 6H).

Hmotnostní spektrometrie FD: 592.

Vypočítané množství pro C^^H^^NO^S (%): C 72,26, H 6,06, N 2,41. Nalezené množství (%): C 72,19, H 5,99, N 2,11.

♦ · 9 · « ·

- 64 Krok j

Příprava [6-benzyloxy-3-[4-[2-(1-piperidinyl)ethoxy]fenoxy]-2-(4-methoxyfenyl)]benzo[b]thiofenu

Redukce produktu z kroku i) výše poskytuje sloučeninu podle nadpisu izolovanou s celkovým výtěžkem 95 %. Čištění na silikagelu 1 až 5% směsí methanol/chloroform poskytuje bělavou tuhou látku o teplotě tání 105 až 108 °C.

^ΤΗ NMR (DMSO-dg): 7,62 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,59 (d,

J = 8,8 Hz, 2H), 7,45-7,30 (m, 5H), 7,15 (dd, J =

8,6 Hz, 1H) , 7,00-6,94 (m, 3H) , 6,82 (s, 4H) , 5,13 (s,

2H) , 3,92 (široký t, J = 5,8 Hz, 2H) , 3,72 (s, 3H) , 2,55 (široký t, J = 5,8 Hz, 2H), 2,37-2,34 (m, 4H), 1,44-1,31 (m, 4H).

Hmotnostní spektrometrie FD: 565.

Vypočítané množství pro 02₅Ηβ₅Ν0₄3 (%): C 74,31, H 6,24, N 2,48. Nalezené množství (%): C 74,35, H 6,07, N 2,76.

···· ··· ·· ···· «» ··

Krok k

Příprava [6-hydroxy-3-[4-[2-(1-piperidinyl)]ethoxy]fenoxy]-2 -(4-methoxyfenyl)]benzo[b]thiofenu

K roztoku [6-benzyloxy-3-[4-[2-(1-piperidinyl)ethoxy]fenoxy]-2-(4-methoxyfenyl)]benzo[b]thiofenu (8,50 g, 15,0 mmol) ve 300 ml směsi ethanol/ethylacetat 5:1 se přidá palladiová čerň (1,50 g), formiat amonný (3,50 g, 55,6 mmol) a 30 ml vody. Výsledná směs se vaří pod zpětným chladičem a sleduje se chromatografií na tenké vrstvě. Po zhruba 3 h se reakce považuje za ukončenou a roztok se ochladí na teplotu okolí. Směs se filtruje vrstvou Celítu pro oddělení katalyzátoru a filtrát se odpaří ve vakuu na tuhou látku. Koncentrát se rozdělí mezi nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného a 5% směs ethanol/ethylacetat. Vrstvy se oddělí a organická fáze se vysuší síranem sodným a odpaří ve vakuu. Surový produkt se vyčistí chromatograficky (na silikagelu 1 až 5% směsí methanol/chloroform) s obdržením 6,50 g (91 %) [6-hydroxy-3-[4-[2-(1-piperidinyl) ethoxy]fenoxy]-2-(4-methoxyfenyl)]benzo[b]thiofenu ve formě pěny, která se převede na tuhou látku triturací • · · » s hexanem. Její teplota tání je 174 až 176 °C.

¹H NMR (DMSO-dg): 9,77 (s, 1H), 7,56 (d, J =

8,8 Hz, 2H), 7,23 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,07 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 6,93 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,81 (s, 4H), 6,76 (dd, J = 8,6, 2,0 Hz, 1H), 3,91 (široký t, J = 5,9 Hz, 2H),

3,71 (s, 3H), 2,55 (široký t, J = 5,9 Hz, 2H), 2,38-2,33 (m, 4H), 1,46-1,28 (m, 6H).

Hmotnostní spektrometrie FD: 475.

Vypočítané množství pro C₂gH₂gNO^S (%): C 70,71, H 6,15, N 2,94. Nalezené množství (%): C 70,46, H 5,93, N 2,71.

