CZ372999A3 - Synthetic compound binding calcitonin receptor, reaction agent, scintigraphic representation agent, preparation and radiotherapeutic agent containing thereof, complex and system for preparing a radioactive preparation, the reaction agent labeling method and process of its preparation and use - Google Patents
Synthetic compound binding calcitonin receptor, reaction agent, scintigraphic representation agent, preparation and radiotherapeutic agent containing thereof, complex and system for preparing a radioactive preparation, the reaction agent labeling method and process of its preparation and use Download PDFInfo
- Publication number
- CZ372999A3 CZ372999A3 CZ19993729A CZ372999A CZ372999A3 CZ 372999 A3 CZ372999 A3 CZ 372999A3 CZ 19993729 A CZ19993729 A CZ 19993729A CZ 372999 A CZ372999 A CZ 372999A CZ 372999 A3 CZ372999 A3 CZ 372999A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- amino acid
- peptide
- reagent
- amid
- group
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Syntetická sloučenina, kteráváže receptor kalcitoninu, má molekulovou hmotnost menší než 10 000 aje kovalentně navázánana chelátor radioaktivního kovu za vzniku reakčního činidla, které má stejnou nebo větší vazebnou afinitu na receptor kalcitoninu nežje vazebná afinita radioaktivním jodem označeného přírodního kalcitoninu na uvedený receptor. Reakční činidlo, které obsahuje uvedenou sloučeninu, scintigrafické zobrazovací činidlo, které obsahuje toto reakční činidlo, prostředek, který obsahuje toto reakční činidlo, a radioterapeutické činidlo, které obsahuje toto reakční činidlo a cytotoxický radioisotop, komplex, který se vytvoří zreagovánímreakčního činidla podle kteréhokoliv z nároků 1 až 20 s techneciem-99m, rheniem-186 nebo rheniem-188 v přítomnosti redukčního činidla, a sestava pro přípravu radiofarmaceutického přípravku, který obsahuje zatavenou nádobku obsahující předem stanovené množství shora uvedeného reakčního činidla a dostatečné množství redukčního činidlapro označení tohoto reakčního činidla techneciem-99m, rheniem-186 nebo rheniem-188. Způsob označení uvedeného reakčního činidla a způsobjeho výroby a jeho použití pro výrobu léčeivapro zobrazení místav tělu savce a pro výrobu léčivapro léčení onemocnění, pro kteréje charakteristickápřítomnost receptorůkalcitoninu. Syntetická sloučenina, která váže receptor kalcitoninu, reakční činidlo, scintigrafické zobrazovací činidlo, prostředek a radioterapeutické činidlo ji obsahující, komplex a sestava pro přípravu radioaktivního přípravku, způsob označení reakčního činidla a způsob jeho výroby a použitíThe synthetic calcitonin receptor compound has a molecular weight of less than 10,000 and is covalently a radioactive metal chelator to form a reaction metal an agent having the same or greater binding affinity to calcitonin receptor than radioactive binding affinity iodine-labeled natural calcitonin on said receptor. The reagent it contains the compound, the scintigraphic imaging agent it contains this reagent, a composition comprising the reaction reagent an agent, and a radiotherapeutic agent comprising the same a reagent and a cytotoxic radioisotope, a complex that is by reacting the reagent of any one from 1 to 20 with technetium-99m, rhenium-186 or rheniem-188 in the presence of a reducing agent, and an assembly for preparing a radiopharmaceutical composition containing it a sealed container containing a predetermined amount of the aforementioned reagent and sufficient amount of a reducing agent to indicate the reagent technetium-99m, rhenium-186 or rhenium-188. Way designating said reagent and method of manufacture; its use for the manufacture of a medicament for displaying the body a mammal and for the manufacture of a medicament for the treatment of the diseases for which it is characteristic of the presence of calcitonin receptor. Synthetic compound that binds calcitonin receptor, reagent, scintigraphic an imaging agent, a composition and a radiotherapeutic agent containing it; radioactive formulation preparation, reagent labeling method a how it is manufactured and used
Description
Syntetická sloučenina, která váže receptor kalcitoninu, reakční činidlo, scintigrafické zobrazovací činidlo, prostředek a radioterapeutické činidlo ji obsahující, komplex a sestava pro přípravu radioaktivního přípravku, způsob označení reakčního činidla a způsob jeho výroby a použitíA synthetic compound that binds to a calcitonin receptor, a reagent, a scintigraphic imaging agent, a composition and a radiotherapeutic agent containing it, a complex and an assembly for preparing a radioactive preparation, a method for labeling a reagent, and a method for its manufacture and use
Oblast technikyTechnical field
Tento vynález se týká syntetické sloučeniny, která váže receptor kalcitoninu a je kovalentně navázána na chelátor radioaktivního kovu, takže vznikne reakčního činidlo, které má stejnou nebo větší vazebnou afinitu na receptor kalcitoninu než je vazebná afinita radioaktivním jodem označeného přírodního kalcitoninu na uvedený receptor. Je popsáno scintigrafické zobrazovací činidlo, které obsahuje toto reakční činidlo, prostředek a radioterapeutické činidlo, které obsahuje toto reakční činidlo a cytotoxický radioisotop, a komplex, který se vytvoří zreagováním tohoto reakčního činidla s cytotoxickým radioisotopem v přítomnosti redukčního činidla. Uvedené reakční činidlo lze použít pro výrobu léčiva zvláště při léčení rakoviny.The present invention relates to a synthetic compound that binds to the calcitonin receptor and is covalently bound to a radioactive metal chelator to form a reagent having the same or greater binding affinity to the calcitonin receptor than the binding affinity of radioactive iodine labeled natural calcitonin to said receptor. Described is a scintigraphic imaging agent comprising the reagent, the composition and a radiotherapeutic agent comprising the reagent and a cytotoxic radioisotope, and a complex formed by reacting the reagent with a cytotoxic radioisotope in the presence of a reducing agent. Said reagent may be used for the manufacture of a medicament, particularly in the treatment of cancer.
Dosavadní stav technikyBACKGROUND OF THE INVENTION
V posledních 60 letech byl dosažen velký pokrok v tendenci snižování dlouhodobé úmrtnosti na některé typy rakovin, zvláště rakoviny žaludku. Během stejné doby však tendence úmrtností na jiné typy rakovin zůstávají nezměněny nebo se dokonce zvyšují. Například rakovina plic je nejčastějším typem rakoviny na světě, která dnes představuje hlavní příčinu úmrtnosti na rakovinu u mužů a žen. Rakovina prsu je nejobvyklejší rakovinou u žen a druhou hlavní příčinou úmrtnosti žen na rakovinu. V některých zemích se zvyšuje úmrtnost na rakovinu vaječníku. Rovněž pokračují rakoviny lymfatických žláz u dětí i dospělých, jako jsou leukemie a ne-Hodgkinovy lymfomy, které představují významné příčiny úmrtnosti na rakovinu. U všech těchto rakovin je dnes cílem jejich včasná diagnosa a účinné léčení.Over the past 60 years, great progress has been made in reducing long-term mortality from some cancers, especially stomach cancer. However, over the same period, mortality trends for other types of cancer remain unchanged or even increase. For example, lung cancer is the most common type of cancer in the world, which today is the leading cause of cancer mortality in men and women. Breast cancer is the most common cancer in women and the second leading cause of cancer mortality in women. In some countries, ovarian cancer mortality is increasing. Lymphatic gland cancers in both children and adults, such as leukemia and non-Hodgkin's lymphomas, are also continuing to be important causes of cancer mortality. Today, all these cancers are targeted at early diagnosis and effective treatment.
9 9 9 99
9 99 99 99 9
9 9 9 99
9 999 9999,999,999
9 99 9
9 9 9 9 9 99 9 9 9 9
Před několika lety byla navržena místně směrovaná diagnosa a terapie, které umožňují in vivo zacílení příslušných míst onemocnění v těle živočicha. Obecně platí, že místně směrovaná diagnosa nebo terapie používá cílené částice, jako je protilátka specifická pro místo onemocnění nebo pro organismus, který způsobuje onemconění, která je svázána se značkou v případě diagnostického činidla nebo s cytotoxickým činidlem v případě terapeutického činidla. Existuje velmi mnoho literatury, které se týká radioaktivně označených protilátek nebo fragmentů protilátek pro účely diagnostického zobrazení. Podobně byla během těchto let navržena četná místně směrovaná terapeutická činidla, která používají monoklonální protilátky a rozmanité radioisotopy, např. jak je uvedeno v USA patentech č. 4 454 106, 4 472 509, 4 828 991, 5246 691, 5 355 394 a 5641 471, v evropských patentech 429624 a 585 986, ve spisu WO 90/15 625 a podobně. Tato činidla na bázi protilátky poskytují vedlejší účinky, které se týkají imunitních odpovědí léčeného živočicha na protilátku, i když se fragmenty protilátky nebo humanizované protilátky používají jako cílící částice.Several years ago, locally directed diagnosis and therapy have been proposed that allow in vivo targeting of relevant disease sites in the animal's body. Generally, a site-directed diagnosis or therapy uses targeted particles, such as a disease-specific antibody or an organism that causes onemonium, which is associated with a label for a diagnostic agent or a cytotoxic agent for a therapeutic agent. There is very much literature on radiolabeled antibodies or antibody fragments for diagnostic imaging purposes. Similarly, numerous site-directed therapeutic agents have been proposed over the years using monoclonal antibodies and a variety of radioisotopes, e.g., as disclosed in U.S. Patent Nos. 4,454,106, 4,472,509, 4,828,991, 5246,691, 5,355,394, and 5641 471, European patents 429624 and 585 986, WO 90/15 625 and the like. These antibody-based agents provide side effects that relate to the immune response of the treated animal to the antibody, although antibody fragments or humanized antibodies are used as targeting particles.
Nevýhodám místně cílených diagnostických a terapeutických činidel na bázi protilátky se lze vyhnout, jestliže se používají cílící částice, které mají nižší molekulové hmotnosti, jako jsou peptidy specifické pro receptor nebo malé molekuly. Kondenzace peptidu nebo malé molekuly se značkou nebo cytotoxickým činidlem, za zachování specifičnosti sloučeniny na receptor, však může být technicky obtížná. Způsoby radioaktivního označení peptidů a dalších malých molekul, které zachovávají schopnost sloučeniny vázat se specificky na receptor, jsou popsány v obecně známých USA patentech č. 5 225180, 5 405 597, 5 443 815, 5 508 020, 5 552 525, 5 561 220, 5 620 675, 5 645 815, 6 654 272, 5 711 931, 5 716 596, 5 720 934 a 5 736122, v opuštěné USA patentové přihlášce č. 07/955 466 a ve spisech WO 92/13 572, WO 93/10 747, WO 93/17 719, WO 93/21 962, WO 92/23 085, WO 93/25 244, WO 94/00 489, WO 94/07 918 a WO 94/28 942. Způsoby popsané v těchto patentech a publikacích jsou zvláště vhodné pro výrobu místně směrovaných diagnostických zobrazujících činidel. USA patenty č. 5620675 a 5 716 596 a spisy WO 94/00489, WO 95/03330, WO 95/00 553, WO 95/31 221 a WO 96/04 308 φφ ··Disadvantages of site-based antibody-based diagnostic and therapeutic agents can be avoided when targeting moieties having lower molecular weights, such as receptor-specific peptides or small molecules, are used. However, condensation of a peptide or small molecule with a label or cytotoxic agent, while maintaining the specificity of the compound at the receptor, may be technically difficult. Methods for radiolabeling peptides and other small molecules that retain the ability of a compound to bind specifically to a receptor are described in commonly-known U.S. Patent Nos. 5,251,580, 5,405,597, 5,443,815, 5,508,020, 5,552,525, 5,561,220 5,620,675, 5,645,815, 6,654,272, 5,711,931, 5,716,596, 5,720,934, and 5,736,122, in the abandoned U.S. Patent Application Nos. 07/955,466 and WO 92/13,572, WO 93 / 10,747, WO 93/17,719, WO 93/21962, WO 92/23 085, WO 93/25 244, WO 94/00489, WO 94/07 918 and WO 94/28 942. patents and publications are particularly suitable for the manufacture of locally directed diagnostic imaging agents. U.S. Patent Nos. 5,620,675 and 5,716,596 and WO 94/00489, WO 95/03330, WO 95/00 553, WO 95/31 221 and WO 96/04 308 φφ ··
Φ Φ 4Φ Φ 4
Φ Φ «Φ Φ «
ΦΦΦ Φ Φ 4 • 4 φ Φ Φ Φ popisují analogy somatostatinového peptidu, které se mohou používat pro místně směrovanou radioterapii. Spis WO 95/33 497 popisuje somatostatinové analogy, gpllb/llla receptor vázající peptidy a peptidy vázající leukocyty, které se mohou používat pro místně směrovanou radiodiagnosu nebo radioterapii. Spis WO 96/30 055 popisuje peptidy vázající receptor vasoaktivního intestinálního peptidu (VIP), který se může používat pro místně směrovanou radiodiagnosu nebo radioterapii.• Φ • 4 • 4 φ Φ Φ Φ describe somatostatin peptide analogues that can be used for site-directed radiotherapy. WO 95/33 497 discloses somatostatin analogues, gpIIb / IIIa receptor binding peptides and leukocyte binding peptides, which can be used for site-directed radiodiagnosis or radiotherapy. WO 96/30 055 discloses vasoactive intestinal peptide (VIP) receptor binding peptides, which can be used for site-directed radiodiagnosis or radiotherapy.
Nádorové buňky často příležitostně exprimují nebo nadexprimují příslušný receptor nebo receptorový subtyp, jak ukazují vazebné receptorové studie. U některých typů rakovin se markéry nádorových buněk mohou měnit podle toho, jak onemocnění postupuje, možná proto, že odráží stav onemocnění a tedy prognosu pro pacienta. Druh receptoru, který nádorová buňka exprimuje, může být charakteristický pro etiologii nádoru a může tedy poskytovat relativně specifický markér pro nádor. Například bylo ukázáno, že radioaktivně označené samotostatinové analogy se specificky vážou na neuroendokrinní nádory, melanomy, rakovinu plic a některé rakoviny prsu. Jeden takový analog, 111ln-Octreoscan, dostal obchodní schválení pro používání při zobrazování neuroendokrinních nádorů. Druhý radioaktivně označený somatostatinový analog, mTc-Depreotide, má ukončenu třetí fázi klinických testů pro použití pro zobrazování nádorů plic. Bylo ukázáno, že 123l-vasoaktivní intestinální peptid je cílen na adenokarcinomy tlustého střeva a žaludku.Tumor cells often occasionally express or overexpress a particular receptor or receptor subtype, as shown by binding receptor studies. In some cancers, tumor cell markers may vary as the disease progresses, possibly because it reflects the disease state and hence the prognosis for the patient. The type of receptor that the tumor cell expresses may be characteristic of the etiology of the tumor and may thus provide a relatively specific marker for the tumor. For example, radiolabeled self -ostatin analogs have been shown to specifically bind to neuroendocrine tumors, melanomas, lung cancer, and some breast cancers. One such analog, 111 ln-Octreoscan, has received commercial approval for use in imaging neuroendocrine tumors. The second radiolabeled somatostatin analogue, m Tc-Depreotide, has completed the third phase of clinical trials for use in imaging lung tumors. 123 L-vasoactive intestinal peptide has been shown to target colon and stomach adenocarcinomas.
Kalcitonin (CT) je peptid o 32 aminokyselinách, který je sekretován ze štítné žlázy jako odpověď na zvýšené hladiny vápníku v seru. Kalcitonin má četné biologické účinky, které jsou zprostředkovány kalcitoninovými receptory přítomnými na povrchu buněk v cílovém orgánu. Receptory s vysokou afinitou na CT byly identifikovány v kostech, ledvinách, plicích a v centrálním nervovém systému. V kostech CT inhibuje resorpci kostí osteokblasty, v ledvinách CT zvyšuje vylučování vápenatých iontů a v centrálním nervovém systému tento peptid indukuje analgesi, sekreci žaludeční kyseliny a inhibicí chuti. Malá množství CT byla podávána živočichům a lidem bez toxických účinků. Lososový CT je klinicky používán pro léčení kostních poruch, jako je Pagetovo onemocnění, maligní hyperkalcemie a osteoporóza. Intra• · · · venózně podávaný kalcitonin rychle mizí z krve a je primárně vylučován močí. Hlavním místy lokalizace podávaného CT jsou ledviny, játra a epifýzy dlouhých kostí.Calcitonin (CT) is a 32 amino acid peptide that is secreted from the thyroid in response to elevated serum calcium levels. Calcitonin has numerous biological effects that are mediated by calcitonin receptors present on the cell surface of the target organ. Receptors with high affinity for CT have been identified in the bones, kidneys, lungs and central nervous system. In bone, CT inhibits bone resorption by osteocblasts, in kidney CT increases calcium excretion, and in the central nervous system, this peptide induces analgesia, gastric acid secretion, and taste inhibition. Small amounts of CT were administered to animals and humans without toxic effects. Salmon CT is clinically used to treat bone disorders such as Paget's disease, malignant hypercalcemia and osteoporosis. Intra-venous calcitonin disappears rapidly from the blood and is primarily excreted in the urine. The main sites of localization of administered CT are kidneys, liver and long bone epiphyses.
Množství cirkulujícího CT jsou považována za markér některých typů nebo stavů rakoviny, například medulámího karcinomu štítné žlázy, rakoviny malých buněk plic, karcinoidů, rakoviny prsu a gastrointestinální rakoviny. Vysoce afinitní CT receptory byly identifikovány v lymfatických buňkách, lidských buněčných liniích rakoviny plic, lidských buněčných liniích rakoviny prsu a v primární tkáni rakoviny prsu. Findlay a spol., Biochem. J. 1981, 196, 513 až 520, popisují, že CT receptory jsou nadexprimovány v některých buněčných liniích rakoviny prsu, plic, vaječníků a lymfatických žláz.Circulating CT levels are considered to be a marker of some types or conditions of cancer, such as medullary thyroid cancer, small cell lung cancer, carcinoids, breast cancer, and gastrointestinal cancer. High affinity CT receptors have been identified in lymphatic cells, human lung cancer cell lines, human breast cancer cell lines, and in primary breast cancer tissue. Findlay et al., Biochem. J. 1981, 196, 513-520, disclose that CT receptors are overexpressed in some breast, lung, ovarian and lymphatic cancer cell lines.
Sekvence aminokyselin CT některých druhů (člověk, losos a úhoř) jsou uvedeny níže:The amino acid sequences of CTs of some species (human, salmon and eel) are listed below:
hCT CGNLSTCMLGTYTQDFNKFHTFPQTAIGVG.AP.amid (sekv. id. č. 1), cCT CSNLSTCVLGKLSQELHKLQTYPRTNTGSG.TP.amid (sekv. id. č. 2), eCT CSNLSTCVLGKLSQELHKLQTYPRTDVGAGTP.amid (sekv. id. č. 3) (kde jednopísmenové zkratky aminokyselin znamenají tak, jak je uvedeno v Zubay: Biochemistry, druhé vydání, MacMillan Publishing, New York 1988, str. 33, a kde podtržené aminokyseliny mezi dvěma cysteinovými zbytky v aminové koncové části peptidu znamenají disulfidovou vazbu). U těchto druhů je zachováno devět zbytků, zahrnující karboxylový koncový prolinový amid a disulfidem vázané cysteinové zbytky v polohách 1 a 7. Lososový a úhoří CT jsou účinnější než lidský CT jak in vitro tak in vivo.hCT CGNLSTCMLGTYTQDFNKFHTFPQTAIGVG.AP.amid (SEQ ID NO: 1), cCT CSNLSTCVLGKLSQELHKLQTYPRTNTGSG.TP.amid (SEQ ID NO: 2), eCT CSNLSTCVLGKLSQ amino acid sequence SEQ ID NO: 3). are as set forth in Zubay: Biochemistry, Second Edition, MacMillan Publishing, New York 1988, p. 33, and wherein the underlined amino acids between the two cysteine residues in the amino terminal portion of the peptide represent a disulfide bond). Nine residues are retained in these species, including the carboxyl terminal proline amide and disulfide-linked cysteine residues at positions 1 and 7. Salmon and eel CT are more effective than human CT both in vitro and in vivo.
Byly vyvinuty analogy CT peptidu, u nichž je chemicky labilní disulfid nahražen stabilními vazbami atom uhlíku-atom uhlíku vytvořenými mezi 2-aminokorkovou kyselinou, jak je popsáno v USA patentu č. 4 086 221. CT analogy, u nichž jsou vynechány oblasti aminového konce, střední oblast nebo karboxylový konec molekuly, vykazují pouze slabé navázání na CT receptory. Mezi zbytky 8 a 22 CT molekuly lze provést mnoho substitucí aminokyselin, takže se generují biologicky aktivní CT ana······ · · ·· · · • · · ·· · · ···· ··· · · · · · · • · · · · · · ······ • · · · ·· · · ·· «· ··· ··· ·· 44 logy. Některé CT analogy pouze s minimální sekvenční homologii s přírodní formou CT mají biologickou aktivitu podobnou aktivitě lososového CT. Upravené CT peptidové deriváty (jako je Cbz-LHKLQY-OMe) si také zachovává podstatnou vazebnou aktivitu na receptor.CT peptide analogues have been developed in which the chemically labile disulfide is replaced by stable carbon-carbon bonds formed between the 2-aminocork acid, as described in U.S. Patent No. 4,086,221. CT analogs in which the amino terminus regions are omitted, the middle region or the carboxyl terminus of the molecule show only weak binding to CT receptors. Many amino acid substitutions can be made between residues 8 and 22 of the CT molecule, so that biologically active CTs are generated, and they are generated. 44 logos. Some CT analogs with only minimal sequence homology to the natural form of CT have biological activity similar to that of salmon CT. Modified CT peptide derivatives (such as Cbz-LHKLQY-OMe) also retain substantial receptor binding activity.
Jelikož nádory mohou exprimovat nebo nadexprimovat různé receptory, pro dosažení optimálních diagnostických a terapeutických modalit proti rakovině jsou potřeba rozmanitá radiodiagnostická a radioterapeutická činidla.Since tumors can express or overexpress various receptors, a variety of radiodiagnostic and radiotherapeutic agents are required to achieve optimal diagnostic and therapeutic modalities for cancer.
Podstata vynálezuSUMMARY OF THE INVENTION
CT receptory na povrchu buněk plicního a vaječníkového adenokarcinomu, rakoviny prsu a lymfomů lze využít jako markéry pro umístění, identifikaci a léčení těchto nádorů in vivo. Autoři předloženého vynálezu poprvé vyvinuli malé, syntetické sloučeniny, včetně peptidů odvozených od CT, které mají schopnost vázat se s vysokou afinitou na CT receptory a jsou příznivými farmakokinetiky, čímž umožňují účinnou in vivo lokalizaci diagnostických a terapeutických činidel v místech nádorů. Tato reakční činidla podle vynálezu poskytují podklad pro rychlé, cenově efektivní, neinvazivní diagnostické zobrazovací postupy, které jsou užitečné pro detekci nádorů, zjištění stavu onemocnění a vyhodnocení metastatického rozšíření nádorů, charakterizovaných expresí nebo nadexpresí CT receptorů. Reakční činidla podle vynálezu poskytují také podklad pro vyhodnocení terapeutické účinnosti dalších modalit léčení, například umístění CT-receptor exprimujících nádorových buněk s následující chirurgickou terapií, radioterapií nebo chemoterapií. Reakční činidla podle vynálezu se mohou používat také jako cílové částice pro místně řízenou radioterapii.CT receptors on the surface of lung and ovarian adenocarcinoma cells, breast cancer and lymphoma can be used as markers for the location, identification and treatment of these tumors in vivo. The present inventors have for the first time developed small, synthetic compounds, including CT-derived peptides, which have the ability to bind with high affinity to CT receptors and are favorable pharmacokinetics, thereby allowing efficient in vivo localization of diagnostic and therapeutic agents at tumor sites. These reagents of the invention provide the basis for rapid, cost-effective, non-invasive diagnostic imaging procedures that are useful for detecting tumors, detecting disease states, and evaluating metastatic spread of tumors, characterized by the expression or overexpression of CT receptors. The reagents of the invention also provide a basis for evaluating the therapeutic efficacy of other treatment modalities, for example, the placement of CT-receptor expressing tumor cells followed by surgical therapy, radiotherapy or chemotherapy. The reagents of the invention may also be used as target particles for topical radiotherapy.
