CZ289930B6 - Aryl and heteroaryl peptide derivatives and pharmaceutical preparations in which they are comprised - Google Patents
Aryl and heteroaryl peptide derivatives and pharmaceutical preparations in which they are comprised Download PDFInfo
- Publication number
- CZ289930B6 CZ289930B6 CZ19952321A CZ232195A CZ289930B6 CZ 289930 B6 CZ289930 B6 CZ 289930B6 CZ 19952321 A CZ19952321 A CZ 19952321A CZ 232195 A CZ232195 A CZ 232195A CZ 289930 B6 CZ289930 B6 CZ 289930B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- hydroxy
- alkyl
- substituted
- heteroaryl
- aryl
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
- C07K5/06086—Dipeptides with the first amino acid being basic
- C07K5/06095—Arg-amino acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/16—Otologicals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
- C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/06078—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
- C07K5/06086—Dipeptides with the first amino acid being basic
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Description
Oblast technikyTechnical field
Vynález se týká arylových a heteroarylových peptidových derivátů a farmaceutických prostředků je obsahujících. Uvedené deriváty mají protizánětlivé účinky a jsou vhodné pro léčení a prevenci onemocnění u savců, způsobovaných nedostatečnou imunitou. Konkrétněji se jedná o nové inhibitory tryptázy použitelné k prevenci a léčení zánětlivých onemocnění dýchacího traktu, jako je astma a alergická rýma, pokročilá bronchokonstrikce a hypersenzitivita dýchacích cest spojených s chronickým astmatem.The invention relates to aryl and heteroaryl peptide derivatives and pharmaceutical compositions containing them. Said derivatives have anti-inflammatory effects and are suitable for the treatment and prevention of diseases in mammals caused by immunodeficiency. More specifically, they are novel tryptase inhibitors useful for the prevention and treatment of inflammatory diseases of the respiratory tract, such as asthma and allergic rhinitis, advanced bronchoconstriction and airway hypersensitivity associated with chronic asthma.
Dosavadní stav technikyBACKGROUND OF THE INVENTION
Astma je komplexní onemocnění, způsobené vzestupem hladiny biochemických mediátorů. Jeho projevy jsou akutní i chronické. Astma se často projevuje progresivním rozvojem hypersenzitivity trachei a bronchů jak k imunospecifickým alergenům, tak k různým chemickým a fyzikálním podnětům. Hypersenzitivita tkáně astmatických bronchů je považována za následek chronických zánětlivých reakcí, které dráždí a poškozují epitelium povrchu dýchacích cest a podporují patologické ztlušťování podpovrchových tkání. Studie bronchiální biopsie ukázaly, že stálí pacienti s mírným astmatem mají na stěnách dýchacích cest známky zánětu.Asthma is a complex disease caused by an increase in the level of biochemical mediators. His symptoms are both acute and chronic. Asthma is often manifested by the progressive development of trachea and bronchial hypersensitivity to both immunospecific allergens and various chemical and physical stimuli. Hypersensitivity of asthmatic bronchial tissue is considered to be the result of chronic inflammatory reactions that irritate and damage the airway surface epithelium and promote pathological thickening of subsurface tissues. Bronchial biopsy studies have shown that stable patients with mild asthma have signs of inflammation on the airway walls.
Jedním z iniciátorů zánětlivého procesu je alergická odpověď na vdechnuté alergeny. Leukocyty, které nesou IgE receptory, převážně mastocyty a basofily, ale také monocyty, makrofágy a eosinofíly, jsou přítomny v epiteliu a podpovrchových tkáních hladkých svalů bronchů. Tam je zahájena jejich aktivace vazbou specifických vdechnutých antigenů na IgE receptory. Aktivované mastocyty uvolní množství aktivních nebo primárních chemických mediátorů zánětlivé reakce a enzymů. Kromě toho vzniká mnoho sekundárních mediátorů zánětu in šitu enzymovou reakcí aktivovaných mastocytů, konkrétně superoxidy a mediátorů odvozených od lipidů. Degranulací mastocytů dále vznikají některé velké molekuly: proteoglykany, peroxidáza, arylsulfatáza B a proteázy - tryptáza a chymotryptická proteináza (chymáza). Viz „Drug Therapy of Asthma“, Kap. 62, 1054-54.One of the initiators of the inflammatory process is an allergic response to inhaled allergens. Leukocytes that carry IgE receptors, predominantly mast cells and basophils, but also monocytes, macrophages and eosinophils, are present in the epithelium and subsurface tissues of bronchial smooth muscle. There, they are activated by the binding of specific inhaled antigens to IgE receptors. Activated mast cells release a number of active or primary chemical mediators of the inflammatory response and enzymes. In addition, many secondary inflammatory mediators are produced in situ by the enzymatic reaction of activated mast cells, particularly superoxides and lipid-derived mediators. Degranulation of mast cells also produces some large molecules: proteoglycans, peroxidase, arylsulfatase B and proteases - tryptase and chymotryptic proteinase (chymase). See "Drug Therapy of Asthma", Chap. 62, 1054-54.
Toto uvolnění chemických látek z mastocytů je pravděpodobně příčinou časné bronchokostrikce. Tato reakce se objevuje u hypersenzitivních osob po expozici alergeny, rozptýlenými ve vzduchu. Časná astmatická reakce je maximální 15 minut po expozici alergenem, zlepšení nastává za jednu až dvě hodiny. V 25 až 35 % případů po časné astmatické reakci následuje další pokles dýchacích funkcí, který začíná v několika málo hodinách a je maximální mezi 6. a 12. hodinou po expozici. Tato pozdní astmatická reakce je doprovázena znatelným zvýšením počtu zánětlivých buněk, které pronikají hladkým svalstvem bronchů a tkání epitelu, a vylévají se do dýchacích cest. Mezi tyto buňky patří eosinofíly, neutrofíly a lymfocyty. Buňky jsou přitahovány chemitaktickými látkami, uvolněnými z mastocytů. Pronikají buňky se aktivují během pozdní fáze reakce. Pozdní astmatická odpověď je považována za sekundární zánětlivou reakci částečně způsobenou sekreční aktivitou makrofágů.This release of chemicals from mast cells is probably the cause of early bronchocostriction. This reaction occurs in hypersensitive individuals after exposure to airborne allergens. Early asthmatic response is maximal 15 minutes after allergen exposure, improvement occurs in one to two hours. In 25 to 35% of cases, an early asthmatic reaction is followed by a further decrease in respiratory function, which begins within a few hours and is maximal between 6 and 12 hours after exposure. This late asthmatic reaction is accompanied by a noticeable increase in the number of inflammatory cells that penetrate the bronchial smooth muscle and epithelial tissues and emerge into the airways. These cells include eosinophils, neutrophils and lymphocytes. Cells are attracted by chemitactic agents released from mast cells. Penetrating cells are activated during the late phase of the reaction. The late asthmatic response is considered to be a secondary inflammatory response partly due to the secretory activity of macrophages.
Odpovídající soubor zánětlivých reakcí se objevuje také ve svrchní mukose, obvykle jako odpověď na alergeny, rozptýlené ve vzduchu. Stejně jako při astmatu se mastocyty aktivují křížovou vazbou molekul IgE a specifických antigenů. Při alergické trvalé nebo vasomotorické rýmě se mastocyty aktivují i bez expozice partikulárními antigeny. I v tomto případě uvolňují mastocyty degranulací primární a sekundární mediátory zánětu. Do místa, kde probíhají tyto procesy, jsou přitahovány eosinofíly a makrofágy a rozvíjejí zánětlivou reakci. V pozdní fázi reakce se často objevuje destrukce nosní epiteliální tkáně.A corresponding set of inflammatory reactions also occurs in the upper mucosa, usually in response to airborne allergens. As with asthma, mast cells are activated by cross-linking IgE molecules and specific antigens. In allergic persistent or vasomotor rhinitis, mast cells are activated even without exposure to particulate antigens. In this case too, mast cells release the primary and secondary mediators of inflammation by degranulation. Eosinophils and macrophages are attracted to the site of these processes and develop an inflammatory response. In the late phase of the reaction, destruction of nasal epithelial tissue often occurs.
Tryptáza je nejvýznamnější proteáza, kterou produkují lidské mastocyty. Účastní se přípravy neuropeptidů a tkáňového zánětu. Lidská tryptáza je glykosylovaný, heparinem spojený tetramer. Skládá se ze 4 heterogenních katalytických podjednotek. Aminokyselinová sekvence monomeru tryptázy, stejně jako její genové struktura, se nepodobají žádné z mnoha proteáz, jejichž struktura byla charakterizována. Viz Vanderslice a kol. (1990) Proč. Nati. Acad. Sci. USA 87: 3811-3815; Miller a kol. (1990) J. clin. Invest. 86: 864-870; Miller a kol. (1989) J. Clin. Invest. 84: 11881195; a Vanderslice a kol. (1989) Biochemistry 28: 4148-4155; a Katunuma a kol. (1990) Monographs in Allergy 27: 51-66.Tryptase is the most important protease produced by human mast cells. It participates in the preparation of neuropeptides and tissue inflammation. Human tryptase is a glycosylated, heparin-linked tetramer. It consists of 4 heterogeneous catalytic subunits. The amino acid sequence of the tryptase monomer, as well as its gene structure, do not resemble any of the many proteases whose structure has been characterized. See Vanderslice et al. (1990) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 87: 3811-3815; Miller et al. (1990) J. Clin. Invest. 86: 864-870; Miller et al. (1989) J. Clin. Invest. 84: 11881195; and Vanderslice et al. (1989) Biochemistry 28: 4148-4155; and Katunuma et al. (1990) Monographs in Allergy 27: 51-66.
Tryptáza je skladována v sekrečních granulích mastocytů. Po aktivaci mastocytů můžeme přítomnost tryptázy snadno změřit v různých biologických tekutinách. Například po anafylaxi se tryptáza objeví v krevním řečišti, kde zůstává přítomna několik hodin. Viz Schwartz a kol. (1987) N. Engl. J. Med. 316: 1622-1626. Její přítomnost byla zjištěna ve vzorcích tekutiny po výplachu nosu a plic po expozici specifickým antigenem. Viz Castells a Schwartz (1988) J, Allerg. Clin. Immunol. 82: 348-355 a Wenzel a kol. (1988) Am. Rev. Resp. Dis. 141: 563-568. Hladiny tryptázy v tekutině po výplachu plic atopického astmatika jsou zvýšeny po endobronchiální stimulaci alergenem. Někteří kuřáci cigaret mají významně zvýšené hladiny tryptázy v tekutině po výplachu plic ve srovnání se skupinou nekuřáků. To podporuje hypotézu, že uvolnění proteázy z aktivovaných mastocytů může přispívat k destrukci plic při kuřácké rozedmě plic. Viz Kalenderian a kol. (1988) Chest 94: 119-123. Kromě toho se ukázalo, že tryptáza je potenciálním mitogenem pro fibroblasty, to svědčí o její účasti při plicní fibróze a intesticiálních plicních onemocněních. Viz Ruoss a kol. (1991) J. Clin. Invest. 88: 493-499.Tryptase is stored in secretory granules of mast cells. After mast cell activation, tryptase can be easily measured in various biological fluids. For example, after anaphylaxis, tryptase appears in the bloodstream where it remains for several hours. See Schwartz et al. (1987) N. Engl. J. Med. 316: 1622-1626. Its presence was detected in fluid samples after nasal and lung lavage after exposure to a specific antigen. See Castells and Schwartz (1988) J, Allerg. Clin. Immunol. 82: 348-355 and Wenzel et al. (1988) Am. Roar. Resp. Dis. 141: 563-568. Tryptase levels in the lung lavage of atopic asthmatic are increased after endobronchial allergen stimulation. Some cigarette smokers have significantly elevated tryptase levels in the lung flush compared to the non-smoking group. This supports the hypothesis that protease release from activated mast cells may contribute to lung destruction in smoking emphysema. See Kalenderian et al. (1988) Chest 94: 119-123. In addition, tryptase has been shown to be a potential mitogen for fibroblasts, suggesting its involvement in pulmonary fibrosis and intestinal lung diseases. See Ruoss et al. (1991) J. Clin. Invest. 88: 493-499.
Tryptáza se účastní různých biologických procesů, včetně degradace vazodilatačních a bronchorelaxačních neuropeptidů, (viz Caughey a kol. (1988) J. Pharmacol. Exp. Ther. 244: 133-137; Franconi a kol. (1988) J. Pharmacol. Exp. Ther. 248: 947-951; a Tam a kol. (1990) Am. J. Respir. Cell Mol.. Biol. 3: 27-32) a tlumení citlivosti bronchů vůči histaminu (viz Sekizawa a kol. (1989) J. Clin. Invest. 83: 175-179). Tyto studie ukazují, že tryptáza zřejmě zvyšuje bronchokostrikci při astmatu tím, že ničí bronchodilatační peptidy.Tryptase is involved in various biological processes, including degradation of vasodilatory and bronchorelaxant neuropeptides, (see Caughey et al. (1988) J. Pharmacol. Exp. Ther. 244: 133-137; Franconi et al. (1988) J. Pharmacol. Exp. Ther. 248: 947-951 and Tam et al (1990) Am J. Respir. Cell Mol .. Biol. 3: 27-32) and inhibition of bronchial sensitivity to histamine (see Sekizawa et al (1989) J). Clin Invest Invest 83: 175-179). These studies show that tryptase appears to increase bronchocostriction in asthma by destroying bronchodilator peptides.
Dále se ukázalo, že tryptáza štěpí α-řetězce fibrinogenu, stejně jako kininogeny vysoké molekulové hmotnosti za vzniku kininů a má tedy spolu s heparinem úlohu lokálního antikoagulantu. Schopnost tryptázy aktivovat prostomelysin (pro-MMP-3) a prokolagenázu (pro-MMP-1) přes MMP-3 svědčí o tom, že tryptáza se také účastní procesu tkáňového zánětu a přeměn. Při tomto pozorování také bylo zjištěno, že tryptáza hraje roli při destrukci kloubu při revmatické artritidě. Kromě toho tryptáza štěpí peptidy geneticky podobné s kalcitoninem. Protože tento peptid se účastní v procesu neurogenního zánětu, tryptáza je faktorem regulace kožního neurogenního zánětu. Viz Caughey (1991) Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 4: 387-394. Nedávno byly publikovány různé formy tryptázy, které štěpí protrombin na trombin, a zprostředkovávají poznávání povrchového proteinu viru HIV gp 120 pomocí CD4+ T lymfocytů (viz Katunuma a kol. (1990) Monographs in Allergy 27: 51-66.Furthermore, tryptase has been shown to cleave fibrinogen α-chains, as well as high molecular weight kininogens, to form kinins, and thus, together with heparin, act as a local anticoagulant. The ability of tryptase to activate prostomelysin (pro-MMP-3) and procollagenase (pro-MMP-1) via MMP-3 suggests that tryptase is also involved in the tissue inflammation and transformation process. It has also been found in this observation that tryptase plays a role in joint destruction in rheumatoid arthritis. In addition, tryptase cleaves peptides genetically similar to calcitonin. Because this peptide is involved in the process of neurogenic inflammation, tryptase is a factor in the regulation of cutaneous neurogenic inflammation. See, Caughey (1991) Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 4: 387-394. Recently, various forms of tryptase that cleave prothrombin into thrombin have been published and mediate recognition of the HIV gp 120 surface protein by CD4 + T lymphocytes (see Katunuma et al. (1990) Monographs in Allergy 27: 51-66).
Astma se stalo nejrozšířenějším chronickým onemocněním v průmyslových zemích. Při léčení astmatu nebo dalších chorob, způsobených imunitou, se konvenční metody a terapeutické prostředky ukázaly jako málo účinné. Z tohoto důvodu bylo žádoucí poskytnout dokonalejší prostředky a metody, které odstraní nevýhody těchto konvenčních prostředků a metod a umožní účinnou léčbu těchto chorob.Asthma has become the most common chronic disease in industrialized countries. In the treatment of asthma or other immune-related diseases, conventional methods and therapeutic agents have proved to be ineffective. For this reason, it has been desirable to provide improved means and methods that overcome the disadvantages of these conventional means and methods and allow effective treatment of these diseases.
Uvedené nedostatky jsou z převážné části odstraněny u derivátů a farmaceutických prostředků podle tohoto vynálezu.These drawbacks are largely eliminated with the derivatives and pharmaceutical compositions of the present invention.
-2CZ 289930 B6-2GB 289930 B6
Podstata vynálezuSUMMARY OF THE INVENTION
Předmětem vynálezu jsou arylové a heteroarylové peptidové deriváty obecného vzorce IThe present invention provides aryl and heteroaryl peptide derivatives of formula (I)
v němžin which
Ar je C^ioaryl nebo C^ioheteroaryl mající 1 nebo 2 atomy dusíku v kruhu, přičemž každá z uvedených arylových skupin je substituována hydroxylem v poloze ortho vzhledem k amidovému postrannímu řetězci a popřípadě má dodatečné substituenty, vybrané ze skupiny zahrnující halogen, Ci^alkyl, CMalkoxyl, Ci^alkylthioskupinu, trifluormethyl, C]_4acyloxyl, C^ioaryl, Cí-ioheteroaryl definovaný shora a hydroxyl, stou výhradou, že aromatický kruh nesoucí amidový postranní řetězec není dále substituován halogenem, a s další výhradou, že aromatický kruh nesoucí amidový postranní řetězec nemá Ci^alkyl v poloze ortho k hydroxylu,Ar is C 10-10 aryl or C 1-4 heteroaryl having 1 or 2 ring nitrogen atoms, each of said aryl groups being substituted with hydroxyl at the ortho position relative to the amide side chain and optionally having additional substituents selected from the group consisting of halogen, C 1-4 alkyl , C M alkoxy, Ci ^ alkylthio, trifluoromethyl, C] _4acyloxyl C-ioaryl, C ioheteroaryl defined above, and hydroxy, with the proviso that the aromatic ring bearing the amide side chain is further substituted by halogen, with the further proviso that the aromatic ring bearing the amide side chain does not have a C 1-4 alkyl ortho to the hydroxyl,
R1 je vodík, C^alkyl, C6_ioaryl-Ci_4alkyl nebo C6_iohearyl-Ci_4alkyl, v němž C^ioheteroaryl má shora uvedený význam,R 1 is hydrogen, C 1-4 alkyl, C 6-10 aryl-C 1-4 alkyl or C 6-10earyl-C 1-4 alkyl, in which C 1-4 heteroaryl is as defined above,
R2 je vodík nebo Ci^alkyl,R 2 is hydrogen or C ^ alkyl,
R3 je vybrán ze skupiny zahrnující zbytky obecných vzorců II až IX •(CH2)b-XR 3 is selected from the group consisting of radicals of formulas II to IX • (CH 2 ) b -X
NHNH
nh2 (II)nh 2 (II)
(III)(III)
(IV) (V)(IV)
-3CZ 289930 B6 (VI)-3GB 289930 B6 (VI)
(VII) /---\ NH ~'(CHjJp—w C H2)^ X— '—t nh2 (VIII) “íchA-nh 2 (ix) v nichž m až wjsou celá čísla, přičemž m je 3 až 6, n je 0 až 3, p je 0 až 2, q je 0 až 2, r je 0 až 5, s je 0 až 2, t je 1 až 3, u je 1 nebo 2, v je 3 až 6 a w je 0 až 3, A je-CH=CH-nebo-CsC-a X je -NH-nebo-CH2-,(VII) / --- \ NH ~ '(w CHjJp-CH2) ^ X' -t NH 2 (VIII) "An ICH 2 H (IX) in which m and W are integers, where m is 3 to 6, n is 0 to 3, p is 0 to 2, q is 0 to 2, r is 0 to 5, s is 0 to 2, t is 1 to 3, u is 1 or 2, v is 3 to 6 aw is 0 to 3, A is-CH = CH- or-CsC- and X is -NH- or-CH 2 -,
R4 je C]_4alkyl, hydroxylem substituovaný Cé-ioaryl-CM-alkyl nebo hydroxylem substituovaný C6_ioheteroaryl-Ci^-alkyl, v němž C^^aryl-Ci^alkyl má shora definovaný význam, aR 4 is C 1-4 alkyl, hydroxy-substituted C 6-10 aryl-C 1-4 -alkyl or hydroxy-substituted C 6-10 heteroaryl-C 1-4 -alkyl in which C 1-4 -alkyl-C 1-4 alkyl is as defined above, and
R5 a R6 značí jednotlivě vodík, C^alkyl, hydroxylem substituovaný C^oaryl-C^alkyl nebo hydroxylem substituovaný C^io-heteroaryl-CMalkyl, v němž Ci^heteroaryl má shora definovaný význam, neboR 5 and R 6 are each independently hydrogen, C 1-4 alkyl, hydroxy substituted C 1-4 aryl-C 1-4 alkyl or hydroxy substituted C 1-4 heteroaryl-C 1-4 alkyl, in which C 1-4 heteroaryl is as defined above, or
R4 a R5 spolu s dusíkem a uhlíkem, na které jsou vázány, tvoří hydroxylem substituovaný 4-, 5nebo 6-členný N-heterocyklus a R6 je vodík, neboR 4 and R 5 together with the nitrogen and carbon to which they are attached form a hydroxy substituted 4-, 5 or 6-membered N-heterocycle and R 6 is hydrogen, or
R4 a R6 spolu s dusíkem a uhlíkem, na které jsou vázány, tvoří hydroxylem substituovaný 4-, 5nebo 6-členný N-heterocyklus a R5 je vodík, aR 4 and R 6 together with the nitrogen and carbon to which they are attached form a hydroxy substituted 4-, 5 or 6-membered N-heterocycle and R 5 is hydrogen, and
R7 je OR8 nebo -NR8R9, kde R8 a R9 značí jednotlivě vodík, C^alkyl, Ce-ioaryl, Ce-ioarylC^alkyl nebo C^ioheteroaryl-Cj^alkyl, v němž C^ioheteroaryl má shora definovaný význam, neboR 7 is OR 8 or -NR 8 R 9 , wherein R 8 and R 9 are each independently hydrogen, C 1-6 alkyl, C 6-10 aryl, C 6-10 arylC 1-4 alkyl or C 1-4 heteroaryl C 1-4 alkyl, in which C 1-4 heteroaryl has as defined above, or
R8 a R9 spolu s dusíkem, na který jsou vázány, tvoří hydroxylem a/nebo karbamoylem substituovaný 5- nebo 6-členný N-heterocyklus, a jejich farmaceuticky přijatelné soli.R 8 and R 9 together with the nitrogen to which they are attached form a hydroxyl and / or carbamoyl substituted 5- or 6-membered N-heterocycle, and pharmaceutically acceptable salts thereof.
