CZ285834B6 - Peptide, encoded dna, expression vector, host cell, process for preparing the peptide, antibody, method of its detection and vaccine - Google Patents
Peptide, encoded dna, expression vector, host cell, process for preparing the peptide, antibody, method of its detection and vaccine Download PDFInfo
- Publication number
- CZ285834B6 CZ285834B6 CZ942068A CZ206894A CZ285834B6 CZ 285834 B6 CZ285834 B6 CZ 285834B6 CZ 942068 A CZ942068 A CZ 942068A CZ 206894 A CZ206894 A CZ 206894A CZ 285834 B6 CZ285834 B6 CZ 285834B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- peptide
- arg
- antibody
- seq
- sequence
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 158
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 19
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 22
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 title claims description 15
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 8
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title description 12
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 27
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 19
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 13
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 13
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 13
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 11
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 11
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 10
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 8
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims description 8
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 claims description 8
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims description 7
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 claims description 7
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 6
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 claims description 6
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims description 6
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229960002433 cysteine Drugs 0.000 claims description 6
- 235000005772 leucine Nutrition 0.000 claims description 6
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 5
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 claims description 5
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229960002429 proline Drugs 0.000 claims description 5
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 claims description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 claims description 4
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical group CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 4
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 235000014705 isoleucine Nutrition 0.000 claims description 4
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 claims description 4
- 229930182817 methionine Chemical group 0.000 claims description 4
- 235000006109 methionine Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000013930 proline Nutrition 0.000 claims description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 3
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 claims description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 claims description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 claims description 2
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 claims description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000008729 phenylalanine Nutrition 0.000 claims description 2
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 claims description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 claims description 2
- 235000004400 serine Nutrition 0.000 claims description 2
- 229960001153 serine Drugs 0.000 claims description 2
- 235000002374 tyrosine Nutrition 0.000 claims description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 claims description 2
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 claims 4
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 claims 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims 1
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 claims 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 40
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 abstract description 7
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 abstract description 7
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 abstract description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 58
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 56
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 56
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 26
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 21
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 21
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 18
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 18
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 15
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 14
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 12
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 12
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 12
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 11
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 11
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 11
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 9
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 9
- -1 nucleic acid hydrides Chemical class 0.000 description 8
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 8
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 8
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 7
- 229920001184 polypeptide Chemical group 0.000 description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- IASNWHAGGYTEKX-IUCAKERBSA-N Arg-Arg-Gly Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NCC(O)=O IASNWHAGGYTEKX-IUCAKERBSA-N 0.000 description 6
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 6
- 108010091092 arginyl-glycyl-proline Proteins 0.000 description 6
- 108010078326 glycyl-glycyl-valine Proteins 0.000 description 6
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 6
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 6
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 6
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 6
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 6
- 108700039791 Hepatitis C virus nucleocapsid Proteins 0.000 description 5
- SENJXOPIZNYLHU-UHFFFAOYSA-N L-leucyl-L-arginine Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCN=C(N)N SENJXOPIZNYLHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- KHCSOLAHNLOXJR-BZSNNMDCSA-N Tyr-Leu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KHCSOLAHNLOXJR-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 5
- JXWGBRRVTRAZQA-ULQDDVLXSA-N Val-Tyr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N JXWGBRRVTRAZQA-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 5
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 5
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 5
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 5
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 5
- 108010000761 leucylarginine Proteins 0.000 description 5
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 5
- YBZMTKUDWXZLIX-UWVGGRQHSA-N Arg-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O YBZMTKUDWXZLIX-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- PIFJAFRUVWZRKR-QMMMGPOBSA-N Val-Gly-Gly Chemical compound CC(C)[C@H]([NH3+])C(=O)NCC(=O)NCC([O-])=O PIFJAFRUVWZRKR-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- 108010043240 arginyl-leucyl-glycine Proteins 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N glycyl-glycyl-glycine Natural products NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000010710 hepatitis C virus infection Diseases 0.000 description 4
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OMLWNBVRVJYMBQ-YUMQZZPRSA-N Arg-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O OMLWNBVRVJYMBQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 3
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 3
- OLPPXYMMIARYAL-QMMMGPOBSA-N Gly-Gly-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CN OLPPXYMMIARYAL-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- IZVICCORZOSGPT-JSGCOSHPSA-N Gly-Val-Tyr Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O IZVICCORZOSGPT-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 3
- 125000002061 L-isoleucyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])[C@](C([H])([H])[H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 description 3
- NTRAGDHVSGKUSF-AVGNSLFASA-N Leu-Arg-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O NTRAGDHVSGKUSF-AVGNSLFASA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- AUEJLPRZGVVDNU-UHFFFAOYSA-N N-L-tyrosyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 AUEJLPRZGVVDNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 108010068380 arginylarginine Proteins 0.000 description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- JYPCXBJRLBHWME-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-prolyl-L-arginine Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(O)=O JYPCXBJRLBHWME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010067216 glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 3
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZATRYQNPUHGXCU-DTWKUNHWSA-N Arg-Gly-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)CNC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)C(=O)O ZATRYQNPUHGXCU-DTWKUNHWSA-N 0.000 description 2
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- 239000005635 Caprylic acid (CAS 124-07-2) Substances 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- 125000000174 L-prolyl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]1([H])C(*)=O 0.000 description 2
- DSFYPIUSAMSERP-IHRRRGAJSA-N Leu-Leu-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N DSFYPIUSAMSERP-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 2
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 229960002446 octanoic acid Drugs 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 108010078580 tyrosylleucine Proteins 0.000 description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XVZCXCTYGHPNEM-IHRRRGAJSA-N (2s)-1-[(2s)-2-[[(2s)-2-amino-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O XVZCXCTYGHPNEM-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 1,1-ethanedithiol Chemical compound CC(S)S DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NOGFHTGYPKWWRX-UHFFFAOYSA-N 2,2,6,6-tetramethyloxan-4-one Chemical compound CC1(C)CC(=O)CC(C)(C)O1 NOGFHTGYPKWWRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PCDWFBFHIIKIPM-UHFFFAOYSA-N 3-ethyl-2h-1,3-benzothiazole-2-sulfonic acid Chemical compound C1=CC=C2N(CC)C(S(O)(=O)=O)SC2=C1 PCDWFBFHIIKIPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UCIYCBSJBQGDGM-LPEHRKFASA-N Ala-Arg-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N UCIYCBSJBQGDGM-LPEHRKFASA-N 0.000 description 1
- SIGTYDNEPYEXGK-ZANVPECISA-N Ala-Gly-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)C)C(O)=O)=CNC2=C1 SIGTYDNEPYEXGK-ZANVPECISA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- XUUXCWCKKCZEAW-YFKPBYRVSA-N Arg-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N XUUXCWCKKCZEAW-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- RIQBRKVTFBWEDY-RHYQMDGZSA-N Arg-Lys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O RIQBRKVTFBWEDY-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- 240000003291 Armoracia rusticana Species 0.000 description 1
- 235000011330 Armoracia rusticana Nutrition 0.000 description 1
- GNKVBRYFXYWXAB-WDSKDSINSA-N Asn-Glu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O GNKVBRYFXYWXAB-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- GIQCDTKOIPUDSG-GARJFASQSA-N Asn-Lys-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)C(=O)O GIQCDTKOIPUDSG-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 1
- 101150013191 E gene Proteins 0.000 description 1
- PXXGVUVQWQGGIG-YUMQZZPRSA-N Glu-Gly-Arg Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N PXXGVUVQWQGGIG-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- HMHRTKOWRUPPNU-RCOVLWMOSA-N Gly-Ile-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(O)=O HMHRTKOWRUPPNU-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 1
- JYPCXBJRLBHWME-IUCAKERBSA-N Gly-Pro-Arg Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O JYPCXBJRLBHWME-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- CDGLBYSAZFIIJO-RCOVLWMOSA-N Ile-Gly-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@H]([NH3+])C(=O)NCC(=O)NCC([O-])=O CDGLBYSAZFIIJO-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 1
- NLZVTPYXYXMCIP-XUXIUFHCSA-N Ile-Pro-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O NLZVTPYXYXMCIP-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 description 1
- 125000000899 L-alpha-glutamyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C(O[H])=O 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 125000002059 L-arginyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])N([H])C(=N[H])N([H])[H] 0.000 description 1
- 125000000415 L-cysteinyl group Chemical group O=C([*])[C@@](N([H])[H])([H])C([H])([H])S[H] 0.000 description 1
- RNKSNIBMTUYWSH-YFKPBYRVSA-N L-prolylglycine Chemical compound [O-]C(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 RNKSNIBMTUYWSH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- HIZYETOZLYFUFF-BQBZGAKWSA-N Leu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O HIZYETOZLYFUFF-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- JRJLGNFWYFSJHB-HOCLYGCPSA-N Leu-Gly-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O JRJLGNFWYFSJHB-HOCLYGCPSA-N 0.000 description 1
- XVZCXCTYGHPNEM-UHFFFAOYSA-N Leu-Leu-Pro Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)N1CCCC1C(O)=O XVZCXCTYGHPNEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ALSRJRIWBNENFY-DCAQKATOSA-N Lys-Arg-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O ALSRJRIWBNENFY-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- DBMLDOWSVHMQQN-XGEHTFHBSA-N Met-Ser-Thr Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O DBMLDOWSVHMQQN-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- FXGIMYRVJJEIIM-UWVGGRQHSA-N Pro-Leu-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 FXGIMYRVJJEIIM-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000256248 Spodoptera Species 0.000 description 1
- UKBSDLHIKIXJKH-HJGDQZAQSA-N Thr-Arg-Glu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O UKBSDLHIKIXJKH-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- NAXBBCLCEOTAIG-RHYQMDGZSA-N Thr-Arg-Lys Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](N)[C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O NAXBBCLCEOTAIG-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- FBQHKSPOIAFUEI-OWLDWWDNSA-N Thr-Trp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O FBQHKSPOIAFUEI-OWLDWWDNSA-N 0.000 description 1
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 1
- FRMFMFNMGQGMNB-BVSLBCMMSA-N Tyr-Pro-Trp Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 FRMFMFNMGQGMNB-BVSLBCMMSA-N 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000008065 acid anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 108010001271 arginyl-glutamyl-arginine Proteins 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 1
- 230000003196 chaotropic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 1
- 230000009137 competitive binding Effects 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 125000000664 diazo group Chemical group [N-]=[N+]=[*] 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 229940096118 ella Drugs 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000005021 gait Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011491 glass wool Substances 0.000 description 1
- 108010025801 glycyl-prolyl-arginine Proteins 0.000 description 1
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 150000004678 hydrides Chemical class 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011147 inorganic material Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 108010057821 leucylproline Proteins 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000012317 liver biopsy Methods 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- JDSHMPZPIAZGSV-UHFFFAOYSA-N melamine Chemical group NC1=NC(N)=NC(N)=N1 JDSHMPZPIAZGSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 230000036963 noncompetitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000007826 nucleic acid assay Methods 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 description 1
- 239000011368 organic material Substances 0.000 description 1
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 1
- 239000000123 paper Substances 0.000 description 1
- 239000000863 peptide conjugate Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010029020 prolylglycine Proteins 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- DAJSVUQLFFJUSX-UHFFFAOYSA-M sodium;dodecane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCS([O-])(=O)=O DAJSVUQLFFJUSX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 239000013076 target substance Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N thioanisole Chemical compound CSC1=CC=CC=C1 HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004906 thiomersal Drugs 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 108010084932 tryptophyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- OOLLAFOLCSJHRE-ZHAKMVSLSA-N ulipristal acetate Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1[C@@H]1C2=C3CCC(=O)C=C3CC[C@H]2[C@H](CC[C@]2(OC(C)=O)C(C)=O)[C@]2(C)C1 OOLLAFOLCSJHRE-ZHAKMVSLSA-N 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 108010009962 valyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24211—Hepacivirus, e.g. hepatitis C virus, hepatitis G virus
- C12N2770/24222—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Peptidy se sekvencí Tyt-Leu-Leu-Pro-Arg-Arg a jejich analogy jsou schopny vázat protilátky specifické pro parenterálně přenášenou ne-A a ne-B hepatitidu (PT-NANBH), zvláště HCV, a použití takových peptidů při imunologickém testu pro stanovení HCV nebo vakcíny pro její prevenci. ŕTyt-Leu-Leu-Pro-Arg-Arg peptides and their analogs are able to bind antibodies specific for parenterally transmitted ne-A and ne-B hepatitis (PT-NANBH), particularly HCV, and the use of such peptides in the immunoassay for determination of HCV or vaccine for its prevention. ŕ
Description
Peptid, kódová DNA, vektor pro expresi, hostitelská buňka, způsob výroby peptidu, protilátka, způsob její detekce a vakcínaPeptide, coding DNA, expression vector, host cell, method of making a peptide, antibody, method of detecting it and vaccine
Oblast technikyTechnical field
Vynález se týká peptidu, schopného vázat specifické protilátky pro parenterálně přenášenou hepatitidu odlišnou od hepatitidy A nebo B, zvláště HCV, kódové sekvence DNA pro tento peptid, vektor pro expresi s obsahem DNA, transformovaných hostitelských buněk, způsobu výroby uvedeného peptidu, protilátky proti tomuto peptidu, způsobu její detekce a vakcíny.The invention relates to a peptide capable of binding specific antibodies for parenterally transmitted hepatitis different from hepatitis A or B, in particular HCV, the DNA coding sequence for the peptide, a vector expressing DNA, transformed host cells, a method for producing said peptide, an antibody against the peptide , a method for detecting it and a vaccine.
