CZ303575B6 - Separation and detection of mixed samples using sequential injection chromatography - Google Patents
Separation and detection of mixed samples using sequential injection chromatography Download PDFInfo
- Publication number
- CZ303575B6 CZ303575B6 CZ20090801A CZ2009801A CZ303575B6 CZ 303575 B6 CZ303575 B6 CZ 303575B6 CZ 20090801 A CZ20090801 A CZ 20090801A CZ 2009801 A CZ2009801 A CZ 2009801A CZ 303575 B6 CZ303575 B6 CZ 303575B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- column
- mobile phase
- separation
- chromatographic
- columns
- Prior art date
Links
Landscapes
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
Abstract
Description
Separace a detekce směsných vzorků sekvenční injekční chromatografiíSeparation and detection of pooled samples by sequential injection chromatography
Oblast technikyTechnical field
SWITH
Předkládaný vynález se týká oblasti analytické chemie, konkrétně chromatografie separace. Používá automatizovanou metodu sekvenční injekční analýzy. Týká se příkladů, kdy se běžně používá pro časově a nákladově efektivní separaci obsahových látek ve směsném vzorku gradientová eluce. Týká se sériové analýzy vzorků u nichž se předpokládá, že obsahuje složky, analyty, s vysoce rozdílným retenčními vlastnostmi vůči nastaveným chromatografíckým podmínkám systému mobilní a stacionární fáze.The present invention relates to the field of analytical chemistry, in particular separation chromatography. It uses an automated sequence injection analysis method. It refers to examples where gradient elution is commonly used for the time and cost-effective separation of the content of the mixed sample. It refers to serial analysis of samples suspected of containing components, analytes, with highly different retention properties relative to the set chromatographic conditions of the mobile and stationary phase systems.
Dosavadní stav technikyBACKGROUND OF THE INVENTION
Kapalinová chromatografie na reverzní stacionární fázi běžně využívá izokratické složení mobilní fáze během separace jednotlivých látek vzorku tzv. izokratícká eluce. V případě nedostatečné selektivity separačních podmínek pro jednotlivé látky lze tyto jednoduše upravit změnou složení mobilní fáze během separace (nejČastěji plynulou změnou poměru rozpouštědel v mobilní fázi) tzv. gradientová eluce. Sekvenční injekční chromatografie (SIC) je jednou z možností jak provádět kapalinovou chromatografii. SIC využívá nejčastěji monolitickou chromatografickou kolonu (různé délky a průměru) s reverzní stacionární fází Cl8 pro její nízký odpor vůči protékající mobilní fázi. Nedostupnost jiných druhů stacionárních fází monolitických kolon a omezená možnost využití částicových kolon (díky jejich vyššímu odporu vůči protékající mobilní fázi) ome25 zuje selektivitu separací a tím i využitelnost metody SIC [Chocholouš P., Solích P., Šatínský D.: Analytica Chimica Acta (600) 2007, 129-135., Chocholouš P., Šatínský D., Sladkovský R., Pospíšilová M., Solích P.: Talanta (77) 2008, 566-570],Liquid chromatography on reverse stationary phase commonly utilizes the isocratic composition of the mobile phase during the separation of individual sample substances by the so-called isocratic elution. In the case of insufficient selectivity of separation conditions for individual substances, these can be easily adjusted by changing the composition of the mobile phase during separation (most often by continuously changing the ratio of solvents in the mobile phase) by the so-called gradient elution. Sequence Injection Chromatography (SIC) is one way to perform liquid chromatography. SIC uses mostly monolithic chromatographic column (different length and diameter) with reverse stationary phase C18 for its low resistance to flowing mobile phase. The unavailability of other types of stationary phases of monolithic columns and the limited possibility of using particle columns (due to their higher resistance to flowing mobile phase) limit selectivity of separations and thus the applicability of the SIC method [Chocholouš P., Solích P., Šatínský D .: Analytica Chimica Acta ( 600) 2007, 129-135., Chocholous P., Satinsky D., Sladkovsky R., Pospisilova M., Solich P .: Talanta (77) 2008, 566-570],
Pro detekci směsných vzorků s předpokládanými, vysoce rozdílným retenčními vlastnostmi ana30 lytů vůči nastaveným chromatografíckým podmínkám je nutné použít chromatografii s měnícími se chromatografickými podmínkami (gradientová eluce). Při gradientově eluci jsou pro jednotlivé analyty vytvářeny co nejvhodnější chromatografické podmínky plynulou zménou složení mobilní fáze.For the detection of pooled samples with expected, highly different retention properties of ana30 lytes relative to the set chromatographic conditions, it is necessary to use chromatography with varying chromatographic conditions (gradient elution). Gradient elution produces the most suitable chromatographic conditions for each analyte by continuously changing the composition of the mobile phase.