Tento vynález poskytuje reakční činidla vázající CT receptor, která obsahují sloučeniny vázající se na CT receptor, s výhodou CT peptidy, CT deriváty nebo CT analogy, které jsou kovalentně napojeny na chelátor radioaktivního kovu. Sloučneiny, která vážou CT receptor, používaná v reakčních činidlech podle vynálezu, mají molekulovou hmotnost menší než 10 000. V některých provedeních jsou reakční činidla • · · podle vynálezu charakterizována jako peptidy, díky přítomnosti peptidové vazby buď v té části reakčního činidla, které se váže na CT receptor, nebo přítomností peptidové vazby v chelátoru radioaktivního kovu. Reakční činidla podle vynálezu mají takovou afinitu vázat se na CT receptor, která není menší než desetina afinity radioaktivním jodem označeného přírodního CT na uvedený receptor, jestliže se srovnávají ve standardizovaných testech, jako jsou testy, které jsou níže popsány v příkladu 4. Ve výhodných provedeních mají reakční činidla podle předloženého vynálezu vazebnou afinitu k CT receptorů stejnou nebo vyšší než přírodní CT nebo radioaktivně označené části přírodního CT na uvedený receptor, jestliže se srovnávají v uvedeném standardizovaném testu.The present invention provides CT receptor binding reagents comprising CT receptor binding compounds, preferably CT peptides, CT derivatives or CT analogs that are covalently linked to a radioactive metal chelator. The CT receptor binding compounds used in the reagents of the invention have a molecular weight of less than 10,000. In some embodiments, the reagents of the invention are characterized as peptides, due to the presence of a peptide bond in either part of the reagent that it binds to the CT receptor, or by the presence of a peptide bond in a radioactive metal chelator. The reagents of the invention have an affinity for binding to a CT receptor that is not less than one-tenth the affinity of radioactive iodine labeled natural CT for said receptor when compared in standardized assays such as those described in Example 4 below. In preferred embodiments the reagents of the present invention have a binding affinity for CT receptors equal to or higher than the natural CT or radiolabeled portions of the natural CT to said receptor when compared in said standardized assay.
Radiofarmaceutická činidla podle vynálezu se mohou používat jako místně specifická diagnostická nebo terapeutická činidla. Jestliže jsou označena techneciem-99m, jodem-123 a jodem-131, reakční činidla podle vynálezu se mohou používat jako scintigrafická zobrazovací činidla. Jestliže jsou označena magnetickým, paramagnetickým, supermagnetickým nebo superparamagnetickým kovem, reakční činidla podle vynálezu se mohou používat jako magnetická resonanční kontrastní činidla. Jestliže jsou označena cytotoxickými radionuklidy, reakční činidla podle vynálezu se mohou používat pro místně směrovanou radioterapii. Tento vynález poskytuje také farmaceutické prostředky, které obsahují radioaktivně označené sloučeniny vázající CT receptor podle vynálezu a farmaceuticky přijatelný nosič. Podle vynálezu se získávají také způsoby výroby reakčních činidel vázajících CT receptor podle vynálezu a jejich radioaktivně označených provedení.The radiopharmaceutical agents of the invention may be used as site-specific diagnostic or therapeutic agents. When labeled with technetium-99m, iodine-123 and iodine-131, the reagents of the invention can be used as scintigraphic imaging agents. When labeled with a magnetic, paramagnetic, supermagnetic or superparamagnetic metal, the reagents of the invention can be used as magnetic resonance contrast agents. When labeled with cytotoxic radionuclides, the reagents of the invention may be used for site-directed radiotherapy. The present invention also provides pharmaceutical compositions comprising the radiolabeled CT receptor binding compounds of the invention and a pharmaceutically acceptable carrier. Also provided by the invention are methods for making the CT receptor binding reagents of the invention and radiolabelled embodiments thereof.
Tento vynález poskytuje také sestavy pro přípravu radioaktivně označených sloučenin vázajících CT receptor z reakčních činidel podle vynálezu. Sestavy podle vynálezu obsahují zatavenou nádobku, která obsahuje předem stanovené množství reakčního činidla podle vynálezu a popřípadě dostatečné množství redukčního činidla pro radioaktivní označení reakčního činidla.The invention also provides kits for preparing radiolabeled CT receptor binding compounds from the reagents of the invention. The kits of the invention comprise a sealed container containing a predetermined amount of the reagent of the invention and optionally a sufficient amount of a reducing agent to radiolabel the reagent.
« · »«·»
Tento vynález poskytuje způsoby použití radioaktivně označených reakčních činidel vázajících CT receptor podle vynálezu pro diagnosu a terapii. V jednom provedení se získávají způsoby pro použití reakčních činidel podle vynálezu v označené formě pro zobrazování míst v těle savce získáním zobrazení iv vivo. Tyto způsoby obsahují stupně podávání účinného diagnostického množství označených reakčních činidel podle vynálezu a detegování značky umístěné v místě těla savce.The present invention provides methods of using the radiolabeled CT receptor binding reagents of the invention for diagnosis and therapy. In one embodiment, methods are provided for using the reagents of the invention in a labeled form for imaging sites in the mammalian body by obtaining an IV vivo imaging. These methods comprise the steps of administering an effective diagnostic amount of labeled reagents of the invention and detecting a marker positioned at the site of the mammal's body.
Tento vynález poskytuje také způsoby zmírnění onemocnění, která je charakterizováno expresí nebo nadexpresí CT receptorů, vyznačujících se tím, že zahrnují stupeň podávání terapeuticky účinného množství radioaktivně označených reakčních činidel vázajících CT receptor podle vynálezu živočichovi.The present invention also provides methods for alleviating a disease characterized by the expression or overexpression of CT receptors, comprising the step of administering to an animal a therapeutically effective amount of a radiolabeled CT receptor binding reagent of the invention.
Další aspekty a výhody předloženého vynálezu jsou zřejmé z následujícího podrobnějšího popisu výhodných provedení uvedených níže.Other aspects and advantages of the present invention will become apparent from the following detailed description of the preferred embodiments set forth below.
Podrobný popis vynálezu: Předložený vynález poskytuje reakční činidla vázající CT receptory, která jsou užitečná pro přípravu farmaceutických činidel vázajících CT receptor pro diagnosu a terapii. Pro účely tohoto vynálezu pojem sloučenina vázající CT receptor je zamýšlena tak, že zahrnuje přirozeně se vyskytující CT, fragmenty CT, analogy CT a deriváty CT, které se specificky vážou na CT receptor exprimovaný rozmanitými typy buněk rozpoznávanými zručnými odborníky z oblasti techniky. Sloučeniny, které jsou navrženy tak, že napodobují vlastnosti CT vázajícího receptor jsou také zahrnuty v této definici a jsou zahrnuty v tomto vynálezu.DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION The present invention provides CT receptor binding reagents that are useful for the preparation of pharmaceutical CT receptor binding agents for diagnosis and therapy. For purposes of this invention, the term CT receptor binding compound is intended to include naturally occurring CT, CT fragments, CT analogs and CT derivatives that specifically bind to the CT receptor expressed by a variety of cell types recognized by those skilled in the art. Compounds that are designed to mimic the properties of a CT binding receptor are also included in this definition and are included in the invention.
Pro účely tohoto vynálezu pojem vazebná afinita CT receptoru je zamýšlen tak, že znamená vazebnou afinitu měřenou jakýmkoliv způsobem známým odborníkovi z oblasti techniky, mezi než patří, mimo jiné, ty způsoby, které měří vazebnou afinitu disociační konstantou, inhibiční konstantou nebo hodnotou IC50.For purposes of this invention, the term CT receptor binding affinity is intended to mean binding affinity measured by any method known to one skilled in the art, including, but not limited to, those that measure binding affinity by dissociation constant, inhibitory constant, or IC 50 value.
Pojem který má vazebnou afinitu na receptor CT alespoň jednu desetinu afinity radioaktivní jodem označeného CT na uvedený receptor je myšlen tak, že • · · · • * · · • · · · • · · · · · • « • · · · ♦ · · « · · · · • · · * « · · · · • · · · · • · · · · · · znamená, že disociační konstanta (Kd) reakčního činidla není menší než desetina Kd radioaktivním jodem označeného CT, jestliže se měří přímým navázáním CT receptorů nebo kompetitivním inhibičním testem CT receptorů, nebo že inhibiční konstanta (Kj) nebo IC50 reakčního činidla není desetkrát větší než radioaktivně označeného CT, jestliže se měří kompetitivním inhibičním testem CT receptorů.A term having a binding affinity for the CT receptor of at least one-tenth of the affinity of a radioactive iodine labeled CT to said receptor is meant that the term " CT " Means that the dissociation constant (Kd) of the reagent is not less than one-tenth of the Kd of the radiolabelled CT, when measured by direct binding of CT receptors or by competitive inhibition of CT receptors, or that the inhibitory constant (K i) or IC 50 of the reagent is not ten times greater than radiolabeled CT when measured by competitive inhibition of CT receptors.
Pojem který má vazebnou afinitu na receptor CT stejnou nebo větší než přírodní CT nebo než radioaktivním jodem označené částice CT na uvedený CT receptor je myšlen tak, že zahrnuje taková reakční činidla, která mají disociační konstantu (Kd) stejnou nebo větší než je disociační konstanta neoznačeného CT nebo radioaktivním jodem označeného CT, jestliže se měří přímým navázáním CT receptoru nebo kompetitivním inhibičním testem CT receptorů. Tento pojem lze interpretovat také tak, že zahrnuje reakční činidla, která mají inhibiční konstantu (K) nebo IC50 reakčního činidla stejnou nebo menší než jsou u přírodního CT nebo u radioaktivně označeného CT, jestliže se měří kompetitivním inhibičním testem CT receptorů.A term having a CT receptor binding affinity equal to or greater than natural CT or radioactive iodine labeled CT particles to said CT receptor is meant to include those reagents having a dissociation constant (K d) equal to or greater than the dissociation constant of unlabeled CT or radioactive iodine labeled CT when measured by direct CT receptor binding or competitive CT receptor inhibition assay. The term can also be interpreted to include reagents having an inhibition constant (K) or IC 50 of the reagent equal to or less than that of natural CT or radiolabeled CT when measured by a competitive CT receptor inhibition assay.
Podle tohoto vynálezu mají reakční činidla podle vynálezu vazebnou afinitu k CT receptorů alespoň desetkrát větší než je afinita radioaktivně označeného přírodního CT na uvedený receptor, jestliže se srovnávají ve standardizováním testu, jak je popsáno níže. Ve výhodných provedeních mají reakční činidla podle vynálezu vazebnou afinitu k CT receptorů stejnou nebo větší než přírodní CT nebo než radioaktivně označené části přírodního CT pro uvedený receptor, jestliže se srovnávají v uvedeném standardizovaném testu.According to the invention, the reagents of the invention have a binding affinity for CT receptors of at least ten times greater than the affinity of radiolabeled natural CT for said receptor when compared in standardizing the assay as described below. In preferred embodiments, the reagents of the invention have a binding affinity for CT receptors equal to or greater than the natural CT or radiolabelled portions of the natural CT for said receptor when compared in said standardized assay.
Disociační konstanty nebo vazebné inhibiční konstanty radioafarmaceutických činidel podle vynálezu vzhledem k CT receptorů, stejně jako srovnání afinity nebo avidity takového navázání s navázáním 125l-označeného CT samotného lze stanovovat použitím známých způsobů, jako jsou ty, které jsou uvedeny v Receptors, A Quantitative Approach, A. Levitzki, The Benjamin/Cummings Publishing Company (Kalifornie 1984). S výhodou se standardizované testy navázání CT receptorů, jako • · » · · ·The dissociation constants or binding inhibition constants of the radiopharmaceutical agents of the invention with respect to CT receptors, as well as comparing the affinity or avidity of such binding with binding of 125 I -labeled CT alone can be determined using known methods such as those listed in Receptors, A Quantitative Approach , A. Levitzki, The Benjamin, Cummings Publishing Company (California 1984). Preferably, standardized CT receptor binding assays, such as
I · · · ·· · ·· · • · ·» · · · ··♦· jsou testy uvedené níže v příkladu 4, používají pro měření vazebné afinity reakčních činidel podle vynálezu na CT receptor.The assays set forth in Example 4 below use the CT receptor to measure the binding affinity of the reagents of the invention.
Vedle sloučenin vázajících CT receptor, reakční činidla získaná tímto vynálezem obsahují chelátor radioaktivního kovu, který je kovalentně napojen na sloučeninu takovým způsobem, že vazebná specifičnost sloučeniny na CT receptor není v podstatě změněna. Jakýkoliv radioaktivním kovem označený chelátor se může kovalentně navázat na sloučeninu vázající CT receptor, takže se získá reakční činidlo podle vynálezu. Například sloučenina vázající CT receptor, s výhodou peptid, může být kovalentně napojena na chelátor obecného vzorceIn addition to the CT receptor binding compounds, the reagents obtained by the present invention comprise a radioactive metal chelator that is covalently attached to the compound in such a way that the binding specificity of the compound to the CT receptor is not substantially altered. Any radiolabeled chelator may be covalently bound to a CT receptor binding compound to provide a reagent of the invention. For example, a CT receptor binding compound, preferably a peptide, can be covalently linked to a chelator of the formula
C(pgp)s-(aa)-C(pgp)s, v němž (pgp)s znamená atom vodíku nebo chránící skupinu thiolu a (aa) znamená jakoukoliv primární a- nebo β-aminokyselinu neobsahující thiolovou skupinu. Ve výhodném provedení tato aminokyselina znamená glycin.C (pgp) s - (aa) -C (pgp) s wherein (pgp) s is a hydrogen atom or a thiol protecting group and (aa) is any non-thiol-containing primary α- or β-amino acid. In a preferred embodiment, the amino acid is glycine.
Jiný příklad - chelátor radioaktivního kovu užitečný v reakčních činidlech podle vynálezu obsahuje skupinu, která obsahuje jediný thiol, obecného vzorceAnother example - a radioactive metal chelator useful in the reagents of the invention contains a single thiol group of the formula
A-CZ(B)-{C(RaRb)}„-X, v němž A znamená atom vodíku, skupinu HOOC, H2NOC, (peptid)-NHOC, (peptid)-OOC-, R62NCO nebo Rd, B znamená atom vodíku, skupinu SH, -NHRC, -NÍRyCpeptid) nebo Rd, Z znamená atom vodíku nebo Rd, X znamená skupinu SH, -NHRC, -N(Rc)-(peptid) nebo Rd, Ra, Rb, Rc a Rd nezávisle znamenají atom vodíku nebo přímý nebo rozvětvený řetězec nebo cyklický nižší alkyl, n znamená číslo 0, 1 nebo 2, Rc znamená alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, aminokyselinu nebo peptid obsahující 2 až 10 aminokyselin a 1) jestliže B znamená skupinu -NHRC nebo -NÍR^-Ípeptid), X znamená skupinu SH a n znamená číslo 1 nebo 2, 2) jestliže X znamená skupinu -NHRC nebo -N(Rc)-(peptid), B znamená skupinu SH a n znamená • · ·*· · « · · · · * · · · · · • 9 9 9 9 • · 999 999A-CZ (B) - {C (R a R b)} "- X wherein A is H, HOOC, H 2 NOC, (peptide) -NHOC, (peptide) -OOC-, R 6 2 NCO or R d , B is hydrogen, SH, -NHR C , -RNC (peptide) or R d , Z is hydrogen or R d , X is SH, -NHR C , -N (R c ) - (peptide) or R d , R a , R b , R c and R d independently represent a hydrogen atom or a straight or branched chain or cyclic lower alkyl, n is 0, 1 or 2, R c is an alkyl of 1 to 4 carbon atoms, an amino acid or a peptide of 2 to 10 amino acids and 1) when B is -NHR C or -NR- (peptide), X is SH and n is 1 or 2, 2) if X is -NHR C or -N (R) c ) - (peptide), B stands for SH group and n stands for 9 9 9 9 999 999 999
9 99 9
9 9 9 9 9 číslo 1 nebo 2, 3) jestliže B znamená atom vodíku nebo Rd, A znamená skupinu HOOC, H2NOC, (peptid)-NHOC nebo (peptid)-OOC, X znamená skupinu SH a n znamená číslo 0 nebo 1, 4) jestliže A znamená atom vodíku nebo Rd, potom jestliže B znamená skupinu SH, X znamená skupinu -NHRC nebo -N(R°)-(peptid), a jestliže X znamená skupinu SH, B znamená skupinu -NHRC nebo -N(Rc)-(peptid) a n znamená číslo 1 nebo 2, 5) jestliže X znamená atom vodíku nebo Rd, A znamená skupinu HOOC, H2NOC, (peptid)-NHOC nebo (peptid)-OOC a B znamená skupinu SH, 6) jestliže Z znamená methyl, X znamená methyl, A znamená skupinu HOOC, H2NOC, (peptid)-NHOC nebo (peptid)-OOC, B znamená skupinu SH a n znamená číslo 0 a 7) jestliže B znamená skupinu SH, X neznamená skupinu SH, a jestliže X znamená SH a B neznamená skupinu SH.9 9 9 9 9 number 1 or 2, 3) if B is hydrogen or R d , A is HOOC, H2NOC, (peptide) -NHOC or (peptide) -OOC, X is SH and n is 0 or 1 (4) if A represents a hydrogen atom or R d , then if B represents a SH group, X represents a -NHR C group or -N (R °) - (peptide), and if X represents a SH group, B represents a -NHR C group or -N (R c ) - (peptide) and n is 1 or 2, 5) when X is hydrogen or R d , A is HOOC, H2NOC, (peptide) -NHOC or (peptide) -OOC and B is SH, 6) when Z is methyl, X is methyl, A is HOOC, H 2 NOC, (peptide) -NHOC or (peptide) -OOC, B is SH and n is 0 and 7) if B is SH, X is not SH, and when X is SH and B is not SH.
Výhodným provedením tohoto chelátoru radioaktivního kovu je sloučenina obecného chemického vzorceA preferred embodiment of the radioactive metal chelator is a compound of the general chemical formula
R1-CO-(aminokyselina)1-(aminokyselina)2-Z, při čemž každá (aminokyselina)1 a (aminokyselina)2 nezávisle znamená jakoukoliv primární a- nebo β-aminokyselinu, která neobsahuje thiolovou skupinu, Z znamená skupinu obsahující thiol, která znamená cystein, homocystein, isocystein, penicilamin, 2-merkaptoethylamin nebo 3-merkaptoethylamin, a R1 znamená nižší alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, aminokyselinu nebo peptid obsahující 2 až 10 aminokyselin. Jestliže Z znamená cystein, homocystein, isocystein nebo penicilamin, karbonylová skupina uvedené části je kovalentně navázána na hydroxylovou skupinu, skupinu NR3R4, kde R3 a R4 nezávisle znamenají atom vodíku nebo nižší alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, aminokyselinu nebo petid obsahující 2 až 10 aminokyselin, neboR 1 -CO- (amino acid) 1- (amino acid) 2 -Z, wherein each (amino acid) 1 and (amino acid) 2 independently represents any primary α- or β-amino acid not containing a thiol group, Z represents a thiol group which is cysteine, homocysteine, isocysteine, penicillamine, 2-mercaptoethylamine or 3-mercaptoethylamine, and R 1 is C 1 -C 4 lower alkyl, amino acid or peptide of 2 to 10 amino acids. When Z is cysteine, homocysteine, isocysteine or penicillamine, the carbonyl group of said moiety is covalently bonded to a hydroxyl group, NR 3 R 4 , wherein R 3 and R 4 independently represent hydrogen or C 1 -C 4 lower alkyl, amino acid or a petid of 2 to 10 amino acids, or
Y-(aminokyselina)1-(aminokyselina)2-NHR2, kde Y znamená skupinu obsahující thiol, která znamená cystein, homocystein, isocystein, penicilamin, 2-merkaptoacetát nebo 3-merkaptopropionát, každá (aminokyse«···*· « 9 99 9 9Y- (amino acid) 1- (amino acid) 2 -NHR 2 , wherein Y is a thiol-containing group that is cysteine, homocysteine, isocysteine, penicillamine, 2-mercaptoacetate or 3-mercaptopropionate, each (amino acid) 9 98 9 9
9 9 9 · 9 9 · « · · ··« · · 9 9 9 9 • · 9 9 9 9 9 99 9 9 99 • 999 9 9 9 99 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 99 99 999 9 9 9 9
99 99 9 ·9· 99 99 lina)1 a (aminokyselina)2 nezávisle znamená jakoukoliv primární a- nebo β-aminokyselinu, která neobsahuje thiolovou skupinu, a R2 znamená atom vodíku nebo nižší alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, aminokyselinu nebo peptid obsahující 2 až 10 aminokyselin. Jestliže Y znamená cystein, homocystein, isocystein nebo penicilamin, aminová skupina uvedené části je kovalentně navázána na atom vodíku, aminokyselinu nebo peptid obsahující 2 až 10 aminokyselin.99a 9 · 99a 99a) 1a (amino acid) 2 independently means any primary α- or β-amino acid that does not contain a thiol group, and R 2 is hydrogen or C 1 -C 4 lower alkyl, amino acid or a peptide of 2 to 10 amino acids. When Y is cysteine, homocysteine, isocysteine or penicillamine, the amino group of said moiety is covalently attached to a hydrogen atom, an amino acid or a peptide of 2 to 10 amino acids.
V příslušných provedeních tohoto aspektu vynálezu je vzorec tohoto chelátoru radioaktivních kovů vybrán ze skupiny, která sestává ze sloučenin následujících obecných vzorcůIn particular embodiments of this aspect of the invention, the formula of the radioactive metal chelator is selected from the group consisting of compounds of the following formulas
-(aminokyselina)1-(aminokyselina)2-{A-CZ(B)-{C(R1R2)}n-X},- (amino acid) 1- (amino acid) 2- {A-CZ (B) - {C (R 1 R 2 )} nX},
-{A-CZ(B)-{C(R1R2)}n-X}-(aminokyselina)1-(aminokyselina)2,- {A-CZ (B) - {C (R 1 R 2 )} nX} - (amino acid) 1- (amino acid) 2 ,
-(primární αω- nebo B,a>-diaminokyselina)-(aminokyselina)1-{A-CZ(B)-{C(R1R2)}n-X}-a- (primary αω- or B, a> -diamino acid) - (amino acid) 1- {A-CZ (B) - {C (R 1 R 2 )} n -X} -a
-{A-CZ(B)-{C(R1R2)}n-X}-(aminokyselina)1-(primámí α,β- nebo α,γ-diaminokyselina), při čemž každá (aminokyselina)1 a (aminokyselina)2 nezávisle znamená jakoukoliv v přírodě se vyskytující, modifikovanou, substituovanou nebo pozměněnou a- nebo β-aminokyselinu, která neobsahuje thiolovou skupinu, A znamená atom vodíku, skupinu HOOC, H2NOC, (aminokyselina nebo peptid)-NHOC, (aminokyselina nebo peptid)-OOC- nebo R4, B znamená atom vodíku, skupinu SH, -NHR3, -N(R3)-(aminokyselina nebo peptid) nebo R4, Z znamená atom vodíku nebo R4, X znamená skupinu SH, -NHR3, -NtR^-íaminokyselina nebo peptid) nebo R4, R1, R2, R3 a R4 nezávisle znamenají atom vodíku nebo přímý nebo rozvětvený řetězec nebo cyklický nižší alkyl, n znamená číslo 0, 1 nebo 2, (peptid) znamená peptid ze 2 až 10 aminokyselin, a 1) jestliže B znamená skupinu -NHR3 nebo -NÍRVíaminokyselina nebo peptid), X znamená skupinu SH a n znamená číslo 1 nebo 2, 2) jestliže X znamená skupinu -NHR3 nebo -NÍR^-íaminokyselina nebo peptid), B znamená skupinu SH a n znamená číslo 1 nebo 2, 3) jestliže B znamená atom vodíku nebo R4, A znamená skupinu HOOC, H2NOC, (aminokyselina nebo peptid)-NHOC nebo- {A-CZ (B) - {C (R 1 R 2 )} nX} - (amino acid) 1- (primary α, β- or α, γ-diamino acid), each of which (amino acid) 1 a (amino acid) 12 independently represents any naturally occurring, modified, substituted or altered α- or β-amino acid that does not contain a thiol group, A represents a hydrogen atom, a HOOC, H2NOC, (amino acid or peptide) -NHOC, (amino acid or peptide) -OOC- or R 4 , B is hydrogen, SH, -NHR 3 , -N (R 3 ) - (amino acid or peptide) or R 4 , Z is hydrogen or R 4 , X is SH, -NHR 3 , -NtR 4 -amino acid or peptide) or R 4 , R 1 , R 2 , R 3 and R 4 independently represent a hydrogen atom or a straight or branched chain or cyclic lower alkyl, n is 0, 1 or 2, (peptide 1) is a peptide of 2 to 10 amino acids, and 1) when B is -NHR 3 or -R (N-amino acid or peptide), X is SH and n is 1 or 2 (2) when X is -NHR 3 or -NR (amino acid or peptide), B is SH and n is 1 or 2; 3) if B is hydrogen or R 4 , A is HOOC, H2NOC, ( amino acid or peptide) -NHOC or
9 999 • 9 (aminokyselina nebo peptid)-OOC, X znamená skupinu SH a n znamená číslo 0 nebo 1,4) jestliže A znamená atom vodíku nebo R4, potom jestliže B znamená skupinu SH, X znamená skupinu -NHR3 nebo -N(R3)-(aminokyselina nebo peptid), a jestliže X znamená skupinu SH, B znamená skupinu -NHR3 nebo -NíR^Xaminokyselina nebo peptid) a n znamená číslo 1 nebo 2, 5) jestliže X znamená atom vodíku nebo R4, A znamená skupinu HOOC, H2NOC, (aminokyselina nebo peptid)-NHOC nebo (aminokyselina nebo peptid)-OOC a B znamená skupinu SH, 6) jestliže Z znamená methyl, X znamená methyl, A znamená skupinu HOOC, H2NOC, (aminokyselina nebo peptid)-NHOC nebo (aminokyselina nebo peptid)-OOC, B znamená skupinu SH a n znamená číslo 0, a 7) jestliže B znamená skupinu SH, X neznamená skupinu SH a jestliže X znamená SH a B neznamená skupinu SH.9,999,9 (amino acid or peptide) -OOC, X is SH (and n is 0 or 1,4) if A is hydrogen or R 4 , then if B is SH, X is -NHR 3 or -N (R 3 ) - (amino acid or peptide), and when X is SH, B is -NHR 3 or -N (R 4 ) (amino acid or peptide) and n is 1 or 2, 5) if X is hydrogen or R 4 , A is HOOC, H 2 NOC, (amino acid or peptide) -NHOC or (amino acid or peptide) -OOC and B is SH, 6) when Z is methyl, X is methyl, A is HOOC, H 2 NOC, (amino acid or peptide) -NHOC or (amino acid or peptide) -OOC, B is SH and n is 0, and 7) when B is SH, X is not SH and when X is SH and B is not SH.
