CZ32522U1

CZ32522U1 - Culture medium for the elimination of glyphosate-induced maturation oocyte maturation defects

Info

Publication number: CZ32522U1
Application number: CZ2018-35595U
Authority: CZ
Inventors: Kristýna Hošková; Tereza Žalmanová; Tomáš Kott; Jaroslav Petr
Original assignee: Výzkumný Ústav Živočišné Výroby V.V.I.
Priority date: 2018-07-11
Filing date: 2018-07-11
Publication date: 2019-01-30

Description

CZ 32522 UlCZ 32522 Ul

Kultivační medium pro eliminaci defektů zrání savčích oocytů vyvolaných glyfosátemCulture medium for elimination of glyphosate-induced maturation defects in mammalian oocytes

Oblast technikyTechnical field

Řešení se týká zvýšení vývojové schopnosti savčích oocytů získaných od zvířat, která byla vystavena nepříznivým účinkům herbicidu glyfosátu. Toto kultivační medium má velký význam zejména při asistované reprodukci hospodářských zvířat.The invention relates to enhancing the developmental capacity of mammalian oocytes obtained from animals that have been exposed to the adverse effects of the glyphosate herbicide. This culture medium is of particular importance in assisted reproduction of farm animals.

Dosavadní stav technikyBACKGROUND OF THE INVENTION

Narůstající znečištění životního prostředí má za následek poruchy plodnosti. K polutantům, které se na tom významně podílejí, patří i endokrinní disruptory, čili látky schopné narušit hormonální rovnováhu organismu. Mezi nimi zaujímají významné místo i herbicidy používané v zemědělství včetně glyfosátu. Tyto látky jsou v životním prostředí velmi rozšířené a jejich negativní efekt se projevuje už ve velmi nízkých koncentracích. Je proto krajně obtížné, ne-li nemožné, zajistit, aby lidé či zvířata nebyli účinku těchto látek vystaveni.Increasing environmental pollution results in impaired fertility. Endocrine disruptors, or substances capable of disrupting the hormonal balance of the organism, are among the major pollutants involved. Among them, herbicides used in agriculture, including glyphosate, have an important place. These substances are widespread in the environment and their negative effect is already seen in very low concentrations. It is therefore extremely difficult, if not impossible, to ensure that humans or animals are not exposed to these substances.

V současné době se pro asistovanou reprodukci savců, např. pro klonování, in vitro oplození, transgenozi, včetně hospodářsky významných druhů, využívají oocyty dozrálé v podmínkách in vitro. Ty mohou pocházet od zvířat, jež byla vystavena účinkům látek znečišťujících životní prostředí. Kvalita takových oocytů je snížená a jejich schopnost dozrát v podmínkách in vitro bývá narušena. Platí to i při expozici zvířat glyfosátem, který se vyskytuje v krmi věch a je s to následně narušit zrání oocytů in vitro. Proto se vyvíjejí systémy kultivace, které by riziko narušení in vitro zrání u oocytů ze zvířat exponovaných glyfosátem eliminovaly. Pro tyto kultivační systémy se hledají látky, které by u oocytů kultivovaných in vitro zabránily významným vývojovým defektům.Currently, oocytes matured in vitro are used for assisted reproduction of mammals, e.g., cloning, in vitro fertilization, transgenesis, including economically important species. These may come from animals that have been exposed to environmental pollutants. The quality of such oocytes is impaired and their ability to mature under in vitro conditions is impaired. This is also true when animals are exposed to glyphosate, which is present in animal feed and is subsequently capable of interfering with oocyte maturation in vitro. Therefore, cultivation systems are being developed that would eliminate the risk of in vitro maturation in oocytes from animals exposed to glyphosate. For these culture systems, agents are sought that would prevent significant developmental defects in in vitro cultured oocytes.

Pokud by se podařilo zajistit plnohodnotné zrání i u oocytů ze zvířat, která byla předtím v důsledku znečištění životního prostředí vystavena působení glyfosátu, zvýšilo by se využití šlechtitelského potenciálu samic a zefektivnily by se i postupy asistované reprodukce.If maturation of oocytes from animals previously exposed to glyphosate as a result of environmental contamination could be ensured, the utilization of the breeding potential of females would be increased and assisted reproductive procedures would be made more effective.