Dosavadní stav technikyBACKGROUND OF THE INVENTION
Hepatitida NANBH, odlišná od hepatitidy A nebo B se obvykle definuje pouze vylučovací diagnózou u lidí s hepatitidou, odlišnou od typu A nebo B. Virus této hepatitidy se také označuje jako virus hepatitidy C, HCV. Obvykle infekce není přímo identifikována, jak je uvedeno v souhrnné publikaci Shih a další, Prog. Liver Dis., 8, 433 až 452, 1986. V USA může mít až 10 % krevních transfuzí za následek uvedený typ hepatitidy, což vytváří významný problém.Hepatitis NANBH, different from hepatitis A or B, is usually defined only by the exclusion diagnosis in people with hepatitis different from type A or B. This hepatitis virus is also referred to as hepatitis C virus, HCV. Typically, the infection is not directly identified, as reported in Shih et al., Prog. Liver Dis., 8, 433-452 (1986). In the United States, up to 10% of blood transfusions can result in this type of hepatitis, creating a significant problem.
GB 2 239 245A popisuje nukleotidové a polypeptidové sekvence viru, vyvolávajícího posttransfuzní NANBH, oblast jádra tohoto viru je popsána nukieotidovými i peptidovými sekvencemi. Tato oblast není v uvedeném patentovém spisu přesně analyzována. Podstatné části oblasti jádra byly použity v rekombinantních polypeptidech, zejména vBHC-11, jak je ve zmíněném patentovém spisu rovněž uvedeno.GB 2,239,245A describes the nucleotide and polypeptide sequences of a virus inducing posttransfusion NANBH, the core region of this virus being described by both nucleotide and peptide sequences. This area is not accurately analyzed in said patent. Substantial portions of the core region have been used in recombinant polypeptides, particularly vBHC-11, as also mentioned in said patent.
Podstatné oblasti jádra viru, vyvolávajícího NANBH, tak jak byly popsány v GB 2 239 245A se k detekci infekce HCV užívají také podle mezinárodní patentové přihlášky č. WO 93/17110, která odpovídá britské patentové přihlášce č. 9 203 803.3.NANBH-inducing core core regions as described in GB 2,239,245A are also used to detect HCV infection according to International Patent Application No. WO 93/17110, which corresponds to British Patent Application No. 9,203,803.3.
EP-A 0445423 popisuje způsob detekce přítomnosti protilátky proti antigenu HCV, postup spočívá v tom, že se vzorek uvede do styku s polypeptidem, obsahujícím nejméně jeden epitop antigenu HCV. Užívají se polypeptidy z předpokládané oblasti jádra HCV. Specifické oblasti epitopů těchto polypeptidů nejsou identifikovány.EP-A 0445423 discloses a method for detecting the presence of an antibody against HCV antigen, the method comprising contacting a sample with a polypeptide comprising at least one epitope of the HCV antigen. Polypeptides from the putative region of the HCV core are used. Specific epitope regions of these polypeptides are not identified.
Nyní bylo neočekávaně zjištěno, že v N-terminální oblasti bílkoviny jádra HCV existuje několik epitopních domén. Bylo také neočekávaně zjištěno, že séra, reagující s N-terminální oblastí bílkoviny jádra reagují převážně výlučně s jedinou doménou nebo popřípadě s touto doménou v kombinaci s jakoukoliv jinou epitopní doménou. Tato jediná doména byla označena jako imunodominantní doména a příslušný epitop byl izolován. Epitop odpovídá peptidu viru HCV s následující sekvencí (sekvence č. 1 a 2)It has now been unexpectedly found that several epitope domains exist in the N-terminal region of the HCV core protein. It has also unexpectedly been found that sera reacting with the N-terminal region of the core protein react predominantly exclusively with a single domain or, optionally, this domain in combination with any other epitope domain. This single domain was designated as an immunodominant domain and the corresponding epitope was isolated. The epitope corresponds to the HCV peptide with the following sequence (SEQ ID NO: 1 and 2)
Tyr-Leu-Leu-Pro-Arg-Arg (YLLPRR).Tyr-Leu-Leu-Arg-Arg (YLLPRR).
Tato sekvence je uložena v polohách 35 až 40 bílkoviny jádra uvedeného viru.This sequence is located at positions 35-40 of the core protein of said virus.
Byl také syntetizován nový peptid se zvýšenou citlivostí a specifičností ve srovnání s přírodním peptidem při použití v testech na stanovení HCV.A new peptide with increased sensitivity and specificity as compared to natural peptide when used in HCV assays was also synthesized.
- 1 Cz 285834 B6- 1 En 285834 B6
Podstata vynálezuSUMMARY OF THE INVENTION
Podstatu vynálezu tvoří peptid obecného vzorceThe present invention provides a peptide of the general formula
Xi-Xj-Xj-Xi-Xj-Xí (SEQ ID č. 3) (I), ve kterémX 1 -X 1 -X 1 -X 1 -X 1 -X 1 (SEQ ID No. 3) (I) wherein
Xi představuje tyrosin, kyselinu asparagovou, kyselinu glutamovou, leucin nebo isoleucin,Xi represents tyrosine, aspartic acid, glutamic acid, leucine or isoleucine,
X2 představuje leucin, cystein, kyselinu asparagovou nebo kyselinu glutamovou,X 2 represents leucine, cysteine, aspartic acid or glutamic acid,
X3 znamená leucin nebo valin,X 3 is leucine or valine,
X4 znamená prolin nebo methionin,X4 is proline or methionine,
X5 znamená arginin, kyselinu asparagovou, kyselinu glutamovou, prolin, cystein, fenylalanin, isoleucin, asparagin, glutamin nebo methionin aX 5 is arginine, aspartic acid, glutamic acid, proline, cysteine, phenylalanine, isoleucine, asparagine, glutamine or methionine; and
X6 představuje arginin, kyselinu glutamovou, serin nebo cystein, a kde peptid neodpovídá vzorci Tyr-Leu-Leu-Pro-Arg-Arg (SEW ID č. 1 a 2).X 6 represents arginine, glutamic acid, serine or cysteine, and wherein the peptide does not conform to the formula Tyr-Leu-Leu-Pro-Arg-Arg (SEW ID Nos. 1 and 2).
Tento vynález také dává k dispozici DNA sekvenci kódující peptid obecného vzorce I, kde sekvence se může snadno zjistit, pokud se vezme v úvahu degeneraci genetického kódu a použití kodonu.The present invention also provides a DNA sequence encoding a peptide of formula I, wherein the sequence can be readily ascertained, taking into account the degeneracy of the genetic code and codon usage.
Peptidy podle tohoto vynálezu se mohou používat jednotlivě jako část většího polypeptidu a/nebo jako směs peptidů s jinými peptidy z HCV genomu, heterologního genomu nebo topograficky příbuzných peptidů.The peptides of the invention may be used individually as part of a larger polypeptide and / or as a mixture of peptides with other peptides from the HCV genome, heterologous genome, or topographically related peptides.
Přítomný vynález také poskytuje expresní vektory obsahující DNA sekvence, jako jsou zde definovány, kde vektory jsou schopny, ve vhodném hostiteli, vyvolat expresi DNA sekvence za vzniku peptidů, které jsou vymezeny výše.The present invention also provides expression vectors comprising DNA sequences as defined herein, wherein the vectors are capable, in a suitable host, of inducing expression of the DNA sequence to produce the peptides as defined above.
Expresní faktor obvykle obsahuje řídicí prvky DNA, které působí expresi DNA sekvence v příslušném hostiteli. Tyto prvky se mohou měnit podle hostitele, ale obvykle zahrnují promotor, místo vázající ribozom, startovací a koncová místa přenosu a transkripční koncové vazebné místo. Příklady takových vektorů zahrnují plazmidy a viry. Expresní vektory podle tohoto vynálezu zahrnují jak extrachromozomální vektory, tak vektory, které jsou integrovány do buněčných chromozomů hostitele. Při použití například E. coli může expresní vektor obsahovat DNA sekvenci podle tohoto vynálezu popřípadě jako fosovanou vazbu buď k 5'- nebo 3'-konci DNA sekvence kódující například β-galaktosidasu nebo k 3'-konci DNA sekvence kódující například trp E gen. Při použití bakulovirového systému (AcNPV) hmyzu je popřípadě DNA sekvence připojena k polyedrové kódující sekvenci.The expression factor usually comprises DNA control elements that cause expression of the DNA sequence in the appropriate host. These elements may vary according to the host, but typically include a promoter, a ribosome binding site, start and end transfer sites, and a transcriptional end binding site. Examples of such vectors include plasmids and viruses. Expression vectors of the invention include both extrachromosomal vectors and vectors that are integrated into host cell chromosomes. Using, for example, E. coli, the expression vector may comprise a DNA sequence of the invention optionally as a fused linkage to either the 5'- or 3'-end of a DNA sequence encoding for example β-galactosidase or to the 3'-end of a DNA sequence encoding for example trp E gene. Using an insect baculovirus system (AcNPV), the DNA sequence is optionally linked to a polyhedra coding sequence.
Vynález se týká také hostitelských buněk, transformovaných svrchu definovanými vektory pro expresi.The invention also relates to host cells transformed with the above-defined expression vectors.
Příklady hostitelských buněk, vhodných pro použití podle tohoto vynálezu zahrnují prokaryotické a také eukaryotické buňky, jako jsou buňky bakterií, kvasinek, savců a hmyzu. Zvláštní příklady takových buněk zahrnují E. coli, S. cerevisiae, P. pastoris, buňky vaječníku čínského křečka a myší buňky a také Spodoptera fřugiperda a Tricoplusia ni. Volba hostitelovy buňkyExamples of host cells suitable for use in the present invention include prokaryotic as well as eukaryotic cells, such as bacteria, yeast, mammal and insect cells. Specific examples of such cells include E. coli, S. cerevisiae, P. pastoris, Chinese hamster ovary cells and mouse cells as well as Spodoptera fugiperda and Tricoplusia ni. Host cell selection
-2CZ 285834 B6 může záviset na řadě okolností, ale pokud je důležitá posttransformační modifikace HCV virového peptidů, potom by se měla dát přednost eukaryotickému hostiteli.There may be a number of circumstances depending on the circumstances, but if the posttransformation modification of the HCV viral peptide is important, then the eukaryotic host should be preferred.
Tento vynález se také týká způsobu výroby peptidů, které zde jsou vymezeny, který spočívá v tom, že se syntetizuje DNA sekvence kódující peptid obecného vzorce I, tato DNA sekvence se uloží do vektoru pro expresi tak, že ve vhodné hostitelské buňce je možno dosáhnout exprese, hostitelské buňky se tímto vektorem transformují a pak se pěstují a peptid se izoluje.The invention also relates to a method for producing the peptides as defined herein, comprising synthesizing a DNA sequence encoding a peptide of formula I, said DNA sequence being inserted into an expression vector such that expression can be achieved in a suitable host cell , the host cells are transformed with this vector and then grown and the peptide isolated.
DNA sekvence kódující peptid se může syntetizovat za použití standardních postupů (Gait, Oligonucleotide Synthesis: A Practical approach, Oxford, IRL Press /1984/).The DNA sequence encoding the peptide can be synthesized using standard procedures (Gait, Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach, Oxford, IRL Press (1984)).
Požadovaná DNA sekvence, získaná jak je popsáno výše, se může zavést do expresního vektoru za použití známých a standardních technických postupů. Expresní vektor se obvykle odstřihne za použití restrikčních enzymů a DNA sekvence se zavede za použití ligace se zarovnaným koncem nebo s posunutým koncem. Střih se obvykle provádí v restrikčním místě v obvyklé poloze v expresním vektoru tak, že jednou zavedené DNA sekvence jsou pod kontrolou funkčních prvků DNA, co způsobí jeho expresi.The desired DNA sequence obtained as described above can be introduced into an expression vector using known and standard techniques. The expression vector is usually excised using restriction enzymes and the DNA sequence is introduced using blunt-ended or displaced-end ligation. Typically, splicing is carried out at the restriction site at the usual position in the expression vector such that once introduced DNA sequences are under the control of the functional elements of the DNA, causing it to be expressed.
Transformace hostitelovy buňky se může provádět za použití standardních technických postupů. Obvykle se používá určité fenotypické značení, k odlišení mezi transformanty, které se úspěšně vázaly na expresní vektor a transformanty, u kterých k tomu nedošlo. Pěstování transformovaných buněk hostitele a podle potřeby izolace peptidů se může také provádět za použití standardních technických postupů.Transformation of the host cell can be performed using standard techniques. Typically, some phenotypic labeling is used to distinguish between transformants that have successfully bound to an expression vector and transformants that have not. Cultivation of transformed host cells and, where appropriate, peptide isolation may also be accomplished using standard techniques.
Peptidy podle tohoto vynálezu se mohou připravit syntetickými způsoby nebo rekombinantní DNA technologií. Peptidy jsou výhodně syntetizovány za použití automatických syntezátorů.The peptides of the invention may be prepared by synthetic methods or by recombinant DNA technology. The peptides are preferably synthesized using automatic synthesizers.
Protilátka specifická pro peptidy podle tohoto vynálezu se může zvýšit za použití peptidů. Protilátka může být polyklonální nebo monoklonální. Protilátka se může použít při kontrolním testování jakosti šarže peptidů, čištění peptidů nebo virového lyzátu, epitopním mapování, pokud bylo provedeno značení, jako konjugátu při kompetitivním typu testu, pro detekci protilátky a při detekčním testu antigenu.An antibody specific for the peptides of the invention can be raised using the peptides. The antibody may be polyclonal or monoclonal. The antibody can be used in batch quality control testing of peptides, purification of peptides or viral lysate, epitope mapping, if labeled, as a conjugate in a competitive assay type, for antibody detection, and antigen detection assay.