Mezi specifická výhodná provedení tohoto aspektu vynálezu patří chelátory raioaktivního kovu vybrané ze skupiny sestávající ze sloučenin následujících vzorců -Gly-Gly-Cys-, Cys-Gly-Gly-, -Gly-Gly-Cys-, -(s-Lys)-Gly-Cys-, (6-Om)-Gly-Cys-, -(Y-Dab)-Gly-Cys-, -(B-Dap)-Lys-Cys- a -(B-Dap)-Gly-Cys- (V těchto vzorcích je tomu třeba rozumět tak, že ε-Lys znamená lysinový zbytek, ve kterém ε-aminová skupina, spíše než typická α-aminová skupina, je kovalentně navázána na karboxylovou skupinu přilehlé aminokyseliny za vzniku peptidové vazby; δ-Om znamená omithinový zbytek, v němž δ-aminová skupina, spíše než typická α-aminová skupina, je kovalentně navázána na karboxylovou skupinu přilehlé aminokyseliny za vzniku peptidové vazby; γ-Dab znamená zbytek 2,4-diaminomáselné kyseliny, v níž je γ-amino skupina kovalentně navázána na karboxylovou skupinu přilehlé aminokyseliny za vzniku peptidové vazby; β-Dap znamená zbytek 1,3-diaminopropionové kyseliny, v níž je β-aminová skupina kovalentně navázána na karboxylovou skupinu přilehlé aminokyseliny za vzniku peptidové vazby.).Specific preferred embodiments of this aspect of the invention include radioactive metal chelators selected from the group consisting of compounds of the following formulas -Gly-Gly-Cys-, Cys-Gly-Gly-, -Gly-Gly-Cys-, - (s-Lys) -Gly -Cys-, (6-Om) -Gly-Cys-, - (Y-Dab) -Gly-Cys-, - (B-Dap) -Lys-Cys- and - (B-Dap) -Gly-Cys- (In these formulas, it is to be understood that ε-Lys means a lysine residue in which an ε-amino group, rather than a typical α-amino group, is covalently attached to the carboxyl group of an adjacent amino acid to form a peptide bond; δ-Om means an omithine residue in which the δ-amino group, rather than a typical α-amino group, is covalently attached to the carboxyl group of an adjacent amino acid to form a peptide bond, γ-Dab means a 2,4-diaminobutyric acid residue in which the γ-amino group is covalently linked to the carboxyl group of an adjacent amino acid to form a peptide bond, β-Dap means a 1,3-d residue aminopropionic acid in which the β-amino group is covalently linked to the carboxyl group of an adjacent amino acid to form a peptide bond.).
V jiném provedení chelátor raidoaktivního kovu reakčního činidla podle vynálezu znamená bisamino-bisthiolový chelátor obecného vzorceIn another embodiment, the raidoactive metal chelator of the reagent of the invention is a bisamino-bisthiol chelator of formula
NHNH
I (CRÁI (CRÁ
S-(pgp)s S- (pgp) p
99999999
9999
I 9 9 9 > 9 9 9I 9 9 9> 9 9 9
99· 99999 · 999
99
9 9 9 (cr2:9 9 9 (CR 2:
N-A-CO-peptidN-A-CO-peptide
I (CRÁI (CRÁ
S-(pgp)5 v němž každá R nezávisle znamená atom vodíku, methyl nebo ethyl, každé (pgp)s nezávisle znamená chránící skupinu thiolu nebo atom vodíku, m, n a p nezávisle znamenají číslo 2 nebo 3, A znamená lineární nebo cyklický nižší alkyl, aryl, heterocyklyl, jejich kombinaci nebo jejich substituované deriváty a X znamená peptid. Bisaminobisthiolový chelátor v tomto provedení podle vynálezu znamená také sloučeniny obecného vzorceS- (pgp) 5 wherein each R independently represents a hydrogen atom, methyl or ethyl, each (pgp) s independently represents a thiol protecting group or a hydrogen atom, m, n and p independently represent 2 or 3, A represents a linear or cyclic lower alkyl , aryl, heterocyclyl, a combination thereof, or substituted derivatives thereof, and X is a peptide. The bisaminobisthiol chelator in this embodiment of the invention is also a compound of formula
v němž každé R nezávisle znamená atom vodíku, methyl nebo ethyl, m, n, a p nezávisle znamenají číslo 2 nebo 3, A znamená lineární nebo cyklický nižší alkyl, aryl, heterocyklyl, jejich kombinace nebo jejich substituované deriváty, V znamená atom vodíku nebo skupinu CO-peptid, R' znamená atom vodíku nebo peptid, a v němž jestliže V znamená atom vodíku, R1 znamená peptid, a jestliže R' znamená atom vodíku, V znamená skupinu CO-peptid. Pro účely tohoto vynálezu chelatační částice, které mají tyto struktury, budou oznažovány jako částice BAT.wherein each R independently represents hydrogen, methyl or ethyl, m, n, and p independently represent 2 or 3, A represents linear or cyclic lower alkyl, aryl, heterocyclyl, combinations thereof or substituted derivatives thereof, V represents hydrogen atom or a group A CO-peptide, R 'is a hydrogen atom or a peptide, and wherein when V is a hydrogen atom, R 1 is a peptide, and when R' is a hydrogen atom, V is a CO-peptide group. For the purposes of the present invention, chelating particles having these structures will be referred to as BAT particles.
φφ ΦΦΦΦ • Φ φ · · φφ ΦΦΦΦ φφφ φ φ φφφφ φ φ φφ φ φ φ φφφφφφ • ΦΦΦ φφ φφ •Φ φφ φφφ φφφ φφ φφφ ΦΦΦΦ Φ · · · φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ • φ φ • • • • • φ
Chelátor radioaktivního kovu používaný v reakčním činidle podle vynálezu může být vybrán ze skupiny sestávající z diethylentriaminpentaoctové kyseliny (DTPA) obecného vzorce (HOOCCH2)2N(CR2)(CR2)N(CH2COOH)(CR2)(CR2)N(CH2COOH), v němž každé R nezávisle znamená atom vodíku, alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku nebo aryl a jeden R je kovalentně navázán na dvojmocný linker, ethylediamintetraoctové kyseliny (EDTA) obencého vzorce (HOOCCH2)2N(CR2)(CR2)N(CH2COOH), v němž R nezávisle znamená atom vodíku, alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku nebo aryl a jeden R je kovalentně navázán na dvojmocný linker,The radioactive metal chelator used in the reagent of the invention may be selected from the group consisting of diethylenetriaminepentaacetic acid (DTPA) of the general formula (HOOCCH 2 ) 2N (CR 2 ) (CR 2 ) N (CH 2 COOH) (CR 2 ) (CR 2 ) N (CH 2 COOH) wherein each R is independently hydrogen, C 1 -C 4 alkyl or aryl and one R is covalently attached to a divalent linker of ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) of the general formula (HOOCCH 2 ) 2N (CR 2) (CR 2) N (CH 2 ( COOH) wherein R is independently hydrogen, C 1 -C 4 alkyl or aryl and one R is covalently bonded to a divalent linker,
1,4,7,10-tetraazododekantetraoctové kyseliny, sloučeniny obecného vzorce1,4,7,10-tetraazododecantetraacetic acid, a compound of formula
(CRA(CRA
v němž n znamená číslo 2 nebo 3 a každé R nezávisle znamená atom vodíku, alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku nebo aryl a jeden R je kovalentně navázán na sloučeninu, která váže receptor kalcitoninu, a desferrioxaminu.wherein n is 2 or 3 and each R is independently hydrogen, C 1 -C 4 alkyl or aryl and one R is covalently bonded to a calcitonin receptor binding compound and desferrioxamine.
Většina radioaktivních kovů může být chelatována s reakčními činidly podle vynálezu, které zahrnují shora uvedené chelátory radioaktivních kovů.Most of the radioactive metals can be chelated with the reagents of the invention, including the above-mentioned chelating agents for radioactive metals.
• · ·*·· • · · • · · • · · * · ♦ · ·· ·· • · · · · · • · · · · • · ··· ··· • · ·· · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · ·
9 9· 999 · 99
Reakční činidla podle vynálezu mohou obsahovat také chelátor radioaktivního kovu vybraný ze skupiny sestávající zeThe reagents of the invention may also contain a radioactive metal chelator selected from the group consisting of
i) skupiny obecného vzorce I(i) groups of the general formula I
(l)a ii) skupiny obecného vzorce II(1) and (ii) a group of formula (II)
v nichž n, m a p znamenají nezávisle číslo 0 nebo 1, každé R' nezávisle znamená atom vodíku, nižší alkyl, hydroxyalkyl(se 2 až 4 atomy uhlíku) nebo alkoxyalkyl(se 2 až 4 atomy uhlíku) a každé R nezávisle znamená atom vodíku nebo R, kde R znamená substituovaný nebo nesubstituovaný nižší alkyl nebo fenyl, který neobsahuje thiolovou skupinu, a jedna ze skupin R nebo R' znamená L, kde L znamená vázací skupinu dvojvazného linkeru napojenou na chelátor kovu na cílové částici, pň čemž jestliže jedna skupina R' znamená L, NR2 znamená amin.wherein n, m and p are independently 0 or 1, each R 'independently is hydrogen, lower alkyl, hydroxyalkyl (C 2 -C 4) or alkoxyalkyl (C 2 -C 4), and each R independently is hydrogen or R, wherein R is a substituted or unsubstituted lower alkyl or phenyl not containing a thiol group, and one of R or R 'is L, wherein L is a divalent linker linking group attached to a metal chelator on the target particle, provided that one R group 1 is L, NR 2 is amine.
Ve výhodných provedeních L znamená lineární nebo větvený řetězec s 1 až 6 atomy uhlíku nebo cyklickou alkylovou skupinu, karboxylový ester, karboxamid, sulfonamid, ether, thioether, amin, alken, alkin, 1,2-, 1,3- nebo 1,4-napojený, popřípadě • 4 4444In preferred embodiments, L is a linear or branched chain of 1 to 6 carbon atoms or a cyclic alkyl group, carboxylic ester, carboxamide, sulfonamide, ether, thioether, amine, alkene, alkyne, 1,2-, 1,3- or 1,4 connected or 4 4444, respectively
4* 44 • · 4 4 4 · 4 4444 • 4 4 4 4 4 4 4 44 * 44 • 4 4 4 4 4444 4 4 4 4 4 4 4 4
44 4 44444444 • 444 44 44 • 4 44 444 4 44 44 44 substituovaný benzenový kruh, aminokyselinu, peptid se 2 až 10 aminokyselinami nebo jejich kombinace.44,444,444,444,444 44,444,444 44,444 substituted benzene ring, amino acid, peptide of 2 to 10 amino acids or combinations thereof.
Ve výhodných provedeních R znamená lineární, větvenou nebo cyklickou alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, skupinu -CqOCr-, -CqNHCr- nebo skupinu -CqSCr, kde q a r znamenají nezávisle čísla 1 až 5, při čemž součet q+r není větší než 6, alkyl(s 1 až 6 atomy uhlíku)-X, kde X znamená hydroxylovou skupinu, substituovanmý amin, quanidin, amidin, substituovanou thiolovou skupinu, karboxylovou kyselinu, esterovou, fosfátovou nebo sulfátovou skupinu, fenylovou skupinu nebo fenylovou skupinu substituovanou atomem halogenu, hydroxylem, substituovaným aminem, guanidinem, amidiniem, substituovaným thiolem, etherem, fosfátem nebo sulfátem, indolovou skupinu, heterocyklickou skupinu se 1 až 6 atomy uhlíku obsahující 1 až 3 atomy dusíku, kyslíku nebo síry nebo jejich kombinace.In preferred embodiments, R is a linear, branched or cyclic alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, -C q OC r -, -C q NHC r - or -C q SCr, wherein q and r are independently 1 to 5, at wherein the sum of q + r is not greater than 6, alkyl (C 1 -C 6) -X, wherein X is hydroxyl, substituted amine, quanidine, amidine, substituted thiol, carboxylic acid, ester, phosphate or sulfate, phenyl halo, hydroxyl, substituted amine, guanidine, amidinium, substituted thiol, ether, phosphate or sulfate, indole, C 1 -C 6 heterocyclic group containing 1 to 3 nitrogen, oxygen or sulfur atoms, or a combination thereof, or a phenyl group .
Podle tohoto vynálezu může mít chelátor radioaktivního kovu reakčního činidla vázajícího CT receptor obecný vzorec IIIAccording to the present invention, the radioactive metal chelator of the CT receptor binding reagent may have the formula III
R6 .o RSMR 6 .o R SM
Os^NH Hf 4~X. , 2 R3 NR'R2 HSAxis NH NH 4 -X. 2 R 3 NR'R 2 HS
OO
L-Z (lil) , v němž R1 a R2 nezávisle na sobě znamenají atom vodíku, nižší alkyl, hydroxyalkyl(se 2 až 4 atomy uhlíku) nebo alkoxyalkyl(se 2 až 4 atomy uhlíku), R3, R4, R5 a R6 nezávisle na sobě znamenají atom vodíku, substituovaný nebo nesubstituovaný nižší alkyl nebo fenyl, který neobsahuje thiolovou skupinu, R7 a R8 nezávisle na sobě znamenají atom vodíku, nižší alkyl, nižší hydroxyalkyl nebo nižší alkoxyalkyl, L znamená dvojvaznou skupinu kinekru a Z znamená CT peptid.LZ (III) wherein R 1 and R 2 independently of one another are hydrogen, lower alkyl, hydroxyalkyl (C 2 -C 4) or alkoxyalkyl (C 2 -C 4), R 3 , R 4 , R 5 and R 6 independently represent hydrogen, substituted or unsubstituted lower alkyl or phenyl, which does not contain a thiol group, R 7 and R 8 independently represent hydrogen, lower alkyl, lower hydroxyalkyl or lower alkoxyalkyl; L is a divalent group kinekru and Z is a CT peptide.
v « ·«· · • · · ♦ • 9 9 9 • 99 9 999in 9 9 9 99 99 999
99
Mezi další výhodné chelátory kovu podle tohoto vynálezu patří chelátory obecného vzorce IV , 7 ° oOther preferred metal chelators of the present invention include chelators of formula IV, 7 ° C
θγΝΗ HfAθγΝΗ HfA
R4“Zx, . 2 R3 NR'ÍsJ_r; (IV) v němž R1 a R2 nezávisle na sobě znamenají atom vodíku, nižší alkyl, hydroxyalkyl(se 2 až 4 atomy uhlíku) nebo alkoxyalkyl(se 2 až 4 atomy uhlíku), R3, R4, R5 a R6 nezávisle na sobě znamenají atom vodíku, substituovaný nebo nesubstituovaný nižší alkyl nebo fenyl, který neobsahuje thiolovou skupinu, a jedna ze skupinu R3, R4, R5 a R6 znamená skupinu Z-L-HN(CH2)n-, kde L znamená skupinu dvojvazného linkeru, Z znamená cílící částici, n znamená číslo od 1 do 6, R7 a R8 nezávisle na sobě znamenají atom vodíku, nižší alkyl, nižší hydroxyalkyl nebo nižší alkoxyalkyl a X znamená aminovou skupinu, substituovanou aminovou skupinu nebo -NR1-Y, kde Y znamená aminokyselinu, amid aminokyseliny nebo peptid se 2 až 10 aminokyselinami.R 4 'Zx,. R 2 NR 3 'is R j; (IV) wherein R 1 and R 2 independently represent hydrogen, lower alkyl, hydroxyalkyl (2 to 4 carbon atoms) or alkoxyalkyl (C 2 -C 4 alkyl), R 3, R 4, R 5, and R 6 are independently hydrogen, substituted or unsubstituted lower alkyl or phenyl that does not contain a thiol group, and one of R 3 , R 4 , R 5 and R 6 is ZL-HN (CH 2 ) n - wherein L represents a divalent linker group, Z represents a targeting moiety, n represents a number from 1 to 6, R 7 and R 8 independently represent a hydrogen atom, a lower alkyl, a lower hydroxyalkyl or a lower alkoxyalkyl and X represents an amino group, a substituted amino group or -NR 1- Y, wherein Y is an amino acid, an amino acid amide, or a peptide of 2 to 10 amino acids.
Mezi výhodnější chelátory kovů podle vynálezu patří chelátory obecného vzorce VMore preferred metal chelators of the invention include those of formula V
(V) ·· 99(V) ·· 99
9 · 9 9 9 9 9 9 9 99 · 9 9 9 9 9 9 9 9
9 9 9 9 9 9 9 99 9 9 9 9
9 99 9 9 9 9999999,999 9,999,999
9 9 9 9 9 9 99 9 9 9 9 9
99 999 999 99 99 • · ·*·♦ v němž R1 a R2 nezávisle na sobě znamenají atom vodíku, nižší alkyl, nižší hydroxyalkyl nebo nižší alkenylalkyl, R3 a R4 nezávisle na sobě znamenají atom vodíku, substituovaný nebo nesubstituovaný nižší alkyl nebo fenyl, který neobsahuje thiolovou skupinu, n znamená číslo od 1 do 6, L znamená skupinu dvojvazného linkeru a Z znamená CT peptidovou částici.Wherein R 1 and R 2 independently of one another are hydrogen, lower alkyl, lower hydroxyalkyl or lower alkenylalkyl, R 3 and R 4 independently of each other are hydrogen, substituted or unsubstituted lower alkyl or phenyl that does not contain a thiol group, n is a number from 1 to 6, L is a divalent linker group, and Z is a CT peptide particle.
Mezi další výhodnější chelatační částice patří chelátory obecného vzorce VI z-l.Other more preferred chelating particles include chelators of Formula VI z-1.
r~^ 0 r ~ ^ 0
O^/NH HN<AO 2 / NH HN?
NH,NH,
NH,NH,
HS' (VI), v němž L znamená skupinu dvojvazného linkeru a Z znamená CT peptidovou částici.HS '(VI), wherein L is a divalent linker group and Z is a CT peptide particle.
Mezi nejvýhodnější chelatační částice podle vynálezu patří chelátory následujících obecných vzorců (aminokyselina)1 -(aminokyselina)2-cystein,(aminokyselina)1-(aminokyselina)2-isocystein,(aminokyselina)1-(aminokyselina)2-homocystein,(aminokyselina)1-(aminokyselina)2-penicilamin,(aminokyselina)1-(aminokyselina)2-2-merkaptoethylamin,(aminokyselina)1-(aminokyselina)2-2-merkaptopropylamin,(aminokyselina)1-(aminokyselina)2-2-merkpato-2-methylpropylamin-a (aminokyselina)1-(aminokyselina)2-3-merkaptopropylamin-, v nichž (aminokyselina) v primární a- nenbo β-aminokyselině neobsahuje thiolovou skupinu a v nichž chelátor je napojen buď na cílovou částici nebo linkerovou skupinu kovalentní vazbou s karboxylovým koncem chelátoru nebo postranním řetězcem na jedné ze skupin aminokyselin.The most preferred chelating particles of the invention include chelators of the following formulas (amino acid) 1- (amino acid) 2 -cysteine, (amino acid) 1- (amino acid) 2 -isocysteine, (amino acid) 1- (amino acid) 2 -homocysteine, (amino acid) 1- (amino acid) 2 -penicillamine, (amino acid) 1- (amino acid) 2 -2-mercaptoethylamine, (amino acid) 1- (amino acid) 2 -2-mercaptopropylamine, (amino acid) 1- (amino acid) 2 -2-mercapto -2-methylpropylamine-α (amino acid) 1- (amino acid) 2 -3-mercaptopropylamine- in which the (amino acid) in the primary and / or β-amino acid does not contain a thiol group and in which the chelator is attached to either the target particle or linker group by a covalent bond with a carboxyl terminus of a chelator or a side chain at one of the amino acid groups.
• · »· · β φ· · b · · » · · · ·· ··• »β b b b b b b b b b b
Mezi nejvýhodnější chelátory patří také chelátory shora uvedeného vzorce, v němž (aminokyselina)1 znamená buď α,ω- nebo β,ω-aminokyselinu, v nichž a- nebo β-aminová skupina znamená volný amin a α,ω- nebo β,ω-aminokyselina je kovalentně napojena ω-aminovou skupinou.The most preferred chelators also include the chelators of the above formula wherein (amino acid) 1 is either an α, ω- or β, ω-amino acid in which the α- or β-amino group is a free amine and α, ω- or β, ω the amino acid is covalently linked by a ω-amino group.
Mezi další nejvýhodnější chelátory patří ty, které jsou vybrány ze skupiny sestávající ze sloučenin následujících obecných vzorcůOther most preferred chelators include those selected from the group consisting of compounds of the following formulas
-cystein-(aminokyselina)-(a,B- nebo β,γ-diaminokyselina),-cysteine- (amino acid) - (a, B- or β, γ-diamino acid),
-isocystein-(aminokyselina)-(a,B- nebo β,γ-diaminokyselina),-isocysteine (amino acid) - (a, B- or β, γ-diamino acid),
-homocystein-(aminokyselina)-(a,B- nebo β,γ-diaminokyselina),-homocysteine- (amino acid) - (a, B- or β, γ-diamino acid),
-penicilamin-(aminokyselina)-(a,B- nebo β,γ-diaminokyselina),-penicillamine- (amino acid) - (a, B- or β, γ-diamino acid),
2-merkaptooctová kyselina-(aminokyselina)-(a,B- nebo β,γ-diaminokyselina),2-mercaptoacetic acid- (amino acid) - (a, B- or β, γ-diamino acid),
2- nebo 3-merkaptopropionová kyselina-(aminokyselina)-(a,B- nebo β,γ-diaminokyselina) a2- or 3-mercaptopropionic acid- (amino acid) - (a, B- or β, γ-diamino acid) and
2-merkapto-2-methylpropionová kyselina-(aminokyselina)-(a,B- nebo β,γ-diaminokyselina), v nichž (aminokyselina) v primární a- nebo β-aminokyselině neobsahuje thiolovou skupinu a v nichž chelátor je napojen buď na cílovou částici nebo linkerovou skupinu kovalentní vazbou s aminovým koncem chelátoru nebo postranním řetězcem na jedné ze skupin aminokyselin.2-mercapto-2-methylpropionic acid- (amino acid) - (a, B- or β, γ-diamino acid) in which the (amino acid) in the primary α- or β-amino acid does not contain a thiol group and in which the chelator is attached to either a target particle or linker group by a covalent bond with the amino terminus of a chelator or side chain at one of the amino acid groups.
