CZ28294A3 - Immunostimulation - Google Patents
Immunostimulation Download PDFInfo
- Publication number
- CZ28294A3 CZ28294A3 CS94282A CS2829492A CZ28294A3 CZ 28294 A3 CZ28294 A3 CZ 28294A3 CS 94282 A CS94282 A CS 94282A CS 2829492 A CS2829492 A CS 2829492A CZ 28294 A3 CZ28294 A3 CZ 28294A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- antigens
- antigen
- trat
- hiv
- composition
- Prior art date
Links
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 title description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 151
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 151
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 150
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 44
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 35
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 34
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 30
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 29
- 108010079246 OMPA outer membrane proteins Proteins 0.000 claims abstract description 28
- 108700006385 OmpF Proteins 0.000 claims abstract description 23
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims abstract description 12
- 101800001690 Transmembrane protein gp41 Proteins 0.000 claims description 41
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 28
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 18
- 229960003983 diphtheria toxoid Drugs 0.000 claims description 17
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 claims description 17
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 12
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 11
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 claims description 9
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 claims description 7
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 claims description 7
- 201000005702 Pertussis Diseases 0.000 claims description 7
- 241000233870 Pneumocystis Species 0.000 claims description 7
- 201000005485 Toxoplasmosis Diseases 0.000 claims description 7
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 claims description 7
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 7
- 201000000317 pneumocystosis Diseases 0.000 claims description 7
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 7
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 7
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims description 7
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 claims description 6
- 208000000474 Poliomyelitis Diseases 0.000 claims description 5
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 claims description 5
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims description 5
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 claims description 5
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 claims description 4
- 230000003915 cell function Effects 0.000 claims description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 3
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 15
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 abstract description 13
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 abstract description 5
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 abstract 3
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 abstract 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 abstract 1
- 206010001513 AIDS related complex Diseases 0.000 description 32
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 27
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 27
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 26
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 25
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 22
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 22
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 19
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 12
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 12
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 12
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 9
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 9
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 9
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 9
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 7
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 6
- 101710116435 Outer membrane protein Proteins 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 5
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 5
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 4
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 4
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 4
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000007766 Kaposi sarcoma Diseases 0.000 description 3
- 208000001388 Opportunistic Infections Diseases 0.000 description 3
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- LGGRPYXPOUIMKG-OJICBBQQSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S,3R)-2-[[2-[[(2S,3S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-6-amino-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-1-[2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-amino-3-hydroxybutanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]hexanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]hexanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-4-yl)propanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]acetyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]acetyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]propanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]hexanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-N-[(2S)-1-[[(2S)-1-amino-3-(1H-imidazol-4-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]pentanediamide Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N2CCC[C@H]2C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC3=CC=CC=C3)C(=O)N[C@@H](CC4=CC=C(C=C4)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC5=CNC=N5)C(=O)N)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC6=CC=C(C=C6)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@@H]7CCCN7C(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)N LGGRPYXPOUIMKG-OJICBBQQSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 210000003359 CD4-positive helper T lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 2
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 2
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 210000000662 T-lymphocyte subset Anatomy 0.000 description 2
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 2
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000035584 blastogenesis Effects 0.000 description 2
- 210000004970 cd4 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 2
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000001589 lymphoproliferative effect Effects 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 244000039328 opportunistic pathogen Species 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124718 AIDS vaccine Drugs 0.000 description 1
- FRBAHXABMQXSJQ-FXQIFTODSA-N Arg-Ser-Ser Chemical group [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FRBAHXABMQXSJQ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 206010014824 Endotoxic shock Diseases 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 229940033330 HIV vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 241000598436 Human T-cell lymphotropic virus Species 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 1
- 208000008771 Lymphadenopathy Diseases 0.000 description 1
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 108010092262 T-Cell Antigen Receptors Proteins 0.000 description 1
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000036436 anti-hiv Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 229940124522 antiretrovirals Drugs 0.000 description 1
- 239000003903 antiretrovirus agent Substances 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 108091036078 conserved sequence Proteins 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000012997 ficoll-paque Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000033687 granuloma formation Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000008004 immune attack Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000001571 immunoadjuvant effect Effects 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 239000000568 immunological adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000002434 immunopotentiative effect Effects 0.000 description 1
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 208000018555 lymphatic system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 210000003071 memory t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002969 morbid Effects 0.000 description 1
- 230000001459 mortal effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000007425 progressive decline Effects 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000013777 protein digestion Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 208000021160 simian immunodeficiency virus infection Diseases 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N zidovudine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](N=[N+]=[N-])C1 HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 229960002555 zidovudine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/164—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55516—Proteins; Peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55544—Bacterial toxins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
- C12N2740/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Virology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
Vynález se týká použití kostimulačních induktorů k zesílení nebo podpoření imunitní odpovědi u pacientů s nedostatečností funkce T buněk, zejména pomocných T buněk, a nových prostředků, vhodných k zesilování reaktivity T buněk, zejména pomocných T buněk. Blíže se vynález týká použití proteinů OmpA, OmpF nebo TraT vnější membrány E. coli k zesílení imunitní odpovědi vůči antigenům u imunokompromizovaných jedinců a prostředků, obsahujících tyto proteiny.The invention relates to the use of costimulatory inducers to enhance or support the immune response in patients with T cell insufficiency, particularly helper T cells, and to novel compositions suitable for enhancing the reactivity of T cells, particularly helper T cells. More particularly, the invention relates to the use of the OmpA, OmpF or TraT outer membrane proteins of E. coli to enhance the immune response to antigens in immunocompromised individuals and compositions comprising these proteins.
Dosavadní stav technikyBACKGROUND OF THE INVENTION
Během vývinu imunitní odpovědi je nutný určitý typ T buňky, známý jak pomocná T buňka, který nese fenotyp CD4, k napomáhání při diferenciaci B buňky na plasmovou buňku, která pak vylučuje rozpustnou protilátku. Než dojde k jejich aktivaci a proliferaci, musejí pomocné T buňky, s pomocí receptoru T buněk a dalších doprovodných molekul, nejprve rozpoznat antigeny na povrchu buněk, obsahujících antigeny (antigen-presenting cells, APC), jako jsou makrofágy, dendritické buňky nebo B buňky. Novější data jsou konsistentní s hypotézou, že T buňky vyžadují k aktivaci dva signály. Jeden signál je vydáván jako výsledek vazby peptidu k molekule hlavního histokompatibilitního komplexu (Major histocompatibility complex, MHC) třídy II na APC a následující interakce tohoto komplexu MHC-peptid s receptorem T buňky. Obsazení receptoru T buňky a s ním spojené biochemické důsledky, i když jsou nezbytnou podmínkou, nepostačují k vyvolání aktivace T buňky. Většina buněk vyžaduje ještě od APC druhý signál nebo pomocnou stimulační molekulu (kostimulátor) (Lafferty,During the development of an immune response, a certain type of T cell, known as a helper T cell that carries the CD4 phenotype, is required to assist in B cell differentiation into a plasma cell, which then secretes a soluble antibody. Before their activation and proliferation, T helper cells must first recognize antigens on the surface of antigen-presenting cells (APCs), such as macrophages, dendritic cells or B cells, with the help of T cell receptors and other accompanying molecules. . More recent data is consistent with the hypothesis that T cells require two signals to activate. One signal is given as a result of binding of the peptide to the Major Histocompatibility Complex (MHC) class II molecule on APC and subsequent interaction of this MHC-peptide complex with the T cell receptor. The occupation of the T cell receptor and the associated biochemical consequences, although necessary, are not sufficient to induce T cell activation. Most cells require a second signal from APC or a co-stimulator (Lafferty,
K.J., Prowse, S.J., a Simeonovic, C.J., 1983, Immunobiology of tissue transplantation: A return to the passenger leukocyte concept, Ann. Rev. Immunol. 1, 43, Mueller, D.L., Jenkins, M.K., a Schwartz, R.H., 1989, Clonal expansion versus functional clonal inactivation: a costimulatory signalling pathway determines the outcome of T cell antigen receptor occupancy, Ann. Rev. Immunol. 7, 445). Bakteriální produkty, jako je LPS a BCG, které, jak se zjistilo, vyvolávají u APC kostimulační aktivitu, jsou známy jako kostimulační induktory (Janeway,K.J., Prowse, S.J., and Simeonovic, C.J., 1983, Immunobiology of Tissue Transplantation: A Return to the Passenger Leukocyte Concept, Ann. Roar. Immunol. 1, 43, Mueller, D.L., Jenkins, M.K., and Schwartz, R.H., 1989, Clonal expansion versus functional clonal inactivation: a costimulatory signaling pathway determining the outcome of T cell antigen receptor occupancy, Ann. Roar. Immunol. 7, 445). Bacterial products such as LPS and BCG, which have been found to induce costimulatory activity in APC, are known as costimulatory inducers (Janeway,
C.A., 1990, Approaching the asymptotě: Revolution and evolution in immunology, Cold Spring Harbor Symp. Quant Biol. 54,C.A., 1990, Approaching the Asymptote: Revolution and Evolution in Immunology, Cold Spring Harbor Symp. Quant Biol. 54,
1). Uvádí se, že kostimulační induktory pravděpodobně zvyšují nebo zlepšují imunitní odpověď jedinců, trpících syndromy imunitní nedostatečnosti, které jsou, alespoň částečně, spojeny s nedostatkem pomocných T buněk.1). Costimulatory inducers are reported to increase or improve the immune response of individuals suffering from immune deficiency syndromes that are, at least in part, associated with T helper cell deficiency.
Syndrom získané imunitní nedostatečnosti (AIDS) je oslabující onemocnění člověka, charakterizované vysokou morbiditou a mortalitou napadených jedinců. Tato nemoc, která je charakterizována počáteční infekcí lentivirem, virem lidské imunitní nedostatečnosti (HIV), je ve svých časných stadiích diagnostikovatelná přítomností protilátek proti HIV v séru a/nebo přítomností viru v séru asymptomatických jedinců. Téměř bez výjimky se u těchto asymptomatických jedinců dále vyvíjí plný AIDS s četnými svými přidruženými komplikacemi, které nakonec vedou k úmrtí infikovaných jedinců.Acquired Immune Deficiency Syndrome (AIDS) is a debilitating human disease characterized by high morbidity and mortality in infected individuals. This disease, characterized by an initial infection with lentivirus, human immunodeficiency virus (HIV), is diagnosed in its early stages by the presence of anti-HIV antibodies in the serum and / or by the presence of the virus in the serum of asymptomatic individuals. Almost without exception, these asymptomatic individuals continue to develop full AIDS with numerous of their associated complications that eventually lead to the death of the infected individuals.