Při gradientově eluci se pracuje s mobilní fází, jejíž složení se mění s časem, takže v průběhu separace dochází k plynulé změně poměru rozpouštědel tvořící mobilní fázi a tím k zvyšování eluční síly mobilní fáze a tím i urychlení eluce (vymývání) látek z chromatografické kolony [Láhdesmaki I., Carroll A. D., Wood J., Klein G. D., Scampavia L. D.: FIAIab Instruments, Brochures/Sichrom (2008)]. Změna eluční síly mobilní fáze umožňuje zajistit selektivitu chro40 matografického systému a zároveň urychlit proces separace. Vzhledem ke zvyšujícímu se zastoupení organického rozpouštědla v mobilní fázi se zvyšuje jeho spotřeba. Po skončení separace gradientovou eluci je třeba upravit podmínky na koloně zpět na počáteční stav, tedy je třeba kolonu dostatečně dlouhou dobu promývat mobilní fází o složení stejném jako na počátku analýzy, tímto dochází k prodlužování času analýzy a stejně tak k další spotřebě mobilní fáze.Gradient elution is carried out using a mobile phase whose composition changes with time, so that during the separation, the ratio of the solvents constituting the mobile phase is continuously changed, thereby increasing the elution force of the mobile phase and thereby accelerating elution (elution) of the substances from the chromatography column [ Bottlesmaki I., Carroll AD, Wood J., Klein GD, Scampavia LD: FIAAB Instruments, Brochures / Sichrom (2008)]. Changing the elution force of the mobile phase makes it possible to ensure the selectivity of the chro40 math system while accelerating the separation process. Due to the increasing proportion of organic solvent in the mobile phase, its consumption increases. After completion of the gradient elution separation, the column conditions must be returned to their initial state, i.e. the column should be washed with the mobile phase of the same composition at the beginning of the analysis for a sufficient period of time, thereby increasing the analysis time as well as further consumption of the mobile phase.
Při sériovém měření vzorků za podmínek gradientově eluce tvoří významný časový úsek doba, kdy jsou po ukončení měření ustalovány chromatografické podmínky v systému na původní (kolona je promývána mobilní fází o původním složení) před analýzou dalšího vzorku. Tento časový úsek prodlužuje čas celé analýzy a také se spotřebovává mobilní fázi.In serial measurement of samples under gradient elution conditions, a significant period of time is the time at which the chromatographic conditions in the system are restored to the original (the column is washed with the mobile phase of the original composition) after the measurement is completed, before analyzing the next sample. This time period extends the entire analysis time and also consumes the mobile phase.
Spotřeba rozpouštědel mobilní fáze se zvyšuje se zvyšujícím se poměrem jejích zastoupení během gradienové eluce a zároveň během ustalování původních podmínek před analýzou dalšího vzorku.Solvent consumption of the mobile phase increases with increasing proportions during the gradient elution and at the same time during the initial conditions stabilization before the analysis of the next sample.
Převod metody separace gradientovou eluci (zejména gradientového profilu) z jednoho přístroje na druhý může být problematický, protože jejích směšovací systémy (čerpadla) pro vytvářeníConversion of a gradient elution separation method (especially a gradient profile) from one instrument to another can be problematic because of its mixing systems (pumps) for producing
- 1 CZ 303575 B6 gradientového profilu ruční síly mobilní fáze mohou být odlišná. Gradientová eluce může být použita jak v případě vysokoúčinné kapalinové chromatografie tak v metodě sekvenční injekční chromatografie (SIC) pro změnu selektivity separace během analýzy [Jandera P., ChuráČekJ.: Gradient Elution in Column Liquid Chromatography. Elsevier, Amsterdam 1985].The gradient of the hand force gradient of the mobile phase may be different. Gradient elution can be used in both high performance liquid chromatography and sequential injection chromatography (SIC) methods to change the selectivity of separation during analysis [Jandera P., ChuracekJ .: Gradient Elution in Column Liquid Chromatography. Elsevier, Amsterdam 1985].