Zvláště výhodné chelátory kovů jsou vybrány ze skupiny sestávající ze sloučenin následujících vzorců: -Gly-Gly-Cys-, -Arg-Gly-Cys-, -(e-Lys)-Gly-Cys-(ó-Om)-Gly-Cys-, -(y-Dab)-Gly-Cys-, -(B-Dap)-Lys-Cys- a -(B-Dap)-Gly-Cys(Označování aminokyselin v těchto vzorcích je stejné jak shora uvedeno.).Particularly preferred metal chelators are selected from the group consisting of compounds of the following formulas: -Gly-Gly-Cys-, -Arg-Gly-Cys-, - (e-Lys) -Gly-Cys- (6-Om) -Gly-Cys -, - (γ-Dab) -Gly-Cys-, - (B-Dap) -Lys-Cys-, and - (B-Dap) -Gly-Cys (The amino acid designations in these formulas are the same as above.).
Příkladem chelátoru radioaktivního kovu shora uvedeného obecného vzorce III je Gly-Gly-Cys-, v němž chelatační částice má strukturu VII ·· »·*· ·· 99An example of a radioactive metal chelator of formula III above is Gly-Gly-Cys-, wherein the chelating particle has the structure VII.
9 9 99 99 9 9 9 99 9 99 99
9 9 9 9 9 9 9 99 9 9 9 9
9 9 9 9 9 9 999 9999 9 9 9 9 9 999 999
9 9 9 9 9 9 99 9 9 9 9 9
99 999 999 99 9999 99 99 99 99
sloučenina vázající receptor kalcitoninu (VII).a calcitonin receptor binding compound (VII).
Chelatační ligandy struktury VII tvoří oxotechneciové komplexy struktury VlilThe chelating ligands of structure VII form oxotechneci complexes of the VIIIa structure
sloučenina vázající receptor kalcitoninu (Vlil).a calcitonin receptor binding compound (VIII).
Příkladem chelátorů radioaktivního kovu shora uvedeného obecného vzorce V je Lys-((a-peptid)-Gly-Cys.amid, který tvoří chelátor vzorce IXAn example of a radioactive metal chelator of formula (V) above is Lys - ((α-peptide) -Gly-Cys.amide, which forms the chelator of formula IX)
Chelatační ligandy vzorce IX tvoří oxotechneciové komplexy vzorce XChelating ligands of formula IX form oxotechneci complexes of formula X
99 «999 «9
999 • 9 9 • 9 *··· • · · • · 9 • · · · • *9 · • 9 99 • 9 9 «999 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9
9 9 99 9 9
999 99« • 9998 99 «• 9
9999
Příkladem reakčního činidla podle vynálezu obsahujícího chelátor radioaktivního kovu shora uvedeného obecného vzorce II je (cílová částice)-Cys-Gly-a,B-diaminopropionamid, který tvoří chelátor vzorce XI sloučenina vázající receptor kalcitoninu-HN—( oAn example of a reagent of the invention containing a radioactive metal chelator of formula II above is (target particle) -Cys-Gly-α, β-diaminopropionamide, which forms the chelator of formula XI a calcitonin-HN receptor-binding compound (o
SH H2N (XI).SH 2 N (XI).
Radiodiagnostická činidla vzorce XI tvoří oxotechneciové komplexy vzorce XII sloučenina vázající receptor kalcitoninu-HNThe radiodiagnostic agents of formula XI form the oxotechnetic complexes of formula XII a calcitonin-HN receptor binding compound
nh2 (XH).NH 2 (XH).
V chelátorech radioaktivních kovů a reakčních činidlech vázajících CT receptor získaných podle vynálezu, která obsahují thiol kovalentně navázaný na chránící skupinu thiolu {(pgp)8}, může být chránící skupina thiolu stejná nebo různá a může znamenat, ale bez omezení na ně, následující skupiny:In radioactive metal chelators and CT receptor binding reagents obtained according to the invention, which contain a thiol covalently bound to a thiol protecting group {(pgp) 8 }, the thiol protecting group may be the same or different and may include, but are not limited to, the following groups :
• φ φφφφ » · · · > · · · φφφ φφ·• φ ·> ·> · φ ·
-CH2-aryl (aryl znamená fenyl nebo alkylem či alkoxylem substituovaný fenyl), -CH-(aryl)2 (aryl znamená fenyl nebo alkylem či alkoxylem substituovaný fenyl),-CH 2 -aryl (aryl means phenyl or alkyl or alkoxy substituted phenyl), -CH- (aryl) 2 (aryl means phenyl or alkyl or alkoxy substituted phenyl),
-C-(aryl)3 (aryl znamená fenyl nebo alkylem či alkoxylem substituovaný fenyl), -CH2-(4-methoxyfenyl),-C- (aryl) 3 (aryl means phenyl or alkyl or alkoxy substituted phenyl), -CH 2 - (4-methoxyphenyl),
-CH-(4-pyridyl)(fenyl)2,-CH- (4-pyridyl) (phenyl) 2 ,
-C(CH3)3,-C (CH 3) 3,
-9-fenylfluorenyl,-9-phenylfluorenyl,
-CH2NHCOR (R znamená nesubstituovaný nebo substituovaný alkyl nebo aryl),-CH 2 NHCOR (R is unsubstituted or substituted alkyl or aryl),
-CH2-NHCOOR (R znamená nesubstituovaný nebo substituovaný alkyl nebo aryl),-CH 2 -NHCOOR (R represents unsubstituted or substituted alkyl or aryl),
-CONHR (R znamená nesubstituovaný nebo substituovaný alkyl nebo aryl) nebo-CONHR (R represents unsubstituted or substituted alkyl or aryl) or
-CH2-S-CH2-fenyl.-CH 2 -S-CH 2 -phenyl.
Výhodné chránící skupiny mají obecný vzorec -CH2-NHCOR, v němž R znamená nižší alkyl s 1 až 8 atomy uhlíku, fenyl nebo fenyl substituovaný nižším alkylem, hydroxylem, nižší alkoxyskupinou, karboxyskupinou nebo nižší alkoxykarbonylovou skupinou. Nejvýhodnější chránící skupinou je acetamidomethylová skupina.Preferred protecting groups are of the formula -CH 2 -NHCOR wherein R is lower alkyl of 1 to 8 carbon atoms, phenyl or phenyl substituted with lower alkyl, hydroxyl, lower alkoxy, carboxy or lower alkoxycarbonyl. The most preferred protecting group is acetamidomethyl.
Jestliže reakční čindilo podle vynálezu obsahuje sloučeninu vázající CT receptor, kterou je peptid, tento peptid s výhodou obsahuje aminokyselinovou sekvenci id. č. 10If the reaction of the invention comprises a CT receptor binding compound which is a peptide, the peptide preferably comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2. No. 10
CH?CO.SNLSTX- (sekv. id. č. 10), v níž X je vybrán ze skupiny sestávající z cysteinového zbytku, homocysteinového zbytku a homohomocysteinového zbytku. Peptid může obsahovat také aminokyselinovou sekvenci id. č. 11 • · · · · · • ·CH 2 CO.SNLSTX- (SEQ ID NO 10), wherein X is selected from the group consisting of a cysteine residue, a homocysteine residue, and a homohomocysteine residue. The peptide may also comprise amino acid sequence id. No. 11 • · · · · · · · ·
CH?C0.1NLSTX2- (sekv. id. č. 11), v níž X1 je vybrána ze skupiny sestávající z alaninového zbytku, glycinového zbytku a serinového zbytku a X2 je vybrána ze skupiny sestávající z cysteinového zbytku, homocysteinového zbytku a homohomocysteinového zbytku. Mezi tyto peptidy patří přirozeně se vyskytující lidský CT a analogy CT peptidu, jako jsou ty, které jsou specificky uvedeny v dále uvedených sekvencích aminokyselin:CH? C0.1NLSTX 2 - (SEQ ID NO: 11) wherein X 1 is selected from the group consisting of alanine residue, glycine residue and serine residue, and X 2 is selected from the group consisting of cysteine residue, homocysteine residue, and homohomocysteine residue. These peptides include naturally occurring human CT and CT peptide analogues, such as those specifically listed in the following amino acid sequences:
CH?CO.SNLST.Hhc.VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid (sekv. id. č. 5),CH? CO.SNLST.Hhc.VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid (SEQ ID NO 5),
CH?CO.SNLST.Hcv.VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid (sekv. id. č. 6),CH? CO.SNLST.Hcv.VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid (SEQ ID NO: 6),
CHpCO.SNLST.Cvs.VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid (sekv. id. č. 7) aCHpCO.SNLST.Cs.VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid (SEQ ID NO 7) and
SNLST.Asu.VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid (sekv. id. č. 8).SNLST.Asu.VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid (SEQ ID NO: 8).
Mezi zvláště výhodná provedení reakčních činidel podle vynálezu patří:Particularly preferred embodiments of the reagents of the invention include:
CHpCO.SNLST.Hhc.VLGKLSCíBAOELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid (sekv. id. č. 4),CHpCO.SNLST.Hhc.VLGKLSCiBAOELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid (SEQ ID NO 4),
CH?CO.SNLST.Hhc.VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGSGTPfe-K)GC.amid.CH ? CO.SNLST.Hhc.VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGSGTPfe-K) GC.amide.
CH?CO.SNLST.Hhc.VLGKLSC(CH?CQ.GGCK.amid))ELHKLQTYPRTNTGSGTP.CH? CO.SNLST.Hhc.VLGKLSC (CH? CQ.GGCK.amid)) ELHKLQTYPRTNTGSGTP.
.amid,.amid,
CH?CO.SNLST.Hhc.VLGKLSC(CH?CO.fB-Dap)KCK.amid)ELHKLQTYPRTNTGS·CH ? CO.SNLST.Hhc.VLGKLSC (CH ? CO.fB-Dap) KCK.amid) ELHKLQTYPRTNTGS ·
GTP.amid,GTP.amid,
CH?CO.SNLST.Hhc.VLGKLSC(CHpCO.fe-K)GCE.amidúELHKLQTYPRTNTGSGTP.a mid,CH? CO.SNLST.Hhc.VLGKLSC (CHpCO.fe-K) GCE.amidúELHKLQTYPRTNTGSGTP.a mid,
CHpCO.SNLST.Hcv.VLGKLSC(CHpCO.GGCK.amid)ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid,CHpCO.SNLST.Hcv.VLGKLSC (CHpCO.GGCK.amid) ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid
CH?CO.SNLST.Hcv.VLGKLSC(CHpCO.(B-Dap)KCK.amid)ELHKLQTYPRTNTGS.CH? CO.SNLST.Hcv.VLGKLSC (CHpCO. (B-Dap) KCK.amid) ELHKLQTYPRTNTGS.
• · · · · ·• · · · · ·
.GTP.amid,.GTP.amid,
CH?CO.SNLST.Hcv.VLGKLSC(CH,CO.fs-K)GCE.amid)ELHKLQTYPRTNTGSGTP.CH ? CO.SNLST.Hcv.VLGKLSC (CH, CO.fs-K) GCE.amid) ELHKLQTYPRTNTGSGTP.
.amid,.amid,
CH?CO.SNLST.Cvs.VLGKLSC(CH,CO.GGCKamid)ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amidCH ? CO.SNLST.Cs.VLGKLSC (CH, CO.GGCKamid) ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid
CH?CQ.SNLST.Cvs.VLGKLSC(CH,CO.(B-DaD)KCK.amid)ELHKLQTYPRTNTGS.CH ? CQ.SNLST.Cs.VLGKLSC (CH, CO. (B-DaD) KCK.amid) ELHKLQTYPRTNTGS.
.GTP.amid,.GTP.amid,
CH2CO1SNLSLCys1VLGKLSC(CH2CO.(8-K)GCE.amid)ELHKLQTYPRTNTGSGTP.CH 2 CO 1 SNLSLCys 1 VLGKLSC (CH 2 CO. (8-K) GCE.amide) ELHKLQTYPRTNTGSGTP.
.amid,.amid,
SNLSIAsuiVLGKLSC(CH2CO.(B-Dap)KCK.amid))ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amidaSNLSIAs i VLGKLSC (CH 2 CO. (B-Dap) KCK.amid)) ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amida
SNLST1Acu.VLGKLSC(CH2CO.(B-Dap)KCK.amid)ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid.SNLST 1 Acu.VLGKLSC (CH 2 CO. (B-Dap) KCK.amid) ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid.
Všechny přirozeně se vyskytující aminokyseliny jsou zkracovány použitím standardních zkratek (které lze nalézt v G. Zubay: Biochemistry, druhé vydání, MacMillen Publishing, New York 1988, str. 33). Pro účely tohoto vynálezu jsou přirozeně se vyskytující aminokyseliny charakterizovány jako lipofilní (alanin, isoleucin, leucin, methionin, fenylalanin, tyrosin, prolin, tryptofan a valin a také S-alkylované deriváty cysteinu), hydrofilní (asparagin, glutamin, threonin, serin), kyselé (kyselina glutamová a kyselina aspartová), bazické (arginin, histidin a lysin), ε-Κ, δ-Om, γ-Dab a β-Dab mají shora uvedené významy. (BAT) znamená N6,N9-bis(2-merkapto-2-methyl-propyl)-6,9-diazanonanovou kyselinu, K.(BAT) a Lys.(BAT) znamenají aminokyselinu lysin acylovanou na ε-aminové skupině postranního řetězce aminokyseliny k (BAT), C(BAT) a Cys(BAT) znamenají S-(N6,N9-bis(2-merkapto-2-methylpropyl)-6,9-diazanonan-1-yl)cystein, (BAM) znamená (N1,N4-bis(2-merkapto-2-methylpropyl)-1,4,10-triazadekan, (BAT-BM) znamená N-{2-(N',N'-bis(2-maleimidoethyl)aminoethyl]-N9-(terc. butoxykarbonyl)-(N6,N9-bis(2-methyl-2-trifenyl-methylthiopropyl)-6,9-diazanonanamid, (BAT-BS) znamená N-{2-(N6, N9-bis(2-sukcinimidoethyl)aminoethyl]-N',N'-bis(2-merkapto-2-methylpropyl)-6,9-diazanonanamid, (BMH) znamená bis-maleimidohexan, (BSH) znamená bis-sukcinimidohexan, (BMME) znamená bis-maleimidomethylether, (BSEE) znamená bis-sukcinimidoethylether, (BMEE) znamená bis-maleimidoethylether a (BSME) znamená bis-sukcinimidomethylether. Jak se používají zde, následující aminokyseliny a analogy aminokyselin jsou uváděny následujícími zkratkami:All naturally occurring amino acids are abbreviated using standard abbreviations (which can be found in G. Zubay: Biochemistry, Second Edition, MacMillen Publishing, New York 1988, p. 33). For the purposes of this invention, naturally occurring amino acids are characterized as lipophilic (alanine, isoleucine, leucine, methionine, phenylalanine, tyrosine, proline, tryptophan and valine as well as S-alkylated cysteine derivatives), hydrophilic (asparagine, glutamine, threonine, serine), acidic (glutamic acid and aspartic acid), basic (arginine, histidine and lysine), ε-Κ, δ-Om, γ-Dab and β-Dab have the meanings given above. (BAT) means N 6 , N 9 -bis (2-mercapto-2-methylpropyl) -6,9-diazanonanoic acid, K. (BAT) and Lys. (BAT) mean the amino acid lysine acylated on the ε-amine group amino acid side chains of k (BAT), C (BAT) and Cys (BAT) mean S- (N 6 , N 9 -bis (2-mercapto-2-methylpropyl) -6,9-diazanonan-1-yl) cysteine, (BAM) means (N 1 , N 4 -bis (2-mercapto-2-methylpropyl) -1,4,10-triazadecane, (BAT-BM) means N- {2- (N ', N'-bis ( 2-maleimidoethyl) aminoethyl] -N 9 - (tert -butoxycarbonyl) - (N 6 , N 9 -bis (2-methyl-2-triphenylmethylthiopropyl) -6,9-diazanonanamide, (BAT-BS) means N- {2- (N 6 , N 9 -bis (2-succinimidoethyl) aminoethyl] -N ', N'-bis (2-mercapto-2-methylpropyl) -6,9-diazanonanamide, (BMH) means bis-maleimidohexane, (BSH) means bis-succinimidohexane, (BMME) means bis-maleimidomethyl ether, (BSEE) means bis-succinimidoethyl ether, (BMEE) means bis-maleimidoethyl ether, and (BSME) means bis-succinimidomethyl ether As used herein, the following amino acids and amino analogs acids are indicated by the following abbreviations:
• · • « · · ·· · ···• · · «· · · ·
Acm znamená merkaptanovou chránící skupinu acetamidomethyl, Pen znamená penicilamin, Aca znamená 6-aminokapronovou kyselinu, Hly znamená homolysin, Apc znamená L-S-(3-aminopropyl)cystein, FD znamená D-fenylalanin, WD znamená D-tryptofan, YD znamená D-tyrosin, Cpa znamená L-(4-chlorfenyl)alanin, Thp znamená 4-amino-tetrahydrothiopyran-4-karboxylovou kyselinu, D-Nal znamená D-2-naftylalanin, Dpg znamená dipropylglycin, Nle znamená norleucin, Hcy znamená homocystein, Hhc znamená homohomocystein, Aib znamená aminoisomáslednou kyselinu, Nal znamená 2-naftylalanin, D-Nal znamená D-2-naftylalanin, Ain znamená 2-aminoindan-2-karboxylovou kyselinu, Achxa znamená 4-amino-cyklohexylalanin, Amf znamená 4-aminomethyl-fenylalanin, Aec znamená S-(2-aminoethyl)cystein, Apc znamená S-(3-aminopropyl)cystein, Aes znamená O-(2-aminoethyl)serin, Aps znamená O-(3-aminopropyl)serin, Abu znamená 2-aminomáselnou kyselinu, Nva znamená norvalin a Asu znamená 2-aminokorkovou kyselinua, pň čemž aminová koncová skupina aminokyselin peptidů obsahujících zbytek Asu je cyklizována amidovou vazbou mezi aminovou koncovou aminoskupinou a karboxylovou skupinou postranního řetězce zbytku Asu.Acm stands for mercaptan protecting group acetamidomethyl, Pen stands for penicillamine, Aca stands for 6-aminocaproic acid, Hly stands for homolysin, Apc stands for LS- (3-aminopropyl) cysteine, F D stands for D-phenylalanine, W D stands for D-tryptophan, Y D stands for D-tyrosine, Cpa is L- (4-chlorophenyl) alanine, Thp is 4-amino-tetrahydrothiopyran-4-carboxylic acid, D-Nal is D-2-naphthylalanine, Dpg is dipropylglycine, Nle is norleucine, Hcy is homocysteine, Hhc stands for homohomocysteine, Aib stands for aminoisobutyric acid, Nal stands for 2-naphthylalanine, D-Nasled stands for 2-naphthylalanine, Ain stands for 2-aminoindan-2-carboxylic acid, Achxa stands for 4-aminocyclohexylalanine, Amf stands for 4-aminomethyl- phenylalanine, Aec is S- (2-aminoethyl) cysteine, Apc is S- (3-aminopropyl) cysteine, Aes is O- (2-aminoethyl) serine, Aps is O- (3-aminopropyl) serine, Abu is 2- aminobutyric acid, Nva means norvaline and Asu means 2-aminocork acid elinua, wherein the amino terminal amino acid group of peptides containing the Asu residue is cyclized by an amide bond between the amino terminal amino group and the carboxyl group of the Asu side chain.
Podle tohoto vynálezu peptidy vázající CT receptor mohou obsahovat jeden nebo více aminokyselinových derivátů, které mají chelátor radioaktivního kovu navázán na aminokyselinový postranní řetězec. Chelátor radioaktivního kovu se s výhodou inkorporuje do peptidu na karboxylovém konci peptidu vázajícího CT receptor. Výhodněji se chelátor radioaktivního kovu inkorporuje do syntetického peptidu vázajícího CT receptor na atom síry postranního řetězce cysteinu, což odpovídá poloze 14 přírodního peptidu. Nejvýhodněji se chelátor radioaktivního kovu inkorporuje do postranního řetězce aminokyseliny peptidu vázajícího CT receptor o sekvenci id. č. 9According to the present invention, CT receptor binding peptides may comprise one or more amino acid derivatives having a radioactive metal chelator linked to an amino acid side chain. The radioactive metal chelator is preferably incorporated into the peptide at the carboxyl terminus of the CT receptor binding peptide. More preferably, the radioactive metal chelator is incorporated into the synthetic CT receptor binding peptide to the sulfur atom of the cysteine side chain, corresponding to position 14 of the native peptide. Most preferably, the radioactive metal chelator is incorporated into the amino acid side chain of the CT receptor binding peptide of sequence id. No. 9
CH2CO.SNLST.Hhc.VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid (sekv. id. č. 9).CH2CO.SNLST.Hhc.VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGSGTP.amide (SEQ ID NO 9).
• ·• ·
Nejvýhodněji se chelátor radioaktivního kovu inkorporuje do peptidu vázající CT receptor na atom síry postranního řetězce cysteinu v poloze 13 peptidu sekv. id. č. 9 (rozlišeného zesílením v sekv. id. č. 9).Most preferably, the radioactive metal chelator is incorporated into the CT receptor binding peptide to the sulfur atom of the cysteine side chain at position 13 of the peptide of SEQ. id. 9 (differentiated by the amplification in SEQ ID NO 9).
Další provedení reakčních činidel podle vynálezu obsahuje alespoň dvě syntetické sloučeniny vázající CT receptor, každá sloučenina je kovalentně navázána na chelátor radioaktivního kovu, a polyvalentní linker tvořící kovalentní vazby, která je vybrána ze skupiny sestávající z vazby na každou sloučeninu, vazby na každý chelátor a vazby na jednu sloučeninu a chelaátor jiné sloučeniny. Podle tohoto vynálezu se mohou vyskytovat také další permutace tohoto provedení. Polyvalentní linkery vhodné pro použití v tomto provedení vynálezu obsahují alespoň dvě identické funkční skupiny, které jsou schopny kovalentního navázání na CT analogy, sloučeniny vázající CT receptor, CT peptidy nebo chelátory radioaktivního kovu, nebo jsou schopny navázání jak na sloučeniny vázající CT receptor tak chelátory radioaktivního kovu. Mezi výhodné funkční skupiny patří, bez omezení, primární aminy, sekundární aminy, hydroxylové skupiny, skupiny karboxylové kyseliny nebo thiolové reaktivní skupiny. Ve výhodných provedeních polyvalentní linkery obsahují bis-sukcinimidylmethylether (BSME), bis-sukcinimidylethylether (BSEE), 4-(2,2-dimethylacetyl)benzoovou kyselinu (DMBA), N-{2-(N',N'-bis(2-sukcinimido-ethyl)aminoethyl)}-(N6,N9-bis(2-methyl-2-merkaptopropyl)-6,9-diazonanamid (BAT-BS), tris(sukcinimidylethyl)amin (TSEA), bissukcinimidohexan (BSH), 4-(O-CH2CO-Gly-Gly-Cys. ,amid)-2-methylpropiofenon (ETAC), tris(acetamidoethyl)amin, bis-acetamidomethyl-ether, bis-acetamidoethyl-ether, α,ε-bis-acetyllysin, lysin a 1,8-bis-acetamido-3,6-dioxa-oktan nebo jejich deriváty.Another embodiment of the reagents of the invention comprises at least two synthetic CT receptor binding compounds, each compound covalently attached to a radioactive metal chelator, and a polyvalent linker forming covalent bonds, selected from the group consisting of binding to each compound, bonds to each chelator, and bonds to one compound and a chelator of another compound. Other permutations of this embodiment may also occur according to the invention. The polyvalent linkers suitable for use in this embodiment of the invention contain at least two identical functional groups capable of covalently binding to CT analogs, CT receptor binding compounds, CT peptides or radioactive metal chelators, or capable of binding to both CT receptor binding compounds and radioactive chelators. metal. Preferred functional groups include, without limitation, primary amines, secondary amines, hydroxyl groups, carboxylic acid groups, or thiol reactive groups. In preferred embodiments, the polyvalent linkers comprise bis-succinimidyl methyl ether (BSME), bis-succinimidyl ether (BSEE), 4- (2,2-dimethylacetyl) benzoic acid (DMBA), N- {2- (N ', N'-bis (2 -succinimido-ethyl) aminoethyl)} - (N 6 , N 9 -bis (2-methyl-2-mercaptopropyl) -6,9-diazonanamide (BAT-BS), tris (succinimidyl ethyl) amine (TSEA), bissuccinimidohexane (BSH) ), 4- (O-CH 2 CO-Gly-Gly-Cys., Amide) -2-methylpropiophenone (ETAC), tris (acetamidoethyl) amine, bis-acetamidomethyl ether, bis-acetamidoethyl ether, α, ε- bis-acetyllysine, lysine and 1,8-bis-acetamido-3,6-dioxa-octane or derivatives thereof.