Polyklonální protilátka proti peptidů podle tohoto vynálezu se může dostat injekcí peptidů, podle potřeby vázaného na nosnou látku, k podpoře imunitní odezvy u savce jako hostitele, jako v případě myši, krysy, ovce nebo králíka, a získání takto připravované protilátky. Peptid se obvykle podává ve formě prostředku pro zavedení injekcí, ve kterém je peptid smíchán s fyziologicky přijatelným ředidlem. Pomocná látka, jako je úplné Freudono adjuvants (FCA) nebo neúplné Freundovo adjuvants (FLA), může být také zahrnuto do prostředku. Prostředek se obvykle zavádí injekcí hostiteli během vhodného časového období, přičemž v příslušných intervalech se odebírají vzorky plazmy pro test anti-HCV virové protilátky. Pokud se dosáhne vhodné úrovně aktivity, hostiteli se odebere krev. Protilátka se potom extrahuje a vyčistí z krevní plazmy za použití standardních technických postupů, například proteinem A nebo iontoměničovou chromatografií.The polyclonal antibody against the peptides of the invention can be obtained by injecting the peptides, if necessary bound to a carrier, to promote an immune response in a mammal as a host, such as a mouse, rat, sheep or rabbit, and recovering the antibody thus prepared. The peptide is usually administered in the form of an injectable composition wherein the peptide is mixed with a physiologically acceptable diluent. An adjuvant such as complete Freudono adjuvants (FCA) or incomplete Freund's adjuvants (FLA) may also be included in the composition. The composition is typically injected into a host over a suitable period of time, and plasma samples are taken at appropriate intervals for the anti-HCV viral antibody assay. When an appropriate level of activity is reached, blood is drawn from the host. The antibody is then extracted and purified from blood plasma using standard techniques such as protein A or ion exchange chromatography.
Monoklonální protilátka proti peptidů podle tohoto vynálezu se může dostat fúzí buněk umrtvené buněčné linie s buňkami, které produkují protilátku proti virově nebo topograficky příbuznému peptidů a kultivací fúzované imortalizované buněčné linie. Běžně se peptidem naočkuje savec odlišný od člověka jako hostitel, například myš nebo krysa. Poté co uplyne dostatečná doba pro stoupnutí hostitelovy odezvy formou protilátky, odstraní se buňky produkující protilátku, jako splenocyty. Buňky imortalizované linie, jako buněčné linie tvořené myelomy myší nebo krysy, se fúzují s buňkami produkujícími protilátku a výsledná fúze se sleduje k identifikaci buněčné linie, jako hydridomu, který způsobuje sekreci požadované monoklonální protilátky. Fúzovná buněčnáThe monoclonal antibody against the peptides of the invention can be obtained by fusing cells of the dead cell line with cells that produce an antibody against a virally or topographically related peptide and culturing the fused immortalized cell line. Typically, the peptide is inoculated with a non-human mammal as a host, such as a mouse or rat. After sufficient time has elapsed to increase the host response as an antibody, antibody-producing cells, such as splenocytes, are removed. The cells of the immortalized line, such as mouse or rat myeloma cell lines, are fused to antibody-producing cells and the resulting fusion is followed to identify the cell line as a hydridome that causes secretion of the desired monoclonal antibody. Fusion cell
-3 CZ 285834 B6 linie se může kultivovat a monoklonální protilátka vyčistit od kultivačního prostředí podobným způsobem, jako se čistí polyklonální protilátka.The line may be cultured and the monoclonal antibody purified from the culture medium in a manner similar to the purification of a polyclonal antibody.
Diagnostické testy založené na tomto vynálezu se mohou použít ke stanovení přítomnosti nebo nepřítomnosti HCV infekce. Tyto testy se mohou také používat ke sledování výsledku ošetření takových infekcí, například při interferonové terapii.Diagnostic assays based on the invention can be used to determine the presence or absence of HCV infection. These assays may also be used to monitor the outcome of the treatment of such infections, for example in interferon therapy.
Při testu diagnózy virové infekce jsou v zásadě tři zřetelné přístupy, které se mohou uzpůsobit tak, aby zahrnuly detekci virové nukleové kyseliny, virového antigenu nebo virové protilátky. Na virové nukleové kyseliny se obvykle pohlíží jako na nejlepší indikátor přítomnosti samotného viru a měly by být pokládány za identifikační materiály, které jsou pravděpodobně infekční. Avšak detekce nukleové kyseliny není obvykle tak přímočará, jako detekce antigenů nebo protilátek, protože úroveň cílové látky může být velmi nízká. Virový antigen se používá jako značkovací látka pro stanovení přítomnosti viru a jako indikátor nakažlivosti. V závislosti na viru, množství antigenu přítomného ve vzorku může být velmi nízké a obtížné pro stanovení. Detekce protilátky je relativně přímočará, protože hostitelův imunitní systém má rozšířenou odezvu na infekci, která vede k produkci velkých množství cirkulující protilátky. Charakter odezvy protilátky může být často klinicky vhodný, například protilátky ze skupiny IgM spíše než ze skupiny IgG jsou ukazatelem nové infekce nebo odezva na zvláštní virový původce může být spojena s clearancí viru. Tak přesný přístup uzpůsobený pro diagnózu virových infekcí závisí na zvláštních okolnostech a zdroji informací. V případě HCV diagnostický test může zahrnovat kterýkoli z těchto tří přístupů.In principle, in a viral infection diagnosis test, there are three distinct approaches that can be adapted to include detection of a viral nucleic acid, a viral antigen, or a viral antibody. Viral nucleic acids are generally seen as the best indicator of the presence of the virus itself and should be considered as identification materials that are likely to be infectious. However, nucleic acid detection is usually not as straightforward as the detection of antigens or antibodies because the level of the target substance can be very low. The viral antigen is used as a marker for determining the presence of virus and as an indicator of infectivity. Depending on the virus, the amount of antigen present in the sample can be very low and difficult to determine. Detection of the antibody is relatively straightforward because the host's immune system has an expanded response to infection that results in the production of large amounts of circulating antibody. The nature of the antibody response may often be clinically appropriate, for example, antibodies from the IgM family rather than the IgG family are indicative of a new infection or the response to a particular viral agent may be associated with virus clearance. Such a precise approach adapted to the diagnosis of viral infections depends on the particular circumstances and the source of the information. In the case of HCV, the diagnostic test may include any of these three approaches.
Při testu diagnózy HCV, obsahujícím stanovení virové nukleové kyseliny, způsob může zahrnovat hydridizaci virové RNA přítomné v testovaném vzorku nebo cDNA syntetizované z takové virové RNA, s DNA sekvencí, kódující peptid obecného vzorce I a vyšetří se výsledné hydridy nukleové kyseliny k identifikaci libovolné nukleové kyseliny viru HCV. Aplikace tohoto způsobu je obvykle omezena na testovaný vzorek příslušné tkáně, například na biopsii jater, ve kterém je RNA viru pravděpodobně přítomna ve vysoké koncentraci. DNA sekvence, kódující peptid obecného vzorce I může mít formu oligonukleotidů nebo sekvence cDNA, popřípadě obsažené v plazmidu. Vyšetření hydridů nukleové kyseliny se obvykle provádí za použití značené DNA sekvence. Výhodně je peptid podle tohoto vynálezu částí oligonukleotidů, ve kterém je značení umístěno v dostatečné vzdálenosti od peptidu tak, že vazba peptidu k virové nukleové kyselině neinterferuje se schopností značení, která nastává příliš blízko k vazebnímu místu. Může se provést alespoň jedna dodatečná řada vyšetření jednoho nebo jiného druhu k charakterizaci dalších hydridů a tak identifikaci libovolné HCV virové nukleové kyseliny. Stupně hybridace a vyšetření se provádějí podle způsobů známých v oboru.In an HCV diagnosis assay comprising a viral nucleic acid assay, the method may include hydridizing the viral RNA present in the test sample or cDNA synthesized from such viral RNA, with a DNA sequence encoding a peptide of Formula I and screening the resulting nucleic acid hydrides to identify any nucleic acid. HCV virus. The application of this method is usually limited to a test sample of the respective tissue, for example a liver biopsy, in which the RNA of the virus is likely to be present at a high concentration. The DNA sequence encoding the peptide of formula (I) may be in the form of oligonucleotides or cDNA sequences, optionally contained in a plasmid. Nucleic acid hydride assays are typically performed using a labeled DNA sequence. Preferably, the peptide of the invention is part of an oligonucleotide in which the label is located sufficiently away from the peptide such that binding of the peptide to the viral nucleic acid does not interfere with the ability of the label to occur too close to the binding site. At least one additional series of examinations of one or another species may be performed to characterize the other hydrides and thus identify any HCV viral nucleic acid. Hybridization and screening steps are performed according to methods known in the art.
Tento vynález také poskytuje testovací soustavu pro detekci HCV virové nukleové kyseliny, která zahrnujeThe present invention also provides an assay system for detecting HCV viral nucleic acid comprising
i) značený oligonukleotid, který obsahuje DNA sekvenci kódující peptid obecného vzorce I a popřípadě ii) promývací roztoky, reakční pufřy a substrát, pokud značící látkou je enzym.i) a labeled oligonucleotide comprising a DNA sequence encoding a peptide of formula I and optionally ii) wash solutions, reaction buffers and a substrate, if the label is an enzyme.
Výhodně testovací souprava také obsahuje pozitivní kontrolní vzorek pro usnadnění identifikace virové nukleové kyseliny.Preferably, the assay kit also comprises a positive control sample to facilitate identification of the viral nucleic acid.
Při testu diagnózy HCV, obsahujícím detekci virového antigenu nebo protilátky, způsob může zahrnovat uvedení testovaného vzorku do styku s peptidem podle tohoto vynálezu nebo s polyklonální nebo monoklonální protilátkou proti peptidu a stanovení, zda je v testovaném vzorku obsažena nějaká vazba antigen-protilátka. K tomuto účelu testovací souprava může být opatřena peptidem, jaký je zde vymezen, nebo polyklonální nebo monoklonální protilátkou a zařízenímIn an HCV diagnosis assay comprising detection of a viral antigen or antibody, the method may comprise contacting the test sample with a peptide of the invention or a polyclonal or monoclonal antibody against the peptide and determining whether any antigen-antibody binding is present in the test sample. For this purpose, the test kit may be provided with a peptide as defined herein or a polyclonal or monoclonal antibody and a device.
-4CZ 285834 B6 pro stanovení, zdaje existuje nějaká vazba s protilátkou nebo antigenem obsaženým v testovaném vzorku. Testovaný vzorek může být vyjmut z libovolných příslušných tkání a získán z fyziologických tekutin zmíněných výše, prostanovení virové nukleové kyseliny. Jestliže se dostane fyziologická tekutina, může se podle potřeby zahustit pro stanovení libovolného přítomného virového antigenu nebo protilátky.To determine if there is any binding to the antibody or antigen contained in the test sample. The test sample may be removed from any of the appropriate tissues and obtained from the physiological fluids mentioned above, for the determination of viral nucleic acid. If physiological fluid is obtained, it may be concentrated as necessary to determine any viral antigen or antibody present.
VyužitelnostUsability
Mohou se používat obměny testovací struktury. Peptid se může použít k zachycení selektivně působící protilátky proti HCV z roztoku, k označení již zachycené selektivně působící protilátky nebo v obou těchto případech a k označení protilátky. Kromě toho se peptid může používat v určitých typech homogenní testovací struktury, ve kterých protilátka reagující s peptidem se stanovuje v roztoku s neoddělenými fázemi.Variations in the test structure may be used. The peptide may be used to capture a selectively acting anti-HCV antibody from solution, to label an already captured selectively acting antibody, or both, and to label the antibody. In addition, the peptide may be used in certain types of homogeneous assay structures in which the antibody reactive with the peptide is determined in a solution with non-separated phases.
Druhy testu, při kterých se peptid používá k zachycení protilátky z roztoku, zahrnují immobilizaci peptidu na povrchu tuhé látky. Tento povrch by měl být schopen být nějakým způsobem promyt. Příklady vhodných povrchů zahrnují polymery různých typů (tvarované do mikrotitračních jamek, kuliček, měřicích tyčinek různých typů, odsávacích jehel, elektrod a optických zařízení), částice (například latex, stabilizované červené krevní buňky, buňky bakterií nebo hub, spory, zlato nebo jiné kovové nebo kov obsahující sóly a proteinové koloidy), s obvyklou velikostí částic od 0,02 do 5 pm, membrány (například z nitrocelulózy, papíru, acetátu celulózy a membrány z organických nebo anorganických materiálů, s vysokou porézností a/nebo velikou plochou povrchu).Types of assay in which a peptide is used to capture an antibody from a solution include immobilizing the peptide on a solid surface. This surface should be able to be washed in some way. Examples of suitable surfaces include polymers of different types (shaped into microtiter wells, beads, rods of different types, aspiration needles, electrodes, and optical devices), particles (e.g., latex, stabilized red blood cells, bacterial or fungal cells, spores, gold or other metal) or metal containing soles and protein colloids), with a typical particle size of from 0.02 to 5 µm, of a membrane (e.g., nitrocellulose, paper, cellulose acetate, and a membrane of organic or inorganic materials, with high porosity and / or large surface area).