Alternativním přístupem pro časové zefektivnění analýzy série podobných vzorků je systém s dvěma a více paralelně zapojenými chromatografickými kolonami, kdy jsou jednotlivé vzorky postupně dávkovány na jednotlivé kolony se stejnou optimální mobilní a stacionární fází pro dané složky ve vzorcích. Výstupy z jednotlivých kolon jsou přepínány do detektoru v závislosti na právě vymývané složce v jednotlivých vzorcích. Sestava vyžaduje dvě (nebo více) jednoduchých čerpadel a ventil pro přepínání výstupu z kolon do detektoru. Bohužel díky trvalému toku mobilních fází je jejich spotřeba vyšší [Linqvist A., Hilke S., Skoglund E.: Journal of Chromatography A (1058) 2004), 121-126, Van Pelt C, K., Corso T. N., Schultz G. A., Lowes S., Henion J.: Anal. Chem. (73)2001, 582-588].An alternative approach for time-efficient analysis of a series of similar samples is a system with two or more parallel chromatographic columns, where individual samples are sequentially fed to individual columns with the same optimal mobile and stationary phase for given components in the samples. Outputs from individual columns are switched to the detector depending on the currently eluted component in individual samples. The assembly requires two (or more) simple pumps and a valve to switch the output from the columns to the detector. Unfortunately, due to the continuous flow of mobile phases, their consumption is higher [Linqvist A., Hilke S., Skoglund E .: Journal of Chromatography A (1058) 2004), 121-126, Van Pelt C, K., Corso TN, Schultz GA, Lowes, S., Henion, J .: Anal. Chem. (73) 2001, 582-588].
Podstata vynálezuSUMMARY OF THE INVENTION
Uvedené nevýhody odstraňuje separace a detekce složek v sérii podobných směsných vzorků s vysoce rozdílnými retenčními vlastnostmi složek vůči nastaveným chromatografickým podmínkám sekvenční injekční chromatografií, které podle vynálezu spočívá v to, že se týž směsný vzorek odděleně separuje nejméně na dvou kolonách s různě nastavenými chromatografickými podmínkami, přičemž se ze směsného vzorku na každé koloně přednostně separují složky s podobnými retenčními vlastnostmi vůči nastaveným, pro ně optimálním chromatografickým podmínkám, a eluáty jednotlivých složek ze všech chromatografických kolon postupně prochází jednou detekční celou spektrofotometr ického detektoru.These disadvantages are eliminated by separating and detecting the components in a series of similar pooled samples with highly different retention properties of the ingredients against the set chromatographic conditions by sequential injection chromatography, which according to the invention consists in separating the same mixed sample separately on at least two columns with different set conditions, wherein components with similar retention properties are preferentially separated from the pooled sample on each column relative to the optimum chromatographic conditions set therein, and the eluates of the individual components from all chromatographic columns are sequentially passed through a single detection whole spectrophotometric detector.
Chromatografické podmínky se upravují změnou délky kolony a/nebo změnou stacionární fáze kolony a/nebo změnou složení mobilní fáze a/nebo rychlostí průtoku mobilní fáze.The chromatographic conditions are adjusted by changing the length of the column and / or by changing the stationary phase of the column and / or by changing the composition of the mobile phase and / or the flow rate of the mobile phase.
Zařízení k provádění separace a detekce podle vynálezu spočívá v tom, že sestává z pístové pumpy i, propojené se selekčním ventilem 5, který je dále propojen s prvním zásobníkem 2 první mobilní fáze a se druhým zásobníkem 3 druhé mobilní fáze a se třetím zásobníkem 4 vzorku a s první chromatografickou kolonou 6 a s druhou chromatografickou kolonou 7, výtoky obou kolon jsou připojeny přes směšovací T bod 12 k průtokové cele 8 UV- VIS detektoru 10, průtoková cela je připojena k lahvi 11 s odpadem.The separation and detection device according to the invention consists of a piston pump 1 connected to a selection valve 5, which is further connected to a first container 2 of the first mobile phase and a second container 3 of the second mobile phase and a third sample container 4 and with the first chromatography column 6 and with the second chromatography column 7, the effluents of both columns are connected via a mixing T point 12 to the flow cell 8 of the UV-VIS detector 10, the flow cell is connected to the waste bottle 11.