Jednu výhodnou skupinu tvoří deriváty podle vynálezu, uvedeného obecného vzorce I, v němžOne preferred group is represented by the derivatives of the invention of formula (I) in which:
Ar je l-hydroxy-2-naftyl, 2-hydroxy-l-naftyl, 3-hydroxy-2-pyridyl, 2-hydroxy-3-pyridyl, 2-hydroxy-3-chinoxalyl, 2-hydroxy-4-methylfenyl, 4-hydroxy-7-methy 1-3-(1,8)naftyridin-3-yl, 2-hydroxyfenyl, 2',5'-dihydroxyfenyl nebo 4-hydroxy-3-bifenyl,Ar is 1-hydroxy-2-naphthyl, 2-hydroxy-1-naphthyl, 3-hydroxy-2-pyridyl, 2-hydroxy-3-pyridyl, 2-hydroxy-3-quinoxalyl, 2-hydroxy-4-methylphenyl, 4-hydroxy-7-methyl-3- (1,8) naphthyridin-3-yl, 2-hydroxyphenyl, 2 ', 5'-dihydroxyphenyl or 4-hydroxy-3-biphenyl,
R1, R2, R5 a R6 značí jednotlivě vodík,R 1, R 2, R 5 and R 6 are individually hydrogen,
-4CZ 289930 B6-4GB 289930 B6
R3 je vybrán ze skupiny zahrnující zbytky shora uvedených obecných vzorců II až IX, v nichž m až w jsou celá čísla, přičemž m je 3 až 6, n je 0 až 3, p je 0 až 2, q je 0 až 2, rje 0 až 5, s je 0 až 2, t je 1 až 3, u je 1 nebo 2, v je 3 až 6 a w je 0 až 3, A je-CH=CH-nebo-C=C-a X je -NH-nebo-CH2-,R 3 is selected from the group consisting of the radicals of formulas II-IX above wherein m to w are integers wherein m is 3 to 6, n is 0 to 3, p is 0 to 2, q is 0 to 2, r is 0 to 5, s is 0 to 2, t is 1 to 3, u is 1 or 2, v is 3 to 6 and w is 0 to 3, A is -CH = CH- or-C = C and X is -NH -or-CH 2 -,
R4 je methyl, neboR 4 is methyl, or
R4 a R5 tvoří s dusíkem a uhlíkem, na něž jsou vázány, hydroxylem substituovaný 5-členný heterocyklus, aR 4 and R 5 form with the nitrogen and carbon to which they are attached a hydroxyl-substituted 5-membered heterocycle, and
R7 je -OH, -OCH3, -NH2, -3'-karbamoyl-l'-piperidyl, -4'-karbamoyl-l'-piperidyl, -Γkarbamoyl-2-fenylaminoskupina nebo -N(CH3)2, a jejich farmaceuticky přijatelné soli.R 7 is -OH, -OCH 3 , -NH 2 , -3'-carbamoyl-1'-piperidyl, -4'-carbamoyl-1'-piperidyl, -carbamoyl-2-phenylamino or -N (CH 3 ) 2 , and pharmaceutically acceptable salts thereof.
Druhou výhodnou skupinu sloučenin podle tohoto vynálezu tvoří deriváty obecného vzorce I, v němžA second preferred group of compounds of the present invention are derivatives of Formula I wherein:
Ar je l-hydroxy-2-naftyl, 2-hydroxy-l-naftyl, 3-hydroxy-2-pyridyl nebo 2-hydroxy-3chinoxalyl,Ar is 1-hydroxy-2-naphthyl, 2-hydroxy-1-naphthyl, 3-hydroxy-2-pyridyl or 2-hydroxy-3-quinoxalyl,
R1 a R2 značí vodík,R 1 and R 2 is hydrogen,
R3 je vybrán ze skupiny zahrnující zbytky uvedených obecných vzorců II až V, v nichž m až w jsou celá čísla, přičemž m je 3 až 6, n je 0 až 3, p je 0 až 2, q je 0 až 2 a v je 0 až 3, A je -CH=CH- nebo -C=C- a X je -NH- nebo -CH^, a ostatní substituenty mají shora uvedené významy.R 3 is selected from the group consisting of radicals of formulas II to V wherein m to w are integers wherein m is 3 to 6, n is 0 to 3, p is 0 to 2, q is 0 to 2, and v is 0 to 3, A is -CH = CH- or -C = C- and X is -NH- or -CH 4, and the other substituents have the above meanings.
Výhodným derivátem podle vynálezu v rozsahu obecného vzorce I, v němžA preferred derivative of the invention within the scope of Formula I wherein:
A je l-hydroxy-2-naftyl,A is 1-hydroxy-2-naphthyl,
R1, R2 a R6 značí jednotlivě vodík,R 1, R 2 and R 6 are individually hydrogen,
R3 je-(CH2)3NHC(=NH)NH2,R 3 is - (CH 2 ) 3 NHC (= NH) NH 2 ,
R4 a R5 spolu s dusíkem a uhlíkem, na které jsou vázány, tvoří hydroxylem substituovaný 5-členný N-heterocyklus aR 4 and R 5 together with the nitrogen and carbon to which they are attached form a hydroxyl-substituted 5-membered N-heterocycle and
R7 je-NH2, je konkrétně l-hydroxy-2-naftoyl-L-arginyl-L-prolinamid.R 7 is -NH 2 , in particular 1-hydroxy-2-naphthoyl-L-arginyl-L-prolinamide.
Jiným vhodným derivátem v rozsahu obecného vzorce I, v němžAnother suitable derivative within the scope of Formula I wherein:
Ar je 2-hydroxy-l-naftyl,Ar is 2-hydroxy-1-naphthyl,
R1, R2 a R6 značí vodík,R 1 , R 2 and R 6 denote hydrogen,
R3 je-(CH2)3NHC(=NH)NH2,R 3 is - (CH 2 ) 3 NHC (= NH) NH 2 ,
R4 a R5 spolu s dusíkem a uhlíkem, na které jsou vázány, tvoří hydroxylem substituovaný 5-členný N-heterocyklus aR 4 and R 5 together with the nitrogen and carbon to which they are attached form a hydroxyl-substituted 5-membered N-heterocycle and
-5CZ 289930 B6-5GB 289930 B6
R7 je-NH2) je konkrétně 2-hydroxy-l-naftoyl-L-arginyl-L-prolinamid.R 7 is-NH 2) is specifically 2-hydroxy-1-naphthoyl-L-arginyl-L-prolinamide.
Další výhodnou skupinu tvoří deriváty podle vynálezu, obecného vzorce I, v němžA further preferred group of compounds of the present invention are those of formula (I) wherein:
Ar je l-hydroxy-2-naftyl, 2-hydroxy-l-naftyl, 3-hydroxy-2-pyridyl nebo 2-hydroxy-3chinoxalyl,Ar is 1-hydroxy-2-naphthyl, 2-hydroxy-1-naphthyl, 3-hydroxy-2-pyridyl or 2-hydroxy-3-quinoxalyl,
R1, R2, R3 a R6 značí jednotlivě vodík,R 1, R 2, R 3 and R 6 are individually hydrogen,
R3 je vybrán ze skupiny zahrnující zbytky uvedených obecných vzorců II až V, v nichž m až w jsou celá čísla, přičemž m je 3 až 6, n je 0 až 3, p je 0 až 2, q je 0 až 2 a w je 0 až 3, A je -CH=CH- nebo -C=C- a X je -NH- nebo -CHr-,R 3 is selected from the group consisting of radicals of formulas II to V wherein m to w are integers wherein m is 3 to 6, n is 0 to 3, p is 0 to 2, q is 0 to 2 and w is 0 to 3, A is -CH = CH- or -C = C- and X is -NH- or -CH 2 -,
R4 je Ci_4alkyl, neboR 4 is C 1-4 alkyl, or
R4 a R5 spolu s dusíkem a uhlíkem, na něž jsou vázány, tvoří hydroxylem substituovaný 4-, 5nebo 6-členný N-heterocyklus aR 4 and R 5 together with the nitrogen and carbon to which they are attached form a hydroxy-substituted 4-, 5 or 6-membered N-heterocycle and
R7 je -OH, -OCH3, -NH2, -3 '-karbamoyl-1 '-piperidyl nebo -N(CH3)2.R 7 is -OH, -OCH 3, -NH 2 , -3'-carbamoyl-1'-piperidyl or -N (CH 3 ) 2 .
Další výhodnou skupinu tvoří deriváty obecného vzorce I, v němžA further preferred group consists of derivatives of the general formula I in which:
Ar je l-hydroxy-2-naftyl,Ar is 1-hydroxy-2-naphthyl,
R,R aR značí jednotlivě vodík,R, R and R are each hydrogen,
R3 je-(CH2)3NHC(=NH)NH2,R 3 is - (CH 2 ) 3 NHC (= NH) NH 2 ,
R4 a R5 spolu s dusíkem a uhlíkem, na které jsou vázány, tvoří hydroxylem substituovaný 5-členný N-heterocyklus aR 4 and R 5 together with the nitrogen and carbon to which they are attached form a hydroxyl-substituted 5-membered N-heterocycle and
R7 je-NH2.R 7 is -NH 2 .
Ještě jinou výhodnou skupinou jsou deriváty obecného vzorce I, v němžYet another preferred group is a compound of formula (I) wherein:
Ar je 2-hydroxy-l-naftyl,Ar is 2-hydroxy-1-naphthyl,
R1, R2 a R6 značí vodík,R 1 , R 2 and R 6 denote hydrogen,
R3 je -<CH2)3NHC(=NH)NH2,R 3 is - (CH 2 ) 3 NHC (= NH) NH 2 ,
R4 a R5 spolu s dusíkem a uhlíkem, na které jsou vázány, tvoří hydroxylem substituovaný 5-členný N-heterocyklus aR 4 and R 5 together with the nitrogen and carbon to which they are attached form a hydroxyl-substituted 5-membered N-heterocycle and
R7 je-NH2.R 7 is -NH 2 .
Předmětem vynálezu jsou též farmaceutické prostředky pro léčení zánětlivých onemocnění u savců, způsobovaných nedostatečnou imunitou, které jako účinné látky obsahují v účinném množství arylové a heteroarylové peptidové deriváty podle vynálezu v kombinaci s farmaceuticky přijatelným nosičem.The present invention also provides pharmaceutical compositions for the treatment of inflammatory diseases in mammals caused by immunodeficiency, which contain, in an effective amount, the aryl and heteroaryl peptide derivatives of the invention in combination with a pharmaceutically acceptable carrier.
Farmaceutické prostředky podle vynálezu jako farmaceuticky přijatelný nosič obsahují netoxický farmaceuticky přijatelný nosič.The pharmaceutical compositions of the invention include, as a pharmaceutically acceptable carrier, a non-toxic pharmaceutically acceptable carrier.
-6CZ 289930 B6-6GB 289930 B6
Farmaceutické prostředky podle jsou vhodné zejména pro léčení zánětlivých onemocnění dýchacího traktu, jako je astma a alergická rýma, a jako účinné látky obsahují arylové a heteroarylové peptidové deriváty podle vynálezu v roztoku aerosolovatelného farmaceuticky přijatelného nosiče nebo suchého prášku.The pharmaceutical compositions according to the invention are particularly suitable for the treatment of inflammatory diseases of the respiratory tract, such as asthma and allergic rhinitis, and contain as active ingredients the aryl and heteroaryl peptide derivatives of the invention in a solution of an aerosolizable pharmaceutically acceptable carrier or dry powder.
Farmaceutické prostředky podle vynálezu obsahují prostředky pro převedení aerosolovatelného farmaceuticky přijatelného nosiče nebo suchého prášku do aerosolové formy vhodné pro inhalaci a intranasální aplikaci.The pharmaceutical compositions of the invention comprise means for converting an aerosolizable pharmaceutically acceptable carrier or dry powder into an aerosol form suitable for inhalation and intranasal administration.
Jiné provedení tohoto vynálezu představují farmaceutické prostředky, které obsahují účinnou látku podle vynálezu v uvedeném roztoku nosiče v koncentraci 0,1 až 30 mg/ml.Another embodiment of the present invention are pharmaceutical compositions comprising the active ingredient of the present invention in said carrier solution at a concentration of 0.1 to 30 mg / ml.
Farmaceutické prostředky podle vynálezu dále obsahují β-adrenergního agonistu.The pharmaceutical compositions of the invention further comprise a β-adrenergic agonist.
S výhodou farmaceutické prostředky podle tohoto vynálezu obsahují β-adrenergního agonistu vybraného ze skupiny zahrnující albuterol, tetrabutalin, formoterol, fenoterol a prenalin.Preferably, the pharmaceutical compositions of this invention comprise a β-adrenergic agonist selected from the group consisting of albuterol, tetrabutaline, formoterol, phenoterol and prenalin.
Farmaceutické prostředky podle vynálezu dále obsahují protizánětlivý kortikosteroid.The pharmaceutical compositions of the invention further comprise an anti-inflammatory corticosteroid.
Výhodně farmaceutické prostředky podle vynálezu obsahují protizánětlivý kortikosteroid vybraný ze skupiny zahrnující beclomethason, triamcinolon, flurisolid a dexamethason.Preferably, the pharmaceutical compositions of the invention comprise an anti-inflammatory corticosteroid selected from the group comprising beclomethasone, triamcinolone, flurisolide and dexamethasone.
Farmaceutické prostředky podle vynálezu jsou vhodné pro léčení zánětlivých stavů kůže způsobovaných nedostatečnou imunitou a jako účinnou látku obsahují arylové a heteroarylové peptidylové deriváty podle tohoto vynálezu ve spojení s farmaceuticky přijatelným nosičem.The pharmaceutical compositions of the invention are suitable for the treatment of inflammatory conditions of the skin caused by immunodeficiency and contain as active ingredient the aryl and heteroaryl peptidyl derivatives of the invention in association with a pharmaceutically acceptable carrier.
Zvlášť výhodnými tryptázovými inhibitory jsou sloučeniny 3 a 15 z tabulek I a II, vzorců X a XIParticularly preferred tryptase inhibitors are compounds 3 and 15 of Tables I and II, formulas X and XI
(X)(X)
CXI)CXI)
Zde popsané sloučeniny se používají pro prevenci a léčení zánětlivých onemocnění způsobených imunitou, zejména spojených s respiračním traktem, včetně astmatu. Zejména stadium hypersenzitivity spojené s chronickým astmatem a alergickou rýmou. Předkládaný vynález tedy popisuje metody léčení zánětlivých onemocnění způsobených imunitou, kdy pacient se zánětlivým onemocněním způsobeným imunitou reaguje na léčbu inhibitorem tryptázy a je podána terapeuticky účinná dávka nebo množství sloučeniny uvedené v tomto vynálezu.The compounds described herein are used for the prevention and treatment of inflammatory diseases caused by immunity, particularly those associated with the respiratory tract, including asthma. In particular, the stage of hypersensitivity associated with chronic asthma and allergic rhinitis. Thus, the present invention provides methods for treating an inflammatory disease caused by an immune response, wherein the patient with an inflammatory disease caused by the immune response responds to treatment with a tryptase inhibitor and administers a therapeutically effective dose or amount of a compound of the invention.
Vynález také popisuje farmaceutické prostředky obsahující zde popisované sloučeniny. Tyto farmaceutické prostředky mohou existovat v různých formách - mohou se podávat orálně, injekčně a jako infúzní roztoky. Obvykle pokud se používají k léčení nebo prevenci astmatu, zvláště přecitlivělosti spojené s chronickým astmatem, jsou tyto farmaceutické směsi ve formě aerosolu prášku nebo roztoků.The invention also provides pharmaceutical compositions comprising the compounds described herein. These pharmaceutical compositions can exist in various forms - they can be administered orally, by injection and as infusion solutions. Usually, when used to treat or prevent asthma, particularly hypersensitivity associated with chronic asthma, these pharmaceutical compositions are in the form of an aerosol of powder or solutions.
Pokud se používají při léčení zánětlivých stavů kůže způsobených imunitou, sloučeniny z tohoto vynálezu se používají v kombinaci s netoxickými farmaceuticky přijatelnými nosiči. Sloučeniny z tohoto vynálezu mohou být použity v kombinaci s protizánětlivými látkami, dalšími terapeutiky proti astmatu, jako jsou agonisté β-adrenergik, protizánětlivé kortikosteroidy, anticholinergika a další.When used in the treatment of immune-mediated inflammatory conditions of the skin, the compounds of the invention are used in combination with non-toxic pharmaceutically acceptable carriers. The compounds of the invention may be used in combination with anti-inflammatory agents, other asthma therapeutics such as β-adrenergic agonists, anti-inflammatory corticosteroids, anticholinergics and others.