Podstata technického řešeníThe essence of the technical solution

Uvedené problémy odstraňuje kultivační medium pro eliminaci defektů zrání savčích oocytů vyvolaných glyfosátem, podle technického řešení, jehož podstata spočívá v tom, že 1 1 tohoto media obsahujeThese problems are overcome by a culture medium for the elimination of glyphosate-induced maturation defects of mammalian oocytes, according to a technical solution which consists in the fact that 1 l of this medium contains

Chlorid vápenatý Calcium chloride 0,139600 g/1 0.139600 g / l Dusičnan železitý · 9 H₂OFerric nitrate · 9 H ₂ O 0,000720 g/1 0.000720 g / l Síran hořečnatý (bezvodý) Magnesium sulphate (anhydrous) 0,097670 g/1 0.097670 g / l Chlorid draselný Potassium chloride 4,000000 g/1 4.000000 g / l Fosforečnan draselný Potassium phosphate 0,060000 g/1 0.060000 g / l Octan sodný (bezvodý) Sodium acetate (anhydrous) 0,050000 g/1 0.0550000 g / l Uhličitan sodný Sodium carbonate 2,200000 g/1 2.200000 g / l Chlorid sodný Sodium chloride 8,000000 g/1 8.000000 g / l

- 1 CZ 32522 U1- 1 CZ 32522 U1

Fosforečnan sodný (bezvodý) Sodium phosphate (anhydrous) 0,047880 g/1 0.047880 g / l L-alanin L-alanine 0,025000 g/1 0.025000 g / l L-arginin · HC1 L-arginine · HCl 0,070000 g/1 0.070000 g / l L-kyselina asparagová L-aspartic acid 0,030000 g/1 0.030000 g / l L-cystein · HC1 · H₂OL-cysteine · HCl · H ₂ O 0,000110 g/1 0.000110 g / l L-cystin · 2 HC1 L-cystine · 2 HCl 0,026000 g/1 0.026000 g / l L-kyselina glutamová L-glutamic acid 0,066800 g/1 0.066800 g / l L-glutamin L-glutamine 0,100000 g/1 0.100000 g / l Glycin Glycine 0,050000 g/1 0.0550000 g / l L-histidin · HC1 · H₂OL-histidine · HCl · H ₂ O 0,021880 g/1 0.021880 g / l Hydroxy-L-prolin Hydroxy-L-proline 0,010000 g/1 0.010000 g / l L-isoleucin L-isoleucine 0,020000 g/1 0.020000 g / l L-leucin L-leucine 0,060000 g/1 0.060000 g / l L-lysin · HC1 L-lysine · HCl 0,070000 g/1 0.070000 g / l L-methionin L-methionine 0,015000 g/1 0.015000 g / l L-fenylalanin L-phenylalanine 0,025000 g/1 0.025000 g / l L-prolin L-proline 0,040000 g/1 0.040000 g / l L-serin L-serine 0,025000 g/1 0.025000 g / l L-threonin L-threonine 0,030000 g/1 0.030000 g / l L-tryptofan L-tryptophan 0,010000 g/1 0.010000 g / l L-tyrozin· 2 Na · 2 H₂OL-tyrosine · 2 Na · 2 H ₂ O 0,057660 g/1 0.057660 g / l L-valin L-valine 0,025000 g/1 0.025000 g / l Kyselina askorbová · Na Ascorbic acid · Na 0,0000566 g/1 0.0000566 g / l D-Biotin D-Biotin 0,000010 g/1 0.000010 g / l Kalciferol Calciferol 0,000100 g/1 0.000100 g / l Cholin chlorid Choline chloride 0,000500 g/1 0.000500 g / l Kyselina listová Folic acid 0,000010 g/1 0.000010 g / l