Nový analytický přístup využívá nově dvou paralelně umístěných chromatografických kolon pro separaci a stanovení látek a rozšiřuje možnosti chromatografické analýzy složitějších vzorků (zvyšuje selektivitu měření). Dvoukolonová chromatografie je založena na ízokratické eluci (neměnných podmínkách analýzy). Každá chromatografická kolona má optimální chromatografické podmínky pro různou skupinu složek obsažených ve vzorku. Látky s menší schopností retence ke stacionární fázi jsou separovány na první koloně a jsou promývány optimální první mobilní fází a látky s větší schopnosti retence k téže stacionární fázi jsou separovány na druhé koloně, v níž jsou optimální chromatografické podmínky pro tyto složky, které jsou odlišné od první kolony, (s odlišnou délkou, stacionární fází a odpovídající optimální druhou mobilní fází).The new analytical approach utilizes two parallel chromatography columns for separation and determination of substances and extends the possibilities of chromatographic analysis of more complex samples (increases the selectivity of measurements). Two column chromatography is based on isocratic elution (fixed analysis conditions). Each chromatography column has optimal chromatographic conditions for a different group of components contained in the sample. Substances with lower retention capacity to the stationary phase are separated on the first column and are washed with the optimum first mobile phase and substances with higher retention capacity to the same stationary phase are separated on the second column in which the chromatographic conditions for these components are different from first columns, (with different length, stationary phase and corresponding optimal second mobile phase).
Každá kolona je promývána stále stejnou mobilní fází, odpadá nutnost promývání stacionární fáze mobilní fází s původním složením před analýzou dalšího vzorku. Eliminován je problém unášení základní linie při změně složení mobilní fáze za podmínek gradientově eluce, při zachování vysoké reprodukovatelnosti a snadné přenositelnosti metody na jiný přístroj. Pro každou skupinu látek se používá specifická (optimální) kolona a mobilní fáze, optimální průtoková rychlost mobilní fáze, optimální objem vzorku.Each column is still washed with the same mobile phase, eliminating the need to wash the stationary phase with the mobile phase of the original composition before analyzing the next sample. This eliminates the problem of baseline drift when changing the composition of the mobile phase under gradient elution conditions, while maintaining high reproducibility and easy portability of the method to another instrument. For each group of substances a specific (optimal) column and mobile phase, optimum mobile phase flow rate, optimal sample volume are used.
Přestože silněji zadržované látky nejsou vymyty z první kolony před dalším nadávkováním vzorku na tuto kolonu, nemají vliv na následnou analýzu. Jsou velmi pomalu vymývány z první kolony ve velmi vysokém retenčním čase a zaznamenány jen jako malé zvýšení základní linie píky jsou velmi ro zrny té. Experimentálně bylo ověřeno, že zadržování těchto látek na koloně iiCsnízuje účinnost první kolony vazbou na aktivní bíc+o laií íoAlthough heavily retained substances are not washed out of the first column before the next loading of the sample onto this column, they do not affect the subsequent analysis. They are eluted very slowly from the first column at a very high retention time and recorded only as a small increase in baseline peaks are very granular ones. It has been experimentally verified that the retention of these substances on the iiC column reduces the efficacy of the first column by binding to the active moiety.
11JLU J *J 1 111 1U použita pro separaci látek silněji zadržovaných na první koloně, zatímco slaběji zadržované látky nejsou zadržovány na druhé koloně vůbec a vymývají se s šumem mrtvého objemu kolony. Takto lze s výhodou použít druhou kratší kolonu, vyšší průtok druhé mobilní fáze nebo druhou mobilní fázi s vyšší eluční silou. Variabilita systému je vysoká díky široké nabídce chromatografických kolon, směsí mobilní fáze, průtokových rychlostí mobilní fáze a nástřikových objemů vzorku.11JLU J * J 1 111 1U is used to separate more strongly retained substances on the first column, while weaker retained substances are not retained on the second column at all and elute with the dead volume of the column. Thus, preferably a second shorter column, a higher flow rate of the second mobile phase, or a second mobile phase with a higher elution force can be used. The system variability is high due to the wide range of chromatographic columns, mobile phase mixtures, mobile phase flow rates and sample injection volumes.
Významná je úspora mobilní fáze v porovnání s metodou s gradientovou změnou eluční síly mobilní fáze, vynechán je krok promývání kolony před opakovaným nástřikem jako při metodě s gradientovou změnou eluční síly mobilní fáze, tomu odpovídá i časová úspora.The mobile phase savings are significant compared to the gradient method of mobile phase elution force, the step of washing the column before repeated injection as in the gradient phase elution method of mobile phase is omitted, which corresponds to the time savings.