Stručný popis obrázkůBrief description of the pictures
Na obrázku 1 je graf, který ukazuje specifickou plicní rezistenci u ovcí jako funkci času v hodinách po expozici. Prázdné čtverečky představují kontrolní hodnoty a plná kolečka představují hodnoty pro stejné zvíře po podání sloučeniny 3 z tabulky I a II.Figure 1 is a graph showing specific lung resistance in sheep as a function of time in hours post exposure. Open squares represent control values and solid circles represent values for the same animal after administration of compound 3 of Tables I and II.
Na obr. 2 je graf, který ukazuje rozvoj hypersenzitivity ovcí při bronchokonstrikci způsobené carbacholem, 24 hodin po expozici alergenem, když je před carbacholem podána sloučenina 3 z tabulky I a II. Tmavý, jednolitý sloupec odpovídá kontrole, slepý vzorek. Světlejší jednolitý sloupec odpovídá léku, slepý vzorek. Pruhovaný sloupec odpovídá kontrole, po podání antigenu. Bílý sloupec odpovídá léku, po podání antigenu.Fig. 2 is a graph showing the development of sheep hypersensitivity in bronchoconstriction due to carbachol, 24 hours after allergen exposure when compound 3 of Tables I and II is administered prior to carbachol. Dark, single column corresponds to control, blank sample. The lighter solid column corresponds to the drug, the blank sample. The striped bar corresponds to the control, after antigen administration. The white bar corresponds to the drug after antigen administration.
Příklady provedení vynálezuDETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
I. Definice a obecné parametryI. Definitions and general parameters
Následující definice dále ilustrují a definují význam a rámec různých termínů, které jsou zde použity k popisu vynálezu.The following definitions further illustrate and define the meaning and scope of the various terms used herein to describe the invention.
„Zánětlivá onemocnění způsobená imunitou“ obecně zahrnují choroby, které jsou spojeny s uvolňováním mediátorů zmastocytů a reagují na léčbu tryptázovým inhibitorem. Příklady těchto onemocnění zahrnují onemocnění přímého typu hypersenzitivity jako je astma, alergická rýma, urticarie a cévní edém, a ekzematická dermatitida (atopická dermatitida), a anafylaxe, stejně jako hyperproliferativní choroby kůže, vředy trávicího ústrojí, zánětlivá onemocnění střev, zánětlivé stavy kůže, apod."Immune inflammatory diseases" generally include diseases that are associated with the release of messenger mediators and respond to treatment with a tryptase inhibitor. Examples of such diseases include direct type hypersensitivity diseases such as asthma, allergic rhinitis, urticaria and vascular edema, and eczematic dermatitis (atopic dermatitis), and anaphylaxis as well as hyperproliferative skin diseases, gastrointestinal ulcers, inflammatory bowel diseases, inflammatory conditions of the skin, and the like .
„Hypersenzitivita“ se vztahuje k pozdní fázi bronchokonstrikce a hyperreaktivity dýchacích cest spojených s chronickým astmatem. Hypersenzitivita astmatické bronchiolámí tkáně je považována za následek chronické zánětlivé reakce, které dráždí a ničí epitelim lemující stěny dýchacích cest a podporuje patologické ztlušťování podpovrchové tkáně.“Hypersensitivity” refers to the late phase bronchoconstriction and airway hyperreactivity associated with chronic asthma. Hypersensitivity of asthmatic bronchiolar tissue is considered to be a chronic inflammatory reaction that irritates and destroys the epithelium lining the airway walls and promotes pathological thickening of subsurface tissue.
„Halogen“ označuje atomy fluóru, brómu, chlóru a jódu."Halogen" refers to fluorine, bromine, chlorine and iodine atoms.
„Hydroxyl“ označuje skupinu -OH."Hydroxyl" refers to the group -OH.
-8CZ 289930 B6 „Nižší alkyl“ označuje cyklický, větvený nebo rovný řetězec alkylové skupiny jednoho až šesti uhlíkových atomů. U tohoto termínu jsou dále uváděny příklady skupin, jako je methyl, ethyl, npropyl, i-propyl, n-butyl, t-butyl, i-butyl (nebo 2-methylpropyl), cyklopropylmethyl, i-amyl, namyl, a hexyl.-8EN 289930 B6 "Lower alkyl" refers to a cyclic, branched, or straight chain alkyl group of one to six carbon atoms. Exemplary groups such as methyl, ethyl, n-propyl, i-propyl, n-butyl, t-butyl, i-butyl (or 2-methylpropyl), cyclopropylmethyl, i-amyl, nyl, and hexyl are further exemplified herein.
„Aryl“ nebo „Ar“ označuje aromatickou karbocyklickou skupinu, která má jeden kruh (např. fenyl), vícenásobný kruh (např. bifenyl) nebo vícenásobné kondenzované kruhy z nichž je alespoň jeden aromatický (např, 1,2,3,4-tetrahydronaftyl, naftyl, anthryl nebo fenanthryl), které mohou být případně substituované, např. halogenem, nižším alkylem, nižší alkoxy skupinou, nižší alkylthio skupinou, trifluoromethylem, nižší acyloxy skupinou, arylem, heteroarylem a hydroxylem. Ale podle tohoto vynálezu aromatický kruh nesoucí amidový postranní řetězec nemůže být dále substituovaný halogenem. Kromě toho aromatický kruh nesoucí postranní amidový řetězec nemůže mít umístěn nižší alkylovou skupinu v poloze ortho k hydroxylové skupině (tj. meta k amidovému postrannímu řetězci)."Aryl" or "Ar" refers to an aromatic carbocyclic group having a single ring (eg, phenyl), a multiple ring (eg, biphenyl), or multiple condensed rings of which at least one is aromatic (eg, 1,2,3,4- tetrahydronaphthyl, naphthyl, anthryl or phenanthryl), which may be optionally substituted, eg, by halogen, lower alkyl, lower alkoxy, lower alkylthio, trifluoromethyl, lower acyloxy, aryl, heteroaryl and hydroxyl. However, according to the present invention, the aromatic ring bearing the amide side chain cannot be further substituted with halogen. In addition, the aromatic ring bearing the side amide chain cannot have a lower alkyl group located ortho to the hydroxyl group (i.e., meta to the amide side chain).
„Heterocyklus“ označuje nasycenou, nenasycenou nebo aromatickou karbocyklickou skupinu, která má jednoduchý kruh (např. morfolinový kruh, pyridyl nebo furyl) nebo vícenásobné kondenzované kruhy (např. nafthyridinyl, chinoxalyl, chinolinyl, indolizinyl nebo benzo[b]thienyl) a který má nejméně jeden heteroatom, jako je N, O nebo S, uvnitř kruhu, který může být nesubstituovaný nebo substituovaný např. halogenem, nižším alkylem, nižším alkoxylovou skupinou, nižší alkylthioskupinou, trifluoromethylem, nižší acyloxyskupinou a hydroxy skupinou. Termín „heteroaryl“ nebo „HetAr“ označuje heterocyklus, který má nejméně jeden heterocyklický kruh aromatický."Heterocycle" means a saturated, unsaturated or aromatic carbocyclic group having a single ring (eg morpholine ring, pyridyl or furyl) or multiple condensed rings (eg naphthyridinyl, quinoxalyl, quinolinyl, indolizinyl or benzo [b] thienyl) and having at least one heteroatom, such as N, O or S, within the ring, which may be unsubstituted or substituted with, for example, halogen, lower alkyl, lower alkoxy, lower alkylthio, trifluoromethyl, lower acyloxy and hydroxy. The term "heteroaryl" or "HetAr" refers to a heterocycle having at least one heterocyclic ring aromatic.
„Arylalkyl“ označuje skupinu -R-Ar, kde Ar je arylová skupina a R je alifatická skupina s rovným nebo větveným řetězcem. Arylalkylová skupina může být nesubstituovaná nebo substituovaná např. halogenem, nižším alkylem, nižší alkoxylovou skupinou, nižší alkylthioskupinou, trifluoromethylem, nižší acyloxyskupinou a hydroxy skupinou."Arylalkyl" refers to the group -R-Ar, where Ar is an aryl group and R is a straight or branched chain aliphatic group. The arylalkyl group may be unsubstituted or substituted, for example, by halogen, lower alkyl, lower alkoxy, lower alkylthio, trifluoromethyl, lower acyloxy and hydroxy.
„Heteroarylalkyl“ označuje skupinu -R-HetAr, kde HetAr je heteroarylová skupina a R je alifatická skupina s rovným nebo větveným řetězcem. Heteroarylalkylová skupina může být nesubstituovaná nebo substituovaná, např. halogenem, nižším alkylem, nižší alkoxylovou skupinou, nižší alkylthioskupinou, trifluoromethylem, nižší acyloxyskupinou a hydroxy skupinou."Heteroarylalkyl" refers to the group -R-HetAr, wherein HetAr is a heteroaryl group and R is a straight or branched chain aliphatic group. The heteroarylalkyl group may be unsubstituted or substituted, eg, by halogen, lower alkyl, lower alkoxy, lower alkylthio, trifluoromethyl, lower acyloxy and hydroxy.
„Farmaceuticky přijatelná sůl“ označuje soli, které zachovávají biologickou efektivitu a vlastnosti mateřské sloučeniny a které nejsou biologicky nebo jinak nežádoucí."Pharmaceutically acceptable salt" refers to salts that retain the biological effectiveness and properties of the parent compound and that are not biologically or otherwise undesirable.
„Farmaceuticky nebo terapeuticky přijatelný nosič“ označuje nosné médium, které neinterferuje s biologickým účinkem aktivních složek a které není toxické pro pacienta a okolí."Pharmaceutically or therapeutically acceptable carrier" refers to a carrier medium that does not interfere with the biological action of the active ingredients and that is not toxic to the patient and the environment.
„Stereoizomer“ označuje chemickou sloučeninu, které má stejnou molekulovou hmotnost a chemické složení, ale atomy jsou jinak seskupeny. Chemicky totožné skupiny se liší prostorovou orientací, a pokud jsou čisté, tak stáčejí rovinu polarizovaného světla, ale některé čisté stereoizomery mají optickou rotaci, která je také jemná, že je současnými přístroji nezjistitelná. Sloučeniny tohoto vynálezu mohou mít jednu nebo více asymetrických uhlíkových atomů a tak mohou zahrnovat různé stereoizomery. Všechny stereoizomery jsou zahrnuty do rámce vynálezu."Stereoisomer" refers to a chemical compound that has the same molecular weight and chemical composition but the atoms are otherwise grouped. Chemically identical groups differ in spatial orientation, and when pure they rotate the plane of polarized light, but some pure stereoisomers have optical rotation which is also subtle to be undetectable by current instruments. The compounds of the invention may have one or more asymmetric carbon atoms and thus may include various stereoisomers. All stereoisomers are included within the scope of the invention.
„Léčba“ nebo „léčení“ označuje jakékoliv podávání tryptázového inhibitoru in vitro nebo in vivo a zahrnuje:"Treatment" or "treatment" refers to any administration of a tryptase inhibitor in vitro or in vivo, and includes:
(i) zastavení symptomů choroby (ii) zmenšení nebo zastavení dlouhodobých vlivů choroby a/nebo (iii) odstranění symptomů choroby.(i) stopping the symptoms of the disease; (ii) reducing or stopping the long-term effects of the disease and / or (iii) eliminating the symptoms of the disease.
-9CZ 289930 B6-9EN 289930 B6
II. Tryptázové inhibitoryII. Tryptase inhibitors
Předkládaný vynález popisuje prostředky obsahující účinné serinové proteázové inhibitory, konkrétněji tryptázové inhibitory, které se používají pro zmírnění zánětlivých onemocnění způsobených imunitou, konkrétně bronchokonstrikce způsobené alergickým podnětem u astmatického zvířete.The present invention discloses compositions comprising potent serine protease inhibitors, more particularly tryptase inhibitors, which are used to alleviate inflammatory diseases caused by immune, in particular bronchoconstriction caused by an allergic stimulus in an asthmatic animal.
Tryptázové inhibitory jsou látky, které zpomalují nebo zabraňují tryptázové aktivitě. Podle jednoho aspektu předkládaného vynálezu tryptázový inhibitor obsahuje sloučeninu obecného vzorce I:Tryptase inhibitors are agents that slow or prevent tryptase activity. According to one aspect of the present invention, a tryptase inhibitor comprises a compound of formula I:
nebo farmaceuticky přijatelnou sůl, vyznačující se tím, že: Ar je hydroxylem substituovaný aryl nebo hydroxylem substituovaný heteroaryl, kde hydroxyl je umístěn v poloze ortho k amidovému postrannímu řetězci a pokud je Ar hydroxylem substituovaný aryl, aromatický kruh, nesoucí amidový postranní řetězec, není substituovaný halogenem a nenese nižší alkylovou skupinu v poloze ortho k hydroxylu; R1 je vodík, nižší alkyl, arylalkyl nebo heteroarylalkyl, R2 je vodík nebo nižší alkyl; R3 je vybráno ze skupiny sestávající ze zbytků obecných vzorců Π-ΙΧ:or a pharmaceutically acceptable salt, characterized in that: Ar is a hydroxyl substituted aryl or a hydroxy substituted heteroaryl, wherein the hydroxyl is located ortho to the amide side chain and when Ar is a hydroxy substituted aryl, the aromatic ring bearing the amide side chain is not substituted halogen and does not carry a lower alkyl group ortho to the hydroxyl; R 1 is hydrogen, lower alkyl, arylalkyl or heteroarylalkyl, R 2 is hydrogen or lower alkyl; R 3 is selected from the group consisting of radicals of the formulas Π-ΙΧ:
(II)(II)
(IV) (V)(IV)
(VI)(VI)
-10CZ 289930 B6-10GB 289930 B6
7c»^ ,.NH (CH& NH2 (VII)7 c »^,. NH (CH & NH 2 (VII))
(VIII)(VIII)
-(CHjVNHj (IX) kde m je celé číslo od 3 do 6, n je celé číslo od 0 do 3, p je celé číslo od 0 do 2, q je celé číslo od 0 do 2, r je celé číslo od 0 do 5, sje celé číslo od 0 do 2, t je celé číslo od 1 do 3, u je 1 nebo 2, 5 v je celé číslo od 3 do 6, w je celé číslo od 0 do 3, A je -CH=CH- nebo -CH=CH-; a X je -NHnebo -CH2-; R4 je nižší alkyl, substituovaný arylalkyl nebo substituovaný heteroarylalkyl a R5 a R6 jsou nezávisle vybrány ze skupiny sestávající z vodíku, nižšího alkylu, substituovaného arylalkylu a substituovaného heteroarylalkylu; nebo R4 a R5 spolu s dusíkem a uhlíkem na které jsou navázány tvoří substituovaný čtyřčlenný, pětičlenný nebo šestičlenný heterocyklus a R6 je io vodík; nebo R4 a R6 spolu s dusíkem a uhlíkem na které jsou navázány tvoří substituovaný čtyřčlenný, pětičlenný nebo šestičlenný heterocyklus a R5 je vodík; a R7 je -OR8 nebo -NR8R , kde R8 a R9 jsou nezávisle vybrány ze skupiny sestávající z vodíku, nižšího alkylu, arylu, arylalkylu nebo heteroarylalkylu, nebo R8 a R9 spolu s dusíkem na který je navázány tvoří substituovaný pětičlenný nebo šestičlenný heterocyklus.- (CHjVNHj (IX) where m is an integer from 3 to 6, n is an integer from 0 to 3, p is an integer from 0 to 2, q is an integer from 0 to 2, r is an integer from 0 to 2 5, s is an integer from 0 to 2, t is an integer from 1 to 3, u is 1 or 2, 5 v is an integer from 3 to 6, w is an integer from 0 to 3, A is -CH = CH or -CH = CH-; and X is -NH or -CH 2 -; R 4 is lower alkyl, substituted arylalkyl or substituted heteroarylalkyl, and R 5 and R 6 are independently selected from the group consisting of hydrogen, lower alkyl, substituted arylalkyl, and or R 4 and R 5 together with the nitrogen and carbon to which they are attached form a substituted four, five or six-membered heterocycle and R 6 is also hydrogen, or R 4 and R 6 together with the nitrogen and carbon to which they are attached form a substituted a four, five, or six membered heterocycle and R 5 is hydrogen, and R 7 is -OR 8 or -NR 8 R, where R 8 and R 9 are independently is selected from the group consisting of hydrogen, lower alkyl, aryl, arylalkyl or heteroarylalkyl, or R 8 and R 9 together with the nitrogen to which they are attached form a substituted 5- or 6-membered heterocycle.
V preferovaném příkladu je Ar l-hydroxy-2-naftyl, 2-hydroxyl-l-naftyl, 3-hydroxy-2-pyridyl nebo 2-hydroxy-3-chinoxalyl; R1 je vodík; R2 je vodík; R3 je vybráno ze skupiny sestávající ze zbytků obecných vzorců II až V.In a preferred example, Ar is 1-hydroxy-2-naphthyl, 2-hydroxyl-1-naphthyl, 3-hydroxy-2-pyridyl or 2-hydroxy-3-quinoxalyl; R 1 is hydrogen; R 2 is hydrogen; R 3 is selected from the group consisting of radicals of formulas II to V.
NHNH
II •(CHjVX NH,II • (CH3VX NH,
NHNH
IIII
-(CH2)ň-A-(CH2)w-XX^NH2 (II >- (CH 2 ) n -A- (CH 2 ) w -X X 1 NH 2 (II>)
(III)(III)
(IV) (V)(IV)
-11 CZ 289930 B6 kde m je celé číslo od 3 do 6, n je celé číslo od 0 do 3, p je celé číslo od 0 do 2, q je celé číslo od 0 do 2 a w je celé číslo od 0 do 3, A je -CH=CH- nebo -CH=CH~; a X je -NH- nebo -CHr-; buď R4 je nižší alkyl a R5 a R6 je vodík; a nebo R4 a R5 spolu s dusíkem a uhlíkem na které jsou 5 navázány tvoří substituovaný čtyřčlenný, pětičlenný nebo šestičlenný heterocyklus a R6 je vodík;Where m is an integer from 3 to 6, n is an integer from 0 to 3, p is an integer from 0 to 2, q is an integer from 0 to 2, and w is an integer from 0 to 3, A is -CH = CH- or -CH = CH-; and X is -NH- or -CH 2 -; either R 4 is lower alkyl and R 5 and R 6 is hydrogen; or or R 4 and R 5 together with the nitrogen and carbon to which they are attached form a substituted four, five or six membered heterocycle and R 6 is hydrogen;
a R7 je -OH, -OCH3, -NH2, 3'-aminokarboxy-l '-piperidyl nebo -N(CH3)2.and R 7 is -OH, -OCH 3 , -NH 2 , 3'-aminocarboxy-1'-piperidyl or -N (CH 3 ) 2 .
Zvláště preferovaný tryptázový inhibitor je sloučenina 3 z tabulky I a II vzorce ΧΠ:A particularly preferred tryptase inhibitor is compound 3 of Tables I and II of formula ΧΠ:
(ΧΠ)(ΧΠ)
Dalším preferovaným tryptázovým inhibitorem vzorce XIII je sloučenina 15 z tabulky I a Π:Another preferred tryptase inhibitor of formula XIII is compound 15 of Table I and Π:
(xiii)(xiii)
Jiným preferovaným tryptázovým inhibitorem je sloučenina 21 z tabulky I a II vzorce XIV:Another preferred tryptase inhibitor is Compound 21 of Tables I and II of Formula XIV:
(XIV)(XIV)
-12CZ 289930 B6-12GB 289930 B6
Tryptázové inhibitory popsané v předkládaném vynálezu lze získat známými technikami ze snadno dostupných výchozích látek, jak je podrobněji popsáno níže.The tryptase inhibitors described in the present invention can be obtained by known techniques from readily available starting materials, as described in more detail below.