-2CZ 32522 U1-2GB 32522 U1

Menadion Menadion 0,000016 g/1 0.000016 g / l Myo-inozitol Myo-inositol 0,000050 g/1 0.000050 g / l Niacinamid Niacinamide 0,000025 g/1 0.000025 g / l Kyselina nikotinová Nicotinic acid 0,000025 g/1 0.000025 g / l Kyselina pantotenová Pantothenic acid 0,000050 g/1 0.000050 g / l Kyselina p-aminobenzoová P-Aminobenzoic acid 0,000010 g/1 0.000010 g / l Pyridoxal · HC1 Pyridoxal · HCl 0,000025 g/1 0.000025 g / l Pyridoxin · HC1 Pyridoxine · HCl 0,000025 g/1 0.000025 g / l Retinol acetát Retinol acetate 0,000140 g/1 0.000140 g / l Riboflavin Riboflavin 0,000010 g/1 0.000010 g / l DL-a-tokoferol fosfát · Na DL-α-tocopherol phosphate · Na 0,000010 g/1 0.000010 g / l Thiamin · HC1 Thiamine · HCl 0,000010 g/1 0.000010 g / l Adenin sulfát Adenine sulphate 0,010000 g/1 0.010000 g / l Adenosin trifosfát · 2 Na Adenosine triphosphate · 2 Na 0,001000 g/1 0.001000 g / l Adenosin monofosfát · Na Adenosine monophosphate · Na 0,0002385 g/1 0.0002385 g / l Cholesterol Cholesterol 0,0002000 g/1 0.0002000 g / l Deoxyribóza Deoxyribose 0,0005000 g/1 0.0005000 g / l Glukóza Glucose 1,0000000 g/1 1.0000000 g / l Glutathion (redukovaný) Glutathione (reduced) 0,0000500 g/1 0.0000500 g / l Guanin · HC1 Guanine · HCl 0,0003000 g/1 0.0003000 g / l Hypoxanthin Hypoxanthin 0,0003000 g/1 0.0003000 g / l Fenolová červeň · Na Phenol red · Na 0,0213000 g/1 0.0213000 g / l Polyoxyethylensorbitanmonooleát Polyoxyethylene sorbitan monooleate 0,0200000 g/1 0.0200000 g / l Ribóza Ribose 0,0005000 g/1 0.0005000 g / l Thymin Thymine 0,0003000 g/1 0.0003000 g / l Uráčil Uráčil 0,0003000 g/1 0.0003000 g / l Xantin · Na Xantin · Na 0,0003440 g/1 0.0003440 g / l Resveratrol Resveratrol 5 μΜ 5 μΜ

-3 CZ 32522 Ul-3 CZ 32522 Ul

CystathioninCystathionine

Kyselina merkaptopyrohroznováMercaptopyruvic acid

Xestosaprol C μΜ μΜ mM.Xestosaprol C μΜ μΜ mM.

Kultivační medium podle technického řešení je charakterizováno tím, že se oocyty s ukončenou růstovou fází kultivují in vitro s xestosaprolem C po dobu, která je u daného druhu zvířat běžně nutná pro postup zrání oocytů do metafáze II. Kultivační medium podle technického řešení je dále charakterizováno tím, že se na oocyty s ukončeným růstem a úplně vyvinutou vývojovou schopností během jejich zrání in vitro působí v in vitro kultuře xestosaprolem C v koncentracích od 10 do 100 nM, přičemž tato kultivace trvá po dobu, která odpovídá době nutné v podmínkách kultivace in vitro pro postup zrání oocytů do stádia metafáze II.The culture medium according to the invention is characterized in that oocytes with terminated growth phase are cultured in vitro with xestosaprol C for a period normally required for the progression of oocyte maturation to metaphase II. The culture medium according to the invention is further characterized in that the oocytes with growth-terminated and fully developed developmental capacity during their in vitro maturation are treated in x vitro with xestosaprol C in concentrations from 10 to 100 nM, which culture lasts for a period of time corresponds to the time required under in vitro culture conditions for the progression of oocyte maturation to the metaphase II stage.

Kultivační medium podle technického řešení pro zvýšení ochrany oocytů proti efektům glyfosátu se konkrétně výhodně používá tak, že se nezralé savčí oocyty s ukončeným růstem a úplně vyvinutou vývojovou schopností in vitro kultivují v médiu s xestosaprolem C v koncentraci 50 mM. Kultivace trvá dobu, která je u daného druhu potřebná pro dozrání oocytů s ukončenou růstovou fází a plnou vývojovou schopností v podmínkách in vitro, tj. u prasete asi 44 až 48 hodin, u skotu 22 až 24 hodin, u více než 85 % oocytů pro další použití.The culture medium according to the invention for increasing the protection of oocytes against the effects of glyphosate is particularly preferably used by culturing immature growth-terminated mammalian oocytes with fully developed developmental ability in vitro in xestosaprol C medium at a concentration of 50 mM. Cultivation lasts the time required for the maturation of the mature growth-phase oocytes with full developmental capacity in vitro, ie about 44 to 48 hours in pigs, 22 to 24 hours in cattle, and more than 85% of oocytes for other uses.