Sloučeniny vázající CT receptor získané podle předloženého vynálezu se mohou chemicky syntetizovat in vitro použitím jakéhokoliv vhodného způsobu syntézy. S výhodou se CT peptidy mohou syntetizovat podle vynálezu rekombinantními způsoby. Výhodněji se CT peptidy, deriváty CT peptidu a analogy CT peptidu mohou obecně s výhodou připravovat podle předloženého vynálezu použitím syntetizátoru peptidů. CT peptidy podle tohoto vynálezu se s výhodou syntetizují kovalentním • · · • · · 9 • · 9 9 • · · ·9 napojením chelátoru radioaktivního kovu na peptid během chemické syntézy in vitro použitím způsobů dobře známých odborníkům z oblasti techniky jako syntéza peptidů v pevné fázi. Tímto způsobem se mohou do peptidu inkorporovat chelátory radioaktivních kovů místně-selektivním způsobem ve skutečně jakékoliv poloze peptidu, čímž se vyhneme snížení afinity a specifičnosti peptidu na CT receptor.The CT receptor binding compounds obtained according to the present invention can be chemically synthesized in vitro using any suitable method of synthesis. Preferably, CT peptides can be synthesized according to the invention by recombinant means. More preferably, CT peptides, CT peptide derivatives, and CT peptide analogs can generally be conveniently prepared according to the present invention using a peptide synthesizer. The CT peptides of the invention are preferably synthesized by covalent attachment of a radioactive metal chelator to a peptide during in vitro chemical synthesis using methods well known to those skilled in the art such as solid peptide synthesis. stage. In this way, radioactive metal chelators can be incorporated into the peptide in a locally selective manner at virtually any position of the peptide, thereby avoiding reducing the affinity and specificity of the peptide for the CT receptor.
Podle tohoto vynálezu se peptidy vázající CT receptor připravují tak, že mají aminokyselinu s chráněným thiolem, typicky cysteinový zbytek, zahrnutu do peptidu. Následujícím odštěpením peptidu ze syntetické pryskyřice a cyklizaci zbytků na aminovém konci se odstraní chránící skupina thiolové skupiny a získá se prosthetická skupina obsahující chelátor radioaktivního kovu a thiolová reaktivní skupina.According to the present invention, CT receptor binding peptides are prepared having a thiol protected amino acid, typically a cysteine residue, included in the peptide. Subsequent cleavage of the peptide from the synthetic resin and cyclization of the amino-terminus residues deprotects the thiol protecting group to yield a prosthetic group containing a radioactive metal chelator and a thiol reactive group.
Jak bylo shora uvedeno, reakční činidla vázající CT receptor podle vynálezu mohou být radioaktivně označena, takže poskytují radiodiagnostická nebo radioterapeutická činidla. Příkladem radiodiagnostické aplikace používající radioaktivně označená reakční činidla podle vynálezu je scintigrafické zobrazení, při kterém lze stanovit umístění a rozsah nádorů nesoucích CT receptor. Pojem scintigrafické zobrazovací činidlo, jak se zde používá, zahrnuje radioaktivně označené reakční činidlo, které má možnost být detegováno prostředky detegujícími radioaktivitu (včetně, ale bez omezení na ně, γ-kamery nebo scintilační detektorové sondy). U radioterapeutických provedení podle vynálezu jsou reakční činidla vázající CT receptor označena cytotoxickými radionuklidy a jsou užitečná při léčení onemocnění nebo dalších nemocí živočichů, s výhodou lidí, jako jsou onemocnění nebo nemoci, které se vyznačují expresí nebo nadexpresí CT receptorů. Mezi onemocnění nebo nemoci související s CT patří, ale bez omezení na ně, rakovina prsu, rakovina vaječníků, rakovina plic, lymfom a další onemocnění, vyznačující se růstem maligních nebo benigních nádorů vázajících sloučeniny vázající CT receptor. Tyto nádory obsahují CT nebo jeho deriváty nebo analoga expresí CT receptorů na povrchu buněk.As mentioned above, the CT receptor binding reagents of the invention may be radiolabeled to provide radiodiagnostic or radiotherapeutic agents. An example of a radiodiagnostic application using the radiolabeled reagents of the invention is scintigraphic imaging in which the location and extent of CT receptor-bearing tumors can be determined. The term scintigraphic imaging agent, as used herein, includes a radiolabeled reagent that has the ability to be detected by means of detecting radioactivity (including but not limited to γ-cameras or scintillation detector probes). In radiotherapeutic embodiments of the invention, CT receptor binding reagents are labeled with cytotoxic radionuclides and are useful in the treatment of diseases or other diseases of animals, preferably humans, such as those characterized by the expression or overexpression of CT receptors. CT related diseases or diseases include, but are not limited to, breast cancer, ovarian cancer, lung cancer, lymphoma, and other diseases characterized by growth of malignant or benign tumors binding CT receptor binding compounds. These tumors contain CT or its derivatives or analogs by expressing CT receptors on the cell surface.
• <9 · · · · 4 ·• <9 · · · · ·
9 9 · 9 9 • ·9 9 · 9 9
Jakýkoliv radioaktivní kov může tvořit komplex s reakčními činidly podle vynálezu za vzniku radiodiagnostického nebo radioterapeutického činidla. Reakční činidla podle vynálezu mohou být například radioaktivně označena techneciem-99m, jodem-125 nebo jodem-123, takže se získá scintigrafické zobrazující činidlo. Tento vynález poskytuje také reakční činidla vázající CT receptor, která jsou schopna tvořit komplex s magnetickým, paramagnetickým, supermagnetickým nebo superparamagnetickým atomem, iontem nebo částicí kovu. Reakční činidla vázající CT receptor podle vynálezu mohou být s výhodou také radioaktivně označena cytotoxickým radioisotopem vybraným ze skupiny sestávající ze skandia-47, mědi-67, galia-72, ytria-90, cínu-117m, jodu-125, jodu-131, samaria-153, gadolinia-159m, dysprosia-165, holmia-166, yterbia-175, lutecia-177, rhenia-186, rhenia-188, astatu-211, vismutu-212 a vismutu-213, takže se získá radioterapeutické činidlo.Any radioactive metal may complex with the reagents of the invention to form a radiodiagnostic or radiotherapeutic agent. For example, the reagents of the invention may be radiolabeled with technetium-99m, iodine-125 or iodine-123 to provide a scintigraphic imaging agent. The present invention also provides CT receptor binding reagents capable of complexing with a magnetic, paramagnetic, supermagnetic or superparamagnetic atom, ion, or metal particle. Preferably, the CT receptor binding agents of the invention may also be radiolabeled with a cytotoxic radioisotope selected from the group consisting of scandia-47, copper-67, gallium-72, yttria-90, tin-117m, iodine-125, iodine-131, samaria -153, gadolinium-159m, dysprosia-165, holmia-166, yterbium-175, lutecia-177, rhenia-186, rhenia-188, astatu-211, vismutu-212 and vismutu-213 to obtain a radiotherapeutic agent.
Jestliže se reakční činidla podle vynálezu používají pro vznik komplexu radioaktivního technecia nebo rhenia, komplex s techneciem, s výhodou technistan s techneciem-99m nebo sůl rhenia ve formě rhenistanu, se nechá zreagovat s reakčním činidlem v přítomnosti redukčního činidla. Výhodným redukčním činidlem je dithioničitan, cínaté nebo železnaté ionty, nejvýhodnějším redukčním čindilem je chlorid cínatý. Komplex může být také vytvořen reakcí reakčního činidla podle tohoto vynálezu s předem vytvořeným labilním komplexem technecia nebo rhenia a další sloučeniny, známé jako přenašeč ligandu. Tento způsob je znám jako výměna ligandu a je dobře znám odborníkům z oblasti techniky. Labilní komplex se může vytvořit použitím takových přenašečů ligandů, jako je například vínan, citran, glukonát nebo mannitol. Mezi technistan technecia-99m a soli rhenia užitečné podle předloženého vynálezu patří soli s alkalickými kovy, jako je sodná sůl, amonné soli nebo nižší alkylamoniové soli.When the reagents of the invention are used to form a complex of radioactive technetium or rhenium, a complex with technetium, preferably technetium-99m pertechnetate or a rhenium salt in the form of rhenate, is reacted with the reagent in the presence of a reducing agent. The preferred reducing agent is stannous or ferrous dithionite, the most preferred reducing agent is stannous chloride. The complex may also be formed by reacting a reagent of the invention with a preformed labile complex of technetium or rhenium and other compounds known as a ligand transporter. This method is known as ligand exchange and is well known to those skilled in the art. The labile complex may be formed using ligand transporters such as tartrate, citrate, gluconate or mannitol. Technetium-99m pertechnetate and rhenium salts useful in the present invention include alkali metal salts such as sodium salt, ammonium salts or lower alkyl ammonium salts.
Tento vynález zahrnuje také sestavu pro výrobu reakčních činidel označených radioaktivním kovem pro použití jako radiofarmaceutické sloučeniny. Sestava podle vynálezu obsahuje zatavenou nádobku obsahující předem stanovené množství činidla vázajícího CT receptor a popřípadě, jestliže radioaktivním kovem je těch• · · · · · · • · · · · • · · · • · · · · · · ······ • · · · · · · · ·· ·· ··· ··· ·· ·· necium-99m, rhenium-186 nebo rheniiim-188, redukční činidlo. Například se příslušné množství reakčního činidla podle vynálezu zavede do nádobky obsahující redukční činidlo, jako je chlorid cínatý, v množství, které je dostatečné pro označení reakčního činidla techneciem-99m, rheniem-186 nebo rheniem-188. Do sestavy se může zahrnout také příslušné množství přenašeče ligandů, jak byly shora popsány (jako je například vínan, citran, glukonát, glukoheptanát nebo mannitol). Sestava může také obsahovat konvenční farmaceutické pomocné materiály, jako jsou například farmaceuticky přijatelné soli pro úpravu osmotického tlaku, pufry, ochranná činidla a podobné. Tyto složky mohou být v kapalné, zmrazené nebo suché formě. Ve výhodném provedení se složky sestavy připravují v lyofilizované formě. Radioafarmaceutické prostředky označené techneciem-99m, rheniem-186 a rheniem-188 podle předloženého vynálezu se mohou pňpravovat přidáním příslušného množství technecia-99m, rhenia-186 nebo rhenia-188 nebo komplexů těchto radionuklidů do baněk a reakcí za podmínek popsaných níže v příkladech.The invention also encompasses a kit for the manufacture of radiolabelled reagents for use as radiopharmaceutical compounds. The kit of the invention comprises a sealed container containing a predetermined amount of a CT receptor binding agent, and optionally, if the radioactive metal is those. Necium-99m, rhenium-186 or rheniiim-188, reducing agent. For example, an appropriate amount of the reagent of the invention is introduced into a container containing a reducing agent such as stannous chloride in an amount sufficient to label the reagent with technetium-99m, rhenium-186 or rhenium-188. An appropriate amount of a ligand carrier as described above (such as tartrate, citrate, gluconate, glucoheptanate or mannitol) may also be included in the kit. The kit may also include conventional pharmaceutical excipients such as pharmaceutically acceptable salts for adjusting the osmotic pressure, buffers, preservatives and the like. These components may be in liquid, frozen or dry form. In a preferred embodiment, the kit components are prepared in lyophilized form. The technetium-99m, rhenium-186 and rhenium-188 radio-pharmaceutical compositions of the present invention can be prepared by adding appropriate amounts of technetium-99m, rhenium-186 or rhenium-188 or complexes of these radionuclides to flasks and reactions under the conditions described in the Examples below.
Sestava podle vynálezu se může připravovat také ve formě vhodné pro diagnostické zobrazení nebo jako terapeutické činidlo používající radioisotop jodu, zahrnující jod-123 a jod-131, s výhodou jod-123. V tomto provedení sestava obsahuje zatavenou nádobku obsahující předem stanovené množství reakčního činidla vázajícího CT receptor, které je schopno být radioaktivně označeno isotopem jodu.The kit of the invention may also be prepared in a form suitable for diagnostic imaging or as a therapeutic agent using an iodine radioisotope, including iodine-123 and iodine-131, preferably iodine-123. In this embodiment, the assembly comprises a sealed container containing a predetermined amount of a CT receptor binding agent capable of being radiolabelled with an iodine isotope.
Mezi reakční činidla vázající CT receptor vhodná pro použití v tomto provedení patří CT samotný, derivát CT, analog CT, mimetika CT a peptidomimetika CT, která se specificky vážou na CT receptor. Jestliže se v tomto provedení používají peptidová a peptidomimetická reakční činidla vázající CT receptor, tyrosinový zbytek v tomto reakčním činidle může být radioaktivně označen. Tento tyrosinový zbytek se může vyskytovat přirozeně v peptidu nebo v peptidomimetiku nebo se tyrosinový zbytek může přidat do peptidu nebo peptidomimetika v té poloze, která neporušuje navázání reakčního činidla na CT receptory. Dávka, místa a cesty podávání, příprava prostředků a podávaná specifická radioaktivita použitím sestavy podle tohoto provedení jsou zde popsány pro techneciem a rheniem označená reakční činidla pro scintigrafická a terapeutická použití.CT receptor binding reagents suitable for use in this embodiment include CT alone, a CT derivative, a CT analog, CT mimetics, and CT peptidomimetics that specifically bind to the CT receptor. When peptide and peptidomimetic CT receptor binding reagents are used in this embodiment, the tyrosine residue in the reagent may be radiolabeled. The tyrosine residue may be naturally present in the peptide or peptidomimetic, or the tyrosine residue may be added to the peptide or peptidomimetic at a position that does not interfere with the binding of the reagent to the CT receptors. Dosage, sites and routes of administration, formulation compositions, and specific radioactivity administered using the kit of this embodiment are described herein for technetium and rhenium labeled reagents for scintigraphic and therapeutic uses.
•φ φφφφ • · φφ φφ φφ φφ φ φφ φ • · φφφφ • φ φ φφφ φφφ φ φ φ φ φφφ φφφ φφ ··• φ φ φ · · · • φ φ φ φ φ · · · · · · · · · · · · φ
Zobrazovací činidla získaná podle vynálezu se používají pro zobrazování nádorů, zvláště pro zobrazování primárních a metastatických neoplastických míst vyznačujících se neoplastickými buňkami, které exprimují nebo nadexprimují CT receptory, a zvláště takové primární a zvláště metastatické buňky odvozené od nádoru prsu, plic a vaječníků, které byly klinicky nezvládnutelné detekcí použitím konvenčních způsobů. Zobrazovací činidla získaná podle předloženého vynálezu se mohou používat také pro zviditelnění takových orgánů, jako jsou ledviny nebo kosti pro diagnostikování poruch v těchto orgánech.The imaging agents obtained according to the invention are used for imaging of tumors, in particular for imaging primary and metastatic neoplastic sites characterized by neoplastic cells that express or overexpress CT receptors, and in particular those primary and particularly metastatic cells derived from breast, lung and ovarian tumors that have been clinically unmanageable by detection using conventional methods. The imaging agents obtained according to the present invention may also be used to visualize organs such as the kidneys or bones for diagnosing disorders in these organs.
Pro diagnostické účely se podává efektivní diagnostické množství diagnostického nebo radiodiagnostického činidla podle vynálezu, s výhodou intravenózně. U radiodiagnostických provedení se lokalizace radioaktivního označení deteguje konvenčními způsoby, jako je γ-scintigrafie. U neradioaktivních diagnoistických provedení se lokalizace míst akumulace diganostických činidel označených paramagnetickým kovem podle vynálezu provádí způsoby zobrazení magnetickou resonancí.For diagnostic purposes, an effective diagnostic amount of a diagnostic or radiodiagnostic agent of the invention is administered, preferably intravenously. In radiodiagnostic embodiments, the localization of the radiolabel is detected by conventional means such as γ-scintigraphy. In non-radioactive diagnosis embodiments, the localization of the accumulation sites of the paramanic-labeled diganostic agents of the invention is performed by magnetic resonance imaging methods.
Podle tohoto vynálezu se scintigrafická zobrazovací reakční činidla označená techneciem-99m podle vynálezu podávají v jediné jednotkové injektovatelné dávkové formě. Reakční činidla označená techneciem-99m získaná podle vynálezu se mohou podávat intravenózně v jakémkoliv konvenčním mediu pro intravenózní injekci, jako je vodné solné medium nebo medium krevní plasmy. Obecně má jednotková dávka, která se má podávat, radioaktivitu 0,01 mCi až 100 mCi, s výhodou 1 mCi až 20 mCi. Množství roztoku, které se má injekčně podávat v jednotkové dávce, je od 0,01 do 10 ml. Po intravenózním podání se během několika minut provede zobrazení in vivo. Zobrazení se však může provádět také, jestliže je to žádoucí, po hodinách nebo dokonce po delším období od doby, kdy bylo radiaktivně označené reakční činidlo injekčně podáno pacientovi. Ve většině případů se dostatečné množství podané dávky akumuluje v oblasti, která má být zobrazena, během 0,1 hodiny, takže je možné získat scintigrafickou fotografii. Podle tohoto vynálezu se může použít jakýkoliv konvenční způsob scintigrafického zobrazení pro diagnostické účely.According to the invention, the technetium-99m-labeled scintigraphic imaging reagents of the invention are administered in a single unit injectable dosage form. The technetium-99m labeled reagents obtained according to the invention can be administered intravenously in any conventional intravenous injection medium, such as aqueous saline or blood plasma medium. Generally, the unit dose to be administered has a radioactivity of 0.01 mCi to 100 mCi, preferably 1 mCi to 20 mCi. The amount of solution to be injected in a unit dose is from 0.01 to 10 ml. After intravenous administration, in vivo imaging is performed within minutes. However, imaging may also be performed, if desired, hours or even longer than the time when the radiolabeled reagent was injected into the patient. In most cases, a sufficient amount of administered dose accumulates in the area to be imaged within 0.1 hour, so that a scintigraphic photograph can be obtained. Any conventional scintigraphic imaging method for diagnostic purposes can be used according to the present invention.
• · ··· · »· ·»• · ···
Pro účely podle tohoto vynálezu radiotherapie zahrnuje jakýkoliv terapeutický účinek v rozmezí od utišení bolesti do odstranění nádoru nebo remisi příznaků souvisejících s příslušnou rakovinou, která je léčena. Jestliže se pro terapetické účely používají reakční činidla podle vynálezu, jsou radioaktivně označena efektivním množstvím cytotoxického radioisotopu. Pro tento účel se může podávat cytotoxický radioisotop v množství od 10 mCi do 200 mCi jakoukoliv vhodnou klinickou cestou, s výhodou intravenózní injekcí.For the purposes of the present invention, radiotherapy includes any therapeutic effect ranging from pain relief to removal of the tumor or remission of symptoms associated with the particular cancer being treated. When used for therapeutic purposes, the reagents of the invention are radiolabelled with an effective amount of a cytotoxic radioisotope. For this purpose, the cytotoxic radioisotope may be administered in an amount of from 10 mCi to 200 mCi by any suitable clinical route, preferably by intravenous injection.
Podle tohoto vynálezu se efektivní radiodiagnostická nebo radioterapeutická činidla mohou identifikovat následujícím způsobem. Reakční činidla podle vynálezu obsahující sloučeniny vázající CT receptor, včetně CT fragmentů, analogů CT peptidů a CT derivátů, se syntetizují zůsoby podle vynálezu a chelátor radioaktivního kovu se kovalentně naváže na tuto sloučeninu. Reakční činidla se pak uvedou do komplexu s radioaktivním kovem nebo neradioaktivním isotopem, který má chelatační vlastnost podobnou žádanému radioaktivnímu kovu, a navázání CT receptorů se pak vyhodnotí in vitro kempetitivními testy navázání, jak je zde popsáno, použitím CT označeného radioaktivním jodem. Jako příklad této metodologie se ReO používá pro vyhodnocení vhodnosti peptidů vázajících CT receptor pro použití 99m-techneciem radioaktivně označených scintigrafických zobrazovacích činidel, jak je popsáno níže v příkladu 4.According to the present invention, effective radiodiagnostic or radiotherapeutic agents can be identified as follows. Reagents of the invention containing CT receptor binding compounds, including CT fragments, CT peptide analogs, and CT derivatives, are synthesized by the methods of the invention and the radioactive metal chelator is covalently bound to the compound. The reagents are then complexed with a radioactive metal or non-radioactive isotope having a chelating property similar to the desired radioactive metal, and the binding of the CT receptors is then evaluated by in vitro camping binding assays as described herein using radioactive iodine-labeled CT. As an example of this methodology, ReO is used to evaluate the suitability of CT receptor binding peptides for the use of 99m-technetium radiolabeled scintigraphic imaging agents as described in Example 4 below.
Způsoby výroby a označování těchto sloučenin jsou úplněji ilustrovány v následujících příkladech, které ilustrují některé aspekty shora popsaného vynálezu a výhodných výsledků a jsou uvedeny jako ilustrace, nikoliv jako omezení.Methods for making and labeling these compounds are more fully illustrated in the following examples, which illustrate some aspects of the above-described invention and preferred results, and are given by way of illustration, not limitation.
• 9 99• 9 99
9 9 9 • 9 9 99 9 9
999 999999 999
99
9999
Příklady provedení vynálezuDETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
Příklad 1Example 1
Syntéza chelátorů BATSynthesis of BAT chelators
Chelátory BAT, zvláště od S-cysteinu a od ε-aminolysinu odvozené chelátory BAT, se připravují podle způsobů současně vlastněné a současně podané USA patentové přihlášky č. 08/414 424, která je zde zahrnuta jako odkaz.BAT chelators, particularly S-cysteine and ε-aminolysine derived BAT chelators, are prepared according to the methods of co-owned and co-pending U.S. Patent Application Serial No. 08 / 414,424, which is incorporated herein by reference.
Příklad 2Example 2
Syntéza peptidů v pwevné fáziSolid phase peptide synthesis
Syntéza peptidů v pevné fázi (SPPS) se provádí v měřítku 0,25 milimolu (mmolu) použitím syntetizátoru peptidů Applied Biosystems Model 431A a použitím chránění aminového konce 9-fluorenylmethyloxykarbonylovou (Fmoc) skupinou, kondenzací se směsí dicyklohexylkarbodiimid/hydroxybezotriazol nebo 2-(1 H-benzotriazol-1 -yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium-hexafluorfosfát/hydroxybenzotriazolu (HBRU/ /HOBT) a použitím p-hydroxymethyl-henoxymethyl-polystyrenové (HMP pryskyřice, Sasrinu™, chlortritylové pryskyřice pro karboxylový konec kyselin nebo Rink amidové pryskyřice pro karboxylový konec amidů.Solid phase peptide synthesis (SPPS) is performed on a 0.25 millimole (mmole) scale using an Applied Biosystems Model 431A peptide synthesizer and using the 9-fluorenylmethyloxycarbonyl (Fmoc) amino terminus protection, condensation with dicyclohexylcarbodiimide / hydroxybezotriazole or 2- (1) H-benzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-tetramethyluronium hexafluorophosphate / hydroxybenzotriazole (HBRU / / HOBT) and using p-hydroxymethyl-henoxymethyl-polystyrene (HMP resin, Sasrin ™, chlorotrityl carboxylic acid end resin) or Rink amide resins for the carboxyl end of the amides.