Výsledný čas analýz)7 a spotřeba mobilní fáze v případě dvoukolonového systému je nižší nejméně o 30 % v porovnání se shodnou analýzou v módu gradientově eluce. Pro dvoukolonový systém není třeba dvojice pump se směšovačem vytvářejícím gradient mobilní fáze. Systém je vybaven pístovou pumpou a selekčním ventilem.The resulting analysis time 17 and the mobile phase consumption of the two-column system is at least 30% lower compared to the same analysis in gradient elution mode. For a two-column system, a pair of pumps with a mobile phase gradient mixer is not required. The system is equipped with a piston pump and a selection valve.
Sekvenční injekční chromatografie podle vynálezu umožňuje sériové stanovení vzorků o známém složení s předpokládaným rozsahem množství jednotlivých složek. Je časově úspornější a snižuje spotřebu rozpouštědel mobilní fáze v porovnání se sekvenční injekční chromatografii s gradientovou elucí.Sequence injection chromatography according to the invention allows the serial determination of samples of known composition with a predicted amount of individual components. It is time-saving and reduces the solvent consumption of the mobile phase compared to sequential gradient chromatography.
Chromatografické podmínky co nejvhodnější pro jednotlivé skupiny složek jsou vytvářeny výběrem co nej vhodnější kolony se stacionární fází a co nej vhodnějším složením mobilní fáze, které se během měření nemění.Chromatographic conditions as appropriate for the individual groups of components are generated by selecting the most suitable stationary phase column and the most suitable mobile phase composition that does not change during measurement.
Při sériovém měření vzorků díky neměnným chromatografie kým podmínkám je čas pro obnovu zařízení pro analýzu nového vzorku nulový.For serial measurement of samples due to fixed chromatography conditions, the recovery time for the new sample analysis device is zero.
Složení mobilní fáze způsobem podle vynálezu je ovlivněno i výběrem druhé kolony, což v případě kratší kolony umožňuje použít mobilní fázi s menším množství organického rozpouštědla v porovnání s gradientovou elucí.The composition of the mobile phase according to the invention is also influenced by the selection of the second column, which in the case of a shorter column allows the mobile phase to be used with less organic solvent compared to the gradient elution.
Dávkování vzorku na více kolon (oddělená separace složek s rozdílnými retenčními vlastnostmi) umožňuje i variabilitu dávkovaného množství vzhledem k předpokládané odezvě detektoru pro předpokládanou koncentraci složek - vyšší nadávkované množství umožní zvýšit odezvu detektoru, tedy snížit nejnižší limit stanovení (limit kvantifikace), tato možnost u gradientově eluce není.Dosing of the sample to more columns (separate separation of components with different retention properties) also allows variability of the dosed quantity with respect to the anticipated detector response for the expected concentration of components - higher dosed quantity will increase the detector response, ie lower the limit of determination (limit of quantification). gradient elution is not.
Sekvenční injekční chromatografie podle vynálezu umožňuje analýzu (kvalitativní i kvantitativní) u vzorku se známým složením a s obsahem těchto analytů v kalibrovaném rozsahu, který je předem experimentálně ověřen.Sequence injection chromatography according to the invention allows analysis (qualitative and quantitative) of a sample of known composition and containing these analytes in a calibrated range which has been experimentally verified in advance.
Podmínky měření v sekvenční injekční chromatografii podle vynálezu jsou optimalizovány vzhledem k složení analyzovaného vzorku. Vybrány jsou vhodné kolony pro dané skupiny složek, vybráno je vhodné složení mobilních fází pro jednotlivé kolony, vybráno je vhodné množství vzorku dávkované na jednotlivé kolony, vybráno je vhodné množství mobilní fáze pro jednotlivé kolony a průtoková rychlost mobilních fází pro jednotlivé kolony. Spektrofotometrický detektor je nastaven vzhledem k absorpčním vlastnostem jednotlivých složek. Všechny výše uvedené podmínky jsou nastaveny v programu počítače ovládajícího celý systém a jsou během měření neměnné.The measurement conditions in the sequential injection chromatography of the invention are optimized with respect to the composition of the sample to be analyzed. Suitable columns are selected for the given groups of components, the appropriate mobile phase composition for each column is selected, the appropriate amount of sample fed to each column is selected, the appropriate amount of mobile phase is selected for each column and the mobile phase flow rate for each column. The spectrophotometric detector is adjusted with respect to the absorption properties of the individual components. All of the above conditions are set in the program of the computer controlling the whole system and are unchanged during the measurement.