Příklad 15

Příprava hydrochloridu [6-hydroxy-3-[4-[2-(1-piperidinyl) ethoxy]fenoxy]-2-(4-methoxyfenyl)]benzo[b]thiofenu

HO

OCH • · « 9 · 9 9

9 · * 9 · 9 ·

9 · 9 9 · 9 9 9 ·

9 9 ♦ ·

9999 999 99 9999

Produkt z příkladu 14 se převede na odpovídající hydrochlorid s výtěžkem 85 % zpracováním diethyletherem nasyceným chlorovodíkem v ethylacetátu s následnou krystalizací ze směsi ethanol/ethylacetat. Teplota tání produktu je 156 až 160 °C.

¹H NMR (DMSO-dg): 10,28 (široký s, 1H), 9,85 (s,

1H) ,	7,56 (d,	J = 8,8	Hz, 2H), 7,25 (d, J	= 2,	0 Hz, 1H),
7,06	(d, J =	8,7 Hz,	1H), 6,93 (d, J = 8,8	Hz,	2H), 6,87
(q.	JAB = 9,3	Hz, 4H)	, 4,27 (široký t, J =	5,9	Hz, 2H),
3,71	(s, 3H),	3,44-3,	31 (m, 4H), 2,98-2,88	(m,	2H) ,

1,74-1, 60 (m, 5H), 1,36-1,29 (m, 1H).

Hmotnostní spektrometrie FD: 475.

Vypočítané množství pro C₂gH₂gNO₄S.1,0 HCl (%): C 65,68, H 5,90, N 2,73. Nalezené množství (%): C 65,98, H 6,11, N 2,64.

Příklad 16

Příprava [6-methoxy-3- [4- [2-(1-piperidinyl)ethoxy]fenoxy]-2-(4-hydroxyfenyl)]benzo[b]thiofenu • ·· · ··♦

Krok a

Příprava [6-methoxy-2-(4-benzyloxyfenyl)]benzo[b]thiofenu

H₃CO

Podle obecných způsobů kroků a) až g) z příkladu 14 se látka podle nadpisu obdrží s výtěžkem 73 % a její teplota tání je 217 až 221 °C.

^TH NMR (DMSO-dg): 7,63-7,60 (m, 3H), 7,59-7,26 (m,

7H), 7,02 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 6,96 (dd, J = 8,8, 2,2 Hz,

1H), 5,11 (s, 2H), 3,88 (s, 3H).

Hmotnostní spektrometrie FD: 346.

• · « ·

Vypočítané množství pro 02₂ ^Ηΐ8^2® ^{: C} 76,27, H

5,24. Nalezené množství (%): C 76,00, H 5,25.

Krok b [6-Methoxy-2-(4-benzyloxyfenyl)-3-brom]benzo[b]thiofen

Sloučenina podle nadpisu se obdrží s výtěžkem 91 % a její teplota tání je 125 až 127 °C.

¹H NMR (DMSO-dg): 7,64-7,61 (m, 4H), 7,46-7,31 (m,

5H) , 7,15-7,09 (m, 3H) , 5,15 (s, 2H) , 3,82 (s, 3H) .

Hmotnostní spektrometrie FD: 346.

Vypočítané množství pro C2₂H-L7O₂SBr (%) : C 62,13, H 4,03. Nalezené množství (%): C 62,33, H 3,93.

Krok c [6-Methoxyoxy-2-(4-benzyloxyfenyl-3-brom] benzo[b]thiofen-(S-oxid) • · fr »

Sloučenina podle nadpisu se oddělí jako žlutá tuhá látka chromatograficky (chloroformem na silikagelu) a její teplota tání je 119 až 123 °C.

¹H NMR (DMSO-dg): 7,73 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,68 (d,

J = 8,8 Hz, 2H), 7,55 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,46-7,31 (m, 5H), 7,26 (dd, J = 8,5, 2,2 Hz, 1H), 7,18 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 5,16 (s, 2H), 3,86 (s, 3H).

Hmotnostní spektrometrie FD: 441.

Vypočítané množství pro C₂₂H₁₇O₃SBr (%): C 59,87, H 3,88. Nalezené množství (%): C 60,13, H 4,10.

Krok d [6-Methoxy-3 - [4 -[2 -(1-piperidinyl)ethoxy]fenoxy]-2 -(4-benzyloxyfenyl)]benzo[b]thiofen-(S-oxid) ·· • · · · · • · ·

• · · · ♦ ···· · · * ·· *··*

Sloučenina podle nadpisu se obdrží ve formě žluté tuhé látky o teplotě tání 89 až 93 °C.

