CZ200851A3 - Sacharidové deriváty lupanu, jejich použití a farmaceutické prípravky obsahující tyto deriváty - Google Patents

Abstract

Sacharidové deriváty lupanu obecného vzorce I, kde R znamená substituent nezávisle vybraný ze skupiny zahrnující vodík, hydroxylovou, amino, merkapto, alkyloxy, alkylovou a sacharidovou skupinu, R' znamená substituent nezávisle vybraný ze skupiny zahrnující vodík, alkylovou, karboxylovou, acylovou, a sacharidovou skupinu, kde alespon jeden z R a R' obsahuje sacharidovou skupinu. Popisují se rovnež farmaceutické prostredky obsahující tyto deriváty a použití techto látek jako léciv a rustových regulátoru.

Description

Oblast techniky

Vynález se týká sacharidových derivátů lupánu a jejich použití pro inhibice hypeproliferace savčích buněk, pro léčení proliferativnich onemocnění u savců, především v protinádorové terapii. Vynález zahrnuje rovněž preparáty obsahující tyto deriváty.

Dosavadní stav techniky

Saponiny patří do rozsáhlé rodiny steroidních nebo triterpenoidních glykosidů, široce se vyskytujících v rostlinách a některých mořských organismech, v nichž jsou hydrofilní mononebo oligo-sacharidy spojeny s hydrofobní sapogeninovou páteří (Hostettmann et al., Saponins, Cambridge University Press, 1995). Tyto látky získaly značnou pozornost pro své různorodé slibné biologické a farmaceutické vlastnosti, zahrnující protinádorové, protivirové, íungicidní, protizánětlivé a další účinky (Ikeda et al., Biol. Pharm. Bull., 23,2000,363-364; Takechi et al., Phytochemistry, 30, 1991, 3943-3944; Mimaki et al., Phytochemistry, 38, 1995, 1279-1286). Nedávno byl ukázán jejich signifikantní vliv na růst rostlin (Ohara et al., J. Wood Sci., 49, 2003, 59-64).

Lupeol [33-lup-20(29)-en] byl nalezen v mnoha rostlinných druzích (Mutai et al., Phytochemistry, 65,2004, 1159-1164; Krasutsky, Nat. prod. Rep,, 23,2006, 919-942), betulin (lup-20(29)-en-3p,28-diol) je vysoce významnou komponentou březové kůry a betulinová kyselina [3p-hydroxy-lup-20(29)-en-28-ová kyselina] mající velice zajímavé a slibné biologické vlastnosti (Sami et al., Eur. J. Pharm. Sci., 29,2006,1-13; Dzubak et al., Nat. Prod. Rep., 23, 2006, 394-411) může být také izolována z různých rostlin (Baglin et al., Mini Rev. Med. Chem., 3, 2003, 525-539) nebo snadno připravena zbetulinu (Kim et al., Synth. Commun., 27, 1997, 1607-1612). Přirozené saponiny založené na lupeolu (Minocha, Phytochemistry, 20, 1981, 135-137) a betulinové kyselině (Tapondjou et al., Phytochemistry, 67, 2006, 2126-2132) se zřídka nacházejí v přírodě, a zprávy o jejich syntéze jsou také sporadické (Ma et al., Tetrahedron Lett., 45, 2004, 3261-3263; Gauthier et al., Bioorg. Med. Chem., 14, 2006, 6713-6725). Různé aspekty chemické a biologické aktivity betulinu a jeho derivátů jsou diskutovány v různých článcích (Pakulski, Polish J. Chem,, 79,2005,361-367).

Slibné pro jejich potencionální klinické využití je, že tyto triterpenoidy nevykazují hemolytickou aktivitu ve vysokých koncentracích (100 mmol/1) a pouze velmi nízkou aktivitu v extrémních koncentracích (500 mmol/1) (Yamashita et al., Clinica Chim, Acta, 325, 2002, 91’96). Například, hodnoty EC50 (50% účinná koncentrace) < 6,6xl0⁴ μΜ a pozoruhodně vysoký terapeutický index (TI) překonávající 20 000 byly získány pro některé deriváty betulinu a betulínové kyseliny, ve srovnání s 1,5 μΜ a 12 000 pro azidothymidin (AZT). Navíc vykazují některé deriváty betulinu a betulínové kyseliny vysokou antí-HIV aktivitu (Sun et al., J. Med. Chem., 41, 1998, 4648-4657). Některé deriváty také vykazují signifikantní cytotoxicitu a protinádorové účinky, kdy koncentrace vedoucí k 50% inhibici životaschopnosti (IC50) byla přibližně 20-80 μΜ. Ačkoliv betulin a lupeol jsou obvykle neaktivní, betulinová kyselina může být selektivně cytotoxická pro některé nádorové buněčné linie (Sami et al., Eur. J. Pharm. Sci., 29,2006,1-13).

V poslední době jsme se zabývali přípravou saponinů z několika lupanových triterpenů (lupeol, betulinová kyselina a betulin). Připojení cukru k sapogeninu jako hydrofilní transportusnadňující funkční skupiny by mohlo zlepšit jejich schopnost vstupovat do cílových buněk pomocí interakce s mannosovými receptory, zvýšit jejich rozpustnost a poskytnout tak vhodné lékové formy. V bodoucnu, kvůli přítomnosti cukerného fragmentu a potenciální afinitě k dendritickým buňkám mohou být tyto deriváty považovány za komponenty na sacharidech založených protinádorových léčiv. Tyto látky mohou být proto použity jako antimitotické a apoptotické léky, zejména jako protinádorová léčiva. Předmětem tohoto vynálezu je poskytnout protinádorové sloučeniny mající vysokou selektivitu a terapeutický index, tzn., že jsou méně toxické a více účinné než dosud známé necukemé analogy.

Podstata vynálezu

Předmětem tohoto vynálezu jsou sacharidové deriváty lupánu obecného vzorce I

a jejich farmaceuticky přijatelné soli s alkalickými kovy, amoniakem či aminy ve formě racemátů nebo opticky aktivních isomerů, nebo jejich adičních solí s kyselinami, kde • · · · ·· · · ·· • · · · · 9 9 999 • · · · 9 9 · 9 9 9 99

9 9 9 9 b · 9 9 9* ·· ·* «· ««· ·· ··

R znamená substituent nezávisle vybraný ze skupiny zahrnující vodík, hydroxylovou, amino, merkapto, alkyloxy, alkylovou a sacharidovou skupinu,

R' znamená substituent nezávisle vybraný ze skupiny zahrnující vodík, alkylovou, karboxylovou, acylovou a sacharidovou skupinu, kde nejméně jeden z R a R' obsahuje sacharidovou skupinu.

Výše uvedené generické skupiny mají významy uvedené v následující legendě, přičemž amino znamená skupinu -NH₂, azido znamená skupinu -N3, hydroxy znamená skupinu -OH, karboxyl znamená skupinu -COOH, merkapto znamená skupinu -SH, alkyl znamená přímou nebo rozvětvenou alkylovou skupinu obsahující 1 až 6 uhlíkových atomů, které jsou případně substituovány 1 až 5 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující hydroxyl, alkyloxy, amino, karboxyl a acyl skupinu, aryl znamená aromatickou karbocyklickou skupinu obsahující 6 až 18 uhlíkových atomů, které jsou tvořeny nejméně jedním aromatickým kruhem nebo více kondenzovanými kruhy, z nichž nejméně jeden kruh je aromatický, která je případně substituovaná 1 až 7 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující alkyl, hydroxy, alkyloxy, amino, karboxyl a acyl skupinu, arylalkyl znamená skupinu -Rl-Ar, kde Ar je arylová skupina a Rl je rozvětvený nebo přímý alkylenový řetězec obsahující 1 až 6 uhlíkových atomů a arylová skupina je případně substituována 1 až 5 substituenty vybranými ze skupiny zahrnující alkyl, hydroxy, alkyloxy, amino, karboxyl a acyl skupinu, acyl znamená skupinu -C(O)R, kde R je alkyl, aiyl, arylalkyl nebo sacharid, alkyloxy znamená skupinu -OR, kde R je alkyl, aryl, arylalkyl, alkylamino znamená skupinu -NR”R', kde R” může být vodík, alkyl nebo aryl a R' ” může být alkyl nebo aryl, • 4 f · · ♦*··** • ♦ * · * 4 · ·· i • · · · » · · ·*·· • · · · · · ·· · |t·· sacharidová skupina znamená monosacharidy, disacharidy nebo tnsacharidy vybrané ze skupiny zahrnující glykosyl nebo glykosidový derivát vyskytující se v obou enantiomemích formách, což může být D-forma (např. D-glukosa nebo D-galaktosa) nebo L-forma (např. L-ramnosa nebo L-fukosa), jejich anomerické spojení může být vybráno z a nebo β konfigurace a sacharidová skupina může být případně substituovaná azido, amino, alkylamino, acyl, aryl nebo arylalkyl skupinami.

Předmětem vynálezu jsou ve výhodném provedení sacharidové deriváty lupánu obecného vzorce I a farmaceuticky akceptovatelné soli z alkalickými kovy, amoniakem Či aminy ve formě racemátů nebo opticky aktivních isomerů, nebo jejich adiční soli s kyselinami, kde sacharidová skupina je monosacharid, disacharid nebo trisacharid, kde karbohydrátová skupina je glykosyl nebo glykosidový derivát vyskytující se v obou enantiomerických formách, což může být D-forma (např. D-glukosa nebo D-galaktosa) nebo L-forma (např. L-ramnosa nebo L-fukosa), jejich anomerická vazba může být vybrána z a nebo β spojení a sacharidová skupina je vybrána ze skupiny glukosy!, glukosid, mannosyl, mannosid, galaktosyl, galaktosid, fukosyl, fukosid, rhamnosyl, rhamnosid nebo jejich kombinací, a které mohou být případně substituovány azido, amino, alkylamíno, acyl, aryl nebo arylalkyl skupinou.

Předmětem vynálezu jsou s výhodou monosacharidové deriváty lupánu obecného vzorce I, kde alespoň jeden z R nebo R’ obsahuje alespoň jednu glykosylovou nebo glykosidovou skupinu vybranou ze skupiny zahrnující glukosyl, glukosid, mannosyl, mannosid, galaktosyl, galaktosid, fukosyl, fukosid, rhamnosyl, rhamnosid nebo jejich amino, acyl nebo benzyl substituované mono-, di- a trisacharidové deriváty a soli s alkalickými kovy, amoniakem či aminy ve formě racemátů nebo opticky aktivních isomerů, nebo jejich adičních solí s kyselinami.