Vázání peptidu na povrchu se může dosahovat pasivní adsorpcí z roztoku optimálního složení, který může obsahovat povrchově aktivní látky, rozpouštědla, soli a/nebo chaotropní látky, nebo aktivním chemickým vázáním. Aktivním vázáním se míní změna reaktivních nebo aktivovatelných funkčních skupin, které mohou být vystaveny účinku na povrchu (například kondenzačních činidel, aktivních esterů, halogenidů a anhydridů kyselin, v látkách obsahujících aminoskupiny, hydroxyskupiny nebo karboxyskupiny, merkaptoskupiny, karbonylové skupiny, diazoskupiny nebo nenasycené skupiny). Aktivním vázáním se případně může mínit vazba přes protein (samotný, připojený k povrchu pasivně nebo aktivní vazbou), jako je albumin nebo kasein, ke kterému virový peptid může být chemicky vázán libovolným z různých způsobů. Použití proteinu tímto způsobem se může ukázat jako výhodné, pro isoelektrický bod, náboj, hydrofilnost nebo jiné fyzikálně chemické vlastnosti. Virový peptid může být také připojen k povrchu (obvykle ale není zapotřebí membrána), s následujícím elektroforézním dělením reakční směsi, stejně jako imunoprocipitací.Binding of the peptide to the surface may be achieved by passive adsorption from a solution of optimal composition, which may contain surfactants, solvents, salts and / or chaotropic substances, or by active chemical binding. By active binding is meant a change in reactive or activatable functional groups that may be exposed to the surface (e.g., condensation agents, active esters, halides and acid anhydrides, in substances containing amino, hydroxy or carboxy, mercapto, carbonyl, diazo or unsaturated groups) . Optionally, active binding may be understood to mean binding through a protein (alone, attached to the surface passively or by active binding), such as albumin or casein, to which the viral peptide may be chemically bound by any of a variety of methods. Use of a protein in this manner may prove advantageous for isoelectric point, charge, hydrophilicity, or other physicochemical properties. The viral peptide may also be attached to the surface (usually but no membrane required), followed by electrophoretic separation of the reaction mixture as well as immunoprocipitation.
Po kontaktování (zreagování) povrchu nesoucího peptid s testovaným vzorkem se vše nechá určitou dobu k proběhnutí reakce a pokud je zapotřebí, odstraní se přebytek vzorku některým z řady možných řešení (jako promýváním, odstřeďováním, filtracím magnetickým působením nebo účinkem kapiláry) a zachycená protilátka se stanoví na libovolném zařízení, které poskytne signál schopný detekce. Například toho se může dosáhnout za použití značené molekuly nebo částice jako je popsána výše, která bude reagovat se zachycenou protilátkou (například proteinem A nebo proteinem G a podobně, anti-speciem nebo podtypem anti-imunoglobulinu, reumatiodním faktorem nebo protilátkou k peptidu, za použití kompetitivního nebo blokujícího způsobu) nebo libovolné molekuly obsahující epitop obsažený v peptidu.After contacting (reacting) the peptide-bearing surface with the test sample, the reaction is allowed to proceed for some time and, if necessary, excess sample is removed by any of a number of possible solutions (such as washing, centrifugation, magnetic filtration or capillary filtration). on any device that provides a signal capable of being detected. For example, this can be accomplished using a labeled molecule or particle as described above that will react with the captured antibody (e.g., protein A or protein G, and the like, an anti-species or anti-immunoglobulin subtype, a rheumatoid factor, or an antibody to a peptide). competitive or blocking method) or any molecule comprising an epitope contained in the peptide.
Signál schopný detekce může být optický, radioaktivní nebo fyzikálně chemický a může být poskytnut přímo značenou molekulou nebo částicí, například účinkem barviva, radioaktivního značení, elektroaktivního druhu, magnetické rezonanční analýzy nebo fluoroforu, nebo nepřímo značením molekuly nebo částice enzymem samotným schopným zvýšit měřitelnou změnuThe signal capable of detection may be optical, radioactive or physicochemical and may be provided by a directly labeled molecule or particle, for example by dye, radiolabeling, electroactive species, magnetic resonance analysis or fluorophore, or indirectly by labeling the molecule or particle with an enzyme capable of increasing measurable change.
-5CZ 285834 B6 libovolného druhu. Podle jiného provedení signál schopný detekce se může dostat například za použití aglutinace, nebo difrakcí nebo účinkem způsobujícím dvojlom, pokud povrch je ve formě částic.-5GB 285834 B6 of any kind. In another embodiment, the signal capable of detection can be obtained, for example, by agglutination, or by diffraction, or a birefringent effect if the surface is in particulate form.
Testy, při kterých se samotný peptid používá ke značení již zachycené protilátky, vyžadují určitou formu značení peptidů, která umožní, aby byla stanovena. Značení se může provádět přímo chemicky nebo pasivním připojením, například radioaktivním značením, magnetickým rezonančním druhem značení, značení částic nebo enzymu peptidem, nebo nepřímo, vázáním libovolné formy značení na molekulu, která bude sama reagovat s peptidem. Chemické vázání značících částí na peptidů může být nepřímé, přes část již přítomnou v peptidů, jako přes aminoskupinu, nebo přes intermediámí část, jako je melaminová skupina. Zachycení protilátky může proběhnout na libovolných površích již zmíněným libovolným reakčním činidlem, zahrnujícím pasivní nebo aktivovanou adsorpci, která bude působit ve specifické protilátce nebo jejímž výsledkem bude specifická protilátka nebo vázaný imunokomplex. Zejména vázání protilátky by nastalo působením anti-species nebo podtypu anti-imunoglobulinu, reumatiodního faktoru nebo proteinu A, G a podobně nebo libovolné molekuly obsahující epitop obsažený v peptidů.Assays in which the peptide itself is used to label an already captured antibody require some form of peptide labeling that allows it to be determined. Labeling can be accomplished directly by chemical or passive attachment, for example, radiolabeling, magnetic resonance type labeling, particle or enzyme labeling with the peptide, or indirectly, by binding any form of labeling to a molecule that will itself react with the peptide. Chemical binding of the labeling moieties to the peptide may be indirect, through the moiety already present in the peptide, such as through the amino group, or through an intermediate moiety, such as the melamine group. The capture of the antibody can take place on any surface by the aforementioned reagent, including passive or activated adsorption, which will act in a specific antibody or result in a specific antibody or bound immunocomplex. In particular, antibody binding would occur by the action of an anti-species or anti-immunoglobulin subtype, rheumatoid factor or protein A, G and the like, or any molecule comprising an epitope contained in the peptides.
Značený peptid se může použít při kompetitivním způsobu vázání, při kterém je vázání k libovolné zvláštní molekule, na některém z povrchů uvedených formou příkladů výše, blokováno antigenem ve vzorku. Podle jiného provedení se může použít nekompetivního způsobu, při kterém antigen ve vzorku je vázán specificky nebo nespecificky na některém z povrchů uvedených výše a je také vázán kbivaletní nebo polyvaletní molekule (například protilátce) se zbývajícími valencemi, které jsou použity k zachycování značeného peptidů.The labeled peptide can be used in a competitive binding method in which binding to any particular molecule, on any of the surfaces exemplified above, is blocked by the antigen in the sample. In another embodiment, a non-competitive method may be used wherein the antigen in the sample is bound specifically or non-specifically on any of the surfaces listed above and is also bound by a kbivalent or polyvaletic molecule (e.g. an antibody) with the remaining valences used to capture the labeled peptides.
Často při homogenních testech peptid a protilátka jsou odděleně označeny tak, že pokud protilátka reaguje s rekombinantním peptidem ve volném roztoku, obě označené látky navzájem reagují, aby se dosáhlo například neradioaktivního přenosu energie, zachycené na jedné značící látce, na druhou značící látku s vhodnou detekcí z excitovaného druhého značení nebo lychlého ukončení prvního značení (například fluorimetricky, magnetickou rezonancí nebo měřením enzymu). Kromě toho jak virový peptid, tak protilátka ve výsledných vzorcích má za výsledek omezenou interakci značeného páru a tak rozdílnou úroveň signálu v detektoru.Often, in homogeneous assays, the peptide and antibody are separately labeled such that when the antibody reacts with the recombinant peptide in free solution, both labeled substances interact with each other to achieve, for example, non-radioactive energy transfer captured on one label to the other label with appropriate detection from an excited second label or a quick termination of the first label (for example, by fluorimetry, magnetic resonance, or enzyme measurement). In addition, both the viral peptide and the antibody in the resulting samples result in a limited interaction of the labeled pair and thus a different signal level in the detector.
Vhodná testovací formace pro detekci HCV protilátky je přímá sendvičová formace enzymu pro imunonologické stanovení (ELA). Peptid se povléká na mikrotitrační jamky. Testovaný vzorek a peptid, ke kterému je enzym vázán, se přidávají současně. Kterákoli HCV protilátka přítomná v testovaném vzorku se váže jak k peptidů povlékajícímu jamku, tak k peptidů vázanému s enzymem. Obvykle se používají stejné peptidy na obou stranách sendviče. Pro promytí se vázaný enzym stanoví přímo za použití specifického substrátu, co je spojeno se změnou barvy. Testovací souprava pro použití v ELA zahrnuje:A suitable assay formation for the detection of HCV antibody is the direct sandwich enzyme formation for immunoassay (ELA). The peptide is coated onto microtiter wells. The test sample and the peptide to which the enzyme is bound are added simultaneously. Any HCV antibody present in the test sample binds to both the peptide-coated well and the enzyme-bound peptides. Usually the same peptides are used on both sides of the sandwich. For washing, the bound enzyme is determined directly using a specific substrate, which is associated with a color change. The ELA test kit includes:
1) peptid, který je zde definován, značený enzymem,1) an enzyme labeled peptide as defined herein,
2) substrát pro enzym,2) substrate for the enzyme,
3) prostředek opatřený povrchem, na kterém je peptid immobilizován a3) a composition provided with a surface on which the peptide is immobilized; and
4) popřípadě promývací roztoky a/nebo pufiy.4) optionally washing solutions and / or buffers.
Je také možné používat systém ELLA pro zachycování IgG/IgM protilátky, ve kterém je antilidská protilátka povlečena na jamkách o objemu v mikrolitrech a testovaný vzorek se přidává do jamky. Jakákoli IgG nebo IgM protilátka přítomná v testovaném vzorku se bude potom vázat k anti-lidské protilátce. Peptid podle tohoto vynálezu, který je značen, se přidá do jamky a peptid se bude vázat k libovolné IgG nebo IgM protilátce, co je způsobeno v důsledku HCV infekce. IgG nebo IgM protilátka se může vizualizovat účinkem značení na peptidů.It is also possible to use an ELLA system to capture an IgG / IgM antibody in which the anti-human antibody is coated in microliter wells and the test sample is added to the well. Any IgG or IgM antibody present in the test sample will then bind to the anti-human antibody. The peptide of the invention that is labeled is added to the well and the peptide will bind to any IgG or IgM antibody due to HCV infection. An IgG or IgM antibody can be visualized by the effect of labeling on the peptides.
-6CZ 285834 B6-6GB 285834 B6
Tak může být zřejmé, že peptidy podle tohoto vynálezu se mohou používat k detekci HCV infekce v mnoha strukturách, tedy volných peptidech, při testech včetně klasické ELISA, kompetiční ELISA, membránově vázané ELA a imunologického srážení. Peptidové konjugáty se mohou používat při rozšířených testech a ELISA zachycující IgG/IgM protilátku.Thus, it can be appreciated that the peptides of the invention can be used to detect HCV infection in a variety of structures, i.e., free peptides, in assays including classical ELISA, competition ELISA, membrane bound ELA, and immunological precipitation. Peptide conjugates can be used in expanded assays and an IgG / IgM capture antibody.
Peptid podle tohoto vynálezu se může vpravit do vakcínového prostředku pro vyvolání imunity k HCV u člověka. K tomuto účelu peptid může být přítomen společně s farmaceuticky přijatelnou nosnou látkou.The peptide of the invention may be incorporated into a vaccine composition for inducing immunity to HCV in humans. For this purpose, the peptide may be present together with a pharmaceutically acceptable carrier.
Pro použití ve vakcínovém prostředku, peptid může být popřípadě přítomen jako část částice z jaderné fuze hepatitidy B, jak popsal Clarke a kol. (Nátuře 330, 381-384 /1987/) nebo polymer na bázi polylysinu, jak popsal Tam (PNAS 85, 5409-5413 /1988/). Podle jiného provedení peptid se může popřípadě připojit ke struktuře částice, jako jsou liposomy nebo ISCOMS.For use in a vaccine composition, the peptide may optionally be present as part of a hepatitis B nuclear fusion particle, as described by Clarke et al. (Nature 330, 381-384 (1987)) or a polylysine-based polymer as described by Tam (PNAS 85, 5409-5413 (1988)). Alternatively, the peptide may optionally be attached to a particle structure such as liposomes or ISCOMS.
Farmaceuticky přijatelné nosné látky zahrnují kapalné prostředí vhodné k použití jako pomocná látka (vehikulum), k zavedení peptidu do těla pacienta. Příkladem takového kapalného prostředí je fyziologický roztok (roztok chloridu sodného). Peptid se může rozpustit nebo suspendovat jako tuhá látka v nosné látce.Pharmaceutically acceptable carriers include a liquid medium suitable for use as an excipient (vehicle) to deliver the peptide to the patient. An example of such a liquid medium is saline. The peptide may be dissolved or suspended as a solid in a carrier.
Vakcínový prostředek může také obsahovat pomocnou látku (adjuvans) pro stimulaci imunitní odezvy a tím zvýšení účinku vakcíny. Příklady adjuvants zahrnují hydroxid hlinitý a fosforečnan hlinitý.The vaccine composition may also contain an adjuvant to stimulate the immune response and thereby enhance the effect of the vaccine. Examples of adjuvants include aluminum hydroxide and aluminum phosphate.
