CZ2008851A3 - Biologicky aktivní probiotický prostredek - Google Patents

Abstract

Biologicky aktivní probiotický prostredek, který jako úcinnou látku obsahuje mikrobní hmotu živých bakterií vybranou ze skupiny, zahrnující laktobacily Lactobacillus acidophilus z faeces zdravého cloveka kmenu ACT - 41, ACT - 44 a ACT - 5, deponované jednotlive pod prírustkovými císly VKPM V-9644 pro kmen ACT - 41, VKPM V - 9647 pro kmen ACT - 44 a VKPM V - 9645 pro kmen ACT - 5, dále Lactobacillus rhamnosus kmene LC - 52GV, deponovaného pod prírustkovým císlem VKPM V - 9475 a baktérie Bifidobacterium adolescenti kmene BGV - 11, deponovaného pod prírustkovým císlem VKPM Ac - 1742, kde tato mikrobní hmota je v kompozici s živými bakteriemi streptokoku Streptococcus thermophilus, vybranými ze skupiny, zahrnující kmeny ST - 9H, ST - 13, ST - 138 a ST - 154, deponované jednotlive pod prírustkovými císly VKPM V - 9643 pro kmen ST - 9H, pod prírustkovým císlem VKPM V - 9646 pro kmen ST - 13 a pod prírustkovým císlem VKPM V - 7766 pro kmen ST - 138. Prostredek obsahuje nejméne 3,0 x 10.sup.8.n., s výhodou 6,0 x 10.sup.8.n. jednotky vytvárející kolonie KOE laktobacilu Lactobacillus acidophilus a 2,0 x 10.sup.8.n., s výhodou 2,5 x 10.sup.8.n. jednotky vytvárející kolonie KOE streptokoku Streptococcus thermophilus. Použití biologicky aktivního prostredku s antagonistickou aktivitou vuci shigellum, salmonelám, cholerovému vibriu, stafylokoku a ptoteju, pri stavech, vybraných ze skupiny zahrnující akutní, táhlé a chronické strevní infekce zjištené a nezjištené etiologie, opakované oddelení choroboplodných puvodcu strevních infekcí, dlouhotrvající žaludecní poruchy s absencí úcinku od predcházející antibakteriální terapie, disbakteriózy a jejich prev

Description

Biologicky aktivní probiotický prostředek

Oblast techniky

Předmětem vynálezu je biologicky aktivní probiotický prostředek, zvláště pro zlepšení zdravotního stavu a posílení rezistence organizmu zemědělských zvířat a drůbeže.

Dosavadní stav techniky

Probiotika jsou živé bakterie, dodávané organizmu jako potravinové doplňky. Nejznámější jsou laktobacily a bifidobaktérie, ve velké míře obsažené v jogurtu i některých jiných potravinách. Tyto bakteriální druhy jsou nepatogenní a netoxikogenní, přežívají v potravinách a vydrží průchod prostředím žaludku a tenkého střeva. Životní aktivity laktobacilů a bifidobakterií a stimulace jejich růstu jsou ovlivňovány prebiotiky, nestravitelnými potravinovými doplňky. Protože ne všechna probiotika jsou trvalou součástí kolonizující mikroflóry, je třeba je periodicky dodávat. Komerční přípravky zpravidla obsahují směs laktobacilů a bifidobaktérií, někdy i kvasinky (sacharomycety). Předmětem zájmu jsou hlavně bifidobaktérie, anaerobní zárodky, které normálně hrají důležitou úlohu v degradaci cukrů v potravě a tvoří a secernují ve vodě rozpustné vitaminy. Jejich podíl je zvláště vysoký ve střevní mikroflóře kojených dětí (až 95% všech vykultivovaných bakterií), u nichž také mají mimořádně velký význam pro ochranu před střevními infekcemi.

U dospělého člověka je jejich podíl podstatně nižší, i když jejich úloha je i pak významná. Jak se ukazuje, aktivita a význam jednotlivých bakteriálních druhů a kmenů se velmi liší. Přitom je známo, že při standardním mikrobiologickém vyšetření může být identifikována jen nepatrná část anaerobní střevní mikroflóry. Proto jsou zprávy o jejich biologickém významu zatíženy značnou nejednotností. Nicméně je zřejmé, že probiotika jsou podstatnou součástí protiinfekčních mechanizmů střeva.

Mikroorganizmy v probiotikách musí splňovat určitá kritéria. Tak například přežívají průchod prostředím žaludečního traktu, což předpokládá jejich rezistenci proti kyselinám a žluči; jsou životaschopné jak v potravinách, tak také během procesu výroby lyofilizovaných přípravků, a to z hlediska předpisů o přípravě, složení a zkoušeni léčiv (farmakopéa); přilnou na epiteliálních střevních buňkách s následnou kolonizací; nevykazují patogenní příznaky; stabilizují střevní mikroflóru;

rychle se rozmnožují, vytvářejí kolonie ve střevním traktu a perzistují s projevem rodových vlastností probiotik. Uvedeným kritériím nejvíce odpovídá autochtonní skupina mikroorganizmů daného společenství, zahrnující stálé „obyvatele“ střevního ekosystému, jako jsou výše uvedené laktobacily, bifidobaktérie a střevní tyčinky.

Probiotika mají rovněž vliv u zvířat s produktivitou mléka. U zvířat s vysokou produktivitou mléka probíhá mnohem intenzivnější látková výměna a fyziologické a toxické zatížení v * • · · a · o a a a a ·« « a a · a a* * ’ · a a · a a · · aaaa ·· aa* ♦» «» organizmu je mnohem větší. Toxické zatíženi může být i důsledkem zvýšené tvorby dusíku v organizmu, zejména v případě podávání potravy s vysokým obsahem bílkovin (nadbytek koncentrátů), při zužitkování vlastních zásob bílkovin ve formě zdroje energie a při zvýšení podílu zeleného krmivá. Velmi důležitým faktorem je právě krmení. Je známo, že s jedním litrem mléka se z organizmu krávy vylučuje 30 - 35 g bílkovin, 26 - 40 g tuku, 48 g laktózy, 1,2 g vápníku, 0,9 g fosforu, velké množství vitamínů a mikroprvků.