V průběhu nemoci vykazují HIV pozitivní jedinci progresivní úbytek své populace pomocných T buněk [CD4-pozitivních buněk (CD4+)] a přírůstek počtu CD8+ buněk. Spolu se ztrátou buněk CD4+ vykazují infikovaní jedinci progresivní úbytek jejich schopnosti vytvářet ochrannou imunitní odpověď na HIV nebo na četné oportunní patogeny, které mohou napadat infikováné jedince. Tento chronický úbytek pomocných (CD4+) T buněk a z něho vyplývající zhoršení buňkami zprostředkované imunity úzce koreluje s postupem nemoci směrem k AIDS (Fahey, J.L., Taylor, J.M.G., Detels, R., Hofmann, B., Melmed, R., Nishinian, P., a Giorgi, J., 1990, The prognostic value of cellular and sérologie markers in infection with human immunodeficiency virus type 1, N. Engl. J. Med. 332, 166, Lange, J.M.A., de Volf, F., a Goudsmit, J., 1989, Markers for progression in H.I.V. infection, AIDS 3 (suppl. 1): S153) .During disease, HIV-positive individuals show a progressive decrease in their T-cell helper population [CD4-positive cells (CD4 + )] and an increase in the number of CD8 + cells. Along with the loss of CD4 + cells, infected individuals show a progressive loss of their ability to produce a protective immune response to HIV or to numerous opportunistic pathogens that may attack infected individuals. This chronic loss of helper (CD4 + ) T cells and the resulting impairment of cell-mediated immunity closely correlates with the progression of the disease towards AIDS (Fahey, JL, Taylor, JMG, Detels, R., Hofmann, B., Melmed, R., Nishinian , P., and Giorgi, J., 1990, The Prognostic Value of Cellular and Serology Markers in Human Immunodeficiency Virus Type 1 Infection, N. Engl, J. Med., 332, 166, Lange, JMA, de Volf, F. , and Goudsmit, J., 1989, Markers for Progression in HIV Infection, AIDS 3 (suppl. 1): S153).
V úsilí zastavit šíření AIDS mezi rizikovými jedinci a vyvinout způsob léčby infikovaných jedinců se četné výzkumné skupiny zaměřily na vývoj vakciny proti HIV. Od původní izolace HIV před asi 10 lety tak byly použity četné sofistikované virologické a biotechnologické přístupy k navrhování a produkci rozmanitých možných vakcin (Hu, S-L., Kosowski,In an effort to stop the spread of AIDS among at-risk individuals and to develop a method of treating infected individuals, numerous research groups have focused on developing an HIV vaccine. Thus, since the initial isolation of HIV about 10 years ago, numerous sophisticated virological and biotechnological approaches have been used to design and produce a variety of possible vaccines (Hu, S-L., Kosowski,
S.G., a Dalrymple, J.M., 1986, Expression of AIDS virus envelope gene in recombinant vaccinia virus, Nátuře 320: 537, Kennedy, R.C., Dreesman, G.R., Chanh, T.C., Baswell, R.N., Allan, J.S., Lee, T.H., Essex, Μ., Sparrow, J.T., Ho,SG, and Dalrymple, JM, 1986, Expression of AIDS virus envelope gene in recombinant vaccinia virus, Nature 320: 537, Kennedy, RC, Dreesman, GR, Chanh, TC, Baswell, RN, Allan, JS, Lee, TH, Essex , Μ., Sparrow, JT, Ho,
D.D., a Kanda, P., 1987, Use of a resin-bound synthetic peptide for identifying a neutralizing antigenic determinant associated with the human immunodeficiency virus envelope, J. Biol. Chem. 262: 5769). Téměř bez výjimky však tyto navrhované vakciny v klinických testech neuspěly. Neúspěch mnoha navrhovaných vakcin a neúprosný vývoj nemoci u infikovaných pacientů směrem k plnému AIDS vedlo mnohé k pesimistickému náhledu, že vývoj účinné vakciny proti AIDS je téměř nemožný. Tento náhled však nesdílejí Desrosiers a spolupracovníci (Desrosiers, R. , Vyard, M., Kodama, T., Ringler, D.J., Arthur, K. , Sehgal, P.K., Letvin, N.L., King, N.V., a Daniel, M.D., 1989, Vaccine protection against simian immunodeficiency virus infection, P.N.A.S. 86: 6353), kteří nedávno oznámí4 li slibné výsledky vakcinace opic rhesus inaktivovanými preparáty HIV.D.D., and Kanda, P., 1987, Use of a resin-bound synthetic peptide for identifying and neutralizing antigenic determinants associated with the human immunodeficiency virus envelope, J. Biol. Chem. 262: 5769). Almost without exception, however, these proposed vaccines have failed in clinical trials. The failure of many of the vaccines proposed and the inexorable development of the disease in infected patients towards full AIDS have led many to pessimistic view that the development of an effective AIDS vaccine is almost impossible. Desrosiers and collaborators (Desrosiers, R., Vyard, M., Kodama, T., Ringler, DJ, Arthur, K., Sehgal, PK, Letvin, NL, King, NV, and Daniel, MD, 1989 do not share this view. (Vaccine protection against simian immunodeficiency virus infection, PNAS 86: 6353), who have recently reported 4 promising results of vaccinating rhesus monkeys with inactivated HIV preparations.
Jedním z hlavních problémů při vývoji účinné vakciny k potírání již nastalých HIV infekcí je, že HIV samotný napadá a inaktivuje pomocné T buňky CD4+, což jsou právě buňky, které musejí být stimulovány, aby se u jedince mohla vytvořit ochranná imunitní odpověď. V průběhu normální imunitní odpovědi aktivované pomocné buňky CD4+ produkují cytokiny, jako je Interleukin-2 (IL-2), které, jak známo, vyvolávají klonální proliferaci aktivovaných T buněk, která může nakonec vést k eliminaci virálně infikovaných buněk. Ukázalo se však, že přídavek exogenního IL-2 k periferálním krevním mononukleárním buňkám (PBMC) HlV-seropozitivních jedinců může obnovit jak antigenně, tak mitogenně vyvolávanou blastogenesi in vitro (Bell, S.J.D., Doherty, R., Kemp, B., a Cooper, D.A.,One of the main problems in developing an effective vaccine to combat already existing HIV infections is that HIV itself attacks and inactivates CD4 + helper T cells, which are cells that need to be stimulated to generate a protective immune response in an individual. During the normal immune response, activated CD4 + helper cells produce cytokines such as Interleukin-2 (IL-2), which are known to induce clonal proliferation of activated T cells, which may ultimately lead to the elimination of virally infected cells. However, it has been shown that addition of exogenous IL-2 to peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) of HIV-seropositive individuals can restore both antigenic and mitogenic induced blastogenesis in vitro (Bell, SJD, Doherty, R., Kemp, B., and Cooper , DA,
1990, Exogeneous IL-2 can re-instate T-cell proliferative response to HIV-1 envelope and core-derived peptides,1990, Exogenous IL-2 can re-instate T-cell proliferative response to HIV-1 envelope and core-derived peptides,
A.S.H.M. 4th National conference on AIDS, abstrakt). Podobná stimulace PBMC in vivo, vedouc! k produkci IL-2, odvozeného od CD4, by pomohla udržet silnou antivirální imunitu, spojenou s CD8. Zdálo by se tedy výhodné používat terapie, které vedou ke zvýšení úrovně T lymfocytů CD4+, zejména během asymptomatických stadií nemoci, vyvolané HIV.ASHM 4th National Conference on AIDS, abstract). Similar stimulation of PBMCs in vivo, leading! to produce CD4-derived IL-2 would help maintain the strong anti-viral immunity associated with CD8. Thus, it would seem advantageous to use therapies which result in an increase in the level of CD4 + T cells, particularly during the asymptomatic stages of the HIV-induced disease.
Nicméně IL-2, který byl doporučen ke schválení FDA (Stone R., Anti-cancer drug IL-2 may finally be approved, Science 235, 528, 1992) jako imunoterapeutikum pro léčbu rakoviny ledvin, má četné rušivé vedlejší účinky zahrnující ...oběhové potíže, které mohou dosahovat intenzity srdeční mrtvice nebo infarktu... Zřetelně tedy existuje potřeba účinného imunostimulantu bez nežádoucích vedlejších účinků, přisuzovaných IL-2.However, IL-2, which has been recommended for approval by the FDA (Stone R., anti-cancer drug IL-2 may finally be approved, Science 235, 528, 1992) as an immunotherapeutic for the treatment of renal cancer, has numerous interfering side effects including .. Thus, there is a clear need for an effective immunostimulant without the undesirable side effects attributed to IL-2.
Jedním z přístupů ke zlepšení prognózy HIV-infikovaných jedinců by bylo zvýšení buď absolutního počtu nebo reaktivity pomocných T buněk u HIV-infikovaných jedinců, a tím zlepšení schopnosti jedince vést imunitní útok proti HIV-infikovaným buňkám a vyvinout účinné odpovědi vůči oportunním patogenům.One approach to improving the prognosis of HIV-infected individuals would be to increase either the absolute number or the reactivity of helper T cells in HIV-infected individuals, thereby improving the individual's ability to lead an immune attack against HIV-infected cells and develop effective responses to opportunistic pathogens.
V mezinárodní patentové přihlášce č. PCT/AU87/00107 (Barnes, T.M., Lehrbach, P., a Russell-Jones, G.J., Immunopotentiation) je uvedeno, že v komplexech s imunogenem působí TraT, OmpA a OmpF v imunokompetentních hostitelích jako účinné imunoadjuvanty. V této citaci však není zmínka o tom, že by TraT, OmpA nebo OmpF měly schopnost zvyšovat reaktivitu pomocných T buněk.International Patent Application No. PCT / AU87 / 00107 (Barnes, TM, Lehrbach, P., and Russell-Jones, GJ, Immunopotentiation) discloses that in complexes with an immunogen, TraT, OmpA and OmpF act as effective immunoadjuvants in immunocompetent hosts. . However, there is no mention in this reference that TraT, OmpA or OmpF had the ability to increase T-helper cell reactivity.
Původci tohoto vynálezu došli k překvapivému zjištění, že tyto proteiny zvyšují reaktivitu pomocných T buněk pacientů, trpících nedostatečností funkce pomocných T buněk. Dále původci objevili synergický účinek těchto proteinů a jiných antigenů na reaktivitu pomocných T buněk.The present inventors have surprisingly found that these proteins increase the reactivity of T helper cells of patients suffering from T helper cell insufficiency. In addition, we have discovered a synergistic effect of these proteins and other antigens on T helper cell reactivity.