V závislosti na povaze funkčních skupin mohou sloučeniny, popsané v tomto vynálezu, dále tvořit soli s různými anorganickými a organickými kyselinami a zásadami. Tyto soli mohou být tvořeny s anorganickými kyselinami jako je kyselina chlorovodíková, kyselina bromovodíková, kyselina sírová, kyselina dusičná, kyselina fosforečná a podobně, a s organickými kyselinami jako je kyselina octová, kyselina propionová, kyselina glykolová, kyselina pyrohroznová, kyselina šťavelová, kyselina hydroxyjantarová, kyselina malonová, kyselina jantarová, kyselina maleinová, fumarová kyselina, vinná kyselina, citrónová kyselina, benzoová kyselina, skořicová kyselina, mandlová kyselina, methansulfonová kyselina, ethansulfonová kyselina, p-toluensulfonová kyselina, salicylová kyselina a podobně.Depending on the nature of the functional groups, the compounds described herein may further form salts with various inorganic and organic acids and bases. These salts may be formed with inorganic acids such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid and the like, and with organic acids such as acetic acid, propionic acid, glycolic acid, pyruvic acid, oxalic acid, hydroxy succinic acid, malonic acid, succinic acid, maleic acid, fumaric acid, tartaric acid, citric acid, benzoic acid, cinnamic acid, mandelic acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid, salicylic acid and the like.
Soli mohou vznikat i ze zbytku karboxylové kyseliny působením alkalických kovů nebo bází, které obsahují alkalické kovy, jako jsou hydroxidy alkalických kovů a alkoxidy alkalických kovů, nebo působením kovů alkalických zemin nebo bází, které obsahují kovy alkalických zemin, jako jsou hydroxidy kovů alkalických zemin a alkoxidy kovů alkalických zemin. Dále mohou vznikat z karboxylové kyseliny a organické zásady, jako jsou trimethylamin, diethylamin, ethanolamin, piperidin, isopropylamin, cholin, kofein a další.Salts may also be formed from the rest of the carboxylic acid by treatment with alkali metals or bases containing alkali metals such as alkali metal hydroxides and alkali metal alkoxides, or by treatment with alkaline earth metals or bases containing alkaline earth metals such as alkaline earth metal hydroxides and alkaline earth metal alkoxides. Further, they can be formed from carboxylic acid and organic bases such as trimethylamine, diethylamine, ethanolamine, piperidine, isopropylamine, choline, caffeine and others.
Soli mohou vznikat běžným způsobem, jako je reakce volné kyseliny nebo báze produktu s jedním nebo více ekvivalenty vhodné báze nebo kyseliny v rozpouštědle, ve kterém sůl není rozpustná, nebo v rozpouštědle jako je voda, které se pak odstraní odpařením ve vakuu nebo lyofilizací nebo výměnou kationtu stávající báze za jiný kationt na vhodném iontoměniči.Salts may be formed in a conventional manner, such as by reacting the free acid or base of the product with one or more equivalents of a suitable base or acid in a solvent in which the salt is insoluble or in a solvent such as water, which is then removed by vacuum evaporation or freeze-drying or exchange cation of an existing base for another cation on a suitable ion exchanger.
III. Testování in vitro a in vivoIII. In vitro and in vivo testing
V této problematice jsou známy protokoly testování in vitro pro screening potenciálních inhibitorů vjejich schopnosti inhibovat tryptázu. Viz např. Sturzebecher a kol. (1992) Biol Chem. Hoppe-Syeler 173: 1025-1030. Obvykle tato stanovení měří tryptázou indukovanou hydrolýzu chromogenní substance peptidového typu. Podrobnosti postupu, který je zde uveden jako příklad, jsou popsány níže.In vitro protocols for screening potential inhibitors for their ability to inhibit tryptase are known in the art. See, eg, Sturzebecher et al. (1992) Biol. Chem. Hoppe-Syeler 173: 1025-1030. Typically, these assays measure tryptase-induced hydrolysis of a chromogenic substance of the peptide type. The details of the procedure exemplified herein are described below.
Dále může být aktivita sloučenin popsaných v tomto vynálezu zhodnocena testováním in vivo na jednom z mnoha modelů astmatu zvířat. Viz Larson, „Experimental Models of Reversible Airway Obstruction“, v The Lung: Scientific Foundantions, Crystal, West a kol., editoři, Raven Press, New York, 1991; Wamer a kol. (1990) Am. Rev. Respir. Dis. 141: 253-257. Ideální zvířecí model by měl kopírovat hlavní klinické a fyziologické znaky humánního astmatu, včetně hypersenzitivity dýchacích cest na chemické mediátory a fyzikální podněty; vymizení obstrukce dýchacích cest při podání léků použitelných při humánním astmatu (β-adrenergika, methylxanthiny, kortikosteroidy a další; zánět dýchacích cest s průnikem aktivovaných leukocytů; a chronické zánětlivé degenerativní změny, jako je ztluštění základnové membrány, hypertrofie hladkého svalstva a zničení epitelu. Druhy, používané jako zvířecí modely, zahrnují myši, krysy, morčata, králíky, psy a ovce. Všechny druhy mají nějaká omezení, a vhodná volba závisí na řešeném problému.Further, the activity of the compounds described herein can be evaluated by in vivo testing in one of many animal asthma models. See Larson, "Experimental Models of Reversible Airway Obstruction," in The Lung: Scientific Foundantions, Crystal, West et al., Editors, Raven Press, New York, 1991; Wamer et al. (1990) Am. Roar. Respir. Dis. 141: 253-257. The ideal animal model should replicate the main clinical and physiological features of human asthma, including airway hypersensitivity to chemical mediators and physical stimuli; the disappearance of airway obstruction when administering drugs useful in human asthma (β-adrenergics, methylxanthines, corticosteroids and others; airway inflammation with activated leukocyte infiltration; and chronic inflammatory degenerative changes such as base membrane thickening, smooth muscle hypertrophy and epithelial destruction. , used as animal models, include mice, rats, guinea pigs, rabbits, dogs, and sheep.All species have some limitations, and the appropriate choice depends on the problem being solved.
Počáteční astmatickou odpověď můžeme zhodnotit na morčatech a psech, a zvláště na křížencích chrta a baseta, který rozvíjí nespecifickou hypersenzitivitu dýchacích cest na četné nealergenní látky, jako jsou methacholin a kyselina citrónová. Vybrané ovce vykazují dvojitou reakci na antigenní stimulaci proteiny Ascaris. U zvířat s dvojitou reakcí je časná astmatická reakce (IAR) následována pozdní astmatickou reakcí (LAR), a to 6 až 8 hodin po expozici. Hypersenzitivita na carbachol, cholinergenního agonistu, vzrůstá 24 hodin po antigenní stimulaci při které zvíře vykazuje LAR.The initial asthmatic response can be evaluated in guinea pigs and dogs, and especially in greyhound-basset crosses, which develops non-specific airway hypersensitivity to numerous non-allergenic substances such as methacholine and citric acid. Selected sheep show a double response to antigenic stimulation by Ascaris proteins. In animals with a double response, the early asthmatic response (IAR) is followed by a late asthmatic response (LAR) 6 to 8 hours after exposure. Hypersensitivity to carbachol, a cholinergenic agonist, increases 24 hours after antigen stimulation in which the animal exhibits LAR.
-13CZ 289930 B6-13GB 289930 B6
Ovce jako model alergika byl použit ke zjištění potenciálních antiastmatických účinků sloučenin, uvedených v předkládaném vynálezu. Podávání prostředků obsahujících aerosolované roztoky sloučeniny tohoto vynálezu alergickým ovcím před nebo po expozici specifickými alergeny ukázalo, že takové prostředky podstatně zmenšují nebo odstraňují pozdní astmatickou reakci 5 a v důsledku toho i hypersenzitivitu.Sheep as an allergic model was used to determine the potential antiasthmatic effects of the compounds of the present invention. Administration of compositions containing aerosolized solutions of the compound of the invention to allergic sheep prior to or after exposure to specific allergens has shown that such compositions substantially reduce or eliminate the late asthmatic response 5 and, consequently, hypersensitivity.
Sloučeniny, popsané v tomto vynálezu, se také používají pro léčení ostatních onemocnění, způsobených imunitou, při kterých tryptázová aktivita přispívá ke vzniku patologických stavů. Tato onemocnění zahrnují zánětlivá onemocnění spojená s mastocyty, jako je revmatoidní 10 artritida, revmatoidní spondylitida, osteoartritida, dnavá artritida a ostatní artritické stavy, zánětlivá onemocnění vnitřních orgánů, vředy trávícího ústrojí a různé stavy kůže.The compounds described in this invention are also used for the treatment of other immune-related diseases in which tryptase activity contributes to pathological conditions. Such diseases include inflammatory diseases associated with mast cells such as rheumatoid arthritis, rheumatoid spondylitis, osteoarthritis, gouty arthritis and other arthritic conditions, inflammatory diseases of the internal organs, gastrointestinal ulcers, and various skin conditions.
Účinnost sloučenin v tomto vynálezu při léčení převážné většiny onemocnění způsobených imunitou může být zjištěna buď postupy in vitro, nebo in vivo. Tedy protizánětlivá účinnost 15 sloučenin z tohoto vynálezu může být demonstrována stanoveními, které jsou v této oblasti dobře známy, například technikou Arthusovy obrácené pasivní reakce (Reversed Passive Arthus Reaction - (RPAR)-PAW (viz např. Ganguly a kol. (1992) U.S. Patent No. 5, 126, 352). Stanovení pro určení terapeutického významu sloučenin při léčení různých stavů kůže, jako jsou hyperproliferativní onemocnění kůže, v této oblasti dobře známá, například Arachidonic Acid 20 Mouše Ear Test (id). Sloučeniny v tomto vynálezu mohou být oceněny pro svoje protivředové působení podle metod popsaných vChiu a kol. (1984) Archives Intemationales de Pharmacodynamie et de Therapie 270: 128-140.The efficacy of the compounds of this invention in the treatment of the vast majority of immune-related diseases can be ascertained by either in vitro or in vivo procedures. Thus, the anti-inflammatory activity of the 15 compounds of this invention can be demonstrated by assays well known in the art, for example, the Reversed Passive Arthus Reaction - (RPAR) -PAW technique (see, eg, Ganguly et al. (1992) US No. 5, 126, 352) Assays for determining the therapeutic importance of compounds in the treatment of various skin conditions, such as hyperproliferative skin diseases, are well known in the art, for example, Arachidonic Acid 20 Mouse Ear Test (id). be evaluated for their anti-ulcer activity according to the methods described by Chiu et al (1984) Archives Intemationales de Pharmacodynamie et de Therapie 270: 128-140.
IV. Podávání in vivoIV. In vivo administration
Podle tohoto vynálezu, terapeuticky nebo farmaceuticky účinné množství tryptázového inhibitoru, a zejména sloučenina obecného vzorce I, je podávána pacientům trpícím onemocněním způsobeným imunitou. Podle jednoho příkladu lze sloučeniny v tomto vynálezu použít pro prevenci nebo zlepšení astmatu. Při použití prostředků podle předkládaného vynálezu v léčení 30 astmatu může být sloučenina podána preventivně před expozicí alergenem nebo jiným faktorem, nebo po této expozici. Sloučeniny v tomto vynálezu jsou zejména použitelné pro zlepšení destrukce tkáně v pozdní fázi, kterou můžeme vidět u sezónní nebo trvalé rýmy. Jiný aspekt předkládaného vynálezu je zaměřen na prevenci a léčení ostatních imunitou způsobených zánětlivých onemocnění spojených s mastocyty jako je urticarie a cévní edém, exematická 35 dermatitida (atopická dermatitida) a anafylaxe, stejně jako hyperproliferativní onemocnění kůže, vředy trávicího ústrojí a další.According to the present invention, a therapeutically or pharmaceutically effective amount of a tryptase inhibitor, and in particular a compound of formula I, is administered to patients suffering from an immune disorder. In one example, the compounds of the invention can be used to prevent or ameliorate asthma. When using the compositions of the present invention in the treatment of asthma, the compound may be administered preventively before or after exposure to an allergen or other factor. The compounds of the invention are particularly useful for improving the late-stage tissue destruction seen in seasonal or permanent rhinitis. Another aspect of the present invention is directed to the prevention and treatment of other immune-related inflammatory diseases associated with mast cells such as urticaria and vascular edema, ematic dermatitis (atopic dermatitis) and anaphylaxis, as well as hyperproliferative skin diseases, gastrointestinal ulcers and others.
Prostředky obsahující sloučeniny mohou být podávány při preventivním a/nebo terapeutickém léčení. Při terapeutické aplikaci jsou prostředky podány pacientům již trpícím onemocněním, jak 40 je popsáno výše, v množství dostatečném pro léčení nebo alespoň pro částečné zastavení symptomů onemocnění nebo jejich komplikací. Množství přiměřené k dosažení těchto cílů je definováno jako „terapeuticky účinné množství nebo dávka“. Množství účinné pro toto požití bude záviset na průběhu a stavu onemocnění, předchozí terapii, na pacientově zdravotním stavu a na reakci na léčiva a na názoru ošetřujícího lékaře.Compositions containing the compounds may be administered in preventive and / or therapeutic treatment. In therapeutic application, the compositions are administered to patients already suffering from the disease as described above in an amount sufficient to treat or at least partially arrest the symptoms of the disease or its complications. An amount adequate to achieve these goals is defined as a "therapeutically effective amount or dose". The amount effective for such ingestion will depend upon the course and condition of the disease, prior therapy, the patient's health and response to drugs, and the judgment of the attending physician.
Při preventivní aplikaci jsou prostředky obsahující sloučeniny podle tohoto vynálezu podávány pacientům, kteří jsou citliví nebo z nějakého jiného důvodu hrozí nebezpečí konkrétního onemocnění. Množství v tomto případě definujeme jako „preventivně účinné množství nebo dávka“. Při tomto použití přesné množství opět závisí na pacientově zdravotním stavu, hmotnosti 50 a dalším.For preventive administration, compositions containing the compounds of this invention are administered to patients who are susceptible or at risk for a particular disease. The amount in this case is defined as a "preventively effective amount or dose". In this use, the exact amount again depends on the patient's health, weight 50 and others.
Když se jednou pacientův stav zlepšil, tak pokud je to nutné, podává se udržovací dávka. Dále mohou být sníženy dávky nebo frekvence podávání, nebo oboje, v závislosti na symptomech, aby byla udržena úroveň zlepšení symptomů. Když se symptomy ustálí na žádané úrovni, léčeníOnce the patient's condition has improved, a maintenance dose is administered if necessary. Further, dosages or frequency of administration, or both, may be reduced depending on the symptoms to maintain a level of amelioration of the symptoms. When symptoms stabilize at the desired level, healing
- 14CZ 289930 B6 může skončit. Pacienti ovšem mohou vyžadovat přerušovanou dlouhodobou léčbu, pokud se symptomy onemocnění opakují.- 14GB 289930 B6 may end. However, patients may require intermittent long-term treatment if the symptoms of the disease recur.
Obecně vhodná účinná dávka tryptázového inhibitoru bude v rozsahu od 0,1 do 1000 miligramů (mg) na příjemce a den, výhodněji v rozsahu od 1 do 100 mg na den. Nejvýhodnější je potřebnou dávku podat v jedné, dvou, třech, čtyřech menších dávkách podaných v přiměřených intervalech během dne. Tyto menší dávky mohou být podány ve formě jednotkových dávek, například o obsahu od 5 do 1000 mg, nejlépe od 10 do 100 mg aktivní složky na jednu dávkovou jednotku.Generally, a suitable effective dose of the tryptase inhibitor will be in the range of 0.1 to 1000 milligrams (mg) per recipient per day, more preferably in the range of 1 to 100 mg per day. Most preferably, the required dose will be administered in one, two, three, four smaller doses administered at appropriate intervals throughout the day. These smaller doses may be administered in unit dosage form, for example containing from 5 to 1000 mg, preferably from 10 to 100 mg of active ingredient per dosage unit.
Prostředky používané v této terapii mohou mít různé formy. Tyto formy zahrnují například dávky ve formě pevné, polotuhé nebo tekuté, jako jsou tablety, prášky, roztoky nebo suspenze, liposomy, injekční a infuzní roztoky. Výběr formy závisí na zamýšleném způsobu podání a terapeutické aplikaci.The compositions used in this therapy may take various forms. Such forms include, for example, solid, semi-solid or liquid doses such as tablets, powders, solutions or suspensions, liposomes, injectable and infusion solutions. The choice of form depends on the intended route of administration and therapeutic application.
I když je možné podávat aktivní látku z tohoto vynálezu samotnou, je výhodnější podávat ji jako součást farmaceutické směsi. Prostředky v uváděném vynálezu obsahují nejméně jednu látku nebo inhibitor z tohoto vynálezu v terapeuticky nebo farmaceuticky účinné dávce spolu s jedním nebo více terapeuticky nebo farmaceuticky přijatelnými nosiči a dalšími možnými terapeutickými přísadami. Různé možnosti jsou popsány například vGilman a kol. (editoři) (1990) Goodman and Gilman's: The Pharmacological Bases of Therapeutics, 8. vydání, Pergamon Press; a Remingtonů viz výše. Jsou zde diskutovány metody podávání, např. orální, intravenózní, intraperitoneální nebo intramuskulámí podávání a další. Farmaceuticky přijatelné nosiče zahrnují vodu, fyziologický roztok, pufry a další sloučeniny popsané například v Měrek Index, Měrek & Co., Rahway, NJ.While it is possible to administer the active ingredient of the invention alone, it is preferable to administer it as part of a pharmaceutical composition. The compositions of the present invention comprise at least one agent or inhibitor of the invention in a therapeutically or pharmaceutically effective dose together with one or more therapeutically or pharmaceutically acceptable carriers and other possible therapeutic ingredients. Various options are described, for example, in Gilman et al. (eds.) (1990) Goodman and Gilman ' s: The Pharmacological Bases of Therapeutics, 8th Edition, Pergamon Press; and Remingtons, supra. Methods of administration are discussed herein, such as oral, intravenous, intraperitoneal or intramuscular administration, and others. Pharmaceutically acceptable carriers include water, saline, buffers, and other compounds described, for example, in Gauge Index, Gauge & Co., Rahway, NJ.
Obvykle, pokud jsou sloučeniny z předkládaného vynálezu používány k léčení astmatu nebo alergické rýmy, budou ve formě aerosolu. Termín „aerosol“ zahrnuje jakoukoliv fázi z předkládaného vynálezu, ve které je suspendován plyn, který umožňuje inhalaci do bronchiolů nebo do nosu. Aerosol zahrnuje suspenzi plynu a kapiček sloučenin z předkládaného vynálezu, která vzniká v inhalátoru nebo rozprašovači, nebo v rozprašovači mlhy. Aerosol také zahrnuje suchý prášek složený ze sloučeniny z tohoto vynálezu suspendované ve vzduchu nebo v jiném nosném plynu, který může být dodáván například vefouknutím z inhalačního přístroje.Usually, when used to treat asthma or allergic rhinitis, the compounds of the present invention will be in the form of an aerosol. The term "aerosol" includes any phase of the present invention in which a gas is suspended to allow inhalation into bronchioles or the nose. The aerosol comprises a suspension of gas and droplets of the compounds of the present invention formed in an inhaler or nebulizer, or a nebulizer mist. The aerosol also includes a dry powder composed of a compound of the invention suspended in air or other carrier gas, which can be delivered, for example, by blowing from an inhaler.