¹H NMR (DMSO-dg): 7,68 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,62 (d,

J = 8,8 Hz, 2H), 7,42-7,28 (m, 5H), 7,08-6,92 (m, 6H),

6,86 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 5,09 (s, 2H), 3,94 (široký t, J = 5,8 Hz, 2H), 3,81 (s, 3H), 2,56 (široký t, J = 5,8 Hz, 2H), 2,37-2,34 (m, 4H), 1,45-1,31 (m, 6H).

Hmotnostní spektrometrie: FD 592.

Vypočítané množství pro CggHggNOgS.0,25 EtOAc (%):

C 71,62, H 6,18, N 2,32. Nalezené množství (%): C 71,32,

H 5,96, N 2,71.

Krok e [6-Methoxy-3- [4- [2-(1-piperidinyl)ethoxy]fenoxy]-2-(4-benzyloxyfenyl)/benzo[b]thiofen » · 0 »000 0

Sloučenina podle její teplota tání je nadpisu se obdrží s výtěžkem 91 % a 106 až 110 °C.

¹H NMR (DMSO-dg): 7,59 (d, J = 8,8 Hz,

J = 2,2 Hz, 1H), 7,42-7,28 (m, 5H), 7,13 (d,

1H), 7,03 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,82 (s, 4H),

3,92 (široký t, J = 5,8 Hz, 2H), 3,78 (s, 3H) (široký t, J = 5,8 Hz, 2H), 2,37-2,33 (m, 4H)

2H), 7,54 (d,

J = 8,8 Hz, 5,08 (s, 2H), , 2,55 , 1,44-1,31 (m, 4H).

Hmotnostní spektrometrie FD: 565.

Vypočítané množství pro C₃gH₃₅NO₄S (%) N 2,48. Nalezené množství (%): C 74,26, H : 74,31, H 6,24, 6,17, N 2,73.

Krok f

Příprava [ 6-methoxy-3 -[4-[2-(1-piperidinyl)ethoxy]fenoxy]-2-(4-hydroxyfenyl)]benzo[b]thiofenu

··	•	··	··	• ·	··
• *	• ·	• ·	9 9	• ·	• ·
*	•	• ·	9	• »	• 9
•	•	• ·	•	• 9	9 9
···*	• · ·		····	9 ·	99

Sloučenina podle nadpisu se obdrží s výtěžkem 88 % a její teplota tání je 147 až 150 °C.

¹H NMR (DMSO-dg): 9,72 (s, 1H), 7,51 (d, J =

2,0 Hz, 1H), 7,48 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,11 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,88 (dd, J = 8,8, 2,2 Hz, 1H), 6,81 (s, 4H),

6.76 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 3,91 (široký t, J = 5,9 Hz, 2H),

3.77 (s, 3H), 2,55 (široký t, J = 5,9 Hz, 2H), 2,38-2,33 (m, 4H), 1,46-1,28 (m, 6H).

Hmotnostní spektrometrie FD: 475.

Vypočítané množství pro C₂gH₂gNO₄S (%) : C 70,71, H 6,15, N 2,94. nalezené množství (%): C 71,00, H 6,17, N 2,94.

Příklad 17 ·· · ·» »· ·· ·· • ·· · · · · · · · · • · · · · ♦ · · · • · · · · ···· ···· ··· ·· ···· ·· ··

Příprava [6-methoxy-3- [4- [2- (1-piperidinyl)ethoxy]fenoxy]-2-(4-hydroxyfenyl)]benzo [b]thiofenhydrochloridu

Sloučenina podle nadpisu se připraví způsobem analogickým způsobu použitému v příkladu 15 s obdržením sloučeniny podle nadpisu o teplotě tání 215 až 217 °C.

^TH NMR (DMSO-dg): 7,52 (d, J = 2,2 Hz, (d, J = 8,4 Hz, 1H), Hz, 2H), 4,27 (široký 3,43-3,34 (m, 4H), 2,

1,36-1,29 (m, 1H).