K nepostradatelným složkám potravy, které ovlivňují reprodukční funkce krav, je energie, protein, vitamíny A, E a mikroprvky. Zvíře, jehož denní objem nadojeného mléka činí 30 až 40 litrů, ztrácí větší množství uvedených látek ve srovnání se zvířaty, jejichž objem nadojeného mléka je podstatně nižší. To znamená, že čím vyšší je nadojený objem mléka, tím více potravy bude zvíře vyžadovat. Probiotika přispívají k lepšímu vstřebání vitamínů A, B, E a C v organizmu zvířat.

Účinnost aplikace probiotik v rámci krmení vysokoproduktivních krav není dosud plně doceněna. Probiotika ovlivňuji kvalitu mléka krav. Z hlediska absolutní hodnoty se tučnost mléka zvýší v průměru o 0,05 % a množství mléčných bílkovin o 0,04 %. Není vyloučena ani tendence zvýšeni sušiny a laktózy v mléce. Vyvážená potrava s použitím probiotik ovlivňuje nejen objem nadojeného mléka, ale charakterizuje rovněž složení mléka. Použití probiotik v potravě zlepšuje zdravotní stav hovězího dobytka, snižuje výdaje na veterinární přípravky a služby a rovněž zamezuje ztrátám, vzniklých při poklesu dojivosti při onemocnění zvířat.

Aplikace probiotik je aktuální i v chovu drůbeže, kdy se objevují disbakteriózy a oslabení imunity, čímž se snižuje užitkovost chovu. Platí to zejména v současné době, kdy se přestalo s používáním krmných antibiotik. Úkolem je vytvořit biologicky aktivní krmné doplňky, které napomohou při dalším zlepšení trávení a posílení rezistence organizmu zemědělských zvířat a drůbeže.

Podstata vynálezu

Podstata tohoto vynálezu spočívá v tom, že biologicky aktivní probiotický prostředek obsahuje jako účinnou látku mikrobni hmotu živých bakterii vybranou ze skupiny, zahrnující laktobacily Lactobacillus acidophilus z faeces zdravého člověka kmenů ACT - 41, ACT - 44 a ACT - 5, deponované jednotlivě pod přírůstkovými čísly VKPM V-9644 pro kmen ACT 41, VKPM V - 9647 pro kmen ACT - 44 a VKPM V - 9645 pro kmen ACT - 5, dále Lactobacillus rhamnosus kmene LC - 52GV, deponovaného pod přírůstkovým číslem VKPM V - 9475 a baktérie Bifidobacterium adolescentis kmene BGV -11, deponovaného pod přírůstkovým číslem VKPM Ac - 1742, kde tato mikrobni hmota je v kompozici s živými bakteriemi streptokoků Streptococcus thermophilus, vybranými ze skupiny, zahrnující kmeny «· β ·

-3ST-9H, ST - 13, ST - 138 a ST - 154, deponované jednotlivé pod přírůstkovými čísly VKPM V - 9643 pro kmen ST - 9H, pod přírůstkovým číslem VKPM V - 9646 pro kmen ST 13 a pod přírůstkovým číslem VKPM V - 7766 pro kmen ST - 138.

Biologicky aktivní probiotický prostředek obsahuje nejméně 3,0 x 10®, s výhodou 6,0 x 10® jednotky vytvářející kolonie KOE laktobacilú Lactobacillus acidophilus a 2,0 x 10⁸, s výhodou 2,5 x 10® jednotky vytvářející kolonie KOE streptokoků Streptococcus thermophilus.

Předmětem tohoto vynálezu je dále použití uvedeného biologicky aktivního prostředku s antagonistickou aktivitou vůči shigellům, salmonelám, cholerovému vibriu, stafylokoku a ptoteju, zejména pro zemědělská zvířata a drůbež při stavech, vybraných ze skupiny, zahrnující akutní, táhlé a chronické střevní infekce zjištěné a nezjištěné etiologie, opakované oddělení choroboplodných původců střevních infekcí, dlouhotrvající žaludeční poruchy s absencí účinku od předcházející antibakteriální terapie, disbakteriózy a jejich prevence, alergické choroby, včetně vznikajících při antibiotické terapii a/nebo pro zvýšení rezistence zvířecího organismu.

Laktobacily Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus rhamnosus a bakterie Bifidobacterium adolescentis uvedených kmenů v probiotickém prostředku podle tohoto vynálezu mají vysokou antagonistickou aktivitu k patogenním nebo podmínečně patogenním organizmům. Normalizují mikroflóru trávícího systému, stimulují a jsou vhodné k detoxikaci organizmu. Dochází k obnově a stimulaci růstu laktobacilú a bioprobiotických bakterií ve střevní mikroflóře, snižuje se obsah plísní a koncentrace hnilobných bakterií. Na přípravek s jejich obsahem není návyk a lze jej používat dlouhodobě. Uvedené mikroorganismy zároveň mají vysokou biochemickou aktivitu, nemají zvláštní požadavky na prostředí, na složení krmiv resp. potravy. Jsou aktivní k prostředí, ve kterém se pěstují. Mají imunostimulační účinky, jsou hypoalergenni při aplikaci. Lze je použít ve zdravotnictví, veterinárním lékařství, kosmetice a v potravinářském průmyslu.

Živé bakterie termofilních streptokoků Streptococcus thermophilus v probiotickém prostředku podle tohoto vynálezu vytvářejí dobré podmínky pro množení laktobacilú Lactobacillus acidophilus a bifidobakterií v organismu člověka nebo zvířete, díky přítomnosti exopolysacharidů při produkci β-galaktozidázy. Jsou hypoalergenni a používají se, obdobně jako laktobacily, ve zdravotnictví, veterinárním lékařství, v kosmetice a v potravinářském průmyslu. Pro kultivaci prostředí se používá odtučněné mléko s podílem sušiny v rozsahu od 16 do 18 % hmotn. v prostředí pro vysušení a dlouhodobé uskladnění, anebo odtučněné mléko s přídavkem sacharózy a želatiny a konzervační látky, například kyseliny citrónové.