Pro roztoky, užívané pro přípravu aerosolů v předkládaném vynálezu, je preferovaný rozsah koncentrací sloučenin z tohoto vynálezu od 0,1 do 100 miligramů (mg)/mililitr (ml), výhodněji 0,1 až 30 mg/ml, a nejvýhodněji od 1 do 10 mg/ml. Obvykle jsou roztoky pufrovány fyziologicky kompatibilním pufrem jako je fosfátový nebo hydrogenuhličitanovým. Obvyklý rozsah pH je od 5 do 9, výhodněji od 6,5 do 7,8, a nejvýhodněji od 7,0 do 7,6. K dosažení osmolarity fyziologického rozmezí se obvykle přidává chlorid sodný, nejlépe v rozmezí 10 % isotonický. Složení těchto roztoků pro přípravu aerosolových inhalačních prostředků je diskutována v Remingtonů Pharmaceutical Sciences, viz také Ganderton a Jones, Druh Delivery to the Respirátory Tract, Ellis Horwood (1987); Gonda (1990) Critical Reviews in Therapeutic Druh Carrier Systems 6: 273-313; a Reabum a kol. (1992) J. Pharmacol. Toxicol. Metods 27: 143-159.For the solutions used to prepare aerosols in the present invention, a preferred concentration range of the compounds of this invention is from 0.1 to 100 milligrams (mg) / ml (ml), more preferably 0.1 to 30 mg / ml, and most preferably from 1 to 100 mg / ml. 10 mg / ml. Typically, solutions are buffered with a physiologically compatible buffer such as phosphate or bicarbonate. A typical pH range is from 5 to 9, more preferably from 6.5 to 7.8, and most preferably from 7.0 to 7.6. Sodium chloride, preferably in the range of 10% isotonic, is usually added to achieve osmolarity in the physiological range. The compositions of these solutions for the preparation of aerosol inhalants are discussed in Remington's Pharmaceutical Sciences, see also Ganderton and Jones, Tract Delivery to the Respirators, Ellis Horwood (1987); Gonda (1990) Critical Reviews in Therapeutic Species Carrier Systems 6: 273-313; and Reabum et al. (1992) J. Pharmacol. Toxicol. Metods 27: 143-159.
Roztoky sloučenin z tohoto vynálezu mohou být převedeny do aerosolů jakýmkoliv známým způsobem běžně používaným pro přípravu aerosolových inhalačních farmaceutických prostředků. V zásadě tyto metody zahrnují stlačení nebo prostředky zajišťující stlačení nádoby s roztokem, obvykle s inertním nosným plynem, a průchod stlačeného plynu malým otvorem, tak kapičky roztoku proniknou do úst a trachei zvířete, kterému lék podáváme. Pro usnadnění průniku látky se obvykle na výstupní otvor nasazuje náustek.Solutions of the compounds of this invention can be aerosolized by any known method commonly used to prepare aerosol inhalation pharmaceutical compositions. Essentially, these methods include compression or means for compressing the container of solution, usually an inert carrier gas, and passing the compressed gas through a small opening, so that the droplets of solution penetrate the mouth and trache of the animal to which the drug is being administered. A mouthpiece is usually fitted to the outlet opening to facilitate the penetration of the fabric.
Při jednom příkladu aplikace se prostředky v předkládaném vynálezu se skládají z roztoků sloučenin z tohoto vynálezu, v kterých jsou nebo nejsou obsaženy prostředky obvyklé pro vznik aerosolu při léčení astmatu, jako jsou inhalátory s měřitelným dávkováním, tryskovéIn one example of administration, the compositions of the present invention consist of solutions of the compounds of the present invention in or without aerosol formulations for the treatment of asthma, such as measurable inhalers,
-15CZ 289930 B6 rozprašovače a ultrazvukové rozprašovače. Tento prostředek také může zahrnovat náustek, nasazený na výstupní otvor.-15EN 289930 B6 nebulisers and ultrasonic nebulisers. The means may also include a mouthpiece mounted on the outlet orifice.
Při jiném způsobu aplikace při léčení alergické lýmy prostředek nepovinně obsahuje roztok sloučeniny z tohoto vynálezu v nosním spreji.In another mode of administration in the treatment of allergic rhinitis, the composition optionally comprises a nasal spray solution of a compound of the invention.
Suchý prášek obsahující sloučeninu z tohoto vynálezu s expicientem, je jiný způsob aplikace předkládaného vynálezu. Může být podáván práškovým inhalátorem, který obsahuje výše popsaný prášek.A dry powder comprising a compound of the present invention with an excipient is another method of applying the present invention. It may be administered by a powder inhaler containing the powder described above.
Rozumí se, že metody z tohoto vynálezu mohou být použity v kombinaci s dalšími látkami pro léčení onemocnění způsobených imunitou a zejména astmatu. V těchto kombinacích se používají zvláště agonisté β-adrenergik, protože odstraňují symptomy časné astmatické reakce, zatímco sloučeniny z předkládaného vynálezu odstraňují symptomy pozdní astmatické reakce. Preferovaní agonisté β-adrenergik v těchto roztocích zahrnují jakékoliv obvyklé β-agonisty, používané pro odstranění astmatu, jako je albuterol, terbutalin, formoterol, fanoterol nebo prenalin.It is to be understood that the methods of the invention can be used in combination with other agents for the treatment of diseases caused by immune and in particular asthma. In particular, β-adrenergic agonists are used in these combinations because they eliminate the symptoms of early asthmatic reaction, while the compounds of the present invention eliminate the symptoms of late asthmatic reaction. Preferred β-adrenergic agonists in these solutions include any conventional β-agonist used to control asthma, such as albuterol, terbutaline, formoterol, fanoterol or prenalin.
Ostatní látky požívané v kombinaci se sloučeninami z tohoto vynálezu zahrnují anticholinergika, jako je ipratropium bromid, a protizánětlivé kortikosteroidy (adrenokortikální steroidy), jako je beclomethason, trimacinolon, flurisolid nebo dexamethason.Other agents used in combination with the compounds of this invention include anticholinergics such as ipratropium bromide and anti-inflammatory corticosteroids (adrenocortical steroids) such as beclomethasone, trimacinolone, flurisolide or dexamethasone.
Sloučeniny tohoto vynálezu mohou být použity při léčení zánětlivých stavů kůže, způsobených imunitou, jako je urticarie a cévní edém, ekzematická dermatitida a hyperproliferativní onemocnění kůže, např. psoriáza, u savců. Jako důsledek povrchové aplikace sloučeniny obecného vzorce I se očekává remise symptomů. Při její působení na zánětlivé stavy kůže způsobené imunitou lze očekávat zmenšení šupinatosti, erytému, rozsahu ložisek, svědění a ostatních symptomů, spojených se stavy kůže. Dávkování léčiva a délka léčby potřebná pro úspěšné léčení může být u každého pacienta různá, ale osoba kvalifikovaná v této problematice bude schopna určit tyto variace a stanovit podle toho průběh léčby.The compounds of the invention can be used in the treatment of immune-mediated inflammatory conditions of the skin, such as urticaria and vascular edema, eczematic dermatitis, and hyperproliferative skin diseases, e.g., psoriasis, in mammals. As a consequence of topical application of the compound of formula I, symptom remission is expected. Its effects on immune-mediated inflammatory skin conditions can be expected to reduce scaling, erythema, focal extent, pruritus and other symptoms associated with skin conditions. The dosage and duration of treatment required for successful treatment may vary from patient to patient, but a person skilled in the art will be able to determine these variations and determine the course of treatment accordingly.
Vynález také zahrnuje prostředky pro povrchovou aplikaci na kůži, obsahující sloučeninu obecného vzorce I, obvykle v koncentracích v rozsahu od 0,001 % do 10 %, spolu s netoxickým farmaceuticky přijatelným povrchovým nosičem. Tyto povrchové prostředky se připravují kombinací aktivní složky podle tohoto vynálezu s konvenčními farmaceutickými rozpouštědly a nosiči, obvykle povrchově používané ve formě suché, tekuté, ve formě krému a aerosolu. Masti a krémy mají vodný nebo olejový základ s přídavkem vhodného zahušťovadla a/nebo gelovací látky. Jako základ mohou obsahovat vodu a/nebo tekutý parafín nebo rostlinný olej jako je olej z podzemnice olejné nebo ricinový olej. Zahušťovací látky, které jsou použity podle povahy základu, zahrnují tuhý parafín, stearát hlinitý, ketostearylalkohol, propylenglykol, polyethylenglykoly, lanolin, hydrogenovaný lanolin, včelí vosk a další.The invention also encompasses compositions for topical application to the skin comprising a compound of Formula I, usually in concentrations ranging from 0.001% to 10%, together with a non-toxic pharmaceutically acceptable surface carrier. These topical compositions are prepared by combining the active ingredient of the present invention with conventional pharmaceutical solvents and carriers, usually surface-applied in dry, liquid, cream and aerosol form. Ointments and creams have an aqueous or oily base with the addition of a suitable thickener and / or gelling agent. They may contain as a base water and / or liquid paraffin or a vegetable oil such as peanut oil or castor oil. Thickening agents that are used according to the nature of the base include solid paraffin, aluminum stearate, ketostearyl alcohol, propylene glycol, polyethylene glycols, lanolin, hydrogenated lanolin, beeswax and others.
Pleťové vody mohou být složeny z vodného nebo olejového základu a obecně také obsahují jednu nebo více následujících složek: stabilizační činidla, emulgátory, disperzní činidla, suspendační činidla, zahušťovadla, barvicí činidla, parfémy a další.Lotions may be composed of an aqueous or oily base and generally also contain one or more of the following components: stabilizing agents, emulsifiers, dispersing agents, suspending agents, thickeners, coloring agents, perfumes, and others.
Prášky mohou být složeny z jakéhokoliv vhodného práškového základu, například talku, laktózy, škrobu a podobně. Kapky jsou složeny z vodného nebo nevodného základu a dále mohou obsahovat jednu nebo více disperzních činidel, suspendačních činidel, rozpouštěcích činidel a dalších.The powders may be composed of any suitable powder base, for example talc, lactose, starch and the like. The drops are comprised of an aqueous or non-aqueous base and may further comprise one or more dispersing agents, suspending agents, solubilizing agents, and others.
Povrchové farmaceutické prostředky podle tohoto vynálezu mohou zahrnovat jeden nebo více konzervačních nebo bakteriostatických činidel, např. methylhydroxybenzoát, propylhydroxybenzoát, propylhydroxybenzoát, chlorokresol, benzalkonium chlorid a další. Povrchové farmaceutické prostředky také nepovinně obsahují další aktivní složky jako antimikrobiální činidla, zejména antibiotika, anestetika, analgetika a činidla proti svědění.The topical pharmaceutical compositions of the invention may include one or more preservative or bacteriostatic agents, e.g., methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, chlorocresol, benzalkonium chloride, and others. The topical pharmaceutical compositions also optionally contain other active ingredients such as antimicrobial agents, in particular antibiotics, anesthetics, analgesics and anti-itching agents.
-16CZ 289930 B6-16GB 289930 B6
Sloučeniny podle tohoto vynálezu jsou také použitelné při léčení vředů trávicího ústrojí. Konkrétněji vykazují chemoterapeutickou aktivitu, která umožňuje odstranění symptomů vředů trávicího ústrojí a podporují léčení žaludečních a/nebo dvanáctníkových vředů. Sloučeniny mohou být použity ve spojení s ostatními terapeutickými činidly, jako jsou protizánětlivá činidla a/nebo analgetika, jako je aspirin, indomethacin, fenylbutazon, ibuprofen, naproxen, tolemtim a další.The compounds of this invention are also useful in the treatment of gastrointestinal ulcers. More specifically, they exhibit chemotherapeutic activity that allows the relief of symptoms of gastrointestinal ulcers and promotes the treatment of gastric and / or duodenal ulcers. The compounds may be used in conjunction with other therapeutic agents such as anti-inflammatory agents and / or analgesics such as aspirin, indomethacin, phenylbutazone, ibuprofen, naproxen, tolemtim and others.
Farmaceutické prostředky mohou být podávány parenterálně nebo orálně při léčení preventivním a/nebo terapeutickém. Farmaceutické prostředky mohou být podávány v různých dávkových jednotkách v závislosti na způsobu podávání. Například formy dávkovačích jednotek vhodné pro orální podávání zahrnují prášky, tablety, kapsle a dražé.The pharmaceutical compositions may be administered parenterally or orally in preventative and / or therapeutic treatments. The pharmaceutical compositions may be administered in different dosage units depending on the mode of administration. For example, dosage unit forms suitable for oral administration include powders, tablets, capsules, and dragees.
Farmaceutické prostředky mohou být podávány intravenózně. Tento vynález popisuje prostředky pro intravenózní podávání, které obsahují roztok sloučeniny rozpuštěný nebo suspendovaný v přijatelném nosiči, nejvýhodněji ve vodném nosiči. Mohou být použity různé nosiče, například voda, pufrovaná voda, 0,4% fyziologický roztok a další. Tyto prostředky jsou nepovinně sterilizovány běžnými, dobře známými sterilizačními technikami, nebo mohou být sterilizovány filtrací. Výsledné vodné roztoky mohou být baleny pro přímé užití nebo lyofilizovány, lyofilizovaný preparát je před podáváním kombinován se sterilním vodným roztokem. Prostředky mohou obsahovat farmaceuticky přijatelné pomocné složky k dosažení fyziologických podmínek, jako je úprava pH a pufrační činidla, činidla pro úpravu tonicity, zvlhčovadla a další, např. octan sodný, laktát sodný, chlorid sodný, chlorid draselný, chlorid vápenatý, monolaurát sorbitanu, oleát triethanolaminu a další.The pharmaceutical compositions may be administered intravenously. The present invention provides compositions for intravenous administration comprising a solution of the compound dissolved or suspended in an acceptable carrier, most preferably an aqueous carrier. Various carriers can be used, for example, water, buffered water, 0.4% saline, and others. These compositions are optionally sterilized by conventional, well known sterilization techniques, or may be sterilized by filtration. The resulting aqueous solutions may be packaged for immediate use or lyophilized, the lyophilized preparation being combined with a sterile aqueous solution prior to administration. The compositions may contain pharmaceutically acceptable excipients to achieve physiological conditions such as pH adjustment and buffering agents, tonicity adjusting agents, humectants and others, e.g., sodium acetate, sodium lactate, sodium chloride, potassium chloride, calcium chloride, sorbitan monolaurate, oleate triethanolamine and others.
Pro pevné směsi jsou použity pevné nosiče, například farmaceuticky čistý mannitol, laktóza, škrob, stearát hořečnatý, sacharin sodný, talek, celulóza, glukóza, sacharóza, uhličitan sodný a další. Pro orální podávání je farmaceuticky přijatelný netoxický prostředek tvořen smísením jakéhokoliv běžně používané složky, jako jsou například výše uvedené nosiče, a 0,1 až 95 % aktivní složky, nejvýhodněji 20 %.For solid compositions, solid carriers are used, for example, pharmaceutically pure mannitol, lactose, starch, magnesium stearate, sodium saccharin, talc, cellulose, glucose, sucrose, sodium carbonate and others. For oral administration, a pharmaceutically acceptable non-toxic composition is comprised of admixing any commonly used ingredient, such as the aforementioned carriers, and 0.1 to 95% of the active ingredient, most preferably 20%.
Proto aby zde popsaný vynález byl plně pochopen, slouží následující příklady. Je zřejmé, že tyto příklady slouží pouze pro ilustraci, a nemohou být v žádném směru považovány za omezení vynálezu.Therefore, for the invention described herein to be fully understood, the following examples serve. It is understood that these examples are for illustrative purposes only and should not be construed as limiting the invention in any way.
I. Obecné metodyI. General methods
Výchozí materiály, které zde nejsou popsány, jsou komerčně dostupné, jsou známé nebo mohou být připraveny metodami, které jsou v dané problematice dobře známy. Sloučeninu obecného vzorce I lze připravit technikami známými v dané problematice s použitím systetických technik pevné nebo kapalné fáze. Výchozí materiály pro přípravu sloučenin obecného vzorce I jsou v dané problematice známé nebo je lze připravit metodami, které jsou dobře známy všem, kdo jsou vdané problematice zběhlí. Například techniky syntézy pevné fáze polypeptidů jsou popsány například v Solid Phase Peptide Synthesis: A Practical Approach, (editoři E. Atherton a R. C. Sheppard) IRL Press at Oxford University Press (1989) and in Merrifield, J. Amer. Chem. Soc, 85:2149-2156 (1963). Chemie peptidových vazeb je také popsána v The Peptides, Vol. 1, (editoři Gross, E. and J. Meienhofer), Academie Press, Orlando (1979). Další techniky včetně těchto Geysen a kol., J. Imm. Meth., (1987) 102: 259-274; Houghten a kol., Nátuře (1991) 154:84-86.Starting materials not described herein are commercially available, are known or can be prepared by methods well known in the art. The compound of formula (I) may be prepared by techniques known in the art using solid or liquid phase systetic techniques. The starting materials for preparing the compounds of formula I are known in the art or can be prepared by methods well known to those skilled in the art. For example, solid phase polypeptide synthesis techniques are described, for example, in Solid Phase Peptide Synthesis: A Practical Approach, (eds. E. Atherton and R. C. Sheppard), IRL Press at Oxford University Press (1989) and in Merrifield, J. Amer. Chem. Soc., 85: 2149-2156 (1963). The chemistry of peptide bonds is also described in The Peptides, Vol. 1, (edited by Gross, E. and J. Meienhofer), Academic Press, Orlando (1979). Other techniques including these Geysen et al., J. Imm. Meth., (1987) 102: 259-274; Houghten et al., Nature (1991) 154: 84-86.
Ve zde popsaném postupu pro přípravu sloučeniny tohoto vynálezu jsou požadavky na chránící skupiny obecně dobře známé všem, kteří jsou zběhlí v problematice organické chemie. Použití vhodné ochrany skupin je nezbytně zahrnuto ve zde uváděném postupu, ačkoliv zde není vysloveně popsáno.In the process described herein for preparing a compound of this invention, the requirements for protecting groups are well known to those skilled in the art of organic chemistry. The use of suitable protecting groups is necessarily included in the process herein, although not explicitly described herein.
-17CZ 289930 B6-17GB 289930 B6
Zde popsaná izolace a purifíkace sloučenin a meziproduktů může být provedena, pokud je to požadováno, vhodným separačním nebo purifikačním postupem jako je např. filtrace, extrakce, krystalizace, kolonová chromatografie, tenkovrstvá chromatografie nebo preparativní chromatografíe, vysokotlaká kapalinová chromatografie nebo kombinace těchto metod. Konkrétní příklady vhodných separačních a izolačních postupů lze získat z odkazů na níže uvedené příklady. Ovšem lze samozřejmě použít další ekvivalentní separační nebo izolační metody.The isolation and purification of the compounds and intermediates described herein may be performed, if desired, by a suitable separation or purification process such as filtration, extraction, crystallization, column chromatography, thin layer chromatography or preparative chromatography, high pressure liquid chromatography, or a combination of these methods. Specific examples of suitable separation and isolation procedures can be obtained by reference to the examples below. However, other equivalent separation or isolation methods may of course be used.
Sakaguchiho test slouží pro detekci argininu a peptidů obsahujících arginin. Viz Stewart a Young „Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd Ed., Pierce Chemical Company, p. 114. Byl připraven roztokThe Sakaguchi test is for the detection of arginine and arginine-containing peptides. See Stewart and Young " Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd Ed., Pierce Chemical Company, p. 114. A solution was prepared.
I, obsahující 0,01 % α-naftolu a 5% močoviny v 95% ethanolu. Roztok II byl připraven rozpuštěním 2 gramů (g) bromu ve 100 mililitrech (ml) 8% roztoku hydroxidu sodného ve vodě. Do roztoku I bylo přidáno 5 peciček hydroxidu sodného. Analyzovaný vzorek byl bodově nanesen na destičku pro tenkovrstvou chromatografii (TLC). TLC destička byla poté osprejována roztokem I. TLC destička byla vysušena a poté osprejována roztokem II. Červené body indikovaly výskyt aminoiminomethanových skupin.I, containing 0.01% α-naphthol and 5% urea in 95% ethanol. Solution II was prepared by dissolving 2 grams (g) of bromine in 100 ml (ml) of an 8% solution of sodium hydroxide in water. To the solution I was added 5 pellets of sodium hydroxide. The sample to be analyzed was spot-loaded onto a thin-layer chromatography (TLC) plate. The TLC plate was then sprayed with solution I. The TLC plate was dried and then sprayed with solution II. Red dots indicated the occurrence of aminoiminomethane groups.