- 3 CZ 303575 B6- 3 GB 303575 B6
Přehled obrázků na výkresechBRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS
Na obr. 1 je znázorněno schéma zařízeníFig. 1 shows a schematic of the apparatus
Příklady provedení vynálezuDETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
Výstupní kontrola při výrobě léčivých přípravků (zejména tablety) s obsahem paracetamolu, kofeinu a propyfenazonu byla prováděna na zařízení znázorněném na obr. 1.The final control in the manufacture of medicinal products (especially tablets) containing paracetamol, caffeine and propyphenazone was performed on the device shown in Fig. 1.
Zařízení sestává z pístové pumpy 1, propojené se selekčním ventilem 5, který je dále propojen s prvním zásobníkem 2 první mobilní fáze a se druhým zásobníkem 3 druhé mobilní fáze a se třetím zásobníkem 4 vzorku a s první chromatografickou kolonou 6 a s druhou chromatografickou kolonou 7. Výtoky obou kolon jsou připojeny přes směšovací T bod J_2 k průtokové cele 8 UV-VIS detektoru 10, průtoková cela připojena k lahvi 11 s odpadem. Průtoková cela 8 je ozařována UV lampou 9, Pístová pumpa I a osmicestný selekční ventil 5 a UV-VIS detektor 10 jsou ovládány osobním počítačem 13.The apparatus consists of a piston pump 1, connected to a selection valve 5, which is further connected to a first container 2 of the first mobile phase and a second container 3 of the second mobile phase and a third sample container 4 and a first chromatography column 6 and a second chromatography column 7. Both columns are connected via a mixing T point 12 to the flow cell 8 of the UV-VIS detector 10, the flow cell connected to the waste bottle 11. The flow cell 8 is irradiated with a UV lamp 9, the piston pump 1 and the eight-way selection valve 5 and the UV-VIS detector 10 are controlled by a personal computer 13.
Stanovení obsahových látek v tabletách s paracetamolem, kofeinem, propyfenazonem se provádělo za použití kyseliny salicylové jako vnitřního standardu. V první koloně 6 byla použita mobilní fáze o složení acetonitril : voda = 10 : 90. Jako první kolona 6 byla použita komerčně vyráběná chromatografická monolitická kolona s chemicky modifikovaným silikagelem řetězci 08 (25 + 5 mm x 4,6 mm) - první kolona s chemicky modifikovaným silikagelem řetězci 08 (25 + 5 mm x 4,6 mm) - první kolona byla použita pro separaci a následné spektrofotometrické stanovení při 210 nm paracetamolu, kofeinu a kyseliny salicylové. Jako druhá kolona 7 byla použita komerčně vyráběná chromatografická monolitická kolona s chemicky modifikovaným silikagelem řetězci 08 (10 mm x 4,6 mm). Mobilní fáze v druhé koloně 7 měla složení acetonitrikvoda = 30 : 70. Druhá kolona 2 byla použita pro separaci a následné spektrofotometrické stanovení propyfenazonu. Kalibrační rozsah měření je pro paracetamol 1,2 až 150,0pg ml“1 při korelaci 0,999; pro koefin 1,6 až 200,0 pg ml1 při korelaci 0,999 a pro propyfenazon 2,4 až 300,0 pg ml“1 při korelaci 0,999.The determination of the contents of the tablets with paracetamol, caffeine, propyphenazone was performed using salicylic acid as an internal standard. In the first column 6, a mobile phase of acetonitrile: water = 10: 90 was used. The first column 6 was a commercially produced chromatography monolithic column with chemically modified silica gel chain 08 (25 + 5 mm x 4.6 mm) - the first column with chemically modified silica gel chain 08 (25 + 5 mm x 4.6 mm) - the first column was used for separation and subsequent spectrophotometric determination at 210 nm of paracetamol, caffeine and salicylic acid. As the second column 7, a commercially produced chromatographic monolithic column with chemically modified silica gel 08 (10 mm x 4.6 mm) was used. The mobile phase in the second column 7 had an acetonitrile = 30:70 composition. The second column 2 was used for separation and subsequent spectrophotometric determination of propyphenazone. The calibration range for paracetamol is 1.2 to 150.0 µg ml -1 with a correlation of 0.999; for coefine 1.6 to 200.0 pg ml -1 with a correlation of 0.999 and for propyphenazone 2.4 to 300.0 pg ml -1 with a correlation of 0.999.