Podstata vynálezuSUMMARY OF THE INVENTION
Předmětem vynálezu je tedy prostředek, obsahující ve směsi protein zvolený ze skupiny zahrnující TraT, OmpA, OmpF a jejich části, alespoň jeden jiný antigen a farmaceuticky přijatelný nosič.Accordingly, the present invention provides a composition comprising in admixture a protein selected from the group consisting of TraT, OmpA, OmpF and portions thereof, at least one other antigen and a pharmaceutically acceptable carrier.
Druhým předmětem vynálezu je prostředek, obsahující protein zvolený ze skupiny zahrnující TraT, OmpA, OmpF a jejich části, vázaný k antigenu, zvolenému ze skupiny zahrnující antigeny HIV, antigeny chřipkového viru, antigeny záškrtu, antigeny černého kašle, spalničkové antigeny, tetanové antígeny, antigeny Pneumocystis, antigeny Candida, antigeny Toxoplasmosis, antigeny Cytomegalovirus, antigeny hepatitidy, antigeny obrny, jejich kombinace a jednotlivé subjednotkové proteiny, peptidy nebo polysacharidy, izolované z uvedených antigenů, a farmaceuticky přijatelný nosič.A second object of the invention is a composition comprising a protein selected from the group consisting of TraT, OmpA, OmpF and portions thereof, bound to an antigen selected from the group consisting of HIV antigens, influenza virus antigens, diphtheria antigens, pertussis antigens, measles antigens, tetanus antigens, antigens Pneumocystis, Candida antigens, Toxoplasmosis antigens, Cytomegalovirus antigens, hepatitis antigens, polio antigens, combinations thereof and individual subunit proteins, peptides or polysaccharides isolated from said antigens, and a pharmaceutically acceptable carrier.
Třetím předmětem vynálezu je způsob zvyšování imunitní reaktivity u pacienta s imunitní nedostatečností, spočívající v podávání prostředku, obsahujícího účinné množství proteinu zvoleného ze skupiny zahrnující TraT, OmpA, OmpF a jejich části a farmaceuticky přijatelný nosič.A third object of the invention is a method of increasing immune reactivity in a patient with immune deficiency comprising administering a composition comprising an effective amount of a protein selected from the group consisting of TraT, OmpA, OmpF and portions thereof, and a pharmaceutically acceptable carrier.
Čtvrtým předmětem vynálezu je použití prostředku, obsahujícího účinné množství proteinu zvoleného ze skupiny zahrnující TraT, OmpA, OmpF a jejich části a farmaceuticky přijatelný nosič, ředidlo a/nebo excipient, při výrobě léčiva pro zvyšování imunitní reaktivity u pacienta s nedostatečností imunitní funkce.A fourth object of the invention is the use of a composition comprising an effective amount of a protein selected from the group consisting of TraT, OmpA, OmpF and portions thereof, and a pharmaceutically acceptable carrier, diluent and / or excipient, in the manufacture of a medicament for enhancing immune reactivity in a patient with immune deficiency.
Ve výhodném provedení vynálezu se zvyšuje reaktivita T buněk a pacient má nedostatečnost funkce T buněk.In a preferred embodiment of the invention, the T-cell reactivity is increased and the patient has T-cell insufficiency.
V dalším výhodném provedeni vynálezu jsou T buňkami pomocné T buňky a pacient má nedostatečnost funkcí pomocných T buněk.In another preferred embodiment of the invention, the T cells are helper T cells and the patient has insufficient helper T cell functions.
Ve výhodném provedení vynálezu je farmaceuticky přijatelným nosičem hydrofobní depotní nosič. Vhodné depotní nosiče zahrnují alhydrogel, proteosomy a liposomy.In a preferred embodiment of the invention, the pharmaceutically acceptable carrier is a hydrophobic depot carrier. Suitable depot carriers include alhydrogel, proteosomes, and liposomes.
V dalším výhodném provedení vynálezu je uvedený alespoň jeden jiný antigen zvolen ze skupiny zahrnující antigeny HIV, antigeny chřipkového viru, antigeny záškrtu, antigeny černého kašle, spalničkové antigeny, tetanové antigeny, antigeny Pneumocystis, antigeny Candida, antigeny Toxoplasmosis, antigeny Cytomegalovirus, antigeny hepatitidy, antigeny obrny, jejich kombinace a jednotlivé subjednotkové proteiny, peptidy nebo polysacharidy, izolované z uvedených antigenů. V současnosti je však výhodné, aby tímto alespoň jedním jiným antigenem byl antigen HIV, toxoid záškrtu nebo tetanový toxoid a přednostně antigen HIV zvolený z peptidu gp41[8] a smyčkového peptidu V3.In another preferred embodiment of the invention said at least one other antigen is selected from the group consisting of HIV antigens, influenza virus antigens, diphtheria antigens, pertussis antigens, measles antigens, tetanus antigens, Pneumocystis antigens, Candida antigens, Toxoplasmosis antigens, Cytomegalovirus antigens, hepatitis antigens. polio antigens, combinations thereof and individual subunit proteins, peptides or polysaccharides isolated from said antigens. However, it is presently preferred that the at least one other antigen is an HIV antigen, diphtheria toxoid or tetanus toxoid, and preferably an HIV antigen selected from gp41 peptide [8] and V3 loop peptide.
V ještě dalším výhodném provedení vynálezu je proteinem TraT nebo jeho část.In yet another preferred embodiment of the invention, the protein is TraT or a portion thereof.
TraT, OmpF a OmpA jsou vnější membránové proteiny gramnegativních bakterií. Protein TraT je vnější membránový protein určitých kmenů E. coli, který je odpovědný za odolnost těchto kmenů vůči usmrcení sérem. Proteiny OmpA a OmpF spadají rovněž do stejné skupiny proteinů. Tyto proteiny je možno získat z jiných gramnegativních bakterií, jako je E. coli nebo Salmonella. V současnosti je však výhodné, získávají-li se proteiny z kmenů E. coli.TraT, OmpF and OmpA are the outer membrane proteins of gram-negative bacteria. The TraT protein is an outer membrane protein of certain E. coli strains which is responsible for the resistance of these strains to serum killing. The OmpA and OmpF proteins also belong to the same family of proteins. These proteins can be obtained from other gram-negative bacteria, such as E. coli or Salmonella. However, it is presently preferred that proteins are obtained from E. coli strains.
Studie, citované v tomto vynálezu, ukázaly možnost zvýšit hladinu a/nebo aktivitu pomocných T buněk u jedinců s nedostatečností funkce pomocných T buněk, z níž vyplývá, že TraT, OmpF a OmpA z E. coli a jejich části mohou fungovat jako kostimulační induktory odděleně od kostimulačních induktorů BCG a LPS, popsaných Janewayem (1990), avšak s podobnou funkcí.The studies cited in the present invention have shown the possibility of increasing the level and / or activity of helper T cells in individuals with T helper deficiency, suggesting that TraT, OmpF and OmpA from E. coli and parts thereof can function as costimulatory inducers separately from the costimulatory inducers BCG and LPS described by Janeway (1990), but with a similar function.
Původci ukázali, že kostimulační induktorová aktivita vnějších membránových proteinů TraT a OmpA E. coli může být použita ke stimulaci pomocných T buněk, odvozených odWe have shown that the costimulatory inducer activity of the outer membrane proteins TraT and OmpA of E. coli can be used to stimulate helper T cells derived from
HIV-pozitivních jedinců, v přítomnosti antigenů a zejména peptidů odvozených od virových proteinů nebo recall antigenů jako je záškrtový toxoid (DT) a tetanový toxoid (TT) .HIV-positive individuals, in the presence of antigens and particularly peptides derived from viral proteins or recall antigens such as diphtheria toxoid (DT) and tetanus toxoid (TT).
V protikladu k BCG a LPS nevyvolávají TraT, OmpA a OmpF nežádoucí vedlejší účinky, jako je endotoxický šok a tvorba granulomů v místě injekce.In contrast to BCG and LPS, TraT, OmpA and OmpF do not induce unwanted side effects such as endotoxic shock and granuloma formation at the injection site.
TraT, OmpF a OmpA proto mohou být používány jako induktory kostimulační aktivity v buňkách obsahujících antigen, a tak stimulovat pomocné T buňky při indukci imunitních odpo vědí například vůči antigenům odvozeným od HIV, a tudíž překonávat nereaktivitu CD4-pozitivních T buněk u HIV-infikovaných jedinců.TraT, OmpF and OmpA can therefore be used as inducers of costimulatory activity in antigen-containing cells, thus stimulating helper T cells in inducing immune responses to, for example, HIV-derived antigens, and thus overcoming CD4-positive T cell inactivity in HIV-infected individuals. .
Klinickým výsledkem zvýšeného počtu pomocných T buněk j zlepšená imunitní funkce, která má dále za následek zvýšenou schopnost jedince bojovat s oportunními infekcemi.The clinical outcome of an increased number of helper T cells is an improved immune function, which further results in an increased ability of the individual to fight opportunistic infections.
Použití těchto molekul by značně zlepšilo účinnost potenciálních vakcin proti AIDS stimulací produkce pomocných T buněk. Alternativně při použití ve spojeni s dalšími antigeny, k nimž si jedinec předem vyvinul paměťové T buňky, mohou tyto molekuly zvýšit celkovou úroveň imunity jedince.The use of these molecules would greatly improve the efficacy of potential AIDS vaccines by stimulating helper T cell production. Alternatively, when used in conjunction with other antigens to which an individual has previously developed memory T cells, these molecules may increase the overall level of immunity of the individual.
Schopnost těchto molekul obnovovat funkci pomocných T buněk by mohla být rovněž využita ke zvýšení produkce pomocných T buněk při stavech imunitní nedostatečnosti, například těch, které mohou vzniknout jako důsledek určitého typu rako viny, transplantací orgánů a různých autoimunitních stavů.The ability of these molecules to restore helper T cell function could also be used to increase helper T cell production in immune deficiency states, such as those that may result from a certain type of cancer, organ transplants and various autoimmune conditions.
Prostředky podle vynálezu se připravují míšením, přednostně homogenním smísením TraT, OmpA nebo OmpF nebo částiThe compositions of the invention are prepared by mixing, preferably by homogeneous mixing of TraT, OmpA or OmpF or a portion thereof.