II. Syntéza sloučeniny obecného vzorce I v pevné fáziII. Solid phase synthesis of the compound of formula (I)
A. Příprava sloučeniny obecného vzorce 3 z tabulky I a IIA. Preparation of Compound of Formula 3 of Tables I and II
4-(2',4'-dimethoxyfenyl-fluorenylmethyloxycarbonyl(Fmoc)-aminomethyl)-fenoxylová pryskyřice (Rink resin; Bachem, CA; 3,5 gramů (g) v navážce 0,289 miliekvivalent/gram (meq/g), 1,01 milimolů (mmol)) byla suspendována v 30 ml roztoku N,N-dimethylformamid (DMF): toluen (1:1 objemově) obsahujícího 30% objemových piperidinu. Reakční směs byla míchána 5 minut a pak zfíltrována. Byla přidána další dávka roztoku piperidinu (30 ml) a směs míchána dalších 5 minut. Po filtraci byly částice pryskyřice postupně promyty DMF (6*) a methylen chloridem (6X).4- (2 ', 4'-dimethoxyphenyl-fluorenylmethyloxycarbonyl (Fmoc) -aminomethyl) -phenoxy resin (Rink resin; Bachem, CA; 3.5 grams (g) in bulk 0.289 milliequivalents / gram (meq / g), 1, 01 millimoles (mmol) was suspended in 30 ml of a solution of N, N-dimethylformamide (DMF): toluene (1: 1 by volume) containing 30% by volume piperidine. The reaction mixture was stirred for 5 minutes and then filtered. Another portion of piperidine solution (30 mL) was added and the mixture stirred for an additional 5 minutes. After filtration, the resin particles were washed sequentially with DMF (6X) and methylene chloride ( 6X ).
Fmoc-L-prolin (Milligen; 6,06 mmol), benzotriazol-l-yl-oxy-tris(dimethylamino)-fosfonium nexafluorofosfát (BOP, Novabiochem; 6,06 mmol), 1-hydrodxybenzotriazol (HOBT; Aldrich; 0,06 mmol) byl rozpuštěn v 30 ml DMF. Výsledný čirý roztok byl přidán k pryskyřici Rink a výsledná kašovitá směs se 4 hodiny míchala (probubláváním dusíkem). Reakční směs byla zfíltrována a částice pryskyřice byly promyty, jak je popsáno výše. Skupina Fmoc byla odstraněna piperidinem, jak je popsáno výše.Fmoc-L-proline (Milligen; 6.06 mmol), benzotriazol-1-yl-oxy-tris (dimethylamino) -phosphonium nexafluorophosphate (BOP, Novabiochem; 6.06 mmol), 1-hydrodoxybenzotriazole (HOBT; Aldrich; 0, 06 mmol) was dissolved in 30 ml DMF. The resulting clear solution was added to the Rink resin and the resulting slurry was stirred for 4 hours (bubbling with nitrogen). The reaction mixture was filtered and the resin particles were washed as described above. The Fmoc group was removed with piperidine as described above.
Roztok Fmoc-L-argininu (PMC) (Milligen; 6,06 mmol), BOP (6,06 mmol), a HOBT (6,06 mmol) v DMF (30 ml) byly přidány k částicím pryskyřice a kašovitá směs byla míchána 4 hodiny a poté zfíltrována, promyta, opracována působením piperidinu a opět promyta, jak je popsáno výše.A solution of Fmoc-L-arginine (PMC) (Milligen; 6.06 mmol), BOP (6.06 mmol), and HOBT (6.06 mmol) in DMF (30 mL) was added to the resin particles and the slurry was stirred 4 hours and then filtered, washed, treated with piperidine and washed again as described above.
Roztok l-hydroxy-2-naftoové kyseliny (Aldrich; 1,14 mg, 6,06 mmol), 1,3-diisopropylkarbodiimid (DIPCDI; Aldrich; 0,949 ml, 6,06 mmol) a HOBT (0,819 g, 6,06 ml) v DMF (45 ml) byly přidány do reakční směsi a směs byla tepána na třepačce po dobu 7 hodin. Po filtraci, promytí a přidání piperidinu (jak je popsáno výše), byla pryskyřice promyta postupně DMF (6*), methylenchloridem (6*) a methanolem (6χ). Pryskyřice byla suspendována v methanolu a třepána na třepačce přes noc (15 hodin). Byla zfíltrována a dvakrát promyta methanolem.A solution of 1-hydroxy-2-naphthoic acid (Aldrich; 1.14 mg, 6.06 mmol), 1,3-diisopropylcarbodiimide (DIPCDI; Aldrich; 0.949 mL, 6.06 mmol) and HOBT (0.819 g, 6.06) ml) in DMF (45 ml) were added to the reaction mixture and the mixture was shaken for 7 hours. After filtration, washing and addition of piperidine (as described above), the resin was washed sequentially with DMF (6X), methylene chloride (6X) and methanol ( 6X ). The resin was suspended in methanol and shaken on a shaker overnight (15 hours). It was filtered and washed twice with methanol.
Bílá sypká hmota byla pak suspendována v roztoku obsahujícím trifluoroctovou kyselinu (TFA): anisol: vodu v poměru 90 : 5 : 5 (30 ml). Pryskyřice se okamžitě zbarvila růžově a pak ztmavla během jedné až dvou minut na sytě červenou barvu. Po 5 minutách byla reakční směs zfíltrována. Tento postup byl opakován ještě 2χ s čerstvým štěpným činidlem, s tím rozdílem, že doba kontaktu byla zvýšena o 10 minut v každém opakování.The white bulk was then suspended in a solution containing trifluoroacetic acid (TFA): anisole: water 90: 5: 5 (30 mL). The resin immediately turned pink and then darkened to a deep red color within one to two minutes. After 5 minutes, the reaction mixture was filtered. This procedure was repeated 2 χ with fresh cleavage reagent, except that contact time was increased to 10 minutes in each repetition.
Roztoky v TFA byly spojeny a vzniklý čirý oranžový roztok byl ponechán k sedimentaci při teplotě místnosti po dobu 3,5 hodiny. Zahuštění ve vakuu poskytlo světle žlutý olej, který bylThe TFA solutions were combined and the resulting clear orange solution was allowed to sediment at room temperature for 3.5 hours. Concentration in vacuo afforded a pale yellow oil which was
-18CZ 289930 B6 udržován ve vakuu (<1 torr) po dobu 3 hodiny. Olej byl rozpuštěn v 50% vodném roztoku acetonitrilu (100 ml) a lyofilizován, čímž vznikl surový produkt jako špinavě bílá pevná látka (471 mg).289930 B6 was maintained under vacuum (<1 torr) for 3 hours. The oil was dissolved in 50% aqueous acetonitrile (100 mL) and lyophilized to give the crude product as an off-white solid (471 mg).
Produkt byl analyzován HPLC (Polymer Labs 100A PLRP kolona, 1,0 x 150 milimetrů (mm), eluován lineárním gradientem 20 až 45% acetonitrilu po dobu 13 minut při průtoku 0,1 ml/min). Analýza prokázala, že surový produkt byl v podstatě jediná sloučenina (retenční čas 10,35 minut, >98% stanoveno UV absorbancí). Purifíkace byla provedena HPLC s použitím kolony naplněné Cis silikagelem (Vydac; 22 x 250 mm, 15-20 pm, 300 a, eluována lineárním gradientem 20 až 35% po dobu 30 minut při průtoku 10 ml/min). Bylo třeba opakovat nástřik v množství 3035 mg. Podobné frakce (retenční čas 44 až 48 minut) byly spojeny a lyofilizovány, čímž byla získána sypká bílá látka (351 mg), která byla tvořena jedinou sloučeninou (dle HPLC).The product was analyzed by HPLC (Polymer Labs 100A PLRP column, 1.0 x 150 mm (mm), eluting with a linear gradient of 20 to 45% acetonitrile over 13 minutes at a flow rate of 0.1 mL / min). Analysis showed that the crude product was essentially a single compound (retention time 10.35 minutes,> 98% determined by UV absorbance). Purification was performed by HPLC using a column packed with C 18 silica gel (Vydac; 22 x 250 mm, 15-20 µm, 300 a, eluting with a linear gradient of 20 to 35% over 30 minutes at a flow rate of 10 mL / min). It was necessary to repeat the injection at 3035 mg. Similar fractions (retention time 44-48 minutes) were combined and lyophilized to give a free-flowing white solid (351 mg), which was a single compound (by HPLC).
Hmotová „elektrospray“ spektrometrie (vypočítaná molekulová hmotnost 440,49, nalezeno M+1 = 441,1) a NMR spektroskopie (protonová a 13C) jsou konzistentní s očekávanou strukturou. ’H NMR (CD3OD) 8 7,89 (d, J=8Hz, 1 H), 7,78 (d, J=6Hz, 1 H), 7,76 (d, J=6Hz, 1 H), 7,57 (dt, J=8, 1Hz, 1 H), 7,48 (dt, J=8, 1Hz, 1 H), 7,29 (d, J=8Hz, 1 H), -4,95 (nezřetelný, 1 H), 4,49 (dd, J=8, 5Hz, 1H), 3,97 (dt, J=10, 7Hz, 1H), 3,73 (dt, J=10, 7Hz, 1H), 3,23 (t, J=7Hz, 2 H), 2,29 (m, 1 H), 1,7 až 2,2 (m, 8 H).Electrospray mass spectrometry (calculated molecular weight 440.49, found M +1 = 441.1) and NMR spectroscopy (proton and 13 C) are consistent with the expected structure. 1 H NMR (CD 3 OD) δ 7.89 (d, J = 8Hz, 1H), 7.78 (d, J = 6Hz, 1H), 7.76 (d, J = 6Hz, 1H) 7.57 (dt, J = 8.1Hz, 1H), 7.48 (dt, J = 8.1Hz, 1H), 7.29 (d, J = 8Hz, 1H), -4, 95 (unclear, 1H), 4.49 (dd, J = 8.5Hz, 1H), 3.97 (dt, J = 10.7Hz, 1H), 3.73 (dt, J = 10.7Hz, 1H), 3.23 (t, J = 7 Hz, 2H), 2.29 (m, 1H), 1.7-2.2 (m, 8H).
B. Postup pro další sloučeniny obecného vzorce IB. Procedure for Other Compounds of Formula I
Podle postupu části A uvedeném shora a s použitím následujících sloučenin místo l-hydroxy-2naftoové kyseliny:Following the procedure of Part A above and using the following compounds instead of 1-hydroxy-2-naphthoic acid:
2- hydroxy-4-methylbenzoová kyselina;2-hydroxy-4-methylbenzoic acid;
3- hydroxy-2-chinocalinkarboxylová kyselina;3-hydroxy-2-quinocalinecarboxylic acid;
3-hydroxy-2-naftoová kyselina;3-hydroxy-2-naphthoic acid;
2- hydroxy-l-naftoová kyselina;2-hydroxy-1-naphthoic acid;
3- hydroxy-2-pyridinkarboxylová kyselina;3-hydroxy-2-pyridinecarboxylic acid;
4- hydroxy-7-methyl-3-naftyridinkarboxylová kyselina;4-hydroxy-7-methyl-3-naphthyridine carboxylic acid;
2-hydroxy-3-pyridinkarboxylová kyselina;2-hydroxy-3-pyridinecarboxylic acid;
2-hydroxybenzoová kyselina;2-hydroxybenzoic acid;
2,5-dihydroxybenzoová kyselina; a2,5-dihydroxybenzoic acid; and
2-hydroxy-5-fenylbenzoová kyselina (viz E níže) byly připraveny následující sloučeniny:The following compounds were prepared from 2-hydroxy-5-phenylbenzoic acid (see E below):
sloučenina 2 z tabulky I a II; sloučenina 9 z tabulky I a II;Compound 2 of Tables I and II; Compound 9 of Tables I and II;
sloučenina 14 z tabulky I a II; sloučenina 15 z tabulky I a II; sloučenina 16 z tabulky I a II; sloučenina 17 z tabulky I a II; sloučenina 18 z tabulky I a II; sloučenina 19 z tabulky I a II;compound 14 of Tables I and II; compound 15 of Tables I and II; Compound 16 of Tables I and II; compound 17 of Tables I and II; compound 18 of Tables I and II; compound 19 of Tables I and II;
sloučenina 20 z tabulky I a II; a sloučenina 21 z tabulky I a II.compound 20 of Tables I and II; and compound 21 of Tables I and II.
C. Příprava ostatních sloučenin obecného vzorce IC. Preparation of Other Compounds of Formula I
Podle postupu v části A, uvedené výše, při použití Fmoc-D-prolinu místo Fmoc-L-prolinu, byla získána sloučenina 12 z tabulky III.Following the procedure in Part A above, using Fmoc-D-proline instead of Fmoc-L-proline, compound 12 of Table III was obtained.
-19CZ 289930 B6-19GB 289930 B6
D. Příprava dalších sloučenin obecného vzorce ID. Preparation of Other Compounds of Formula I
Sloučenina z tabulky I a II byla připravena tak, že Fmoc-L-fenylalanin byl navázán na pryskyřici postupem analogickým jako je postup pro navázání Fmoc-L-prolinu v části A, uvedené výše. Skupina Fmoc byla odstraněna a na Fmoc prolin byl navázán fenylalanin. Další postup syntézy sloučeniny 13 byl proveden s použitím technik popsaných v části A.The compound of Tables I and II was prepared by coupling the Fmoc-L-phenylalanine to the resin by a procedure analogous to the procedure for binding Fmoc-L-proline in Part A above. The Fmoc group was removed and phenylalanine was coupled to the Fmoc proline. Further synthesis of compound 13 was performed using the techniques described in Part A.
Podobně příprava sloučeniny 6 a 7 z tabulky I a II zahrnuje navázání Fmoc-piperidin-3karboxylové kyseliny nebo Fmoc-piperidin-4-karboxylové kyseliny na pryskyřici, odstranění Fmoc skupiny a pak navázání Fmoc-L-prolinu. Zbytek syntézy byl proveden stejně jako v části A, popsané výše.Similarly, the preparation of compounds 6 and 7 of Tables I and II involves coupling the Fmoc-piperidine-3-carboxylic acid or Fmoc-piperidine-4-carboxylic acid to the resin, removing the Fmoc group and then coupling the Fmoc-L-proline. The remainder of the synthesis was carried out as described in Part A above.
E. Příprava 2-hydroxy-5-fenylbenzoové kyselinyE. Preparation of 2-hydroxy-5-phenylbenzoic acid
2-hydroxy-5-fenylbenzoová kyselina byla syntetizována následovně. Roztok tetrahydropyranem THP-chráněného 4-fenylfenolu (474 mg, 2 mmol, připravený z 4-fenylfenolu standardními metodami popsanými v Green and Wuts na str. 31-34) v bezvodém THF (5 ml) byl ochlazen na -78 °C a bylo přidáno n-buthyllithium (2 ml 1,6 M v hexanu). Reakční směs byla míchána a ohřátá na teplotu okolí, během čehož vznikla světle hnědá suspenze. Po 2 hodinách byla reakční směs ochlazena na -78 °C a byl přidán přebytek bezvodého CO2, který působil na směs několik minut. Reakční směs byla míchána a ohřátá na teplotu okolí. Po 2 hodinách byla reakční směs roztřepána mezi ethyléter a vodný 1 N roztok NaOH. Vodná vrstva byla ledem ochlazena na 0 °C, okyselena na pH 2 vodným roztokem 1 N HC1. Vodný roztok byl vytřepán s methylenchloridem. Organická vrstva byla vysušena nad síranem hořečnatým. Zahuštění ve vakuu poskytlo surový produkt jako špinavě bílou pevnou látku (258 mg, 2-hydroxy-5-fenylbenzoová kyselina). NMR spektroskopie surového produktu byla konzistentní s předpokládanou strukturou. 1H NMR (DMSO-d6) δ 8,04 (d, >3Hz, 1H), 7,78 (dd, J=9, 3Hz, 1H), 7,62 (d, J=7Hz, 2H), 7,44 (t, J=7Hz, 2H), 7,32 (t, >7Hz, 1H), 7,00 (d, J=9Hz, 1H). Vypočítaná molekulová hmotnost: 466,5. Nalezená molekulová hmotnost 467,2. LC gradient 25 až 45% acetonitril po dobu 13 minut. LC retenční čas 3,5 minuty. Materiál byl použit bez další purifikace.2-Hydroxy-5-phenylbenzoic acid was synthesized as follows. A solution of tetrahydropyran THP-protected 4-phenylphenol (474 mg, 2 mmol, prepared from 4-phenylphenol by standard methods described in Green and Wuts on pages 31-34) in anhydrous THF (5 mL) was cooled to -78 ° C and was cooled to -78 ° C. n-Butyllithium (2 mL of 1.6 M in hexane) was added. The reaction mixture was stirred and warmed to ambient temperature to give a light brown suspension. After 2 hours, the reaction mixture was cooled to -78 ° C and an excess of anhydrous CO 2 was added to the mixture for several minutes. The reaction mixture was stirred and warmed to ambient temperature. After 2 hours, the reaction mixture was partitioned between ethyl ether and aqueous 1 N NaOH solution. The aqueous layer was ice-cooled to 0 ° C, acidified to pH 2 with aqueous 1 N HCl. The aqueous solution was shaken with methylene chloride. The organic layer was dried over magnesium sulfate. Concentration in vacuo gave the crude product as an off-white solid (258 mg, 2-hydroxy-5-phenylbenzoic acid). The NMR spectroscopy of the crude product was consistent with the proposed structure. 1 H NMR (DMSO-d 6) δ 8.04 (d,> 3Hz, 1H), 7.78 (dd, J = 9.3Hz, 1H), 7.62 (d, J = 7Hz, 2H), 7, 44 (t, J = 7 Hz, 2H), 7.32 (t,> 7 Hz, 1H), 7.00 (d, J = 9 Hz, 1H). Calculated molecular weight: 466.5. Found molecular weight 467.2. LC gradient 25 to 45% acetonitrile over 13 minutes. LC retention time 3.5 minutes. The material was used without further purification.