Sekvence měření TC - SIC;TC-SIC measurement sequence;
Na základě počítačového programu bylo přesné množství první mobilní fáze nasáto pohybem pístu peristaltické pumpy 1 z prvního zásobníku 2 přes výstup selekčního ventilu 5 do zásobníku peristaltické pumpy i, poté vzorek byl nasát pumpou J_ přes selekční ventil 5 z třetího zásobníku 4 do hadičky spojující vstup selekčního ventilu 5 a výstup pumpy 1, otočením směru průtoku pomocí první mobilní fáze byl vzorek vymýván z hadičky přes selekční ventil 5 dále na první chromatografickou kolonu 6 a pak byl vymýván celým objemem první mobilní fáze ze zásobníku pumpy i do průtokové cely 8 detektoru a dále z průtokové cely 8 detektoru do lahve ΐ 1 pro odpad. UV-VIS detektor zaznamenává absorbancí během celé doby promývání první kolony první mobilní fází. Po separaci všech složek s podobnými vlastnostmi vůči nastaveným chromatografickým podmínkám v první chromatografické koloně 6 nově analýza pokračovala separací na druhé chromatografické koloně 7, kde se separovaly další složky vzorku s podobnými vlastnostmi vůči nastaveným chromatografie kým podmínkám na druhé chromatografické koloně 7. Přesné množství druhé mobilní fáze bylo nasáto pohybem pístu peristaltické pumpy f z druhého zásobníku druhé mobilní fáze 3 přes výstup selekčního ventilu 5 do zásobníku peristaltické pumpy 1. Vzorek je nasát pumpou 1 přes selekční ventil 5 z třetího zásobníku vzorku 4 do hadičky spojující vstup selekčního ventilu 5 a výstup pumpy Otočením směru průtoku pomocí druhé mobilní fáze je vzorek vymýván z hadičky přes selekční ventil 5 dále na druhou chromatografickou kolonu 2 a pak vymýván celým objemem druhé mobilní fáze ze zásobníku pumpy | do průtokové cely 8 detektoru a dáte z průtokové cely 8 detektoru do lahve JJ pro odpad. UV-VIS detektor zaznamenává absorbancí během celé doby promývání kolony druhou mobilní fází.Based on the computer program, the exact amount of the first mobile phase was aspirated by moving the piston of the peristaltic pump 1 from the first reservoir 2 through the selection valve outlet 5 to the peristaltic pump reservoir 1, then the sample was sucked through the selector valve 5 from the third reservoir 4 into the tube connecting valve 5 and pump outlet 1, by reversing the flow direction with the first mobile phase, the sample was eluted from the tubing through the selection valve 5 further to the first chromatography column 6 and then eluted with the entire volume of the first mobile phase from the pump reservoir to the detector flow cell 8; flow detector cell 8 into bottle lah 1 for waste. The UV-VIS detector records the absorbance throughout the first column wash time of the first mobile phase. After separation of all components with similar properties to the set chromatographic conditions in the first chromatography column 6, the analysis continued with separation on the second chromatography column 7, where other components of the sample with similar properties to the set chromatographic conditions were separated on the second chromatography column 7. Exact amount of the second mobile Phase was sucked by moving the piston of the peristaltic pump f from the second reservoir of the second mobile phase 3 through the selection valve outlet 5 to the peristaltic pump reservoir 1. The sample is sucked through the selection valve 5 from the third sample reservoir 4 into the hose connecting the selection valve inlet 5 and the pump outlet. flow direction using the second mobile phase, the sample is eluted from the tubing through the selection valve 5 further to the second chromatography column 2 and then eluted with the entire volume of the second mobile phase from the pump reservoir | into the detector flow cell 8 and put the detector flow cell 8 into the waste bottle 11. The UV-VIS detector records the absorbance during the entire wash time of the column with the second mobile phase.
-4CZ 303575 B6-4GB 303575 B6
Po vyhodnocení časového záznamu z detektoru se opět do obou chromatografíekých kolon nastříkne nový vzorek.After evaluating the time record from the detector, a new sample is again injected into both chromatography columns.
