CZ367899A3

CZ367899A3 - Substantially pure crabescidines, pharmaceutical or veterinary preparation in which they are comprised and their use

Info

Publication number: CZ367899A3
Application number: CZ19993678A
Authority: CZ
Inventors: Jian-Gong Shi; Furong Sun; Kenneth L. Rinehart
Original assignee: Pharma Mar, S. A.; Linek Ernest V.
Priority date: 1998-04-14
Filing date: 1998-04-14
Publication date: 2000-04-12

Abstract

Jsou popsány nové krambescidiny, farmaceutické nebo veterinární prostředky, které obsahují efektivní protinádorové < množství v podstatě čistého krambescidinu a použití efektivního protinádorového množství těchto nových v podstatě čistých krambescidinů pro výrobu léčiva pro terapeutické nebo profylaktické ošetření pacienta trpícího savčímnádorem.New crambescids, pharmaceuticals or pharmaceuticals are described veterinary means that contain effective anticancer agents <amount of substantially pure crambescidine and use the effective antitumor quantity of these new ones substantially pure crambescids for the manufacture of a medicament for therapeutic or prophylactic treatment of a patient suffering savčímnádorem.

Description

V podstatě čisté krambescidiny, farmaceutický nebo veterinární prostředek je obsahující a jejich použitíSubstantially pure crambescidines, pharmaceutical or veterinary compositions containing them and their use

Oblast technikyTechnical field

Předložený vynález se týká nových krambescidinů, farmaceutických nebo veterinárních prostředků, které obsahují efektivní protinádorové množství krambescidinů a použití těchto nových krambescidinů pro výrobu léčiva pro terapeutické nebo profylaktické ošetření pacienta trpícího savčím nádorem.The present invention relates to novel crambescidines, pharmaceutical or veterinary compositions comprising an effective antitumor amount of crambescidines, and the use of these novel crambescidines for the manufacture of a medicament for the therapeutic or prophylactic treatment of a patient suffering from a mammalian tumor.

Dosavadní stav technikyBACKGROUND OF THE INVENTION

Během testování nových bioaktivních činidel z mořských hub byla popsána nová skupina silných cytotoxických a protivirových sloučenin, krambescidiny vzorce 1 až 5 (Jares-Erijiman E. A., Sakai R., Rinehart K.L.: J. Org. Chem. 1991, 56, 5712 až 5715; Jares-Erijiman E.A., Ingrum A.L., Camey J.R., Rinehart K.L., Sakai R.: J. Org. Chem. 1993, 58, 4805 až 4808; Taveras R., Daloze D., Braekman J.C., Hajdue E.: Biochem. Syst. Ecol. 1994, 22, 645; Berlinck R.G.S., Braekman J.C., Daloze D., Bruno I., Riccio R., Ferri S., Spampinato S., Sperioni E.: J. Nat. Prod. 1993, 56, 1007 až 1015.) z houby Crambe crambe a ptilomycalin A vzorce 6 z houby Ptilocaulis spiculifer a Hemimycale sp. (Kashman Y., Hirsh S., McConnell O.J., Ohtani I., Kusumi T., Kikasawa H.: J. Am. Chem. Soc. 1989, 111, 8925 až 8926; Ohtani I., Kusumi T.M, Kakisawa H., Kashman Y., Hirsh S.: J. Am. Chem. Soc. 1992, 114, 8472 až 8479; Ohtani I., Kusumi T., Kakisawa H.: Tetrahedron Lett. 1992, 33, 2525 až 2528.), které mají komplexní pentacycklické guanidiny navázány lineární mastnou ω-hydroxykyselinou na hydroxysperimidinovou nebo spemnidinovou jednotku. Rozsáhlé NMR studie ukázaly, že relativní stereochemie pentacyklických guanidinových částic krambescidinů vzorců 1 až 4 a ptilomycalinu vzorce 6 jsou identické, při čemž oxidační degradace krambescidinů 816 vzorce 1 (Jares-Erijiman E.A., Ingrum A.L., Camey J.R., Rinehart K.L., Sakai R.: J. Org. Chem. 1993, 58, 4805 až 4808.) a enantioselektivní totální syntéza ptilomycalinu A vzorce 6 (Overman L.E., RabinowitzA new class of potent cytotoxic and antiviral compounds, crambescidines of formulas 1 to 5 (Jares-Erijiman EA, Sakai R., Rinehart KL: J. Org. Chem. 1991, 56, 5712-5715; Jares-Erijiman EA, Ingrum AL, Camey JR, Rinehart KL, Sakai R .: J. Org Chem 1993, 58, 4805-4808, Taveras R., Daloze D., Braekman JC, Hajdue E., Biochem. 1994, 22, 645, Berlinck RGS, Braekman JC, Daloze D, Bruno I, Riccio R, Ferri S, Spampinato S, Sperioni E, J. Nat Prod Prod 1993, 56, 1007 to 1015.) from Crambe crambe and ptilomycalin A of formula 6 from Ptilocaulis spiculifer and Hemimycale sp. (Kashman Y., Hirsh S., McConnell OJ, Ohtani I., Kusumi T., Kikasawa H., J. Am. Chem. Soc. 1989, 111, 8925-8926; Ohtani I., Kusumi TM, Kakisawa H. Kashman Y., Hirsh S .: J. Am Chem Soc., 1992, 114, 8472-8479; Ohtani I., Kusumi T., Kakisawa H., Tetrahedron Lett. 1992, 33, 2525-2528. which have complex pentacyclic guanidines bound by a linear fatty ω-hydroxy acid to a hydroxysperimidine or spemnidine unit. Extensive NMR studies have shown that the relative stereochemistry of the pentacyclic guanidine particles of crambescidines of formulas 1 to 4 and ptilomycaline of formula 6 are identical, with the oxidative degradation of crambescidines 816 of formula 1 (Jares-Erijiman EA, Ingrum AL, Camey JR, Rinehart KL, Sakai R. J. Org. Chem. 1993, 58, 4805-4808) and enantioselective total synthesis of ptilomycalin A of formula 6 (Overman LE, Rabinowitz

Μ.H., Renhowe Ρ.Α.: J. Am. Chem. Soc. 1995, 117, 2657 až 2658.) bezpečně prokázaly identickou absolutní konfiguraci jejich centrálních gauanidinových částí.How.H., Renhowe Ρ.Α .: J. Am. Chem. Soc. 1995, 117, 2657-2658.) Safely demonstrated an identical absolute configuration of their central gauanidine moieties.

Nedávno byl zjištěn současný výkyt krambescidinů a ptilomycalinu A v houbě Batzella sp. (Patil A.D., Kumar N.V., Kokke W.C., Beán M.F., Freyer A.J., BrosseRecently, concurrent occurrence of crambescidines and ptilomycalin A has been found in Batzella sp. (Patil A.D., Kumar N.V., Kokke W.C., Bean M.F., Freyer A.J., Brosse

C.D., Mai S., Truneh A., Faulkner D.J., Carte B., Breen A.L., Hetzberg R.P., JohnsonC.D., Mai S., Truneh A., Faulkner D. J., Carte B., Breen A. L., Hetzberg R.P., Johnson

R.K., Westley J.W., Potts B.C.M.: J. Org. Chem. 1995, 60, 1182 až 1188.). Podstatné cytotoxické, protivínové a pratihoubové aktivity byly popsány u krambescidinů (Jares-Erijiman E. A., Sakai R., Rinehart KL.: J. Org. Chem. 1991, 56, 5712 až 5715; Jares-EriJimanm E.A., Ingrum A.L., Camey J.R., Rinehart K.L., Sakai R.: J. Org. Chem. 1993, 58, 4805 až 4808; Taveras R., Daloze D., Braekman J.C., Hajdue E.: Biochem. Syst. Ecol. 1994, 22, 645; Berlinck R.G.S., Braekman J.C., Daloze D., Bruno I., Riccio R., Ferri S., Spampinato S., Sperioni E.: J. Nat. Prod. 1993, 56,1007 až 1015.) a ptilomycalinu A (Kashman Y., Hirsh S., McConnell O.J., Ohtani I., Kusumi T., Kikasawa H.: J. Am. Chem. Soc. 1989, 111, 8925 až 8926; Ohtani I., Kusumi T.M., Kakisawa H., Kashman Y., Hirsh S.: J. Am. Chem. Soc. 1992, 114, 8472 až 8479; Ohtani I., Kusumi T., Kakisawa H.: Tetrahedron Letí. 1992, 33, 2525 až 2528.) a o krambescidinů bylo uvedeno, že je silným blokátorem kanálků vápníku (Berlinck R.G.S., Braekman J.C., Daloze D., Bruno I., Riccio R., Ferri S., Spampinato S., Sperioni E.: J. Nat. Prod. 1993, 56,1007 až 1015.).R.K., Westley, J.W., Potts, B. C., J. Org. Chem. 1995, 60, 1182-1188.). Substantial cytotoxic, antiviral and fungal activities have been described for crambescidins (Jares-Erijiman EA, Sakai R., Rinehart KL .: J. Org. Chem. 1991, 56, 5712-5715; Jares-EriJimanm EA, Ingrum AL, Camey JR, Rinehart KL, Sakai R., J. Org. Chem., 1993, 58, 4805-4808, Taveras, R., Daloze, D., Braekman, JC, Hajdue, E., Biochem. Syst., 1994, 22, 645, Berlinck RGS. Braekman JC, Daloze D, Bruno I, Riccio R, Ferri S, Spampinato S, Sperioni E, J. Nat. Prod. 1993, 56, 1007-1015., And ptilomycalin A (Kashman Y. Hirsh S., McConnell OJ, Ohtani I., Kusumi T., Kikasawa H .: J. Am Chem Soc., 1989, 111, 8925-8926, Ohtani I., Kusumi TM, Kakisawa H., Kashman Y. Hirsh S .: J. Am Chem Soc 1992, 114, 8472-8479, Ohtani I., Kusumi T., Kakisawa H., Tetrahedron Leti 1992, 33, 2525-2528. that it is a potent calcium channel blocker (Berlinck RGS, Braekman JC, Daloze D, Bruno I, Riccio R, Ferri S, Spampina to S., Sperioni, E .: J. Nat. Prod. 1993, 56, 1007-1015.).

Aby se získala podstatná množství krambescidinů 816 vzorce 1 pro preklinické a klinické pokusy, byly tři vzorku Crambe crambe podrobeny isolaci podobné isolaci, která byla drive popsána (viz příklady provedení vynálezu) (Jares-Erijiman E. A., Sakai R., Rinehart KL.: J. Org. Chem. 1991, 56, 5712 až 5715; Jares-EriJiman E.A., Ingrum A.L., Camey J.R., Rinehart K.L., Sakai R.: J. Org. Chem. 1993, 58, 4805 až 4808). Isolaci, která byla vedena FAB-MS, bylo isolováno celkem 1,48 g krambescidinů 816 (vzorce 1) spolu se známými krambescidiny vzorce 2 až 5, ptilomycalinem A vzorce 6 a šesti nově objevenými krambescidinovými sloučeninami vzorce 7 až 12.To obtain substantial amounts of crambescidines 816 of Formula 1 for preclinical and clinical trials, three Crambe crambe samples were subjected to isolation similar to that described above (see Examples) (Jares-Erijiman EA, Sakai R., Rinehart KL .: J. Org. Chem., 1991, 56, 5712-5715; Jares-Eri Jiman EA, Ingrum AL, Camey JR, Rinehart KL, Sakai R., J. Org. Chem. 1993, 58, 4805-4808). A total of 1.48 g of crambescidines 816 (Formula 1), along with the known crambescidines of Formula 2-5, ptilomycalin A of Formula 6, and six newly discovered crambescidine compounds of Formula 7-12 were isolated by FAB-MS isolation.