III. Syntéza sloučeniny obecného vzorce I v roztokuIII. Synthesis of a compound of formula I in solution
A. Příprava sloučeniny 10 z tabulky I a IIIA. Preparation of Compound 10 of Tables I and III
K 20 g (L)-fenylalaninu ochlazeného na -5 °C v lázni sůl/led bylo přidáno 74 ml koncentrované kyseliny sírové. Teplota reakční směsi byla ponechána, aby se ustálila a poté bylo přidáno 9,4 ml koncentrované kyseliny dusičné přikapáváním po dobu 5 minut. Reakční směs byla míchána 30 minut a poté přidána do 700 ml drceného ledu s vodou; pH bylo upraveno na 8-9 koncentrovaných hydroxidem amonným. Roztok byl ponechán krystalizovat při teplotě místnosti a poté přes noc chlazen na 4 °C. Světle žlutý krystalický produkt byl zfíltrován přes tuhý filtrační papír, promyt studenou vodou a usušen. Produkt byl rekrystalizován v horké vodě a filtrát byl odpařen a rekrystalizován (2x) s celkovým výtěžkem 55%. Teplota tání: 218-222 °C (surový produkt). TLC: Rf (F) 0,18. NMR: (D2O/NaOD), γ 2,99 (dd, >13,4, 7,2 Hz, 1 H), 3,10 (dd, >13,4, 6,0 Hz, 1 H), 3,57 (dd, >7,2, 6,0 Hz, 1 H), 7,48 (d, >8,6 Hz, 2 H), 8,21 (d, >8,7 Hz, 2H).To 20 g of (L) -phenylalanine cooled to -5 ° C in a salt / ice bath was added 74 ml of concentrated sulfuric acid. The reaction mixture was allowed to equilibrate and then 9.4 ml of concentrated nitric acid was added dropwise over 5 minutes. The reaction mixture was stirred for 30 minutes and then added to 700 ml of crushed ice with water; The pH was adjusted to 8-9 concentrated with ammonium hydroxide. The solution was allowed to crystallize at room temperature and then cooled to 4 ° C overnight. The light yellow crystalline product was filtered through a solid filter paper, washed with cold water and dried. The product was recrystallized in hot water and the filtrate was evaporated and recrystallized (2x) with a total yield of 55%. Melting point: 218-222 ° C (crude product). TLC: R f (F) 0.18. NMR: (D 2 O / NaOD), γ 2.99 (dd,> 13.4, 7.2 Hz, 1H), 3.10 (dd,> 13.4, 6.0 Hz, 1H) 3.57 (dd,> 7.2, 6.0 Hz, 1 H), 7.48 (d,> 8.6 Hz, 2 H), 8.21 (d,> 8.7 Hz, 2H ).
T-butyloxykarbonylem (BOC)-chráněné aminokyseliny je možné připravit standardními technikami. Viz např. Greene and Wuts Protective Groups in Organic Synthesis, 2nd Ed., John Willey & Sons, lne.: New York, str. 327-328 (1991).T-Butyloxycarbonyl (BOC) -protected amino acids can be prepared by standard techniques. See, e.g., Greene and Wuts Protective Groups in Organic Synthesis, 2nd Ed., John Willey & Sons, Inc .: New York, pp. 327-328 (1991).
K roztoku (o teplotě -20 °C) BOC-chráněného p-nitrofenylalaninu (3,00 g, 9,67 mmol) v bezvodém methylenchloridu (5 ml) byl přidán N-methylmorfolin (NMM, 1,07 ml, 9,67 mmol) a následně isobuthylchloroformát (1,26 ml, 9,67 mmol). Reakční směl byla 15 minut míchána při -20 °C. Do směsi byl přidán methyl-L-prolinhydrochlorid (L-Pro-OMe, 1,60 g, 9,67 mmol)To a solution (-20 ° C) of BOC-protected p-nitrophenylalanine (3.00 g, 9.67 mmol) in anhydrous methylene chloride (5 mL) was added N-methylmorpholine (NMM, 1.07 mL, 9.67). mmol) followed by isobutyl chloroformate (1.26 mL, 9.67 mmol). The reaction mixture was stirred at -20 ° C for 15 minutes. Methyl L-proline hydrochloride (L-Pro-OMe, 1.60 g, 9.67 mmol) was added to the mixture.
-20CZ 289930 B6 jako pevná látka a následně další NMM (1,07 ml, 9,67 mmol). Po jednohodinovém míchání při -20 °C a jednohodinovém míchání při teplotě místnosti byla reakční směs zahuštěna ve vakuu a poté zředěna ethylacetátem. Ethylacetátový roztok byl promyt 10% vodným roztokem kyseliny citrónové, vodou a solným roztokem, vysušen nad síranem hořečnatým a zahuštěn ve vakuu. Kolonovou chromatografií bylo získáno 2,4 g produktu (výtěžek >60 %).-20GB 289930 B6 as a solid followed by additional NMM (1.07 mL, 9.67 mmol). After stirring at -20 ° C for 1 hour and stirring at room temperature for 1 hour, the reaction mixture was concentrated in vacuo and then diluted with ethyl acetate. The ethyl acetate solution was washed with 10% aqueous citric acid solution, water and brine, dried over magnesium sulfate and concentrated in vacuo. Column chromatography gave 2.4 g of the product (yield> 60%).
BOC skupina byla odstraněna působením HC1 v dioxanu s použitím standardních podmínek. Viz např. Greene and Wuts, str. 328-329. K roztoku l-hydroxy-2-naftoové kyseliny (160 mg, 0,84 mmol) v methylenchloridu a N,N-dimethylformanidu (1:1, 3 ml) byl přidán 1-hydroxybenzotriazol (159 mg, 1,17 mmol). Roztok byl ochlazen na 0°C a byl přidán l-(3dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidhydrochlorid (EDCI, 161 mg, 0,84 mmol). Roztok byl míchán po dobu 45 minut při 0 °C a poté byl přidán roztok dipeptidu (300 mg, 0,84 mmol) připravený výše a následně NMM (93 μΐ, 0,84 mmol). Reakční směs byla míchána jednu hodinu při 0 °C a 45 minut při teplotě místnosti. Reakční směs byla zahuštěna ve vakuu a zředěna ethylacetátem a vodou. Organická vrstva byla separována, promyta (4*) vodou a poté solným roztokem, vysušena a zahuštěna ve vakuu. Chromatografie poskytla kondenzovaný produkt (300 mg, 73%).The BOC group was removed by treatment with HCl in dioxane using standard conditions. See, eg, Greene and Wuts, pp. 328-329. To a solution of 1-hydroxy-2-naphthoic acid (160 mg, 0.84 mmol) in methylene chloride and N, N-dimethylformanide (1: 1, 3 mL) was added 1-hydroxybenzotriazole (159 mg, 1.17 mmol). The solution was cooled to 0 ° C and 1- (3-dimethylaminopropyl) -3-ethylcarbodiimide hydrochloride (EDCI, 161 mg, 0.84 mmol) was added. The solution was stirred for 45 minutes at 0 ° C and then the dipeptide solution (300 mg, 0.84 mmol) prepared above was added followed by NMM (93 µΐ, 0.84 mmol). The reaction mixture was stirred at 0 ° C for one hour and at room temperature for 45 minutes. The reaction mixture was concentrated in vacuo and diluted with ethyl acetate and water. The organic layer was separated, washed (4 *) with water and then brine, dried and concentrated in vacuo. Chromatography gave the condensed product (300 mg, 73%).
K roztoku kondenzovaného produktu (410 mg, 0,83 mmol) v ethylacetátu (20 ml) byla přidána ledová kyselina octová (10 kapek) a 10% palladium na aktivním uhlí (100 mg). Tento roztok byl hydrogenován 5 hodin. Reakční směs byla poté zfiltrována přes celit a roztok byl zahuštěn ve vakuu s výtěžkem 375 mg (98 %) produktu, který byl použit bez další purifíkace.To a solution of the condensed product (410 mg, 0.83 mmol) in ethyl acetate (20 mL) was added glacial acetic acid (10 drops) and 10% palladium on charcoal (100 mg). This solution was hydrogenated for 5 hours. The reaction mixture was then filtered through celite and the solution was concentrated in vacuo to yield 375 mg (98%) of the product which was used without further purification.
K roztoku produktu výše uvedené hydrogenační reakce (200 g, 0,45 mmol) v bezvodém methanolu (10 ml) byla přidána kyselina formamidinsulfonová (118 mg, 0,95 mmol, připravená oxidací komerčně dostupné formamidinsulfonové kyseliny podle postupu popsaného v Mryanoff a kol. (1986) J. Org. Chem. 1882). Reakční směs byla míchána tři dny. Reakční směs byla zahuštěna ve vakuu a produkt byl izolován chromatografií (eluován methanolem:methylenchloridem) s výtěžkem 17 mg požadovaného produktu, sloučeniny 10 z tabulky III.To a solution of the above hydrogenation reaction product (200 g, 0.45 mmol) in anhydrous methanol (10 mL) was added formamidine sulfonic acid (118 mg, 0.95 mmol) prepared by oxidation of commercially available formamidine sulfonic acid according to the procedure described by Mryanoff et al. (1986) J. Org. Chem. 1882). The reaction mixture was stirred for three days. The reaction mixture was concentrated in vacuo and the product was isolated by chromatography (eluting with methanol: methylene chloride) to yield 17 mg of the desired product, compound 10 of Table III.
IV. Alternativní syntéza sloučeniny obecného vzorce IIV. Alternative Synthesis of Compound of Formula I
A. Příprava sloučeniny 3 z tabulky I a IIA. Preparation of Compound 3 of Tables I and II
Roztok l-benzyloxy-2-naftoové kyseliny (2,247 g) vthionyl chloridu (15 ml) byl refluxován 4 hodiny. Přebytečný reagent byl odpařen ve vakuu. Zbytek byl zředěn bezvodým DMF (9 ml) a zahuštěn na 2 ml. K tomuto roztoku byl přidán 4-dimethylaminopyridin (1,02 g). Směs byla míchána přes noc při teplotě okolí. Výsledný pyridinový komplex byl přidán do míchaného roztoku nitro-L-argininu (1,77 g), tetramethylguanidinu (1 ml) a lithiumchloridu (4,56 g) v DMF (60 ml). Směs byla míchána při teplotě okolí 48 hodin. Většina DMF byla odpařena ve vakuu a zbytek byl rozdělen mezi 1,5 normální (N) vodný roztok HC1 a ethyl acetát. Spojené organické vrstvy byly promyty nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a vysušeny nad síranem hořečnatým. Zahuštění ve vakuu poskytlo surový produkt (3,5 g, l-benzyIoxy-2-naftoyl-Nnitro-L-argininová kyselina). TLC: Rf produktu je 0,22 (použití destičky silikagelu a eluce 10% methanol/kyselina octová v chloroformu). Tento materiál byl použit bez další purifíkace.A solution of 1-benzyloxy-2-naphthoic acid (2.247 g) in thionyl chloride (15 mL) was refluxed for 4 hours. Excess reagent was evaporated in vacuo. The residue was diluted with anhydrous DMF (9 mL) and concentrated to 2 mL. To this solution was added 4-dimethylaminopyridine (1.02 g). The mixture was stirred overnight at ambient temperature. The resulting pyridine complex was added to a stirred solution of nitro-L-arginine (1.77 g), tetramethylguanidine (1 mL) and lithium chloride (4.56 g) in DMF (60 mL). The mixture was stirred at ambient temperature for 48 hours. Most of the DMF was evaporated in vacuo and the residue was partitioned between 1.5 N (aq) aqueous HCl and ethyl acetate. The combined organic layers were washed with a saturated aqueous sodium chloride solution and dried over magnesium sulfate. Concentration in vacuo gave the crude product (3.5 g, 1-benzyloxy-2-naphthoyl-N-nitro-L-arginic acid). TLC: Rf of the product is 0.22 (using a silica gel plate and eluting with 10% methanol / acetic acid in chloroform). This material was used without further purification.
Roztok l-benzyloxy-2-naftoyl-N-nitro-L-argininové kyseliny (150 mg) v bezvodém DMF (5 ml) byl ochlazen na -25 °C a opracován působením isobutylchloroformátu (0,053 ml). Reakční směs byla míchána a ohřátá na teplotu místnosti. Po 20 minutách byl přidán pevný Lprolinamid (jako jeho sůl kyseliny chlorovodíkové, 65,9 mg). Směs je míchána 16 hodin a poté zředěna ethylacetátem. Ethylacetátový roztok byl promyt 5% vodným roztokem kyseliny citrónové, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a vysušen nad síranem hořečnatým. Roztok byl zahuštěn ve vakuu a zbytek byl rozpuštěn v ethanolu (40 ml, obsahujícím 10 % methanolu a 10 % kyseliny octové) a hydrogenován při 52 librách na čtvereční stopu (psi) s 10% palladiem na uhlí (10 mg) do skončení reakceA solution of 1-benzyloxy-2-naphthoyl-N-nitro-L-arginic acid (150 mg) in anhydrous DMF (5 mL) was cooled to -25 ° C and treated with isobutyl chloroformate (0.053 mL). The reaction mixture was stirred and warmed to room temperature. After 20 minutes solid Lprolinamide (as its hydrochloric acid salt, 65.9 mg) was added. The mixture is stirred for 16 hours and then diluted with ethyl acetate. The ethyl acetate solution was washed with 5% aqueous citric acid solution, saturated sodium bicarbonate solution and saturated aqueous sodium chloride solution and dried over magnesium sulfate. The solution was concentrated in vacuo and the residue was dissolved in ethanol (40 mL containing 10% methanol and 10% acetic acid) and hydrogenated at 52 pounds per square foot (psi) with 10% palladium on carbon (10 mg) until completion of the reaction.
-21 CZ 289930 B6 (TLC na silikagelu, eluce chloroformem:methanolem 9:1), které je indikováno zmizením rychleji se pohybujících skvrn. Reakční směs byla zfiltrována přes celit, promyta ethanolem a methanolem. Směs byla zahuštěna ve vakuu a purifikována vysokotlakou kapalinovou chlomatografií za získání l-hydroxy-2-naftoyl-L-arginyl-L-prolin amidu (41 mg, „elektrospray“ hmotové spektrum: M+l = 441), izolovaného jako jeho sůl kyseliny trifluoroctové.(TLC on silica gel, eluting with chloroform: methanol 9: 1), indicated by the disappearance of the faster moving spots. The reaction mixture was filtered through celite, washed with ethanol and methanol. The mixture was concentrated in vacuo and purified by high pressure liquid chromatography to give 1-hydroxy-2-naphthoyl-L-arginyl-L-proline amide (41 mg, electrospray mass spectrum: M + 1 = 441) isolated as its acid salt. trifluoroacetic.
C. Příprava sloučeniny 1 z tabulky IIIC. Preparation of Compound 1 of Table III
Podle postupu v části A, uvedené výše a při použití 2-benzyloxy-l-naftoové kyseliny místo 1benzyloxy-2-naftoové kyseliny a sarkosinamidu místo L-prolin amidu, byla získána sloučenina 1 z tabulky III.Following the procedure in Part A above, using 2-benzyloxy-1-naphthoic acid instead of 1-benzyloxy-2-naphthoic acid and sarcosinamide instead of L-proline amide, compound 1 of Table III was obtained.
D. Příprava dalších sloučenin obecného vzorce ID. Preparation of Other Compounds of Formula I
Podle postupu části B uvedeném shora a s použitím následujících sloučenin místo sarkosinu:Following the procedure of Part B above and using the following compounds instead of sarcosine:
L-prolin-N,N-dimethylamid;L-proline-N, N-dimethylamide;
L-prolinmethylester; a trans-4-hydroxy-L-prolinmethylester;L-proline methyl ester; and trans -4-hydroxy-L-proline methyl ester;
byly získány následující sloučeniny:the following compounds were obtained:
sloučenina 5 z tabulky I a II;compound 5 of Tables I and II;
sloučenina 8 z tabulky I a II; a sloučenina 4 z tabulky III.Compound 8 of Tables I and II; and compound 4 of Table III.
V. Fyzikální údajeV. Physical data
Tabulka ITable I
-22CZ 289930 B6-22EN 289930 B6
1. Všechny molekulové hmotnosti byly stanoveny s použitím Finniganova „elektrospray“ hmotnostního spektrometru, pokud není uvedeno jinak.1. All molecular weights were determined using a Finnigan electrospray mass spectrometer unless otherwise indicated.
2. Ve všech případech byl použit binární gradientový systém obsahující acetonitril a vodu. Všechny eluenty obsahovaly 0,1 % trifluoroctové kyseliny. A: 20 až 45% acetonitril po dobu 13 minut. B: 10 až 35% acetonitril po dobu 13 minut. C: 5 až 95% acetonitril po dobu 45 minut. D: 2 až 95% acetonitril po dobu 10 minut. E: 25 až 45% acetonitril po dobu 13 minut.2. A binary gradient system containing acetonitrile and water was used in all cases. All eluents contained 0.1% trifluoroacetic acid. A: 20 to 45% acetonitrile for 13 minutes. B: 10 to 35% acetonitrile for 13 minutes. C: 5-95% acetonitrile over 45 minutes. D: 2 to 95% acetonitrile for 10 minutes. E: 25 to 45% acetonitrile for 13 minutes.
3. Testovaný materiál byl směsí diastereomerů.3. The test material was a mixture of diastereomers.
4. Molekulové hmotnosti byly stanoveny Biolonovou hmotnostní spektrometrií. Hodnoty představuje M+.4. Molecular weights were determined by Biolon Mass Spectrometry. Values are M + .
VI. Stanovení tryptázové inhibice in vitroVI. Determination of tryptase inhibition in vitro
Sloučeniny (přibližně 1 mg), které měly být stanoveny proti tryptáze byly rozředěny v dimethylsulfoxidu (DMSO) a naředěny 1:10 pufrem obsahujícím 50 milimolámí (mM) Tris-HCl při pH 8,2, a obsahující 10 mM NaCl, 0,05% Tween-20. Z původního ředění bylo připraveno 7 dalších 3násobných ředění ve stejném pufru s přídavkem 10% DMSO. Alikvotní podíly (50 μΐ) z každého ze série 8 ředění byly naneseny do jednotlivých jamek 96jamkové mikrotitrační destičky (dno jamek ve tvaru U). Tryptáza (25 μΐ; 0,5 mM výsledná koncentrace) byla přidána do každé jamky a vzorky byly promíchány a inkubovány jednu hodinu při teplotě místnosti buď při okolním osvětlení (tj. světlo, které je k dispozici v místnosti během experimentu), nebo za kontrolovaných podmínek „světla“ nebo „tmy“. „Světlo“ zde znamená světelnou intenzitu 400 až 450 stopových kandel z fluorescenční žárovky. „Tma“ zde znamená, že nádobky vzorku jsou zabaleny do hliníkové fólie. Enzymová reakce je pak iniciována přídavkem syntetického tripeptidového substrátu, tosyl-GlyProLys-p-nitroanilidu (25 μΐ; 0,5 mM výsledná koncentrace). Mikrotitrační destičky byly hned přeneseny do UV/MAX Kinetic Microplate Reader (Molecular Devices) a hydrolýza chromogenního substrátu byly sledována spektrofotometricky při 405 mM po dobu 5 minut. Enzymová stanovení poskytla obvyklé křivky lineárního vzestupu za těchto podmínek. Měření počáteční rychlosti vypočítané z křivek vzestupu pomocí kinetického analytického programu s názvem „BatchKi“ (komerčně dostupný z Biokin Ltd., Madison WI), program byl použit k určení zdánlivých inhibičních konstant pro každý inhibitor. Tento program je určen k zobrazení regresí a zobrazení křivky z nelineálních dat.Compounds (about 1 mg) to be determined against tryptase were diluted in dimethylsulfoxide (DMSO) and diluted 1:10 with a buffer containing 50 millimolar (mM) Tris-HCl at pH 8.2, and containing 10 mM NaCl, 0.05 % Tween-20. From the original dilution, 7 additional 3-fold dilutions were prepared in the same buffer with the addition of 10% DMSO. Aliquots (50 μΐ) from each of the 8 dilution series were plated into individual wells of a 96-well microtiter plate (U-bottom). Tryptase (25 μΐ; 0.5 mM final concentration) was added to each well and the samples were mixed and incubated for one hour at room temperature either under ambient light (ie light available in the room during the experiment) or under controlled conditions. conditions of "light" or "dark". "Light" here means the light intensity of 400 to 450 foot candels from a fluorescent lamp. "Darkness" here means that the sample containers are wrapped in aluminum foil. The enzyme reaction is then initiated by the addition of a synthetic tripeptide substrate, tosyl-GlyProLys-p-nitroanilide (25 μΐ; 0.5 mM final concentration). The microtiter plates were immediately transferred to a UV / MAX Kinetic Microplate Reader (Molecular Devices) and the hydrolysis of the chromogenic substrate was monitored spectrophotometrically at 405 mM for 5 minutes. Enzyme assays provided the usual linear rise curves under these conditions. Measurement of the initial velocity calculated from the ascension curves using a kinetic analysis program called "BatchKi" (commercially available from Biokin Ltd., Madison WI), the program was used to determine the apparent inhibition constants for each inhibitor. This program is designed to display regression and display curve from nonlinear data.