Předmětem vynálezu jsou v jiném provedení heterosacharidové deriváty lupánu obecného vzorce I, kde alespoň jeden z R nebo R’ obsahuje alespoň jednu glykosylovou nebo glykosidovou skupinu vybranou ze skupiny zahrnující glukosyl, glukosid, mannosyl, mannosid, galaktosyl, galaktosid, fukosyl, fukosid, rhamnosyl, rhamnosid, které mohou být případně substituovány jednou nebo dvěma glykosylovými nebo glykosidovými skupinami vybranými ze skupiny glukosyl, glukosid, mannosyl, mannosid, galaktosyl, galaktosid, fukosyl, fukosid, rhamnosyl, rhamnosid nebo jejich amino, acyl nebo benzyl deriváty, jejich solemi sž • · · · · ·· · * · · • · · · · · « · · · • · · · « · v · · » * ·· ** *· *«· ·· ·· alkalickými kovy, amoniakem či aminy ve formě racemátů nebo opticky aktivních isomerů, nebo jejich adičních solí s kyselinami.

Mimořádně výhodnými sloučeninami podle vynálezu jsou sacharidové deriváty lupánu obecného vzorce I: 3p-(9-(a-D-mannopyranosyl)-lup-20(29)-en, 3p-ř9-(ct-D-mannopyranosyl)(l-»3)-[(a-D-mannopyranosyl)-(l->6)]-a-D-mannopyranosyl-lup-20(29)-en, 1-Ο-[3-βacetoxy-lup-20(29)-en-28-oyl]-a-D-mannopyranosyl, l-O-[3-p-acetoxy-lup-20(29)-en-28oyl]-(a-D-mannopyranosyl)-(l->3)-[(a-D-mannopyranosyl)-(l->6)]-a-D-mannopyranosyl, 3βO-acetyl-28-O-(a-D-mannopyranosyl)-lup-20(29)-en, 3β-0-α€6ΐγ1-28Ό-(α-0mannopyranosy l)-( 1->3 )-[(a-D-mannopyranosyl)-( 1-»6)]-a-D-mannopyranosyl-lup-20(29)-en, 28-O-acetyI^O-(a’D-mannopyranosyl)-lup-20(29)-en, 28-O-acetyl^-O-(a-Dmannopyranosyl)-( 1 ->3)-[(a-D-mannopyranosyl)-( l->6)]-a-D-mannopyranosyl-lup-20(29)-en, 3β-Ο-(β-Ο-§1υ^ργΓ3ηο5γ1)-1υρ-20(29)-εη, 3β-0-(α-Ώ-πιαηηοργΓ3ηο5γΤ)-( 1 —>3 )-[(a-DmannopyranosylH 1 ->6)]^-D-glukopyranosyl-lup-20(29)-en, 1 -O-[3^-acetoxy-lup-20(29)en-28-oyl]-(a-D-mannopyranosyl)-( 1 ->3 j-fía-D-mannopyranosylj-í 1 ->6)] -β-Dglukopyranosyl, 3p-O-acetyl-28-O-(ů-D-glukopyranosyl)-lup-20(29)-en, 3p-O-acetyl-28-O-(aD-mannopyranosylH 1 ->3)-[(a-D-mannopyranosyl)-( 1 ~>6)]-β-D-glukopyranosyl-l up-20(29)en, 28-O-acetyl-3p-O-(p-D-glukopyranosyl)-lup-20(29)-en, 28-O-acetyl-^-O-(a-Dmannopyranosyl)-(l->3)-[(a-D-marmopyranosyl)-(l->6)]^-D-glukopyranosyl4up’20(29)-en, 3β-Ο-(β-Ο^α131ί1οργΓΗηο8γ1)-1υρ-20(29)-6η, 3β-(λ(αΌ-πΊαηηορν^ηο5γ1)-( 1 -»3)-[(a-Dmannopyranosyl)-(l-»6)]T-D-galaktopyranosyl-lup-20(29)-en, 1 -<9-[3-p-acetoxy-lup-20(29)ene-28-oyl]^-D-galaktopyranosyl, l-O-[3T-acetoxy-lup-20(29)-en-28-oyl]-(a-Dmannopyranosyl)-( 1 ->3)-[(a-D-mannopyranosyl)-( 1 ->6)]^-D-galaktopyranosyl, 3 β-0-acetyl28-O-^-D-gaIaktopyranosyl)-lup-20(29)-en, 3β-0-αο6[γ1-28Ό-(αΌ-ηΐ3ηηοργ™ηο5γ1)(l->3)-[(a-D-mannopyranosyl)-(1^6)]-P-D-galaktopyranosyl-!up-20(29)-en, 28-O-acetyl^O-(P-D-galaktopyranosyl)-lup-20(29)-en, 28O-acetyl^O-(a-D-mannopyranosyl)-(l->3)[(a-D-mannopyranosyl)-(l->6)]^-D-galaktopyranosyl-iup-20(29)-en, 3β-Ο-(Εramnopyranosyl)-lup-20(29)-en, l-(7-[3^-acetoxy-lup-20(29)-en-28Oyl]-L-ramnopyranosyl, 3βΌ-3ϋείγ1-28-Ο-(Ι.-Γ8ΠΐηοργΓ3ηθ3γ])-1υρ-20(29)-6η, 28-0-acetyl^-0-(L-ramnopyranosyl)lup-20(29)-en, 3p,28-di-O-(a-D-mannopyranosyl)-lup-20(29)-en, 3p,28-di-O-(a-Dmannopyranosyl)-lup-20(29)-en.

Dalším předmětem tohoto vynálezu jsou sloučeniny podle předloženého vynálezu pro použití jako léčiva.

Dalším předmětem tohoto vynálezu je způsob inhibice proliferace a indukce apoptózy pomocí sloučeniny obecného vzorce I.

Dalším předmětem vynálezu jsou sacharidové deriváty lupánu obecného vzorce I pro použiti v inhibici buněčné proliferace a indukci apoptózy.

Tento vynález zahrnuje metodu pro inhibici buněčné proliferace v savcích zahrnující podání savcům, kteří potřebují takovouto léčbu, efektivního množství sacharidových derivátů lupánu obecného vzorce I.

Dalším předmětem vynálezu jsou sacharidové deriváty lupánu obecného vzorce I pro použití při léčbě hyperproliferativních onemocnění.

Předmětem vynálezu jsou rovněž metody pro léčení hyperproliferativních onemocnění v savcích, které zahrnují aplikaci efektivního množství sacharidových derivátů lupánu obecného vzorce I savcům, kteří toto léčení potřebují.

Předmětem vynálezu je rovněž metoda pro inhibici proliferace a indukci apoptózy u savců, zahrnující podání terapeuticky účinného množství sacharidových derivátů lupánu vzorce I savcům, kteří tuto léčbu potřebují.

Sacharidové deriváty lupanů jsou použitelné pro léčbu poruch, které zahrnují buněčnou proliferaci i jiných, zejména onemocnění jako je rakovina, osteoporóza, defekty v metabolismu cholesterolu, Alzheimerova choroba, Huntíngtonova choroba, steroidy indukovaná osteonekróza, poruchy sexuálního chování a diferenciace, androgen insensitivní syndrom, glukokortikoidní insensitivní astma, steroidy indukovaná katarakta a defícience P450 oxidoreduktázy, osteoporózy, defektů v metabolismu cholesterolu, • · ♦ · · · · ·· · • · · · · · ·· ·· • · · · · · · · · · * ·· «4 ·· ··· ·»·*

Dalším předmětem vynálezu jsou sacharidové deriváty lupánu obecného vzorce I pro použití jako růstové faktory, zejména ve zvířecích a lidských buněčných tkáňových kulturách pro regulaci jejich prolíferace a morfogeneze.

Dalším předmětem vynálezu je farmaceutický prostředek, který obsahuje nejméně jeden sacharidový derivát lupánu obecného vzorce I a farmaceuticky přijatelné nosiče.

Tento vynález zahrnuje farmaceutický prostředek obsahující dále jeden nebo více farmaceutických excipientů.

Tento vynález také zahrnuje farmaceutický prostředek, který dále obsahuje běžně užívané cytostatikum, zejména mitoxantrone, cis-platinu, methotrexát, taxol nebo doxorubicin.

Sacharidové deriváty lupánu obsažené podle tohoto vynálezu mohou být použity v prostředku obsahujícím volnou formu sloučeniny obecného vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelné soli. Tyto farmaceuticky přijatelné soli mohou být tvořeny s, například, alkalickými kovy, amoniakem nebo aminy. Tyto sloučeniny mohou být také ve formě adičních solí s kyselinou. Tyto deriváty nebo jejich soli mohou být rovněž ve formě racemátů nebo opticky aktivních izomerů.

ZPŮSOBY PŘÍPRAVY

Sacharidové deriváty lupánu obecného vzorce I mohou být obecně připravovány různými metodami používanými v obecné sacharidové syntéze zahrnující zejména metodiky tvorby cukerných vazeb (např, Toshima, K.; Tatsuta, K. Chem. Rev. 1993, 93, 1503-1531; Nicolaou, K. C., Mitchell, H. J. Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 2001, 40, 1576-1624) stejně jako použití “nechráněných akceptorových” metodologií (e g. Fumeaux, R. H.; Pakulski, Z.; Tyler, P. C„ Can. J. Chem. 2002,80,964-972).

Předmětem tohoto vynálezu je rovněž nový způsob pro přípravu sloučeniny obecného vzorce I,

I • · kde R a R‘ mají výše uvedené významy.

Například, sloučenina obecného vzorce I, kde R = OAc a R‘ = mannosyl může být připravena za použití 3-O-acetyl-lupeolu s 2,3,4,6-tetra-O-benzoyl-a-D-mannopyranosyl trichloracetimidem nebo 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-a-D-mannopyranosyl trichloracetimidem v přítomnosti trimethylsilyl trifluorometansulfonátu (TMSOTf) a následující debenzoylace uhličitanem draselným v methanolu.

Další způsob přípravy podle předloženého vynálezu spočívá v tom, že se například, sloučenina obecného vzorce I, kde R = OAc a R‘ = (mannopyranosy 1)-(1->3)[(mannopyranosyl)-(1->6)]-mannopyranosyl připraví zvýše uvedeného produktu reakcí se 2 ekvivalenty 2,3,4,6-tetra-O-benzoyl-a-D-mannopyranosyl trichloracetimidu s následnou deprotekcí.