ýý
Průmyslová využitelnostIndustrial applicability
Separace a detekce směsných vzorků podle vynálezu je využitelná ve farmaceutickém, nebo potravinářském průmyslu při výstupní kontrole výrobků.The separation and detection of the composite samples according to the invention is useful in the pharmaceutical or food industry for final product inspection.
Claims (3)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20090801A CZ303575B6 (en) | 2009-12-01 | 2009-12-01 | Separation and detection of mixed samples using sequential injection chromatography |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20090801A CZ303575B6 (en) | 2009-12-01 | 2009-12-01 | Separation and detection of mixed samples using sequential injection chromatography |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2009801A3 CZ2009801A3 (en) | 2011-06-08 |
| CZ303575B6 true CZ303575B6 (en) | 2012-12-19 |
Family
ID=44114440
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20090801A CZ303575B6 (en) | 2009-12-01 | 2009-12-01 | Separation and detection of mixed samples using sequential injection chromatography |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ303575B6 (en) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4271697A (en) * | 1979-10-17 | 1981-06-09 | Phillips Petroleum Company | Chromatographic analysis |
| US20050218055A1 (en) * | 2004-03-30 | 2005-10-06 | Shimadzu Corporation | Liquid chromatograph |
-
2009
- 2009-12-01 CZ CZ20090801A patent/CZ303575B6/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4271697A (en) * | 1979-10-17 | 1981-06-09 | Phillips Petroleum Company | Chromatographic analysis |
| US20050218055A1 (en) * | 2004-03-30 | 2005-10-06 | Shimadzu Corporation | Liquid chromatograph |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Choholous P. et al: An overview of sequential injection chromatography; ANALYTICA CHIMICA ACTA 600 (2007) 129-135 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ2009801A3 (en) | 2011-06-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5635204B2 (en) | Chromatographic purification method | |
| AU661349B2 (en) | Protein chromatography system | |
| Chocholouš et al. | An overview of sequential injection chromatography | |
| Gilbert | High performance liquid chromatography | |
| del Rosario Brunetto et al. | Determination of losartan, telmisartan, and valsartan by direct injection of human urine into a column-switching liquid chromatographic system with fluorescence detection | |
| Molina-Díaz et al. | Solid-phase spectroscopy from the point of view of green analytical chemistry | |
| Kirkland | Preferred experimental conditions for trace analysis by modern liquid chromatography | |
| Huclová et al. | Coupling of monolithic columns with sequential injection technique: A new separation approach in flow methods | |
| Chocholouš et al. | Fast simultaneous spectrophotometric determination of naphazoline nitrate and methylparaben by sequential injection chromatography | |
| US5135718A (en) | Apparatus for simultaneously analyzing vanillylmandelic acid, homovanillic acid and creatinine | |
| Korepanova et al. | HPLC‐SEC characterization of membrane protein‐detergent complexes | |
| Huclová et al. | Sequential injection extraction based on restricted access material for determination of furosemide in serum | |
| EP2581741A1 (en) | Method transfer by freezing an initially non-controlled parameter | |
| Wu et al. | Quantification of 7-aminoflunitrazepam in human urine by polymeric monolith-based capillary liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry | |
| WO2012163416A1 (en) | Expanded linear range by use of two flow cell detectors with long and short parh | |
| CN109324135B (en) | Method for simultaneously detecting 3 emulsifiers in composite emulsifier | |
| Scott et al. | Advances in the application of high resolution liquid chromatography to the separation of complex biological mixtures | |
| JPH03205559A (en) | Chromatographic analysis of biosample and liquid chromatograph device | |
| Taleuzzaman et al. | Particle size role, Importance and Strategy of HPLC Analysis-An update | |
| CZ303575B6 (en) | Separation and detection of mixed samples using sequential injection chromatography | |
| EP0548178A1 (en) | Quantitative analysis and monitoring of protein structure by subtractive chromatography | |
| CN112903846B (en) | Analysis method for determining rivaroxaban and impurities thereof | |
| Lamprecht et al. | Determination of carvedilol in human plasma by high-performance liquid chromatography applying on-line deproteination and column switching | |
| Kupiec et al. | High-performance liquid chromatography | |
| US11307181B1 (en) | HPLC system with mixed-mode columns for measuring charged analytes in complex mixtures |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20181201 |