TraT, OmpA nebo OmpF, kterážto část stimuluje buňku, obsahující antigen, k vyvolání kostimulačního signálu pro pomocné T buňky, s farmaceuticky přijatelným nosičem, ředidlem a/nebo excipientem pomocí standardních metod přípravy farmaceutických prostředků.TraT, OmpA or OmpF, which portion stimulates an antigen-containing cell to elicit a costimulatory signal for T helper cells, with a pharmaceutically acceptable carrier, diluent and / or excipient using standard methods of preparing pharmaceutical compositions.
Výhodně způsob dále zahrnuje použití alespoň jednoho ji ného antigenu při přípravě farmaceutického prostředku. Tímto antigenem může být antigen, proti němuž je žádoucí vyvolat u pacienta imunitní odpověď. Například u pacientů s AIDS mohou být použity antigeny HIV. Další použitelné antigeny zahr nují antigeny chřipkového viru, antigeny záškrtu, antigeny černého kašle, spalničkové antigeny, antigeny Pneumocystis, antigeny Canďida, antigeny Toxoplasmosis, antigeny Cytomegalovirus, jejich kombinace a jednotlivé subjednotkové proteiny, peptidy nebo polysacharidy, izolované z uvedených antige nů.Preferably, the method further comprises using at least one other antigen in the preparation of a pharmaceutical composition. The antigen may be an antigen against which it is desired to elicit an immune response in a patient. For example, HIV antigens may be used in AIDS patients. Other useful antigens include influenza virus antigens, diphtheria antigens, pertussis antigens, measles antigens, Pneumocystis antigens, Canidida antigens, Toxoplasmosis antigens, Cytomegalovirus antigens, combinations thereof and individual subunit proteins, peptides or polysaccharides isolated from said antigens.
Proteiny TraT, OmpA a OmpF, které mohou být používány podle vynálezu, mohou být purifikovány z veřejně dostupných standardních kmenů E. coli, které produkují tyto proteiny.The TraT, OmpA and OmpF proteins that can be used in accordance with the invention can be purified from publicly available wild-type E. coli strains that produce these proteins.
Jedním takovým kmenem E. coli je ATCC 67331, který byl uložen 2.3.1987 v Americké sbírce typových kultur, 12301 Parklawn Drive, Rockville MD 20852, USA. Purifikace TraT, OmpF a OmpA z E. coli je popsána v mezinárodní patentové přihlášce č. PCT/AU87/00107 (VO 87/06590).One such E. coli strain is ATCC 67331, which was deposited March 2, 1987 in the American Type Culture Collection, 12301 Parklawn Drive, Rockville MD 20852, USA. Purification of TraT, OmpF and OmpA from E. coli is described in International Patent Application No. PCT / AU87 / 00107 (WO 87/06590).
Alternativně je možno tyto proteiny získat z dalších bakteriálních kmenů, které obsahují rekombinační molekuly DNA, kódující tyto proteiny, a čistit je metodou, příslušnou místu produkce rekombinačního proteinu TraT, OmpA nebo OmpF.Alternatively, these proteins may be obtained from other bacterial strains containing recombinant DNA molecules encoding the proteins and purified by a method appropriate to the site of production of the recombinant protein TraT, OmpA or OmpF.
Jestliže mají být použity části těchto proteinů, které stimulují buňku s obsahem antigen k vyvolání kostimulační aktivity pomocných T buněk, je možno požadované části identifikovat a připravit následujícím způsobem.If portions of these proteins that stimulate an antigen-containing cell are to be used to elicit costimulatory T-cell stimulatory activity, the desired portions can be identified and prepared as follows.
K identifikaci receptoru, který váže molekulu na buňku vykazující antigen, se použije intaktní molekula. Tato intaktní molekula se pak digeruje standardními metodami digesce proteinů a generované části se testují na vazbu k identifikovanému receptoru. Ty části, které se mohou vázat a mohou stimulovat vyvolání kostimulační aktivity buňkou vykazující antigen, jsou vhodné k použití v prostředcích a způsobech podle vynálezu.An intact molecule is used to identify the receptor that binds the molecule to the antigen-presenting cell. This intact molecule is then digested by standard protein digestion methods and the generated portions tested for binding to the identified receptor. Those portions that can bind and can stimulate the induction of costimulatory activity by an antigen-presenting cell are suitable for use in the compositions and methods of the invention.
Jak je odborníkovi zřejmé, bylo by podle vynálezu možno s podobným účinkem použít homology a analogy TraT, OmpA a OmpF. Použití takových homologů a analogů se proto považuje za součást rozsahu této přihlášky.As one skilled in the art will appreciate, homologues and analogs of TraT, OmpA and OmpF could be used with similar effect. The use of such homologs and analogs is therefore considered to be within the scope of this application.
Jako antigeny je možno v prostředcích a způsobech podle vynálezu použít jakýkoli antigen, proti němuž je žádoucí vyvolat u imunokompromitovaného nebo imunosuprimovaného pacienta imunitní odpověď.As antigens, any antigen against which it is desired to elicit an immune response in an immunocompromised or immunosuppressed patient can be used in the compositions and methods of the invention.
Příklady těchto antigenů zahrnují například antigeny HIV, jako je peptid gp41[8], který může být použit ke stimulaci blastogenese HlV-specifických lymfocytů u HIV-infikovaných pacientů. Další antigeny mohou zahrnovat antigeny chřipkového viru, antigeny záškrtu, antigeny černého kašle, spalničkové antigeny, antigeny Pneumocystis, antigeny Candida, antigeny Toxoplasmosis, antigeny Cytomegalovirus, jejich kombinace a jednotlivé subjednotkové proteiny, peptidy nebo polysacharidy, izolované z uvedených antigenů.Examples of these antigens include, for example, HIV antigens, such as the gp41 peptide [8], which can be used to stimulate HIV-specific lymphocyte blastogenesis in HIV-infected patients. Other antigens may include influenza virus antigens, diphtheria antigens, pertussis antigens, measles antigens, Pneumocystis antigens, Candida antigens, Toxoplasmosis antigens, Cytomegalovirus antigens, combinations thereof, and individual subunit proteins, peptides or polysaccharides isolated from said antigens.
Prostředky podle vynálezu mohou být připravovány standardními farmaceutickými metodami.The compositions of the invention may be prepared by standard pharmaceutical methods.
Má-li být v prostředku použit antigen, může být smísen v zásobníku s kostimulačním induktorem. Alternativně může být antigen a kostimulační induktor komplexován chemickou konjugací s případným použitím chemické modifikace a/nebo vazebních skupin. V případě bílkovinných antigenů mohou být kostimulační induktor a antigen ve formě kondenzované bílkoviny, získané metodami rekombinace DNA.If an antigen is to be used in the composition, it may be mixed in a reservoir with a costimulatory inducer. Alternatively, the antigen and the costimulatory inducer may be complexed by chemical conjugation, optionally using chemical modification and / or linking groups. In the case of protein antigens, the costimulatory inducer and antigen may be in the form of a condensed protein obtained by recombinant DNA methods.
V každém případě je důležité, aby proces připojení antigenu ke kostimulačnimu induktoru nepoškodil požadovanou antigenicitu antigenu nebo kostimulační induktorovou aktivitu TraT, OmpA, OmpF nebo jejich části.In any case, it is important that the process of attaching the antigen to the costimulatory inducer does not damage the desired antigenicity or costimulatory inducer activity of TraT, OmpA, OmpF or portions thereof.
Kostimulační induktor nebo kostimulační induktor s antigenem může být formulován do depotního nosiče. Mají-li být obsaženy obě složky, je žádoucí je udržovat pohromadě. Toho je možno dosáhnout s depotním nosičem a typy vhodných depotních nosičů zahrnují alhydrogel, proteosomy a liposomy. Prostředky se připravují standardními metodami příslušejícími použitému nosiči.The costimulatory inducer or costimulatory inducer with the antigen may be formulated into a depot carrier. If both components are to be included, it is desirable to keep them together. This can be achieved with a depot carrier, and types of suitable depot carriers include alhydrogel, proteosomes, and liposomes. The compositions are prepared by standard methods appropriate to the carrier used.
Má-li být kostimulační induktor použit bez antigenu nebo je-li kostimulační induktor s antigenem komplexován nebo kondenzován, je možno použít i jiných tradičních nosičů než depotních.If the costimulatory inducer is to be used without the antigen or if the costimulatory inducer is complexed or coupled with the antigen, traditional carriers other than depot can be used.
Prostředek podle vynálezu se přednostně podává pacientovi parenterálně standardními metodami parenterální aplikace.The composition of the invention is preferably administered to a patient parenterally by standard methods of parenteral administration.
Nejčastěji se v jedné dávce používá 100 ng-10 mg každého kostimulačního induktoru a antigenu.Most often, 100 ng-10 mg of each costimulatory inducer and antigen is used per dose.
Přesná použitá dávka a poměr kostimulačního induktoru a antigenu závisí na: (i) typu a charakteru (například imunogenicitě) antigenu, (ii) genetickém pozadí subjektu, (iii) imunologické historii subjektu a (iv) typu imunitní odpovědi (například humorální, lymfocytově zprostředkované, makrofágově zprostředkované nebo granulocytově zprostředkované), která se má modifikovat.The precise dose and costimulatory inducer to antigen ratio used will depend on: (i) the type and nature (e.g., immunogenicity) of the antigen, (ii) the subject's genetic background, (iii) the immunological history of the subject, and , macrophage-mediated or granulocyte-mediated) to be modified.
Příslušný poměr kostimulačního induktoru k antigenu je schopen určit kvalifikovaný uživatel systematickým měněním relativní dávky a poměrů kostimulátoru k antigenu do dosažení požadované imunitní odpovědi.The appropriate costimulatory inducer to antigen ratio can be determined by a qualified user by systematically varying the relative dose and costimulator to antigen ratios until the desired immune response is achieved.
Uznává se, že stanovení příslušného dávkování u konkrétního pacienta ovlivňuje množství faktorů. Tyto faktory zahrnuj í věk, hmotnost, pohlaví, všeobecný zdravotní stav a souběžné choroby pacienta. Stanovení příslušné velikosti dávky u konkrétního pacienta se provádí standardními farmaceutickými metodami.It is recognized that a number of factors affect the determination of the appropriate dosage for a particular patient. These factors include age, weight, sex, general health, and concomitant diseases of the patient. Determination of the appropriate dose level for a particular patient is accomplished by standard pharmaceutical methods.