Vakcínový prostředek může obsahovat peptid v konečné koncentraci, která je v rozmezí od 0,01 do 5 mg/ml, výhodně od 0,03 do 2 mg/ml. Vakcínový prostředek se může vnést do sterilního zásobníku, který se potom neprodyšně uzavře a skladuje za nízké teploty, například při 4 °C, nebo se může lyofilizovat.The vaccine composition may comprise the peptide at a final concentration ranging from 0.01 to 5 mg / ml, preferably from 0.03 to 2 mg / ml. The vaccine composition can be introduced into a sterile container, which is then sealed and stored at a low temperature, for example at 4 ° C, or lyophilized.
Za účelem vyvolání imunity u člověka vůči HCV se může podat jedna dávka nebo větší počet dávek vakcínového prostředku. Každá dávka může mít objem od 0,1 do 2 ml, výhodně od 0,2 do 1 ml. Způsob vyvolání imunity u Člověka vůči HCV zahrnuje podání účinného množství vakcínového prostředku, jak zde bylo vymezeno výše.A single dose or multiple doses of the vaccine composition may be administered to induce human immunity to HCV. Each dose may have a volume of from 0.1 to 2 ml, preferably from 0.2 to 1 ml. The method of inducing human immunity to HCV comprises administering an effective amount of a vaccine composition as defined herein.
Tento vynález také skýtá použití peptidu, který je zde vymezen, při přípravě vakcíny k použití při vyvolání imunity u člověka vůči HCV.The invention also provides the use of a peptide as defined herein in the preparation of a vaccine for use in inducing human immunity to HCV.
Vakcíny podle tohoto vynálezu se mohou podávat libovolným obvyklým způsobem pro podávání vakcín, včetně orálního a parenterálního (například intravenózního, subkutánního nebo intramuskulámího) podání v injekci. Ošetření může sestávat z jediné dávky vakcíny nebo většího počtu dávek během určitého časového období.The vaccines of the invention may be administered by any conventional route of administration for vaccines, including oral and parenteral (e.g., intravenous, subcutaneous or intramuscular) injection. The treatment may consist of a single dose of vaccine or multiple doses over a period of time.
V sekvenčním záznamu jsou zahrnuty SEQ ID č. 1 až 29, na které se odkazuje v popisu a patentových nárocích.Included in the Sequence Listing are SEQ ID Nos. 1 to 29, which are referred to in the specification and claims.
Příklady provedení vynálezuDETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
Provedení tohoto vynálezu budou nyní ilustrována.Embodiments of the invention will now be illustrated.
Příklad 1Example 1
Identifikace epitopní sféry HCV jádra proteinuIdentification of the epitope sphere of HCV core protein
N-Terminální 97 aminokyselinový zbytek HCV jádra proteinu SEQ ID č. 8 se mapuje analýzou PEPSCAN. Tento proces zahrnuje serologické analýzy sekvenčně překrývajících se peptidů, u kterých trvá oblast zájmu, k identifikaci epitopní sféry. Devadesát překrývajících se oktamerních peptidů se syntetizuje na polypropylenových nosičích charakteru hrotu (pin supports) podle instrukcí výrobce (Cambridge Research Biochemicals) tak, že každý peptid se překrývá s předcházející sekvencí sedmi N-koncovými zbytky a s následujícím peptidem sedmi Ckoncovými zbytky. Sérum nebo IgG čištěný ze séra jednotlivců potvrzuje, že jsou seropozitivní na HCV použité k vyšetření peptidů.The N-terminal 97 amino acid residue of the HCV core of the protein of SEQ ID No. 8 is mapped by PEPSCAN analysis. This process involves serological analyzes of sequentially overlapping peptides of interest to identify the epitope sphere. Ninety overlapping octameric peptides are synthesized on pin supports in polypropylene according to the manufacturer's instructions (Cambridge Research Biochemicals) such that each peptide overlaps with the preceding sequence of seven N-terminal residues and the next peptide of seven C-terminal residues. Serum or IgG purified from individual sera confirms that they are seropositive for HCV used to screen peptides.
Příklad 2Example 2
Vyšetření peptidůExamination of peptides
Zkušební postup se provádí v zásadě jak je popsáno v manuálu získaném jako instrukce od výrobce. Doba a teplota inkubace testované protilátky se odlišují od předepsaných údajů, přičemž se zkracuje doba adsorpce u každého testu.The test procedure is performed essentially as described in the manual obtained as manufacturer's instructions. The incubation time and temperature of the test antibody differs from the prescribed data, reducing the adsorption time for each test.
SérumSerum
Celkově se testuje 16 sér pomocí analýzy PEPSCAN. Ty sestávají z 12 sér zakoupených u U.S. Donors, u kterých je zjištěno, že jsou pozitivní na protilátky vůči HCV, při obvyklém vyšetření v místě získání. Zbývající čtyři séra jsou od pacientů, u kterých byla stanovena diagnóza, že mají ne-A a ne-B hepatitidu a u kterých se následně ukazuje, že obsahují protilátku k HCV. Séra se vyšetřují buď jako frakce surového séra nebo jako přípravek na bázi kyseliny kaprylové. Čištění kyseliny kaprylové z IgG ze séra se provádí jak popisuje Steinbuch a Audran v Arch. Biochem. Biophys. 134, 279-284 /1969/.A total of 16 sera were tested by PEPSCAN analysis. These consist of 12 sera purchased from U.S. Pat. Donors found to be positive for HCV antibodies in a conventional screening site. The remaining four sera are from patients diagnosed as having non-A and non-B hepatitis and subsequently shown to contain an antibody to HCV. Sera are examined either as a raw serum fraction or as a caprylic acid preparation. Purification of caprylic acid from IgG from serum is performed as described by Steinbuch and Audran in Arch. Biochem. Biophys. 134, 279-284 (1969).
TestTest
Testovací struktura zahrnuje sekvenční inkubování různých hrotů v mikrojamkových deskách obsahujících blokující testovanou protilátku, konjugát a substrátové roztoky. Imunologický komplex se vytvoří na hrotu s konjugátem značeným enzymem, kde konjugát je imobilizován na vazbě antipeptid-protilátka z testovaného séra. Pokud se hrot potom ponoří do substrátu, enzym změní barvu, co se použije ke stanovení množství vazeb antipeptid-protilátka.The assay structure includes sequential incubation of various spikes in microwell plates containing blocking test antibody, conjugate, and substrate solutions. The immunological complex is formed on the tip with an enzyme-labeled conjugate, wherein the conjugate is immobilized on the antipeptide-antibody binding from the test serum. If the tip is then immersed in the substrate, the enzyme changes color, which is used to determine the amount of antipeptide-antibody binding.
BlokováníBlocking
Hroty se ponoří do 200 μΐ superkoktejlu (1 % ovalbuminu, 1 % hovězího sérového albuminu v 0,15-molámím fyziologickém roztoku pufrované fosfátem, o hodnotě pH 7,2, a 0,1 % Tween 20) a nechají stát za teploty místnosti po dobu 1 hodiny.The spikes are immersed in a 200 μΐ supercoctail (1% ovalbumin, 1% bovine serum albumin in 0.15 molar phosphate buffered saline, pH 7.2, and 0.1% Tween 20) and allowed to stand at room temperature for 2 hours. for 1 hour.
Testovaná protilátkaTest antibody
Testovaná protilátka se zředí od 1:200 (IgG) do 1:100 (sérum) superkoktejlem. Hroty se potom nechají stát v tomto roztoku (175 μΐ na jamku) za teploty 37 °C po dobu 1 hodiny. Po této inkubaci se hromy čtyřikrát omyjí v 0,15-molámím fyziologickým roztokem pufrovaném fosfátem, o hodnotě pH 7,2, a 0,05% Tween 20, vždy za teploty místnosti během 10 minut.Test antibody is diluted from 1: 200 (IgG) to 1: 100 (serum) by supercock. The tips are then allowed to stand in this solution (175 μΐ per well) at 37 ° C for 1 hour. After this incubation, the thunder was washed four times in 0.15 molar phosphate buffered saline, pH 7.2, and 0.05% Tween 20, each at room temperature for 10 minutes.
-8CZ 285834 B6-8EN 285834 B6
KonjugátConjugate
Králičí anti-lidský IgG kopulovaný sperixidázou z křenu selského se zředí v poměru 1:100 superkoktejlem. Peptid nesoucí hroty se potom nechá stát v tomto roztoku za teploty místnosti po dobu 1 hodiny. Hroty se potom znovu čtyřikrát omyjí, jak je uvedeno výše.Rabbit anti-human IgG coupled with horseradish sperixidase is diluted 1: 100 with a supercock. The tip-bearing peptide is then allowed to stand in this solution at room temperature for 1 hour. The spikes are then washed four more times as above.
SubstrátSubstrate
Roztok substrátu se připravuje čerstvý pro každý test. Ke 100 ml 0,1-molámího fosfátu se přidá 0,08-molámí citrátový pufr o hodnotě pH 4,0, rozpuštěný v 50 mg kyseliny 2,2'-azino-bis(3ethylbezthiazolinsulfonové (ABTS) a 0,3 μΐ/ml 30% peroxidu vodíku. Hroty se ponoří do jamek obsahujících roztok substrátu (150 μΙ na jamku) a inkubují za teploty místnosti v temnu. Poté co se vytvoří dostatek barvy, reakce se zastaví odstraněním hrotů. Desky se hned potom odečtou v zařízení pro vyhodnocování spektrometrických desek, při vlnové délce 405 nm. Hodnoty absorbance se potom vynesou proti počtu hrotů. Epitopní sféra se poté definuje jako kontinuální sekvence aminokyselin obecně ke všem pozitivním hrotům ve sféře, to jest pozitivní hrot 1 Gly-Val-Tyr-Leu-Leu-Pro-Arg-Arg (SEQ ID č. 9) (G V Y L L P R R) pozitivní hrot 2 Val-Tyr-Leu-Leu-Pro-Arg-Arg-Gly (SEQ ID č. 10) (VYL L P R R G) pozitivní hrot 3 Tyr-Leu-Leu-Pro-Arg-Arg-Gly-Pro (SEQ ID č. 11) (YL LPRR GP)The substrate solution is prepared fresh for each test. To 100 ml of 0,1-molar phosphate add 0,08-molar citrate buffer, pH 4,0, dissolved in 50 mg of 2,2'-azinobis (3-ethylbenzthiazolinesulfonic acid (ABTS) and 0,3 μΐ / ml The tips are immersed in wells containing substrate solution (150 μΙ per well) and incubated at room temperature in the dark, after enough color is formed, the reaction is stopped by removing the tips, and the plates are then read in a spectrometric evaluation device. The epitope sphere is then defined as a continuous amino acid sequence generally to all positive spikes in the sphere, i.e., a positive tip of 1 Gly-Val-Tyr-Leu-Leu-Pro. -Arg-Arg (SEQ ID No. 9) (GVYLLPRR) positive tip 2 Val-Tyr-Leu-Leu-Pro-Arg-Arg-Gly (SEQ ID No. 10) (VYL LPRRG) positive tip 3 Tyr-Leu- Leu-Pro-Arg-Arg-Gly-Pro (SEQ ID NO. 11) (YL LPRR GP)
V tomto příkladu epitop má sekvenci Tyr-Leu-Leu-Pro-Arg-Arg (YLLPRR) (SEQ ID č. 1 a 2).In this example, the epitope has the sequence Tyr-Leu-Leu-Pro-Arg-Arg (YLLPRR) (SEQ ID Nos. 1 and 2).
ČištěníCleaning
Po použití se hroty čistí působením ultrazvuku v přerušovacím pufru (1 % dodecylsulfonátu sodného a 0,1 % 2-merkaptoethanolu v 0,1-molámím dihydrogenfosforečnanu sodném) zahřátém na teplotu 60 °C. Hroty se vystaví působení ultrazvuku na dobu 30 minut a poté dvakrát omyjí v destilované vodě za teploty 60 °C a jednou ve vroucím methanolu. Hroty se potom uloží za teploty místnosti neprodyšně uzavřené v pytlíčcích obsahujících silikagel nebo se mohou hned znovu použít při následujícím testu.After use, the spikes were cleaned by sonication in disruption buffer (1% sodium dodecylsulfonate and 0.1% 2-mercaptoethanol in 0.1 molar sodium dihydrogen phosphate) heated to 60 ° C. The spikes were sonicated for 30 minutes and then washed twice in distilled water at 60 ° C and once in boiling methanol. The spikes are then stored at room temperature tightly sealed in bags containing silica gel or can be reused immediately in the next test.
U několika sfér vN-koncové oblasti HCV jádra proteinu se takto zjistí, že jsou epitopní. Jedna z těchto oblastí, epitop imunologické sféry, se stanoví ve větším nebo menším rozsahu u všech testovaných sér. Epitop imunologické sféry je situován ve zbytcích 35 až 40 jádra proteinu, které má amimokyselinovou sekvenci Tyr-Leu-Leu-Pro-Arg-Arg (YLLPRR) SEQ ID č. 1 a 2. Výsledky zkoušek vzorků jsou vedeny v tabulce 1.Several spheres in the N-terminal region of the HCV core of the protein are thus found to be epitopic. One of these regions, an immunological sphere epitope, is determined to a greater or lesser extent in all sera tested. The epitope of the immunological sphere is situated within residues 35-40 of the core protein having the amino acid sequence Tyr-Leu-Leu-Pro-Arg-Arg (YLLPRR) of SEQ ID NOS: 1 and 2. The results of the sample assays are shown in Table 1.
Tabulka 1Table 1
-9CZ 285834 B6-9EN 285834 B6
Tabulka 1 - pokračováníTable 1 - continued
Aminokyselinové zbytky jsou označovány kolem tvořeným jednotlivými písmeny (Eur. J.Amino acid residues are denoted around a single letter (Eur. J.