10,28 (široký s, 1H), 9,80 1H), 7,47 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 6,91-6,80 (m, 5H), 6,78 (d, J t, J = 5,8 Hz, 2H) , 3,78 (s, 97-2,91 (m, 2H), 1,78-1,61 (m,

Hmotnostní spektrometrie FD:

(s, 1H) 7,12 = 8,6 3H) ,

5H) ,

Vypočítané 65,68, H 5,90, H 5,79, N 2,99 množství pro C2gH2gNO₄S.1,0 HCl (%): C N 2,73. Nalezené množství (%): C 65,87,

Příklady prostředků

V následujících prostředcích pojem účinná složka znamená sloučeninu obecného vzorce I nebo její sůl či solvát.

Příklad prostředku 1

Želatinové tobolky

Složka Množství (mg/tobolka)

Účinná složka	0,1 -	- 1000
Škrob, NF	0 -	- 650
Škrob, prášek schopný tečení	0 -	- 650
Kapalný silikon, 3,5.10”^ m^s-1 (350 cSt)	0 -	- 15

Příklad prostředku 2 Tablety
Složka	Množství (mg/tableta)
Účinná složka	2,5 - 1000
Mikrokrystalická celulosa	200 - 650
Odkuřovaný oxid křemičitý	10 - 650
Kyselina stearová	5-15

Příklad prostředku 3

Tablety

4 ·· *· 44 ·*

4 4 4 · · · · 4 4 4 4 • 4 44 4 4 4 4 *

444 4 444 44 4

4 444 4444

4444 444 44 444« 44 44

Složka	Množství	(mg/tableta)
Účinná složka	25 -	1000
Škrob	45
Mikrokrystalická celulosa	35
Polyvinylpyrrolidon	4
(jako 10% roztok ve vodě)
Sodná sůl karboxymethylcelulosy	4,5
Stearat hořečnatý	0,5
Mastek	1

Účinná složka, škrob a celulosa se ponechají projít sítem 0,355 mm (45 mesh U.S.) a důkladně promíchají. Roztok polyvinylpyrrolidonu se smíchá s výslednými prášky a poté se ponechá projít sítem 1,4 mm (14 mesh U.S.) a pečlivě promísí. Obdržené granule se vysuší při teplotě 50 až 60 °C a ponechají se projít sítem 1,18 mm (18 mesh U.S.). Sodná sůl karboxymethylškrobu, stearat hořečnatý a mastek, které prošly předtím sítem 0,25 mm (60 mesh U.S.) se přidají ke granulím, které se po míchání lisují na tabletovacím stroji s obdržením tablet.

Příklad prostředku 4

Suspenze

Složka Množství (mg/5 ml)

Účinná složka

Sodná sůl karboxymethylcelulosy Sirup

0,1 - 1000 mg mg

1,25 mg « 9 ·· • · ·* ··

9 9 9 • 9 ·

9 9 9

9 9 · • · · · • 9 · 9

99

Složka

Množství (mg/5 ml)

Roztok kyseliny benzoové Příchuť.

Bervivo

Čištěná voda do

0,10 ml dle přání dle přání 5 ml

Lék se ponechá projít sítem 0,355 mm (45 mesh U.S.) a smíchá se se sodnou solí karboxymethylcelulosy a sirupem s vytvořením hladké pasty. Roztok kyseliny benzoové, příchuť a barvivo se zředí malým množstvím vody a přidá se za míchání. Poté se přidá dostatečné množství vody pro získání požadovaného objemu.

Přiklad prostředku 5

Aerosol

Složka

Množství (hmotnostních %)

Účinná složka 0,25 Ethanol 25,75 Hnací plyn 22 (Chlordifluormethan) 70,00

Účinná složka se smísí s ethanolem a směs se přidá k podílu hnací látky 22 ochlazené na 30 °C a přenese se do plnicího zařízení. Požadované množství se poté plní do nádoby z nerezavějící oceli a zředí zbývající hnací látkou. Poté se k nádobě připojí ventilová jednotka.

Příklad 6

··	•				··	··
• ·	·«	• ·	• ·'	•	•	• ·
•	•	• ·	•		•	• ·
•
•	•	• ·	•	«	•	• ·
····	···	··	·«··		·«	»«

Čípky

Složka Množství (mg/čípek)

Účinná složka 250

Glyceridy nasycených 2000 mastných kyselin

Účinná složka se ponechá projít sítem 0,25 mm (60 mesh U.S.) a suspenduje se v glyceridech nasycené mastné kyseliny, které se předtím roztaví s použitím minimálního nezbytného tepla. Směs se poté nalije do čípkové formy o nominálním obsahu 2 g a ponechá se ochladit.