Další způsob přípravy podle předloženého vynálezu spočívá v tom, že se například sloučenina obecného vzorce I, kde R = OAc a R‘ = mannosyl může připravit s použitím fenyl

2.3.4.6- tetra-O-benzoyl-l-thio-D-mannopyranosidu nebo fenyl 2,3,4,6-tetraO-acetyl-l -thío-Dmannopyranosidu jako glykosylového donoru.

A ještě další způsob přípravy podle předloženého vynálezu spočívá v tom, že se například sloučenina obecného vzorce I, kde R = OAc a R‘ = mannosyl připraví s použitím

2.3.4.6- tetra-O-benzoyl-D-mannopyranosyl bromidu nebo 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-D- mannopyranosyl bromidu jako donoru glykosylu.

Všechny sloučeniny podle obecného vzorce I, kde R a R‘ mají výše uvedené významy, mohou být připraveny popsanými metodami.

TERAPEUTICKÁ APLIKACE

Vhodné cesty pro aplikaci jsou orální, rektální, vazální místní (zahrnující okulámí, bukální a sublinguální), vaginální a parenterálni (zahrnující subkutánní, intramuskulámí, intravitreózní, nitrožilni, intradermální, intrathekální a epidurální). Preferovaný způsob podání závisí na stavu pacienta, toxicitě sloučeniny a místě infekce, kromě ostatních ohledů známých klinikovi.

* · * * ♦ * * v ·· *··«·· I t «· • · ··· · · φ B ··· • · · · · · ····· ·· ·· ·· ·*· ««

Terapeutický přípravek obsahuje od 1 do 95 % aktivní látky, přičemž jednorázové dávky obsahují přednostně od 20 do 90 % aktivní látky a při způsobech aplikace, které nejsou jednorázové, obsahují přednostně od 5 do 20 % aktivní látky. Jednotkové dávkové formy jsou např. potahované tablety, tablety, ampule, lahvičky, čípky nebo tobolky. Jiné formy aplikace jsou např. masti, krémy, pasty, pěny, tinktury, rtěnky, kapky, spreje, disperze atd. Příkladem jsou tobolky obsahující od 0,05 g do 1,0 g aktivní látky.

Farmaceutické přípravky podle předloženého vynálezu jsou připravovány známým způsobem, např. běžným mícháním, granulací, potahováním, rozpouštěcimi nebo lyofilizačními procesy.

Přednostně jsou používány roztoky aktivních látek a dále také suspenze nebo disperze, obzvláště izotonické vodné roztoky, suspenze nebo disperze, které mohou být připraveny před použitím, např. v případě lyofilizovaných preparátů obsahujících aktivní látku samotnou nebo s nosičem jako je mannitol. Farmaceutické přípravky mohou být sterilizovány a/nebo obsahují excipienty, např. konzervační přípravky, stabilizátory, zvlhčovadla a/nebo emulgátory, rozpouštěcí činidla, soli pro regulaci osmotického tlaku a/nebo pufry. Jsou připravovány známým způsobem, např. běžným rozpouštěním nebo lyofílizací. Zmíněné roztoky nebo suspense mohou obsahovat látky zvyšující viskozitu, jako např. sodnou sůl karboxymethylcelulosy, dextran, polyvinylpyrrolidon nebo želatinu.

Olejové suspense obsahují jako olejovou složku rostlinné, syntetické nebo semisyntetické oleje obvyklé pro injekční účely. Oleje, které zde mohou být zmíněny, jsou obzvláště kapalné estery mastných kyselin, které obsahují jako kyselou složku mastnou kyselinu s dlouhým řetězcem majícím 8-22, s výhodou pak 12-22 uhlíkových atomů, např. kyselinu laurovou, tridekanovou, myristovou, pentadekanovou, palmitovou, margarovou, stearovou, arachidonovou a behenovou, nebo odpovídající nenasycené kyseliny, např. kyselinu olejovou, alaídikovou, eurikovou, brasidovou a linoleovou, případně s přídavkem antioxidantů, např. vitaminu E, β-karotenu nebo 3,5-di-tór/-butyl-4-hydroxytoluenu. Alkoholová složka těchto esterů mastných kyselin nemá více než 6 uhlíkových atomů a je mono- nebo polyhydrická, např. mono-, di- nebo trihydrické alkoholy jako metanol, etanol, propanol, butanol nebo pentanol a jejich isomery, ale hlavně glykol a glycerol. Estery mastných kyselin jsou s výhodou např. ethyl oleát, isopropyl myristát, isopropyl palmitát, „Labrafil Ní 2375“ (polyoxyethylen glycerol trioleát, Gattefoseé, Paříž), „Labrafil M 1944 CS“ (nenasycené polyglykolované glyceridy připravené alkoholýzou oleje z meruňkových jader a složené z glyceridů a esterů polyethylen glykolu; Gattefoseé, Paříž), „Labrasol“ (nasycené polyglykolované glyceridy připravené alkoholýzou TCM a složené z glyceridů a esterů • * · * · · ♦·· * • •4··· *9 ·· • 9 · · * · * · « · ·· • •99 *9 9»999 • 9 ·· ·· 999 9999 polyethylen glykolu; Gattefoseé, Paříž) a/nebo „Miglyol 812“ (triglycerid nasycených mastných kyselin s délkou řetězce Cg až C]₂ od Hůls AG, Německo) a zvláště rostlinné oleje jako bavlníkový olej, mandlový olej, olivový olej, ricinový olej, sesamový olej, sójový olej a zejména olej z podzemnice olejné.

Příprava injekčního přípravku se provádí za sterilních podmínek obvyklým způsobem, např. plněním do ampuli nebo lahviček a uzavíráním obalů.

Např. farmaceutické přípravky pro orální použití se mohou získat smícháním aktivní látky s jedním nebo více tuhými nosiči, případnou granulací výsledné směsi, a pokud je to požadováno, zpracováním směsi nebo granulí do tablet nebo potahovaných tablet přídavkem dalších neutrálních látek.

Vhodné nosiče jsou obzvláště plnidla jako cukry, např. laktosa, sacharosa, mannitol nebo sorbitol, celulosové preparáty a/nebo fosforečnany vápníku, s výhodou fosforečnan vápenatý nebo hydrogenfosforečnan vápenatý, dále pojivá jako škroby, s výhodou kukuřičný, pšeničný, rýžový nebo bramborový škrob, methylcelulosa, hydroxypropylmethylceluiosa, sodná sůl karboxymethylceluiosy a/nebo polyvinylpyrrolidin, a/nebo pokud požadováno desintegrátory jako výše zmíněné škroby a dále karboxymethylový škrob, zesítěný polyvinylpyrrolidin, alginová kyselina a její soli, s výhodou alginát sodný. Další neutrální látky jsou regulátory toku a lubrikanty, s výhodou kyselina salicylová, talek, kyselina stearová a její soli jako stearát hořečnatý a/nebo vápenatý, polyethylen glykol nebo jeho deriváty.

Jádra potahovaných tablet mohou být potažena vhodnými potahy, které mohou být odolné vůči žaludeční šťávě, přičemž používané potahy jsou mezi jinými koncentrované roztoky cukrů, které mohou obsahovat arabskou gumu, talek, polyvinylpyrrolidin, polyethylen glykol a/nebo oxid titaničitý, dále potahovací roztoky ve vhodných organických rozpouštědlech nebo směsích rozpouštědel, čí pro přípravu potahů odolných vůči žaludeční šťávě roztoky vhodných celulosových preparátů jako acetylcelulosaftalát nebo hydroxypropyimethylcelulosaftalát. Barviva nebo pigmenty jsou přimíchávány do tablet nebo potahovaných tablet např. pro identifikaci nebo charakterizaci různých dávek účinné složky.

Farmaceutické přípravky které mohou být užívány orálně jsou také tvrdé tobolky ze želatiny nebo měkké uzavřené tobolky ze želatiny a změkčovadla jako glycerol nebo sorbitol. Tvrdé tobolky mohou obsahovat aktivní látku ve formě granulí, smíchanou např. s plnidly jako je kukuřičný škrob, pojivý nebo lubrikanty jako talek nebo stearát horečnatý, a se stabilizátory. V měkkých tobolkách je aktivní látka přednostně rozpuštěna nebo suspendována ve vhodných kapalných látkách neutrální povahy jako mazací tuk, parafinový olej nebo kapalný polyethylen • · · glykol či estery mastných kyselin a ethylen nebo propylen glykolu, přičemž je také možno přidat stabilizátory a detergenty např. typu esterů polyethylen sorbitanových mastných kyselin.

Další formy orálního podávání jsou např. sirupy připravované běžným způsobem, které obsahují aktivní složku např. v suspendované foímě a v koncentraci okolo 5 až 20 %, přednostně okolo 10% nebo podobné koncentrace, která umožňuje vhodnou individuální dávku, např. když je měřeno 5 nebo 10 ml. Ostatní formy jsou např. práškové nebo kapalné koncentráty pro přípravu koktejlů, např. v mléce. Takovéto koncentráty mohou být také baleny v množství odpovídajícím jednotkové dávce.

Farmaceutické přípravky, které mohou být používány rektálně, jsou např. čípky, které obsahují kombinaci aktivní látky se základem. Vhodné základy jsou např. přírodní nebo syntetické triglyceridy, parafínové uhlovodíky, polyethylen giykoly nebo vyšší alkoholy.

Přípravky vhodné pro parenterální podání jsou vodné roztoky aktivní složky ve formě rozpustné ve vodě, např. ve vodě rozpustná sůl nebo vodná injekční suspenze, která obsahuje látky zvyšující viskozitu, např. sodnou sůl karboxymethylcelulosy, sorbitol a/nebo dextran, a stabilizátory tam kde je to vhodné. Aktivní látka může být také přítomna ve formě lyofilizátu společně s excipienty kde je to vhodné a může být rozpuštěna před parenterální aplikací přidáním vhodných rozpouštědel. Roztoky, které jsou použity pro parenterální aplikaci, mohou být použity např. i pro infúzní roztoky. Preferovaná konzervovadla jsou s výhodou antioxidanty jako kyselina askorbová, nebo mikrobicidy kyselina sorbová či benzoová.

Masti jsou emulze oleje ve vodě, které obsahují ne více než 70 %, ale přednostně 20 až 50% vody nebo vodné fáze. Tukovou fázi tvoří zejména uhlovodíky, např. vazelína, parafínový olej nebo tvrdé parafíny, které přednostně obsahují vhodné hydroxysloučeniny jako mastné alkoholy a jejich estery, např. cetyl alkohol, nebo alkoholy lanolinu, s výhodou lanolin pro zlepšení kapacity pro vázání vody. Emulgátory jsou odpovídající lipofilní sloučeniny jako sorbitanové estery mastných kyselin (Spaný), s výhodou sorbitan oleát nebo sorbitan isostearát. Aditiva k vodné fázi jsou např. smáčedla jako polyalkoholy, např. glycerol, propylen glykol, sorbitol a/nebo polyethylen glykol, nebo konzervační prostředky či příjemně vonící látky.

Mastné masti jsou nevodné a obsahují jako bázi hlavně uhlovodíky, např. parafín, vazelínu nebo parafinový olej, a dále přírodní nebo semisyntetické tuky, např. hydrogenované kokosové triglyceridy mastných kyselin nebo, s výhodou, hydrogenované oleje, např. hydrogenovaný ricínový olej nebo olej z podzemnice olejné, a dále částečné glycerolové estery mastných kyselin, např. glycerol mono- a/nebo distearát. Dále obsahují např. mastné alkoholy, emulgátory a/nebo aditiva zmíněná v souvislosti s mastmi, která zvyšují příjem vody.

Krémy jsou emulze oleje ve vodě, které obsahují více než 50% vody. Používané olejové báze jsou zejména mastné alkoholy, např. lauryl, cetyl nebo staryl alkoholy, mastné kyseliny, například palmitová nebo stearová kyselina, kapalné a pevné vosky, například isopropyl myristát, lanolin nebo včelí vosk, a/nebo uhlovodíky, například vazelína (petrolátum) nebo parafínový olej. Emulgátory jsou povrchově aktivní sloučeniny s převážně hydrofílními vlastnostmi, jako jsou odpovídající neiontové emulgátory, např. estery mastných kyselin polyalkoholů nebo jejich ethylenoxy adukty, např. estery polyglycerických mastných kyselin nebo polyethylen sorbitanové estery (Tween) dále polyoxyethylenové etery mastných alkoholů nebo polyoxyethylenové estery mastných kyselin, nebo odpovídající iontové emulgátory, jako alkalické soli sulfátů mastných alkoholů, s výhodou laurylsulfát sodný, cetylsulfát sodný nebo stearylsulfát sodný, které jsou obvykle používány v přítomnosti mastných alkoholů, např. cetyl stearyl alkoholu nebo stearyl alkoholu. Aditiva k vodné fázi jsou mimo jiné činidla, která chrání krémy před vyschnutím, např. polyalkoholy jako glycerol, sorbitol, propylen glykol a polyethylen glykol, a dále konzervační činidla a příjemně vonící látky.

Pasty jsou krémy nebo masti obsahující práškové složky absorbující sekreci jako jsou oxidy kovů, např. oxidy titanu nebo oxid zinečnatý, a dále talek či silikáty hliníku, které mají za úkol vázat přítomnou vlhkost nebo sekreci.

Pěny jsou aplikovány z tlakových nádob a jsou to kapalné emulze oleje ve vodě v aerosolové formě, přičemž jako hnací plyny jsou používány halogenované uhlovodíky, jako polyhalogenované alkany, např, dichlorfluormethan a dichlortetrafluorethan, nebo přednostně nehalogenované plynné uhlovodíky, vzduch, N2O či oxid uhličitý. Používané olejové fáze jsou stejné jako pro masti a krémy a také jsou používána aditiva tam zmíněná.

Tinktury a roztoky obvykle obsahují vodně-etanolickou bázi, ke které jsou přimíchána zvlhčovadla pro snížení odpařování jako jsou polyalkoholy, např. glycerol, glykoly a/nebo polyethylen glykol, dále promazávadla jako estery mastných kyselin a nižších polyethylen glykolů, tj. lipofilní látky rozpustné ve vodné směsi nahrazující tukové látky odstraněné z kůže etanolem, a pokud je to nutné, i ostatní excipienty a aditiva.

Tento vynález dále poskytuje veterinární přípravky obsahující nejméně jednu aktivní složku společně s veterinárním nosičem. Veterinární nosiče jsou materiály pro aplikaci přípravku a mohou to být látky pevné, kapalné nebo plynné, které jsou inertní nebo přijatelné ve veterinární medicíně a jsou kompatibilní s aktivní složkou. Tyto veterinární přípravky mohou být podávány orálně, parenterálně nebo jakoukoli jinou požadovanou cestou.

Vynález se také vztahuje na procesy nebo metody pro léčení nemocí zmíněných výše. Látky mohou být podávány profylakticky nebo terapeuticky jako takové nebo ve formě farmaceutických přípravků, přednostně v množství které je efektivní proti zmíněným nemocem, přičemž u teplokrevných živočichů, např. člověka, vyžadujícího takovéto ošetření, je látka používána zejména ve formě farmaceutického přípravku. Na tělesnou hmotnost okolo kg je aplikována denní dávka látky okolo 0,1 až 5 g, s výhodou 0,5 až 2 g.

Příklady provedení vynálezu

Silikagel HF-254 a silikagel 230-400 (Měrek) byly použity pro TLC a kolonovou chromatografii. *H a ^l3C NMR spektra byla měřena pomocí 303K (500 a 125 MHz) Bruker Avance DRX-500 spektrometru. Tetramethylsilan (TMS) byl použit jako *H a ^l3C NMR vnitřní standard chemického posunu. Pozorované signály aromatických skupin pro typické hodnoty byly eliminovány pro zjednodušení. Hmotová spektra s vysokým rozlišením (HR-MS) byla získána pomoci hmotového spektrometru MARINER. Optické rotace byly měřeny pomocí JASCO P-1020 automatického polarimetru. Přiřazení konfigurace bylo založeno na NMR měřeních zahrnujících DEPT a dvou-dimensionálni techniky zahrnující gradient-selektivní COSY, 'H-^C gradient selektivní HSQC (g-Heteronuclear Single Quantum Correlation; C, H korelace cestou dvojitého INEPT transferu ve fázově citlivém modu), ’Η-^Ο gradient selektivní HMBC (g-Heteronuclear Multiple Bond Correlation; long-range correlation) stejně jako TOCSY experimentech.

Následující příklady slouží pro osvětlení vynálezu, aniž jej jakkoliv omezují.

Příklad 1

Lupeol [3f-lup-20(29)-en] (l). Vzorek (300 g) peridermu z kmene břízy bradavičnaté nasbíraný v Poraji (jižní Polsko) byl sušen na vzduchu po dobu 7 dní, poté nařezán na malé kousky a extrahován metanolem v Soxhletově aparátu po dobu 8 h. Extrakt byl zakoncentrován se ziskem 58,0 g čistého betulinu, který byl přečištěn acetylací refluxovanou směsí acetanhydridu (120 ml), kyseliny octové (50 ml) a pyridinu (1 ml) po dobu 2 h. Roztoky byly odpařeny do sucha a odparky přečištěny kolonovou chromatografii (hexan-diethylether 40:1 -> 5:1 jako eluent). Nejrychleji se pohybující frakce v průběhu chromatografícké separace individuálních komponent obsahovala lupeol acetát (3). Ta byla následně čištěna kolonovou chromatografii (hexan-ethyl acetát 50:1) produkující čistou sloučeninu 3 (4,0 g). 'H NMR spektrální data potvrdila popsané údaje z literatury (Hiroya, K.; Takahashi, T.; Miura, N.; Naganuma, A.; Sakamoto, T. Bioorg. Med Chem. 2002,10, 3229-3236). ^,3C NMR (CDC1₃) δ:

•	Φ	•	•	•
•	Φ	•	« ·
	Φ	•	Φ ·	•
• Φ	•	Φ	«	Φ
««	ΦΦ	1·

·· ♦ * Φ 4 • Φ · Φ·

Φ « · · Φ · • Φ Φ Φ Φ • ΦΦ ·Φ 4«

170.9 (C=O), 150.9 (C-20), 109.3 (C-29), 81.0 (C-3), 55.4, 50.4, 48.3, 48.0, 43,0 (C),

42.8 (C), 40.9 (C), 40.0 (CH₂), 38.4 (CH₂), 38.1, 37.8 (C), 37.1 (C), 35.6 (CH₂), 34.2 (CH₂),

29.8 (CH₂), 27.9, 27,4 (CH₂), 25.1 (CH₂), 23.7 (CH₂), 21,3,20.9 (CH₂), 19,3,18.2 (CH₂), 18.0, 16.5,16.2,16.0,14.5.

Roztok lupeol acetátu (3, 3,93 g, 8,4 mmol) a hydroxidu draselného (1,25 g, 22 mmol) v ethanolu (30 ml) byl refluxován po dobu 5 h, zchlazen na pokojovou teplotu a zakoncentrován. Olej ovitý odparek byl suspendován v dichlormethanu a filtrován přes krátkou silikonovou ucpávku (hexan-ethyl acetát 5:1). Filtrát byl zakoncentrován a odparek přečištěn kolonovou chromatografíí (hexan-ethyl acetát 9:1) produkující čistý lupeol (1, 3.06 g, 85%); b.t. 209-211 °C; [α]ο° +25.0 (c 1.15, CHCfi). *H a ^l3C NMR spektrální data odpovídala již publikovaným datům (Hiroya et al. 2002; Reynolds et al. 1986).

Příklad 2

3fi-O-(2,3,4,6-Teira-O-benzoyl-a-D-mannopyranosyl)-lup-20(29)-en (5).

Roztok 2,3,4,6-tctra-O-benzoyl-a-D-mannopyranosyl trichloracetimidátu (24, 572 mg, 0,77 mmol) a lupeolu (1, 320 mg, 0,75 mmol) v CH₂C1₂ (15 ml) byl míchán 30 min při pokojové teplotě nad molekulovým sítem (4 Á, 700 mg, jemně mleté), poté zchlazen na -40°C a přidán TMSOTf (50 μΐ). Po 20 minutách byla reakce zastavena přidáním Et₃N (0,2 ml) a roztok byl odpařen in vacuo. Kolonová chromatografie (hexan-ethyl acetát 9:1 —> 5:1) odparku poskytla sloučeninu 5 (716 mg, 95%) jako pěnu. [a]o -2.4 (c 0.5, CHClj). ’H NMR (CDClj) δ: 6.08 (t, 1H, Λ.3 = Ji,5 = 10.1 Hz, H-4), 5.92 (dd, 1H, J₃,₂ 3.2 Hz, H-3), 5.62 (dd, 1H, J_2>1 1.8 Hz, H-2), 5.28 (d, 1H, H-l), 4.70(d, 1H, J2.0 Hz, lupen-H-29), 4.67 (dd, 1H, Λ,₅ 2.3,3^ 11.9 Hz, H-6), 4.56 (m, 2H, H-5, lupen-H-29), 4.48 (dd, 1H, 5.1 Hz, H-6), 3.35 (dd, 1H, 3 4,3, 11,7 Hz, lupen-H-3), 2.38 (td, 1H, J5.7,11,0 Hz, lupen-H-19), 1.78-1,98 (m, 2H), 0.66-1.75 (m), 1.70 (s, 3H, CH₃), 1.11 (s, 3H, CHj), 1.05 (s, 3H, CH₃), 0.95 (s, 3H, CHj), 0.94(s, 3H, CHj), 0.89 (s, 3H, CH,), 0.80 (s, 3H, CH,). ¹³C NMR (CDCh) δ: 166.1 (C=O), 165.6 (C=O), 165.6 (C=O),

165.5 (C=O), 150,9 (lupen-C-20), 109.4 (lupen-C-29), 94.4 (C-l), 84.3 (lupen-C-3), 71,6,70.3,

69.5,67.1,63.1 (CH₂), 55.7,50.5,48.3,48.0,43.0 (C), 42.9 (C), 40.9 (C), 40.0 (CH₂),38.6 (C),

38.3 (CH₂), 38.1, 37.1 (C), 35.6 (CH₂), 34.3 (CH₂), 29.9 (CH₂), 28.8, 27.5 (CH₂), 25.2 (CH₂),

22.2 (CH₂), 21.0 (CH₂), 19.3,18.3 (CH₂), 18.0,16.5,16.2,16.0,14.6. HR-MS (ESI) vypočteno pro C64H76NaOio (M+Na)⁺: 1027,5331, Nalezeno: 1027,5388.

·· · e · • · · ·· • · · · · · f « · · · ··· ·» tt

9	•	t	9 ·
•	•	•	•	•
•	•	• ·	•	•
• ·	•	•	•	•
··	**	1»

Příklad 3

3P-O-(Gt-D-Mannopyranosyl)-lup-20(29)-en (6).

K roztoku sloučeniny 5 (910 mg, 0,91 mmol) v methanolu (20 ml) byl přidán K₂CO₃ (200 mg) a směs byla míchána přes noc a vysušena do sucha. Kolonová chromatografíe (hexan-ethyl acetát 5 :1, pak hexan-ethyl acetát-methanol 5:3:1 -> 1:1.1) odparku dala sloučeninu 6 (420 mg, 79 %) jako bílé krystaly. B.t.: 244-24 5°C; [α]ο° +77.5 (c 0.5, CHCl₃-methanol 1:1). ‘H NMR (CDC1₃-CD₃OD 1:1) δ: 4.94 (bs, 1H), 4.70 (d, 1H, ./2.0 Hz, lupen-H-29), 4.57 (m, 1H), 3.72-3,84 (m, 5H), 3.68 (m. 1H), 3.35 (m, 1H), 3.23 (dd, 1H, J4.3,11.7 Hz, lupen-H-3), 2.40 (td, 1H, y 5.8,11.1 Hz, lupen-H-19), 1,92 (m, 2H), 0.66-1.80 (m), 1.69 (s, 3H, CH₃), 1.06 (s, 3H, CH₃), 0.99 (s, 3H, CH₃), 0.96 (s, 3H, CH₃), 0.86 (s, 3H, CH₃), 0.81 (s, 3H, CH₃), 0.78 (s, 3H, CH₃). ^,3C NMR (CDC1₃-CD₃OD 1:1) δ: 151.3 (lupen-C-20), 109.7 (lupen-C-29), 97.0 (C1), 83.1 (lupen-C-3), 73.6, 72.3, 72.1, 67.6, 62.0 (CH₂), 56.2, 51,0, 48.9, 48.6, 43.5 (C), 43.3 (C), 41.4 (C), 40.5 (CH₂),38.9 (C), 38.8 (CH₂), 38.6, 37.6 (C), 36.1 (CH₂), 34.8 (CH₂), 30.3 (CH₂), 28.9, 27.9 (CH₂), 25.7 (CH₂), 22.4 (CH₂), 21.5 (CH₂), 19.5, 18.8 (CH₂), 18.3, 16.6,

16.5, 16.4, 14.9. HR-MS (ESI) vypočteno pro C^HéoNaOů (M+Na)⁺: 611.4282. Nalezeno: 611.4311. Elem. anal.: vypočteno pro C₃6H6o0₆ x H₂O: C, 71,25; H, 10,30. Nalezeno: C, 71,02; H, 10,38.

Příklad 4

3β-Ο-(2,5,4,6-Tetra-0-benzoyl-a-D-mannopyranosyl)-(l->3)-[(2,3,4,6-tetra-O-benzoyl-a-Dmanopyranosyl)-(l->6)]-a-D-mannopyi‘anosyl-lup-20(29)-en (7).

Roztok sloučeniny 6 (295 mg, 0,5 mmol) v směsi CH₂Cl₂-acetonÍtril (1:1, 20 ml) byl míchán při pokojové teplotě nad molekulovým sítem (4 Á, 500 mg, jemně mleté) po dobu 30 min, poté zchlazen na -40 °C, přidáno TMSOTf (55 pL) a následně 2,3,4,6-tetra-O-benzoyl-a-Dmannopyranosyl trichloracetimidát (24, 815 mg, 1,1 mmol) v CH₂C1₂ (10 mL) po kapkách po dobu 15 min. Roztok byl míchán následujících 30 min, neutralizován Et₃N (0,2 ml) a zakoncentrován dosucha. Kolonová chromatografíe (hexan-ethyl acetát 5:1 -> 7:3, poté hexan-ethyl acetát-methanol, 5:3:1) dala výtěžek 430 mg (37 %) čisté sloučeniny 7, která byla použita v následující reakci bez dalšího čištění.

Příklad 5

3(3-0-(2,3,4,6-Tetra-O-benzoyl-a-D-mannopyranosyl)-(l ->3)-[(2,3,4,6-tetra-O-benzoyl-a-Dmannopyranosyl)-(l ~^6)J-2,4-di-O-acetyl-a-D-mnanopyranosyl-lup-20(29)-en (8).

• « · * « fr • · · »·« I« ·· ♦ · » · · · I · · 4«« • · 4 · 44 444*4 «· 4* 4* ·4· <44*

Produkt (7) byl acetylován za standardních podmínek (Ac₂O, Py) a čištěn kolonovou chromatografii (hexan-ethyl acetát 5:1 -> 7:3) s výtěžkem sloučeniny 8 (251 mg, 27% po dvou krocích) jako amorfního skla. 'H NMR (CDClj) 8: 6.23 (t, 1H, Λ.3 ⁼ Λ,ί = 10.0 Hz, H4’), 6.14 (t, 1H, Λ.3 = Λ,5 = 10.1 Hz, H-4”), 5.91 (dd, 1H, J_u 3.4 Hz, H-3”), 5.84 (dd, 1H, J_u

3.2 Hz, H-3’), 5,78 (dd, 1H, J_v 1.8 Hz, H-2”), 5.56 (dd, 1H, J₂,i 2.0 Hz, H-2’), 5.49 (t, 1H, = J^ = 10.1 Hz, H-4), 5.40 (d, 1H, Η-Γ), 5.34 (dd, 1H, J_2iJ 3.3,1.7 Hz, H-2), 5.14 (d, 1H, H-l”), 5.08 (d, 1H, H-l), 4.48-4.75 (m, 8H, H-5’,5”,6’,6”, lupen-H-29), 4.39 (dd, 1H, H-3), 4.23 (m, 1H, H-5), 4.02 (dd, 1H, Λ.5 6.4, J₆,₆> 10.7 Hz, H-6), 3.70 (dd, 1H, Λ\5 2.5 Hz, H-6), 3.33 (dd, 1H, y 4.3, 11.7 Hz, lupen-H-3), 2.31 (s, 3H, CH₃), 2.30 (s, 3H, CH₃), 0.75-1.63 (m, další protony). ^I3C NMR (CDC1₃) δ: 170.8 (OO), 170.3 (C=O), 166.1 (C=O), 166.0 (C=O),

165.4 (C=O), 165.3 (C=O), 165.2 (C=O), 165.2 (C=O), 165.1 (C=O), 150.8 (lupen-C-20),

109.3 (lupen-C-29), 99.0 (^lJ_C-_H 173.5 Hz, C-Γ), 97.3 173.5 Hz, C-l”), 94.3 171.3

Hz, C-l), 84.4 (lupen-C-3), 75.2 (C-3), 72.0 (C-2), 70.7 (C-2’), 70.3, 70.2 and 70.2 (C2”,3”,5), 69.6 (C-5’), 69.4 (C-3’), 68.7 (C-5”), 68.4 (C-4), 66.9 (C-6), 66.8 (C-4”), 66.3 (C-4’),

62.9 (C-6”), 62.4 (C-6’), 55.3, 50.1, 48.2, 47.9,42.9 (C), 42.5 (C), 40.7 (C), 39.9 (CH₂), 38.6 (C), 38.3 (CH₂), 37.9, 37.0 (C), 35.4 (CH₂), 34.1 (CH₂), 29.8 (CH₂), 28.9, 27.2 (CH₂), 24.9 (CH₂), 22.5 (CH₂), 21.1 (CHj), 20.9 (CHj), 18.2 (CH₂), 17.9, 16.5, 16.0, 15.9, 14,0, HR-MS (ESI) vypočteno pro CiosHii₆Na0₂6 [M+Na]⁺: 1851,7647. Nalezeno: 1851,7730.

Příklad 6

3fi-O-(a-D-mannopyranosyl)-(] -^3)-[(a-D-mannopyranosyl)-(l ->6)j-a-D-mannopyranosyl~ lup-20(29)-en (9).

Suspenze sloučeniny 8 (190 mg, 0,1 mM) a K₂CO₃ (40 mg) v methanolu (5 ml) byla míchána 2 h, poté neutralizována Amberlyst 15 pryskyřicí (H⁺ forma), filtrována přes krátkou silikonovou ucpávku (methanol jako eluent) a tento filtrát byl odpařen do sucha. Reziduální methylbenzoát byl odstraněn přidáním vody (3 ml) a zmrazení vedlo k získání sloučeniny 9 (84 mg, 88 %) jako bílého práškur. ¹³C NMR (pyridin-z/j) δ: 151.1 (lupen-C-20), 109.9 (lupen-C-29), 103.8 (C-l), 101.8 (C-l), 98.6 (C-l), 82.9, 81.1, 75.5, 75.1, 74.5, 73.2, 73.1, 72.4, 72.1, 72.1, 69.5,

69.3.67.2 (CH₂), 67.1, 63.2 (CH₂), 63.0 (CH₂), 55.8, 52.0, 50.5,48,6,48.3, 43.2 (C), 43.1 (C),

41.1 (C), 40.3 (CH₂), 38.7 (C), 38.5 (CH₂), 38.3,37.3 (C), 35.8 (CH₂), 34.7 (CH₂), 30.2 (CH₂),

27.8 (CH₂), 25.6 (CH₂), 22,7 (CH₂), 21.1 (CH₂), 19.5,18.6 (CH₂), 18.2,16.7, 16.3, 16.2, 14.7. HR-MS (ESI) vypočteno pro CísHgoNaO^ [M+Naf: 935,5339. Nalezeno: 935,5343.

• · · · · · « t·« • · * · · · » «· ·· « • · · · 9 9 9 9 9 99

99 99 999 ·»«·

Příklad 7

2,3,4,ó-Tetra-O-henzoyl-a-D-mannopyranosylester kyseliny 3-[3-O-aceryl-lup-20(29)-en-28ové (10).

Acetát kyseliny betulinové (4, 500 mg, 1,0 mM) byl převeden na glykosid 10 pomocí 2,3,4,6tetra-O-benzoyl-a-D-mannopyranosyl trichloracetimidátu (24) a postup popsaný pro sloučeninu 5 poskytl látku 10 (985 mg, 91 %) jako pěnu. [o|d -18,6 (c 0,6, CHC1₃). ’H NMR (CDCh) δ: 6.44 (d, 1H, Λ,₂ 2.0 Hz, H-l), 6.19 (t, 1H, = Λ.5 = 10.1 Hz, H-4), 5.87 (dd, 1H,

A,2 3.3 Hz, H-3), 5.72 (dd, 1H, H-2), 4.80 (bs, 1H, Iupen-H-29), 4.66 (m, 2H), 4.42-4.52 (m, 3H), 3.05 (ddd, 1H, 7 5.0, 11.1 Hz), 2.42 (m, 1H), 2.31 (m, 1H), 2.12 (m, 1H), 2.04 (s, 3H, CH₃). ¹³C NMR (CDCh) δ: 173.1 (C=O), 171.0 (C=O), 166.1 (C=O), 165.5 (C=O), 165.3 (OO), 165,1 (CO), 150.0 (lupen C-20), 110.0 (lupen C-29), 90.3 (C-l), 80.9 (lupen C-3),

71.5, 70.0, 69.3, 66.3, 62.6 (C-6), 57.1 (C), 55.5, 50.5, 49.4, 46.9, 42.5 (C), 40.7 (C), 38.4 (CH₂), 38.2, 37.8 (C), 37.1 (C), 37.0 (CH₂), 34.2 (CH₂), 32.4 (CH₂), 30.5 (CH₂), 29,6 (CH₂), 27.9, 25.5 (CH₂), 23.7 (CH₂), 21.3 (CHj), 20.8 (CH₂), 19.4, 18.2 (CH₂), 16.4 (CH₃), 16.1 (CH₃), 16.0 (CH₃), 14.7 (CH₃). HR-MS (ESI) vyp. pro C₆₆H₇₆NaO_]3 [M+Na]⁺: 1099,5178. Nalezeno: 1099,5142.

Příklad 8

2,3,4,6-Tetra-O-acetyI-a-D-mannopyranosylesler kyseliny 3-p-O-acetyl-lup-20(29)-en'28-ové (11).

Acetát kyseliny betulinové (4, 500 mg, 1.0 mM) a 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-a-D-mannopyranosyl trichloracetimidát (25) byl přeměněn na glykosid 11 za použití postupu popsaného pro látku 5, postup poskytl látku 11 (772 mg, 93%) jako pěnu. [α]η° +32,4 (c 0,6, CHC1₃). ^lH NMR (CDC1₃) δ: 6.13 (d, 1H, 2.0 Hz, H-l), 5.35 (t, 1H, Λ.3 = Λ.5 = 10.0 Hz, H-4), 5.29 (dd, 1H,

J₃,2 3.3 Hz, H-3), 5.24 (dd, 1H, H-2), 4.74 (d, 1H, J 1.8 Hz, lupen H-29), 4.61 (bs, lupen H-29), 4.46 (dd, 1H, J 8.0 and 10.3 Hz, lupen H-17), 4.29 (dd, 1H, Λ,ί 4.9, 12.4 Hz, H-6), 4.06 (dd, 1H, J_6;5 2.5 Hz, H-6’), 3.98 (m, 1H, H-5), 2.94 (m, 1H, lupen H-19), 2.18 (s, 3H, CH₃), 2.08 (s, 3H, CH₃), 2.05 (s, 3H, CH₃), 2.03 (s, 3H, CH₃), 1.99 (s, 3H, CH₃), 1.68 (s, 3H, CH₃), 0.97 (s, 3H, CH₃), 0.90 (s, 3H, CH₃), 0.83 (s, 6H, 2 x CH₃), 0.81 (s, 3H, CH₃). ¹³C NMR (CDCh) δ: 172.9 (C=O), 171.0 (C=O), 170.6 (C=O), 169.9 (C=O), 169.7 (C=O), 169.5 (C=O),

149.8 (lupen C-20), 110,0 (lupen C-29), 90.1 (C-l), 80.9 (lupen C-3), 71.1, 69.0, 68.3, 65.4,

62.2 (C-6), 56.9 (C), 55.4, 50.5,49.3, 46.8,42.4 (C), 40.7 (C), 38.4 (CH₂), 38.1, 37.8 (C), 37.1 (C), 36.8 (CH₂), 34.2 (CH₂), 32.2 (CH₂), 30,3 (CH₂), 29.5 (CH₂), 27.9,25.4 (CH₂), 23.7 (CH₂), • » « ««*« ··»» ····«· ··*· ·· · · · · · · · · ·· • · · · · · · · · ·· «« «4 ·· ··· ····

21.3, 20.8 (CH₂), 20.7, 20.7, 20.6, 20.5, 19.3, 18.1 (CH₂), 16.4, 16,1, 16.0, 14.6. HR-MS (ESI) vypočteno pro CíeHésNaOií [M+Naf: 851,4552. Nalezeno: 851,4578

Příklad 9 a-D-Mannopyranosyl ester kyseliny 3-p-O-Licetyl-hip-20(29)-en-28-ové (12).

K roztoku sloučeniny 11 (1,27 g, 1,53 mM) v methanolu (15 ml)byl přidán roztok čerstvě připraveného methoxidu sodného v methanolu (0,24 M, 0,2 ml) a míchán 90 min. Tento roztok byl neutralizován pomocí Amberlyst 15 (H⁺ forma), přefiltrován přes krátkou silikagelovou ucpávku (methanol jako eluent) a filtrát byl odpařen dosucha. Kolonová chromatografie (hexan-ethyl acetát, 7:3 then hexan-ethyl acetát-methanol, 5:3:1 -> 1:1.1) odparku poskytla sloučeninu 12 (910 mg, 90 %) jako pěnu. [a]o° +48.4 (c 0.6, CHCh-methanol 1:1). ^!H NMR (CDCh-CDjOD 1:1) δ: 6.04 (d, 1H, A,2 1.8 Hz, H-l), 2.01 (s, 3H, CH3), 1.66 (s, 3H, CH3), 0.96 (s, 3H, CH3), 0.90 (s, 3H, CH3), 0.83 (s, 3H, CH3), 0.81 (s, 6H, 2 x CH3). ¹³C NMR (CDClj / CD3OD, 1 :1) δ: 173.7 (C=O), 171.3 (C=O), 149.5 (lupen C-20), 109.1 (lupen C-29), 92.7 (C-l), 80.9 (lupen C-3), 75.0, 70.8, 69.3, 65,7,60.6 (C-6), 56.3 (C), 54.9, 50.0,48.7,46.4,

41.9 (C), 40.1 (C), 37.8 (CH₂), 37.7, 37.1 (C), 36.5 (C), 36.1, 33.7 (CH₂), 31.4 (CH₂), 29.7 (CH₂), 29.0 (CH₂), 27,1 (CH₂), 24.9, 23.0 (CH₂), 20.3 (CH₂), 20.2, 18,3, 17.5 (CH₂), 15.6, 15.3,15.2,13.9. HR-MS (ESI) vyp, pro C₃₈H6₀NaO₉ [M+Na]⁺: 683,4130. Nalezeno: 683,4161. Elem. anal.: Vypočteno: C₃₈H₆₀O9 x 1,5H₂O: C, 66,35; H, 9,23. Nalezeno: C, 66,35; H, 9,14.

Příklad 10 (2,3,4,6-tetra-O-benzoyl-a-D-mannopyranosyl)-(l ->3)-[(2,3,4,6-tetra-O-benzoyl-a-Dmannopyranosyl)-(l ->6) ]-a-D-mannopyranosyl ester 3-P-O-acetyl-lup-20(29)-en-28-ové kyseliny (13).

Mannosid 12 (330 mg, 0,5 mM) a 2,3,4,6-tetra-O-benzoyl-a-D-mannopyranosyl trichloracetimidát (24, 815 mg, 1,1 mM) byly převedeny za použití postupu popsaného pro sloučeninu 7 na trimannosid 13, který byl použit v následující reakci bez dalšího přečištění.

Příklad 11 (2,3,4,6-tetra-O-benzoyl-a-D-manopyranosyl)-(l -+3)-((2,3,4,6-tetra-O-benzoyl-a-Dmanopyranosyl)-(l -+6)]-2,4-di-O-acetyl-a-D-manopyranosyl ester 3-P-()-acetyldup-2(')(29)en-28-ové kyseliny (14).

Surový produkt 13 byl acetylován za standardních podmínek (AC2O, Py) a poté přečištěn kolonovou chromatografií (hexan-ethyl acetát 7:3 a poté hexan-ethyl acetátmethanoi 5,3:0,2 -> 5,3:0,5) za poskytnutí sloučeniny 14 (391 mg, 41% apo dvou krocích) jako amorfního skla. [a]o 13 9 (c 0.5, CHC1₃). ^!H NMR (CDClj) δ: 6.27 (t, 1H, Λ3 = A? = 10.1 Hz, H-4“), 6.25 (d, 1H,J_L21.9 Hz, H-l), 6.17 (m, 1H,J9.6,10.9 Hz, H-4’), 5.83 (m, 3H, H-2’, 3’, 3”), 5.63 (t, ΙΗ,Λ.3 =Λ,5 = 9.9 Hz, H-4), 5.56 (dd, 1H, J₂,i 2.0,7_υ 3.1 Hz, H-2”), 5.45 (dd, 1H, .¼ 3.3 Hz, H-2), 5.39 (d, 1H, H-l”), 5.14 (bs, 1H, H-l’), 4.75 (m, 2H, H-6’, lupen H-29), 4.44-4,65 (m, 6H, H-5’, 5”, 6’, 6”, 6”, lupen H-29), 4.38 (m, 2H, H-3, lupen H-3), 4.02 (m, 2H, H-5, 6), 3.76 (dd, 1H, J₆,₅ 2.3, J₅,₆- 10.6 Hz, H-6), 2.98 (m, 1H, 74.7, 11.1 Hz), 2.38 (s, 3H, CH₃), 2.33 (s, 3H, CH₃), 2.01 (s, 3H, CH₃), 1.69 (s, 3H, CH₃), 0.93 (s, 3H, CH3), 0.87 (s, 3H, CH₃), 0.66 (s, 3H, CH₃), 0.61 (s, 3H, CH₃), 0.57 (s, 3H, CHj). ^!3C NMR (CDCI3) δ: 173.3 (CO), 171.0 (CO), 170.4 (CO), 170.1 (CO), 166.2 (C=O), 166.0 (CO), 165.5 (CO),

165.4 (CO), 165.4 (CO), 165.3 (2 x CO), 165.2 (CO), 149.8 (lupen C-20), 110.2 (lupen C-29), 99.4 CJc-h 174.2 Hz, C-Γ), 98.0 ('Jc-h 175.5 Hz, C-l”), 90.2 (\J_C-h 179.3 Hz, C-l),

80.9 (lupen C-3), 75.5 (C-3), 72.3 (C-5), 70.7 (C-2”), 70.4 (C-3’ or C-3”), 70.1 (C-2’), 69.8 (C5”), 69.8 (C-2), 69.4 (C-3’ or C-3”), 68.9 (C-5’), 67.6 (C-4), 67.2 (C-6), 66.6 (C-4’), 66.4 (C4”), 62.8 (C-6’), 62.4 (C-6”), 57.1 (C), 55.4, 50.4, 49.3, 47.1, 42.5 (C), 40.7 (C), 38.4, 38.2 (CH₂), 37.6 (C), 37.1 (CH₂), 37.1 (C), 36.9 (C), 34,3 (CH₂), 32.4 (CH₂), 30.5 (CH₂), 29.5 (CH₂), 27.8,25.5 (CH₂), 23.6 (CH₂), 21.3, 21.0,20.8,20.8 (CH₂), 19.3, 18.0, 16,3,16.1, 16,0,

14.6. HR-MS (ESI) vyp. pro CnoH₁₁₆Na0₂₉ [M+Na]⁺: 1923.7495. Nalezeno: 1924.7516. Vypočteno pro Ci 10H116Ο29 x 2H₂O: C, 68.17; H, 6,24, Nalezeno: C, 68.05; H, 6.29.

Příklad 12 (a-D-manopyranosyl)-(l -^3)-[(a-D-manopyranosyl)-(l->6)]-a-D‘manopyranosyl ester 3-βO-acetyl-lup-20(29)-en-28-ové kyseliny (15).

Suspenze sloučeniny 14 (160 mg, 0,084 mM) a K2CO3 (40 mg) v methanolu (5 ml) byla míchána 2 h, neutralizována Amberiystem 15 (H^1- forma), přefiltrována přes krátkou sílikagelovou ucpávku (methanol jako eluent) a filtrát byl odpařen dosucha. Residuální methyl benzoát byl odstraněn přidáním vody (3 ml) a následné mrazové sušení poskytlo sloučeninu 15 (82 mg, kvant.) jako bílý produkt. ¹³C NMR (pyridin-í/?) δ: 174.3 (CO), 170.7 (CO), 150.7 (lupen C-20), 110.2 (lupen C-29), 104.1 (C-l), 102.2 (C-l), 95.1 (C-l), 80.8, 80.5, 76.8, 75.5, 75.2, 73.1, 73.1, 72.3, 72.0, 70.3, 69.5, 69.2, 66.9 (CH₂), 66.5, 63.1 (CH₂), 63.0 (CH₂), 57.2 (C), 55.7, 52.0, 50.8,49.7,47.6,42.8 (C), 41.1 (C), 38.6 (CH₂), 38.0 (C), 37.3 (C), 37.2 (CH₂), ·«··*· · · ·· • 9 ··· · · · · · · · ···· · · · · · · · *· «· ·· ··· ·· ··

34.6 (CH₂), 32.5 (CH₂), 30.9 (CH₂), 29.9 (CH₂), 28.1, 26.0 (CH₂), 24.1 (CH₂), 21.2 (CH, CH₂), 19,4, 18.5 (CH₂), 16.8, 16.3, 14.9. HR-MS (ESI) vyp. pro C₅₀H_s0NaOi₉ [M+Naf: 1007,5186. Nalezeno: 1007,5177. Vypočteno pro CjoH^oO^ x H₂O: C, 59,86; H, 8,24, Nalezeno: C, 59,77; H, 8,21.

Přiklad 13

Testování in v Hro cytotoxické aktivity

Buněčné linie (T-lymfoblastická leukemie CEM; buněčná linie odvozená od karcinomu mléčné žlázy MCF-7, plicní nádorová linie A-549, buňky cervikálního karcinomu HELA, maligní melanomová buněčná linie G361, a lidské fibroblasty BJ-H-tert) byly pěstovány v DMEM médiu (Gibco BRL) obsahujícím 10 % fetálniho telecího séra, 4 mM glutaminu, 100 U/ml penicilinu a 100 pg/ml streptomycinu v 37 °C, 100 % vlhkosti a v 5% atmosféře CO₂. Buněčná suspenze o koncentraci přibližně 1,25 x 10⁵ bunčk/ml byla přenesena do 96jamkových mikrotitračních destiček a po 3 hod. stabilizaci byly přidány testované saponiny o různé koncentraci (sériové ředěni). Saponiny byly rozpuštěny v dimethylsulfoxidu (DMSO) před přidáním do kultury. Kontrolní kultury obsahovaly pouze DMSO. Finální koncentrace DMSO v reakční směsi nepřesáhla 0,6 %. Jednotlivé čtyřnásobně ředěné koncetrace testovaných látek byly přidány v čase nula jako 20 μΐ alikvotní podíl do jamek mikrotitračních destiček. Obvykle se sloučeniny ředily do šesti koncentrací v Čtyřnásobné ředící řadě. Při rutinním testování byla nejvyšší koncentrace v jamce 50 μΜ, případné změny této koncentrace závisí na dané látce. Po 72 hod. inkubaci byly buňky inkubovány s Calceinem AM (Molecular Probes) po dobu 1 h. Fluorescence živých buněk byla kvantifikována za použiti Labsystem FIA readeru Fluoroscan Ascent (Microsystems).

Přežití nádorových buněk (IC50) bylo spočítáno podle následujícího vztahu:

ICjo^-(ODiéíivu vystavené jamky / průměr ODkontroini jamky) 100 A. Hodnota IC50, která odpovídá koncentraci látky, kdy je usmrceno 50 % nádorových buněk, byla vypočtena ze získaných dávkových-odpovědních křivek.

Tabulka 1. Hodnoty IC50 (μΜ) získané z Calcein AM testu s nádorovými buňkami; Výsledky byly získány ze tří nezávislých experimentů prováděných v triplikátech, z nichž byla určena směrodatná odchylka. Betulinová kyselina (2) byla použita jako pozitivní kontrola.

Sloučenina	i CEM	MCF7	Buněčná linie (IC5Í A-549 HeLa	í, μΜ) BJ-H-tert	RPMI 8226	G361
1	27,641,4	>50	>50	>50	>50	37,5±5,6	>50
2	4042,8	>50	>50	47,6±1,9	>50	34,641,5	>50
3	>50	>50	>50	>50	>50	44,142,2	>50
4	1040,2	21,8±5,5	4340,6	14,544,3	>50	6,740,4	32,340,6
6	33,344,7	34,140,1	45,141,4	32,140,4	33,545,3	26,241,5	31,841,7
9	>50	>50	>50	>50	>50	>50	>50
12	10,440,7	22,742,2	43,340,3	34,742,5	38,740,5	19,440,5	22,741,4
15	>50	>50	>50	>50	>50	>50	>50
17	34,840,2	>50	>50	38,444,6	>50	28,140,5	>50
18	30,44=2,2	>50	>50	>50	>50	19,942,3	42,141,9
19	30,2±0,7	46,7±0,9	>50	37,9±0,l	>50	22,441,7	35,940,1
20	12,941,1	35,5±1,9	44,640,2	42,841,3	43,140,5	18,540,5	27,940,1
21	>50	>50	>50	>50	>50	>50	>50
22	27,745,3	39,245,7	44,640,2	45,743,5	35,647,9	29,243,8	22,343,9
23	>50	>50	>50	>50	>50	>50	>50

Struktury sloučenin uvedených v Tabulce 1.

1: R = H, R' = CH₃ (lupeol)

2: R = H, R' = CO₂H (betulinová kyselina)

3: R = Ac, R' = CH₃

4: R = Ac, R' = CO₂H

5: R = Bz

6: R = H • · · · · · · ··« ·· ·· ·· ··· ·· ··

7: R = H 8: R = Ac

10: R = Bz 11: R = Ac

12: R = H

13: R = H

14: R = Ac ······ 4 ··· * · · · · * 4 · 4 4 4♦ ··» 4 · · v · ·· • · 4· «4 4 4 4 444 4

16: R = R' = H (betulin) 17 R = R’ = Ac

18: R = Ac, R' = H

19: R = H, R' = Ac

23: R = * φ φ · · · φ ·· t t φ · · * · · · * ·· • » v * · · · · · ·* ·« ·· ·· «·« «9··

Příklad 14

Suché tobolky

5000 tobolek, každá obsahující jako aktivní složku 0,25 g jedné ze sloučenin obecného vzorce

I, zmíněných v předcházejících příkladech, se připraví následujícím postupem:

Složeni

Aktivní složka 1250 g

Talek180 g

Pšeničný škrob120 g

Magnesium stearát 80 g

Laktosa20 g

Postup přípravy: Rozetřené látky jsou protlačeny přes síto s velikostí ok 0,6 mm. Dávka 0,33 g směsi je přenesena do želatinové tobolky pomocí přístroje na plnění tobolek.

Příklad 15

Měkké tobolky

5000 měkkých Želatinových tobolek, každá z nich obsahující jako aktivní složku 0,05 g jedné z látek obecného vzorce I zmíněných v předcházejících příkladech, se připraví následujícím postupem:

Složení

Aktivní složka 250 g

Lauroglykol 2 litry

Postup přípravy: Prášková aktivní látka je suspendována v Lauroglykolu® (propylenglykol laurát, Gattefoseé S. A., Saint Priest, Francie) a rozetřena ve vlhkém pulverizátoru na velikost částic asi 1 až 3 mm. Dávka o velikosti 0,419 g směsi je potom přenesena do měkkých želatinových tobolek pomocí přístroje na plnění tobolek.

Přiklad 16

Měkké tobolky

5000 měkkých želatinových tobolek, každá z nich obsahující jako aktivní složku 0,05 g jedné ze sloučenin obecného vzorce 1 zmíněných v předcházejících příkladech, se připraví následujícím postupem:

• · · · · •t ·· ·· ···

Složeni

Aktivní složka 250g

PEG400 1 litr

Tween 80 1 litr

Postup přípravy: Prášková aktivní složka je suspendována v PEG 400 (polyethylen glykol o Mr mezi 380 a 420, Sigma, Fluka, Aldrich, USA) a Tween® 80 (polyoxyethylen sorbitan monolaurát, Atlas Chem. Ind., Inc., USA, dodává Sigma, Fluka, Aldrich, USA) a rozetřena ve vlhkém pulverizátoru na částice o velikosti 1 až 3 mm. Dávka o velikosti 0,43 g směsi je potom přenesena do měkkých želatinových tobolek pomocí přístroje na plnění tobolek.

Claims (13)

1. PATENTOVÉ NÁROKY « ·*

   1. Sacharidové deriváty lupánu obecného vzorce I a jejich farmaceuticky využitelné soli z alkalickými kovy, amoniakem či aminy, ve formě racemátů nebo opticky aktivních isomerů, nebo jejich adičních solí s kyselinami, kde

   R znamená substituent nezávisle vybraný ze skupiny zahrnující vodík, hydroxylovou, amino, merkapto, alkyloxy, alkylovou a sacharidovou skupinu,

   R' znamená substituent nezávisle vybraný ze skupiny zahrnující vodík, alkylovou, karboxylovou, acylovou, a sacharidovou skupinu, kde alespoň jeden z R a R' obsahuje sacharidovou skupinu.
2. 2. Sacharidové deriváty lupánu podle nároku 1, kde sacharid je monosacharid, disacharid nebo trisacharid, kde karbohydrátová skupina je glykosyl nebo glykosid vyskytující se v obou enantiomemích formách, jejich anomerické spojení je a nebo β, s výhodou je karbohydrátová skupina je vybrána ze skupiny zahrnující glukosyl, glukosid, mannosyl, mannosid, galaktosyl, galaktosid, fukosyl, fukosid, rhamnosyl, rhamnosid nebo jejich kombinace, které mohou být případně nezávisle na sobě substituovány azido, amino, alkylamino, acetylovou, arylovou nebo arylalkylovou skupinou.
3. 3. Sacharidové deriváty lupánu podle nároku 1, kde alespoň jeden z R a R’ obsahuje alespoň jednu glykosylovou nebo glykosídovou skupinu vybranou ze skupiny zahrnující glukosyl, glukosid, mannosyl, mannosid, galaktosyl, galaktosid, fukosyl, fukosid, rhamnosyl, rhamnosid nebo jejich amino, acyl a benzyl mono-, di- a trisacharidové deriváty.
4. 4. Sacharidové deriváty lupánu podle nároku 1, kde alespoň jeden z R nebo R’ obsahuje alespoň jednu glykosylovou nebo glykosídovou skupinu vybranou ze skupiny zahrnující · · · ♦ « ♦ ··· ta β · * * · · · ♦ ·♦ a a · · · · · · · ·*

   I· ·· ·· ···Β· ·· glukosy], glukosid, mannosyl, mannosid, galaktosyl, galaktosid, fukosyl, fukosid, rhamnosyl, rhamnosid, které jsou substituovány jednou nebo dvěma glykosylovými nebo glykosidovými skupinami zvolenou ze skupiny obsahující glukosyl, glukosid, mannosyl, mannosid, galaktosyl, galaktosid, fukosyl, fukosid, rhamnosyl, rhamnosid nebo jejich amino, acyl nebo benzyl deriváty.
5. 5. Sacharidové deriváty lupánu podle nároku 1, vybrané ze skupiny zahrnující 33β-Ο-(αΌ' mannopyranosyl)-lup-20(29)-en, 3 p-U-(a-D-mannopyranosyl)-( 1 ->3)-[(a-Dmannopyranosyl)-(l->6)]-a-D-mannopyranosyl-lup-20(29)-en₎ l-(7-[3^-acetoxy-lup-20(29)en-28-oyl]-a-D-mannopyranosyl, l-O-[3^-acetoxy-lup-20(29)-en-28-oyl]’(a-Dmannopyranosyl)-( 1 ->3)-[(u-D-mannopyranosyl)-( 1 ->6)]-a-D-mannopyranosyl, 3β-O-acetyl28-O'(a-D-mannopyranosyl)-lup-20(29)-en, 3β-0-acetyl-28-0-(α-D-mannopyranosyl)-(l->3)[(a-D-mannopyranosyl)-(l->6)]-a-D-mannopyranosyl-lup-20(29)-en, 28O-acetyJ-33O-(a-Dmannopyranosyl)-lup-20(29)-en, 28-0-acetyl^-0-(a-D-mannopyranosyl)-( 1 ->3)-[(a-DmannopyTanosy])-(l->6)]-a-D-mannopyranosyl-lup-20(29)-en, 33-(?-(p-D-glukopyranosyl)1 up-20(29)-en, 3β-č>-(α-D-mannopyΓanosyl)-( 1 ->3)-[(a-D-mannopyranosyl)-( 1 —>6)]-β-Οglukopyranosyl-lup-20(29)-en, 1O-[3^-acetoxy-lup-20(29)-en-28-oyl]-(a-Dmannopyranosyl)-(l->3)-[(a-D-mannopyranosyl)-(l->6)]^-D-glukopyranosyl, 3p-O-acetyl28-CHf-D-glukopyranosyl)-lup-20(29)-en, 3p-O-acetyl-28-O-(a-D-mannopyranosyl)’(l->3)[(a-D-mannopyranosyl)-(l->6)]^-D-glukopyranosyl-lup-20(29)-en, 28-O-acetyl^-O-$-Dglukopyranosyl)-lup-20(29)-en, 28-O-acetyl^O-(a-D-mannopyranosyl)-(l->3)-[(a-Dmannopyranosyl)-( 1 ->6)]^-D-glukopyranosyi-lup-20(29)-en, 3 p-O-(P-D-galaktopyranosyl)lup-20(29)-en, 3β-ΰ-(α-D-mannopyranosyl)-(l->3)-[(α-D-mannopyranosyl)-(1^6)]-β-Dgalaktopyranosyl-lup-20(29)-en, l-O-[3-p-acetoxy-lup-20(29)-ene-28-oyl]-P-Dgalaktopyranosyl, 1O-[3-p-acetoxy-lup-20(29)-en-28-oyl]-(a-D-mannopyranosyl)-( 1 —>3 )-[(a~ D-mannopyranosyl)-( 1 ->6)]-p-D-galaktopyranosyl, 3P-O-acetyl-28-O-(p-Dgalaktopyranosyl)-lup-20(29)-en, 3p-O-acetyl-28-O-(a-D-mannopyranosyl)-(1^3)-[(a-Dmannopyranosyl)-(l->6)]-P-D-galaktopyranosyl-lup-20(29)-en, 28O-acetyl-3p-O-(p-Dgalaktopyranosyl)-lup-20(29)-en, 28-O-acetyl-3P-O-(a-D-mannopyranosyl)-(1->3)-[(a-Dmannopyranosyl)-( 1 ->6)]-p-D-galaktopyranosyl-lup-20(29)-en, 3p-O-(L-ramnopyranosyl)lup-20(29)-en, l-O-[3-P-acetoxy’1up-20(29)-en-28-oyl]-L-rhamnopyranosyl, 3β-0-αοβΐγ1-28O-(L-ramnopyranosyl)-lup-20(29)-en, 28-O-acetyl-3p-O-(L-rhamnopyranosyl)-lup-20(29)-en, « φ « 9 · 9 ♦ ··· « 9 ♦ 9 · * 9 9 9 9♦ ···· · · 9 9 · ·· ·· ·» ·* 999 ·«99 lup-20(29)-en, l-O-[3-p-acctoxy-lup-20(29)- en-28-oyl]-L-rhamnopyranosyl, 3p-0-acetyl28-O-(L-ramnopyranosyl)-lup-20(29)-en, 28-O-acetyl-3pO-(L-rhamnopyranosyl)-lup-20(29)en, 33,28-di-O-(a-D-mannopyranosyl)-lup-20(29)-en, 3p,28-di-O-(a-D-mannopyranosyl)-lup20(29)-en.
6. 6. Sacharidové deriváty lupánu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5 pro použití jako léčiva.
7. 7. Sacharidové deriváty lupánu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5 pro použiti při inhibici buněčné proliferace a indukci apoptózy.
8. 8. Sacharidové deriváty lupánu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5 pro použití a léčení hyperproliferativnich onemocnění.
9. 9. Sacharidové deriváty lupánu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5 pro použití při léčení onemocnění vybraného ze skupiny zahrnující rakoviny, osteoporózy, defektů v metabolismu cholesterolu, Alzheimerovy choroby, Huntingtonovy chorby, steroídy indukované osteonekrózy, poruch sexuálního chování a diferenciace, androgen insensitivního syndromu, glukokortikoidního insensitivního astmatu, steroídy indukované katarakty, defícienci P450 oxidoreduktázy.
10. 10. Sacharidové deriváty lupánu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5 pro použití jako růstové faktory, zejména ve zvířecích a lidských buněčných tkáňových kulturách pro regulaci jejich proliferace a morfogeneze.
11. 11. Farmaceutický prostředek, který zahrnuje nejméně jeden sacharidový derivát lupánu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5 a farmaceuticky přijatelný nosič.
12. 12. Farmaceutický prostředek podle nároku 11, který dále zahrnuje jeden nebo více excipientů.
13. 13. Farmaceutický prostředek podle nároku 11 nebo 12, dále obsahující běžně používaná cytostatika, s výhodou mitoxantron, cis-platinu, methotrexát, taxol nebo doxorubicin.