*« 4 · · 4 4 ·· · · * · « « «9 • · · « «« «« «·« · · 4« · ·9 · · « · 4« • 4 44« ···· · 4 4«

Příklady provedení vynálezu

Biologicky aktivní probiotický prostředek, který je určen k prevenci a léčbě disbakteriózy a ke zvýšeni rezistence organizmu zvířat, obsahuje mikrobni hmotu živých bakterií, zahrnující laktobacily Lactobacillus acidophilus z faeces zdravého člověka kmene ACT - 41, ACT - 44 a ACT - 5, deponované jednotlivě pod přírůstkovými čísly VKPM V - 9644 pro kmen ACT 41, VKPM V - 9647 pro kmen ACT - 44 a VKPM V - 9645 pro kmen ACT - 5. Mikrobni hmota dále může zahrnovat živé bakterie Lactobacillus rhamnosus kmene LC - 52GV, který je deponovaný pod přírůstkovým číslem VKPM V - 9475, a alternativně rovněž živé bakterie Bifidobacterium adolescenti kmene BGV -11, deponovaného pod přírůstkovým číslem VKPM Ac - 1742. Uvedená mikrobni hmota je v kompozici s živými bakteriemi streptokoků Streptococcus thermophilus kmene ST-9H, ST -13, případné ST - 138 a ST- 154, deponovanými jednotlivě pod přírůstkovými čísly VKPM V - 9643 pro kmen ST - 9H, pod přírůstkovým číslem VKPM V - 9646 pro kmen ST -13 a pod přírůstkovým číslem VKPM V - 7766 pro kmen ST - 138. Bakterie streptokoků Streptococcus thermophilus byly kultivovány na mléčné syrovátce a následně vysušeny. Probiotický prostředek dále obsahuje hmotu substrátu, vybraného ze skupiny, obsahující škrob, odstředěné mlého, topinambur, otruby a laktózu.

Jeden gram probiotického prostředku obsahuje nejméně 3,0 x 10^s jednotky vytvářející kolonie KOE laktobacilů Lactobacillus acidophilus a 2,0 x 10⁸ jednotky vytvářející kolonie KOE streptokoků Streptococcus thermophilus. V konkrétním příkladu provedení obsahuje jeden gram probiotického prostředku 6,0 x 10⁸ jednotky vytvářející kolonie KOE laktobacilů Lactobacillus acidophilus a 2,5 x 10⁸ jednotky vytvářející kolonie KOE streptokoků Streptococcus thermophilus.

Při vizuálním pohledu je prostředek homogenní sypký prášek béžové až tmavěbéžové barvy s vůní po kyselém mléce. Jeho aktivita je určena podle obsahu laktobacilů a termofilních streptokoků. Mikrobni hmota živých bakterií je antagonisticky aktivní vůči širokému spektru patogenních a podmíněně patogenních mikroorganizmů. Baktericidní vlastnosti jsou podmíněny obsahem specifických antibiotických látek, jejichž činnost se zvyšuje účinky kyseliny mléčné. Termofilní streptokoky, které v malém množství představují přirozenou mikroflóru organizmu, vytvářejí příznivé podmínky k rozmnožování Lactobacillus acidophilus a za přítomnosti exopolysacharidů a produkování β-galaktozidázy.

V probiotickém prostředku obsažená kultura kmene Lactobacillus acidophilus ACT - 41, deponovaná pod přírůstkovým číslem VKPM V-9644, produkuje L (+) izomer mléčné kyseliny a vyznačuje se antagonistickou aktivitou k patogenním a podmíněně patogenním v * mikroorganizmům. Počet buněk kmene ve sterilním odstředěném mléce činí 9 x 10⁸ až 6 x 10⁹ v jednom cm³. Mezní hodnota tvorby kyselin ve sterilním odstředěném mléce je 420 ± 4,0 °T. Obsah guaninu a cytosinu (GC) v DNK činí 37,1 mol. %.

V probiotickém prostředku obsažená kultura kmene Lactobacillus acidophilus ACT - 44, deponovaná pod přírůstkovým číslem VKPM V - 9647, produkuje L (+) izomer mléčné kyseliny a vyznačuje se antagonistickou aktivitou k patogenním a podmíněně patogenním mikroorganizmům. Počet buněk kmene ve sterilním odstředěném mléce činí 8 x 10⁸ až 5 x 10⁹ v jednom cm³. Mezní hodnota tvorby kyselin ve sterilním odstředěném mléce je 388 ± 5,0 °T. Obsah guaninu a cytosinu (GC) v DNK činí 35,9 mol. %.

Kultura kmene Lactobacillus acidophilus ACT - 5, deponovaná pod přírůstkovým číslem VKPM V - 9645, obsažená v probiotickém prostředku, produkuje L (+) izomer mléčné kyseliny a vyznačuje se antagonistickou aktivitou k patogenním a podmíněně patogenním mikroorganizmům. Obsahuje enzym superoxid dismutáza, vyznačující se vysokou aktivitou. Počet buněk kmene ve sterilním odstředěném mléce činí 5 x 10⁸ až 6 x 10⁹ v jednom cm³. Mezní hodnota tvorby kyselin ve sterilním odstředěném mléce je 265 ± 5,0 °T. Obsah guaninu a cytosinu (GC) v DNK činí 36,7 mol. %.

Výchozí kultury kmene Lactobacillus acidophilus ACT - 41, ACT - 44 a ACT - 5 byly získány z faeces zdravého člověka. Kmeny jsou charakteristické gram pozitivními, nepohyblivými, katalytickými negativními tyčinkami, nevytváří spory. Tyčinky jsou dlouhé, vyskytují se samostatně a v krátkých řetězcích.

Výchozí kultura bakterií Lactobacillus rhamnosus kmene LC - 52GV, deponovaná pod přírůstkovým číslem VKPM V - 9475, byla získána z upravené kultury na bázi kyselého mléka. Produkuje pravotočivou kyselinu mléčnou L (+) a izomery mléčné kyseliny DL a vyznačuje se antagonistickou aktivitou k patogenním a podmíněně patogenním mikroorganizmům. Kmen je charakteristický grampozitivními, nepohyblivými, katalytickými negativními koky, nevytváří spory. Tyčinky jsou krátké, vyskytují se samostatně a v krátkých řetězcích. V hustém živném prostředí tvoří povrchové kolonie typu R. Počet buněk kmene ve sterilním odstředěném mléce činí 2 x 10⁸ až 5 x 10⁸ v jednom cm³. Mezní hodnota tvorby kyselin ve sterilním odstředěném mléce je 120 ± 10,0 °T. Genetické zvláštnosti kmene údaje 16 S RHK.