Biochem. 138, 9-37 /1984/). Podtržené charakteristiky představují oblast imunologické sféry.Biochem. 138, 9-37 (1984)]. The underlined characteristics represent the area of the immunological sphere.
Příklad 3Example 3
Způsob přípravy nové látky napodobující původní epitopA process for preparing a novel substance mimicking an original epitope
Substituční způsob síťování (replacement net method) se použije k sekvenční náhradě složek aminokyselinových zbytků v epitopu s každou z jiných geneticky zakódovaných aminokyselin.The replacement net method is used to sequentially replace the components of the amino acid residues in the epitope with each of the other genetically encoded amino acids.
Pro analýzu substitučního síťování základní sekvence vstoupí do software (Epitope Mapping Software), poskytnutého Cambridge Research Biochemicals, a vytvoří se soubor substituovaných peptidů. Tento proces se provádí pro šest aminokyselinových zbytků imunologické sféry jádra epitopu HCV. Peptidy se syntetizují na polypropylenovaných hrotech, podle pokynů výrobce (Cambridge Research Biochemicals). Zkušební struktura je stejná jako je uvedena pro PEPSCAN výše.To analyze the substitution cross-linking of the base sequence, it enters the software (Epitope Mapping Software) provided by Cambridge Research Biochemicals, and a set of substituted peptides is generated. This process is performed for the six amino acid residues of the immunological realm of the HCV epitope core. Peptides are synthesized on polypropylene tips according to the manufacturer's instructions (Cambridge Research Biochemicals). The test structure is the same as described for PEPSCAN above.
Uvažuje se se substitučním síťováním jádra v imunologické sféře epitopové sekvence Tyr-LeuLeu-Pro-Arg-Arg (YLLPRR) (SEQ ID č. 1 a 2) pomocí 12 placených dárců lidského séra, jak je popsáno výše.Substitution of the nucleus in the immunological domain of the epitope sequence Tyr-LeuLeu-Pro-Arg-Arg (YLLPRR) (SEQ ID Nos. 1 and 2) with 12 paid human serum donors is contemplated as described above.
Pro každou polohu v epitopu je dána frekvence každé substituce zbytku jako substituce přijatelné pro základní sekvenci. Substituované zbytky se pokládají za přijatelné, pokus signál nového peptidu činí 80 % základní sekvence nebo je větší.For each position in the epitope, the frequency of each residue substitution is given as a substitution acceptable for the base sequence. Substituted residues are considered acceptable if the signal of the new peptide is 80% or greater of the base sequence.
Na základě těchto výsledků, se dostanou substituované aminokyselinové zbytky pro každou polohu, které jsou nepravděpodobnější zesilující substitucí a jsou uvedeny v tabulce 2. Zbytky uvedené kurzivou se týkají základní sekvence.Based on these results, substituted amino acid residues for each position that are most likely to be amplified by substitution are given and are shown in Table 2. The italicized residues refer to the base sequence.
-10CZ 285834 B6-10GB 285834 B6
Tabulka 2Table 2
Příklad 4Example 4
Způsob přípravy AC 22Method of preparation AC 22
Plně chráněná peptidová pryskyřice se sestaví na p-hydroxymethylfenoxymethylové (HMP) pryskyřici postupnou syntézou v tuhé fázi (zpracováním od karboxylového koncového zbytku směrem k zbytku tvořenému koncovou aminoskupinou) podle obecného postupu uvedeného vApplied Biosystems User Bulletin, č. 33 /listopad 1990/. HMP pryskyřice se přenese do reakční nádoby (Applied Biosystems Peptide Synthesizer Model 431 A). Aminokyselinový zbytek s koncovými karboxyskupinami se kopuluje na pryskyřici za použití standardního postupu popsaného v popisu způsobu výroby Applied Biosystems Fastmoc Cycle Protocol. Nezreagovaná kopulující místa na pryskyřici se poté blokují tím, že se chrání anhydridem kyseliny benzoové. Všechny následující aminokyseliny se poté přidávají postupným způsobem, přičemž se pohybuje od konce obsahujícího karboxyskupinu ke konci tvořenému aminoskupinou, za použití výrobního postupu Applied Biosystems Fastmoc Cycle Protocol. Ν-α-Aminoskupina u všech peptidů je chráněna vazbou s 9-fluorfenylmethoxykarbonylovou (Fmoc) skupinou. Boční řetězce funkčních skupin příslušných aminokyselin jsou chráněny těmito skupinami:The fully protected peptide resin is assembled onto the p-hydroxymethylphenoxymethyl (HMP) resin by sequential solid phase synthesis (treatment from the carboxyl terminal residue to the amino terminal residue) according to the general procedure of Applicated Biosystems User Bulletin, No. 33 (November 1990). The HMP resin was transferred to a reaction vessel (Applied Biosystems Peptide Synthesizer Model 431 A). The carboxyl-terminated amino acid residue is coupled to the resin using the standard procedure described in the description of the Applied Biosystems Fastmoc Cycle Protocol. Unreacted coupling sites on the resin are then blocked by protecting with benzoic anhydride. All subsequent amino acids are then added sequentially, ranging from the carboxyl-containing end to the amino-end using the Applied Biosystems Fastmoc Cycle Protocol manufacturing procedure. The Ν-α-Amino group of all peptides is protected by binding to the 9-fluorophenylmethoxycarbonyl (Fmoc) group. The side chains of the functional groups of the respective amino acids are protected by the following groups:
-11CZ 285834 B6-11EN 285834 B6
Plně chráněná peptidová pryskyřice se přenese do láhve tvaru hrušky a zpracuje s 0,25 ml ethandithiolu, 0,5 ml thioanisolu, 0,5 ml vody a 8,75 ml kyseliny trifluoroctové. Směs se míchá za teploty místnosti po dobu 90 minut a poté filtruje přes skleněnou vlnu v Pasteurově pipetě. Filtrát se nakape do ledově chladného etheru, obsaženého v odstředivkové zkumavce Corex, načež se peptid vysráží. Obsah zkumavky se odstřeďuje a kapalina odsává, čímž se ve zkumavce získají pelety peptidů. Peptid se promyje etherem (za požití špachtle k odstranění agregace pelet) a peptid se dostane odstřeďováním. Tento postup se opakuje celkem šestkrát. Peptid se nakonec suší odstřeďováním za sníženého tlaku.The fully protected peptide resin is transferred to a pear-shaped bottle and treated with 0.25 ml of ethanedithiol, 0.5 ml of thioanisole, 0.5 ml of water and 8.75 ml of trifluoroacetic acid. The mixture was stirred at room temperature for 90 minutes and then filtered through a glass wool in a Pasteur pipette. The filtrate was dropped into ice-cold ether contained in a Corex centrifuge tube, whereupon the peptide precipitated. The contents of the tube are centrifuged and the liquid is aspirated to obtain peptide pellets in the tube. The peptide is washed with ether (using a spatula to remove pellet aggregation) and the peptide is recovered by centrifugation. This procedure is repeated a total of six times. Finally, the peptide is dried by centrifugation under reduced pressure.
Příklad 5Example 5
Vakcínový prostředekVaccine composition
Vakcínový prostředek se může připravit obvyklým technickým postupem za použití dále uvedených složek v daném množství.The vaccine composition may be prepared by conventional techniques using the following ingredients in a given amount.
HCV virový peptid (buď samotný jako delší polypeptid nebo s koktejlem z jiných peptidů) thiomersal chlorid sodný voda > 0,36 mgHCV viral peptide (either alone as a longer polypeptide or with a cocktail of other peptides) thiomersal sodium chloride water> 0.36 mg
0,04 až 0,2 mg < 8,5 mg < 1 ml0.04 to 0.2 mg <8.5 mg <1 ml
SEKVENČNÍ ZÁZNAMSEQUENCE RECORD
1) OBECNÉ INFORMACE1) GENERAL INFORMATION
i) PŘIHLAŠOVATEL:(i) APPLICANT:
A) JMÉNO: The Wellcome Foundation LimitedA) NAME: The Wellcome Foundation Limited
B) ULICE: Unicom House, 160 Euston Road,B) STREET: Unicom House, 160 Euston Road,
C) MĚSTO: LondýnC) CITY: London
D) ZEMĚ: Velká Británie(D) COUNTRY: United Kingdom
G) PSČ: NW1 2BP ii) NÁZEV VYNÁLEZU: Peptidy účinné proti vírové hepatitidě C iii) POČET SEKVENCÍ: 29 iv) FORMA DOSTUPNÉHO POČÍTAČE:G) ZIP Code: NW1 2BP ii) NAME OF THE INVENTION: Peptides effective against viral hepatitis C iii) NUMBER OF SEQUENCES: 29 iv) AVAILABLE COMPUTER FORM:
A) TYP MEDIA: disketaA) MEDIA TYPE: diskette
B) POČÍTAČ: IBM PC kompatibilníB) COMPUTER: IBM PC compatible
C) OPERAČNÍ SYSTÉM: PC-DOS/MS-DOSC) OPERATING SYSTEM: PC-DOS / MS-DOS
D) SOFTWARE: Patentln Release # 1.0, verse # 1.25 (EPO)D) SOFTWARE: PatentIn Release # 1.0, Version # 1.25 (EPO)
-12CZ 285834 B6-12GB 285834 B6
2) INFORMACE PRO SEQ ID č. 1:2) INFORMATION FOR SEQ ID No. 1:
i) SEKVENČNÍ CHARAKTERISTIKY:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
A) DÉLKA: 18 základních párůA) LENGTH: 18 base pairs
B) TYP: nukleová kyselinaB) TYPE: nucleic acid
C) rozvětvenost: jedináC) Branching: single
D) TOPOLOGIE: lineární ii) TYP MOLEKULY: cDNA ix) ZNAKY:D) TOPOLOGY: linear ii) MOLECULA TYPE: cDNA ix) FEATURES:
A) NÁZEV/KLÍČ: CDSA) NAME / KEY: CDS
B) UMÍSTĚNÍ: 1..18 xi) POPIS SEKVENCE: SEQ. ID č. 1:B) LOCATION: 1..18 xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ. Id 1:
TAC TTG TTG CCG CGC AGC 18TAC TTG TTG CCG
Tyr Leu Leu Pro Arg ArgTyr Leu Leu Arg Arg
55
2) INFORMACE PRO SEQ ID č. 2:2) INFORMATION FOR SEQ ID No. 2:
i) SEKVENČNÍ CHARAKTERISTIKY:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
A) DÉLKA: 6 aminokyselinA) LENGTH: 6 amino acids
B) TYP: aminokyselinaB) TYPE: amino acid
D) TOPOLOGIE: lineární ii) TYP MOLEKULY: protein xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID č. 2:D) TOPOLOGY: linear ii) MOLECULA TYPE: protein xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID No. 2:
Tyr Leu Leu Pro Arg ArgTyr Leu Leu Arg Arg
55
2) INFORMACE PRO SEQ ID č. 3:2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 3:
i) SEKVENČNÍ CHARAKTERISTIKY:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
A) DÉLKA: 6 aminokyselinA) LENGTH: 6 amino acids
B) TYP: aminokyselinaB) TYPE: amino acid
D) TOPOLOGIE: neznámá ii) TYP MOLEKULY: peptid ix) ZNAKY:D) TOPOLOGY: unknown ii) MOLECULA TYPE: peptide ix) FEATURES:
A) NÁZEV/KLÍČ: Modifikované vazební místoA) NAME / KEY: Modified binding site
B) UMÍSTĚNÍ: o něco vzadu (1)B) LOCATION: a little behind (1)
D) JINÉ INFORMACE: /poznámka: „Xaa“ představuje Tyr, Asp, Glu, Leu nebo Ile/D) OTHER INFORMATION: / Note: 'Xaa' represents Tyr, Asp, Glu, Leu or Ile /
-13CZ 285834 B6 ix) ZNAKY:-13GB 285834 B6 ix) FEATURES:
A) NÁZEV/KLÍČ: Modifikované vazební místoA) NAME / KEY: Modified binding site
B) UMÍSTĚNÍ: o něco vzadu (2)B) LOCATION: a little behind (2)
D) JINÉ INFORMACE: /poznámka: „Xaa“ představuje Leu, Cys, Asp nebo Glu/ ix) ZNAKY:D) OTHER INFORMATION: / Note: “Xaa” represents Leu, Cys, Asp or Glu / ix) FEATURES:
A) NÁZEV/KLÍČ: Modifikované vazební místoA) NAME / KEY: Modified binding site
B) UMÍSTĚNÍ: o něco vzadu (3)B) LOCATION: a little behind (3)
D) JINÉ INFORMACE: /poznámka: „Xaa“ představuje Leu nebo Ile/ ix) ZNAKY:D) OTHER INFORMATION: / Note: “Xaa” represents Leu or Ile / ix) FEATURES:
A) NÁZEV/KLÍČ: Modifikované vazební místoA) NAME / KEY: Modified binding site
B) UMÍSTĚNÍ: o něco vzadu (4)B) LOCATION: A little behind (4)
D) JINÉ INFORMACE: /poznámka: „Xaa“ představuje Pro nebo Met/ ix) ZNAKY:D) OTHER INFORMATION: / Note: “Xaa” represents Pro or Met / ix) CHARACTERS:
A) NÁZEV/KLÍČ: Modifikované vazební místoA) NAME / KEY: Modified binding site
B) UMÍSTĚNÍ: o něco vzadu (5)B) LOCATION: A little behind (5)
D) JINÉ INFORMACE: /poznámka: „Xaa“ představuje Arg, Asp, Glu, Pro, Cys, Phe, Ile, Asn, Gin nebo Ile/ ix) ZNAKY:D) OTHER INFORMATION: / Note: 'Xaa' represents Arg, Asp, Glu, Pro, Cys, Phe, Ile, Asn, Gin or Ile / ix)
A) NÁZEV/KLÍČ: Modifikované vazební místoA) NAME / KEY: Modified binding site
B) UMÍSTĚNÍ: o něco vzadu (6)B) LOCATION: A little behind (6)
D) JINÉ INFORMACE: /poznámka: „Xaa“ představuje Arg, Asp, Glu, Ser nebo Cys/ xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID č. 3:D) OTHER INFORMATION: / note: "Xaa" represents Arg, Asp, Glu, Ser or Cys / xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 3:
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa XaaXaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
55
2) INFORMACE PRO SEQ ID ě. 4:2) INFORMATION FOR SEQ ID NO. 4:
i) SEKVENČNÍ CHARAKTERISTIKY:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
A) DÉLKA: 51 základních párůA) LENGTH: 51 base pairs
B) TYP: nukleová kyselinaB) TYPE: nucleic acid
C) rozvětvenost: jedináC) Branching: single
D) TOPOLOGIE: lineární ii) TYP MOLEKULY: cDNA ix) ZNAKY:D) TOPOLOGY: linear ii) MOLECULA TYPE: cDNA ix) FEATURES:
A) NÁZEV/KLÍČ: CDSA) NAME / KEY: CDS
B) UMÍSTĚNÍ: 1..51B) LOCATION: 1..51
D) JINÉ INFORMACE: /poznámka: „Nukleotidy 1-3“ jsou ne-HCV původu/ xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID č. 4:D) OTHER INFORMATION: / Note: "Nucleotides 1-3" are of non-HCV origin / xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 4:
TGC CAG ATC GTT GGT GGA GTT TAC TTG TTG CCG CGC AGG GGC 42TGC CAG ATC GTG GGT GGA GTG TAC TTG TTG CCG
Cys Gin Ile Val Gly Gly Val Tyr Leu Leu Pro Arg Arg GlyCys Gin Val Gly Gly Val Tyr Leu Leu For Arg Arg Gly
5 105 10
-14CZ 285834 B6-14EN 285834 B6
CCT AGA TTGCCT AGA TTG
Pro Arg LeuFor Arg Leu
2) INFORMACE PRO SEQ ID č. 5:2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 5:
i) SEKVENČNÍ CHARAKTERISTIKY:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
A) DÉLKA: 17 aminokyselinA) LENGTH: 17 amino acids
B) TYP: aminokyselinaB) TYPE: amino acid
D) TOPOLOGIE: lineární ii) TYP MOLEKULY: protein xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID č. 5:D) TOPOLOGY: linear ii) MOLECULA TYPE: protein xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 5:
Cys Gin Ile Val Gly Gly Val Tyr Leu Leu Pro Arg Arg Gly ProCys Gin Val Gly Gly Val Tyr Leu Leu Arg Arg Gly Pro
10 1510 15
Arg LeuArg Leu
2) INFORMACE PRO SEQ ID č. 6:2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 6:
i) SEKVENČNÍ CHARAKTERISTIKY:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
A) DÉLKA: 51 základních párůA) LENGTH: 51 base pairs
B) TYP: nukleová kyselinaB) TYPE: nucleic acid
C) rozvětvenost: jedináC) Branching: single
D) TOPOLOGIE: lineární ii) TYP MOLEKULY: cDNA ix) ZNAKY:D) TOPOLOGY: linear ii) MOLECULA TYPE: cDNA ix) FEATURES:
A) NÁZEV/KLÍČ: CDSA) NAME / KEY: CDS
B) UMÍSTĚNÍ: 1..51B) LOCATION: 1..51
D) JINÉ INFORMACE: /poznámka: „Nukleotidy 49 až 51“ jsou ne-HCV původu/ xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID č. 6:D) OTHER INFORMATION: / Note: "Nucleotides 49 to 51" are of non-HCV origin / xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 6:
CAG ATC GTT GGT GGA GTT TAC TTG TTG CCG CGC AGG GGC CCT 42CAG ATG GTG GGT GGA GTG TCT TTG TTG
Gin Ile Val Gly Gly Val Tyr Leu Leu Pro Arg Arg Gly ProGin Ile Gly Gly Gly Val Tyr Leu Leu Arg Arg Gly Pro
5 105 10
AGA TTG TGCAGA TTG TGC
Arg Leu CysArg Leu Cys
2) INFORMACE PRO SEQ ID č. 7:2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 7:
i) SEKVENČNÍ CHARAKTERISTIKY:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
A) DÉLKA: 17 aminokyselinA) LENGTH: 17 amino acids
B) TYP: aminokyselinaB) TYPE: amino acid
D) TOPOLOGIE: lineární ii) TYP MOLEKULY: proteinD) TOPOLOGY: linear ii) MOLECULA TYPE: protein
CŽ 285834 B6 xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID č. 7:285834 B6 (xi) SEQ ID NO: 7:
Gin Ile Val Gly Gly Val Tyr Leu Leu Pro Arg Arg Gly Pro Arg 15 10 15Gly Ile Gly Gly Gly Val Tyr Leu Leu Arg Arg Gly Pro Arg 15 10 15
Leu CysLeu Cys
2) INFORMACE PRO SEQ ID č. 8:2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 8:
i) SEKVENČNÍ CHARAKTERISTIKY:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
A) DÉLKA: 97 aminokyselinA) LENGTH: 97 amino acids
B) TYP: aminokyselinaB) TYPE: amino acid
D) TOPOLOGIE: neznámá ii) TYP MOLEKULY: peptid ix) POPIS SEKVENCE: SEQ ID č. 8:D) TOPOLOGY: unknown ii) MOLECULA TYPE: peptide ix) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 8:
Met Ser Thr Asn Pro Lys Pro Gin Arg Lys Thr Lys Arg Asn Thr Asn 1 5 1015Met Ser Thr Asn Lys Pro Gin Arg Lys Thr Lys Arg Asn Thr Asn 1 5 1015
Arg Arg Pro Gin Asp Val Lys Phe Pro Gly Gly Gly Gin Ile Val Gly 20 2530Arg Arg Gin Gle Gly Gly Gly Gle Gle Gle 20 2530
Gly Val Tyr Leu Leu Pro Arg Arg Gly Pro Arg Leu Gly Val Arg Ala 35 4045Gly Val Tyr Gly Val Arg Ala Gly Val Arg Ala 35 4045
Thr Arg Lys Thr Ser Glu Arg Ser Gin Pro Arg Gly Arg Arg Gin Pro 50 5060Thr Arg Lys Thr Arg Glu Arg Arg Gin Arg Arg Gin Arg 50 5060
Ile Pro Lys Ala Arg Arg Pro Glu Gly Arg Thr Trp Ala Gin ProGlyIle Pro Lys Ala Arg Pro Glu Gly Arg Thr Trp Ala Gin ProGly
70 758070 7580
Tyr Pro Trp Pro Leu Tyr Gly Asn Glu Gly Leu Gly Trp Ala GlyTrpTyr Pro Trp Pro Leu Gly Asn Glu Gly Leu Gly Trp Ala GlyTrp
90959095
LeuLeu
2) INFORMACE PRO SEQ ID č. 9:2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 9:
i) SEKVENČNÍ CHARAKTERISTIKY:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
A) DÉLKA: 8 aminokyselinA) LENGTH: 8 amino acids
B) TYP: aminokyselinaB) TYPE: amino acid
D) TOPOLOGIE: neznámá ii) TYP MOLEKULY: peptid xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID č. 9:D) TOPOLOGY: unknown ii) MOLECULA TYPE: peptide xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID No. 9:
Gly Val Tyr Leu Leu Pro Arg ArgGly Val Tyr Leu Le Arg Arg
55
2) INFORMACE PRO SEQ ID č. 10:2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 10:
i) SEKVENČNÍ CHARAKTERISTIKY:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
A) DÉLKA: 8 aminokyselinA) LENGTH: 8 amino acids
B) TYP: aminokyselinaB) TYPE: amino acid
D) TOPOLOGIE: neznámá ii) TYP MOLEKULY: peptidD) TOPOLOGY: unknown ii) MOLECULA TYPE: peptide
-16CZ 285834 B6 xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID č. 10:-16GB 285834 B6 (xi) SEQ ID NO: 10:
Val Tyr Leu Leu Pro Arg Arg GlyVal Tyr Leu Leu Arg Arg Gly
55
2) INFORMACE PRO SEQ ID č. 11:2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 11:
i) SEKVENČNÍ CHARAKTERISTIKY:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
A) DÉLKA: 8 aminokyselinA) LENGTH: 8 amino acids
B) TYP: aminokyselina D) TOPOLOGIE: neznámá ii) TYP MOLEKULY: peptid xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID č. 11:B) TYPE: amino acid D) TOPOLOGY: unknown ii) MOLECULA TYPE: peptide xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID No. 11:
Tyr Leu Leu Pro Arg Arg Gly ProTyr Leu Leu Arg Arg Gly Pro
55
2) INFORMACE PRO SEQ ID č. 12:2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 12:
i) SEKVENČNÍ CHARAKTERISTIKY:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
A) DÉLKA: 8 aminokyselinA) LENGTH: 8 amino acids
B) TYP: aminokyselina D) TOPOLOGIE: neznámá ii) TYP MOLEKULY: peptid xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID č. 12:B) TYPE: amino acid D) TOPOLOGY: unknown ii) MOLECULA TYPE: peptide xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 12:
Gly Gly Gly Gin Ile Val Gly GlyGly Gly
55
2) INFORMACE PRO SEQ ID č. 13:2) INFORMATION FOR SEQ ID No. 13:
i) SEKVENČNÍ CHARAKTERISTIKY:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
A) DÉLKA: 8 aminokyselinA) LENGTH: 8 amino acids
B) TYP: aminokyselina D) TOPOLOGIE: neznámá ii) TYP MOLEKULY: peptid xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID č. 13:B) TYPE: amino acid D) TOPOLOGY: unknown ii) MOLECULA TYPE: peptide xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID No. 13:
Gly Gly Gin Ile Val Gly Gly ValGly Gly Gin Val Gly Gly Val
55
2) INFORMACE PRO SEQ ID č. 14:2) INFORMATION FOR SEQ ID No. 14:
i) SEKVENČNÍ CHARAKTERISTIKY:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
A) DÉLKA: 8 aminokyselinA) LENGTH: 8 amino acids
B) TYP: aminokyselina D) TOPOLOGIE: neznámáB) TYPE: amino acid D) TOPOLOGY: unknown
-17CZ 285834 B6 ii) TYP MOLEKULY: peptid xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID č. 14:-17EN 285834 B6 ii) MOLECULA TYPE: peptide xi) SEQ ID NO: 14:
Gly Gin Ile Val Gly Gly Val TyrGly Gin Gly Gly Val Tyr
55
2) INFORMACE PRO SEQ ID č. 15:2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 15:
i) SEKVENČNÍ CHARAKTERISTIKY:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
A) DÉLKA: 8 aminokyselinA) LENGTH: 8 amino acids
B) TYP: aminokyselina D) TOPOLOGIE: neznámá ii) TYP MOLEKULY: peptid xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID č. 15:B) TYPE: amino acid D) TOPOLOGY: unknown ii) MOLECULA TYPE: peptide xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID No. 15:
Gin Ile Val Gly Gly Val Tyr LeuGin Ile Val
55
2) INFORMACE PRO SEQ ID č. 16:2) INFORMATION FOR SEQ ID No. 16:
i) SEKVENČNÍ CHARAKTERISTIKY:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
A) DÉLKA: 8 aminokyselinA) LENGTH: 8 amino acids
B) TYP: aminokyselina D) TOPOLOGIE: neznámá ii) TYP MOLEKULY: peptid xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID č. 16:B) TYPE: amino acid D) TOPOLOGY: unknown ii) MOLECULA TYPE: peptide xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID No. 16:
Ile Val Gly Gly Val Tyr Leu LeuIle Val Gly Gly Val Tyr Leu Leu
55
2) INFORMACE PRO SEQ ID č. 17:2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 17:
i) SEKVENČNÍ CHARAKTERISTIKY:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
A) DÉLKA: 8 aminokyselinA) LENGTH: 8 amino acids
B) TYP: aminokyselina D) TOPOLOGIE: neznámá ii) TYP MOLEKULY: peptid xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID č. 17:B) TYPE: amino acid D) TOPOLOGY: unknown ii) MOLECULA TYPE: peptide xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID No. 17:
Val Gly Gly Val Tyr Leu Leu ProVal Gly Gly Val Tyr Leu Leu Pro
55
-18CZ 285834 B6-18EN 285834 B6
2) INFORMACE PRO SEQ ID č. 18:2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 18:
i) SEKVENČNÍ CHARAKTERISTIKY:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
A) DÉLKA: 8 aminokyselinA) LENGTH: 8 amino acids
B) TYP: aminokyselinaB) TYPE: amino acid
D) TOPOLOGIE: neznámá ii) TYP MOLEKULY: peptid ix) ZNAKY:D) TOPOLOGY: unknown ii) MOLECULA TYPE: peptide ix) FEATURES:
A) NÁZEV/KLÍČ: oblastA) NAME / KEY: area
B) UMÍSTĚNÍ: 4..8B) LOCATION: 4..8
D) JINÉ INFORMACE: /poznámka: „Imunodominantní oblast“/ xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID č. 18:D) OTHER INFORMATION: / Note: "Immunodominant region" / xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID No. 18:
Gly Gly Val Tyr Leu Leu Pro ArgGly Gly Val Leu Leu Pro Arg
55
2) INFORMACE PRO SEQ ID č. 19:2) INFORMATION FOR SEQ ID No. 19:
i) SEKVENČNÍ CHARAKTERISTIKY:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
A) DÉLKA: 8 aminokyselinA) LENGTH: 8 amino acids