Pacienty, u nichž se předpokládá použití způsobů a prostředků podle vynálezu, jsou pacienti s nedostatečností funkce pomocných T buněk, jako jsou pacienti trpící chorobnými stavy zahrnujícími autoimunitní choroby, některé typy rakoviny a AIDS a pacienti, u nichž je navozen stav imunosuprese během léčby konkrétní nemoci nebo chorobného stavu, například pacienti s transplantáty a pacienti s rakovinou, léčení chemoterapeuticky nebo radioterapeuticky.Patients contemplated for use of the methods and compositions of the invention are those with helper T cell function deficiencies, such as those suffering from disease states including autoimmune diseases, certain types of cancer and AIDS, and patients who develop immunosuppression during treatment of a particular disease. or a disease state, for example, transplant patients and cancer patients, treated chemotherapeutically or radiotherapeutically.
Způsob podle vynálezu by mohl být používán obecně ke zvýšení jejich hladiny pomocných T buněk nebo může být žádoucí přítomnost specifických antigenů ke zvýšení hladiny pomocných T buněk a ochraně pacienta proti specifickým infekcím, které by ve stavu imunokompromisu nebo imunosuprese mohly být fatální.The method of the invention could generally be used to increase their helper T cell level, or it may be desirable to have specific antigens to increase helper T cell levels and protect the patient against specific infections that could be fatal in immunocompromise or immunosuppression.
Vynález je primárně zaměřen na léčení lidských pacientů, avšak je stejně použitelný i pro ostatní živočichy. Výraz pacient zde tedy zahrnuje jak člověka, tak jiné živočichy.The invention is primarily directed to the treatment of human patients, but is equally applicable to other animals. Thus, the term patient includes both human and other animals.
Příklady provedení vynálezuDETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
Podstata vynálezu je blíže osvětlena v souvislosti s následujícími příklady praktického provedení.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS The invention is illustrated by the following examples.
Příklad 1 (i) TraT zvyšuje proliferativní odpovědi T buněk in vitro vyvolané imunodominantními syntetickými peptidy odvozenými od HIVExample 1 (i) TraT enhances in vitro T cell proliferative responses induced by HIV-derived immunodominant synthetic peptides
A. Výběr peptidu odvozeného od HIV (gp41[8])A. Selection of HIV-derived peptide (gp41 [8])
Většina imunodominantních sekvencí viru lidské imunitní nedostatečnosti typu 1 (HIV-1) je kódována hypervariabilními genovými sekvencemi a mezi těmito sekvencemi j sou rozptýleny oblasti, které jsou mezi kmeny HIV-1 silně zachovány. Imunogenní virové proteiny, které vykazují minimální variace mezi jednotlivými kmeny a konzistentně vyvolávají jak humorální, tak v buňce zprostředkovanou imunitní odpověď, mohou být vhodnými komponentami subjednotkové vakciny. V této souvislosti studovali Bell a spolupracovníci (Bell, S.J.D., Cooper, D.A., Kemp, B.E., Doherty, R.R., a Penny, R., 1992, Definition of an immunodominant T-cell epitope contained in the enve14 lope gp41 sequence of HIV-1, Clin. Exp. Immunol. 87: 37) HIV-seronegativní subjekty a HIV-infikované jedince, klasifikované jako asymptomatické (AS), s AIDS-related komplexem (ARC) nebo jako AIDS. V souladu s klinickým klasifikačním systémem CDC (Centers for Disease Control, 1986, Classification System for Human T-Lymphotropic Virus Type-III/Lymphadenopathy-Associated Virus Infections, Morbid. Mortal. Veekly Report 35: 334) tvoří HIV-infikovaní AS jedinci skupinu II/III, pacienti ARC jsou skupina IVA/IVC2 a pacienti AIDS jsou skupina IVCI/IVD. Autoři nejprve zjišťovali, které ze tří krátkých syntetických peptidů, odvozených od zachovaných sekvencí obalu gp 120 (aminokyseliny 262-284), gp41 (aminokyseliny 579-601) a jádra pl7 (aminokyseliny 106-125) izolovaných oblastí HTLV-IIIg, by mohly vyvolávat u HIV-infikovaných jedinců odpověď B buněk i T buněk. Imunogenní na úrovni BiT buněk byla pouze sekvence odvozená od gp41. Oblast gp41 byla dále charakterizována s použitím řady překrývajících se syntetických peptidů odvozených od zachované oblasti obalu gp41 (aminokyseliny 572-613). Pak autoři identifikovali imunodominantní dodekamer (aminokyseliny 593-604, nazván gp41[8]), který konzistentně vyvolával jak T-blastogenní, tak protilátkovou odpověď u asymptomatických HlV-seropozitivních jedinců, v menším rozsahu u pacientů ARC, avšak nikoli u pacientů AIDS.Most human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) immunodominant sequences are encoded by hypervariable gene sequences, and regions that are highly conserved between HIV-1 strains are scattered between these sequences. Immunogenic viral proteins that exhibit minimal variation between strains and consistently elicit both a humoral and a cell-mediated immune response may be suitable components of a subunit vaccine. In this context, Bell and coworkers (Bell, SJD, Cooper, DA, Kemp, BE, Doherty, RR, and Penny, R., 1992, studied the definition of an immunodominant T-cell epitope contained in the enve14 lope gp41 sequence of HIV- 1, Clin. Exp. Immunol. 87: 37) HIV-seronegative subjects and HIV-infected individuals, classified as asymptomatic (AS), AIDS-related complex (ARC), or AIDS. In accordance with the CDC clinical classification system (Centers for Disease Control, 1986, Classification System for Human T-Lymphotropic Virus Type-III / Lymphadenopathy-Associated Virus Infections, Morbid. Mortal. Veekly Report 35: 334), HIV-infected AS subjects form a group II / III, ARC patients are group IVA / IVC2 and AIDS patients are group IVCI / IVD. The authors first investigated which of the three short synthetic peptides derived from the conserved gp 120 envelope sequences (amino acids 262-284), gp41 (amino acids 579-601), and the p17 core (amino acids 106-125) of the isolated HTLV-IIIg regions could induce in both HIV-infected individuals, both B cell and T cell response. Only gp41-derived sequences were immunogenic at the level of BiT cells. The gp41 region was further characterized using a series of overlapping synthetic peptides derived from the conserved gp41 envelope region (amino acids 572-613). The authors then identified an immunodominant dodecamer (amino acids 593-604, called gp41 [8]) that consistently elicited both a T-blastogenic and antibody response in asymptomatic HIV-seropositive individuals, to a lesser extent in ARC patients but not in AIDS patients.
B. Syntéza peptidů odvozených od HIV-1B. Synthesis of HIV-1-derived peptides
Dva peptidy, gp4l[8] a smyčka V3, odvozené od oblasti gpl20 HIV-1, byly syntetizovány podle návodu výrobce na syntetizátoru peptidů Applied Biosystems typ 430A. Peptidy byly přečištěny chromatografii na Sephadexu G-25 (Pharmacia) v 10% kyselině octové a pak HPLC s reverzní fází na koloně VYDAC C-18 s použitím lineárního gradientu 5 až 60% acetonitrilu v 0,1% TFA. Sekvence syntetizovaných peptidů jsou tyto:Two peptides, gp41 [8] and loop V3, derived from the gp120 region of HIV-1, were synthesized according to the manufacturer's instructions on an Applied Biosystems type 430A peptide synthesizer. The peptides were purified by chromatography on Sephadex G-25 (Pharmacia) in 10% acetic acid and then by reverse phase HPLC on a VYDAC C-18 column using a linear gradient of 5 to 60% acetonitrile in 0.1% TFA. The sequences of synthesized peptides are as follows:
R-S-S-gp41[8]: ke zlepšení rozpustnosti tohoto peptidů byla na dusíkový konec gp41[8] připojena sekvence Arg-Ser-Ser, tj.:R-S-S-gp41 [8]: to improve the solubility of this peptide, the Arg-Ser-Ser sequence was added to the nitrogen end of gp41 [8], ie:
Arg-Ser-Ser-Leu-Gly-Ile-Trp-Gly-Cys-Ser-Gly-Lys-Leu-Ile-Cys smyčka V3:Arg-Ser-Ser-Leu-Gly-Ile-Trp-Gly-Cys-Ser-Gly-Lys-Leu-Ile-Cys loop V3:
Asn-Thr-Arg-Lys-Ser-Ile-Arg-Ile-Gln-Arg-Gly-Pro-Gly-Arg-Ala -Phe-Val-Thr-Ile-Gly-Lys-Ile-Gly-AsnAsn-Thr-Arg-Lys-Ser-Ile-Arg-Ile-Gln-Arg-Gly-Pro-Gly-Arg-Ala-Phe-Val-Thr-Ile-Gly-Lys-Ile-Gly-Asn
C. Hodnocení proliferativních odpovědí lidské T buňkyC. Evaluation of human T cell proliferative responses
Periferní krevní mononukleární buňky (PBMC) byly izolovány gradientovou centrifugací Ficoll-Paque (Pharmacia) a 200000 PBMC bylo kultivováno v 0,2 ml média RPMI-160 (Cyto systems Pty, Ltd., obsahujícím 10 % lidského séra AB, 50 mM penicilinu, 50 mM streptomycinu, 2,5 mM glutaminu a 2 mM puf ru HEPES o pH 7,4) na 96jamkových mikrotitračních plotnách s kruhovým dnem v přítomnosti syntetických peptidů gp41[8] nebo smyčka V3 (2 μΜ), rIL-2 (10 u/ml), záškrtového toxoidu (DT, Commonwealth Sérum Laboratories, Melbourne, Austrálie, 1570Lf jedn./ml, 4 a 40 pg/ml), tetanového toxoidu (TT, Commonwealth Sérum Laboratories, Melbourne, Austrálie, lOOLf jedn./ml, 5 a 50 pg/ml), TraT a OmpA (čištěných podle Crofta a d., 1991, 40 pg/ml, Croft, S., Valsh, J., Lloyd, V., a Russell-Jones, G.J.). Po 6 dnech kultivace při 37 °C (s antigenem nebo bez něho) byla každá kultura přes noc pulsována s 50 pl aH-thymidinu (20 pCi/ml, Amersham, Velká Británie), oddělena pomocí filtračního papíru se skleněným vláknem a podrobena měření na kapalinovém scintilačním spektrometru (Beckman, USA).Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) were isolated by Ficoll-Paque gradient centrifugation (Pharmacia) and 200,000 PBMCs were cultured in 0.2 ml RPMI-160 medium (Cyto systems Pty, Ltd. containing 10% human serum AB, 50 mM penicillin, 50 mM streptomycin, 2.5 mM glutamine and 2 mM HEPES buffer pH 7.4) on 96-well round bottom microtiter plates in the presence of synthetic gp41 peptides [8] or V3 loop (2 μΜ), rIL-2 (10 µl) diphtheria toxoid (DT, Commonwealth Serum Laboratories, Melbourne, Australia, 1570Lf Units / ml, 4 and 40 pg / ml), tetanus toxoid (TT, Commonwealth Serum Laboratories, Melbourne, Australia, 10OLf Units / ml, 5 and 50 pg / ml), TraT and OmpA (purified according to Croft et al., 1991, 40 pg / ml, Croft, S., Valsh, J., Lloyd, V., and Russell-Jones, GJ). After 6 days of culture at 37 ° C (with or without antigen therefrom), each culture overnight pulsed with 50 pl and H-thymidine (20 pCi / ml, Amersham, UK), separated using a filter paper, glass fiber and subjected to measurement on a liquid scintillation spectrometer (Beckman, USA).