Výchozí kultura Bifidobacterium adolescentis kmene BGV -11, deponovaného pod přírůstkovým číslem VKPM Ac -1742, byla získána selekcí z populace kmene v * v ·

-6Bifidobacterium adolescenti VKMP V - 2944. Při fermentací uhlovodíků tvoří kyselinu octovou a L (+) izomer mléčné kyseliny a vyznačuje se antagonistickou aktivitou k patogenním a podmíněně patogenním mikroorganizmům. Z hlediska kultury a morfologie jsou zvláštností kmene anaerobní tyčinky, které netvoří spory. Jsou grampozitivní, nerozpouštěji želatinu, netvoří katalázu a z hlediska ureázy nejsou aktivní. Buňky se vyskytují samostatně, mohou rovněž tvořit krátké řetězce (2 až 5 buněk). Počet buněk kmene ve sterilním živném prostředí (prostředí typu Blaurokka, GMK, thioglykolové prostředí) činí 1,0 x 10⁷ až 7,0 x 10⁸ v jednom cm³. Buňky se mohou rozmnožovat ve sterilním odstředěném mléce s růstovými stimulátory, fermentace mléka činí 14-18 hodin. Titrovaná kyselost (při zavedení výchozí kultury v objemu 5 %) může dosahovat 84 ± 130 °T. Obsah guaninu a cytosinu (GC) v DNK činí 58 ± 0,2 mol. %.

Výchozí kultura Streptococcus thermophilus kmene ST - 9H, deponovaná pod přírůstkovým číslem VKPM V - 9643, byla získána z kysaného domácího ukrajinského kyselého mléka. Z hlediska kultury a morfologie jsou zvláštností kmene grampozitivní, nepohyblivé, katalytické negativní koky. Buňky se převážně vyskytují v řetězcích různé délky a ve dvojicích (diplokoky). Produkuje pravotočivou kyselinu mléčnou, obsahuje enzym dismutáza, vyznačující se vysokou aktivitou. Počet buněk kmene ve sterilním odstředěném mléce činí 5 x 10⁸ až 8 x 10⁹ v jednom cm³. Mezní hodnota tvorby kyselin ve sterilním odstředěném mléce je 102 ± 5,0 °T. Obsah guaninu a cytosinu (GC) v DNK činí 38,2 ± 0,12 mol. %.

Výchozí kultura Streptococcus thermophilus kmene ST - 13, deponovaná pod přírůstkovým číslem VKPM V - 9646, byla získána z tržního kyselého mléka.

Z hlediska kultury a morfologie jsou zvláštností kmene grampozitivní, nepohyblivé, katalytické negativní koky. Buňky se převážně vyskytují v řetězcích různé délky a ve dvojicích (diplokoky). Kmenem je syntetizována pravotočivá kyselina mléčná a βgalaktozidáza. Počet buněk kmene ve sterilním odstředěném mléce činí 4,0 x 10⁸ až 3,0 x 10⁹ v jednom cm³. Mezní hodnota tvorby kyselin ve sterilním odstředěném mléce je 94 ± 4,0 °T. Obsah guaninu a cytosinu (GC) v DNK činí 38,6 mol. %.

Výchozí kultura Streptococcus thermophilus kmene ST - 138, deponovaná pod přírůstkovým číslem VKPM V - 7766, byla získána z kysaného mléčného produktu. Z hlediska kultury a morfologie jsou zvláštností kmene grampozitivní, nepohyblivé, katalytické negativní koky. Neředí želatinu, netvoří spory. Buňky se převážně vyskytují v řetězcích různé délky a ve dvojicích (diplokoky). Produkuje pravotočivou kyselinu mléčnou, obsahuje enzym βgalaktozidázu, může syntetizovat exopolysacharidy. Počet buněk kmene ve sterilním odstředěném mléce činí 2,5 x 10⁸ až 9,0 x 10⁹ v jednom cm³. Mezní hodnota tvorby kyselin • * • · · · · · · · *·· • · · · · «···

7· «··· v · ·« · ·

- · β φ V · » · * ···· ·· ·«· ···· ·· ·· ve sterilním odstředěném mléce je 92 ± 6,0 °T. Obsah guaninu a cytosinu (GC) v DNK činí 38,9 ±0,10 mol. %.

Výchozí kultura Streptococcus thermophilus kmene ST -154, deponovaná pod přírůstkovým číslem VKPM V - 7987, byla získána z kysaného domácího kyselého mléka. Z hlediska kultury a morfologie jsou zvláštností kmene grampozitivní, nepohyblivé, katalytické negativní koky. Buňky se převážně vyskytují v řetězcích různé délky a ve dvojicích (diplokoky). Produkuje pravotočivou kyselinu mléčnou, obsahuje enzym β-galaktozidázu. Počet buněk kmene ve sterilním odstředěném mléce činí 4 x 10⁸ až 9,0 x 10⁹ v jednom cm³. Mezní hodnota tvorby kyselin ve sterilním odstředěném mléce je 84 ± 5,0 °T. Obsah guaninu a cytosinu (GC) v DNK činí 39,8 ± 0,12 mol. %.

Aplikace probiotického prostředku

Léčba hříbat se syndromem diarea (průjmové onemocnění) neobjasněné etiologie

Na hříbatech ve stáří do čtyř měsíců byl proveden následující test na preventivní a léčebnou účinnost probiotického prostředku podle tohoto vynálezu. Hříbata byla rozdělena do skupin se syndromem diarea (průjmové onemocnění) neobjasněné etiologie, se syndromem diarea (průjmové onemocnění), v důsledku realizované léčebné kúry antibiotiky a konečně na hříbata, která byla zaostalá z hlediska růstu a vývoje, v důsledku porušení trávicích procesů při narození.

Anamnéza: syndrom diarea (průjmové onemocnění) se vyvíjí v průběhu 2 až 5 dní. Zdraví hříbat bylo do té doby v pořádku. Hříbata mají velkou žízeň a nechtějí žrát. Objevuje se častá defekace, výkaly jsou tekuté s pronikavým zápachem. Po vyšetření se ukázalo, že sliznaté dutiny byly bledé, jazyk byl suchý, teplota byla v normě. Pokusná hříbata užívala probiotický prostředek v závislosti na stupni onemocnění, a to 0,06 g prostředku na jeden kg hmotnosti, minimálně však 0,1 g prostředku. Bylo doporučeno denní užívání po dobu 10 dní. Při podezření otravy se hříbatům podávaly antidotni přípravky, dále byla doporučena celková posilující léčba a látky, stimulující srdeční činnost.

Výsledky užívání prostředku u hříbat se syndromem diarea (průjmové onemocnění) neobjasněné etiologie

	Název ukazatele	Test	Kontrola
1.	Počet hříbat	8	6
2.	Počet uzdravených hříbat po ukončení 1 léčebné kůry	7	2
3.	Počet uhynulých zvířat	-	-

·«

-8Léčba syndromu diarea (průjmové onemocněni) antibiotické etiologie u hříbat

Anamnéza: syndrom diarea (průjmové onemocnění) se u hříbat vyvíjel po perorálním užívání nebo nitrosvalové aplikaci antibiotik. Přípravek byl naordinován v dávce 0,06 g na jeden kg hmotnosti, minimálně však 0,1 g. Bylo doporučeno denní užívání po dobu 10 dni. Na základě údajů se po 10 až 12 dnech celá léčebná kůra opakovala. Dávky přípravku zůstaly stejné. Hříbatům byla naordinována dieta hladem, byly jim podávány bylinné odvary, lněné semínko, vitamíny až do úplného zániku klinických příznaků onemocněni.

	Název ukazatele	Test	Kontrola
1.	Počet hříbat	10	9
2.	Počet uzdravených hříbat po ukončeni 1 léčebné kůry	9	-
3.	Délka léčby, dní	7 + 3	11+4
4.	Počet hříbat, která se uzdravila v průběhu pozorování (opakovaná léčba)	10	3

Aplikace probiotického přípravku ke stimulaci růstu zvířat a pro normalizaci střevní činnosti

Přípravek byl naordinován hříbatům ve stáři 0 až 4 měsíce, odmítajícím krmivo, dále s celkovou ochablostí a hříbatům, která byla zaostalá ve svém růstu a vývoji. Přípravek byl aplikován dle stanoveného dávkování, a to 0,06 g na jeden kg hmotnosti, minimálně však 0,1 g. Bylo doporučeno denní užívání po dobu 10 dní a s přestávkou 20 dní. U všech hříbat bylo zaznamenáno zvýšení chuti, upravila se jejich pohybová aktivita, zregenerovala se srst zvířat. Tato zvířata dostihla ve vývoji své vrstevníky. Bylo prokázáno, že aplikace probiotického přípravku normalizuje složení střevní mikroflóry. Mikrobiocenóza byla dle údajů laboratorních vyšetření a po ukončené léčbě uvedeným přípravkem tvořena gramnegativní a grampozitivní mikroflórou, streptokoky, dále tyčinkami, tvořícími spory. Před zahájením léčby byla zaznamenána gramnegativní mikroflóra s kvasinkami, stafylokoky, aktinomycetní tyčinky, bakteroidy. Z hlediska etiologie onemocnění bylo možno konstatovat, že přípravek vylučuje ve všech podmínkách rozšíření syndromu diarea.

Aplikace probiotického přípravku s cílem zvýšeni produktivity a kvality mléka krav a k normalizaci stavu trávicího traktu zvířat.

Probiotický přípravek byl použit k prevenci a léčbě disbakteriózy a za účelem zvýšení odolnosti organizmu zvířat. Obsahuje dva druhy životaschopných buněk baktérii (Lactobacillus acidophilus, minimálně 3.0*10 KOE/g, Streptococcus termophilus, minimálně 2.0*10 KOE/g). Přípravek je homogenní, sypký prášek béžové až tmavě béžové barvy a má specifickou vůni po kyselém mléce.

-9Schéma aplikace je znázorněno níže:

i

Skuoinv

i - kontrolní skupina		II - pokusná skupina
základní dávky krmivá		základní dávky krmivá + 50 g probiotik

▼

Vědecké a hospodářské testy ______________i_________________

Mléčná produktivita: hmotnostní podíl tuku v mléce, množství mléčného tuku

Kvalita mléka: koncentrace sušiny, SOMO, tuku, bílkovin, kaseinu, laktózy, chemické a fyzikálně chemické výzkumy a vyšetření, organoleptické vyhodnoceni.

Krmivo, dávky krmiv, krmení zvířat

Efektivita výroby mléka s použitím probiotik

Fyziologické testy

Krmivo a dávky krmiv

Stravitelnost výživných látek jednotlivých dávek krmiv >

_______________♦_______________

Celkové množství a rodové složeni mikroflóry

Hematoloaické ukazatele

Klinické ukazatele ·· ·· * ·· ·♦ ·· • · ♦ · ···* ···· • · · φ ·«·« ._Λ ♦ ··· ♦ ♦ « · ♦ *· ·

- 1 (J - · · a · · * · · •••a aa ··· aaaa aa <·

Mléčná produktivita.

Na zkušební farmě byly provedeny zkoušky za účelem zjištění efektivity vlivu bakteriálního probiotického přípravku podle tohoto vynálezu na mléčnou produktivitu krav. Výsledky zkoušek (viz níže uvedená tabulka) ukázaly, že při aplikaci přípravku se mléčná produkce krav ve zkušební (pokusné) skupině zvýšila v průměru o 4,9 % za celé období provádění zkoušek.

Mléčná produktivita krav v průběhu zkoušek

Ukazatelé	Kontrolní skupina	Zkušební skupina
Za období zkoušek (14 dní), kg:	354 ± 9,7	382 + 10,1
Průměrná denní dojivost, kg	25,3 ± 0,98	27,3 ± 0,82
Množství 4 % mléka, kg	257 ± 76,2	286 ± 80,2
Hmotnostní podíl tuku, %	3,88 ± 0,03	3,93 ± 0,02
Množství mléčného tuku, kg	10,2 ±0,37	11,6 ±0,83

Průměrná denní dojivost krav zkušební skupiny přesáhla za období zkoušek průměrnou denní dojivost kontrolní skupiny o 2,0 kg za 24 hodin. Tučnost mléka krav zkušební skupiny se ve srovnání s kontrolní skupinou zvýšila o 0,05 % absolutní hodnoty. Ukazatelé mléčné produktivity krav svědčí o tom, že průměrná dojivost 4 % mléka se u zkušební skupiny zvýšila o 9,1 %.

Analýza mléčné produktivity, zahrnující vždy pět dnů zkoušek, ukázala, že během prvních 5 dnů provádění zkoušek se dojivost krav, které užívaly priobiotika, přesáhla dojivost krav kontrolní skupiny o 4,1 %, během dalších 5 dnů - o 3,5 % a v závěrečné fázi zkoušek - o 16,5%.

Kvalitativní ukazatelé mléka

V průběhu provádění zkoušek byly kromě změn, týkajících se kvantity mléka, zjištěny i kvalitativní ukazatelé mléka. Průměrný obsah hmotnostního podílu tuku v mléce krav zkušební skupiny činil 3,93 %, u kontrolní skupiny to bylo 3,88 %. Hladina mléčné produktivity a obsah tuku v mléce ovlivnily také objem mléčného tuku. Rozdíl mezi oběmi skupinami činil z hlediska množství mléčného tuku 7,4 kg (7,2 %).

Zvýšení tuku v mléce činilo během první 5 dnů 0,04 % absolutní hodnoty, během dalších 5 dnů - 0,05 %, a v závěrečné fázi zkoušek - 0,05 %. Znamená to, že byla zjištěna tendence zvyšování hmotnostního podílu tuku v mléce pokusných krav, kterým byl podáván přípravek, a to od 4 g tuku na 100 g mléka během prvních 5 dnů, do 5 g v dalších 5 dnech a v ·

JJ ·«· · v «····«

- I I - · · « * · · * * ···· « *· »»·· ·· ·· závěrečných 5 dnech, při nízkém stupni hodnověrnosti rozdílů mezi ukazateli dle jednotlivých skupin.

Dále byla zjištěna tendence zvýšení sušiny o 1,61 % v mléce krav zkušební skupiny, zejména díly obsahu SOMO o 1,87 %, zvýšení tuku o 1,29 %, bílkovin o 1,10 %, laktózy o 1,80 % (viz níže uvedená tabulka).

Fyzikální a chemické složení mléka krav (při výpočtu na 1 kg, q)

Ukazatelé	Kontrolní skupina	Zkušební skupina
Sušina	124,3 ±0,6	126,3 ±0,5
SOMO	85,5 ± 0,2	87,1 ±0,4
Tuk	38,8 ±0,3	39,3 ± 0,9
Bílkoviny	34,1 ± 0,3	34,5 ± 0,5
Mléčný cukr	44,4 ± 0,3	45,2 ± 0,2
Popel	6,67 ± 0,3	6,86 ± 0,4

Elektroforegramy kaseinu a syrovátkových bílkovin ukázaly, že bílkovinné frakce mléka krav zkušební skupiny krav zůstaly nezměněny. V mléce krav zkušební skupiny byly zjištěny změny v zónách y (u) - kaseinu (2 fragmenty oproti 3 v kontrolní skupině), oc-kaseinu (3 místo 5 u kontrolních zvířat); v zóně proteozoteptonů (1 fragment oproti 3) a v zóně p (r) laktoglobulinů (2 fragmenty oproti 3), to znamená, že nebyly zjištěny drobné fragmenty, u nichž s největší pravděpodobnosti proběhla koagulace nebo asociace s velkými (základními) frakcemi bílkovin, což může být zároveň důkazem ukončení procesu syntézy bílkovin v buňkách mléčné žlázy.

Organoleptická vyhodnocení ukázala, že mléko krav zkušební skupiny a kontrolní skupiny bylo rozdílné, bylo zařazeno k produktům vysoké kvality.

Výsledky krmení pokusných zvířat.

Dávky krmivá, určené pro pokusná zvířata, vyhovovaly z hlediska obsahu výživných látek požadavkům pro krmení vysokoproduktivních krav. Koncentrace syrové buničiny v 1 kg sušiny krmivá činila: seno - 33,1 %, siláž - 29,7 %, bylinná mouka - 27,8 %, koncentrovaná krmivá - 5,6 %, šrot - 18,1 %. Růst mléčné produktivity krav přispěl k větší úspoře krmiv na jednotku produkce. Na 1 kg mléka krávy ve zkušební skupině se spotřebovalo mnohem ·· « ·· ·β ···* · · * ♦ * » · * Φ φ V * V · ·· · ·♦· * « »·*«**

- 1ζ - · · ·♦ » · ♦ · «••V 99 »·· ··*· 99 ·♦ méně krmivá ve srovnáni s kontrolní skupinou, a to o 7,6 %, včetně koncentrovaných krmiv u těch došlo ke sníženi o 5 %.

Zvířata zužitkovala energetická krmivá beze zbytku, na 100 %, zkušební (pokusná) skupina spotřebovala o 3,8 % více sena a siláže. Hladina spotřeby výživných látek krmiv u krav ve zkušební skupině byla mnohem vyšší ve srovnání s kontrolní skupinou. Zkušební skupina spotřebovala o 1,34 % více sušiny, organických látek o 1,36 %, surového proteinu - o 1,0 %, surové buničiny - o 2,92 %, surového tuku - o 1,25 %, BEV - o 1,22 %.

Probiotický přípravek podle tohoto vynálezu v krmivech, určených pro pokusná zvířata, ovlivnil stravitelnost výživných látek (viz tabulka).

Koeficienty stravitelnosti výživných látek v jednotlivých dávkách krmivá

Ukazatelé	Kontrolní skupina	Zkušební skupina
Sušina	66,7	68,9
Organické látky	68,1	70,8
Surový protein	69,2	70,5
Surová celulóza (buničiny)	59,3	66,3
Surový tuk	70,9	69,5
BEV	72,7	71,7

Stravitelnost výživných látek jednotlivých dávek krmiv u krav zkušební (pokusné) skupiny byla vyšší ve srovnání se zvířaty kontrolní skupiny: sušina - o 1,5 %, organické látky - o 2,7 %, surový protein - o 1,3 %, surová buničina - o 7,0 %.

Zvýšení stravitelnosti surové buničiny u krav zkušební (pokusné) skupiny lze posuzovat jako výsledek zlepšení celulozolytické aktivity symbiotické mikroflóry, jejíž efektivní vývoj je spojen s požíváním probiotického přípravku.

Pozitivní účinky probiotického přípravku na trávicí trakt u krav zkušební (pokusné) skupiny se projevily ve zvýšení hladiny stravitelnosti všech druhů krmiv, zejména pak krmivá s vysokým obsahem buničiny. Výsledek výzkumu stravitelnosti sušiny v krmivech ukázal, že koeficient stravitelnosti sena u krav zkušební skupiny byl o 5,75 % vyšší, koeficient stravitelnost siláže - o 1,73 %, bylinné mouky - o 1,81 %, u koncentrovaných krmiv - o 6,92 %. Využiti energie jednotlivých druhů krmiv u krav zkušební skupiny se výrazně lišilo od krav v kontrolní skupině. Krávy zkušební skupiny využily objemovou energii krmivá o 16 % více (u sena), o 5 % (bylinná mouka), o 12,6 % (koncentrovaná krmivá) a o 3,2 % (siláž) ve srovnání s kontrolní skupinou.

-13·· ♦ • ·

Při aplikaci probiotického přípravku v jednotlivých dávkách krmivá nebyly zaznamenány odchylky u biochemických a morfologických ukazatelů krve vzhledem k fyziologickým normám, což ukazuje na normální průběh fyziologických procesů v organizmu a na dostatečný přísun výživných látek do organismu krav. Na základě údajů z klinického vyšetření pokusných zvířat lze stanovit, že zvířata byla s přihlédnutím na teplotu těla, puls, frekvenci dýchání a pohybu bachoru krav zdravá a metabolické procesy, probíhající v jejich organizmu, se nacházely v mezích fyziologických norem. Probiotický přípravek vykázal pozitivní účinky na mikroflóru trávicího traktu a její činnosti, přispěl k aktivizaci metabolických procesů v organizmu, systému enzymů v trávicím traktu a ke zlepšení stravitelnosti výživných látek jednotlivých dávek krmiv a dále nejen k jejich zužitkování při růstu tkání a orgánů, ale také v rámci jejich vlivu na produktivitu. Jedná se o přípravek s komplexním efektem, který nevykazuje toxické a vedlejší účinky, nevyvolává závislost mikroflóry na jeho užívání a z ekologického hlediska je naprosto nezávadný.

Aplikace probiotického přípravku, vyrobeného na bázi kompozice kultur životaschopných buněk baktérií Lactobacillus acidophilus a Streptococcus termophilus, přirozených pro bachor prežvýkavců, zvyšuje produktivitu krav. Bylo zjištěno, že při přidání 50 g přípravku (najedno zvíře) do jednotlivých dávek krmivá se zvyšuje mléčná produktivita o 7,9 %. Podávání probiotického přípravku ovlivnilo kvalitativní složení mléka. Tučnost mléka se z hlediska absolutní hodnoty zvýšila o 0,05 %, obsah bílkovin o 0,04 %. Dále byla zjištěna tendence zvýšeni obsahu sušiny, SOMO a laktózy v mléce. Základní bílkovinné frakce mléka krav, jimž byl v krmivech podáván probiotický přípravek, zůstaly nezměněny. Výsledky organoleptického vyhodnoceni mléka ukázaly, že zkrmováni probiotik nesnižuje chuťové kvality mléka. Probiotický přípravek zvýšil stupeň zkrmováni hrubého a šťavnatého krmivá. Spotřeba sena se zvýšila o 3,8 % a rovněž siláž se podávala ve větších objemech, čímž se zvýšila spotřeba sušiny o 1,34 %, surové buničiny o 2,92 % a surového proteinu o 1,0 %. Biochemické a morfologícké ukazatele krve a klinické ukazatele pokusných zvířat ukázaly, že zdravotní stav zvířat a průběh metabolických procesů v jejich organizmu se v průběhu provádění zkoušek nacházel v mezích fyziologických norem. Probiotický přípravek v doporučené dávce (50 g na jedno zvíře) zlepšuje motorickou a sekreční činnost trávicího traktu, zvyšuje objem mikrofauny a mikroflóry v bachoru krav, umožňuje zvýšit stravitelnost výživných látek, obsažených v krmivech, normalizovat složení mikroflóry žaludku střev. Mléčná produktivita krav může být zvýšena o 7,9 % a zužitkování buničiny 7,0 %.

- 14Aplikace probiotickěho přípravku v chovech drůbeže

V chovu drůbeže se často objevují disbakteriózy a oslabení imunity. Výsledkem je procentuální růst onemocněni drůbeže a snižováni její užitkovosti. Tento problém je aktuální v současné době, kdy se přestaly používat krmná antibiotika. Biologicky aktivním krmný doplněk, tvořený probiotickým přípravkem podle tohoto vynálezu byl zkoušen s cílem zlepšit trávení a posílit rezistenci organizmu zemědělských zvířat a drůbeže. Přípravek obsahoval 2,5.10®KOE mikrobních buněk a byl testován na účinnost při výkrmu brojlerových kuřat. Zkouška se uskutečnila ve viváriu ONO „Zagorskoje“ EPCH VNITIP v roce 2006 na brojlerech „Kobb-500“ v buněčných bateriích typu R-15. Prováděla se ve skupině s 35 brojlerovými kuřaty ve stáři od jednoho dne do 38 dní. Podmínky pro chov mláděte (světlo, teplota, hustota chovu aj.) vyhovovaly doporučením VNITIP (2004). Pro výkrm drůbeže byly použity výživné sypké krmné směsi, jejichž výživnost byla stanovena dle VNITIP (2006). Testovanou složkou krmných směsi u skupin drůbeže, na nichž se prováděly testy, byl biologicky aktivní probiotický přípravek podle tohoto vynálezu. Jeden gram přípravku obsahoval 2,5.10® KOE živých mikrobních buněk. Kontrolní skupina drůbeže byla vykrmována plně výživnými krmivý bez přidání biologického doplňku.

Zkoušky ukázaly, že probiotický přípravek jako složka plně výživných krmných směsí pro drůbež přispěl v dávkách 5 a 10 kg /1 ke zlepšení chovu brojlerových kuřat o 2,9 %. Přidání přípravku do krmných směsí testovaným kuřatům v dávkách 5 a 10 kg /1 zvýšilo za 28 dní hmotnost brojlerů o 5,1 - 7,7 %. Rozdíly v hmotnosti testovaného kuřete byly ve srovnání s kontrolním kuřetem statisticky hodnověrné. Vyšší ukazatele u živé váhy kuřete byly zaznamenány u druhé testované skupiny, u níž bylo aplikováno dávkování 10 kg /1 krmivá. Aplikace přípravku jako doplňku krmivá v krmných směsích zajistila v průběhu 38 dní větší růst mláďat, přičemž jejich hmotnost se ve srovnáni s kontrolní skupinou zvýšila o 2,3 - 2,6 %. Během zkoušky nebyly zaznamenány rozdíly v přírůstku váhy kuřat při aplikaci dávkování 5 nebo 10 kg /1 přípravku. Přípravek neovlivnil spotřebu krmivá u testovaných kuřat, při jeho použití v krmných směsích pro brojlerová kuřata se snížila spotřeba krmivá vzhledem k přírůstku na váze o 3,2 - 3,9 %. Stravitelnost a využitelnost výživných látek (protein, tuk, dusík, minerální látky a dostupnost lyzinu, metioninu) ze zkušebních krmiv se nacházely na kontrolní úrovni nebo byla zaznamenána tendence ke zvýšeni. Biochemické ukazatele prsních svalů a jater u testovaných 38-denních brojlerových kuřat se nacházely na kontrolní úrovni a shodovaly se s fyziologickými ukazateli pro dané stáří brojlerových kuřat.

-15Aplikace probiotického přípravku při chovu drůbeže ke stimulaci růstu a za účelem normalizace střevní činnosti

Ukazatelé	Drůbežárna	Drůbežárna - (test)
Datum zahájení chovu	17.08. 2007	19.08.2007
Datum zabití drůbeže	01.10.2007	03.10. 2007
Počet kusů drůbeže	39095	38865
Zbývající počet kusů, %	91,3	93,8
Hrubý přírůstek na váze	61069 ks	62172 ks
Čistý přírůstek na váze	57867 ks	60630 ks
Denní přírůstek na váze	37,4 g	38,4 g
Hmotnost jednoho kusu drůbeže	1,659 kg	1,701 kg
Délka chovu, počet dnů	45	45

Na základě provedených zkoušek lze konstatovat, že aplikace přípravku přispěla ke zvýšení počtu kusů drůbeže v chovných podmínkách a ke zvýšení denního přírůstku na váze v průběhu výkrmného procesu brojlerových kuřat. Přípravek účinkoval proti vzniku průjmů a normalizoval činnost žaludku a střevního traktu. Přípravek je možné používat namísto antibiotik.

Průmyslová využitelnost

Biologicky aktivní probiotický prostředek podle tohoto vynálezu je využitelný zvláště pro zlepšení zdravotního stavu a posílení rezistence organizmu zemědělských zvířat a drůbeže. Používá se k léčbě a prevenci disbakteriózy zemědělských a domácích zvířat, ptactva a kožešinové zvěre, ke zlepšení jejich trávení a zvyšování hmotnosti a k dobrému vývoji mláďat. Přimíchává se do krmivá, navozeným mláďatům se může přidávat i do teplého mléka.

Claims (5)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Biologicky aktivní probiotický prostředek, vyznačující se tím, že jako účinnou látku obsahuje mikrobni hmotu živých bakterií vybranou ze skupiny, zahrnující laktobacily Lactobacillus acidophilus z faeces zdravého člověka kmenů ACT -41, ACT - 44 a ACT - 5, deponované jednotlivě pod přírůstkovými čísly VKPM V-9644 pro kmen ACT - 41, VKPM V 9647 pro kmen ACT - 44 a VKPM V - 9645 pro kmen ACT - 5, dále Lactobacillus rhamnosus kmene LC - 52GV, deponovaného pod přírůstkovým číslem VKPM V - 9475 a baktérie Bifidobacterium adolescenti kmene BGV -11, deponovaného pod přírůstkovým číslem VKPM Ac -1742, kde tato mikrobni hmota je v kompozici s živými bakteriemi streptokoků Streptococcus thermophilus, vybranými ze skupiny, zahrnující kmeny ST- 9H, ST-13, ST-138 a ST-154, deponované jednotlivě pod přírůstkovými čísly VKPM V9643 pro kmen ST - 9H, pod přírůstkovým číslem VKPM V - 9646 pro kmen ST -13 a pod přírůstkovým číslem VKPM V - 7766 pro kmen ST -138.
2. 2. Biologicky aktivní prostředek podle nároku 1, vyznačující se tím, že obsahuje nejméně 3,0 x 10⁸ jednotky vytvářející kolonie KOE laktobacilů Lactobacillus acidophilus a 2,0 x 10® jednotky vytvářející kolonie KOE streptokoků Streptococcus thermophilus.
3. 3. Biologicky aktivní prostředek podle nároku 2, vyznačující se tím, že obsahuje 6,0 x 10⁸ jednotky vytvářející kolonie KOE laktobacilů Lactobacillus acidophilus a 2,5 x 10⁸ jednotky vytvářející kolonie KOE streptokoků Streptococcus thermophilus.
4. 4. Použití biologicky aktivního prostředku podle nároku 1 nebo 2, s antagonistickou aktivitou vůči shigellům, salmonelám, cholerovému vibriu, stafylokoku a ptoteju, při stavech, vybraných ze skupiny zahrnující akutní, táhlé a chronické střevní infekce zjištěné a nezjištěné etiologie, opakované oddělení choroboplodných původců střevních infekci, diouhotrvajici žaludeční poruchy s absenci účinku od předcházející antibakteriální terapie, disbakteriózy a jejich prevence, alergické choroby, včetně vznikajících při antibíotické terapii.
5. 5. Použití biologicky aktivního prostředku podle nároku 1 nebo 2 pro zvýšení rezistence zvířecího organismu.