B) TYP: aminokyselinaB) TYPE: amino acid
D) TOPOLOGIE: neznámá ii) TYP MOLEKULY: peptid ix) ZNAKY:D) TOPOLOGY: unknown ii) MOLECULA TYPE: peptide ix) FEATURES:
A) NÁZEV/KLÍČ: oblastA) NAME / KEY: area
B) UMÍSTĚNÍ: 3..8B) LOCATION: 3..8
D) JINÉ INFORMACE: /poznámka: „Imunodominantní oblast“/ xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID č. 19:D) OTHER INFORMATION: / Note: "Immunodominant region" / xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID No. 19:
Gly Val Tyr Leu Leu Pro Arg ArgGly Val Tyr Leu Le Arg Arg
55
2) INFORMACE PRO SEQ ID č. 20:2) INFORMATION FOR SEQ ID No. 20:
i) SEKVENČNÍ CHARAKTERISTIKY:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
A) DÉLKA: 8 aminokyselinA) LENGTH: 8 amino acids
B) TYP: aminokyselinaB) TYPE: amino acid
D) TOPOLOGIE: neznámá ii) TYP MOLEKULY: peptid ix) ZNAKY:D) TOPOLOGY: unknown ii) MOLECULA TYPE: peptide ix) FEATURES:
A) NÁZEV/KLÍČ: oblastA) NAME / KEY: area
B) UMÍSTĚNÍ: 2..7B) LOCATION: 2..7
D) JINÉ INFORMACE: /poznámka: „Imunodominantní oblast“/D) OTHER INFORMATION: / Note: 'Immunodominant area' /
-19CZ 285834 B6 xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID č. 20:-19EN 285834 B6 (xi) SEQ ID NO: 20:
Val Tyr Leu Leu Pro Arg Arg GlyVal Tyr Leu Leu Arg Arg Gly
55
2) INFORMACE PRO SEQ ID č. 21:2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 21:
i) SEKVENČNÍ CHARAKTERISTIKY:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
A) DÉLKA: 8 aminokyselinA) LENGTH: 8 amino acids
B) TYP: aminokyselinaB) TYPE: amino acid
D) TOPOLOGIE: neznámá ii) TYP MOLEKULY: peptid ix) ZNAKY:D) TOPOLOGY: unknown ii) MOLECULA TYPE: peptide ix) FEATURES:
A) NÁZEV/KLÍČ: oblastA) NAME / KEY: area
B) UMÍSTĚNÍ: 1..6B) LOCATION: 1..6
D) JINÉ INFORMACE: /poznámka: „Imunodominantní oblast“/ xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID č. 21:D) OTHER INFORMATION: / Note: "Immunodominant region" / xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 21:
Tyr Leu Leu Pro Arg Arg Gly ProTyr Leu Leu Arg Arg Gly Pro
55
2) INFORMACE PRO SEQ ID č. 22:2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 22:
i) SEKVENČNÍ CHARAKTERISTIKY:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
A) DÉLKA: 8 aminokyselinA) LENGTH: 8 amino acids
B) TYP: aminokyselinaB) TYPE: amino acid
D) TOPOLOGIE: neznámá ii) TYP MOLEKULY: peptid xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID č. 22:D) TOPOLOGY: unknown ii) MOLECULA TYPE: peptide xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID No. 22:
Leu Leu Pro Arg Arg Gly Pro ArgLeu Leu Arg Arg Gly Pro Arg
55
2) INFORMACE PRO SEQ ID č. 23:2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 23:
i) SEKVENČNÍ CHARAKTERISTIKY:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
A) DÉLKA: 8 aminokyselinA) LENGTH: 8 amino acids
B) TYP: aminokyselinaB) TYPE: amino acid
D) TOPOLOGIE: neznámá ii) TYP MOLEKULY: peptid xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID č. 23:D) TOPOLOGY: unknown ii) MOLECULA TYPE: peptide xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 23:
Leu Pro Arg Arg Gly Pro Arg LeuLeu Arg Arg Gly Pro Arg Leu
55
-20CZ 285834 B6-20EN 285834 B6
2) INFORMACE PRO SEQ ID č. 24:2) INFORMATION FOR SEQ ID No. 24:
i) SEKVENČNÍ CHARAKTERISTIKY:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
A) DÉLKA: 8 aminokyselinA) LENGTH: 8 amino acids
B) TYP: aminokyselina D) TOPOLOGIE: neznámá ii) TYP MOLEKULY: peptid xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID č. 24:B) TYPE: amino acid D) TOPOLOGY: unknown ii) MOLECULA TYPE: peptide xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID No. 24:
Pro Arg Arg Gly Pro Arg Leu GlyFor Arg Arg Gly For Arg Leu Gly
55
2) INFORMACE PRO SEQ ID č. 25:2) INFORMATION FOR SEQ ID No. 25:
i) SEKVENČNÍ CHARAKTERISTIKY:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
A) DÉLKA: 8 aminokyselinA) LENGTH: 8 amino acids
B) TYP: aminokyselina D) TOPOLOGIE: neznámá ii) TYP MOLEKULY: peptid xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID č. 25:B) TYPE: amino acid D) TOPOLOGY: unknown ii) MOLECULA TYPE: peptide xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID No. 25:
Arg Arg Gly Pro Arg Leu Gly ValArg Arg Gly For Arg Leu Gly Val
55
2) INFORMACE PRO SEQ ID č. 26:2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 26:
i) SEKVENČNÍ CHARAKTERISTIKY:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
A) DÉLKA: 8 aminokyselinA) LENGTH: 8 amino acids
B) TYP: aminokyselina D) TOPOLOGIE: neznámá ii) TYP MOLEKULY: peptid xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID č. 26:B) TYPE: amino acid D) TOPOLOGY: unknown ii) MOLECULA TYPE: peptide xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID No. 26:
Arg Gly Pro Arg Leu Gly Val Arg 1 5Arg Gly For Arg Leu Gly Val Arg 1
2) INFORMACE PRO SEQ ID č. 27:2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 27:
i) SEKVENČNÍ CHARAKTERISTIKY:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
A) DÉLKA: 8 aminokyselinA) LENGTH: 8 amino acids
B) TYP: aminokyselina D) TOPOLOGIE: neznámá ii) TYP MOLEKULY: peptidB) TYPE: amino acid D) TOPOLOGY: unknown ii) MOLECULA TYPE: peptide
-21CZ 285834 B6 xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID č. 27:-21EN 285834 B6 (xi) SEQ ID NO: 27:
Gly Pro Arg Leu Giy Val Arg AlaGly Pro Arg
55
2) INFORMACE PRO SEQ ID č. 28:2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 28:
i) SEKVENČNÍ CHARAKTERISTIKY:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
A) DÉLKA: 8 aminokyselinA) LENGTH: 8 amino acids
B) TYP: aminokyselinaB) TYPE: amino acid
D) TOPOLOGIE: neznámá ii) TYP MOLEKULY: peptid xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID č. 28:D) TOPOLOGY: unknown ii) MOLECULA TYPE: peptide xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 28:
Pro Ag Leu Gly Val Arg Ala ThrPro Ag Leu, Gly Val Arg Ala Thr
55
2) INFORMACE PRO SEQ ID č. 29:2) INFORMATION FOR SEQ ID NO: 29:
i) SEKVENČNÍ CHARAKTERISTIKY:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:
A) DÉLKA: 8 aminokyselinA) LENGTH: 8 amino acids
B) TYP: aminokyselinaB) TYPE: amino acid
D) TOPOLOGIE: neznámá ii) TYP MOLEKULY: peptid xi) POPIS SEKVENCE: SEQ ID č. 29:D) TOPOLOGY: unknown ii) MOLECULA TYPE: peptide xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 29:
Arg Leu Gly Val Arg Ala Thr ArgArg Leu Gly Val
Claims (9)
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB929204274A GB9204274D0 (en) | 1992-02-28 | 1992-02-28 | Novel peptides |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ206894A3 CZ206894A3 (en) | 1995-03-15 |
| CZ285834B6 true CZ285834B6 (en) | 1999-11-17 |
Family
ID=10711198
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ942068A CZ285834B6 (en) | 1992-02-28 | 1993-02-26 | Peptide, encoded dna, expression vector, host cell, process for preparing the peptide, antibody, method of its detection and vaccine |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0628079A1 (en) |
| JP (1) | JPH07504562A (en) |
| AU (1) | AU688259B2 (en) |
| CA (1) | CA2131028A1 (en) |
| CZ (1) | CZ285834B6 (en) |
| FI (1) | FI943929A0 (en) |
| GB (1) | GB9204274D0 (en) |
| SK (1) | SK103594A3 (en) |
| WO (1) | WO1993017111A1 (en) |
| ZA (1) | ZA931299B (en) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2711670B1 (en) | 1993-10-22 | 1996-01-12 | Pasteur Institut | Nucleotide vector, composition containing it and vaccine for immunization against hepatitis. |
| EP0829488A4 (en) * | 1995-04-28 | 1999-04-07 | Srl Inc | Antigen peptide compound and immunoassay method |
| FR2775690B1 (en) * | 1998-03-09 | 2001-12-14 | Bio Merieux | MONOCLONAL ANTIBODIES AND USES TO DETECT CORE PROTEIN ANTIGENS OF HCV |
| CA2316130A1 (en) * | 1999-08-19 | 2001-02-19 | Masanori Fukui | Method for detection or determination of hcv core antigens and reagent for detection or determination for use therein |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| HUT59964A (en) * | 1989-05-18 | 1992-07-28 | Chiron Corp | Process for producing new nanbv diagnostica for determining hepatitis c virus |
| KR940000755B1 (en) * | 1990-02-16 | 1994-01-29 | 유나이티드 바이오메디칼 인코오포레이티드 | Synthetic peptides specific for the detection of antibodies to hcv |
| DE69232871T2 (en) * | 1991-06-24 | 2003-05-08 | Chiron Corp | HEPATITIS C-VIRUS POLYPEPTIDES (HIV) |
-
1992
- 1992-02-28 GB GB929204274A patent/GB9204274D0/en active Pending
-
1993
- 1993-01-01 SK SK1035-94A patent/SK103594A3/en unknown
- 1993-02-24 ZA ZA931299A patent/ZA931299B/en unknown
- 1993-02-26 EP EP93904270A patent/EP0628079A1/en not_active Withdrawn
- 1993-02-26 AU AU35725/93A patent/AU688259B2/en not_active Ceased
- 1993-02-26 CA CA002131028A patent/CA2131028A1/en not_active Abandoned
- 1993-02-26 WO PCT/GB1993/000410 patent/WO1993017111A1/en not_active Application Discontinuation
- 1993-02-26 CZ CZ942068A patent/CZ285834B6/en not_active IP Right Cessation
- 1993-02-26 JP JP5514676A patent/JPH07504562A/en active Pending
-
1994
- 1994-08-26 FI FI943929A patent/FI943929A0/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU688259B2 (en) | 1998-03-12 |
| WO1993017111A1 (en) | 1993-09-02 |
| AU3572593A (en) | 1993-09-13 |
| SK103594A3 (en) | 1995-06-07 |
| EP0628079A1 (en) | 1994-12-14 |
| FI943929A (en) | 1994-08-26 |
| ZA931299B (en) | 1993-10-13 |
| CZ206894A3 (en) | 1995-03-15 |
| CA2131028A1 (en) | 1993-09-02 |
| GB9204274D0 (en) | 1992-04-08 |
| FI943929A0 (en) | 1994-08-26 |
| JPH07504562A (en) | 1995-05-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6210675B1 (en) | PT-NANB hepatitis polypeptides | |
| RU2130969C1 (en) | Composition for diagnosis of human hepatitis c (variants), method and set for detection of antibodies to human hepatitis c virus | |
| US7198892B2 (en) | Hepatitis-C virus type 4, 5 and 6 | |
| US6312889B1 (en) | Combinations of hepatitis c virus (HCV) antigens for use in immunoassays for anti-HCV antibodies | |
| US5683864A (en) | Combinations of hepatitis C virus (HCV) antigens for use in immunoassays for anti-HCV antibodies | |
| RU2155228C2 (en) | Genome sequence of hepatitis c virus for diagnostic and therapeutic aims | |
| AU652851B2 (en) | Hepatitis C virus from C-100-3 and env/core regions | |
| EP0642666B2 (en) | Hepatitis c assay | |
| EP0697888B1 (en) | Conserved motif of hepatitis c virus e2/ns1 region | |
| JP2666903B2 (en) | HCV peptide antigen and method for measuring HCV | |
| WO1995000670A1 (en) | Linear and branched peptides effective in diagnosing and detecting non-a, non-b hepatitis | |
| WO1993017110A2 (en) | A recombinant hepatitis c virus polypeptide | |
| CZ285834B6 (en) | Peptide, encoded dna, expression vector, host cell, process for preparing the peptide, antibody, method of its detection and vaccine | |
| US20020150990A1 (en) | Hepatitis C virus peptides | |
| EP0525910A1 (en) | Non-A, non-B peptide | |
| US7166287B1 (en) | Viral agent | |
| AU639560C (en) | Combinations of hepatitis C virus (HCV) antigens for use in immunoassays for anti-HCV antibodies | |
| PT96223B (en) | PROCESS FOR THE PREPARATION OF A VIRAL AGENT RESPONSIBLE FOR HEPATITIS NAO-A BNAO-B POST-TRANSFUSION |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| IF00 | In force as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20040226 |