• · • · ·• · · · ·

Podstata vynálezuSUMMARY OF THE INVENTION

Předmětem předloženého vynálezu jsou struktury a biologické aktivity nových krambescidinů vzorce 7 až 12. Dosud nikdy nebyla z přírodního zdorje isolována chlorovaná spermidinová jednotka krambescidinů 834 (vzorce 7) a 818 (vzorce 8). Struktury krambescidinů jsou následující:The present invention relates to the structures and biological activities of the novel crambescidines of formulas 7 to 12. The chlorinated spermidine unit of crambescidines 834 (formula 7) and 818 (formula 8) has never been isolated from natural sources. The structures of crambescidines are as follows:

OO

R,=OH. R₂=OH, n=14R1 = OH. R ₂ = OH, n = 14

R,=O1I. R₂=OH, n=15Rf = O11. R ₂ = OH, n = 15

Rj=OH, R₂=OH, n=16R 1 = OH, R ₂ = OH, n = 16

R|=Oli, R₂=H, n=14R 1 = O ₁ , R ₂ = H, n = 14

R,=H, R₂=H, n=14R = H, R ₂ = H, n = 14

R,=C1. R₂=OH, n=14R1 = C1. R ₂ = OH, n = 14

Rj=Cl, R₂=H, n=)4R 1 = Cl, R ₂ = H, n = 14

Struktury nových krambescidinů vzorce 7 až 12: Krambescidinu 834 vzorce 7 byl přiřazen molekulární vzorec Ο^ΗτθΝβΟθΟ podle HR-FAB-MS (vysokorozlišovací hmotnostní spektrometrie s bombardováním rychlými atomy) dat [m/z 835,5821 (M+H, diference 0,7 mmu (tisícina hmotnostní jednotky)]. Přítomnost atomu chloru a volné hydroxylové skupiny byla zřejmá, jelikož ve FAB-MS a FAB-MS/CID (kolisí indukovaná disociace)/MS spektrech sloučeniny vzorce 1 byly pozorovány ionty fragmentu o ztrátě chlorovodíku (M+H-HCI, 799,6075, diference -1,4 mmu) a vody (M+H-HCI-H₂O, 781,5984, diference -2,9 mmu).Structures of novel crambescidines of formulas 7 to 12: Crambescidine 834 of formula 7 has been assigned the molecular formula ΟΟ ΗτθΝβΟθΟ according to HR-FAB-MS (high resolution fast atom bombardment mass spectrometry) data [m / z 835.5821 (M + H, difference 0, The presence of the chlorine atom and the free hydroxyl group was evident, since in the FAB-MS and FAB-MS / CID (collision-induced dissociation) / MS spectra of the compound of formula 1, ions of the loss of hydrogen chloride (M) were observed. + H-HCl, 799.6075, difference -1.4 mmu) and water (M + H-HCl-H ₂ O, 781.5984, difference -2.9 mmu).

Struktura hydroxylové pentacyklické guanidinové části sloučeniny vzorce 7 byla podle FAB-MS a NMR dat označena jako shodná s touto částí sloučeniny vzorceThe structure of the hydroxyl pentacyclic guanidine moiety of the compound of formula 7 was indicated by FAB-MS and NMR data to be identical to that of the compound of formula 7

1. Fragmenty iontů m/z 420, 374, 358, 264 a 246, které byly charakteristické pro hydroxylovou pentacyklickou gaunidinovou část krambescidinů vzorce 1 až 4 (Jares-Erijiman E. A., Sakai R., Rinehart K.L.: J. Org. Chem. 1991, 56, 5712 až 5715.) byly pozorovány ve FAB-MS a FAB-MS/CID/MS spektrech sloučeniny vzorce 7. Poloha hydroxylové skupiny v pentacyklické guanidinové jednotce byla pňřazena podle pokusů COSY, HMQC a HMBC-NMR a byla téměř identická s polohami pro krambescidiny vzorců 1 až 4, což ukazuje na to, že poloha hydroxylové skupiny a stereochmeie hydroxylové pentacyklické guanidinové části je ve všech těchto krambescidinech stejná.1. Fragments of m / z ions 420, 374, 358, 264 and 246, which were characteristic of the hydroxyl pentacyclic gaunidine portion of crambescidines of formulas 1-4 (Jares-Erijiman EA, Sakai R., Rinehart KL: J. Org. Chem. 1991 , 56, 5712 to 5715.) were observed in the FAB-MS and FAB-MS / CID / MS spectra of the compound of formula 7. The hydroxyl group position in the pentacyclic guanidine unit was assigned according to the COZY, HMQC and HMBC-NMR experiments and was almost identical to positions for crambescidines of formulas 1 to 4, indicating that the position of the hydroxyl group and the stereochemistry of the hydroxyl pentacyclic guanidine moiety is the same in all these crambescidines.

lonty fragmentů postranního řetězce od C-23 do C-45 byly pozorovány jako intenzivní maxima u m/z 398,3729 (CzsH^NaCX diference 1,8 mmu) a 380,3636 (C23H46N3O, diference 0,5 mmu) ve FAB-MS a FAB-MS/CID/MS sloučeniny vzorce 7, tyto fragmenty nejsou přítomny ve spektru jiných chlorovaných krambescidinů. Polymethylenový řetězec od C-23 do C-37 byl potvrzen NMR a zvláště FAB-MS/CID/MS daty, která poskytují téměř nepřerušenou řadu iontů fragmentů od postupného štěpení methylenových skupin od m/z 380 do 198,1616 (Ci₀H4eN₃O, diference -1,0 mmu). Esterová vazba mezi postranním řetězcem a hydroxylovou pentacyklickou guanidinovou jednotkou, jak ukazuje ion fragmentu s m/z 614,4549 (C36H60N3O5, diference -1,6 mmu), byla potvrzena long-range korelací mezi karboxylovým atomem uhlíku při δ 168,12 (C-22) a protony při δ 3,48 (s, H-14) a 4,16 (t, H₂-23) v HMBC spektru sloučeniny vzorce 7. Z COSY a HMQC dat byly identifikovány dva isolované spinové systémy (od H-39b do H₂-41 a od H-42a, -42b k H₂-45) a poloha atomu chloru v chlorované spermidinové jendotce. Tyto dva spinové systémy byly navzájem spojeny long-range C-H korelacemi mezi C-42 (δ 57,83) a H-39b (δ 3,62) a mezi C-39 (δ 47,19) a H^2a, -42b (δ 3,36, 3,62) pozorovanými v HMBC spektru. Navíc byla pozorováním korelací mezi druhým karboxylovým atomem uhlíku při δ 165,49 (C-38) a protony při δ 3<36 (H-42a), 2,49 (H-37a) a 2,76 (H-37b) v HMBC spektru potvrzena amidová vazba ve sloučenině vzorce 7.ions of side chain fragments from C-23 to C-45 were observed as intensive maxima µm / z 398.3729 (C 2 H 4 NaCX difference of 1.8 mmu) and 380.3636 (C 23 H 46 N 3 O, difference of 0.5 mmu) in FAB-MS and FAB-MS / CID / MS compounds of formula 7, these fragments are not present in the spectrum of other chlorinated crambescidines. Polymethylene chain from C-23 to C-37 was confirmed by NMR and in particular FABMS / CID / MS data, which provide a nearly unbroken series of fragment ions from cleavage of sequential methylene groups from m / z 380 198.1616 (C ₀ ₃ H4eN O, difference -1.0 mmu). The ester bond between the side chain and the hydroxyl pentacyclic guanidine unit, as shown by fragment sm / z 614.4549 (C36H60N3O5, difference -1.6 mmu), was confirmed by long-range correlation between the carboxyl carbon atom at δ 168.12 (C- 22) and protons at δ 3.48 (s, H-14) and 4.16 (t, H ₂ -23) in the HMBC spectrum of the compound of formula 7. Two isolated spin systems were identified from COZY and HMQC data (from H- 39b to H ₂ -41 and from H-42a, -42b to H ₂ -45) and the position of the chlorine atom in the chlorinated spermidine unit. The two spin systems were connected to each other by long-range CH correlations between C-42 (δ 57.83) and H-39b (δ 3.62) and between C-39 (δ 47.19) and H ^ 2a, -42b (δ 3.36, 3.62) observed in the HMBC spectrum. In addition, it was observed by correlations between the second carboxyl carbon atom at δ 165.49 (C-38) and protons at δ 3 <36 (H-42a), 2.49 (H-37a) and 2.76 (H-37b) in The amide bond in the compound of formula 7 was confirmed by the HMBC spectrum.

Krambescidin 818 (vzorce 8), který má podle HR-FAB-MS (M+H, 819,5889, diference -1,0 mmu) molekulový vzorec C^H/gNeOsCI, má o jeden atom kyslíku (hydroxylová skupina) méně než krambescidin 834 (sloučenina vzorce 7). FAB-MS a FAB-MS/CID/MS spektra sloučeniny vzorce 8 ukazují ion fragmentu s m/z 783,6145 (diference -3,3 mmu) odpovídající M+H-HCI, což identifikuje přítomnost atomu chloru. Současně pak přítomnost m/z 404 a 358 a nepřítomnost m/z 420, 374, 264 a 246 ukazuje na to, že krambescidin 818 (vzorce 8) má stejnou pentacyklickou guanidinovou část jako krambescidin 800 (sloučenina vzorce 4), což bylo potvrzeno srovnáním ¹H a ¹³C dat sloučeniny vzorce 8 s daty sloučeniny vzorce 4 (Jares-Erijiman E.Crambescidine 818 (Formula 8), which according to HR-FAB-MS (M + H, 819.5889, difference -1.0 mmu) has the molecular formula C 1 H / gNeO 5 Cl, has one oxygen atom (hydroxyl group) less than crambescidine 834 (compound of formula 7). The FAB-MS and FAB-MS / CID / MS spectra of the compound of Formula 8 show the fragment ion m / z 783.6145 (difference -3.3 mmu) corresponding to M + H-HCl, which identifies the presence of a chlorine atom. At the same time, the presence of m / z 404 and 358 and the absence of m / z 420, 374, 264 and 246 indicate that crambescidine 818 (formula 8) has the same pentacyclic guanidine moiety as crambescidine 800 (compound 4), as confirmed by comparison. ¹ H and ¹³ C of the data of the compound of formula 8 with the data of the compound of formula 4 (Jares-Erijiman E.

A., Sakai R„ Rinehart K.L.: J. Org. Chem. 1991, 56, 5712 až 5715.). ¹H a ¹³C NMR chemické posuny chlorované spermidinové jednotky přiřazené COSY daty ve sloučenině vzorce 8 byly téměř identické s daty sloučeniny vzorce 7, což ukazuje na to, že poloha a stereochemie atomu chloru v krambescidinech 818 a 834 jsou stejné.A., Sakai R. Rinehart KL: J. Org. Chem. 1991, 56, 5712-5155.). ^{The 1} H and ¹³ C NMR chemical shifts of the chlorinated spermidine unit assigned by COZY data in the compound of Formula 8 were nearly identical to those of the compound of Formula 7, indicating that the position and stereochemistry of the chlorine atom in crambescidines 818 and 834 are the same.

Krambescidinu 673 (sloučenina vzorce 9) byl HR-FAB-MS daty (M+H, 674,4734, diference 1,0 mmu) přiřazen molekulový vzorec C38H63N3O7. FAB-MS a FAB-MS/CID/MS spektra sloučeniny vzorce 9 ukazují chrakteristická maxima hydroxylové petacyklické guanidinové jednotky v krambescidinech s m/z 420, 358, 264 a 246 a téměř úplnou sérii iontů homologních fragmentů pocházejících od postupného odštěpování methylenových skupin od m/z 628 do 420, což ukazuje na to, že krambescidin 673 (sloučenina vzorce 9) má na koncové karboxylové kyselině chybějícíCrambescidine 673 (compound of formula 9) was assigned the molecular formula C38H63N3O7 by HR-FAB-MS data (M + H, 674.4734, difference 1.0 mmu). The FAB-MS and FAB-MS / CID / MS spectra of the compound of Formula 9 show the characteristic peaks of the hydroxyl petacyclic guanidine unit in crambescidines of m / z 420, 358, 264 and 246 and an almost complete series of ions of homologous fragments resulting from sequential cleavage of from 628 to 420, indicating that crambescidine 673 (a compound of formula 9) is missing at the terminal carboxylic acid

spermidinovou jednotku. Tato navržená struktura byla plně podpořena ¹H a ¹³C NMR daty pro sloučeniny vzorců 10 a 9, což ukazuje na to, že krambescidin 687 (sloučenina vzorce 10) je methylester krambescidinu 673 (sloučenina vzorce 9). Methoxylová skupina byla pozorována pň δ_Η 3,65 a Óc 51,44 v NMR sepktrech sloučenina vzorce 10. Signál C-38 (δ 174,39) ve sloučenině 10 byl posunut k vyššímu poli pň srovnání s odpovídajícím signálem (δ 181,60) u sloučeniny vzorce 9.a spermidine unit. This proposed structure was fully supported by ¹ H and ¹³ C NMR data for compounds of formulas 10 and 9, indicating that crambescidine 687 (compound of formula 10) is crambescidine methyl ester 673 (compound of formula 9). The methoxyl group was observed at δ _Η 3.65 and ,4c 51.44 in the NMR spectrum of the compound of formula 10. The C-38 signal (δ 174.39) in compound 10 was shifted to a higher field at comparison with the corresponding signal (δ 181.60) ) for a compound of formula 9.

Krambescidin 687 (sloučenina vzorce 10) (HR-FAB-MS, 688,4907, M+H, diference -0,6 mmu pro podle HR-FAB-MS dat (M+H, 674,4734, diferenceCrambescidine 687 (compound of formula 10) (HR-FAB-MS, 688.4907, M + H, -0.6 mmu difference for HR-FAB-MS data (M + H, 674.4734, difference)

1,0 mmu). FAB-MS a FAB-MS/CID/MS spektra sloučeniny vzorce 9 ukazují charakteristická maxima pro hydroxylovou pentacyklickou guanidinovou jednotku v krambescidinech s m/z 420, 358, 264 a 246 a téměř neporušenou sérii iontů homologních fragmentů pocházejících od postupného štěpení methylenových skupin od m/z 628 do 420, což ukazuje na to, že krambescidinu 673 (sloučenina vzorce 9) na konci s karboxylovou kyselinou chybí spermidinová jednotka. Tato navržená struktura byla plně podpořena ¹H a ¹³C NMR daty (viz tabulka 1 a 2), která byla pnřazena pomocí COSY dat. Signál karboxylového karbonylu byl pozorován při δ 181,60.1.0 mmu). The FAB-MS and FAB-MS / CID / MS spectra of the compound of Formula 9 show characteristic maxima for the hydroxyl pentacyclic guanidine unit in the crambescidines of m / z 420, 358, 264 and 246 and an almost intact series of ions of homologous fragments resulting from sequential cleavage of methylene groups from m / from 628 to 420, indicating that crambescidine 673 (a compound of formula 9) is lacking a spermidine unit at the carboxylic acid end. This proposed structure was fully supported by ¹ H and ¹³ C NMR data (see Tables 1 and 2), which were assigned using COZY data. The carboxyl carbonyl signal was observed at δ 181.60.

Krambescidin 687 (sloučenina vzorce 10) (HR-FAB-MS, 688,4907, M+H, diference -0,6 mmu pro C38H66N3O7) lišící se od sloučeniny vzorce 9 skupinou CH₂, vykazoval podobné FAB-MS a FAB-MS/CID/MS ionty fragmentů jako tomu bylo u sloučeniny vzorce 9. Srovnání ¹H a ¹³C NMR dat sloučenin vzorce 10 a 9 ukazují, že krambescidin 687 (sloučenina vzorce 10) je methylester krambescidinu 687 (sloučenina vzorce 10), je methylester krambescidinu 673 (sloučenina vzorce 9). Methoxylová skupina byla pozorována při δ_Η 3,65 a δο 51,44 v NMR spektru sloučeniny vzorce 10. Signál C-38 (δ 174,39) ve sloučenině vzorce 10 byl posun směrem k vyššímu poli při srovnání s odpovídajícím signálem (δ 181,60) ve sloučenině vzorce 9.Crambescidine 687 (compound of formula 10) (HR-FAB-MS, 688.4907, M + H, difference -0.6 mmu for C38H66N3O7) differing from compound of formula 9 by CH ₂ , showed similar FAB-MS and FAB-MS [CID] MS fragment ions as in the compound of Formula 9. Comparison of ¹ H and ¹³ C NMR data of compounds of Formula 10 and 9 show that crambescidine 687 (compound of Formula 10) is crambescidine methyl ester 687 (compound of Formula 10) is crambescidine methyl ester 673 (compound of formula 9). The methoxyl group was observed at δ _Η 3.65 and δο 51.44 in the NMR spectrum of the compound of formula 10. The C-38 signal (δ 174.39) in the compound of formula 10 was a shift towards a higher field compared to the corresponding signal (δ 181 60) in a compound of formula 9.

Krambescidinu 657 (sloučenina vzorce 11) byl pňřazen molekulový vzorec C38H66N3O7, lišící se od sloučeniny vzorce 9 skupinou CH38h63N₃O6 podle HR-FAB-MS dat (M+H, 658,4797, diference -0,2 mmu), lišící se od sloučeniny vzorce 9 atomem kyslíku (skupinou OH). FAB-MS a FAB-MS/CID/MS spektra pro sloučeninu vzorce 11 ukazují ionty fragmentů s m/z 404 a 358 a téměř neporušenou sérii iontů fragmentů pocházejících od postupného štěpení methylenových skupin od m/z 612 do 404, což ukazuje na nepřítomnost atomu kyslíku na C-13 v pentacyklické guanidinové části, jak je potvrzeno ¹H a ¹³C NMR daty v tabulkách 1 a 2.Crambescidine 657 (compound of formula 11) was assigned the molecular formula C38H66N3O7, differing from compound of formula 9 by the group CH38h63N ₃ O6 according to HR-FAB-MS data (M + H, 658.4797, difference -0.2 mmu), differing from the compound of formula 9 with an oxygen atom (OH group). The FAB-MS and FAB-MS / CID / MS spectra for the compound of formula 11 show fragment ions of m / z 404 and 358 and an almost intact series of fragment ions resulting from the sequential cleavage of methylene groups from m / z 612 to 404 indicating the absence of an atom oxygen at C-13 in the pentacyclic guanidine moiety as confirmed by ¹ H and ¹³ C NMR data in Tables 1 and 2.

13,14,15-lsokrambescidinu 657 (vzorce 12) byl přiřazen identický molekulární vzorec C38H63N3O6 jako sloučenině vzorce 11 podle HR-FAB-MS dat (m/z 658,4790, M+H, diference 0,5 mmu). FAB-MS a FAB-MS/CID/MS spektrální data pro sloučeninu vzorce 12 byla také identická s daty sloučeniny vzorce 11. Chromatografické vlastnosti a NMR spektrum sloučenin vzorce 11 a 12 byly však podobné, ale zřetelně rozdílné, což ukazuje, že jde navzájem o isomery. ¹H a ¹³C NMR chemické posuny a interakční konstanty v pentacyklické guanidinové jednotce ve sloučenině vzorce 12, přiřazené COSY a TOCSY pokusy, byly velmi podobné posunům a konstantám u sloučeniny vzorce 5 (Jares-EriJiman E.A., Ingrum A.L., Camey J.R., Rinehart K.L., Sakai R.: J. Org. Chem. 1993, 58, 4805 až 4808.), což ukazuje na to, že stereochemie pentacyklických guanidinových částí sloučeniny vzorce 12 byla dále prokázána NOESY pokusem, při němž byly pozorovány NOE mezi H-10 a CH₃-1 a mezi H-14 a H-13, H-19, zatímco mezi H-10 a H-13 nebyl NOE přítomen (Jares-Erijiman E.13,14,15-lsocrambescidine 657 (Formula 12) was assigned the identical molecular formula C38H63N3O6 as the compound of Formula 11 according to HR-FAB-MS data (m / z 658.4790, M + H, difference 0.5 mmu). The FAB-MS and FAB-MS / CID / MS spectral data for the compound of Formula 12 were also identical to the data of the compound of Formula 11. However, the chromatographic properties and NMR spectra of the compounds of Formula 11 and 12 were similar but distinctly different, indicating o isomers. ^{The 1} H and ¹³ C NMR chemical shifts and coupling constants in the pentacyclic guanidine unit of the compound of Formula 12, assigned to COZY and TOCSY experiments, were very similar to the shifts and constants of the compound of Formula 5 (Jares-EriJiman EA, Ingrum AL, Camey JR, Rinehart KL , Sakai R .: J. Org. Chem. 1993, 58, 4805-4808), suggesting that the stereochemistry of the pentacyclic guanidine moieties of the compound of Formula 12 was further demonstrated by a NOESY experiment in which NOEs were observed between H-10 and H-10. CH ₃ -1 and between H-14 and H-13, H-19, whereas between H-10 and H-13 no NOE was present (Jares-Erijiman E.

A., Sakai R., Rinehart K.L.: J. Org. Chem. 1991, 56, 5712 až 5715; Jares-Erijiman E.A., Ingrum A.L., Camey J.R., Rinehart K.L., Sakai R.: J. Org. Chem. 1993, 58, 4805 až 4808.). Krambescidin vzorce 9, vzorce 11 nebo vzorce 12 má kyselý konec karboxylové kyseliny a silně bazickou pentacyklickou guanidinovou část (Ohtani I., Kusumi T.M, Kakisawa H., Kashman Y., Hirsh S.: J. Am. Chem. Soc. 1992, 114, 8472 až 8479). Vyskytují se tedy ve formě vnitřní soli. Dva vyměnitelné protony ve směru nižšího pole, které podle COSY pokusu odpovídaly H-9b a H-14, byly pozorovány v ¹H NMR spektru (v CDCI₃) sloučeniny vzorce 7, 8 nebo 10, což ukazuje na to, že pentacyklické guanidinové část těchto krambescidinů existuje ve formě soli. Povaha protiiontu není stanovena, ale předpokládá se, že jde o Cl'¹, protože několik isolačních stupňů zahrnuje kontakt s NaCl.A., Sakai R., Rinehart KL, J. Org. Chem. 1991, 56, 5712-5715; EA Jares-Erijiman, AL Ingrum, JR Camey, KL Rinehart, Sakai R .: J. Org. Chem. 1993, 58, 4805-4808.). Crambescidine of Formula 9, Formula 11 or Formula 12 has an acidic carboxylic acid terminus and a strongly basic pentacyclic guanidine moiety (Ohtani I, Kusumi TM, Kakisawa H, Kashman Y, Hirsh S .: J. Am. Chem. Soc. 1992, 114, 8472-8479). They therefore exist in the form of an inner salt. Two lower field replaceable protons corresponding to H-9b and H-14 according to the COZY experiment were observed in the ¹ H NMR spectrum (in CDCl ₃ ) of the compound of formula 7, 8 or 10, indicating that the pentacyclic guanidine moiety These crambescidines exist in the form of a salt. The nature of the counterion is not determined, but is believed to be Cl- ¹ because several isolation steps involve contact with NaCl.

V následující části spisu bude vynález popsán podrobně.In the following, the invention will be described in detail.

Jak bylo shora popsáno, předložený vynález se týká isolace a charakterizace (tj. struktur a bioaktivit) šesti nových krambescidinů (sloučeniny vzorců 7 až 12). Ty byly stanoveny následujícím způsobem.As described above, the present invention relates to the isolation and characterization (ie, structures and bioactivities) of six novel crambescidines (compounds of formulas 7 to 12). These were determined as follows.

Příklady provedení vynálezuDETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

Obecný postupGeneral procedure

NMR spektra byla získána na spektrometrech U-500 nebo UI-500 (500 MHz, ¹H; 125 MHz, ¹³C); chemické posuny (δ) jsou uvedeny v ppm a jsou vztaženy na maxima rozpouštědla. Hmotnostní spektra (FAB) s vysokým a nízkým rozlišením byla měřena na ZAB-SE spektrometru a FAB-MS/CID/MS spektra na zařízení 70 SE-4F s použitím dithiothreitolu-dithioerythritolu jako matrice (Witten J.L., Schaffer M.H., O'Shea M., Cook J.C., Hemling M.E., Rinehart KL.jr.: Biochem. Biophys. Res. Commun. 1984, 124, 350 až 358.). Pro HPLC dělení byla použita kolona C-18 (25.0,8 cm), velikost částic 5 pm) a jako rozpouštědlo směs methanolu s 0,1M chloridem sodným (8:2).NMR spectra were obtained on U-500 or UI-500 spectrometers (500 MHz, ¹ H; 125 MHz, ¹³ C); chemical shifts (δ) are given in ppm and are based on the maximum of the solvent. High and low resolution mass spectra (FAB) were measured on a ZAB-SE spectrometer and FAB-MS / CID / MS spectra on a 70 SE-4F instrument using dithiothreitol-dithioerythritol as a matrix (Witten JL, Schaffer MH, O'Shea M) , Cook JC, Hemling ME, Rinehart, KL, Jr., Biochem. Biophys. Res. Commun. 1984, 124, 350-358.). For HPLC separation, a C-18 column (25.0.8 cm), particle size 5 µm) was used, and a mixture of methanol with 0.1 M sodium chloride (8: 2) was used as solvent.

Extrakce a isolaceExtraction and isolation

Isolace byla prováděna podle FAB-MS měření všech extraktů a rozdělených frakcí. Byla provedena isolace ze třech vzorků Crambe crambe.Isolation was performed by FAB-MS measurement of all extracts and split fractions. Isolation was performed from three Crambe crambe samples.

První vzorek byl shromážděn SCUBA v Murcia, Španělsko, a byl identifikován Dr. M.J. Uriz-Lespem (Centreď Estudis Avancats de Blanes, Blanes, Španělsko). Zmrazený vzorek (100,2 g) byl extrahován směsí chloroformu s toluenem (3:1). Extrakt byl ve vakuu odpařen. Získá se zbytek (6,5 g), který byl roztřepán mezi chloroform a 0,1M chlorid sodný (1:1, třikrát 50 ml). Organická vrstva (3,2 g) byla dále roztřepána mezi dolní fázi a byla vyčištěna HPLC. Získá se sloučenina vzorce 1 (12,0 mg), sloučenina vzorce 2 (7,0 mg), sloučenina vzorce 3 (2,4 mg), sloučenina vzorce 4 (0,4 mg) a sloučenina vzorce 5 (5,4 mg).The first sample was collected by SCUBA in Murcia, Spain, and was identified by Dr. M.J. Uriz-Lespem (Estudis Avancats de Blanes Center, Blanes, Spain). The frozen sample (100.2 g) was extracted with chloroform / toluene (3: 1). The extract was evaporated in vacuo. A residue (6.5 g) was obtained, which was partitioned between chloroform and 0.1 M sodium chloride (1: 1, three times 50 ml). The organic layer (3.2 g) was further partitioned between the lower phase and purified by HPLC. This gave a compound of formula 1 (12.0 mg), a compound of formula 2 (7.0 mg), a compound of formula 3 (2.4 mg), a compound of formula 4 (0.4 mg) and a compound of formula 5 (5.4 mg). ).

Druhý zmrazený vzorek (500,0 g) byl shromážděn na Ibize, Španělsko. Byl isolován podle stejného postupu. Byl získán krambescidin 816 (sloučenina vzorce 1,A second frozen sample (500.0 g) was collected in Ibiza, Spain. It was isolated according to the same procedure. Crambescidine 816 (compound of formula 1,

104,5 mg).104.5 mg).

Třetí vzorek (3208,0 g) byl isolován na ostrově Formentora (Cueva), Palma de Mallorca, Španělsko. Zmrazený vzorek byl extrahován směsí chloroformu s toluenem (3:1). Byl získán extrakt (143,0 g), který byl roztřepán mezi chloroform a 1,0M chlorid sodný (1:1, třikrát 1000 ml). Chloroformová vrstva (55,4 g) byla dále roztřepána mezi směs hexan:ethylacetát:methanol:voda (4:7:4:3). Dolní fáze (18,2 g), která vykazovala dvě hlavní maxima s m/z 817 a 801, byla bleskově chromatografována na koloně C-18 (200 g). Kolona byla eluována dolní vrstvou směsi rozpouštědel [hexan:ethylacetát:methanol:voda (4:7:4:3)]. Získají se dvě frakce, které byly vyčištěny HPLC. Byly tak získány krambescidiny 816 (sloučenina vzorce 1, 1367,4 mg), 843 (vzorce 7, 4,4 mg) a 818 (vzorce 8, 3,1 mg) a ptilomycalin A (vzorce 6, 2,9 mg). Horní fáze (37,2 g), která vykazovala malá maxima s m/z 658 a 674, byla dělena bleskovou chromatografií na koloně silikagelu (300 g, velikost 0,063 až 0,037 mm), eluce gradientem rozpouštědlového systému od 0 do 100 % methanolu v chloroformu (100 až 0 %). Frakce, které vykazovaly maxima s m/z 658, 674 a 688, byly dále vyčištěny opakovanou chromatografií na koloně silikagelu (0,063 až 0,037 mm), eluce směsí chloroform:ethylacetát:methanol (9:9:1), chloroform:methanol (15:1) a chloroform:methanol (9:1). Byly získány krambescidiny 673 (vzorce 9, 23,8 mg), 687 (vzorce 10,A third sample (3208.0 g) was isolated on the island of Formentora (Cueva), Palma de Mallorca, Spain. The frozen sample was extracted with chloroform-toluene (3: 1). An extract (143.0 g) was obtained, which was partitioned between chloroform and 1.0 M sodium chloride (1: 1, three times 1000 ml). The chloroform layer (55.4 g) was further partitioned between hexane: ethyl acetate: methanol: water (4: 7: 4: 3). The lower phase (18.2 g), which showed two major maxima with m / z 817 and 801, was flash chromatographed on a C-18 column (200 g). The column was eluted with the bottom layer of solvent mixture [hexane: ethyl acetate: methanol: water (4: 7: 4: 3)]. Two fractions were obtained, which were purified by HPLC. Crambescidines 816 (Formula 1, 1367.4 mg), 843 (Formula 7, 4.4 mg) and 818 (Formula 8, 3.1 mg) and ptilomycalin A (Formula 6, 2.9 mg) were thus obtained. The upper phase (37.2 g), which showed small peaks with m / z 658 and 674, was separated by flash column chromatography on silica gel (300 g, size 0.063-0.037 mm), eluting with a solvent system gradient from 0 to 100% methanol in chloroform. (100 to 0%). Fractions showing peaks with m / z 658, 674 and 688 were further purified by repeated silica gel column chromatography (0.063-0.037 mm), eluting with chloroform: ethyl acetate: methanol (9: 9: 1), chloroform: methanol (15: 1) and chloroform: methanol (9: 1). Crambescidines 673 (Formula 9, 23.8 mg), 687 (Formula 10,

14,7 mg) a 657 (vzorce 11, 3,4 mg) a 13,14,15-isokrambescidin 657 (vzorce 12, 6,6 mg).14.7 mg) and 657 (Formula 11, 3.4 mg) and 13,14,15-isocrambescidine 657 (Formula 12, 6.6 mg).

Krambescidin 834 (vzorce 7)Crambescidin 834 (Formula 7)

Bezbarvá guma, [alfa]²⁵,, -24,7 ⁰ (c 0,44, methanol), FAB-MS m/z 835 (M+H), 799 (M+H-HCI, C45H79N6O6, HR-FAB-MS 799,6075, diference -1,4 mmu), 781 (M+H-HCI-H₂O, C45H79N6O6, HR-FAB-MS 799,6075, diference -2,9 mmu), 694, 655, 614 (CseHsoNsOs, HR-FAB-MS 781,5984, diference -2,9 mmu), 694, 655, 614 (CaeHeoNgOg, HR-FAB-MS 614,4549, diference -1,6 mmu), 426, 420, 398 (ΧΗΛΟ^ HR-FAB-MS 398,3729, diference 1,8 mmu), 380 (CzoH^NgO, HR-FAB-MS 380,3636, diference 0,5 mmu), 374, 358, 314, 264, 246, 198 (Ci₀H₂₀N₃O, HR-FAB-MS 198,1616, diference -1,0 mmu); ¹H NMR (CD3OD) viz tabulka 1,¹³C NMR (CD3OD) viz tabulka 1, ¹³C NMR (CD3OD) viz tabulka 2, ¹H NMR (CDCI3, δ): 0,88 (t, J = 7, H3-1), 1,46 (m, H-2a), 1,54 (m, H-2b), 4,51 (široký d, J = 10, H-3), 5,49 (široký d, J = 11, H-4), 5,67 (široký dd, J = 11, 7,5, H-5), 2,19 (m, H-9a), 2,34 (m, H-6b), 1,94 (m, H-7a), 2,47 (široký t, J = 14, H-7b), 1,42 (t, J = 12,5, H-9a), 2,56 (dd, J = 12,5, 5, H-9b), 4,32 (m, H-10), 1,57 (m, H-11a), 2,33 (m, H-11b), 2,04 (ddd, J = 14, 10, 4,5, H-12a), 2,16 (m, H-12b), 3,36 (s, H-14), 1,62 (m, H-16a), 1,77 (ddd, J = 14, 14, 4,5, H-16b), 1,76 (m, H-17a), 2,32 (m, H-17b), 1,23 (m, H-18a), 1,76 (dddd, J = 14, 7, 7, 2, H-18b), 4,09 (m, H-19), 1,10 (d, J = 6, H-20), 4,09 (m, H2-23), 1,61 (m, H2-40), 3,43 (široký signál, H2-41), 3,27 (široký signál, H2-42), 3,79 (široký signál, H-43), 1,68 (m, H-44a), 2,15 (m, H-44b), 2,75 (široký signál, H-45a), 2,86 (široký signál, H-45B), 5,83 (s, H-130H), 10,01 (široký s, H-8N), 10,07 (široký s, H-15N); ¹³C NMR (CDCI3, δ): 10,16 (C-1), 29,09 (C-2), 71,29 (C-3), 133,66 (C-4), 129,84 (C-5), 23,44 (C-6), 36,90 (C-7), 83,56 (C-8), 37,03 (C-9), 52,41 (C-10), 29,53 (C-11), 37,19 (C-12), 88,68 (C-13), 54,55 (C-14), 83,04 (C-15), 32,09 (C-16), 18,00 (C-17), 31,56 (C-18), 68,84 (C-19), 21,43 (C-20), 148,13 (C-21), 167,17 (C-22), 65,93 (C-23), 28,38 (C-24), 25,78 (C-36), 32,19 (C-37), 165,01 (C-38), 47,21 (C-39), 19,10 (C-40), 38,74 (C-41), 57,50 (C-42), 65,05 (C-43), 31,71 (C-44), 37,04 (C^5), HR-FAB-MS vypočteno Mr pro C^HeoNeOeCI, 835,5828 (MaH)⁺, nalezeno Mr 835,5821.Colorless gum, [alpha] ,, ²⁵ -24.7 ⁰ (c 0.44, methanol) FAB-MS m / z 835 (M + H), 799 (M + H-HCl, C45H79N6O6, HR-FAB- MS 799.6075, difference -1.4 mmu), 781 (M + H-HCl-H ₂ O, C 45 H 79 N ₆ O 6, HR-FAB-MS 799.6075, difference -2.9 mmu), 694, 655, 614 ( CseH 50 N 5 O 5, HR-FAB-MS 781.5984, difference -2.9 mmu), 694, 655, 614 (CaeHeoNgOg, HR-FAB-MS 614.4549, difference -1.6 mmu), 426, 420, 398 ( Δ-HR-FAB-MS 398.3729, difference 1.8 mmu), 380 (C 20 H 23 N 6 O, HR-FAB-MS 380.3636, difference 0.5 mmu), 374, 358, 314, 264, 246, 198 (C ₁₀ H ₂₀ N ₃ O, HR-FAB-MS 198.1616, difference -1.0 mmu); ¹ H NMR (CD 3 OD) see Table 1, ¹³ C NMR (CD 3 OD) see Table 1, ¹³ C NMR (CD 3 OD) see Table 2, ¹ H NMR (CDCl 3, δ): 0.88 (t, J = 7, H 3) -1), 1.46 (m, H-2a), 1.54 (m, H-2b), 4.51 (broad d, J = 10, H-3), 5.49 (broad d, J = 11, H-4), 5.67 (broad dd, J = 11, 7.5, H-5), 2.19 (m, H-9a), 2.34 (m, H-6b), 1.94 (m, H-7a), 2.47 (broad t, J = 14, H-7b), 1.42 (t, J = 12.5, H-9a), 2.56 (dd, J = 12.5, 5, H-9b), 4.32 (m, H-10), 1.57 (m, H-11a), 2.33 (m, H-11b), 2.04 ( ddd, J = 14, 10, 4.5, H-12a), 2.16 (m, H-12b), 3.36 (s, H-14), 1.62 (m, H-16a), 1.77 (ddd, J = 14, 14, 4.5, H-16b), 1.76 (m, H-17a), 2.32 (m, H-17b), 1.23 (m, H -18a), 1.76 (dddd, J = 14.7, 7, 2, H-18b), 4.09 (m, H-19), 1.10 (d, J = 6, H-20) , 4.09 (m, H2-23), 1.61 (m, H2-40), 3.43 (broad signal, H2-41), 3.27 (broad signal, H2-42), 3.79 (broad signal, H-43), 1.68 (broad, H-44a), 2.15 (broad, H-44b), 2.75 (broad, H-45a), 2.86 (broad, H-45B), 5.83 (s, H-130H), 10.01 (broad s, H-8N), 10.07 (broad s, H -15N); ¹³ C NMR (CDCl 3, δ): 10.16 (C-1), 29.09 (C-2), 71.29 (C-3), 133.66 (C-4), 129.84 (C -5), 23.44 (C-6), 36.90 (C-7), 83.56 (C-8), 37.03 (C-9), 52.41 (C-10), 29 53 (C-11), 37.19 (C-12), 88.68 (C-13), 54.55 (C-14), 83.04 (C-15), 32.09 (C- 16), 18.00 (C-17), 31.56 (C-18), 68.84 (C-19), 21.43 (C-20), 148.13 (C-21), 167, 17 (C-22), 65.93 (C-23), 28.38 (C-24), 25.78 (C-36), 32.19 (C-37), 165.01 (C-38) ), 47.21 (C-39), 19.10 (C-40), 38.74 (C-41), 57.50 (C-42), 65.05 (C-43), 31.71 (C-44), 37.04 (C ^ 5 5), HR-FAB-MS calcd. M ^ for C He He HeoNeOeCl, 835.5828 (MHH) ⁺ , found Mr 835.5821.

Krambescidin 818 (vzorce 8)Crambescidin 818 (Formula 8)

Bezbarvá guma, [alfa]²⁵D -11,4 ⁰ (c 0,31, methanol), FAB-MS m/z 819 (M+H), 783 (M+H-HCI, C^NeOs, HR-FAB-MS 783,6145, diference -3,3 mmu), 696 (C41H70N5O4, HR-FAB-MS 696,5437, diference -0,09 mmu), 639, 612, 598, 404, 430, 398, 380, 358, 288, 260, 206; ¹H NMR (CD3OD) viz tabulka 1, ¹³C NMR (CD3OD) vizColorless gum, [alpha] ²⁵ D -11.4 ⁰ (c 0.31, methanol) FAB-MS m / z 819 (M + H), 783 (M + H-HCl, C ^ NEOS, HR-FAB -MS 783.6145, difference -3.3 mmu), 696 (C41H70N5O4, HR-FAB-MS 696.5437, difference -0.09 mmu), 639, 612, 598, 404, 430, 398, 380, 358 288, 260, 206; ^1H NMR (CD3OD) see Table 1, ¹³ C NMR (CD3OD) see

• · · tabulka 2,¹H NMR (CDCI3, δ): 0,83 (t, J = 7, H-1), 1,42 (m, H-2a), 1,53 (m, H-2b), 4,50 (široký d, J = 9,5, H-3), 5,48 (široký d, J = 11, H-4), 5,68 (široký dd, J = 11, 7, H-5), 2,18 (m, H-6a), 2,34 (m, H-6b), 1,69 (m, H-7a), 2,46 (široký t, J = 13, H-7b), 1,41 (t, J = 12,5, H-9a), 2,55 (dd, J = 12,5, 4,5, H-9b), 3,96 (m, H-10), 1,61 (m, H-11a), 2,21 (m, H-11b), 1,79 (m, H-12a), 2,27 (m, H-12b), 4,28 (ddd, 10, 5, 5, H-13), 2,94 (d, J = 5, H-14), 1,79 (m, H2-16), 1,79 (m, H2-17), 1,20 (m, H-18a), 1,71 (m, H-18b), 3,96 (m, H-19), 1,05 (d, J = 6, H-20), 4,09 (m, H2-23), 1,61 (m, H2-24), 1,60 (m, H2-36), 2,02 (m, H2-37), 3,48 (široký signál, H2-40), 3,43 (široký signál, H2-41), 3,28 (široký signál, H2-42), 3,80 (široký signál, H-43), 1,75 (m, H-44b), 2,77 (široký signál, H-45a), 2,85 (široký signál, H-45b), 9,53 (široký s, H-8N), 9,77 (široký s, H-15N); ¹³C NMR (CDCI3, δ): 10,09 (C-1), 29,11 (C-2), 71,03 (C-3), 133,69 (C-4), 129,94 (C-5), 23,42 (C-6), 36,97 (C-7), 83,59 (C-8), 36,99 (C-9), 53,95 (C-10), 30,66 (C-11), 26,84 (C-12), 51,84 (C-13), 49,67 (C-14), 80,71 (C-15), 31,92 (C-16), 18,40 (C-17), 31,96 (C-18), 67,29 (C-19), 21,46 (C-20), 148,85 (C-21), 168,39 (C-22), 65,46 (C-23), 28,47 (C-24), 25,79 (C-36), 31,92 (C-37), 165,04 (C-38); HR-FAB-MS vypočteno Mr pro C^HgoNsOsCI 819,5879 (M+H)⁺, nalezeno Mr 819,5889.Table 2, ¹ H NMR (CDCl 3, δ): 0.83 (t, J = 7, H-1), 1.42 (m, H-2a), 1.53 (m, H-2b) 4.50 (broad d, J = 9.5, H-3), 5.48 (broad d, J = 11, H-4), 5.68 (broad dd, J = 11.7, H) -5), 2.18 (m, H-6a), 2.34 (m, H-6b), 1.69 (m, H-7a), 2.46 (broad t, J = 13, H- 7b), 1.41 (t, J = 12.5, H-9a), 2.55 (dd, J = 12.5, 4.5, H-9b), 3.96 (m, H-10) ), 1.61 (m, H-11a), 2.21 (m, H-11b), 1.79 (m, H-12a), 2.27 (m, H-12b), 4.28 ( ddd, 10, 5, 5, H-13), 2.94 (d, J = 5, H-14), 1.79 (m, H2-16), 1.79 (m, H2-17), 1.20 (m, H-18a), 1.71 (m, H-18b), 3.96 (m, H-19), 1.05 (d, J = 6, H-20), 4, 09 (m, H2-23), 1.61 (m, H2-24), 1.60 (m, H2-36), 2.02 (m, H2-37), 3.48 (broad signal, H2 -40), 3.43 (broad signal, H2-41), 3.28 (broad signal, H2-42), 3.80 (broad signal, H-43), 1.75 (m, H-44b) 2.77 (broad signal, H-45a), 2.85 (broad signal, H-45b), 9.53 (broad s, H-8N), 9.77 (broad s, H-15N); ¹³ C NMR (CDCl 3, δ): 10.09 (C-1), 29.11 (C-2), 71.03 (C-3), 133.69 (C-4), 129.94 (C -5), 23.42 (C-6), 36.97 (C-7), 83.59 (C-8), 36.99 (C-9), 53.95 (C-10), 30 66 (C-11), 26.84 (C-12), 51.84 (C-13), 49.67 (C-14), 80.71 (C-15), 31.92 (C- 16), 18.40 (C-17), 31.96 (C-18), 67.29 (C-19), 21.46 (C-20), 148.85 (C-21), 168, 39 (C-22), 65.46 (C-23), 28.47 (C-24), 25.79 (C-36), 31.92 (C-37), 165.04 (C-38) ); HR-FAB-MS calcd. For C ^ HHgoNNsOsCl 819.5879 (M + H) ⁺ , found Mr 819.5889.

Krambescidin 673 (vzorce 9)Crambescidin 673 (Formula 9)

Bezbarvá guma, [alfa]²⁵D -16,6 ⁰ (c 0,50, methanol), FAB-MS m/z 674 (M+H), 576, 420, 358, 314 (Ci₉H₂₈N₃O, HR-FAB-MS 314,2240, diference -0,8 mmu), 264, 246, 168; ¹H NMR viz tabulka 1, ¹³C NMR viz tabulka 2; HR-FAB-MS vypočteno Mr pro CsAaNaOy 674,4744 (M+H)⁺, nalezeno Mr 674,4734.Colorless gum, [alpha] ²⁵ D -16.6 ⁰ (c 0.50, methanol), FAB-MS m / z 674 (M + H), 576, 420, 358, 314 (C ₁₉ H ₂₈ N ₃ O) HR-FAB-MS 314.2240, difference -0.8 mmu), 264, 246, 168; ¹ H NMR see Table 1, ¹³ C NMR see Table 2; HR-FAB-MS calc. Mr for CsAaNaOy 674.4744 (M + H) ⁺ , found Mr 674.4734.

Krambescidin 687 (vzorce 10)Crambescidin 687 (Formula 10)

Bezbarvá guma, [alfa]²⁵D -18,2 ⁰ (c 0,52, methanol), FAB-MS m/z 688 (M+H), 630, 590, 420, 374, 358, 314, 264, 246, 168; ¹H NMR viz tabulka 1, ¹³C NMR viz tabulka 2; HR-FAB-MS vypočteno Mr pro C^HeeNsO? 688,4901 (M+H)⁺, nalezeno Mr 688,4907.Colorless gum, [alpha] ²⁵ D -18.2 ⁰ (c 0.52, methanol) FAB-MS m / z 688 (M + H), 630, 590, 420, 374, 358, 314, 264, 246 , 168; ¹ H NMR see Table 1, ¹³ C NMR see Table 2; HR-FAB-MS calcd. 688.4901 (M + H) ⁺ , found Mr 688.4907.

Krambescidin 657 (vzorce 11)Crambescidin 657 (Formula 11)

Bezbarvá guma, [alfa]²⁵D -12,1 ⁰ (c 0,34, methanol), FAB-MS m/z 658 (M+H), 612, 560, 404 (C^H^NaCU, HR-FAB-MS 404,2541, diference 0,8 mmu), 360, 358, 288, 206 (C13H20NO, HR-FAB-MS 206,1547, diference -0,2 mmu); ¹H NMR viz tabulka 1, ¹³C NMR viz tabulka 2; HR-FAB-MS vypočteno Mr pro C38H64N₃O₆ 658,4795 (M+H)⁺, nalezeno Mr 658,4797.Colorless gum, [alpha] ²⁵ D -12.1 ⁰ (c 0.34, methanol) FAB-MS m / z 658 (M + H), 612, 560, 404 (C ^ H ^ NAC, HR-FAB -MS 404.2541, difference 0.8 mmu), 360, 358, 288, 206 (C 13 H 20 NO, HR-FAB-MS 206.1547, difference -0.2 mmu); ¹ H NMR see Table 1, ¹³ C NMR see Table 2; HR-FAB-MS calculated for C38H64N Mr ₃ O ₆ 658.4795 (M + H) ^+, found Mr 658.4797.

Methylace krambescidinu 657Crambescidine methylation 657

Směs sloučeniny vzorce 11 (1 mg) rozpuštěné v methanolu (1 ml) a diazomethanu v diethyletheru (2 ml) se udržuje 24 h na teplotě místnosti. Rozpouštědla se odstraní (N₂) a zbytek se chromatografuje na silikagelu, elcue směsí chloroformu s methanolem (9:1). Získá se tak methylester sloučeniny vzorce 11 (0,7 mg). Bezbarvá guma, FAB-MS m/z 672 (M+H), 574, 404, 358, 288, 206; HR-FAB-MS vypočteno Mr pro CsrteNaOe 672,4952 (M+H)⁺, nalezeno Mr 672,4984.A mixture of the compound of formula 11 (1 mg) dissolved in methanol (1 mL) and diazomethane in diethyl ether (2 mL) was maintained at room temperature for 24 h. The solvents were removed (N ₂ ) and the residue was chromatographed on silica gel, eluting with chloroform / methanol (9: 1). There was thus obtained the methyl ester of the compound of formula 11 (0.7 mg). Colorless gum, FAB-MS m / z 672 (M + H), 574, 404, 358, 288, 206; HR-FAB-MS calc. Mr for CsrteNaOe 672.4952 (M + H) ⁺ , found Mr 672.4984.

13,14,15-lsokrambescidin 657 (vzorce 12)13,14,15-lsocrambescidin 657 (Formula 12)

Bezbarvá guma, [alfa]²⁵D -32,7 ⁰ (c 0,29, methanol), FAB-MS m/z 658 (M+H), 612, 560 (C^H^NaOs, HR-FAB-MS 560,4034, diference 2,9 mmu), 404, 360, 358 (C₂₁H₃₂N₃O₂, HR-FAB-MS 358,2494, diference 0,1 mmu), 288, 206; ¹H NMR viz tabulka 1, ¹³C NMR viz tabulka 2; HR-FAB-MS vypočteno Mr pro C38H64N3O6 658,4795 (M+H)⁺, nalezeno Mr 658,4790.Colorless gum, [alpha] ²⁵ D -32.7 ⁰ (c 0.29, methanol) FAB-MS m / z 658 (M + H), 612, 560 (C ^ H ^ Naos, HR-FAB-MS 560.4034, difference 2.9 mmu), 404, 360, 358 (C ₂₁ H ₃₂ N ₃ O ₂ , HR-FAB-MS 358.2494, difference 0.1 mmu), 288, 206; ¹ H NMR see Table 1, ¹³ C NMR see Table 2; HR-FAB-MS calcd. For C38H64N3O6 658.4795 (M + H) ⁺ , found Mr 658.4790.

Tabulka 1 poskytuje ¹H NMR data sloučenin vzorce 7 až 12. Tabulka 2 poskytuje ¹³C NMR data sloučenin vzorce 7 až 12.Table 1 provides ¹ H NMR data for compounds of formulas 7 to 12. Table 2 provides ¹³ C NMR data for compounds of formulas 7 to 12.

* « ’* ·· > · · 1 » · · I t—<* m r->β υ* «’ * ··> · 1 »· · I t - <* m r-> β υ

Ω υΩ υ

CMCM

ιη * ιη * Μ Μ Ό Ό υ •σ υ • σ 44 44 b- b- Ε Ε Ε Ε U Χ3 AT Χ3 -α -α U Χί AT Χί Ε Ε Ε Ε Ε Ε U Α. AT Α. tf tf ρ—4 ρ — 4 ω ω ο ο CM* CM * ό ό ο* ο * οο* οο * ω* ω * ch ch tr tr ιη ► ιη ► α α ιη ιη ιο ιο 94 94 η η ί--_ ί --_ ο ο 9-4 9-4 tr tr LQ LQ ιη ιη cm“ cm " η η ^-4 ^ -4 cm“ cm "

ιη ιη ιη ιη CM «~4 CM «~ 4 Ε Ε Ε Ε Ε Ε Ε Ε Ε Ε Ε, Ε, ·» cn το · » cn το Ε Ε Ε Ε Ε Ε ιη ιη Ch* Ch * ιη ιη Ch* Ch * CM* CM * ιη ιη 00* 00 * οο οο CM* CM * r*4 r * 4 Ch* Ch * ω. ω. 00. 00. Ά Ά W-4 W-4 ιθ ιθ Ch. Ch. xr xr A. AND. b-. b-. U3. U3. ·—« · - « m* m * »“4 »“ 4 cm“ cm " οΓ οΓ cd CD cd CD —“ - " 94 94 Ρ-4 Ρ-4

Ι-Ι-

b- -4-Γ CM b- -4-Γ CM Ε οί Ε οί Ε cn Ε cn ιη Ch“ XI U Χ3 00* ιη Ch " XI AT Χ3 00 * r—4 <—4 •d U J0 00 r — 4 <—4 • d AT J0 00 Ό* XJ U XI tr Ό * XJ AT XI tr Ε ΧΤ Ε ΧΤ Ε CM* Ε CM * Ε tf Ε tf tr »—4 +J u. X3 tr tr »—4 + J at. X3 tr in^ oT t—4 -4-Γ «—4 in ^ oT t — 4 -4-Γ «—4 E 00* E 00 * E •—4 E • —4 E xr E xr E 00* E 00 * E tr E tr E ID* E ID * tr •q Ch* tr • q Ch * E. CM* E. CM * E CM* E CM * E C-* E C-* 00 00 χΤ χΤ ιη ιη CO WHAT χΤ χΤ α. α. «—4 «—4 cn cn 00 00 t- t- cn cn Ch Ch IO IO »-4 »-4 b~ b ~ Cl Cl CM CM 00 00 A AND O O A AND 9 9 ο“ ο " ρ—4 ρ — 4 tr“ tr " ιη ιη ιη“ ιη " CM CM CM CM ♦—4 ♦ —4 CM CM r—« r— « co what »—4 »—4 CM CM ^4 ^ 4 CM CM tr tr CM CM CM CM r4 r4

υυ

Ω υΩ υ

οο

I-AND-

o r—4 TO O r — 4 IT P-4 *“* r-4 P-4 r-4 in xr ^4 44 in xr ^ 4 44 το το X) X X) X t- 4 t- 4 E E E E u JO at YEAH u JO at YEAH u. A at. AND E E E E E E u XI at XI c·* C·* A* AND* in in 9-4 9-4 CO* WHAT* A* AND* oo* oo * XT XT CM* CM * 4 4 oo. oo. XT* XT * LQ* LQ * in in xr xr A AND »—4 »—4 cn cn θ' θ ' in in a and p«4 p «4 ^4 ^ 4 Xt Xt in in in in CM CM CM CM CM CM

ιη cm“ β Ε β Ε Ε «η Ε Ε Ειη cm “β Ε β Ε Ε Ε Ε Ε Ε Ε

•—4 • —4 CM CM cn cn cn cn iD iD in in CM CM IO IO iO iO xr xr cn cn in in cn «· cn «· o «· O «· 9-M » 9-M »» tn tn r-_ r-_ xr xr 1-4 1-4 CM CM CM CM CM CM co what r-M r-M r-M r-M

data sloučenin vzorců 7 až 12 υdata of compounds of formulas 7 to 12 υ

Ω υΩ υ

σ>σ>

ΩΩ

Ο ηΟ η

ΩΩ

U οοU οο

ΩΩ

Ο ηΟ η

Ω υΩ υ

ί-ί-

>ο b-> ο b-

O X) O X) «-Μ »-4 «-Μ» -4 in ·· CM in ·· CM 1-4 •d 1-4 • d u* X) at* X) xr 44 xr 44 b- b- u at u. at. u at E E u at r-4 r-4 E^ E ^ b b JO YEAH X3 X3 E E E. E. JO YEAH 44 44 ID ID in in tr* tr * CM* CM * cd CD m·* m · * CM* CM * bi bi _Γ _Γ cn cn CM* CM * 00 00 xr xr •Ί • Ί in *· in * · xr «1 xr «1 ID. ID n «» n «» n n o O 9-4 9-4 *r * r in in m“ m " cm cm CM CM v—4 v — 4 cm cm P-4 P-4

b-b-

Ch •d Ch • d •d • d P—4 Ό T3 P — 4 Ό T3 cd P—4 CD P — 4 +J + J m m b-^ b- ^ E E E E u JO at YEAH u J0_ at J0_ u. 43 at. 43 E E E E E E u* X). at* X). 44 44 in* in * 00* 00 * in in CM* CM * 94 94 CM* CM * 00* 00 * CM* CM * CM* CM * CO WHAT xr xr 00 00 xr* xr * in* in * xr xr in in b-_ b-_ xr* xr * O O n. n. xr* xr * o O p—4 p — 4 9-4 9-4 xr xr in in in in CM CM cm cm cm“ cm " CM CM p-T p-T

bοbο

p-4 TJ* p-4 I.E* p 4 •d p 4 • d TJ* T0 I.E* T0 t- t- E E E E u A at AND u .O at .O u A at AND E E E E Ch* Ch * Ch* Ch * t- t- vO* vO * CM* CM * CM* CM * oo oo xr xr oo_ oo_ xr^ xr ^ tr tr in in b-_ b-_ —< - < xr* xr * o* O* r4 r4 ^-4 ^ -4 tr“ tr " id id in in CM** CM ** cm cm

rt Α cm cm η ·+rt Α cm cm η · +

0) JO ιη ο ιο0) JO ιη ο ιο

E E E E E E E. E. E E cn cn E. E. E E h h CM* CM * in in o* O* 00* 00 * xr xr 94 94 CO WHAT xr xr t-* t- * n_ n_ to it n n P-M P-M ^ω. ^ω . «0 «0 iq. iq. tr tr 9^ 9 ^ cm“ cm " 9—* 9— * cm“ cm " cn cn 4 4 r~4 r ~ 4

ιηιη

E. in* E. in * E o’ E O' E_ Ch* E_ Ch * E o* E O* E P—1 E P — 1 E LQ* E LQ * •d 00* • d 00 * E oo* E oo * E ID* E ID * E m* E m * o O Ά Ά CM CM °o* ° o * cn* cn * cn cn o* O* b-_ b-_ b- b- tf tf r·^ r · ^ CM CM cm cm xr* xr * cn cn P^-^P ^- ^ P~f* P ~ f *

ιηιη

in in CM CM u at »—4 »—4 f4 f4 p* p * P* P * 1— 1— E E A_ AND_ 4-Γ 4-Γ E E E. E. E E E. E. CM* CM * b-* b- * tf tf CM* CM * Ρ-Γ Ρ-Γ cd CD A* AND* 00* 00 * O O Π. Π. tr. tr. CO. WHAT. oo oo tr. tr. cq cq r—4 r — 4 cm“ cm " cm“ cm " —Γ —Γ tr“ tr " 1-4 1-4 cm“ cm " CM* CM * CM* CM *

ω β Ε Ε οο* ιη* t-* tf tr ιο co. οο_ω β Ε Ε οο * ιη * t- * tf tr ιο co. οο_

CQ ^4 *“4 <βCQ ^ 4 * 4 4 <β

ΙΑ (π! Ο (J\ —<ΙΑ (π! Ο (J \ - <

Λ X)Λ X)

η)η)

CMCM

XI cm <ηX <cm

α) Α πί Ό ιο I• · · ·* · ···· r>α) Α πί Ό ιο I • · · · * · ··· r>

u ou o

uat

CN vO r- N.CN vO r-N.

E Ε ·α E_ E_ E~ q q ~Γ σ>* cn cn f- b~ b- o· co to o Ί A t 4 ^lřl °i- Goj < ·—ι to ·—i to —* “¹ cn cn inE · α Ε E_ E_ ~ qq ~ E Γ σ> * cn cn F- ~ b · b- about what the Ί A t l ^4'R ° Goj i- <-ι · · that it -i - * ^'1 cn cn in

« « vó vó r- r- E E E E E E E E xí xí E E E E E E 4-T 4-T toj toj xf xf t-T t-T b·* b · * o? O? xr xr G G o' O' o O CO WHAT co* what* ť Ť uq uq cn ·». cn · ». °to ° to cn_ cn_ cO to what it cO to what it d to. d it. n n CN CN r-4 r-4 co what t-4 t-4 <o* <o * <-4 <-4 »“4 »“ 4 d d d d

nn

GG

QQ

O in to vO data sloučenin vzorců 7 až 12 (dokončení)0 in to vO data of compounds of formulas 7 to 12 (completion)

E E E E E E E E •g •G E E E E cn cn co’ what' ď ï 00 00 cn cn lO 10 o* O* co to. what it. Fl Fl r-_ r-_ cq cq o_ O_ cn to cn it q. q. CN CN to4 to4 r-4 r-4 xr* xr * r-4 r-4 co what

b* b* <Ό CO ci d in <D *»b * b * <Ό CO or d in <D * »

COWHAT

r- r- b^ b ^ E. E. E^ E ^ E- E- E E •g •G E E E_ E_ E E L L 4-4 4-4 rr rr t-4 t-4 o* O* o O in in •—4 • —4 o* O* (O (O cn cn rr_ rr_ d to d it Ά Ά q. q. q. q. o. O. vO to vO it iq iq °í ° í d d » < »< r—4 r — 4 xr xr T-4 T-4 rr rr r-4 r-4 ♦—4 ♦ —4 CN CN d* d *

d co ‘43 dd co-43 d

d t’00 to cod t’00 what

V0 tj rr oV0 ie rr o

cs in vqcs in vq

4-T •σ cd m4-T • σ cd m

VOVO

LOLO

VDVD

O inO in

-r d d-r d d

KO r-KO r-

o O LO LO in in o O •-ζ • -ζ rr rr xr xr in in in in 44 44 4-T 4-T Γ^- Γ ^- ud limb xí xí xí xí X3 X3 TJ I.E Ř Ř •4-4 • 4-4 Ό Ό Ό Ό id id r-< r- < in in o* O* <O <O t-4 t-4 rr^ rr ^ °to ° to rr. rr. co* what* rd rd d“ d " co what <ď <ď cd* CD*

m o_ rr*m o_ yy *

CJ bxr ooCJ bxr oo

E qE q

CO rr -- 00 íď IfT in in coCO rr - 00 drive IfT in in co

10. 10. in in co* r-< what* r- < co* t-4 what* t-4 in in in ^4 in ^ 4 f4 f4 G G (4 (4 r- r- u? at? J-4 J-4 f4 f4 (4 (4 f-4 f-4 4-T 4-T f— F- in in Ό* Ό * Ό* Ό * rt rt r4 r4 E- E- E~ E ~ E^ E ^ E_ E_ g G 4-4 4-4 E E E E E. E. E. E. •g •G Ή Ή E^ E ^ •M • M •σ • σ •a •and E E E E E E w w d d CO* WHAT* co* what* r~ r ~ xf xf VD VD <0* <0 * xr* xr * Ch Ch Ό* Ό * <o* <o * CN* CN * u: at: O* O* vd vd CN* CN * \6 \ 6 •<r • <r in in cd CD o O co what tq tq cn cn r-4 r-4 t4 t4 U3 U3 q q xr xr b- b- iq iq vO vO cq cq xr xr co^ co ^ Ά Ά <□ <□ b- b- °°to °° to t-4 t-4 00 00 r4 r4 to4 to4 to4 to4 co* what* »-4 »-4 rr rr r-4 r-4 »—< »- < CN CN CN CN co* what* CO WHAT CN* CN * co“ what" cd* CD* CO* WHAT* xr* xr * t-4 t-4 t-4 t-4 co* what* id id K TO O c O C JO YEAH GS GS J0 J0 ctí honors to it JO YEAH 0) 0) JO YEAH ctí honors Xi Xi Ctí Honors X» X » O O b~ b ~ 00 00 00 00 Ch Ch o O co what XT XT Ό Ό b- b- b- b- Ch Ch cn cn o O r-4 r-4 d d CN CN CO WHAT rr rr Xt Xt in in co what r< r < t4 t4 t-4 t-4 T-4 T-4 r-4 r-4 CN CN d d CN CN CO WHAT co what co what CO WHAT CO WHAT Xt Xt ^r ^ r xr xr xr xr xr xr xt xt xr xr --1 --1 O O

znamená široký signálmeans a broad signal

X3X3

CNCN

ΧΝ (ΟΟ (Ο

UAT

Ω υΩ υ

cncn

tr tr o O Cl· Cl · Oí Oí L·· L · · r-í r-i o O tr tr co what cO what tj· i.e· Ch Ch uo uo o O co what o O 00 00 co^ co ^ 00 00 CO k WHAT to tr «k tr "to o O ^fX ^f X eo eo CN_ CN_ Ά Ά Ch k Ch to tr «* tr «* ^eL ^e L kO *» kO * » Cl· •k Cl · •to ď) •k d) •to of of O* O* co* what* σ» σ » O- O- t'- t'- in in Γ- Γ- Cí Whose Ó“ O" Ch Ch «—4 «—4 v—4 v — 4 rf rf cl· cl · 0' 0 ' r—^ r— ^ Cí Whose Γ- Γ- co what Oí Oí CN CN ω ω 00 00 ΓΟ ΓΟ ΙΌ ΙΌ CO WHAT CN CN in in tr tr co what Oí Oí F—4 F — 4 co what

ο co —* — ·*ο what - * - · *

c- C- 00 00 r- r- 00 00 r~ r ~ co what cO what co what o O in in 00 00 tr tr tr tr ·-« · - « tn tn Ch Ch «k. "to. * * co^ co ^ co what CO * WHAT * 00 •k 00 •to o *k O *to 00 •k 00 •to ΙΛ •k ΙΛ •to *» * » q q 0' ·. 0 ' ·. fc fc o O Cl· Cl · o O co what of of co what cď CD co what í'* and'* co what O O kO kO ·—4 · —4 o O o O k-4 k-4 o- O- CN CN Oí Oí r- r- co what Oí Oí CN CN co what 00 00 co what in in CO WHAT Oí Oí tn tn cn cn 00 00 co what r-4 r-4 CO WHAT

Ο cO — CNO cO-CN

Ο Ch — CN t'<0 kΟ Ch - CN t '<0 k

σ) co mσ) co m

ChCh

CN in \r ·» coCN in \ r · »co

CN co co kCN what to k

COWHAT

CO oCO o

cO •k co coWHAT • WHAT WHAT

COWHAT

OO

O kO k

CN in r~ oo ch ονΟ co co \0CN in r ~ oo ch ονΟ what co \ 0

ChCh

CN co coCN what what

CO Ooo in oo oo O O •k *kCO Ooo in oo oo About O • k * k

CO CN CO CO oOiCO CN CO CO oi

COWHAT

ΙΛΙΛ

COWHAT

O O Oí Oí cO what o O tr tr 00 00 Oí Oí 00 00 co what 0- 0- «— «- cO what O O N- N- Cl· Cl · m m in in o O r- r- Ω Ω 0í •k 0i •to q q o- Wk O- Wk co «, what «, c- C- «k "to o- «k O- "to ΙΩ ΙΩ Cí •k Whose •to CO k WHAT to Γ- *k Γ- *to A. AND. tn ·» tn · » r—4 •k r — 4 •to tr •k tr •to q q U AT o O ch ch o O co what Cl· Cl · co what cO what rf rf OJ OJ Ch Ch ’O 'O ω ω in in CO WHAT Cl· Cl · 1 - 1 - »—4 »—4 cc cc r- r- co what Oí Oí Oí Oí CO WHAT 00 00 co what in in CN CN CO WHAT 00 00 10 10 00 00 Oí Oí ,—4 , —4 co what ch ch ·“* · "* *-· * - ·

CNt^O-CNcDO-Ch—· —' lO cO cO cO xr fc. ·> fc» *k» ·» oc^^rooror-Tr «-«Cír-COCOCNCOCO tco oCNt2O-CNcDO-CH2 - 10 c0 c0 c0 xr fc. > F * oc oc oc oc oc oc oc oc oc oc oc oc oc oc oc

Cl· \rCl · \ r

Ui co r«· oUi co r o · o

COWHAT

00^ vo“00 ^ vo "

CíWhose

Μ *»Μ * »

CO ir, rCl· cn tr oo tr θ’» trcíCO ir, rCl · cn tr oo is sticking

CO CO co Oí fOCO CO co oí fO

cO what O O CO « WHAT « tr tr Cl· Cl · co what 00 00 tr tr oo oo o O CN CN CO WHAT t- t- CN CN o O CO WHAT cO what CN CN r- r- in in ΙΛ ΙΛ 00 00 tr> tr> Ch Ch tr^ tr ^ o O in in ®k ®k «-« «-« CO WHAT Ch. Ch. 'ζ. 'ζ. C? C? Ch Ch rf rf Ó* O* rf rf yf yf tr* tr * cd CD rf rf o O |č No | Ch Ch uf uf rf rf r—Ί r — Ί 00 00 Γ1 Γ1 CN CN co what CO WHAT CN CN co what 00 00 co what in in CO WHAT co what 00 00 m m co what co what CO WHAT

69,34 67,75 68,09 68,82 66,71 68,8169.34 67.75 68.09 68.82 66.71 68.81

21,00 21,09 21,49 21,41 21,59 22/2521.00 21.09 21.49 21.41 21.59 22/25

148 86 149,54 148,85 148,12 349,48 149,74 cscotruovor-oocl· o r-< Cí co tr ΙΩ O b- co148 86 149.54 148.85 148.12 349.48 149.74 cscotruovor-oocl · o r- <Cí co tr ΙΩ O b- co

O\ O »“» CN CS • · ·«O \ O »» »»

OO

QQ

OO

CNCN

t- t- vO vO o O fO fO co what ta. the. O ta O the ‘Ί ‘Ί tn *» tn * » Cn ta Cn the co what tn tn 00 00 tn tn r—4 r — 4 o O o O tO it CN CN CN CN CO WHAT 00 00 · ·

o O Ι- Ι- N3 N3 Ch Ch co what tn tn Ο Ο iO iO M3 M3 o O *, 00 *, 00 ta tn the tn oí“ oí " in in tak cn so cn »—» »-» <£> <£> Ό Ό CN CN CN CN fO fO co what ta^-*ta ^- * f“< f “<

Tabulka 2 ¹³C NMR data sloučenin vzorců 7 až 12 (dokončení) u ¹³ C NMR data of compounds of formulas 7-12 (completion) u

Q oQ o

oO

o O σ σ cn cn o O σ σ r—t k. r — t to. σ k> σ k> t- ta* t- the* ta^ ta ta ^ the t- t- in in 00 00 m m XT XT N N VO VO «3 «3 CN CN CN CN CO WHAT f- F- r—< r— < »—» »-»

u at t- t- t- t- xr xr tn tn 00 00 o O Q Q cn cn in ·% in ·% CN •k CN •to tO •k it •to ta-« ta the-" the o ta O the O O ί- ί- tn tn 00 00 m m CN CN ta^-*ta ^- * ο ο o O CN CN CN CN cn cn oo oo cn cn ta^ ta ^ ta“» the""

oooo

XJ υXJ υ

xr xr tn tn m m co what oo oo o O cn cn xf xf \O \O cn cn CN CN 00 00 O' O' tn ta tn the 00 00 o •k O •to cn ta cn the tn^k tn ^ k »—» *» »-» * » ·«. · «. Q. Q. cn cn tzf tzf 00 00 lO 10 CN CN tn* tn * t- t- cn cn cn cn t- t- CO WHAT CN CN t- t- o O to it CN CN CN CN σ) σ) to it Ν’ Ν ’ ta-» the-" cn cn tn tn Φ Φ cn cn cn cn

CN CN 00 00 <n <n 00 00 00 00 cn cn σ σ tn tn M5 M5 co what 00 00 CN CN σ σ ta^-* tata ^- * ta CO ta WHAT the 00 tak 00 so σ σ o_ O_ ta the v—» ta in-" the 03 ta 03 / the cn ta cn the o_m o _m 00 00 to it 00 00 cd“ CD" cn“ cn " tn tn í- and- σ» σ » σ σ C- C- <o <o CN* CN * Ι- Ι- to it to it CN CN CN CN co what to it ta·* the·* co what in in iO iO cn cn ΓΟ ΓΟ

CNCN

CO V U3 H 00 cn cn ro ro co σι coCO V U3 H 00 cn cn ro ro co σι co

CN CO V v in *r vt·CN CO V in * r t ·

V tk ta·» inV tk ta · »in

Signály označené * a “ mohou být navzájem zaměněny.The signals marked * and “can be interchanged.

Biologická aktivitaBiological activity

Krambescidiny (vzorců 1 až 4) inhibovaly růst buněk L1210 (Jares-Erijiman E. A., Sakai R., Rinehart K.L.: J. Org. Chem. 1991, 56, 5712 až 5715.), krambescidin 816 (vzorce 1) vykazoval také protivirovou aktivitu na Herpes simplex, virus typu I (HSV-1) a byl také silným blokátorem kanálků Ca⁺⁺ (Berlinck R.G.S., Braekman J.C., Daloze D., Bruno I., Riccio R., Ferri S., Spampinato S., Sperioni E.: J. Nat. Prod. 1993, 56, 1007 až 1015.). 13,14,15-lsokrambescidin 800 (vzorce 5) byl podstatně méně toxický na buňky L1210 a nebyla u něj pozorována žádná protivirová aktivita (Jares-EriJiman E.A., Ingrum A.L., Camey J.R., Rinehart K.L., Sakai R.: J. Org. Chem. 1993, 58, 4805 až 4808.). Ptilomycalin A (vzorce 6) vykazoval cytotoxicitu na buňky L1210, P388 a KB, protihoubovou aktivitu na Candida albicans a také protivirovou aktivitu (HSV) (Kashman Y., Hirsh S., McConnell O.J., Ohtani I., Kusumi T., Kikasawa H.: J. Am. Chem. Soc. 1989, 111, 8925 až 8926; Ohtani I., Kusumi T.M, Kakisawa H., Kashman Y., Hirsh S.: J. Am. Chem. Soc. 1992, 114, 8472 až 8479.).Crambescidins (formulas 1-4) inhibited the growth of L1210 cells (Jares-Erijiman EA, Sakai R., Rinehart KL: J. Org. Chem. 1991, 56, 5712-5715), crambescidine 816 (Formula 1) also showed antiviral activity Herpes simplex, type I virus (HSV-1) and was also a potent Ca ⁺⁺ channel blocker (Berlinck RGS, Braekman JC, Daloze D, Bruno I, Riccio R, Ferri S, Spampinato S, Sperioni E (J. Nat. Prod. 1993, 56, 1007-1015). 13,14,15-lsocrambescidin 800 (Formula 5) was substantially less toxic to L1210 cells and no antiviral activity was observed (Jares-EriJiman EA, Ingrum AL, Camey JR, Rinehart KL, Sakai R .: J. Org. Chem., 1993, 58, 4805-4808). Ptilomycalin A (Formula 6) showed cytotoxicity to L1210, P388 and KB cells, anti-fungal activity on Candida albicans as well as antiviral activity (HSV) (Kashman Y., Hirsh S., McConnell OJ, Ohtani I, Kusumi T., Kikasawa H J. Am Chem Soc 1989, 111, 8925-8926, Ohtani I., Kusumi TM, Kakisawa H, Kashman Y, Hirsh S .: J. Am Chem Soc., 1992, 114, 8472. to 8479.).

V paralelním testu na buňky L1210 myší leukemie (viz tabulka 3) s použitím krambescidinů 816 (vzorce 1) jako standardu jsou krambescidiny 834 (vzorce 7) a 818 (vzorce 8) s chlorovanou spermidinovou jednotkou asi pětkrát účinnější než sloučenina vzorce 1. Avšak krambescidiny 674 (vzorce 9) a 687 (vzorce 10) bez spermidinové jednotky jsou méně než pětkrát tak účinné jako sloučenina vzorce 1.In a parallel test for L1210 mouse leukemia cells (see Table 3) using crambescidines 816 (Formula 1) as standard, crambescidines 834 (Formula 7) and 818 (Formula 8) with a chlorinated spermidine unit are about five times more potent than the compound of Formula 1. However, crambescidins 674 (Formula 9) and 687 (Formula 10) without the spermidine unit are less than five times as effective as the compound of Formula 1.

13,14,15-lsokrambescidin 657 (vzorce 12) je, jak bylo očekáváno, podstatně méně účinný (žádná inhibice při 5 pg/ml) než jiné krambescidiny. Ptilomycalin A (vzorce 6) je nepatrně účinnější než sloučenina vzorce 1.13,14,15-lsocrambescidine 657 (Formula 12) is expected to be substantially less potent (no inhibition at 5 µg / ml) than other crambescidins. Ptilomycalin A (Formula 6) is slightly more potent than the compound of Formula 1.

V antipbiálním testu na Rhodotorula glutinis krambescidiny se spermidinovou jednotkou a ptilomycalin A vykazují aktivitu při 2 ug/jamku, ostatní krambescidiny nevykazují žádnou aktivitu při 20 pg/jamku. Tato zjištění ukázala, že jak struktura pentacyklických částí tak jednotky spermidinu nebo jeho derivátu podobající se kleci v krambescidinech a ptilomycalinu A hrají důležité role v jejich silných biologických účinnostech.In the anti-pbial test for Rhodotorula glutinis crambescidins with spermidine unit and ptilomycalin A show activity at 2 µg / well, the other crambescidins show no activity at 20 µg / well. These findings have shown that both the structure of the pentacyclic moieties and the cage-like units of spermidine or its cage derivative in crambescidines and ptilomycalin A play important roles in their potent biological activities.

Je zajímavé, že krambescidin 657 (vzorce 11) je nejsilnější cytotoxickou sloučeninou v tomto testu. Viz zvláště tabulku 4. Aktivita je významně snížena methylací diazomethanem. Protože kyselý konec postranního řetězce je složen směrem k základní pentacyklické guanidinové části ve formě vnitřní soli sloučeniny vzorce 11 a konformace vnitřní soli je jiná než u jiných krambescidinů, cytotoxicita sloučeniny vzorce 11 může pocházet od odlišného mechanismu působení na buňky.Interestingly, crambescidine 657 (Formula 11) is the most potent cytotoxic compound in this assay. See in particular Table 4. Activity is significantly reduced by diazomethane methylation. Since the acidic end of the side chain is folded towards the basic pentacyclic guanidine moiety in the form of the inner salt of the compound of Formula 11, and the conformation of the inner salt is different from other crambescidines, the cytotoxicity of the compound of Formula 11 may derive from a different mechanism of cell action.

Nové krambescidinové sloučeniny budou mít farmaceutická použití srovnatelná s dříve známými krabescidinovými sloučeninami, zvláště jako protinádorové sloučeniny, jak je uvedeno v tabulkách 3 a 4.The novel crambescidine compounds will have pharmaceutical uses comparable to the previously known cresescidine compounds, particularly as antitumor compounds as shown in Tables 3 and 4.

Tabulka 3Table 3

Cytotoxicity sloučenin vzorců 1, 6 až 12 a methylderivátu sloučeniny vzorce 11 na buňky L1210Cytotoxicity of compounds of formulas 1, 6 to 12 and methyl derivative of compound of formula 11 to L1210 cells

koncentrace (pg/i) concentration (pg / i) inhibice (%) inhibition (%) 1 1 6 6 7 7 8 8 9 9 10 10 11 11 12 12 Me-11 Me-11 1,0 1.0 100 100 ALIGN! 100 100 ALIGN! 100 100 ALIGN! 100 100 ALIGN! 100 100 ALIGN! 100 100 ALIGN! 100 100 ALIGN! 100 100 ALIGN! 0 0 0,5 0.5 97 97 99 99 95 95 95 95 0 0 0 0 100 100 ALIGN! 0 0 0 0 0,25 0.25 70 70 60 60 95 95 95 95 0 0 0 0 100 100 ALIGN! 0 0 0 0 0,1 0.1 0 0 20 20 May 90 90 90 90 0 0 0 0 93 93 0 0 0 0

• ·• ·

Tabulka 4Table 4

Cytotoxicity (v pg/ml) na nádorové buněčné linieCytotoxicity (in pg / ml) on tumor cell lines

krambescidiny krambescidiny P-388 P-388 A-549 A-549 HT-29 HT-29 MEL-28 MEL-28 834 (vz. 7) 834 (vz. 7) 0,05 0.05 0,05 0.05 0,05 0.05 0,05 0.05 818(vz. 8) 818 (vz. 8) 0,1 0.1 0,1 0.1 0,1 0.1 0,1 0.1 673 (vz. 9) 673 (vz. 9) Nd Nd Nd Nd Nd Nd Nd Nd 687 (vz. 10) 687 (vz. 10) Nd Nd Nd Nd Nd Nd Nd Nd 657 (vz. 11) 657 (vz. 11) 0,25 0.25 0,05 0.05 0,05 0.05 0,05 0.05 816 (vz. 1) 816 (vz. 1) 0,5 0.5 0,5 0.5 0,4 0.4

Nd: Účinnost nebyla stanovena.Nd: Efficacy not determined.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu byly isolovány (nebo připraveny semisynteticky) v podstatě v čisté formě, tj. v čistotě postačující pro jejich fyzikální a biologickou charakterizaci. Jak bylo shora popsáno, bylo zjištěno, že tyto sloučeniny mají specifické protinádorové aktivity a jako takové budou užitečné jako léčivá činidla u savců, zvláště u lidí. Jiný aspekt tohoto vynálezu se tedy týká farmaceutických prostředků, které obsahují zde identifikované účinné sloučeniny, a způsobů léčení použitím takových farmaceutických prostředků.The compounds of the present invention were isolated (or prepared semisynthetically) in substantially pure form, i.e., in purity sufficient for their physical and biological characterization. As described above, these compounds have been found to have specific antitumor activities and as such will be useful as therapeutic agents in mammals, particularly humans. Thus, another aspect of the invention relates to pharmaceutical compositions comprising the active compounds identified herein and methods of treatment using such pharmaceutical compositions.

Protinádorové aktivity sloučenin byly stanoveny in vitro na buněčných kulturách myší leukemie P-388, lidského karcinomu plic A-549, lidského karcinomu tlustého střeva HT-29 a lidského melanomu MEL-28. Tento způsob byl prováděn pomocí metodologie popsané Bergeronem a spol.: Biochem. Biophys. Res. Commun. 1984, 121, 848, a Schroederem a spol.: J. Med. Chem. 1981, 24,1078.The anti-tumor activities of the compounds were determined in vitro on cell cultures of murine leukemia P-388, human lung carcinoma A-549, human colon carcinoma HT-29, and human melanoma MEL-28. This method was carried out using the methodology described by Bergeron et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 1984, 121, 848, and by Schroeder et al., J. Med. Chem. 1981, 24.1078.

Účinné sloučeniny podle předloženého vynálezu vykazují protinádorovou aktivitu na savčí nádory, jako je myší leukemie P-388, lidský karcinom plic A-549, lidský karcinom tlustého střeva HT-29 a lidský melanom MEL-28. Předložený vynález tedy • · zahrnuje způsob léčení jakéhokoliv savce zasaženého maligním nádorem, který je citlivý na tyto sloučeniny, při čemž tento způsob léčení zahrnuje podávání terapeuticky účinného množství účinné sloučeniny nebo směsi sloučenin nebo jejich farmaceutického prostředku zasaženému jednotlivci.The active compounds of the present invention exhibit anti-tumor activity in mammalian tumors such as murine leukemia P-388, human lung cancer A-549, human colon cancer HT-29 and human melanoma MEL-28. Thus, the present invention encompasses a method of treating any mammal afflicted with a malignant tumor that is susceptible to such compounds, the method comprising administering to the individual an therapeutically effective amount of the active compound or mixture of compounds or a pharmaceutical composition thereof.

Předložený vynález se týká také farmaceutických prostředků, které jako účinnou složku obsahují jednu nebo více sloučenin podle tohoto vynálezu a také způsobů jejich přípravy.The present invention also relates to pharmaceutical compositions comprising as active ingredient one or more compounds of the invention as well as methods for their preparation.

Mezi příklady farmaceutických prostředků patří jakékoliv pevné formy (tablety, pilulky, tobolky, granule atd.) nebo kapaliny (roztoky, suspenze nebo emulze) s vhodným prostředkem nebo orální, místní nebo parenterální podávání. Mohou obsahovat čistou sloučeninu nebo kombinaci s jakýmkoliv nosičem nebo jinými farmakologicky účinnými sloučeninami. Tyto prostředky musí být sterilní, jestliže se podávají parenterálně.Examples of pharmaceutical compositions include any solid forms (tablets, pills, capsules, granules, etc.) or liquids (solutions, suspensions or emulsions) with a suitable formulation or oral, topical or parenteral administration. They may contain the pure compound or a combination with any carrier or other pharmacologically active compounds. These compositions must be sterile when administered parenterally.

Přesné dávkování farmaceutického prostředku obsahujícího sloučeniny podle tohoto vynálezu bude záviset na příslušném prostředku, způsobu aplikace a příslušném místu, hostiteli, a na bakterii nebo nádoru, které jsou ošetřovány. V úvahu by měly být vzaty také další faktory, jako věk, tělesná hmotnost, pohlaví, dieta, doba podávání, rychlost vylučování, stav hostitele, kombinace léčiv, citlivost reakce a intenzita onemocnění. Podávání se může provádět kontinuálně nebo periodicky v rámci maximálně tolerované dávky.The precise dosage of the pharmaceutical composition containing the compounds of the invention will depend on the particular composition, the mode of administration and the site, host, and bacterium or tumor being treated. Other factors such as age, body weight, sex, diet, time of administration, rate of excretion, host condition, combination of drugs, responsiveness and severity of the disease should also be considered. Administration can be carried out continuously or periodically within the maximum tolerated dose.

Předložený vynález byl podrobně popsán včetně jeho výhodných provedení. Podle předloženého popisu bude zručnými odborníky z oblasti techniky však vzato v úvahu, že se mohou provést různé modifikace a/nebo zlepšení tohoto vynálezu a tato stále ještě budou v rozsahu a duchu tohoto vynálezu, jak je dále uvedeno v následujících nárocích.The present invention has been described in detail, including preferred embodiments thereof. However, it will be appreciated by those skilled in the art that various modifications and / or improvements to the invention may be made and will still be within the scope and spirit of the invention as set forth in the following claims.

Claims

1. Essentially pure crambescidine 834.

2. Essentially pure crambescidine 818.

3. Essentially pure crambescidine 673.

4. Essentially pure crambescidine 687.

5. Substantially pure crambescidine 657.

6. Substantially pure 13,14,15-isocrambescidine 657.

7. Substantially pure methyl crambescidine 657.

8. A pharmaceutical or veterinary composition comprising an effective antitumor amount of a substantially pure compound referred to herein as crambescidine 834 and a pharmaceutically acceptable carrier, diluent or vehicle.

9. A pharmaceutical or veterinary composition comprising an effective anti-tumor amount of a substantially pure compound referred to herein as crambescidin 818 and a pharmaceutically acceptable carrier, diluent or vehicle.

10. A pharmaceutical or veterinary composition comprising an effective antitumor amount of a substantially pure compound referred to herein as crambescidin 673 and a pharmaceutically acceptable carrier, diluent or vehicle.

11. A pharmaceutical or veterinary composition comprising an effective anti-tumor amount of a substantially pure compound referred to herein as crambescidine 687 and a pharmaceutically acceptable carrier, diluent or vehicle.

12. A pharmaceutical or veterinary composition comprising an effective anti-tumor amount of a substantially pure compound referred to herein as crambescidin 657 and a pharmaceutically acceptable carrier, diluent or vehicle.

13. A pharmaceutical or veterinary composition comprising an effective anti-tumor amount of a substantially pure compound referred to herein as 13,14,15-isocrambescidine 657 and a pharmaceutically acceptable carrier, diluent or vehicle.

14. A pharmaceutical or veterinary composition comprising an effective antitumor amount of a substantially pure compound referred to herein as methyl crambescidine 657 and a pharmaceutically acceptable carrier, diluent or vehicle.

Use of an effective anti-tumor amount of a substantially pure compound referred to herein as crambescidin 834 and a pharmaceutically acceptable carrier, diluent or vehicle for the manufacture of a medicament for the therapeutic or prophylactic treatment of a patient suffering from a mammalian tumor.

Use of an effective anti-tumor amount of a substantially pure compound referred to herein as crambescidin 818 and a pharmaceutically acceptable carrier, diluent or vehicle for the manufacture of a medicament for the therapeutic or prophylactic treatment of a patient suffering from a mammalian tumor.

Use of an effective anti-tumor amount of a substantially pure compound referred to herein as crambescidin 673 and a pharmaceutically acceptable carrier, diluent or vehicle for the manufacture of a medicament for the therapeutic or prophylactic treatment of a patient suffering from a mammalian tumor.

Use of an effective anti-tumor amount of a substantially pure compound referred to herein as crambescidin 687 and a pharmaceutically acceptable carrier, diluent or vehicle for the manufacture of a medicament for the therapeutic or prophylactic treatment of a patient suffering from a mammalian tumor.

Use of an effective anti-tumor amount of a substantially pure compound referred to herein as crambescidine 657 and a pharmaceutically acceptable carrier, diluent or vehicle for the manufacture of a medicament for the therapeutic or prophylactic treatment of a patient suffering from a mammalian tumor.

Use of an effective anti-tumor amount of a substantially pure compound referred to herein as 13,14,15-isocrambescidine 657 and a pharmaceutically acceptable carrier, diluent or vehicle for the manufacture of a medicament for the therapeutic or prophylactic treatment of a patient suffering from a mammalian tumor.

Use of an effective anti-tumor amount of a substantially pure compound referred to herein as methyl crambescidine 657 and a pharmaceutically acceptable carrier, diluent or vehicle for the manufacture of a medicament for the therapeutic or prophylactic treatment of a patient suffering from a mammalian tumor.