Přiklad prostředku 7

Injekční prostředky

Složka Množství

Účinná složka 50 mg

Izotonický fyziologický roztok 1000 ml

Roztok složek vyjmenovaných výše se podává intravenózně pacientovi při rychlosti zhruba 1 ml za min.

Claims (20)

1. Použití sloučeniny o struktuře

R³ i

ve které

R¹ a R ² jsou nezávisle na sobě zvoleny ze souboru sestávajícího z hydroxyskupiny a alkoxyskupiny o 1 až 4 atomech uhlíku a

R³ a R⁴ jsou nezávisle na sobě zvoleny ze substituentů

O A methylová skupina nebo ethylová skupina nebo R a R* spolu s atomem dusíku, ke kterému jsou připojeny, vytvářejí pyrrolidino-, methylpyrrolidino-, dimethylpyrrolidino-, piperidino-, morfolino- nebo hexamethyleniminokruh, nebo její farmaceuticky přijatelné soli či prekurzoru léčiva, k výrobě farmaceutického prostředku k léčení nemoci centrálního nervového systému vybrané z depresí, náhlých změn nálad a Alzheimerovy choroby u pacienta, který potřebuje tuto léčbu.

• · · · • · · ·

9 9 9

99 9

2. Použití sloučeniny podle nároku 1 o struktuře v tomto nároku uvedené, k výrobě farmaceutického prostředku k léčení depresí nebo náhlých změn nálad u pacienta, který to potřebuje.

3. Použití sloučeniny podle nároku 1 o struktuře v tomto nároku uvedené, k výrobě farmaceutického prostředku k léčení Alzheimerovy choroby u pacienta, který to potřebuje.

4. Použití sloučeniny podle nároku 1 o struktuře v tomto nároku uvedené, kde oba substituenty R¹ a R² jsou hydroxyskupiny, k výrobě farmaceutického prostředku k léčení nemoci centrálního nervového systému vybrané z depresí, náhlých změn nálad a Alzheimerovy choroby u pacienta, který potřebuje tuto léčbu.

5. Použití sloučeniny podle nároku 2 o struktuře uvedené v nároku 1, kde oba substituenty R¹ a R² jsou hydroxyskupiny, k výrobě farmaceutického prostředku k léčení nemoci centrálního nervového systému vybrané z depresí, náhlých změn nálad a Alzheimerovy choroby u pacienta, který potřebuje tuto léčbu.

6. Použití sloučeniny podle nároku 3 o struktuře uvedené v nároku 1, kde oba substituenty R¹ a R² jsou hydroxyskupiny, k výrobě farmaceutického prostředku k léčení nemoci centrálního nervového systému vybrané z depresí , náhlých změn nálad a Alzheimerovy choroby u pacienta, který potřebuje tuto léčbu.

7. Použití sloučeniny podle nároku 1 o struktuře v tomto nároku uvedené, kde R¹ je hydroxyskupina a R² je alkoxyskupina o 1 až 4 atomech uhlíku, k výrobě • · · · • · · φ • 9 φ ΦΦ « · ·· · · ·φ Φ • « · ······· • · ·» · · · * · «9 farmaceutického prostředku k léčení nemoci centrálního nervového systému vybrané z depresí, náhlých změn nálad a Alzheimerovy choroby u pacienta, který potřebuje tuto léčbu.

8. Použití sloučeniny podle nároku 2 o struktuře * 1 9 uvedené v nároku 1, kde R^x je hydroxyskupina a R je » alkoxyskupina o 1 až 4 atomech uhlíku, k výrobě farmaceutického prostředku k léčení nemoci centrálního nervového systému vybrané z depresí, náhlých změn nálad a Alzheimerovy choroby u pacienta, který potřebuje tuto léčbu.