Výsledky byly vyjádřeny jako stimulační index (SI), vypočtený podle rovnice střední cpm s antigenem - střední cpm bez antigenuResults were expressed as stimulation index (SI), calculated according to equation of mean cpm with antigen - mean cpm without antigen
SI = --střední cpm bez antigenu kde cpm je četnost za minutu.SI = - medium cpm without antigen where cpm is frequency per minute.
D. Definice TraT- a IL-2-zprostředkovaných účinků na lymfoproliferaci, specifickou pro peptidy gp41[8],D. Definition of TraT- and IL-2-mediated effects on lymphoproliferation specific for gp41 peptides [8],
V3, záškrtový toxoid (DT) nebo tetanový toxoid (TT)V3, diphtheria toxoid (DT) or tetanus toxoid (TT)
Účinek TraT a IL-2 na proliferativní odpověď (vyjádřenou jako stimulační index) na různé antigeny odvozené od HIV a recall antigeny (DT a TT) byl definován pomocí modifikované verse z literatury známého vzorce (Denz, Η., Lechleitner, M., Marth, C., Daxenbichler, G., Gastl, G., a Braunsteiner, Η., 1985, Effect of human recombinant a -2 and G-interferon on the growth of human cell lineš from solid tumours and hematologie malignancies, J. Interferon Res. 5: 147):The effect of TraT and IL-2 on the proliferative response (expressed as a stimulatory index) on various HIV-derived antigens and recall antigens (DT and TT) was defined by a modified version of the known formula (Denz, Η., Lechleitner, M., Marth , C., Daxenbichler, G., Gastl, G., and Braunsteiner, Η., 1985, Effect of Human Recombinant and -2 and G-Interferon on the Growth of Human Cell Lines from Solid Tumors and Hematology Malignancies, J. Interferon Res. 5: 147)
Aditivní účinek byl definován jako (AB) —:- = !Additive effect was defined as (AB) -: - =!
(A) + (B)(A) + (B)
Synergický účinek byl definován jako (AB)The synergistic effect was defined as (AB)
- > !->!
(A) + (B)(A) + (B)
Inhibiční účinek byl definován jako (AB)The inhibitory effect was defined as (AB)
- < 1 (A) + (B) kde (A) a (B) znamenají proliferativní odpověď vůči jednotlivým činidlům (například gp41[8], resp. TraT) a (AB) je lymfoproliferativní odpověď pozorovaná při kombinaci obou činidel, přidané ke stejným kulturám.- <1 (A) + (B) where (A) and (B) represent a proliferative response to individual agents (eg gp41 [8] and TraT, respectively) and (AB) is a lymphoproliferative response observed when a combination of both agents is added to the same cultures.
Výsledky:Results:
Přídavkem TraT ke kulturám PBMC od jedenácti asymptomatických (AS) jedinců, třinácti pacientů s ARC a jednoho AIDS-lymfomového pacienta se zvýšila proliferativní odpověď T buněk vůči peptidů gp41[8] na vyšší úroveň než při přídavku IL-2 ke kulturám, obsahujícím peptid gp41[8] (tabulka 1).Addition of TraT to PBMC cultures from eleven asymptomatic (AS) individuals, thirteen ARC patients and one AIDS lymphoma patient increased T cell proliferative response to gp41 peptides [8] to a higher level than IL-2 addition to cultures containing gp41 peptide [8] (Table 1).
S výjimkou pacienta č. 110 byl v každém případě pozorován synergický účinek v kulturách, které byly stimulovány směsí TraT a gp41[8], a tento účinek byl maximální, bylo-li v buněčné kultuře použito 40 pg TraT (tabulka 2). Naproti tomu při kombinaci gp41[8] s IL-2 byl synergický účinek pozorován pouze ve třech z dvaceti pěti případů (tabulka 1). Účinek dalšího vnějšího membránového proteinu, OmpA, byl testován rovněž na kulturách PBMC od jednoho asymptomatického a jednoho symptomatického jedince a v obou případech byl pozorován synergický účinek, byl-li OmpA kultivován společně s gp41[8] (tabulka 1).With the exception of patient # 110, in any case, a synergistic effect was observed in cultures that were stimulated with a mixture of TraT and gp41 [8], and this effect was maximal when 40 pg of TraT was used in cell culture (Table 2). In contrast, when combining gp41 [8] with IL-2, a synergistic effect was observed in only three out of 25 cases (Table 1). The effect of another outer membrane protein, OmpA, was also tested on PBMC cultures from one asymptomatic and one symptomatic individual, and in both cases a synergistic effect was observed when OmpA was co-cultured with gp41 [8] (Table 1).
Vzhledem k pozoruhodným výsledkům, získaným při kombinaci gp41[8] s přítomností TraT, bylo důležité zjistit, zda TraT zvyšuje odpověď T buněk i vůči jinému peptidů, odvozenému od HIV. Za vhodného kandidáta byl zvolen smyčkový peptid V3, neboř tento peptid (La Rosa, G.J., Davide, J.P., Veinhold, K., Vaterbury, J.A., Profy, A.T., Lewis, J.A., Lang18 lois, A.J., Dreesman, G.R., Boswell, R.N., Shadduck, P., Holley, L.H., Karplus, M., Bolognesi, D.P., Matthews, T.J., Emini, E.A. , a Putney, S.D., 1990, Conserved sequence and structural elements in the HIV-1 principál neutralizing determinant, Science 249: 932), který je hlavní neutralizující determinantou HIV-1, je v současné době ve stadiu klinických testů (Scrip, č. 1703, 26, 1992). Výsledky v tabulce 3 ukazují, že ve všech osmi případech testovaný TraT zvýšil proliferativní odpověď vůči peptidu V3. Byl však pozorován inhibiční účinek, jestliže byly PBMC od těchto osmi jedinců kultivovány v přítomnosti IL-2 a peptidu V3 (tabulka 3). V souhrnu byl TraT při zvyšování odpovědi T buněk vůči peptidům gp41[8] a V3, odvozeným od HIV, mnohem účinnější než IL-2, tj. lymfokin, který byl vyzkoušen jako imunoterapeutikum (Rosenberg, S.A., Lotze, M.T., a Mul, J.J., 1988, New approaches to the Immunotherapy of cancer using Interleukin-2, Ann. Intern,In view of the remarkable results obtained when combining gp41 [8] with the presence of TraT, it was important to determine whether TraT increased T cell response to other HIV-derived peptides. Loop peptide V3 was chosen as a suitable candidate (La Rosa, GJ, David, JP, Veinhold, K., Vaterbury, JA, Profy, AT, Lewis, JA, Lang18 lois, AJ, Dreesman, GR, Boswell, RN, Shadduck, P., Holley, LH, Karplus, M., Bolognesi, DP, Matthews, TJ, Emini, EA, and Putney, SD, 1990, Conserved sequence and structural elements in the HIV-1 principal neutralizing determinant, Science 249: 932), which is the major neutralizing determinant of HIV-1, is currently in clinical trials (Scrip, No. 1703, 26, 1992). The results in Table 3 show that in all eight cases the TraT tested increased the proliferative response to the V3 peptide. However, an inhibitory effect was observed when PBMCs from these eight individuals were cultured in the presence of IL-2 and V3 peptide (Table 3). In summary, TraT was much more effective than IL-2, a lymphokine that was tested as an immunotherapeutic (Rosenberg, SA, Lotze, MT, and Mul, in increasing T cell responses to HIV-derived gp41 [8] and V3 peptides). JJ, 1988, New approaches to Immunotherapy of cancer using Interleukin-2, Ann. Intern,
Med. 108: 853).Copper. 108: 853).
(ii) TraT zvyšuje proliferativní odpovědi T buněk in vitro vůči recall antigenům, jako je záškrtový toxoid (DT) a tetanový toxoid (TT)(ii) TraT enhances T cell proliferative responses in vitro to recall antigens such as diphtheria toxoid (DT) and tetanus toxoid (TT)
Obecně se uznává, že lymfoproliferativní odpověď vůči recall antigenům se zhoršuje již během asymptomatického stadia nemoci, kdy jsou počty CD4-pozitivních T buněk často jen mírně sníženy (Lané, H.C., Depper, J.M., Greene, V.C., Vhalen, G. , Valdman, T.A. , a Fauci, A.S., 1985, Qualitative analysis of immune function in patients with acquired immunodeficiency syndrome. Evidence for a selective defect in soluble antigen recognition, N. Engl. J. Med. 313: 79). Protože se prokázalo, že TraT zvyšuje HlV-specifickou lymfoproliferaci jak u symptomatických, tak u asymptomatických jedinců, bylo možno očekávat, že bude mít podobný účinek při zesilování od19 povědí vůči recall antigenům. Schopnost TraT zesilovat odpověď vůči recall antigenům by měla klinický význam při podporování imunity a napomáhání imunokompromizovaným jedincům při potírání oportunních infekcí. U všech šesti studovaných pacientů (č. 123 až 128) TraT významně zvyšoval DTi TT-specifickou proliferativní odpověď (tabulka 4). Díky tomuto zjištění se TraT stal atraktivní imunomodulační molekulou pro obnovování defektní reaktivity T buněk nejen vůči antigenům odvozeným od HIV, ale i v oblasti recall antigenů.It is generally accepted that the lymphoproliferative response to recall antigens deteriorates during the asymptomatic stage of the disease, where CD4-positive T cell counts are often only slightly reduced (Lane, HC, Depper, JM, Greene, VC, Vhalen, G., Valdman, TA, and Fauci, AS, 1985, Qualitative Analysis of Immune Function in Patients with Acquired Immunodeficiency Syndrome (Evidence for Selective Defect in Soluble Antigen Recognition, N. Engl. J. Med. 313: 79). Since TraT was shown to increase HIV-specific lymphoproliferation in both symptomatic and asymptomatic individuals, it was expected to have a similar effect in enhancing the 19 responses to recall antigens. The ability of TraT to enhance the response to recall antigens would be of clinical importance in boosting immunity and helping immunocompromised individuals to combat opportunistic infections. In all six patients studied (Nos. 123 to 128), TraT significantly enhanced the DTi TT-specific proliferative response (Table 4). Thanks to this finding, TraT has become an attractive immunomodulatory molecule for restoring defective T cell reactivity not only to HIV-derived antigens but also in the field of recall antigens.