Kultivačním mediem podle technického řešení jsou oocyty vystaveny působení xestosaprolem C, což má pozitivní vliv na kvalitu zrání oocytů, především pak na integritu dělícího vřeténka a euploidní stav chromozomů dozrálého oocytů. To se ukazuje jako velmi výhodné, protože experimenty původců prokázaly, že kultivace s xestosaprolem C má příznivý efekt na zrání oocytů od zvířat, jež byla předtím vystavena účinku glyfosátu. Pokud není použito kultivační medium podle technického řešení, pak většina kultivovaných oocytů ze zvířat, jež byla předtím vystavena účinkům glyfosátu, má narušené dělící vřeténko a při vydělení prvního pólového tělíska dochází k aneuploidiím. Takové oocyty jsou pro většinu biotechnologií nepoužitelné. Způsobem podle technického řešení je dosaženo úplného zrání oocytů do metafáze II u více než 85 % oocytů. Tyto oocyty lze použít pro další reprodukční biotechnologie, protože jsou s to se vyvíjet v kvalitní embrya.The oocytes are exposed to xestosaprol C by the culture medium according to the invention, which has a positive influence on the quality of oocyte maturation, especially on the integrity of the dividing spindle and the euploid state of the matured oocyte chromosomes. This has proven to be very advantageous because experiments by the inventors have shown that cultivation with xestosaprol C has a beneficial effect on oocyte maturation from animals previously exposed to glyphosate. If the culture medium of the present invention is not used, most cultured oocytes from animals previously exposed to glyphosate have a broken spindle and aneuploidies occur when the first pole body divides. Such oocytes are unusable for most biotechnologies. The method according to the invention achieves complete maturation of oocytes to metaphase II in more than 85% of oocytes. These oocytes can be used for other reproductive biotechnologies because they are able to develop into quality embryos.

Působením kultivačního media podle technického řešení dojde k podstatnému zvýšení podílu oocytů, jež dokončí zrání a jsou využitelné pro další reprodukční biotechnologie. Ve srovnání s tradičními postupy kultivace je nárůst podílu dozrálých oocytů zhruba dvoj- až trojnásobný, což má velký hospodářský význam. Způsob kultivace uvedeným kultivačním mediem in vitro oocytů od zvířat, jež byla předtím vystavena účinku glyfosátu, kultivačním mediem podle technického řešení lze využít zejména při reprodukčních biotechnologiích hospodářských zvířat, např. pro klonování či ICSI.The action of the culture medium according to the invention results in a substantial increase in the proportion of oocytes, which complete maturation and are useful for other reproductive biotechnologies. Compared to traditional cultivation techniques, the increase in the proportion of mature oocytes is about two to three times, which is of great economic importance. The method of culturing said in vitro oocyte culture medium from animals previously exposed to glyphosate with the culture medium according to the invention can be used in particular in animal reproductive biotechnology, e.g. for cloning or ICSI.

Kultivační medium podle technického řešení pro zvýšení vývojové schopnosti oocytů od zvířat vystavených před kultivací působení glyfosátu in vitro s xestosaprolem C bylo původci úspěšně ověřeno v laboratořích a stájích u přihlašovatele, kterým je Výzkumný ústav živočišné výroby, v.v.i., v Praze, CZ.The culture medium according to the technical solution for enhancing the developmental ability of oocytes from animals exposed to in vitro glyphosate treatment with xestosaprol C was successfully verified in laboratories and stables by the Applicant, Research Institute of Animal Production, Prague, CZ.

Následující příklady kultivační medium podle technického řešení pouze dokládají, aniž by ho jakkoliv omezovaly.The following examples illustrate the culture medium according to the invention without limiting it in any way.

Příklady uskutečnění technického řešeníExamples of technical solutions

Příklad 1Example 1

-4CZ 32522 U1-4GB 32522 U1

Kultivační medium podle technického řešení pro eliminaci defektů zrání savčích oocytů vyvolaných glyfosátem mělo v 1 1 následující složení:The culture medium according to the invention for the elimination of glyphosate-induced maturation defects of mammalian oocytes had the following composition in 1 l:

Chlorid vápenatý Calcium chloride 0,139600 g/1 0.139600 g / l Dusičnan železitý · 9 H₂OFerric nitrate · 9 H ₂ O 0,000720 g/1 0.000720 g / l Síran hořečnatý (bezvodý) Magnesium sulphate (anhydrous) 0,097670 g/1 0.097670 g / l Chlorid draselný Potassium chloride 4,000000 g/1 4.000000 g / l Fosforečnan draselný Potassium phosphate 0,060000 g/1 0.060000 g / l Octan sodný (bezvodý) Sodium acetate (anhydrous) 0,050000 g/1 0.0550000 g / l Uhličitan sodný Sodium carbonate 2,200000 g/1 2.200000 g / l Chlorid sodný Sodium chloride 8,000000 g/1 8.000000 g / l Fosforečnan sodný (bezvodý) Sodium phosphate (anhydrous) 0,047880 g/1 0.047880 g / l L-alanin L-alanine 0,025000 g/1 0.025000 g / l L-arginin · HC1 L-arginine · HCl 0,070000 g/1 0.070000 g / l L-kyselina asparagová L-aspartic acid 0,030000 g/1 0.030000 g / l L-cystein · HC1 · H₂OL-cysteine · HCl · H ₂ O 0,000110 g/1 0.000110 g / l L-cystin · 2 HC1 L-cystine · 2 HCl 0,026000 g/1 0.026000 g / l L-kyselina glutamová L-glutamic acid 0,066800 g/1 0.066800 g / l L-glutamin L-glutamine 0,100000 g/1 0.100000 g / l Glycin Glycine 0,050000 g/1 0.0550000 g / l L-histidin · HC1 · H₂OL-histidine · HCl · H ₂ O 0,021880 g/1 0.021880 g / l Hydroxy-L-prolin Hydroxy-L-proline 0,010000 g/1 0.010000 g / l L-isoleucin L-isoleucine 0,020000 g/1 0.020000 g / l L-leucin L-leucine 0,060000 g/1 0.060000 g / l L-lysin · HC1 L-lysine · HCl 0,070000 g/1 0.070000 g / l L-methionin L-methionine 0,015000 g/1 0.015000 g / l L-fenylalanin L-phenylalanine 0,025000 g/1 0.025000 g / l L-prolin L-proline 0,040000 g/1 0.040000 g / l L-serin L-serine 0,025000 g/1 0.025000 g / l

L-threonin L-threonine 0,030000 g/1 0.030000 g / l L-tryptofan L-tryptophan 0,010000 g/1 0.010000 g / l L-tyrozin· 2 Na · 2 H₂OL-tyrosine · 2 Na · 2 H ₂ O 0,057660 g/1 0.057660 g / l L-valin L-valine 0,025000 g/1 0.025000 g / l Kyselina askorbová · Na Ascorbic acid · Na 0,0000566 g/1 0.0000566 g / l D-Biotin D-Biotin 0,000010 g/1 0.000010 g / l Kalciferol Calciferol 0,000100 g/1 0.000100 g / l Cholin chlorid Choline chloride 0,000500 g/1 0.000500 g / l Kyselina listová Folic acid 0,000010 g/1 0.000010 g / l Menadion Menadion 0,000016 g/1 0.000016 g / l Myo-inozitol Myo-inositol 0,000050 g/1 0.000050 g / l Niacinamid Niacinamide 0,000025 g/1 0.000025 g / l Kyselina nikotinová Nicotinic acid 0,000025 g/1 0.000025 g / l Kyselina pantotenová Pantothenic acid 0,000050 g/1 0.000050 g / l Kyselina p-aminobenzoová P-Aminobenzoic acid 0,000010 g/1 0.000010 g / l Pyridoxal · HC1 Pyridoxal · HCl 0,000025 g/1 0.000025 g / l Pyridoxin · HC1 Pyridoxine · HCl 0,000025 g/1 0.000025 g / l Retinol acetát Retinol acetate 0,000140 g/1 0.000140 g / l Riboflavin Riboflavin 0,000010 g/1 0.000010 g / l DL-a-tokoferol fosfát · Na DL-α-tocopherol phosphate · Na 0,000010 g/1 0.000010 g / l Thiamin · HC1 Thiamine · HCl 0,000010 g/1 0.000010 g / l Adenin sulfát Adenine sulphate 0,010000 g/1 0.010000 g / l Adenosin trifosfát · 2 Na Adenosine triphosphate · 2 Na 0,001000 g/1 0.001000 g / l Adenosin monofosfát · Na Adenosine monophosphate · Na 0,0002385 g/1 0.0002385 g / l Cholesterol Cholesterol 0,0002000 g/1 0.0002000 g / l Deoxyribóza Deoxyribose 0,0005000 g/1 0.0005000 g / l Glukóza Glucose 1,0000000 g/1 1.0000000 g / l Glutathion (redukovaný) Glutathione (reduced) 0,0000500 g/1 0.0000500 g / l

-6CZ 32522 U1-6GB 32522 U1

Guanin · HC1 Guanine · HCl 0,0003000 g/1 0.0003000 g / l Hypoxanthin Hypoxanthin 0,0003000 g/1 0.0003000 g / l Fenolová červeň · Na Phenol red · Na 0,0213000 g/1 0.0213000 g / l Polyoxyethylensorbitanmonooleát Polyoxyethylene sorbitan monooleate 0,0200000 g/1 0.0200000 g / l Ribóza Ribose 0,0005000 g/1 0.0005000 g / l Thymin Thymine 0,0003000 g/1 0.0003000 g / l Uráčil Uráčil 0,0003000 g/1 0.0003000 g / l Xantin · Na Xantin · Na 0,0003440 g/1 0.0003440 g / l Resveratrol Resveratrol 5 μΜ 5 μΜ Cystathionin Cystathionine 5 μΜ 5 μΜ Kyselina merkaptopyrohroznová Mercaptopyruvic acid 10 μΜ 10 μΜ Xestosaprol C Xestosaprol C 50 mM. 50 mM.

Při klasické kultivaci prasečích oocytů od prasnic, jež byly předtím vystaveny účinkům glyfosátu, dochází v podmínkách in vitro k dokončení zrání do stádia metafáze II u 38 % oocytů. Prasečí oocyty s ukončenou růstovou fází byly kultivovány 44 hodin v kultivačním médiu s přídavkem 50 mM xestosaprolu C. Při tomto postupu stoupá významně podíl dozrálých oocytů, které dosáhnou stádia metafáze II s četností přes 85 %. Takto získané oocyty lze podrobit standardní partenogenetické aktivaci a navodit u nich vývoj do stádia blastocysty. Takto získané savčí partenogenetické zárodky ve vývojovém stádiu blastocyty lze využít například pro tvorbu embryonálních kmenových buněk.In classical cultivation of porcine oocytes from sows previously exposed to glyphosate, 38% oocytes complete maturation to metaphase II stage in vitro. Growth-terminated porcine oocytes were cultured for 44 hours in culture medium with the addition of 50 mM xestosaprole C. In this procedure, the proportion of mature oocytes reaching metaphase II stage increased significantly with a frequency of over 85%. The oocytes thus obtained can be subjected to standard parthenogenetic activation and induce development to the blastocyst stage. The thus obtained mammalian parthenogenetic germs in the developmental stage of blastocytes can be used, for example, for the production of embryonic stem cells.

Příklad 2Example 2

Při tradiční kultivaci oocytů skotu s ukončeným růstem od krav, jež byly předtím vystaveny účinkům glyfosátu, dochází v podmínkách in vitro k dokončení zrání do stádia metafáze II u 41 % oocytů. Oocyty skotu s ukončenou růstovou fází od krav, jež byly předtím vystaveny účinku glyfosátu, byly kultivovány 24 hodin v kultivačním médiu s 50 mM xestosaprolu C. Při tomto postupu stoupá významně podíl dozrálých oocytů, které dosáhnou stádia metafáze II s četností přes 85 %. Takto získané oocyty lze podrobit standardnímu oplození in vitro. Úspěšně oplozené oocyty se dále vyvíjejí v embrya vhodná pro přenos náhradní matce.Traditional culture of bovine growth-terminated bovine oocytes from cows previously exposed to glyphosate results in maturation to metaphase II stage in 41% of oocytes under in vitro conditions. Growth-terminated bovine oocytes from cows previously exposed to glyphosate were cultured for 24 hours in 50 mM xestosaprole C culture medium. In this procedure, the proportion of mature oocytes reaching metaphase II stage increased significantly with a frequency of over 85%. The oocytes thus obtained can be subjected to standard in vitro fertilization. Successful fertilized oocytes further develop into embryos suitable for transmission to the surrogate mother.

Průmyslová využitelnostIndustrial applicability

Nové kultivační medium pro eliminaci defektů zrání savčích oocytů vyvolaných glyfosátem se týká zdokonaleného kultivačního postupu oocytů in vitro, jenž využívá účinků xestosaprolu C, což má velký význam při reprodukčních biotechnologiích hospodářských zvířat.A new culture medium for the elimination of glyphosate-induced maturation defects of mammalian oocytes relates to an improved in vitro oocyte culture procedure that utilizes the effects of xestosaprol C, which is of great importance in livestock reproductive biotechnology.

NÁROKY NA OCHRANUPROTECTION REQUIREMENTS

Claims

Culture medium for the elimination of glyphosate-induced maturation defects in mammalian oocytes, characterized in that 1 l of this medium contains

Calcium chloride 0.139600 g / l Ferric nitrate · 9 H ₂ O 0.000720 g / l Magnesium sulphate (anhydrous) 0.097670 g / l Potassium chloride 4.000000 g / l Potassium phosphate 0.060000 g / l Sodium acetate (anhydrous) 0.0550000 g / l Sodium carbonate 2.200000 g / l Sodium chloride 8.000000 g / l Sodium phosphate (anhydrous) 0.047880 g / l L-alanine 0.025000 g / l L-arginine · HCl 0.070000 g / l L-aspartic acid 0.030000 g / l L-cysteine · HCl · H ₂ O 0.000110 g / l L-cystine · 2 HCl 0.026000 g / l L-glutamic acid 0.066800 g / l L-glutamine 0.100000 g / l Glycine 0.0550000 g / l L-histidine · HCl · H ₂ O 0.021880 g / l Hydroxy-L-proline 0.010000 g / l L-isoleucine 0.020000 g / l L-leucine 0.060000 g / l L-lysine · HCl 0.070000 g / l L-methionine 0.015000 g / l L-phenylalanine 0.025000 g / l L-proline 0.040000 g / l

L-serine 0.025000 g / l L-threonine 0.030000 g / l L-tryptophan 0.010000 g / l L-tyrosine · 2 Na · 2 H ₂ O 0.057660 g / l L-valine 0.025000 g / l Ascorbic acid · Na 0.0000566 g / l D-Biotin 0.000010 g / l Calciferol 0.000100 g / l Choline chloride 0.000500 g / l Folic acid 0.000010 g / l Menadion 0.000016 g / l Myo-inositol 0.000050 g / l Niacinamide 0.000025 g / l Nicotinic acid 0.000025 g / l Pantothenic acid 0.000050 g / l P-Aminobenzoic acid 0.000010 g / l Pyridoxal · HCl 0.000025 g / l Pyridoxine · HCl 0.000025 g / l Retinol acetate 0.000140 g / l Riboflavin 0.000010 g / l DL-α-tocopherol phosphate · Na 0.000010 g / l Thiamine · HCl 0.000010 g / l Adenine sulphate 0.010000 g / l Adenosine triphosphate · 2 Na 0.001000 g / l Adenosine monophosphate · Na 0.0002385 g / l Cholesterol 0.0002000 g / l Deoxyribose 0.0005000 g / l Glucose 1.0000000 g / l

-9GB 32522 U1

Glutathione (reduced) 0.0000500 g / l Guanine · HCl 0.0003000 g / l Hypoxanthin 0.0003000 g / l Phenol red · Na 0.0213000 g / l Polyoxyethylene sorbitan monooleate 0.0200000 g / l Ribose 0.0005000 g / l Thymine 0.0003000 g / l Uráčil 0.0003000 g / l Xantin · Na 0.0003440 g / l Resveratrol 5 μΜ Cystathionine 5 μΜ Mercaptopyruvic acid 10 μΜ Xestosaprol C 50 ιηΜ.