Kde je to potřebné, Fmoc-Cys(BAT) a Na-Fmoc-N8-(BAT)Lys se syntetizují tak, jak je popsáno v současně vlastněné a současně podané USA patentové přihlášce č. 08/414 424, která je zde zahrnuta jako odkaz.Where appropriate, Fmoc-Cys (BAT) and Na-Fmoc-N8- (BAT) Lys are synthesized as described in co-owned and co-pending U.S. patent application Ser. No. 08/414 424, which is incorporated herein by reference as link.
Kde je to potřebné, 2-chloracetylové, 2-bromacetylové a 2-brom-3-fenylpropionylové skupiny se zavádějí buď použitím příslušné 2-halogen-kyseliny jako posledního zbytku kondenzovaného během SPPS nebo zpracováním volné aminokyseliny na konci peptidů navázaného na pryskyřici buď s 2-halogenkyselinou/diisopropyl• · ··· · • φφ ·· ·· φ ♦ φ · • φφφφ • φ ··· φφφ • φ φ ··· φφ φφ karbodiimidem/N-hydroxysukcinimidem/NMP nebo anhydridem 2-halogenkyseliny/diisopropylethylaminem/NMP.Where appropriate, the 2-chloroacetyl, 2-bromoacetyl and 2-bromo-3-phenylpropionyl groups are introduced either by using the corresponding 2-halo-acid as the last residue condensed during SPPS or by processing the free amino acid at the end of the peptide bound to either 2 -halogenic acid / diisopropyl • carbodiimide / N-hydroxysuccinimide / NMP or 2-halosuccinic anhydride / diisopropylethylamine • og♦φφ·φodhalod odφod karb karbodod / NMP.
Kde je to vhodné, 2-halogenacylované peptidy vyčištěné na HPLC se cyklizují mícháním 0,1 až 1,0 mg/ml roztoku ve fosforečnanovém nebo hydrogenuhličitanovém t pufru nebo zředěném hydroxidu amonném (pH 8,0), popřípadě obsahujícím 0,5 až 1,0 ’ mM EDTA, nebo acetonitrilu či THF po dobu 1 až 48 hodin. Následuje okyselení kyselinou octovou, lyofilizace a vyčištění HPLC.Where appropriate, HPLC-purified 2-haloacylated peptides are cyclized by stirring a 0.1 to 1.0 mg / ml solution in phosphate or bicarbonate t buffer or dilute ammonium hydroxide (pH 8.0), optionally containing 0.5 to 1 0.1 mM EDTA, or acetonitrile or THF for 1 to 48 hours. Acetic acid acidification, lyophilization and HPLC purification followed.
Kde je to vhodné, peptidy obsahující thiol se nechají zreagovat s komplexujícími částicemi s techneciem-99m s chráněným thiolem a obsahující chloracetylovou skupinu při pH 10 po dobu 0,5 až 4 hodiny za teploty místnosti. Následuje okyselení kyselinou octovou a odpaření roztoku, takže se získá odpovídající adukt peptid-sulfid. Odstranění chránící skupiny a vyčištění se rutinně provádějí tak, jak je to popsáno. Získá se konjugát chelátor-peptid.Where appropriate, thiol-containing peptides are reacted with thiol-protected technetium-99m complexing particles containing a chloroacetyl group at pH 10 for 0.5 to 4 hours at room temperature. Acidification with acetic acid followed by evaporation of the solution yielded the corresponding peptide-sulfide adduct. Deprotection and purification are routinely performed as described. A chelator-peptide conjugate is obtained.
Kde je to vhodné, BSME, BSEE a BSH adukty se připravují zreagováním peptidů obsahujících jeden thiol (5 až 50 mg/ml v DMF pufrovaném na pH 7 N-methylmorfolinem nebo N-ethylmorfolinem nebo 50mM pufru fosforečnanu sodného, pH 7 až 8, popřípadě obsahujícím 0,5 mM EDTA, nebo DMF, THF či acetonitrilu) s 0,5 molámími ekvivalenty BMME (bis-maleimidomethylether), BMEE (bis-maleimidoethylether) nebo BMH (bis-maleimidohexan), předem rozpuštěnými v acetonitrilu, za teploty místnosti po dobu přibližně 1 až 18 hodin. Tento roztok se zahustí a produkt se vyčistí HPLC.Where appropriate, BSME, BSEE and BSH adducts are prepared by reacting peptides containing one thiol (5-50 mg / ml in DMF buffered to pH 7 with N-methylmorpholine or N-ethylmorpholine or 50 mM sodium phosphate buffer, pH 7-8, optionally containing 0.5 mM EDTA, or DMF, THF or acetonitrile) with 0.5 molar equivalents of BMME (bis-maleimidomethyl ether), BMEE (bis-maleimidoethyl ether) or BMH (bis-maleimidohexane), previously dissolved in acetonitrile, at room temperature for about 1 to 18 hours. This solution was concentrated and the product purified by HPLC.
Kde je to vhodné, TSEA adukty se připraví zreagováním peptidu obsahujícího jediný thiol (v koncentracích 10 až 100 mg/ml peptidu v DMF pufrovaném na pH 7 N-methylmorfolinem nebo N-ethylmorfolinem, nebo 5 až 50 mg/ml peptidu v 50mM fosforečnanu sodném, pH 7 až 8, popřípadě obsahujícím 0,5 mM EDTA, nebo DMF, THF či acetonitrilu) s 0,33 molámími ekvivalenty TMEA (tris(2-maleimidoethyl)aminu) předem rozpuštěném v acetonitrilu nebo DMF s nebo bez 1 molámího ekvivalentuWhere appropriate, TSEA adducts are prepared by reacting a single thiol containing peptide (at concentrations of 10-100 mg / ml peptide in DMF buffered to pH 7 with N-methylmorpholine or N-ethylmorpholine, or 5-50 mg / ml peptide in 50 mM sodium phosphate) , pH 7-8, optionally containing 0.5 mM EDTA, or DMF, THF or acetonitrile) with 0.33 molar equivalents of TMEA (tris (2-maleimidoethyl) amine) previously dissolved in acetonitrile or DMF with or without 1 molar equivalent
44
4 4 • ·· • 44 fl «4 4 • ·· • 44 fl «
triethanolaminu za teploty místnosti 1 až 18 hodin. Tyto reakční směsi obsahující adukty se zahustí a adukty se pak vyčistí použitím HPLC.triethanolamine at room temperature for 1 to 18 hours. These reaction mixtures containing the adducts are concentrated and the adducts are then purified using HPLC.
Kde je to vhodné, kondenzuje se (BAM) (N1,N4-bis(2-merkapto-2-methylpropyl)-1,4,10-triazadekan) s peptidem nejdříve aktivováním peptidkarboxylátu se směsí diisopropylkarbodiimid/N-hydroxysukcinimid nebo HBTU/HOBt v DMF, NMP nebo methylenchloridu. Následuje kondenzace v přítomnosti diisopropylethylaminu. Po kondenzaci se odstraní chránění konjugátů jak shora popsáno.Where appropriate (BAM) (N 1 , N 4 -bis (2-mercapto-2-methylpropyl) -1,4,10-triazadecane) is condensed with the peptide by first activating the peptide carboxylate with a diisopropylcarbodiimide / N-hydroxysuccinimide or HBTU mixture / HOBt in DMF, NMP or methylene chloride. This is followed by condensation in the presence of diisopropylethylamine. After condensation, the protection of the conjugates is removed as described above.
Kde je to vhodné, inkorporuje se (BAT) (N6,N9-bis(2-merkapto-2-methylpropyl)-6,9-diazanonanová kyselina) do peptidů jako chráněné deriváty aminokyseliny, jako je (Na(Fmoc-Ns(N-Boc)-S,S'-bistrityl-BAT)lysin (připravené z Na(Fmoc)-lysinu a Ns(N-Boc)-S,S'-bistrityl-BAT, jak je popsáno v příkladu 2 současně vlastněné a současně podané USA patentové přihlášky č. 08/044 825, která je zde zahrnuta jako odkaz) nebo jako (N(Fmoc)-S,S'-bistrityl-BAT)cystein (připravený jako je shora popsáno v příkladu 1F současně vlastněné a doprovázející USA patentové přihlášce č. 08/814 424, která je zde zahrnuta jako odkaz) během syntézy peptidu a potom se odstraní chránění po odštěpení kompletního peptidu ze syntetické pryskyřice.Where appropriate, (BAT) (N 6 , N 9 -bis (2-mercapto-2-methylpropyl) -6,9-diazanonanoic acid) is incorporated into peptides as protected amino acid derivatives such as (Na (Fmoc-Ns) (N-Boc) -S, S'-bistrityl-BAT) lysine (prepared from Na (Fmoc) -lysine and Ns (N-Boc) -S, S'-bistrityl-BAT) as described in Example 2 co-owned and co-pending U.S. patent application Ser. No. 08/044 825, which is incorporated herein by reference) or as (N (Fmoc) -S, S'-bistrityl-BAT) cysteine (prepared as described above in Example 1F co-owned and accompanying US Patent Application No. 08 / 814,424, which is incorporated herein by reference) during peptide synthesis and then deprotection after cleavage of the complete peptide from the synthetic resin.
Kde je to vhodné, připraví se BAT-BS (N-{2-(N',N'-bis(2-sukcinimidoethyl)aminoethyl)}-N6,N9-bis-(2-methyl-2-merkaptopropyl)-6,9-diazanonanamid)ové adukty zreagováním peptidu obsahujícího jediný thiol (v koncentracích 2 až 50 mg/ml peptidu v DMF pufrovaném na pH 7 N-methylmorfolinem nebo N-ethylmorfolinem nebo v 50mM fosforečnanu sodném (pH 7 až 8), popřípadě obsahujícím 0,5 mM EDTA, nebo DMF, THF či acetonitrilu) s 0,5 molámími ekvivalenty BAT-BM (N-{2-(N',N'-bis(2-maleimidoethyl)aminoethyl)}-N9-(terc.butoxykarbonyl)-N6,N9-bis(2-methyl-2-trifenylmethylthiopropyl)-6,9-diazanonanamidu) předem rozpuštěném v acetonitrilu nebo THF za teploty místnosti po dobu přibližně 1 až 18 hodin. Tento roztok se pak odpaří dosucha a reakcí s 10ml TFA a 0,2 ml triethylsilanu po dobu 1 hodiny se odstraní chránění konjugátů (BAT-BS)-peptid. Roztok se zahustí, adukty produktu se vysrážejí etherem a potom se vyčistí HPLC.Where appropriate, BAT-BS (N- {2- (N ', N'-bis (2-succinimidoethyl) aminoethyl)} - N 6 , N 9 -bis- (2-methyl-2-mercaptopropyl)) is prepared. -6,9-diazanonanamide adducts by reacting a single thiol-containing peptide (at concentrations of 2-50 mg / ml peptide in DMF buffered to pH 7 with N-methylmorpholine or N-ethylmorpholine or in 50 mM sodium phosphate (pH 7-8), optionally containing 0.5 mM EDTA, or DMF, THF or acetonitrile) with 0.5 molar equivalents of BAT-BM (N- {2- (N ', N'-bis (2-maleimidoethyl) aminoethyl)} - N 9 - ( tert-butoxycarbonyl) -N 6 , N 9 -bis (2-methyl-2-triphenylmethylthiopropyl) -6,9-diazanonanamide) previously dissolved in acetonitrile or THF at room temperature for about 1 to 18 hours. This solution was then evaporated to dryness and the protection of the (BAT-BS) -peptide conjugates was removed by treatment with 10 ml of TFA and 0.2 ml of triethylsilane for 1 hour. The solution is concentrated, the product adducts are precipitated with ether and then purified by HPLC.
·» ···· φ φ φ φ φ φ· »···· φ φ φ φ φ φ
Kde je to vhodné, prekursory peptidu se cyklizují (mezi aminovými a karboxylovými konci) reakcí chráněného postranního řetězce, N-koncového volného aminu a C-koncové volné kyseliny s difenylfosforylazidem.Where appropriate, peptide precursors are cyclized (between amino and carboxyl termini) by reaction of the protected side chain, the N-terminal free amine and the C-terminal free acid with diphenylphosphoryl azide.
Peptid vázaný na pryskyřici Sasrin™ se štěpí roztokem 1% (hmotn.) TFA v dichlormethanu. Získá se chráněný peptid. Kde je to vhodné, chráněné peptidové prekursory se cyklizují mezi aminovým a karboxylovým koncem reakcí chráněného postranního řetězce, N-koncového volného aminu a volné kyseliny na karboxylovém konci použitím difenylfosforylazidu.The Sasrin ™ resin-bound peptide is cleaved with a solution of 1% (w / w) TFA in dichloromethane. A protected peptide is obtained. Where appropriate, protected peptide precursors are cyclized between the amino and carboxyl termini by reaction of the protected side chain, N-terminal free amine, and free acid at the carboxyl terminus using diphenylphosphoryl azide.
Produkty navázané na HMP nebo Rink amidové pryskyřici se rutinně štěpí a chránění chráněných cyklizovaných peptidů se odstraní použitím roztoku, který obsahuje trifluoroctovou kyselinu (TFA) nebo TFA a methylenchlorid, popřípadě obsahující vodu, thioanisol, ethandithiol a triethylsilan nebo triisopropylsilan v poměrech 100:5:5:2,5:2 za teploty místnosti 0,5 až 3 hodiny. Kde je to vhodné, produkty se opětovně S-tritylují ve směsi trifenolmethanol/TFA a do peptidu se použitím (Boc)2O znovu zavedou N-Boc skupiny.The products bound to the HMP or Rink amide resin are routinely cleaved and the protected cyclized peptides are removed using a solution containing trifluoroacetic acid (TFA) or TFA and methylene chloride, optionally containing water, thioanisole, ethanedithiol and triethylsilane or triisopropylsilane in ratios of 100: 5: 5: 2.5: 2 at room temperature for 0.5 to 3 hours. Where appropriate, the products are re-S-tritylated in triphenol-methanol / TFA and the N-Boc groups are reintroduced into the peptide using (Boc) 2 O.
Kde je to vhodné, thiolové funkce v peptidové nebo peptidometické sekvenci navržené pro další zpracování s prosthetickou skupinu byly chráněny použitím sloučeniny, jako je S-terc. butyl (za vzniku směsných terc.butyl-disulfidů) nebo p-methoxybenzyl. S-terc.butyl-skupiny se odstraní reakcí s roztokem dithiothreitolu nebo merkaptoethanolu, při čemž se p-methoxybenzylové skupiny odstraní použitím etherátu fluoridu boritého v kyselině trifluoroctové v přítomnosti vychytávače volných radikálů, jako je m-kresol. Protetické peptidy obsahující skupiny vázající radioaktivní kov se připraví SPPS se zakončením N-koncovou 2-halogenacetylovou skupinou. Protetická skupina se odstraní z pryskyřice a jakékoliv thiolové skupiny se chrání, například tritylovou skupinou. Halogenacylovaná sekvence se pak zkondenzuje s peptidem obsahujícím thiol za v podstatě stejných podmínek, jak shora popsáno pro « · · · · · * · 99 99Where appropriate, thiol functions in the peptide or peptidometric sequence designed for further treatment with the prosthetic group were protected using a compound such as S-tert. butyl (to form mixed tert-butyl disulfides) or p-methoxybenzyl. S-tert-butyl groups are removed by treatment with a solution of dithiothreitol or mercaptoethanol, wherein the p-methoxybenzyl groups are removed using boron trifluoride etherate in trifluoroacetic acid in the presence of a free radical scavenger such as m-cresol. Prosthetic peptides containing radioactive metal-binding groups are prepared by SPPS terminated with an N-terminal 2-haloacetyl group. The prosthetic group is removed from the resin and any thiol groups are protected, for example by a trityl group. The halo-acylated sequence is then condensed with a thiol-containing peptide under substantially the same conditions as described above for 99 99
9 9 9 9 9 9 99 9 9 9 9 9
9 9 9 9 99
9 9 999 9999,999,999
9 9 99 9 9
9 999 99 9 9 • · «9,999 99 9 9 • · «
9 99 9
9 99 9
9 9 99 9 9
99 přípravu cyklických thiooetherů. Odstranění zbývajících chránících skupin se pak dosáhne použitím způsobů, které jsou zde popsány, takže se získá konečný produkt.99 preparation of cyclic thioethers. Removal of the remaining protecting groups is then achieved using the methods described herein to give the final product.
Surové peptidy se vyčistí preparativní vysokotlakou kapalinovou chromatografií (HPLC) použitím kolony Waters Δ Pak C18 a gradientovou elucí 0,1% (hmotn.) trifluoroctovou kyselinou (TFA) ve vodě upravené acetonitrilem. Acetonitril se z eluovaných frakcí odpaří a ty se pak lyofilizují. Identita každého produktu se potvrdí hmotností spektrometrií bomabardováním rychlými atomy (FAB-MS) nebo ES (ES-MS).The crude peptides were purified by preparative high pressure liquid chromatography (HPLC) using a Waters-Pak C18 column and gradient elution with 0.1% trifluoroacetic acid (TFA) in acetonitrile-treated water. The acetonitrile was evaporated from the eluted fractions and lyophilized. The identity of each product was confirmed by FAB-MS or ES (ES-MS) mass spectrometry.
Peptidy vázající CT receptor, syntetizované deriváty a analogy, které se zde získávají, stejně jako produkty těchto syntéz identifikované ES-MS nebo FAB-MS, jsou uvedeny níže v tabulce I.CT receptor binding peptides, synthesized derivatives and analogs obtained herein, as well as products of these syntheses identified by ES-MS or FAB-MS, are listed in Table I below.
Tabulka I peptid peptid ReO komplexTable I peptide peptide ReO complex
1. CH?CO.SNLST.Hhc.VLGKLSC(BAT)ELHKLQTYPRTCH? CO.SNLST.Hhc.VLGKLSC (BAT) ELHKLQTYPRT
NTGSGTP.amid 3679 3877*NTGSGTP.amid 3679 3877
2. CH^CO.SNLST.Hhc.VLGKLSCELHKLOTYPRTNTGS2. CH ^ CO.SNLST.Hhc.VLGKLSCELHKLOTYPRTNTGS
GTP.(s-K)GC.amid 3687* 3886GTP ( s- K) GC.amide 3687 * 3886
3. CH?CO.SNLST.Hhc.VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGS.3. CH? CO.SNLST.Hhc.VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGS.
GTP.amid 3373* NAGTP.amid 3373 * NA
4. CH?CO.SNLST.Hhc.VLGKLSC(CH,CO.GGCK.amid))·4. CH ? CO.SNLST.Hhc.VLGKLSC (CH, CO.GGCK.amid)) ·
ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid 3873* 4078ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid 3873 * 4078
5. CH7C0.SNLST.Hhc.VLGKLSC(CH?C0·(B-Dap)KCK.5. CH 7 C0.SNLST.Hhc.VLGKLSC (CH ? C0 · (B-Dap) KCK).
amid)ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid 3777* 3975amide) ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid 3777 * 3975
6. CH,C0.SNLST.Hhc.VLGKLSC(CH9C0.fe-K)·7. CH, C0.SNLST.Hhc.VLGKLSC (CH9C0.fe-K) ·
GCE.amid))ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid 3849* 4047GCE.amid)) ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid 3849 * 4047
7. CH9CO.SNLST.Hcv.VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGS.7. CH9CO.SNLST.Hcv.VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGS.
·· φφφ ♦ φφφ · » φ · φ φ · φ « · φ * · φ·· φ φ φ φ φ »» · · · ·
ΦΦ *· · · ΦΦ*ΦΦ · · ·
ΦΦ ·· • · · · • · · Φ ♦ · · ΦΦΦ Φ ΦΦΦ · · · · Φ Φ Φ Φ Φ
ΦΦ ΦΦΦΦ ΦΦ
GTP.amid 3360*GTP.amid 3360 *
8. CH?CO.SNLST.Hcv.VLGKLSC(CH,CO.GGCK.amid).8. CH ? CO.SNLST.Hcv.VLGKLSC (CH, CO.GGCK.amide).
ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid 3762*ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid 3762 *
9. CH?CO.SNLST.Hcv.VLGKLSC(CH?CO.(B-Dap)KCK· ,amid))ELHKLQTYPRTNTGS.GTP.amid 3862*9. CH? CO.SNLST.Hcv.VLGKLSC (CH? CO. (B-Dap) KCK ·, amide)) ELHKLQTYPRTNTGS.GTP.amid 3862 *
10. CH?CO.SNLST.Hcv.VLGKLSC(CH,CO.fe-K)·10. CH ? CO.SNLST.Hcv.VLGKLSC · CH · CO.fe-K ·
GCE.amid)ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid 3835GCE.amid) ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid 3835
11- CH,CO.SNLST.Cvs.VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGS.11- CH, CO.SNLST.Cvs.VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGS.
.GTP.amid 3346*.GTP.amid 3346 *
12. CH?CO.SNLST.Cys.VLGKLSC(CH,CO.GGCKamid).12. CH ? CO.SNLST.Cys.VLGKLSC (CH, CO.GGCCamid).
ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid 3748*ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid 3748 *
13. CHyCO.SNLST.Cvs.VLGKLSCfCHoCOTB-DapY13. CHyCO.SNLST.Cvs.VLGKLSCfCHoCOTB-DapY
KCK.amid)LHKLQTYPRTNTGSGTP.amid 3848*KCK.amid) LHKLQTYPRTNTGSGTP.amid 3848 *
14. CHpCO.SNLST.Cvs.VLGKLSCfCHoCOTs-K).14. CHpCO.SNLST.Cvs.VLGKLSCfCHoCOTs-K).
GCE.amid)ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid 3820GCE.amid) ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid 3820
15. SNLST.Asu.VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGSGTP.15. SNLST.Asu.VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGSGTP.
.amid 3356.amid 3356
16. SNLST.Asu.VLGKLSCfCH,CO.(B-Dap)KCK.amid))ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid 385816. SNLST.Asu.VLGKLSCfCH, CO. (B-Dap) KCK.amid)) ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid 3858
17. SNLST.Asu.VLGKLSCELHKLQTYPRTDVGAGTP.17. SNLST.Asu.VLGKLSCELHKLQTYPRTDVGAGTP.
.amid 3338.amid 3338
18. SNLST.Acu.VLGKLSC(CH,CO.(B-Dap)KCK.18. SNLST.Acu.VLGKLSC (CH, CO. (B-Dap) KCK).
,amid)ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid 3841, amide) ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid 3841
NAON
39623962
40634063
40334033
NAON
39473947
40484048
40194019
NAON
40574057
NAON
4040 * znamená M+ stanovené hmotnostní spektrometrií (ES) Pro všechny ostatní peptidy bylo M+ stanoveno FAB MS.4040 * means M + as determined by mass spectrometry (ES) For all other peptides, M + was determined by FAB MS.
·· ···· φ · • · • * • · · • 9 ·· ·· • · ·· · · a · • · · · · · • · · ··· 9999 9 9 9 9 999 999 999
9 9 99 9 9
999 999 99 99999 99 99 99
Příklad 3Example 3
Obecný způsob radioaktivního označování techneciem-99mGeneral method of radioactive labeling with technetium-99m
0,1 mg peptidů připraveného jako v příkladu 2 se rozpustí v 0,1 ml nebo 0,2 ml vody nebo 0,9% (hmotn.) solného roztoku. Gluceptát technecia-99m se připraví naplněním nádobky Glucoscan (E. I. Du Pont de Nemours, lne., Wilmington, De.) 0,25 ml technistanu sodného s techneciem-99m obsahujícím až 200 mCi a nechá se stát 15 minut za teploty místnosti. K peptidů se pak přidá 25 μΙ gluceptátu technecia-99m a reakce se nechá 15 až 60 minut probíhat za teploty místnosti nebo 10 až 30 minut pň 100 °C. Potom se zfiltruje 0,2gm filtrem.0.1 mg of the peptides prepared as in Example 2 are dissolved in 0.1 ml or 0.2 ml of water or 0.9% (w / w) saline. Technetium-99m Gluceptate was prepared by filling a Glucoscan vial (E.I. Du Pont de Nemours, Inc., Wilmington, De.) With 0.25 ml of technetium-99m sodium pertechnetate containing up to 200 mCi and allowed to stand at room temperature for 15 minutes. 25 μΙ of technetium-99m gluceptate are then added to the peptides and the reaction is allowed to proceed at room temperature for 15 to 60 minutes or at 100 ° C for 10 to 30 minutes. It is then filtered through a 0.2 µm filter.