Z klinického hlediska by molekula s vlastnostmi podobnými kostimulačnímu induktoru, jako je TraT, byla atraktivním imunoterapeutikem pro podporu obecné imunity u imunokompromizovaných j edinců.In clinical terms, a molecule with costimulatory inducer-like properties, such as TraT, would be an attractive immunotherapeutic to support general immunity in immunocompromised individuals.
Příklad 2Example 2
Průtoková cytometrická analýza distribuce podmnožiny T buněk ukazuje, že TraT přednostně stimuluje CD4-pozitivní pomocné T buňkyFlow cytometric analysis of T cell subset distribution shows that TraT preferentially stimulates CD4-positive T helper cells
Distribuce podmnožiny T buněk periferálních krevních mononukleárních buněk (PBMC), která byla stimulována TraT, Interleukinem-2 (IL-2) nebo gp41[8], byla po ódenní inkubaci analyzována pomocí imunofluorescence a průtokové cytometrie.The distribution of a subset of peripheral blood mononuclear cell (PBMC) T cells stimulated with TraT, Interleukin-2 (IL-2) or gp41 [8] was analyzed by immunofluorescence and flow cytometry after an incubation day.
Fenotypy T buněk v proliferujících kulturách PBMC byly porovnány s fenotypy nestimulovaných buněčných kultur.The phenotypes of T cells in proliferating cultures of PBMC were compared to those of unstimulated cell cultures.
Analýza fenotypů T buněk ml objemy stimulovaných a nestimulovaných PBMC (5.10^ buněk/ml) byly kultivovány 6 dní za stejných podmínek jako v příkladu 1. Po 6 dnech kultivace byly peletované buňky resuspendovány a buněčná suspenze byla nanesena na 1 ml gradi20 entů Ficoll-Hypaque (Pharmacia) a centrifugována 10 min při 800 g. Z rozhraní byly odebrány životaschopné (posouzeno podle vylučováni Trypanové modři) lymfoblastoidní buňky a promyty v Hankově rovnovážném solném roztoku (HBSS, Cytosystems, Pty. Ltd.) o pH 7,4. Životaschopné buňky, které byly izolovány z netříděných kultur PBMC, byly fenotypovány pomocí dvojitých kombinací fluorescenčních monoklonálních protilátek (tj. CD 3/4 a CD 3/8, Coulter Electronics lne. , Hialeah FL, USA).T cell phenotype analysis with ml volumes of stimulated and unstimulated PBMC (5 x 10 6 cells / ml) were cultured for 6 days under the same conditions as in Example 1. After 6 days of culture, the pelleted cells were resuspended and the cell suspension was plated on 1 ml Ficoll-Hypaque gradi20 ent. (Pharmacia) and centrifuged for 10 min at 800 g. Viable (assessed by Trypan blue exclusion) lymphoblastoid cells were harvested from the interface and washed in Hank's equilibrium salt solution (HBSS, Cytosystems, Pty. Ltd.) at pH 7.4. Viable cells that were isolated from unsorted PBMC cultures were phenotyped using double combinations of fluorescent monoclonal antibodies (ie, CD 3/4 and CD 3/8, Coulter Electronics Inc, Hialeah FL, USA).
Z každé kultury PBMC bylo testováno dva tisíce životaschopných buněk na povrchově vázanou fluorescenci. Pomocí jednak počtu životaschopných PBMC (tj . po 6 dnech kultivace se stimulací a bez ní) a jednak relativních podílů příslušných podmnožin T buněk, hradlovaných v každé bitové mapě 2000 buněk, byly vypočteny absolutní počty T buněk z podmnožinTwo thousand viable cells were tested for surface bound fluorescence from each PBMC culture. Using both the number of viable PBMCs (ie after 6 days of stimulation with and without pacing) and the relative proportions of the respective T cell subsets gated in each 2000 cell bitmap, the absolute T cell counts from the subsets were calculated.
CD4-pozitivních a CD8-pozitivních T buněk. Pro výpočet počtů podmnožin byl použit vzorec: % podmnožiny T buněk (na 2000 hradlovaných buněk) x počet životaschopných buněk (stanovený vylučováním Trypanové modři). Bitové mapy byly kontinuálně upravovány, aby zahrnovaly většinu buď stimulovaných nebo nestimulovaných lymfocytů. Po 6 dnech kultivace čištěných PBMC bylo a 90 % životaschopných buněk konzistentně zjištěno jako CD3-požitivní, což ukazuje, že se převážně jedná o T buňky.CD4-positive and CD8-positive T cells. The formula was used to calculate the number of subsets:% subset of T cells (per 2000 gated cells) x number of viable cells (determined by Trypan blue exclusion). The bitmaps were continually adjusted to include most of either stimulated or unstimulated lymphocytes. After 6 days of cultivation of purified PBMCs, and 90% of viable cells were consistently found to be CD3-ingestive, indicating that they were predominantly T cells.
Jestliže byly PBMC kultivovány v přítomnosti TraT, gp41[8] nebo IL-2, došlo k 23 až 48% zvýšení absolutních počtů CD4-pozitivních T buněk. Jestliže byl však TraT kombinován s gp41[8], zvýšil se počet CD4-pozitivních T buněk o 63 % (č. 123), resp. o 96 % (č. 124) (tabulka 5). Naproti tomu došlo k poněkud nižšímu (0 až 42 %) vzrůstu počtu CD8-pozitivních T buněk, jestliže byly PBMC inkubovány v přítomnosti kteréhokoli z uvedených tří stimulátorů, který se zvýšil na 10 % (č. 123) a 79 % (č. 124), když byly PBMC vystaveny při ódenní kultivaci směsi TraT a gp41[8]. Dalším pozoruhodným znakem těchto výsledků je, že po ódenní inkubaci s různými stimulátory došlo k významnému zvýšení poměru CD4/CD8 v porovnání s poměrem CD4/CD8, měřeným bezprostředně po izolaci PBMC.When PBMCs were cultured in the presence of TraT, gp41 [8] or IL-2, there was a 23-48% increase in absolute CD4-positive T cell counts. However, when TraT was combined with gp41 [8], the number of CD4-positive T cells increased by 63% (# 123), respectively. by 96% (No 124) (Table 5). In contrast, there was a slightly lower (0-42%) increase in the number of CD8-positive T cells when PBMCs were incubated in the presence of any of the three stimulators, which increased to 10% (# 123) and 79% (# 124). ) when PBMCs were exposed to an Traen-gp41 blend [8]. Another noteworthy feature of these results is that following an en day incubation with various stimulators, there was a significant increase in the CD4 / CD8 ratio compared to the CD4 / CD8 ratio measured immediately after PBMC isolation.
Synergický efekt mezi TraT a gp41[8] byl ještě výraznější, jestliže byly tyto stimulátory testovány na PBMC od pacientů č. 125 a 126 (tabulka 6). U těchto dvou pacientů s komplexem ARC činily procentické přírůstky počtu buněk CD4: TraT - 58 % (č. 125), 36 % (č. 126), gp41[8] - 0 % (č. 125), 18 % (č. 126), IL-2 - 378 % (č. 125), 216 % (č. 126). Došlo však k dramatickému zvýšení počtu buněk CD4, byl-li TraT kombinován s gp41[8]; 737 % (č. 125), resp. 1763 % (č. 126). Procentické přírůstky CD4 byly významně vyšší než odpovídající přírůstky CD8-pozitivní populace, tj. 74 % (č. 125) a 185 % (č. 126) (tabulka 5). Přednostní nárůst CD4-pozitivních pomocných T buněk v kulturách, inkubovaných s TraT nebo s kombinací gp41[8] a TraT, vede k domněnce, že TraT může zvyšovat počty pomocných T buněk in vivo a napomáhat tak HIV-infikovaným jedincům při boji s oportunními infekcemi. Dalšího zlepšení u HlV-pozitivních jedinců je možno dosáhnout kombinací TraT s antiretrovirálními prostředky, jako je zidovudin.The synergistic effect between TraT and gp41 [8] was even more pronounced when these stimulators were tested for PBMCs from patients # 125 and 126 (Table 6). In these two patients with ARC, the percentage increments of CD4 cell counts were: TraT - 58% (# 125), 36% (# 126), gp41 [8] - 0% (# 125), 18% (# 125). 126), IL-2 - 378% (# 125), 216% (# 126). However, there was a dramatic increase in CD4 cell counts when TraT was combined with gp41 [8]; 737% (No. 125), respectively. 1763% (No. 126). The percent CD4 increments were significantly higher than the corresponding CD8-positive population increments, ie 74% (# 125) and 185% (# 126) (Table 5). The preferential increase in CD4-positive helper T cells in cultures incubated with TraT or with a combination of gp41 [8] and TraT, suggests that TraT may increase helper T cell numbers in vivo, helping HIV-infected individuals to fight opportunistic infections . Further improvement in HIV-positive individuals can be achieved by combining TraT with antiretroviral agents such as zidovudine.