9. Použití sloučeniny podle nároku 3 o struktuře uvedené v nároku 1, kde R¹ je hydroxyskupina a R² je alkoxyskupina o 1 až 4 atomech uhlíku, k výrobě farmaceutického prostředku k léčení nemoci centrálního nervového systému vybrané z depresí, náhlých změn nálad a Alzheimerovy choroby u pacienta, který potřebuje tuto léčbu.

10. Použití sloučeniny podle nároku 1 o struktuře v tomto nároku uvedené, kde R³ a R⁴ spolu s atomem dusíku, ke kterému jsou připojeny, vytvářejí piperidinokruh, k výrobě . farmaceutického prostředku k léčení nemoci centrálního nervového systému vybrané z depresí, náhlých změn nálad • a Alzheimerovy choroby u pacienta, který potřebuje tuto léčbu.

11. Použití sloučeniny podle nároku 2 o struktuře uvedené v nároku 1, kde R³ a R⁴ spolu s atomem dusíku, ke kterému jsou připojeny, vytvářejí piperidinokruh, k výrobě farmaceutického prostředku k léčení nemoci centrálního • · nervového systému vybrané z depresí, náhlých změn nálad a Alzheimerovy choroby u pacienta, který potřebuje tuto léčbu.

12. Použití sloučeniny podle nároku 3 o struktuře uvedené v nároku 1, kde R³ a R⁴ spolu s atomem dusíku, ke kterému jsou připojeny, vytvářejí piperidinokruh, k výrobě farmaceutického prostředku k léčení nemoci centrálního nervového systému vybrané z depresí, náhlých změn nálad a Alzheimerovy choroby u pacienta, který potřebuje tuto léčbu.

13. Použití sloučeniny o struktuře » ve které ⁴ R² je hydroxyskupina nebo methoxyskupina, nebo její farmaceuticky přijatelné soli či prekurzoru léčiva, k výrobě farmaceutického prostředku k léčení deprese nebo náhlých změn nálad u pacienta, který potřebuje tuto léčbu.

14. Použití sloučeniny podle nároku 13 o struktuře • · • · · · • · · · • · v tomto nároku uvedené, kterou je 6-hydroxy-2-(4-methoxyfenyl )-3-[4-(2-piperidinoethoxy)fenoxy]benzo[b]thiofen nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl, k výrobě farmaceutického prostředku k léčení deprese nebo náhlých změn nálad u pacienta, který potřebuje tuto léčbu.

15. Použití sloučeniny podle nároku 13 o struktuře v tomto nároku uvedené, kterou je 6-hydroxy-2-(4-methoxyfenyl )-3-[4-(2-piperidinoethoxy)fenoxy]benzo[b]thiofen nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl, k výrobě farmaceutického prostředku k léčení deprese nebo náhlých změn nálad u pacienta, který potřebuje tuto léčbu.

16. Použití sloučeniny o struktuře ve které

R² je hydroxyskupina nebo methoxyskupina, nebo její farmaceuticky přijatelné soli či prekurzoru léčiva, k výrobě farmaceutického prostředku k léčení Alzheimerovy choroby u pacienta, který to potřebuje.

• · · · • · · 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 · 9 9

99 9 99 9 ·« 99

17. Použití sloučeniny podle nároku 16 o struktuře v tomto nároku uvedené, kterou je 6-hydroxy-2-(4-methoxyfenyl )-3-[4-(2-piperidinoethoxy)fenoxy]benzo[b]thiofen nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl, k výrobě farmaceutického prostředku k léčení Alzheimerovy choroby u pacienta, který to potřebuje.

18. Použití sloučeniny podle nároku 16 o struktuře v tomto nároku uvedené, kterou je 6-hydroxy-2-(4-methoxyfenyl)-3-[4-(2-piperidinoethoxy)fenoxy]benzo[b]thiofen nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl, k výrobě farmaceutického prostředku k léčení Alzheimerovy choroby u pacienta, který to potřebuj e.

19. Použití sloučeniny podle nároku 13 ve formě soli, kterou je hydrochloridová sůl, k výrobě farmaceutického prostředku k léčení deprese nebo náhlých změn nálad u pacienta, který potřebuje tuto léčbu.

20. Použití sloučeniny podle nároku 16 ve formě soli, kterou je hydrochloridová sůl, k výrobě farmaceutického prostředku k léčení Alzheimerovy choroby u pacienta, který to potřebuje.