Čistota techneciem-99m označeného peptidů se stanoví HPLC na obrácených fázích za následujících podmínek: analytická kolona Waters Δ Pak C-18, 5μηη, 3,9 mm x 150 mm, byla naplněna každým radioaktivně označeným peptidem a peptidy se eluují rozpouštědlem s rychlostí průtoku 1 ml/min (Δ-Pak). Gradientová eluce se provádí gradientem 20 až 50 % (hmotn.) směsi rozpouštědlo B/rozpouštědlo A (rozpouštědlo A znamená 0,1% CF3COOH ve vodě a rozpouštědlo B znamená 0,1% CF3COOH ve směsi 90/10 CH3CN/H2O) po dobu dvaceti minut, následuje 3 minuty směs 100 % B/A.The purity of the technetium-99m labeled peptides was determined by reverse phase HPLC under the following conditions: a Waters-Pak C-18, 5µηη, 3.9mm x 150mm analytical column was loaded with each radiolabeled peptide and the peptides eluted with solvent at a flow rate of 1 ml / min (Δ-Pak). The gradient elution is carried out with a gradient of 20 to 50% (w / w) solvent B / solvent A (solvent A means 0.1% CF 3 COOH in water and solvent B means 0.1% CF 3 COOH in 90/10 CH 3 CN / H 2 O) for 20 minutes, followed by a 100% B / A mixture for 3 minutes.
Radioaktivní složky se detegují použitím in-line radiometrického detektoru napojeného na integrující zapisovač. Gluceptát technecia-99m a technistan sodný s techneciem-99m se za těchto podmínek eluují mezi 1 a 4 minutami, zatímco peptidy označené techneciem-99m se eluují za mnohem delší dobu. Peptidy byly detegovány in-line spektrofotometrickou detekcí při 220 nm.Radioactive components are detected using an in-line radiometric detector connected to an integrating recorder. Under these conditions, technetium-99m gluconate and technetium-99m sodium pertechnetate elute between 1 and 4 minutes, whereas the technetium-99m-labeled peptides elute for a much longer time. Peptides were detected by in-line spectrophotometric detection at 220 nm.
Komplexy neradioaktivního rhenia byly připraveny současným rozpuštěním každého peptidového reakčního činidla podle vynálezu s jedním molárním ekvivalentem tetrabutylamonium-oxotetrabromrheničnanu (+5), který se připraví podle Cottona a spol. (Jnorg. Chem. 1996, 5, 9 až 16.) v dimethylformamidu nebo ve směsi • · · ·Non-radioactive rhenium complexes were prepared by co-dissolving each peptide reagent of the invention with one molar equivalent of tetrabutylammonium oxotetrabromorate (+5), prepared according to Cotton et al. (Jnorg. Chem. 1996, 5, 9-16) in dimethylformamide or in a mixture.
acetonitril/voda a mícháním 0,5 až 5 dnů. Komplexy rhenia se isolují HPLC na obrácených fázích, jak je shora popsáno pro peptidy označené techneciem-99m, a byly charakterizovány FABMS nebo ESMS. Neradioaktivní peptidy se detegují jako peptidy in-line spektrofotometrickou detekcí při 220 nm.acetonitrile / water and stirring for 0.5 to 5 days. The rhenium complexes were isolated by reverse phase HPLC as described above for the technetium-99m-labeled peptides and were characterized by FABMS or ESMS. Non-radioactive peptides are detected as peptides by in-line spectrophotometric detection at 220 nm.
Komplexy s radioaktivním rheniem, použitím například Re-186 nebo Re-188, se připraví z příslušných rhenistanových solí použitím stejného postupu jako při označování techneciem-99m nebo přidáním redukčního činidla k roztoku peptidu a rhenistanu, nebo popřípadě použitím činidla pro přenos ligandu, jako je citrát, a inkubací reakce za teploty mezi teplotou místnosti a 100 °C po dobu mezi 5 a 60 minutami.Radioactive rhenium complexes, using, for example, Re-186 or Re-188, are prepared from the corresponding perhenate salts using the same procedure as for technetium-99m labeling or by adding a reducing agent to the peptide and rhenistan solution, or optionally using a ligand transfer agent such as citrate, and incubating the reaction at a temperature between room temperature and 100 ° C for between 5 and 60 minutes.
Výsledky čištění peptidů, peptidů označených techneciem-99m a peptidů komplexovaných s ReO na HPLC jsou uvedeny v tabulce II.The results of HPLC purification of peptides, technetium-99m -peptides, and peptides complexed with ReO are shown in Table II.
Tabulka II peptid peptid ReO komplexTable II peptide peptide ReO complex
1. CH?CO. SNLST. Hhc.VLGKLSCfBAOELHKLQTYPRT.1. CH? CO. SNLST. Hhc.VLGKLSCfBAOELHKLQTYPRT.
7. CH?CO.SNLST.Hcv.VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGS.7. CH? CO.SNLST.Hcv.VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGS.
» · · > · · • •to « • · · · • toto • to ·· ·· · · ·· To to to to toto toto toto toto toto toto toto toto
Data znamenají retenční časy při HPLC v minutách.Data are HPLC retention times in minutes.
• «• «
Příklad 4Example 4
Biologické testyBiological tests
A. Testy inhibice navázáníA. Binding Inhibition Assays
Peptidová reakční činidla v rozsahu tohoto vynálezu nebo jejich provedení komplexovaná s ReO byla testována použitím in vitro testů, které měří jejich schopnost inhibovat specifické navázání 125I-CT na CT receptor použitím membrán z krysího mozku nebo z buněčné linie nádoru prsu a u celých buněk z buněčné linie nádoru prsu, jako je podrobně popsáno níže.Peptide reagents within the scope of this invention or embodiments thereof complexed with ReO were tested using in vitro assays that measure their ability to inhibit specific binding of 125 I-CT to the CT receptor using rat brain or breast tumor cell lines and whole cell from the cell line. breast tumor lines as detailed below.
Analýzy používající psomální membránové frakce krysího mozku a T-47D buňky (získané z Americké sbírky typů kultur, American type Culture Collection, Rockville, Md., ATCC Accession No. HTB-133) byly používány pro identifikování analogů s vysokou afinitou na CT receptor způsobem podle Fishera a spol. (British J. Cancer 1977, 35, 777 až 784.). Ve stručnosti - tkáň se rozseká na malé kousky a zhomogenizuje se. Membrány se několikrát promyjí, analyzují se na obsah proteinu a použijí se v testu navázání. Mebránový protein byl inkubován s 0,1 μϋί ^-lososového CT (Amersham, Cleveland, Oh.) v přítomnosti nebo nepřítomnosti různých koncentrací reakčních činidel, která se mají testovat. Byla testována jak nekomplexovaná reakční činidla tak reakční činidla komplexovaná s ReO. Stoprocentní specifické navázání 135I-CT na CT receptor bylo definováno jako rozdíl mezi úplným navázáním 135I-CT a nespecifickým navázáním 125I-CT měřeným v přítomnosti koncentrace saturující receptor (1 μΜ) nadbytku neoznačeného lososového CT (Sigma, St. Louis, Mo.). Koncentrace, při které testovaná reakční činidla inhibovala specifické navázání 125I-CT z 50 %, byla definována jako ICsoVýsledky navázání na membránové prostředky CT receptorů pro každé z testovaných reakčních činidel jsou uvedeny v tabulce III. Tyto výsledky ukazují, že peptidová reakční činidla v rozsahu tohoto vynálezu a ReO komplexy těchto reak• · · • · · · • · · · • · · · ·· ·· • · · 4 • · · 4 • · · · · · 4 čních činidel se vážou s vysokou afinitou na nádorové buňky a na mozkové membrány exprimující CT receptor.Assays using rat brain brain and T-47D membrane fractions (obtained from the American Type Culture Collection, Rockville, Md., ATCC Accession No. HTB-133) were used to identify analogs with high affinity for the CT receptor by according to Fisher et al. (British J. Cancer 1977, 35, 777-784). In brief, the tissue is chopped into small pieces and homogenized. The membranes are washed several times, analyzed for protein content and used in the binding assay. Mebrane protein was incubated with 0.1 μϋβ -losose CT (Amersham, Cleveland, OH) in the presence or absence of various concentrations of reagents to be tested. Both uncomplexed reagents and reagents complexed with ReO were tested. The 100% specific binding of 135 I-CT to the CT receptor was defined as the difference between full 135 I-CT binding and non-specific binding of 125 I-CT measured in the presence of a saturating receptor concentration (1 μΜ) of excess unlabeled salmon CT (Sigma, St. Louis, Mo .). The concentration at which the test reagents inhibited specific binding of 125 I-CT by 50% was defined as IC 50. The results of binding to the CT receptor membrane compositions for each of the reagents tested are shown in Table III. These results show that the peptide reagents within the scope of the invention and the ReO complexes of these reactions are 4 ' 4 ' 4 ' The topical agents bind with high affinity to tumor cells and brain membranes expressing the CT receptor.
Podobné pokusy bylo prováděny s dalšími peptidovými reakčními činidly v rozsahu tohoto vynálezu použitím celých T-47D buněk a MCF-7 buněk (ATCC č. HTB-22). Testy navázání buněk byly prováděny v podstatě způsobem podle Findlaye a spol. (J. Endocrinol. 1990, 130, 321 až 326.). Ve stručnosti - buňky byly promyty v solném roztoku a resuspendovány v Hankově vyváženém solném roztoku. Jeden až dva miliony buněk byly inkubovány s 0,1 μθΐ 125l-lososového CT v nepřítomnosti a v přítomnosti 1 μΜ neznačeného lososového CT, aby se stanovila hodnota 100% specifického navázání. Buňky se inkubují s 0,1 pCi 125I-CT v přítomnosti nebo nepřítomnosti různých koncentrací reakčních činidel, která mají být testována, v nekomplexované a/nebo komplexované (s ReO) formě. Hodnoty IC50 byly stanoveny jak shora popsáno. Výsledky pro každé z testovaných reakčních činidel jsou uvedeny v tabulce IV.Similar experiments were performed with other peptide reagents within the scope of the invention using whole T-47D cells and MCF-7 cells (ATCC No. HTB-22). Cell binding assays were performed essentially according to the method of Findlay et al. (J. Endocrinol. 1990, 130, 321-326). Briefly, the cells were washed in brine and resuspended in Hank's balanced salt solution. One to two million cells were incubated with 0.1 μθΐ of 125 L-salmon CT in the absence and in the presence of 1 μΜ of unlabeled salmon CT to determine the value of 100% specific binding. Cells are incubated with 0.1 pCi of 125 I-CT in the presence or absence of various concentrations of reagents to be tested in uncomplexed and / or complexed (with ReO) form. IC 50 values were determined as described above. The results for each of the reagents tested are shown in Table IV.
Tabulka IIITable III
Nahražení 125I-CT z CTR v T-47D a mozkových membránách krys CT-mimetickými peptidy struktura peptidu T-47D mozek krysReplacement of 125 I-CT from CTR in T-47D and Rat Brain Membranes CT-Mimetic Peptides T-47D Peptide Brain Structure
ICso Kj IC50 KIC50 Kj IC50 K
CH?CO.SNLST.Hhc.VLGKLSCfBAT)ELHKLQ7YPRT.CH ? CO.SNLST.Hhc.VLGKLSCfBAT) ELHKLQ7YPRT.
NTGSGTP.amid 0,53 0,41 2,6 NDNTGSGTP.amid 0.53 0.41 2.6 ND
CH?CO.SNLST.Hhc.VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGS.CH ? CO.SNLST.Hhc.VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGS.
GTP.(e-K)GC.amid 16 12 18 ND(E-K) GC.amid 16 12 18 ND
CH?CO.SNLST.Hhc.VLGKLSC(BAT)ELHKLQTYPRT.CH? CO.NLST.Hhc.VLGKLSC (BAT) ELHKLQTYPRT.
NTGSGTP.amid (ReO)NTGSGTP.amid (ReO)
CH^CO.SNLST.Hhc.VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGS.CH ^ CO.SNLST.Hhc.VLGKLSCELHKLQTYPRTNTGS.
1,5 1,2 3,0 ND1.5 1.2 3.0 ND
GTP.(e-K)GC.amid (ReO)GTP (e-K) GC.amide (ReO)
22 22 ND22 22 ND
Tabulka IVTable IV
Nahrazení 125I-CT z T47D (buňky a membrány) a MCF-7 buněk sekvenceReplacement of 125 I-CT from T47D (cell and membrane) and MCF-7 cells sequence
IC50 IC50 IC50 (nM)x (nM)y (nM)z IC 50 IC 50 (nM) x (nM) y (nM) z
3. CHgCO.SNLST.Hhc.VLGKLSCELHKLQTYPRT.3. CHgCO.SNLST.Hhc.VLGKLSCELHKLQTYPRT.
NTGSGTP.amid 1,6 nd ndNTGSGTP.amid 1.6 nd nd
4. CH?CO.SNLST.Hhc.VLGKLSC(CH,CO.GGCK.amid))ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid 2,6 nd nd4. CH ? CO.SNLST.Hhc.VLGKLSC (CH, CO.GGCK.amid)) ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid 2.6 nd
5. CH?CO.SNLST.Hhc.VLGKLSC(CH?CO.(ft-DaDY5. CH ? CO.SNLST.Hhc.VLGKLSC (CH? CO. (Ft-Dady
KCK.amid)ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid.ReO nd 0,42 5,8KCK.amid) ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid.ReO nd 0,42 5,8
6. CH?CO.SNLST.Hhc.VLGKLSC(CK>CO.(e-K).6. CH 2 CO.SNLST.Hhc.VLGKLSC (CK> CO. (E-K)).
GCE.amid).ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid.ReO nd 0,33 3,3 8. CH?CO.SNLST.Hcv.VLGKLSC(CH,CQ.GGCK.amid)ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid.ReO nd 0,83 4,8GCE.amid) .ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid.ReO nd 0.33 3.3 8. CH ? CO.SNLST.Hcv.VLGKLSC (CH, CQ.GGCK.amid) ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid.ReO nd 0.83 4.8
9- CH?CO.SNLST.Hcv.VLGKLSC(CH,CO.(B-Dap).9- CH ? CO.SNLST.Hcv.VLGKLSC (CH, CO. (B-Dap)).
KCKamid)ELHKLQTYPRTNTGS.GTP.amid.ReO nd 0,84 nd 10. CH^CO.SNLST.Hcy.VLGKLSCfCHoCQ.fe-KYKCKamid) ELHKLQTYPRTNTGS.GTP.amid.ReO nd 0.84 nd 10. CH ^ CO.SNLST.Hcy.VLGKLSCfCHoCQ.fe-KY
GCE.amid)ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid.ReO nd 0,89 ndGCE.amid) ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid.ReO nd 0.89 nd
12. CH?CO.SNLST.Cvs.VLGKLSC(CH?CQ.GGCK.amid)ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid.ReO nd 1,0 5,2 13- CHgCO.SNLST.Cvs.VLGKLSC(CH,CQ.(a-DaD).12. CH ? CO.SNLST.Cvs.VLGKLSC (CH ? CQ.GGCK.amid) ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid.ReO nd 1.0 5.2 13-CHgCO.SNLST.Cvs.VLGKLSC (CH, CQ. (Α-DaD)).
KCK.amid)LHKLQTYPRTNTGSGTP.amid.ReO nd 2,9 nd 14. CH?CO.SNLST.Cvs.VLGKLSC(CH>CQ.fe-K).KCK.amid) LHKLQTYPRTNTGSGTP.amid.ReO nd 2.9 nd 14. CH? CO.SNLST.C vs. VGGKLSC (CH> CQ.fe-K).
GCE.amid)ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid.ReO nd 2,6 1,9 16. SNLST.Asu.VLGKLSC(CH,CQ.(B-Dap)KCK.amid)ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid.ReO nd 2,7 8,0 • « ·· · » · ······ • · · · « · ♦ · • · « · · · · · · · · · «·GCE.amid) ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid.ReO nd 2,6 1,9 16. SNLST.Asu.VLGKLSC (CH, CQ. (B-Dap) KCK.amid) ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid.ReO nd 2,7 8,0 • · · · · · · · · • • • • • • • • • • • «•
18. SNLST.Acu.VLGKLSC(CH,CO.(B-Dap)KCK.amid)ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid.ReO nd 0,55 7,018. SNLST.Acu.VLGKLSC (CH, CO. (B-Dap) KCK.amid) ELHKLQTYPRTNTGSGTP.amid.ReO nd 0.55 7.0
CSNLSTCVLGKLSQELHKLQIYPRTNTGSGTP-NH, (lososový kalcitonin) nd nd 12,3 nd = neděláno při čemž x T-47D buněčné merrtbrány y celé T-47D buňky z celé MCF-7 buňkyCSNLSTCVLGKLSQELHKLQIYPRTNTGSGTP-NH, (salmon calcitonin) nd nd 12.3 nd = not done while x T-47D cell merrtranes y whole T-47D cells from whole MCF-7 cell
Tyto výsledky ukazují, že peptidová reakční činidla v rozsahu tohoto vynálezu a ReO komplexy těchto peptidů byly schopny specifického navázání na CT receptory na celých buňkách a že reakční činidla byla silnými inhibitory CT navázání u dvou různých buněčných linií nádoru prsu exprimujících CT receptor.These results indicate that the peptide reagents within the scope of this invention and the ReO complexes of these peptides were capable of specifically binding to whole cell CT receptors and that the reagents were potent inhibitors of CT binding in two different CT receptor expressing breast tumor cell lines.
B. Exprese CT receptoru v buněčných liniích rakoviny prsuB. Expression of CT receptor in breast cancer cell lines
Navázání 12I-CT na celé buňky bylo použito pro vyhodnocení hustoty CT receptoru u sedmi různých lidských buněčných linií nádoru prsu. Místní hustota na buňku byla stanovena pro MCF-7 buňky v přítomnosti různých koncentraí CT, aby se dosáhlo nasycení na receptorech. Data pak byla linearizována způsobem podle Scatcharda a spol. (/V. Y. Acad. Sci. 1949, 51, 600 až 672.), aby se vyhodnotila hustota receptoru. Stručně - křivky nasycení byly linearizovány, hodnota Kd byla vypočtena jako -1/směrnice a hodnota Bmax byla rovna průsečíku křivky s osou x. Další buněčné linie (každá z těch, které byly získány z ATTC, Rockville, Md.) byly srovnávány s buňkami MCF-7 při jediné koncentraci 125I-CT a tak byla vyhodnocena jejich hustota CT receptoru. Výsledky jsou souhrnně uvedeny v tabulce V.Binding of 12 I-CT to whole cells was used to evaluate the density of the CT receptor in seven different human breast tumor cell lines. The local cell density was determined for MCF-7 cells in the presence of various concentrations of CT to achieve receptor saturation. The data was then linearized according to the method of Scatchard et al. (/ VY Acad. Sci. 1949, 51, 600-672) to evaluate receptor density. Briefly, the saturation curves were linearized, the Kd value was calculated as -1 / slope, and the B max value was equal to the intersection of the x-axis curve. Other cell lines (each obtained from ATTC, Rockville, Md.) Were compared to MCF-7 cells at a single concentration of 125 I-CT to assess their CT receptor density. The results are summarized in Table V.
Tabulka VTable V
Tato data ukazují, že 86% (6 ze 7) testovaných buněčných linií rakoviny prsu bylo positivních na CT receptory. Cílový receptor pro reakční činidla podle vynálezu je tedy přítomen ve většině testovaných buněčných liniích rakoviny prsu. Nedávno bylo zjštěno, že cílový receptor pro reakční činidla podle vynálezu je nadexprimován u primárních rakovin prsu (Gíllespie a spol.: Int. J. Cancer1997, 73, 812 až 815.). Tyto výsledky ukazují, že CT peptidy podle vynálezu jsou vhodné pro přípravu užitečných místně specifických reakčních činidel pro diagnostikování a léčení nádorů u lidí.These data show that 86% (6 out of 7) of the breast cancer cell lines tested were positive for CT receptors. Thus, the target receptor for the reagents of the invention is present in most of the breast cancer cell lines tested. Recently, it has been discovered that the target receptor for the reagents of the invention is overexpressed in primary breast cancers (Gillespie et al., Int. J. Cancer 1997, 73, 812-815). These results indicate that the CT peptides of the invention are useful for preparing useful site-specific reagents for diagnosing and treating tumors in humans.
C. In vivo testC. In vivo assay
Buněčné linie rakoviny prsu byly testovány na expresi receptorů. Nejlepší buněčné linie byly vybrány pro implantaci štěpu do myší s deficitem imunity. Tyto nádorové modely byly použity pro vyhodnocení nádorového cílového potenciálu in vivo vysoce afinitních peptidů identifikovaných ve shora uvedených in vivo testech.Breast cancer cell lines were tested for receptor expression. The best cell lines were selected for implantation of the graft in immune deficient mice. These tumor models were used to evaluate the tumor target potential in vivo of the high affinity peptides identified in the above in vivo assays.
Buňky rakoviny prsu (T47D a MCF-7) exprimující CT receptor byly implantovány do myší s deficitem imunity nebo do krys Sprague-Dawley a nádory byly nechány růst. Pro testování nových Tc-CT peptidů byly myším nebo krysám s nádorem ·· » · » · • · · • · • · • ·· · injekčně podáno přibližně 0,025 mCi při přibližně 6 mCi/10 nmolů peptidů. Zvířata byla cervikálně posunuty a staticky zobrazovány po dobu 5 minut γ-kamerou. Biologická distribuce Tc-CT peptidů byla pak stanovena vyhodnocením krve, nádoru, cílových orgánů a svalů γ-počítačem spolu se standardními podíly injektované dávky. Časové body pro biologickou distribuci byly vybrány tak, aby představovaly časnou, střední a pozdní fázi vymizení Tc-CT analogu. Studie biologické distribuce ukázaly, že optimální poměry signálů k šumu jsou v době 90 minut po injekci. Pro vyhodnocení potenciálu vybraných analogů zobrazovat nádor byl poměr radioaktivity v krvi a různých tkáních srovnáván s poměry v nádoru. Representativní data biologické distribuce po 90 minutách jsou uvedena níže v tabulce VI.CT receptor-expressing breast cancer cells (T47D and MCF-7) were implanted in immune-deficient mice or Sprague-Dawley rats and tumors were allowed to grow. To test new Tc-CT peptides, approximately 0.025 mCi at approximately 6 mCi / 10 nmoles of peptides were injected into tumor-bearing mice or rats. Animals were cervically shifted and statically imaged for 5 minutes with a γ-camera. The biological distribution of Tc-CT peptides was then determined by evaluation of blood, tumor, target organs and muscles by γ-counter along with standard injected dose fractions. The time points for biodistribution were selected to represent the early, middle and late phase of Tc-CT analog disappearance. Biological distribution studies have shown that optimum signal to noise ratios are within 90 minutes of injection. To assess the tumor-displaying potential of selected analogues, the ratio of radioactivity in blood to various tissues was compared to that in the tumor. Representative biodegradation data after 90 minutes are shown in Table VI below.
• I · « • ♦ · 1 ··· · ·«• I · • · 1 ··· · · «
Tabulka VITable VI
Číslování peptidů odpovídá číslování v tabulkách I až IV.The numbering of peptides corresponds to the numbering in Tables I to IV.
3 T-47D nádor u nahých myší b MCF-7 štěp rakoviny prsu u nahých myší 0 různé prostředky 3 T-47D tumor in nude mice b MCF-7 breast cancer graft in nude mice 0 various means
Tomu je třeba rozumět tak, že předcházející popis zahrnuje některá specifická provedení podle vynálezu a že všechny modifikace nebo alternativy s nimi ekvivalentní jsou v duchu a rozsahu vynálezu, jak je uveden v připojených nárocích.It is to be understood that the foregoing description includes some specific embodiments of the invention and that all modifications or alternatives to them are equivalent within the spirit and scope of the invention as set forth in the appended claims.
• *• *
i:and:
SEZNAM SEKVENCÍ (1) Obecné informace:SEQUENCE LIST (1) General information:
(i) Přihlašovatelé: Dean Richard T.(i) Applicants: Dean Richard T.
Bush Larry R.Bush Larry R.
Pearson Daniel A.Pearson Daniel A.
Lister-James John (ii) Název vynálezu: Syntetická sloučenina, která váže receptor kalcitoninu, reakční činidlo, scintigrafické zobrazovací činidlo, prostředek a radioterapeutické činidlo ji obsahující, komplex a sestava pro přípravu radioaktivního přípravku, způsob označení reakčního činidla a způsob jeho výroby a použití (iii) Počet sekvencí: 11 (iv) Korespondenční adresa:Lister-James John (ii) Title of the Invention: A synthetic compound that binds a calcitonin receptor, a reagent, a scintigraphic imaging agent, a composition and a radiotherapeutic agent containing it, a complex and assembly for preparing a radioactive preparation, (iii) Number of sequences: 11 (iv) Mailing address:
(A) adresát: Diatide, lne.(A) Addressee: Diatide, Inc.