Tabulka 1. Zvýšení gp41[8]-specifické proliferativní odpovědiTable 1. Increase in gp41 [8] -specific proliferative response
T buněk pomocí TraT Ošetření (stimulační index)T cells using TraT Treatment (Stimulation Index)
100100 ALIGN!
21,5 (S) nt nt21.5 (S) mt mt
I - inhibiční účinek ’ S - synergický účinek ** A aditivní účinek nt - netestováno (výrazy jsou vysvětleny v příkladu 1)I - inhibitory effect ´S - synergistic effect ** A additive effect nt - not tested (the terms are explained in example 1)
Tabulka 2. Vliv TraT na gp41[8]-specifickou proliferaci T buněk (dávka - odpověď)Table 2. Effect of TraT on gp41 [8] -specific T cell proliferation (dose-response)
č. pacienta a diagnózaPatient No and Diagnosis
Tabulka 3. Zvýšení V3-specifické proliferativní odpovědi T buněk pomocí TraT ošetření (stimulační index)Table 3. Increase of V3-specific T cell proliferative response by TraT treatment (stimulation index)
inhibiční účinek synergický účinekinhibitory effect synergistic effect
Tabulka 4. Zvýšení proliferativní odpovědi T buněk vůčiTable 4. Increase of T cell proliferative response to
stimulační indexstimulation index
AS - asymptomatický ** ARC - AIDS-related complexAS - asymptomatic ** ARC - AIDS-related complex
Tabulka 5. Průtoková cytometrická analýza distribuce prolife rujících a nestimulovaných buněk podmnožiny T buněk po ódenní inkubaciTable 5. Flow cytometric analysis of the distribution of proliferating and unstimulated cells of a subset of T cells after an δ day incubation
č. pacienta a diagnózaPatient No and Diagnosis
123 - Kaposiho sarkom* 124 - mírný ARC*123 - Kaposi's sarcoma * 124 - mild ARC *
Tabulka 6, Průtoková cytometrická analýza distribuce prolife ruj ících a nestimulovaných buněk podmnožiny T buněk po ódenní inkubaciTable 6, Flow Cytometric Analysis of Distribution of Proliferating and Unstimulated Cells of a Subset of T Cells After an Incubate Incubation
č. pacienta a diagnózaPatient No and Diagnosis
125 - ARC 126 - ARC absolutní počet T buněk absolutní počet T buněk125 - ARC 126 - ARC absolute T cell count absolute T cell count
CD4/CD8 v den 0 byl 0,125 u č. 125, 0,09 u ě. 126CD4 / CD8 on day 0 was 0.125 at # 125, 0.09 at. 126
Průmyslová využitelnostIndustrial applicability
Vynález je použitelný při přípravě vakcin, určených k boji s poruchami imunity, jako je AIDS, a k léčbě pacientů s nedostatečností funkce pomocných T buněk obecně.The invention is useful in the preparation of vaccines intended to combat immune disorders such as AIDS and to treat patients with T helper deficiency in general.
Odborníkovi je zřejmé, že vynález, který byl popsán v konkrétních provedeních, je možno různě obměňovat a/nebo modifikovat bez překročení široce popsané myšlenky nebo rozsahu vynálezu. Popsaná provedení je proto nutno považovat ve všech ohledech za ilustrativní, nikoli restriktivní.It will be apparent to those skilled in the art that the invention described in particular embodiments may be varied and / or modified in various ways without departing from the broad description or scope of the invention. The embodiments described are therefore to be considered in all respects as illustrative and not restrictive.
Claims (21)
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
AUPK772591 | 1991-08-13 | ||
PCT/AU1992/000423 WO1993003762A1 (en) | 1991-08-13 | 1992-08-10 | Immunostimulation |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CZ28294A3 true CZ28294A3 (en) | 1994-05-18 |
Family
ID=3775617
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CS94282A CZ28294A3 (en) | 1991-08-13 | 1992-08-10 | Immunostimulation |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0598813A4 (en) |
JP (1) | JPH07500819A (en) |
CA (1) | CA2115424A1 (en) |
CZ (1) | CZ28294A3 (en) |
HU (2) | HUT70269A (en) |
NZ (1) | NZ243929A (en) |
OA (1) | OA09885A (en) |
SK (1) | SK13494A3 (en) |
WO (1) | WO1993003762A1 (en) |
ZA (1) | ZA926021B (en) |
Families Citing this family (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU6786600A (en) * | 1999-08-20 | 2001-03-19 | General Hospital Corporation, The | Outer membrane protein a, peptidoglycan-associated lipoprotein, and murein lipoprotein as therapeutic targets for treatment of sepsis |
US8055347B2 (en) | 2005-08-19 | 2011-11-08 | Brainsgate Ltd. | Stimulation for treating brain events and other conditions |
US9233245B2 (en) | 2004-02-20 | 2016-01-12 | Brainsgate Ltd. | SPG stimulation |
US8010189B2 (en) | 2004-02-20 | 2011-08-30 | Brainsgate Ltd. | SPG stimulation for treating complications of subarachnoid hemorrhage |
JP5731198B2 (en) | 2007-09-27 | 2015-06-10 | イムノバクシーン・テクノロジーズ・インコーポレイテッドImmunovaccine Technologies Inc. | Use of liposomes in carriers containing a continuous hydrophobic phase for delivery of polynucleotides in vivo |
JP5715051B2 (en) | 2008-06-05 | 2015-05-07 | イムノバクシーン・テクノロジーズ・インコーポレイテッドImmunovaccine Technologies Inc. | Composition comprising carrier comprising liposome, antigen, polynucleotide and continuous phase of hydrophobic substance |
US10105435B2 (en) | 2011-10-06 | 2018-10-23 | Immunovaccine Technologies Inc. | Liposome compositions comprising an adjuvant that activates or increases the activity of TLR2 and uses thereof |
EP2878335B1 (en) | 2013-11-10 | 2018-01-03 | Brainsgate Ltd. | Implant and delivery system for neural stimulator |
EP3093043B1 (en) | 2015-05-13 | 2018-11-14 | Brainsgate Ltd. | Implant and delivery system for neural stimulator |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0109688A3 (en) * | 1982-11-23 | 1986-12-03 | The Wellcome Foundation Limited | Improved complexes, processes for obtaining them and formulations containing such complexes |
US4459286A (en) * | 1983-01-31 | 1984-07-10 | Merck & Co., Inc. | Coupled H. influenzae type B vaccine |
EP0145359B1 (en) * | 1983-11-21 | 1991-01-16 | The Wellcome Foundation Limited | Improved complexes, processes for obtaining them and formulations containing such complexes |
NL8403195A (en) * | 1984-10-19 | 1986-05-16 | Nederlanden Staat | IMMUNOGENIC COMPLEXES AND VACCINES CONTAINING THESE. |
CA1331355C (en) * | 1986-04-21 | 1994-08-09 | Bioenterprises Pty. Ltd | Immunopotentation |
CA1340888C (en) * | 1988-09-01 | 2000-02-01 | Algis Anilionis | Vaccines and diagnostic assays for haemophilus influenzae |
CH683101A5 (en) * | 1990-09-18 | 1994-01-14 | Biotech Australia Pty Ltd | New T-cell epitope(s) derived from the TraT protein of E.Coli |
-
1992
- 1992-08-10 JP JP5503956A patent/JPH07500819A/en active Pending
- 1992-08-10 EP EP9292917802A patent/EP0598813A4/en not_active Withdrawn
- 1992-08-10 HU HU9400233A patent/HUT70269A/en unknown
- 1992-08-10 WO PCT/AU1992/000423 patent/WO1993003762A1/en not_active Application Discontinuation
- 1992-08-10 CA CA002115424A patent/CA2115424A1/en not_active Abandoned
- 1992-08-10 CZ CS94282A patent/CZ28294A3/en unknown
- 1992-08-10 SK SK134-94A patent/SK13494A3/en unknown
- 1992-08-11 ZA ZA926021A patent/ZA926021B/en unknown
- 1992-08-12 NZ NZ243929A patent/NZ243929A/en unknown
-
1994
- 1994-02-10 OA OA60472A patent/OA09885A/en unknown
- 1994-12-07 HU HU94P/P00050P patent/HU210605A9/en unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
HU9400233D0 (en) | 1994-05-30 |
EP0598813A1 (en) | 1994-06-01 |
ZA926021B (en) | 1993-03-26 |
OA09885A (en) | 1994-09-15 |
HU210605A9 (en) | 1995-05-29 |
SK13494A3 (en) | 1994-09-07 |
WO1993003762A1 (en) | 1993-03-04 |
NZ243929A (en) | 1994-12-22 |
HUT70269A (en) | 1995-09-28 |
CA2115424A1 (en) | 1993-03-04 |
EP0598813A4 (en) | 1994-09-14 |
JPH07500819A (en) | 1995-01-26 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5134183B2 (en) | Biologically active HIV- for targeting and / or activating antigen-presenting cells and / or delivering cargo molecules for the purpose of prophylactic or therapeutic vaccination and / or treatment of other diseases Use of 1TAT, fragments or derivatives thereof | |
CN110372796B (en) | Chimeric antigen receptor targeting BCMA and preparation method and application thereof | |
US6455045B1 (en) | Immunogenic compounds with in particular an anti-cytokine effect, preparation process, pharmaceutical compositions and kits containing them | |
JP2021138721A (en) | Hiv pre-immunization and immunotherapy | |
NZ535148A (en) | HIV peptides, antigens, vaccine compositions, immunoassay kit and a method of detecting antibodies induced by HIV | |
AU2001282706A1 (en) | HIV peptides from conserved in gag p17 and 924 and their application in E.G. vaccines | |
NO311807B1 (en) | HIV peptides, antigens, vaccine preparations, immunoassay test kits and a method for detecting antibodies induced by HIV | |
WO2010022740A2 (en) | Hiv-1 envelope polypeptides for hiv vaccine | |
US5683701A (en) | Peptide fragments of HIV | |
CN110923255A (en) | Chimeric antigen receptor targeting BCMA and CD19 and uses thereof | |
CZ28294A3 (en) | Immunostimulation | |
CN105950662B (en) | A kind of replication defective recombinant slow virus CAR-T transgene carrier targeting CD22 and its construction method and application | |
SALMON-CÉRON et al. | Safety and immunogenicity of a recombinant HIV type 1 glycoprotein 160 boosted by a V3 synthetic peptide in HIV-negative volunteers | |
CN112940109B (en) | T cell receptor for recognizing EBV antigen and application thereof | |
EP0547166A1 (en) | Pathogen-specific ctl therapy | |
Ley et al. | A novel approach to the induction of specific cytolytic T cells in vivo | |
US20070160571A1 (en) | Composition and method for inducing protective vaccine response | |
JP3536039B2 (en) | Anti-tumor antigen against HTLV-I tumor or antigenic epitope thereof | |
AU656414B2 (en) | Immunostimulation | |
Vyakarnam et al. | T cell responses to peptides covering the gag p24 region of HIV-1 occur in HIV-1 seronegative individuals | |
CN114560949B (en) | Chimeric antigen receptor with enhanced anti-tumor capability of CAR-T cells, D-CAR-T cells and application thereof | |
US20080014214A1 (en) | Composition and Method for Inducing Protective Vaccine Response Using SDF-1 | |
EP4206217A1 (en) | Method for inducing immunity to sars-cov-2 | |
CN117659140A (en) | Novel coronavirus HLA-A2 restriction epitope peptide and application thereof | |
AU630364B2 (en) | Identification of human t-lymphocyte epitopes in pathogens for vaccine development |