Tabulka II uvádí inhibiční konstanty (Κ/, mikromolámí (pm)), které byly stanoveny pro několik sloučenin z tohoto vynálezu, kde R1 je vodík; R2 je vodík; R3 je -(CH2)3-NH-(C=NH)-NH2; R4 a R5, spolu s dusíkem a uhlíkem na které jsou navázány tvoří pětičlenný heterocyklus; a R6 je vodík. Podle předkládaného vynálezu, sloučenina je označena jako „aktivní“ nebo efektivní jako tryptázový inhibitor pokud její K/ je menší než 1000 μΜ. Na rozdíl od Kj, K/ nemůže být skutečná distociační konstanta komplexu enzyminhibitor; Kj' odpovídá Kj pro nekompetitivní inhibitor a přímo odpovídá Kj pro kompetitivní a akompetitivní inhibitory.Table II lists the inhibition constants (Κ /, micromolar (pm)) that were determined for several compounds of the invention wherein R 1 is hydrogen; R 2 is hydrogen; R 3 is - (CH 2 ) 3 -NH- (C = NH) -NH 2 ; R 4 and R 5 , together with the nitrogen and carbon to which they are attached, form a five membered heterocycle; and R 6 is hydrogen. According to the present invention, a compound is designated as "active" or effective as a tryptase inhibitor when its K / is less than 1000 μΜ. Unlike K i, K i cannot be the actual distociation constant of the enzyme inhibitor complex; K i 'corresponds to K i for a non-competitive inhibitor and directly corresponds to K i for competitive and acompetitive inhibitors.
Vystavení roztoků testovaných sloučenin v testovacím médiu světlu může snižovat Kj'. Obecně jsou podmínky stanovení citlivé na světlo a změny intenzity okolního osvětlení mohou ovlivnit reprodukovatelnost stanovení. Pro odstranění tohoto potencionálního zdroje chyb byly některé analýzy provedeny ve tmě. K,' uvedené v tabulce II a III bez závorek byly stanoveny za podmínek okolního osvětlení. Kj' uvedené se závorkami byly stanoveny za podmínek „tmy“, jak jsou definovány výše. Kj' uvedené s hvězdičkou (*) byly měřeny za podmínek „světla“ jak jsou definovány výše (tj. světelná intenzita 400 až 450 stopových kandel).Exposure to light of test compound solutions in test media may reduce K i '. In general, the assay conditions are light sensitive and variations in ambient light intensity may affect the reproducibility of the assay. In order to eliminate this potential source of error, some analyzes were performed in the dark. K 1 ', shown in Tables II and III without parentheses, were determined under ambient lighting conditions. The k i 'indicated with parentheses were determined under "dark" conditions as defined above. The K i 'indicated with an asterisk (*) were measured under "light" conditions as defined above (ie a light intensity of 400 to 450 foot candelas).
Tabulka III uvádí inhibiční konstanty (Kj', mikromolámí (μΜ)), které byly stanoveny pro několik sloučenin z předkládaného vynálezu. Podle předkládaného vynálezu, sloučenina je označena jako „aktivní“ nebo efektivní jako tryptázový inhibitor pokud její K/ je menší než 1000 μΜ.Table III lists the inhibition constants (K i ', micromolar (µ m)) that were determined for several compounds of the present invention. According to the present invention, a compound is designated as "active" or effective as a tryptase inhibitor when its K / is less than 1000 μΜ.
-23CZ 289930 B6-23GB 289930 B6
Tabulka IITable II
-24CZ 289930 B6-24GB 289930 B6
Tabulka II - pokračováníTable II - continued
-25CZ 289930 B6-25GB 289930 B6
Tabulka II - pokračováníTable II - continued
-26CZ 289930 B6-26GB 289930 B6
Tabulka IIITable III
-27CZ 289930 B6-27GB 289930 B6
Tabulka III - pokračováníTable III - continued
-28CZ 289930 B6-28GB 289930 B6
Tabulka III - pokračováníTable III - continued
VII. Další charakteristika tryptázové inhibice sloučeninou 3 z tabulky I a IIVII. Another characteristic of tryptase inhibition by Compound 3 of Tables I and II
A. Závislost na pHA. Dependence on pH
Sloučenina 3 byla stanovena proti tryptáze při čtyřech různých hodnotách pH v následujícím pufračním systému: 120 mM NaCl, 2,7 mM KCs, 0,13 mM NaH2PO4, 0,896 mM Na2HPO4. Výsledný použitý pufrační systém zahrnuje 0,05% Tween-20. Tabulka IV ukazuje Kf (M) pro sloučeninu 3 při různých hodnotách pH.Compound 3 was determined against tryptase at four different pH values in the following buffer system: 120 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 0.13 mM NaH 2 PO 4, 0.896 mM Na 2 HPO 4. The resulting buffer system used comprises 0.05% Tween-20. Table IV shows Kf (M) for compound 3 at various pH values.
Tabulka IVTable IV
B. Optimalizované stanovení při pH 7,5B. Optimized assay at pH 7.5
Autoři vynálezu objevili, že sloučenina je méně citlivá na světlo v následujícím pufračním systému: 120 mM NaCl, 2,7 mM KC1, 0,13 mM NaH2PO4, 0,896 mM NaHPO4 a 0,05% Tween20 při pH 7,5. Stanovení bylo provedeno podle postupu uvedeného výše a ředění sloučeniny 3 a přidání tryptázy bylo provedeno při okolním osvětlení při teplotě místnosti (22 až 26 °C). Destička se vzorky byla zabalena do hliníkové fólie na 1 hodinovou inkubaci před přidáním substrátu, který byl také připraven při okolním osvětlení. Všechny kroky při ředění a přídavek tryptázy musely být provedeny během 5 minut. Kromě toho sloučenina 3 musí být ředěna DMSO.The inventors have discovered that the compound is less sensitive to light in the following buffer system: 120 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 0.13 mM NaH 2 PO 4 , 0.896 mM NaHPO 4, and 0.05% Tween20 at pH 7.5 . The assay was performed according to the procedure above and dilution of compound 3 and addition of tryptase was performed under ambient lighting at room temperature (22-26 ° C). The sample plate was wrapped in aluminum foil for 1 hour incubation before addition of the substrate, which was also prepared under ambient lighting. All dilution steps and addition of tryptase had to be performed within 5 minutes. In addition, compound 3 must be diluted with DMSO.
VIII. Testování in vivoVIII. In vivo testing
V těchto studiích bylo použito jako modelu astma u ovce. Tyto metody byly dříve publikovány (viz Abraham a kol. (1983) Am. Rev. Respir. Dis. 128: 839-844; Allegra a kol. (1983) J. Appl. Physiol. 55; 726-730; Russi a kol. (1985) J. Appl. Physiol. 59: 1416-1422; Soler a kol. (1989) J. Appl. Physiol. 67:406-413.In these studies, it was used as a model of asthma in sheep. These methods have been previously published (see Abraham et al. (1983) Am. Rev. Respir. Dis. 128: 839-844; Allegra et al. (1983) J. Appl. Physiol. 55; 726-730; Russi et al. (1985) J. Appl Physiol 59: 1416-1422, Soler et al (1989) J. Appl Physiol 67: 406-413.
-29CZ 289930 B6-29GB 289930 B6
Každá ovce sloužila jako svoje vlastní kontrola. Hmotnost těchto zvířat byla od 20 do 50 kg.Each sheep served as its own control. The weight of these animals was from 20 to 50 kg.
V těchto studiích bylo 9 mg sloučeniny 3 z tabulky I a II rozpuštěno v 3 ml pufrovaného fyziologického roztoku a výsledný roztok podán jako aerosol 0,5 hodiny před expozicí alergenem, 4 hodiny po expozici a 24 hodiny po expozic (celková dávka = 27; n = 6). Sloučenina 3 vykázala tendenci redukovat časnou odpověď a tlumila pozdní odpověď, jak je ukázáno na obr. 1. Při kontrolním stanovení (pouze nosič) expozice antigenem způsobila vzestup časné odpovědi nad základní linii specifické plicní rezistence (SRL) 374 ± 104% a 212 ± 21% (tzn. ± stand. chyba). Naproti tomu pokud je ovce léčena sloučeninou 3 z tabulky I a II, časný a pozdní vzestup SRL byl 280 ± 39% a 72 ± 9% (p<0,05 proti kontrole, Wicoxonův řadový test).In these studies, 9 mg of Compound 3 of Tables I and II was dissolved in 3 mL of buffered saline and the resulting solution was administered as an aerosol 0.5 hours before allergen challenge, 4 hours after challenge and 24 hours after challenge (total dose = 27; n = 6). Compound 3 showed a tendency to reduce early response and attenuate late response as shown in Figure 1. In a control (vehicle only) antigen challenge, the increase in early response above baseline specific pulmonary resistance (SRL) was 374 ± 104% and 212 ± 21, respectively. % (ie ± standard error). In contrast, when a sheep is treated with Compound 3 of Tables I and II, the early and late rise of SRL was 280 ± 39% and 72 ± 9% (p <0.05 vs control, Wicoxon rank test).
Vrchol časných odpovědí byl nalezen jako průměr maximálních hodnot, které se objevily ihned po expozici. Vrchol pozdních odpovědí byl vypočítán zprůměrováním maximálních hodnot odpovědi pro každé zvíře během časové periody mezi 6 a 8 hodinou. Tento postup je ustálený a eliminuje možnost snížení pozdní odpovědi jednoduchým průměrováním.The peak of early responses was found as the mean of maximum values that occurred immediately after exposure. The peak of late responses was calculated by averaging the maximum response values for each animal over a time period between 6 and 8 hours. This procedure is stable and eliminates the possibility of reducing the late response by simple averaging.
hodin po expozici antigenem se u kontrolního i léčeného vzorku rozvinula hypersenzitivita dýchacích cest. (Hypersenzitivita dýchacích cest je vyjádřena jako PC400, tj. koncentrace karbacholu, která způsobila 400% vzestup SRL. Tedy snížení v PC400 znamená, že se dýchací cesty staly přecitlivělé). Sloučenina 3 z tabulky I a II blokuje 24 hod. hypersenzitivitu, viz obr. 2. Základní linie PC400 byla 22,0 ± 3,7 dechových jednotek v kontrolním vzorku, pokles na 9,1 ± 1,3 dechových jednotek po expozici alergenem (p<0,05 proti základní linii). Naproti tomu u vzorku, kde byl podán lék, P400 bylo nezměněno oproti základní linii (16,0 ± 3,8 dechových jednotek proti 17,6 ± 3,5 dechovým jednotkám po expozici alergenem). Tedy léčení sloučeninou 3 z tabulky I a II tabulky vykazuje statisticky prokazatelné zlepšení funkce dýchacích cest u ovcí vystavených expozici alergenu.hours after antigen challenge, both control and treated samples developed airway hypersensitivity. (Airway hypersensitivity is expressed as PC400, ie the concentration of carbachol which caused a 400% increase in SRL. Thus, a decrease in PC400 means that the airways have become hypersensitive). Compound 3 of Tables I and II blocks 24 h hypersensitivity, see Fig. 2. The PC400 baseline was 22.0 ± 3.7 breath units in the control, dropping to 9.1 ± 1.3 breath units after allergen exposure ( p <0.05 vs baseline). In contrast, in the drug treated sample, P400 was unchanged from baseline (16.0 ± 3.8 breath units versus 17.6 ± 3.5 breath units after allergen exposure). Thus, treatment with Compound 3 of Tables I and II of the table shows a statistically demonstrable improvement in airway function in sheep exposed to allergen exposure.
Objevy tohoto použití ve všech článcích a referencích, včetně patentů, jsou zde uvedeny jako reference.Discoveries of this use in all articles and references, including patents, are incorporated herein by reference.
Je zřejmé, že výše uvedený popis je ilustrativní a ne restriktivní. Mnohé způsoby použití budou zřejmé všem, kdo jsou zběhlí v dané problematice, při souhrnu výše uvedeného popisu. Rámec vynálezu by neměl být ovšem určen odkazem na výše uvedený popis, měl by být určen odkazem na připojené patentové nároky, spolu s kompletním rámcem ekvivalentů, které mají oprávnění jako patentové nároky.It is understood that the above description is illustrative and not restrictive. Numerous uses will be apparent to those skilled in the art in summary of the above description. However, the scope of the invention should not be determined by reference to the above description, but should be determined by reference to the appended claims, together with a complete framework of equivalents that are entitled as claims.
PATENTOVÉ NÁROKYPATENT CLAIMS
Claims (19)
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US3077093A | 1993-03-12 | 1993-03-12 | |
US3118793A | 1993-03-12 | 1993-03-12 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CZ232195A3 CZ232195A3 (en) | 1996-07-17 |
CZ289930B6 true CZ289930B6 (en) | 2002-04-17 |
Family
ID=26706445
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CZ19952321A CZ289930B6 (en) | 1993-03-12 | 1994-03-11 | Aryl and heteroaryl peptide derivatives and pharmaceutical preparations in which they are comprised |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0688337A1 (en) |
JP (1) | JPH08507768A (en) |
KR (1) | KR100309616B1 (en) |
CN (2) | CN1057772C (en) |
AU (1) | AU683459B2 (en) |
CZ (1) | CZ289930B6 (en) |
FI (1) | FI954245A (en) |
PL (1) | PL176941B1 (en) |
SK (1) | SK282537B6 (en) |
UA (1) | UA42719C2 (en) |
WO (1) | WO1994020527A1 (en) |
Families Citing this family (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0763016B1 (en) * | 1994-06-01 | 2000-01-26 | Axys Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for treating mast-cell mediated conditions |
EE03525B1 (en) * | 1994-09-23 | 2001-10-15 | Arris Pharmaceutical Corporation | Compositions for the treatment of mast cell-mediated inflammatory conditions |
US6388122B1 (en) | 1996-04-10 | 2002-05-14 | Ono Pharmaceutical Co., Ltd. | Tryptase inhibitor and novel guanidino derivatives |
CA2262542A1 (en) * | 1996-07-30 | 1998-02-05 | Vivian Rueywen Wang | Novel compounds and compositions for treating diseases associated with tryptase activity |
US5968782A (en) * | 1996-12-04 | 1999-10-19 | Brigham And Womens's Hospital, Inc. | Mast cell protease that cleaves fibrinogen |
US5955431A (en) * | 1997-02-05 | 1999-09-21 | Brigham And Women's Hospital, Inc. | Mast cell protease peptide inhibitors |
US6221914B1 (en) * | 1997-11-10 | 2001-04-24 | Array Biopharma Inc. | Sulfonamide bridging compounds that inhibit tryptase activity |
WO1999024407A1 (en) * | 1997-11-10 | 1999-05-20 | Array Biopharma, Inc. | Compounds which inhibit tryptase activity |
WO1999026925A1 (en) * | 1997-11-26 | 1999-06-03 | Yoshitomi Pharmaceutical Industries, Ltd. | Tryptase inhibitors comprising heterocyclic amide compounds |
SE515982C2 (en) * | 1998-03-06 | 2001-11-05 | Lipocore Holding Ab | Use of an oil-in-water emulsion as carrier for preparing a topical cream or lotion |
SE9800729L (en) * | 1998-03-06 | 1999-09-07 | Scotia Lipidteknik Ab | New topical formulation I |
DE19939910A1 (en) * | 1999-08-23 | 2001-03-01 | Morphochem Ag | New compounds that inhibit tryptase activity |
GB0507577D0 (en) | 2005-04-14 | 2005-05-18 | Novartis Ag | Organic compounds |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4201863A (en) * | 1974-11-08 | 1980-05-06 | Mitsubishi Chemical Industries, Limited | N2 -Arylsulfonyl-L-argininamides and the pharmaceutically acceptable salts thereof |
US4456595A (en) * | 1982-12-06 | 1984-06-26 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Carboxy and substituted carboxy aroly peptides |
-
1994
- 1994-03-11 AU AU63647/94A patent/AU683459B2/en not_active Ceased
- 1994-03-11 UA UA95104466A patent/UA42719C2/en unknown
- 1994-03-11 WO PCT/US1994/002706 patent/WO1994020527A1/en not_active Application Discontinuation
- 1994-03-11 PL PL94310559A patent/PL176941B1/en unknown
- 1994-03-11 CN CN94191441A patent/CN1057772C/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-03-11 JP JP6520352A patent/JPH08507768A/en not_active Ceased
- 1994-03-11 CZ CZ19952321A patent/CZ289930B6/en not_active IP Right Cessation
- 1994-03-11 EP EP94910926A patent/EP0688337A1/en not_active Ceased
- 1994-03-11 KR KR1019950703932A patent/KR100309616B1/en not_active IP Right Cessation
- 1994-03-11 SK SK1129-95A patent/SK282537B6/en unknown
-
1995
- 1995-09-11 FI FI954245A patent/FI954245A/en unknown
-
1998
- 1998-06-15 CN CN98102273A patent/CN1234229A/en active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
FI954245A0 (en) | 1995-09-11 |
JPH08507768A (en) | 1996-08-20 |
AU683459B2 (en) | 1997-11-13 |
PL310559A1 (en) | 1995-12-27 |
SK112995A3 (en) | 1996-10-02 |
PL176941B1 (en) | 1999-08-31 |
CZ232195A3 (en) | 1996-07-17 |
KR100309616B1 (en) | 2002-02-28 |
CN1234229A (en) | 1999-11-10 |
EP0688337A1 (en) | 1995-12-27 |
CN1119019A (en) | 1996-03-20 |
UA42719C2 (en) | 2001-11-15 |
AU6364794A (en) | 1994-09-26 |
SK282537B6 (en) | 2002-10-08 |
CN1057772C (en) | 2000-10-25 |
WO1994020527A1 (en) | 1994-09-15 |
FI954245A (en) | 1995-09-28 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US5525623A (en) | Compositions and methods for the treatment of immunomediated inflammatory disorders | |
RU2159229C2 (en) | Cycloalkylene or heterocycloalkylene derivatives, pharmaceutical composition, aerosol device, and medical treatment method | |
RU2301225C2 (en) | Kallikrein selective dipeptide inhibitors, pharmaceutical composition based on thereof, their using and method of treatment | |
CZ289930B6 (en) | Aryl and heteroaryl peptide derivatives and pharmaceutical preparations in which they are comprised | |
US5656660A (en) | Compositions and methods for treating mast-cell mediated conditions | |
SA94140584B1 (en) | Arylsulfone amido-hydroxamic substituted | |
HU226979B1 (en) | Bicyclic lactam inhibitor of interleukin-1-beta converting enzyme and pharmaceutical compositions containing them | |
WO1992016549A1 (en) | Parasubstituted phenylalanine derivates | |
JP2002516309A (en) | Novel VLA-4 inhibitor: oMePUPA-V | |
CN111807983B (en) | Cinnamic acid derivative and preparation method thereof | |
EP0922054B1 (en) | Anticoagulant peptidyl-arginine aldehyde derivatives | |
EP1224164B1 (en) | Hydroxamic acid derivative as inhibitor of the formation of soluble human cd23 | |
JPH0426631A (en) | Suppressing agent of vascularization | |
CN107652265A (en) | 1 (base of piperidines 4) 2 benzimidazole ketone compounds and its application | |
JP2000503313A (en) | Pharmaceutical use | |
EP1315804A2 (en) | Novel mmp-2 derivatives for use as inhibitors of integrin alpha vbeta 3 | |
JPH0441430A (en) | Endothelin converting enzyme inhibitor |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 19940311 |