(B) ulice: 9 Δ Drive (C) město: Londonderry (D) stát: Nh.(B) Street: 9 Δ Drive (C) City: Londonderry (D) State: Nh.
(E) země: USA (F) poštovní směrovací číslo: 03053 (v) Počítačová čtecí forma:(E) country: USA (F) postal code: 03053 (v) Computer read form:
(A) typ media: floppy disk (B) počítač: IBM PC compatible (C) operační systém: PC-DOS/MS-DOS (D) počítačový program (software): Patentln Release #1.0, verse #1.30 (vi) Údaje o současné přihlášce:(A) media type: floppy disk (B) computer: IBM PC compatible (C) operating system: PC-DOS / MS-DOS (D) computer program (software): Patentln Release # 1.0, version # 1.30 (vi) about the current application:
(A) číslo přihlášky:(A) Application number:
(B) datum podání:(B) filing date:
(C) klasifikace:(C) Classification:
(vii) Údaje o předchozí přihlášce:(vii) Previous Application Details:
(A) číslo přihlášky: USA 08/847 007 (B) datum podání: 1. května 1997 (viii) Informace o zástupci:(A) Application Number: USA 08/847 007 (B) Filing Date: May 1, 1997 (viii) Agent Information:
(A) Jméno: McDaniels Patricia A.(A) Name: McDaniels Patricia A.
(B) číslo registrace: 33 194 (C) odkaz/číslo spisu: DITl 125.1 PCT (ix) Informace o spojení:(B) Registration number: 33 194 (C) Reference / File number: DITl 125.1 PCT (ix)
(A) telefon: (603) 437-8970 (C) telefax: (603) 437-8977 (2) Informace o sekvenci id. č. 1:(A) telephone: (603) 437-8970 (C) fax: (603) 437-8977 (2) Sequence information id. no. 1:
(i) Vlastnosti sekvence:(i) Sequence characteristics:
(A) délka: 32 aminokyselin (B) typ: aminokyselina (C) typ vlákna:(A) length: 32 amino acids (B) type: amino acid (C) fiber type:
(D) topologie: obojí (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původní zdroj:(D) topology: both (ii) Molecule type: peptide (vi) Original source:
(A) organismus: kalcitonin - člověk *· ·* • · · · • · · · • ftft · · · · • · • ·· ·· • · · · · · (ix) Vlastnosti:(A) organism: calcitonin - human * (ix) (ix) Properties:
(A) jméno/klíč: disulfidová vazba (B) umístění: 1..7 (ix) Vlastnosti:(A) name / key: disulfide bond (B) location: 1..7 (ix) Properties:
(A) jméno/klíč: místně modifikovaný (B) umístění: 32 (D) další informace: /produkt= PROLIN 32 /označení= amid (xi) popis sekvence: sekvence id. č. 1:(A) name / key: locally modified (B) location: 32 (D) additional information: / product = PROLIN 32 / label = amide (xi) sequence description: sequence id. no. 1:
Cys Gly Asn Leu Ser Thr Cys Met Leu Gly Thr Tyr Thr Gin 1 5 10Cys Gly Asn द्वारा किया Leu Ser Thr Cys Gly Thr Tyr Thr Gin 1 5 10
Asp Phe Asn Lys Phe His Thr Phe Pro Gin Thr Ala Ile Gly 15 20 25Asp Phe Asn Lys Phe His Thr Phe
Val Gly Ala Pro 30 (2) Informace o sekvenci id. č. 2:Val Gly Ala Pro 30 (2) Sequence Information id. No. 2:
(i) Vlastnosti sekvence:(i) Sequence characteristics:
(A) délka: 32 aminokyselin (B) typ: aminokyselina (C) typ vlákna:(A) length: 32 amino acids (B) type: amino acid (C) fiber type:
(D) topologie: obojí (ii) Typ molekuly: peptid ••4444 Β 4 4 4 4· · * 44 4 4 4 4 · · 4 4 44·4(D) topology: both (ii) Molecule type: peptide •• 4444 Β 4 4 4 4 · · * 44 4 4 4 4 · · 4 4 44 · 4
4 44 · 4 · 444444 • 444 44 44 • 4 44 444 444 44 44 (vi) Původní zdroj:4 44 · 4 · 444444 • 444 44 44 • 44 444 444 44 44 (vi)
(A) organismus: kalcitonin - losos (ix) Vlastnosti:(A) organism: calcitonin - salmon (ix)
(A) jméno/klíč: disulfidová vazba (B) umístění: 1..7 (ix) Vlastnosti:(A) name / key: disulfide bond (B) location: 1..7 (ix) Properties:
(A) jméno/klíč: místně modifikovaný (B) umístění: 32 (D) další informace: /produkt= PROLIN 31 /označen í= amid (xi) popis sekvence: sekvence id. č. 2:(A) name / key: locally modified (B) location: 32 (D) additional information: / product = PROLIN 31 / label = amide (xi) sequence description: sequence id. No. 2:
Cys Ser Asn Leu Ser Thr Cys Val Leu Gly Lys Leu Ser Gin 1 5 10Cys Ser Asn Leu Ser Thr Cys Val Leu
Glu Leu His Lys Leu Gin Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly 15 20 25Glu Leu His Lys Gin Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly 15 20 25
Ser Gly Thr ProSer Gly Thr Pro
♦ · » 9 · · • · · · » • 9 99 9 9999 9 9 9 9
9 99 9
999 99 99 (2) Informace o sekvenci id. č. 3:999 99 99 (2) Sequence information id. No. 3:
(i) Vlastnosti sekvence:(i) Sequence characteristics:
(A) délka: 32 aminokyselin (B) typ: aminokyselina (C) typ vlákna:(A) length: 32 amino acids (B) type: amino acid (C) fiber type:
(D) topologie: obojí (ii) Typ molekuly: peptid (vi) Původní zdroj:(D) topology: both (ii) Molecule type: peptide (vi) Original source:
(A) organismus: kalcitonin - úhoř (ix) Vlastnosti:(A) organism: calcitonin - eel (ix)
(A) jméno/klíč: disulfidová vazba (B) umístění: 1..7 (ix) Vlastnosti:(A) name / key: disulfide bond (B) location: 1..7 (ix) Properties:
(A) jméno/klíč: místně modifikovaný (B) umístění: 32 (D) další informace: /produkt= PROLIN 3Γ /označení= amid • · (xi) popis sekvence: sekvence id. č. 3:(A) name / key: locally modified (B) location: 32 (D) additional information: / product = PROLIN 3Γ / label = amide • · (xi) sequence description: sequence id. No. 3:
Cys Ser Asn Leu Ser Thr Cys Val Leu Gly Lys Leu Ser Gin 1 5 10Cys Ser Asn Leu Ser Thr Cys Val Leu
Glu Leu His Lys Leu Gin Thr Tyr Pro Arg Thr Asp Val Gly 15 20 25Glu Leu His Lys Gin Thr Tyr Pro Arg Thr Asp Val Gly 15 20 25
Ala Gly Thr Pro 30 (2) Informace o sekvenci id. č. 4:Ala Gly Thr Pro 30 (2) Sequence Information id. 4:
(i) Vlastnosti sekvence:(i) Sequence characteristics:
(A) délka: 31 aminokyselin (B) typ: aminokyselina (C) typ vlákna:(A) length: 31 amino acids (B) type: amino acid (C) fiber type:
(D) topologie: obojí (ii) Typ molekuly: peptid (ix) Vlastnosti:(D) topology: both (ii) Molecule type: peptide (ix) Properties:
(A) jméno/klíč: oblast (B) umístění: 1..6 (D) další informace: /produkt= S1 je acetylovaný a X 6 znamená Hhc /označení= cyklizovaný /poznámka= Peptid je cyklizován thioetherovou vazbou mezi N-koncovou acetylovou skupinou šeřinu 1 a thiolem homocysteinu 6 • · · · · · ► *(A) name / key: region (B) location: 1..6 (D) additional information: / product = S1 is acetylated and X 6 stands for Hhc / label = cyclized / note = The peptide is cyclized by a thioether bond between the N-terminal acetyl group of lilac 1 and homocysteine 6 thiol.
I * ··· (ix) Vlastnosti:I * ··· (ix) Features:
(A) jméno/klíč: místně modifikovaný (B) umístění: 13 (D) další informace: /produkt= C 13 /označení= BAT /poznámka= “Thiolová skupina cysteinu 13 je napojena na bisamino-bisthiolový chelátor (ix) Vlastnosti:(A) name / key: locally modified (B) location: 13 (D) additional information: / product = C 13 / label = BAT / note = “The thiol group of cysteine 13 is attached to the bisamino-bisthiol chelator (ix) Properties:
(A) jméno/klíč: místně modifikovaný (B) umístění: 31 (D) další informace: /produkt= PROLIN 31 /označení= amid (xi) popis sekvence: sekvence id. č. 4:(A) name / key: locally modified (B) location: 31 (D) additional information: / product = PROLIN 31 / label = amide (xi) sequence description: sequence id. 4:
Ser Asn Leu Ser Thr Xaa Val Leu Gly Lys Leu Ser Cys Glu 1 5 10Ser Asn Leu Th Th a Le ly ly ly ly ly ly C C C
Leu His Lys Leu Gin Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser 15 20 25Leu His Lys Leu Gin Thr Tyr Pro Thr Asn Thr Gly Ser 15 20 25
Gly Thr Pro ·· ·· • · · · • · · · • · · · · · • · • · · · • · · ·· ·· ·*· · (2) Informace o sekvenci id. č. 5:Gly Thr Pro (2) Sequence information id. No 5:
(i) Vlastnosti sekvence:(i) Sequence characteristics:
(A) délka: 31 aminokyselin (B) typ: aminokyselina (C) typ vlákna:(A) length: 31 amino acids (B) type: amino acid (C) fiber type:
(D) topologie: obojí (i i) Typ molekuly: peptid (ix) Vlastnosti:(D) topology: both (i i) Molecule type: peptide (ix) Properties:
(A) jméno/klíč: oblast (B) umístění: 1..6 (D) další informace: /produkt= S1 je acetylovaný a X6 znamená Hhc /označení= cyklizovaný /poznámka= Peptid je cyklizován thioetherovou vazbou mezi N-koncovou acetylovou skupinou šeřinu 1 a thiolem homohomocysteinu 6 (ix) Vlastnosti:(A) name / key: region (B) location: 1..6 (D) additional information: / product = S1 is acetylated and X6 stands for Hhc / label = cyclized / note = Peptide is cyclized by thioether bond between N-terminal acetyl with serine 1 and homohomocysteine 6 thiol (ix)
(A) jméno/klíč: místně modifikovaný (B) umístění: 31 (D) další informace: /produkt= PROLIN 31 /označení= amid • * 909 ·(A) name / key: locally modified (B) location: 31 (D) additional information: / product = PROLIN 31 / label = amide • * 909 ·
(xi) popis sekvence: sekvence id. č. 5:(xi) sequence description: sequence id. No 5:
Ser Asn Leu Ser Thr Xaa Val Leu Gly Lys Leu Ser Cys Glu 1 5 10Ser Asn Leu Th Th a Le ly ly ly ly ly ly C C C
Leu His Lys Leu Gin Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser 15 20 25Leu His Lys Leu Gin Thr Tyr Pro Thr Asn Thr Gly Ser 15 20 25
Gly Thr Pro 30 (2) Informace o sekvenci id. č. 6:Gly Thr Pro 30 (2) Sequence Information id. No. 6:
(i) Vlastnosti sekvence:(i) Sequence characteristics:
(A) délka: 31 aminokyselin (B) typ: aminokyselina (C) typ vlákna:(A) length: 31 amino acids (B) type: amino acid (C) fiber type:
(D) topologie: obojí (ii) Typ molekuly: peptid (ix) Vlastnosti:(D) topology: both (ii) Type of molecule: peptide (ix) Properties:
(A) jméno/klíč: oblast (B) umístění: 1..6 (D) další informace: /produkt= S1 je acetylovaný a X6 znamená Hcy /označení= cyklizovaný /poznámka= Peptid je cyklizován thioetherovou vazbou mezi N-koncovou acetylovou skupinou šeřinu 1 a thiolem homocysteinu 6 • φ φφ φ φ φ φ • φ φ φ φφφ φφφ φ φ φ φ · φ φ φφφ • e *φφφ > · · φφφ φ φ φ (ix) Vlastnosti:(A) name / key: region (B) location: 1..6 (D) additional information: / product = S1 is acetylated and X6 stands for Hcy / label = cyclized / note = Peptide is cyclized by thioether bond between N-terminal acetyl group 1 and thiol homocysteine 6 • φ φ φ φ φ φ • φ φ φ φ φ · · · · φ φ φ φ φ φ
(A) jméno/klíč: místně modifikovaný (B) umístění: 31 (D) další informace: /produkt= PROLIN 31 /označení= amid (xi) popis sekvence: sekvence id. č. 6:(A) name / key: locally modified (B) location: 31 (D) additional information: / product = PROLIN 31 / label = amide (xi) sequence description: sequence id. No. 6:
Ser Asn Leu Ser Thr Xaa Val Leu Gly Lys Leu Ser Cys Glu 1 5 10Ser Asn Leu Th Th a Le ly ly ly ly ly ly C C C
Leu His Lys Leu Gin Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser 15 20 25Leu His Lys Leu Gin Thr Thr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser
Gly Thr Pro 30 (2) Informace o sekvenci id. č. 7:Gly Thr Pro 30 (2) Sequence Information id. No 7:
(i) Vlastnosti sekvence:(i) Sequence characteristics:
(A) délka: 31 aminokyselin (B) typ: aminokyselina (C) typ vlákna:(A) length: 31 amino acids (B) type: amino acid (C) fiber type:
(D) topologie: obojí (ii) Typ molekuly: peptid φ ·φ «φ φφ φφφφ φ φφφφ φ φφφ φφφ φ φ · φφφ φ φ φ φ φφφ · e φ * « * · · • φ φ φ φφ «· φ φ® ·*φφ (ix) Vlastnosti:(D) topology: both (ii) Molecule type: peptide peptid φ «φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ · · · φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ · φ φ φ® · * φφ (ix) Features:
(A) jméno/klíč: oblast (B) umístění: 1..6 (D) další informace: /produkt= S1 je acetylovaný /označení= cyklizovaný /poznámka= Peptid je cyklizován thioetherovou vazbou mezi N-koncovou acetylovou skupinou šeřinu 1 a thiolem cysteinu 6 (ix) Vlastnosti:(A) name / key: region (B) location: 1..6 (D) additional information: / product = S1 is acetylated / label = cyclized / note = The peptide is cyclized by a thioether bond between the N-terminal acetyl group of lilac 1 and cysteine 6 thiol (ix)
(A) jméno/klíč: místně modifikovaný (B) umístění: 31 (D) další informace: /produkt= PROLIN 31 /označení= amid (xi) popis sekvence: sekvence id. č. 7:(A) name / key: locally modified (B) location: 31 (D) additional information: / product = PROLIN 31 / label = amide (xi) sequence description: sequence id. No 7:
Ser Asn Leu Ser Thr Cys Val Leu Gly Lys Leu Ser Cys Glu 1 5 10Ser Asn Leu Th Th ys ys ys ys ys ly ly ly ly
Leu His Lys Leu Gin Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser 15 20 25Leu His Lys Leu Gin Thr Tyr Pro Thr Asn Thr Gly Ser 15 20 25
Gly Thr Pro #· ·· • · · · • · · · ··· ··· • · ♦ · ·· ·· «··· · · • · · «· ·· • · · · · • · · < · · • · · · · · »· ·· ··· ··· (2) Informace o sekvenci id. č. 8:Gly Thr Pro # · • ly ly ly ly ly ly ly ly ly ly ly ly ly ly ly ly ly ly ly ly <(2) Sequence information id. No. 8:
(i) Vlastnosti sekvence:(i) Sequence characteristics:
(A) délka: 31 aminokyselin (B) typ: aminokyselina (C) typ vlákna:(A) length: 31 amino acids (B) type: amino acid (C) fiber type:
(D) topologie: obojí (ii) Typ molekuly: peptid (ix) Vlastnosti:(D) topology: both (ii) Type of molecule: peptide (ix) Properties:
(A) jméno/klíč: oblast (B) umístění: 1..6 (D) další informace: /produkt= X6 znamená Asu /označení= cyklizovaný /poznámka= Peptid je cyklizován vazbou mezi serinem 1 a 2-aminokorkovou kyselinou 6 (ix) Vlastnosti:(A) name / key: region (B) location: 1..6 (D) additional information: / product = X6 means Asu / label = cyclized / note = The peptide is cyclized by a bond between serine 1 and 2-aminocork 6 ( (ix) Features:
(A) jméno/klíč: místně modifikovaný (B) umístění: 31 (D) další informace: /produkt= PROLIN 31 /označení= amid(A) name / key: locally modified (B) location: 31 (D) additional information: / product = PROLIN 31 / label = amide
(xi) popis sekvence: sekvence id. č. 8:(xi) sequence description: sequence id. No. 8:
Ser Asn Leu Ser Thr Xaa Val Leu Gly Lys Leu Ser Cys Glu 1 5 107Ser Asn Leu Th Th a Le ly ly ly ly C C C C
Leu His Lys Leu Gin Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser 15 20 25Leu His Lys Leu Gin Thr Tyr Pro Thr Asn Thr Gly Ser 15 20 25
Gly Thr Pro 30 (2) Informace o sekvenci id. č. 9:Gly Thr Pro 30 (2) Sequence Information id. No. 9:
(i) Vlastnosti sekvence:(i) Sequence characteristics:
(A) délka: 31 aminokyselin (B) typ: aminokyselina (C) typ vlákna:(A) length: 31 amino acids (B) type: amino acid (C) fiber type:
(D) topologie: obojí (ii) Typ molekuly: peptid (ix) Vlastnosti:(D) topology: both (ii) Type of molecule: peptide (ix) Properties:
(A) jméno/klíč: oblast (B) umístění: 1..6 (D) další informace: /produkt= S1 je acetylovaný a X6 znamená Hhc /označení= cyklizovaný /poznámka= Peptid je cyklizován thioetherovou vazbou mezi N-koncovou acetylovou skupinou šeřinu 1 a thiolem homohomocysteinu 6 (ix) Vlastnosti:(A) name / key: region (B) location: 1..6 (D) additional information: / product = S1 is acetylated and X6 stands for Hhc / label = cyclized / note = Peptide is cyclized by thioether bond between N-terminal acetyl with serine 1 and homohomocysteine 6 thiol (ix)
(A) jméno/klíč: místně modifikovaný (B) umístění: 31 (D) další informace: /produkt= PROLIN 31 /označení= amid (xi) popis sekvence: sekvence id. č. 9(A) name / key: locally modified (B) location: 31 (D) additional information: / product = PROLIN 31 / label = amide (xi) sequence description: sequence id. No. 9
Ser Asn Leu Ser Thr Xaa Val Leu Gly Lys Leu Ser Cys Glu 1 5 107Ser Asn Leu Th Th a Le ly ly ly ly C C C C
Leu His Lys Leu Gin Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser 15 20 25Leu His Lys Leu Gin Thr Thr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser
Gly Thr Pro 30 (2) Informace o sekvenci id. č. 10:Gly Thr Pro 30 (2) Sequence Information id. No. 10:
(i) Vlastnosti sekvence:(i) Sequence characteristics:
(A) délka: 6 aminokyselin (B) typ: aminokyselina (C) typ vlákna:(A) length: 6 amino acids (B) type: amino acid (C) fiber type:
(D) topologie: cirkulámí (ii) Typ molekuly: peptid ·· ·· » · · · » · · · • · · · · · • · • · · · • · • · · · (ix) Vlastnosti:(D) Topology: Circular (ii) Molecule Type: Peptide (ix) Properties:
(A) jméno/klíč: oblast (B) umístění: 1..6 (D) další informace: /produkt= S1 je acetylovaný a X6 znamená C, Hcy nebo Hhc /označení= cyklizovaný /poznámka= Peptid je cyklizován thioetherovou vazbou mezi N-koncovou acetylovou skupinou šeřinu 1 a thiolem X6 (xi) popis sekvence: sekvence id. č. 10(A) name / key: region (B) location: 1..6 (D) additional information: / product = S1 is acetylated and X6 stands for C, Hcy or Hhc / label = cyclized / note = The peptide is cyclized by a thioether bond between N-terminal acetyl group 1 and thiol X6 (xi) sequence description: sequence id. No. 10
Ser Asn Leu Ser Thr XaaSer Asn Leu
5 (2) Informace o sekvenci id. č. 11:5 (2) Sequence information id. No. 11:
(i) Vlastnosti sekvence:(i) Sequence characteristics:
(A) délka: 6 aminokyselin (B) typ: aminokyselina (C) typ vlákna:(A) length: 6 amino acids (B) type: amino acid (C) fiber type:
(D) topologie: cirkulámí (ii) Typ molekuly: peptid (ix) Vlastnosti:(D) topology: circular (ii) Molecule type: peptide (ix) Properties:
(A) jméno/klíč: oblast (B) umístění: 1..6 (D) další informace: /produkt= X1 znamená A, G nebo S, X6 znamená C, Hcy nebo Hhc /označení= cyklizovaný /poznámka= Peptid je cyklizován thioetherovou vazbou mezi N-koncovým methylenem a thiolem X6 (xi) popis sekvence: sekvence id. č. 11(A) name / key: area (B) location: 1..6 (D) additional information: / product = X1 means A, G or S, X6 means C, Hcy or Hhc / label = cyclized / note = Peptide is cyclized by a thioether bond between N-terminal methylene and thiol X6 (xi) sequence description: sequence id. No. 11
Xaa Asn Leu Ser Thr XaaXaa Asn Leu Ser Thr Xaa
Claims (36)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CZ19993729A CZ372999A3 (en) | 1998-05-01 | 1998-05-01 | Synthetic compound binding calcitonin receptor, reaction agent, scintigraphic representation agent, preparation and radiotherapeutic agent containing thereof, complex and system for preparing a radioactive preparation, the reaction agent labeling method and process of its preparation and use |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CZ19993729A CZ372999A3 (en) | 1998-05-01 | 1998-05-01 | Synthetic compound binding calcitonin receptor, reaction agent, scintigraphic representation agent, preparation and radiotherapeutic agent containing thereof, complex and system for preparing a radioactive preparation, the reaction agent labeling method and process of its preparation and use |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CZ372999A3 true CZ372999A3 (en) | 2000-05-17 |
Family
ID=5467162
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CZ19993729A CZ372999A3 (en) | 1998-05-01 | 1998-05-01 | Synthetic compound binding calcitonin receptor, reaction agent, scintigraphic representation agent, preparation and radiotherapeutic agent containing thereof, complex and system for preparing a radioactive preparation, the reaction agent labeling method and process of its preparation and use |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CZ (1) | CZ372999A3 (en) |
-
1998
- 1998-05-01 CZ CZ19993729A patent/CZ372999A3/en unknown
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US6007792A (en) | Radiolabeled vasoactive intestinal peptides for diagnosis and therapy | |
US5225180A (en) | Technetium-99m labeled somatostatin-derived peptides for imaging | |
EP0720621B1 (en) | Radiolabeled somatostatin-derived peptides for imaging and therapeutic uses | |
US5932189A (en) | Cyclic peptide somatostatin analogs | |
EP0804481A1 (en) | Somatostatin derivatives and their radiolabelled products | |
JP3774238B2 (en) | Calcitonin receptor binding peptide | |
AU4865901A (en) | Novel somatostatin analogs | |
US6051206A (en) | Radiolabeled somatostatin-derived peptides for imaging and therapeutic uses | |
CZ372999A3 (en) | Synthetic compound binding calcitonin receptor, reaction agent, scintigraphic representation agent, preparation and radiotherapeutic agent containing thereof, complex and system for preparing a radioactive preparation, the reaction agent labeling method and process of its preparation and use | |
US6183722B1 (en) | Somatostatin analogs | |
AU2002301563A1 (en) | Calcitonin Receptor-binding Peptides | |
MXPA99009549A (en) | Calcitonin receptor-binding peptides |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic |