CZ20001975A3

CZ20001975A3 - S-oxide and S,S-dioxide tetrahydropyran phenyloxazolidinones

Info

Publication number: CZ20001975A3
Application number: CZ20001975A
Authority: CZ
Inventors: Toni-Jo Poel; Joseph P. Martin Jr.; Michael R. Barbachyn
Original assignee: Pharmacia & Upjohn Company
Priority date: 1998-11-23
Filing date: 1998-11-23
Publication date: 2000-11-15

Abstract

Řešení poskytuje sloučeniny obecných vzorců I, II užitečné jako antimikrobiální látky, kde R] je metyl, etyl, cyklopropyl nebo dichlormetyl; R2 a R3 jsou, na sobě vzájemně nezávislé, vodík nebo fluor; R4 je etyl nebo dichlormetyl. Řešení se také vztahuje na nový způsob stanovení inhibiční aktivity oxazoldinonů na lidskou monoaminoxidasu.The solution provides compounds of formulas I, II useful as antimicrobial agents wherein R 1 is methyl, ethyl, cyclopropyl or dichloromethyl; R2 and R3 are, independent of each other, hydrogen or fluorine; R4 is ethyl or dichloromethyl. The solution is also refers to a new method for determining inhibitory activity oxazoldinones to human monoamine oxidase.

Description

S-oxid a S,S-dioxidtetrahydropyranfenyloxazolidinonyS-oxide and S, S-dioxidetrahydropyranphenyloxazolidinones

Oblast technikyTechnical field

Vynález se týká sloučenin tetrahydropyran-N-fenyloxazolidinonů oxidovaných sírou, ve kterých je fenyloxazolidinonová podjednotka spojena s tetrahydropyranovým kruhem vazbou CC. Vynález se také týká nového způsobu určení inhibiční aktivity oxazolidinonů na lidskou monoaminoxidasu.The invention relates to sulfur-oxidized tetrahydropyran-N-phenyloxazolidinones compounds in which the phenyloxazolidinone subunit is linked to the tetrahydropyran ring by a CC bond. The invention also relates to a novel method for determining the inhibitory activity of oxazolidinones on human monoamine oxidase.

Stav technikyState of the art

Oxazolidinonové antimikrobiální látky patří do nové třídy syntetickách látek se silným antimikrobiálním účinkem proti celé řadě humánních a veterinárních patogenů, mezi které je možné zahrnout gram-pozitivní aerobní bakterie, například polyrezistentní stafylokoky a streptokoky, gram-negativní aerobní bakterie, jako jsou H influenzae a M. catarrahlis, stejně tak jako anaerobní organizmy zahrnující bakterioidy či druh Clostridíum, dále organizmy jako jsou Mycobacterium tuberculosisi a Mycobacterium avium. Je také známo, že oxazolidiny jsou schopny inhibovat monoaminoxidasu (MAO), což je enzym zabraňující akutnímu zvýšení krevního tlaku účinkem endogeního či dieteticky podaného aminu tyraminu. Vzhledem k uvedenému je žádoucí objevit oxazolidiny, které disponují minimální inhibiční aktivitou vzhledem k MAO a tím zabránit vedlejším účinkům způsobeným vzájemnou interakcí léčiv. Současně je zde také velký tlak na vývoj vysoce účinné techniky sledování inhibiční aktivity oxazolidinonových antibiotik na MAO.Oxazolidinone antimicrobial agents belong to a new class of synthetic agents with potent antimicrobial activity against a variety of human and veterinary pathogens, including gram-positive aerobic bacteria such as polyresistant staphylococci and streptococci, gram-negative aerobic bacteria such as H influenzae and M catarrahlis as well as anaerobic organisms including bacterioids or Clostridium species, as well as organisms such as Mycobacterium tuberculosisi and Mycobacterium avium. It is also known that oxazolidines are capable of inhibiting monoamine oxidase (MAO), an enzyme that prevents the acute increase in blood pressure by the action of an endogenous or dietically administered amine tyramine. Accordingly, it is desirable to discover oxazolidines that possess minimal MAO inhibitory activity and thereby avoid side effects due to drug interaction. At the same time, there is also great pressure to develop a highly effective technique for monitoring the inhibitory activity of oxazolidinone antibiotics on MAO.

Mezinárodní publikace číslo WO 97/09328; U.S. přihláška v řízení, sériového čísla 08/696 313 popisuje fenyloxazolidiny vázané C-C vazbou k 4-8 členným heterocyklickým kruhům, které genericky pokrývají i sloučeniny z předkládané přihlášky.International Publication No. WO 97/09328; U.S. Pat. U.S. patent application Serial No. 08 / 696,313 discloses C-C-linked phenyloxazolidines to 4-8 membered heterocyclic rings which generically cover the compounds of the present application.

Mezinárodní publikace číslo WO 97/30995 popisuje deriváty oxazolidinů s antibiotickým účinkem.International Publication No. WO 97/30995 discloses oxazolidine derivatives having antibiotic activity.

Další odkazy které zahrnují aromatické heterocykly vázané na fenyloxazolidinony jsou evropská patentová publikace číslo 0352 781 A2, mezinárodní publikace číslo WO 9309103-A1 a U.S. patenty čísel 5130316, 5254577 a 4948801.Other references that include aromatic heterocycles attached to phenyloxazolidinones are European Patent Publication No. 0352 781 A2, International Publication No. WO 9309103-A1 and U.S. Pat. patents Nos. 5130316, 5254577 and 4948801.

Další odkazy obecného zaměření představují: Castangoli, Jr. a kol., „Syntesis and Elective Monoamine Oxidase B-Inhibiting Properties of 1-Methyl-1,2,3,6-tetrahydropyrid-4-yl Carbamate Derivatives: Potential Prodrugs of (R)- and (S)-Nordeprenyl“, J. Med. Chem., číslo 39, strana 4756-4761 (1996); Walter Weyler a J.I.Salach, „Purifícation and Properties of Mitochondrial Monoamine Oxidase Type A from human Placenta“, J. of Bio. Chem., číslo 260, φφ φ φφφφ ΦΦ·· φ · · · φ φφ φφφ φφ φ φφφφ φφφ» φφφφ strana 13199-13207 (1985) (10/25/85); J.I.Salach a Walter Weyler, „Preparation of the flavincontaining Aromatic Amine Oxidase of Human Placenta and Beef Liver“, Methods enzymol., číslo 142, strana 627-623 (1987); Joseph J.P.Zhou a kol.“Direct Continuous Fluorimetric assay for Monoamine Oxidase Type B“, Analytical Biochemistry, číslo 234, strana 9-12 (1996); Keith F. Tipton a kol., „Commentary - The Radiochemical Assay for Monoamine Oxidase Activity Problems and Pitfalls“, Biochemical Pharmacology, ročník 46, číslo 8, strana 1311-1316 (1993).Other general references include: Castangoli, Jr. et al., "Synthesis and Elective Monoamine Oxidase B-Inhibiting Properties of 1-Methyl-1,2,3,6-tetrahydropyrid-4-yl Carbamate Derivatives: Potential Prodrugs of (R) - and (S) -Nordeprenyl", J. Med. Chem., No. 39, pp. 4756-4761 (1996); Walter Weyler and J.I.Salach, "Purification and Properties of Mitochondrial Monoamine Oxidase Type A from Human Placenta", J. of Bio. Chem., No. 260, φ φ · · · · strana strana strana strana strana strana φ strana strana strana strana 131 131 131 131 131 131 131 131 131 131 131 131 131 131 131 131 99 99 131 131 99 99 131 131 131 99 131 131 131 131 131 131 131 131 131 131 strana 131 J. I. Salach and Walter Weyler, "Preparation of the flavincontaining Aromatic Amine Oxidase of Human Placenta and Beef Liver," Methods Enzymol., No. 142, pp. 627-623 (1987); Joseph J. P. Zhou et al., "Direct Continuous Fluorimetric Assay for Monoamine Oxidase Type B", Analytical Biochemistry, No. 234, pp. 9-12 (1996); Keith F. Tipton et al., "Commentary - The Radiochemical Assay for Monoamine Oxidase Activity Problems and Pitfalls," Biochemical Pharmacology, Vol. 46, No. 8, pp. 1311-1316 (1993).

Podstata vynálezuSUMMARY OF THE INVENTION

Vynálezem zahrnuje sloučeninu obecného vzorce IThe invention includes a compound of formula I

nebo její farmaceuticky přijatelná sůl, kde Ri je metyl, etyl, cyklopropyl, nebo dichlormetyl; R2 a R3 jsou buď totožné, nebo rozdílné a jsou to buď hydrogen-, nebo fluor-. Sloučenina obecného vzorce jedna podle vynálezu zahrnuje jak cis, tak trans izomery.or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein R 1 is methyl, ethyl, cyclopropyl, or dichloromethyl; R 2 and R 3 are either identical or different and are either hydrogen- or fluoro-. The compound of formula (I) according to the invention includes both cis and trans isomers.

Dále vynález zahrnuje sloučeninu obecného vzorce IIFurther, the invention includes a compound of formula II

nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl, kde R2 a R3 byly definovány výše a R4 je etyl nebo dichlormetyl.or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein R 2 and R 3 are as defined above and R 4 is ethyl or dichloromethyl.

Ri v obecném vzorci I je s výhodou metyl nebo etyl.R 1 in formula I is preferably methyl or ethyl.

R4 v obecném vzorci II je s výhodou etyl.R 4 in formula II is preferably ethyl.

Výhodné jsou také sloučeniny obecných vzorců I a II, které jsou monofluorvané.Also preferred are compounds of formulas I and II which are monofluorinated.

Výhodné sloučeniny podle vynálezu:Preferred compounds of the invention:

a) [4(S)-cis]-(-)-N-[[3-[3-fluor-4-(tetrahydro-1 -oxido-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-2-oxo-5-oxazolidinyl]metyl]acetamid * · · · « · • · · ···· * « · ♦ • · · · · · · · · · t ~ ♦ ♦ »·«··♦«···♦ · · · · · · · · · · « * ·· · · · · · · · · ♦·a) [4 (S) -cis] - (-) - N - [[3- [3-Fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -2-oxo- 5-oxazolidinyl] methyl] acetamide * t-t-acetamide * t-t-acetamide 5-oxazolidinyl] methyl] acetamide · · · · * * * * * * * *

b) [4(S)-cis]-(-)-N-[[3-[3-fluor-4-(tetrahydro-l-oxido-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-2-oxo-5-oxazolidinyl]metyl]propionamid, ^c) [4(S)-cis]-(-)-N-[[3-[3-fluor-4-(tetrahydro-1 -oxido-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-2-oxo-5-oxazolidinyl]metyl]cyklopropankarboxamid,b) [4 (S) -cis] - (-) - N - [[3- [3-Fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -2-oxo- 5-Oxazolidinyl] methyl] propionamide, ^c ) [4 (S) -cis] - (-) - N - [[3- [3-Fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-thiopyran-4-yl)]] Phenyl] -2-oxo-5-oxazolidinyl] methyl] cyclopropanecarboxamide

d) [4(S)-cis]-2,2-dichlor-N-[[3-[3-fluor-4-(tetrahydro-l-oxido-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-2-oxo~5-oxazolidinyl]nietyl]acetamid,d) [4 (S) -cis] -2,2-dichloro-N - [[3- [3-fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -2- oxo-5-oxazolidinyl] methyl] acetamide,

e) (S)-(-)-N-[[3-[3-fluor-4-(tetrahydro-l,l-dioxido-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-2-oxo-5-oxazolidinyl] mctyl]propionamid,e) (S) - (-) - N - [[3- [3-Fluoro-4- (tetrahydro-1,1-dioxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -2-oxo-5-oxazolidinyl methyl] propionamide,

f) (S)-(-)-2,2-dichlor-N-[[3-[3-fluor-4-(tetrahydro-l,l-dioxido-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-2-oxo-5-oxazolidinyl]metyl]acetamid,f) (S) - (-) - 2,2-Dichloro-N - [[3- [3-fluoro-4- (tetrahydro-1,1-dioxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -2] -oxo-5-oxazolidinyl] methyl] acetamide,

g) [4(S)-trans]-(-)-N-[[3-[3-fluor-4-(tetrahydro-1 -oxido-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-2-oxo-5-oxazolidinyljmetyljpropionamid,(g) [4 (S) -trans] - (-) - N - [[3- [3-Fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -2-oxo- 5-Oxazolidinyl-methyl-propionamide

h) [4(S)-trans]-(-)-N-[[3-[3-fluor-4-(tetrahydro-1 -oxido-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-2-oxo-5-oxazolidinyl]metyl]cyklopropankarboxamid, neboh) [4 (S) -trans] - (-) - N - [[3- [3-Fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -2-oxo- 5-oxazolidinyl] methyl] cyclopropanecarboxamide, or

i) [4(S)-trans]-2,2-dichlor-N-[[3-[3-fluor-4-(tetrahydro-l-oxido-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-2-oxo-5-oxazolidinyl]metyl]acetamid.i) [4 (S) -trans] -2,2-dichloro-N - [[3- [3-fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -2- oxo-5-oxazolidinyl] methyl] acetamide.

Výhodšjší sloučeninou je [4(S)-cis]-(-)-N-[[3-[3-fluor-4-(tetrahydro-l-oxido-2Hthiopyran-4-yl)fenyl]-2-oxo-5-oxazolidmyl]metyl]acetamid.A more preferred compound is [4 (S) -cis] - (-) - N - [[3- [3-fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -2-oxo-5 -oxazolidinyl] methyl] acetamide.

Vynález také poskytuje metodu stanovení MAO inhibiční aktivity oxazolidinonových antibiotik., která zahrnuje následující kroky;The invention also provides a method for determining the MAO inhibitory activity of oxazolidinone antibiotics, which comprises the following steps;

a) inkubace oxazolidinonu s monoaminoxidasou v pufru s pH v rozmezí 7,0 až 7,5;(a) incubating oxazolidinone with monoamine oxidase in a buffer having a pH in the range of 7.0 to 7.5;

b) přidání l-metyl-4-(l-metyl-2-pyrryl)-l,2,3,6-tetrahydropyridinu do uvedného inkubačního roztoku ab) adding 1-methyl-4- (1-methyl-2-pyrryl) -1,2,3,6-tetrahydropyridine to said incubation solution; and

c) stanovení inhibiční aktivity uvedeného oxazolidinonu na monoaminoxidasovou reakci. Vynález popisuje sírou oxidovaný tetrahydrothiopyranfenyloxazolidinon popsaný obecným vzorcem I a II, jak bylo definováno výše. Jak bylo zmíněno výše, tyto sloučeniny jsou užitečné antimikrobiální látky, účinné v boji s celou řadou lidských a veterinárních patogenů. Bylo objeveno, Že zatímco oxazolidinony, jako skupina chemických sloučenin, jsou inhibitory lidské monoaminoxidasy A (MAO A) a monoaminoxidasy B (MAO B), sloučeniny podle vynálezu mají neočekávaně nízkou MAO inhibiční aktivitu. To znamená, že tyto sloučeniny jsou schopné minimalizovat či eliminovat případné interakce léků, protože silná inhibice monoaminoxadasy se může projevit sníženou klírens dalších látek, včetně několika farmaceutik, metabolizovaných za normálních podmínek touto cestou.c) determining the inhibitory activity of said oxazolidinone on the monoamine oxidase reaction. The invention provides the sulfur-oxidized tetrahydrothiopyranphenyloxazolidinone described by formulas I and II as defined above. As mentioned above, these compounds are useful antimicrobial agents, effective in combating a variety of human and veterinary pathogens. It has been discovered that while oxazolidinones, as a group of chemical compounds, are inhibitors of human monoamine oxidase A (MAO A) and monoamine oxidase B (MAO B), the compounds of the invention have unexpectedly low MAO inhibitory activity. This means that these compounds are able to minimize or eliminate possible drug interactions, as a strong inhibition of monoamine oxidase may result in reduced clearance of other substances, including several pharmaceuticals metabolized under normal conditions by this route.

• · · ** · • · · · ·· · » • · · * · ♦ · • · · · · · · ···· ·<···..· * ·..**..· * ···*··.·** • ** ** <<<<<<<<<* * * * * * * * * * * * * * * * * * ··· * ··. ·

Vynález také popisuje novou spektrofotometrickou metodu sloužící ke stanovení schopnosti oxazolidinonu inhibivat lidskou monoaminoxidasu. MAO A a MAO B jsou membránově vázané flavoproteiny lokalizované na vnější mitochondriální membráně. Tyto enzymy se liší specifítou k substrátu při katalýze oxidativm deaminace biogenních a xenobiotických aminů. Z historického hlediska byly MAO enzymy stanovovány metodou „end point“ (diskontinuálně) s použitím radioaktivity. Tyto metody byly kritizovány především protože chyběl průkaz linearity reakční rychlosti v závislosti na čase za běžných reakčních podmínek. Použití této metody nebylo adekvátní také z hlediska těžkopádného zkoumání mnoha sloučenin v krátkém časovém úseku. Metody zahrnují násobné postupy zpracování včetně extrakce reakčních produktů. Tyto kroky vedou k nepřesnostem ve výsledcích. Viz: Matthews J. Krueger a kol.,“An Examination of the Realiability of the Radiochemical Assay for Monoamine Oxidase A and B“, Analytical Biochemistry, svazek 214, strana 116 - 123 (1993); Keith F. Tipton a kol., „Commentary - The Radiochemical Assay for Monoamine Oxidase Activity - Problems and Pitfalls“, Biochemical Pharmacology, svazek 46, číslo 8, strana 1311-1316 (1993).The invention also provides a novel spectrophotometric method for determining the ability of oxazolidinone to inhibit human monoamine oxidase. MAO A and MAO B are membrane-bound flavoproteins located on the outer mitochondrial membrane. These enzymes differ in substrate specificity by catalysing the oxidative deamination of biogenic and xenobiotic amines. Historically, MAO enzymes were determined by the "end point" method (discontinuously) using radioactivity. These methods were criticized mainly because the linearity of the reaction rate versus time under normal reaction conditions was lacking. The use of this method was also inadequate for the cumbersome investigation of many compounds in a short period of time. The methods include multiple processing procedures including extraction of the reaction products. These steps lead to inaccuracies in the results. See: Matthews J. Krueger et al., "An Investigation of the Realiability of the Radiochemical Assay for Monoamine Oxidase A and B," Analytical Biochemistry, Vol. 214, pp. 116-123 (1993); Keith F. Tipton et al., "Commentary - The Radiochemical Assay for Monoamine Oxidase Activity - Problems and Pitfalls," Biochemical Pharmacology, Vol. 46, No. 8, pp. 1311-1316 (1993).

Vynálezem je dále spektrofotometrický způsob, využitelný k rychlému širokému skríningu. Tento způsob je použitelný k analýze MAO a je založen na barevném produktu oxidace chromogeního substrátu l-metyl-4-(l-metyl-2-pyrryl)-l,2,3,6-tetrahydropiridinu. Výsledky způsobu podle vynálezu jsou ekvivalentní při použití s MAO-A i MAO-B. Tento způsob je citlivý, lineární a nevadí při ní slabý zákal vyvolaný přídavkem solubilizované a částečně purifíkované MAO A a MAO B. Reakční produkt je stálý po dobu mnoha hodin a závislost reakční rychlosti jak na čase, tak na koncentraci enzymu je lineární pro oba enzymy. Způsob podle vynálezu byla úspěšně přizpůsoben použití mikrotitračních desek, tudíž může poskytnout informace o tisících testovaných oxazolinidonových sloučeninách v krátkém časovém intervalu. Linearity závislosti reakční rychlosti bylo dosaženo dokonce při skríningu na mikrotitračních deskách za běžných reakčních podmínek.The invention is furthermore a spectrophotometric method useful for rapid wide screening. This method is useful for MAO analysis and is based on the color product of the oxidation of the chromogenic substrate 1-methyl-4- (1-methyl-2-pyrryl) -1,2,3,6-tetrahydropiridine. The results of the process of the invention are equivalent when used with both MAO-A and MAO-B. The process is sensitive, linear and does not mind the slight turbidity induced by the addition of solubilized and partially purified MAO A and MAO B. The reaction product is stable for many hours and the reaction rate dependence on both time and enzyme concentration is linear for both enzymes. The method of the invention has been successfully adapted to the use of microtiter plates, so it can provide information on thousands of oxazolinidone compounds tested in a short period of time. The linearity of the reaction rate was achieved even when screening on microtiter plates under normal reaction conditions.

Navíc přes fakt, že výzkum MAO inhibiční aktivity oxazolidinonových sloučenin je primární aplikací, je možné způsob podle vynálezu aplikovat ke stanovaní jakéhokoli inhibitoru MAO enzymů.Moreover, despite the fact that research into the MAO inhibitory activity of oxazolidinone compounds is the primary application, the method of the invention can be applied to determine any inhibitor of MAO enzymes.

Výraz „farmaceuticky přijatelné soli“ představuje pro účely vynálezu, soli použitelné k dávkování sloučenin podle vynálezu a zahrnuje chlorid, bromid, jodid, síran fosforečnan, octan, propionan, mléčnan, mesylát, jantaran, jablečnan, tartaran, citronan, 2hydroxyetylsulfonan, fumaran a podobně. Soli mohou být v hydratované formě.The term "pharmaceutically acceptable salts" for the purposes of the invention includes salts useful for dosing the compounds of the invention and includes chloride, bromide, iodide, phosphate sulfate, acetate, propionate, lactate, mesylate, succinate, malate, tartaran, citrate, 2hydroxyethylsulfonan, fumaran and the like. . The salts may be in hydrated form.

Sloučeniny podle vynálezu mohou být připraveny v souladu s metodikou názoměnou ve schématech I a II, která je odborníkům v dané oblasti známá. V krátkosti se jedná o hydrolýzu N• · · · • · ♦ · · · · · ♦ **«· • · · · · · · · « · · • * · · * ·9 «·· ·· · * · · · 9 9 9 9 · 9 9 · « 4 · 9 49 9 9 4 0 49 acetyloxazolidinonu 1 hydroxylaminhydrochloridem, kterou je možné získat například amin 2, jak je uvedeno na schématu I. Působením kyselého chloridu nebo anhydridu na amin 2, v přítomnosti zásady, získáme N-acetyloxazolidinon 3, kde n je 1 nebo 2 a R je Ri nebo R₄, jak bylo definováno výše. Strukturu 1, kde n je 2, je možné získat metodami popsanými v Mezinárodní publikaci číslo WO 97/09328. Strukturu 1, kde n je 1, je možné připravit dle schématu II.The compounds of the invention may be prepared in accordance with the methodology outlined in Schemes I and II known to those skilled in the art. In brief, it is the hydrolysis of N * ** * 9 * 9 * 9 * 9 * 9 Acetyloxazolidinone 1 hydroxylamine hydrochloride obtainable, for example, amine 2 as shown in Scheme I. Treatment of amine 2 with an acid chloride or anhydride in the presence of base, to obtain N-acetyloxazolidinone 3 wherein n is 1 or 2 and R is R 1 or R ₄ as defined above. Structure 1, wherein n is 2, can be obtained by the methods described in International Publication No. WO 97/09328. Structure 1, where n is 1, can be prepared according to Scheme II.

Sloučeninu 4 ze schématu II je možné získat metodami popsanými v mezinárodní publikaci číslo WO 97/09328. Tato sloučenina může být redukována katalytickou hydrogenací v přítomnosti vhodného katalyzátoru a rozpouštědla, za vzniku odpovídajících cis- a transsulfoxidů 6 a 7, jak je naznačeno cestou a. Sulfid 5, který může být izolován jako vedlejší produkt redukce na cestě a, popřípadě syntetizován redukcí 6 a 7 v systému složeném z sulfonové kyseliny a jodidu sodného, může být alternativně oxidován vhodným oxidačním činidlem, například NaIO₄ nebo metachloroproxybenzoová kyselina, ve vhodném rozpouštědle za vzniku 6 a 7, jak je uvedeno v cestě b ze schématu II. Směs izomerů 6 a 7 může být rozdělena chromatograficky.Compound 4 of Scheme II can be obtained by the methods described in International Publication No. WO 97/09328. This compound can be reduced by catalytic hydrogenation in the presence of a suitable catalyst and solvent, to give the corresponding cis- and trans-sulfoxides 6 and 7, as indicated by route a. and 7 in a system composed of sulfonic acid and sodium iodide, may alternatively be oxidized with a suitable oxidizing agent, for example NaIO ₄ or metachloroproxybenzoic acid, in a suitable solvent to form 6 and 7 as shown in route b of Scheme II. The mixture of isomers 6 and 7 can be separated by chromatography.

99 • · 9 9 9 9 9 • * · 9 · 9 9 9 • 99 · 9 99 999 • 9 9 9 9 9 • 9 9 9 9 99 99 99

9 9 9 9 ··9 9 9 9

Schéma IScheme I

NHAcNHAc

NHCRNHCR

ΊΊ

99

Sloučeniny podle vynálezu jsou užitečné při léčbě mikrobiálních infekcí, včetně oftalmologických infekcí, u člověka a dalších teplokrevných živočichů. Mohou používat jak orálně, tak parentálně.The compounds of the invention are useful in the treatment of microbial infections, including ophthalmic infections, in humans and other warm-blooded animals. They can be used both orally and parentally.

Farmaceutické kompozice podle vynálezu může být připraveno kombinací sloučenin obecných vzorců I a II podle vynálezu s pevným nebo kapalným farmaceuticky přijatelným nosičem, případně farmaceuticky přijatelným adjuvans a excipientem, za použití standardních a obvyklých technik. Složení pevné formy zahrnuje prášek, tablety, rozpustné granule, kapsle a čípky. Pevný nosič může být alespoň jedna látka, která může současně sloužit jako rozpouštědlo, ·»·· *· tu ·· 44 · 4 * * · · 4*44 «4 4 4 4 4» <444 ·*»»*·ϊ*·*ίίί·The pharmaceutical compositions of the invention may be prepared by combining the compounds of formulas I and II of the invention with a solid or liquid pharmaceutically acceptable carrier, optionally a pharmaceutically acceptable adjuvant, and an excipient, using standard and conventional techniques. The solid form composition includes powder, tablets, soluble granules, capsules and suppositories. The solid carrier may be at least one substance which may also serve as a solvent at the same time. * · ·Ί ·

444« 44 44 · · 4 4 ředidlo, lubrikant, k ochucení, rozsuspendování, jako pojidlo, jako kapsle rozkládající či enkapsulační látka. Mezi inertní pevné nosiče patří uhličitan hořečnatý, stearan sodný, talek, cukr, laktosa, pektin, dextrin, škrob, želatina, celulosové materiály, nízkotuhnoucí vosk, kakaové máslo a podobně. Složení kapalné formy zahrnuje roztoky, suspenze a emulze. Příkladem může být roztok skládající se ze sloučenin tohoto vynálezu rozpuštěných ve vodě, systému vodapropylenglykol či voda-polyetylenglykol, obsahující případně obvyklá barviva, ochucovadla, stabilizátory a zahušťovadla. S výhodou je farmaceutická kompozice vytvořená obvyklými technikami v jednotkovém balení s účinným, nebo přiměřeným obsahem aktivních složek, to je sloučenin obecných vzorců I a II podle vynálezu. Množství aktivních složek, kterými jsou sloučeniny obecných vzorců I a II podle vynálezu, může být ve farmaceutické kompozici a tedy jednotkovém balení proměnlivé a může být nastaveno v širokém rozmezí v závislosti na konkrétním užití, vlastnostech konkrétní sloučeniny a požadované koncentraci. Obecně se bude množství aktivní složky pohybovat v rozmezí od 0,5 do 90 hmotnostních procent.444 «44 44 · · 4 4 diluent, lubricant, for flavoring, suspending, as a binder, as a capsule-disintegrating or encapsulating substance. Inert solid carriers include magnesium carbonate, sodium stearate, talc, sugar, lactose, pectin, dextrin, starch, gelatin, cellulosic materials, low-solid wax, cocoa butter, and the like. Liquid form compositions include solutions, suspensions, and emulsions. An example is a solution consisting of the compounds of this invention dissolved in water, a water-propylene glycol system or a water-polyethylene glycol system, optionally containing conventional colorants, flavors, stabilizers and thickeners. Preferably, the pharmaceutical composition is formed by conventional techniques in unit packet with an effective or adequate content of active ingredients, i.e., compounds of formulas I and II of the invention. The amount of the active ingredients, which are the compounds of formulas I and II according to the invention, can be variable in the pharmaceutical composition and thus in the unit packet and can be adjusted over a wide range depending on the particular use, properties of the particular compound and desired concentration. Generally, the amount of active ingredient will range from 0.5 to 90 weight percent.

Z terapeutického hlediska bude farmaceutická kompozice podávána při léčení či boji s bakteriální infekcí teplokrevných živočichů orálně, povrchově, transdermálně či parenterálně v takovém množství, aby bylo dosažena a udržena taková koncentrace aktivní komponenty, aby byla antibakteriálního hlediska účinná. Koncentrací je zde myšleno množství, nebo hladina v krvi léčeného živočicha. Obecně se bude toto účinné antibakteriální množství pohybovat v romezí od 0,1 do 100, lépe od 3,0 do 50 mg/kg tělesné hmotnosti na den. Je třeba zdůraznit, že se koncentrace může měnit dle potřeb pacienta, rozšíření léčené bakteriální infekce a použité sloučeniny. Dále je třeba zdůraznit, že první podaná dávka může být vyšší, než uvedené maximum, aby bylo rychle dosaženo kýžené hladiny v krvi. Taktéž může být první dávka nižší než je optimální a v průběhu léčby může být denní dávka progresivně zvýšena dle potřeby v konkrétní situace. Pokud je třeba, je možné denní dávku rozdělit do více podávaných dávek, tedy dva až čtyři krát denně.From a therapeutic point of view, the pharmaceutical composition will be administered orally, topically, transdermally or parenterally to treat or combat bacterial infection of warm-blooded animals in an amount such that a concentration of the active component is achieved and maintained such that the antibacterial effect is effective. By concentration is meant the amount or level in the blood of the treated animal. Generally, this effective antibacterial amount will range from 0.1 to 100, preferably 3.0 to 50 mg / kg body weight per day. It should be emphasized that the concentration may vary according to the patient's needs, the prevalence of the treated bacterial infection and the compound used. Furthermore, it should be emphasized that the first dose administered may be higher than the maximum in order to achieve the desired blood level rapidly. Also, the first dose may be less than optimal, and during treatment the daily dose may be increased progressively as needed in the particular situation. If necessary, the daily dose may be divided into multiple doses, ie two to four times a day.

Sloučeniny obecných vzorců I a II podle vynálezu jsou podávány parenterálně, t.j. injekčně, například intravenózní injekcí či jinou parenterální cestou aplikace. Farmaceutická kompozice k parenterálnímu podávání bude obsahovat farmaceuticky přijatelné množství sloučeniny obecného vzorce I nebo II ve formě rozpustné soli (kyselá či bazická sůl), rozpuštěné ve farmaceuticky přijatelném kapalném nosiči, například vodě pro injekce a pufru zajišťující vhodně pufrovaný isotonický roztok mající například pH 3,5 až 6. Mezi vhodné pufrovací látky patří například fosforečnan sodný, uhličitan sodný, citronan sodný, N-metylglukosamin, L(+)lysin a L(+)-arginin. Uvedené látky jsou jen některé reprezentativní pufrující látky. Obecně budou sloučeniny obecných vzorců I a II rozpuštěny v nosiči v takovém množství, které vytvoří farmaceuticky přijatenou koncentraci injekčního roztoku, která se bude pohybovat v rozmezí od 1 do 400 mg/ml roztoku.Výsledný roztok bude podáván v takovém množství, aby bylo dosaženo množství, které bude mít výše uvedený antibakteriální účinek. Sloučeniny obecných vzorců I a II podle vynálezu jsou podávány s výhodou orálně v pevné či kapalné podobě.The compounds of formulas I and II of the invention are administered parenterally, i.e. by injection, for example by intravenous injection or other parenteral route of administration. A pharmaceutical composition for parenteral administration will comprise a pharmaceutically acceptable amount of a compound of Formula I or II in the form of a soluble salt (acidic or basic salt) dissolved in a pharmaceutically acceptable liquid carrier such as water for injection and a buffer providing a suitably buffered isotonic solution having e.g. Suitable buffering agents include, for example, sodium phosphate, sodium carbonate, sodium citrate, N-methylglucosamine, L (+) lysine, and L (+) - arginine. These are only some representative buffering agents. In general, the compounds of formulas I and II will be dissolved in the carrier in an amount that will produce a pharmaceutically acceptable concentration of the injectable solution ranging from 1 to 400 mg / ml of solution. The resulting solution will be administered in an amount such that which will have the above-mentioned antibacterial effect. The compounds of the formulas I and II according to the invention are preferably administered orally in solid or liquid form.

Oxazolinidodnonové antimikrobiální sloučeniny podle vynálezu jsou užitečné, protože působí proti celé řadě organizmů. Aktivita těchto látek in vitro může být určena standardními způsoby, kam patří stanovení minimální koncentrace schopné inhibovat (MIC) ředěním agaru jak bylo popsáno v „Approved Standard. Method for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria That Grow Aerobically“, třetí vydání publikované 1993 National Committee for clinical Laboratory Standarde, Villanova, Pennsylvania, USA. Tabulka 1 obsahuje údaje o aktivitě sloučenin podle vynálezu proti Staphylococcus aureus a H. influenzae.The oxazolinidodone antimicrobial compounds of the invention are useful because they act against a variety of organisms. The in vitro activity of these agents can be determined by standard methods, including determination of the minimum concentration capable of inhibiting (MIC) by agar dilution as described in the "Approved Standard." Method for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria That Grow Aerobically ”, third edition published 1993 by the National Committee for Clinical Laboratory Standard, Villanova, Pennsylvania, USA. Table 1 contains data on the activity of the compounds of the invention against Staphylococcus aureus and H. influenzae.

Kontinuální spektrofotometrický způsob stanovení aktivity MAO je založen na barevných produktech oxidace chromogenního substrátu 1-mety 1-4-(1-metyl-2~pyrryl)-l,2,3,6-tetrahydropyridinu, katalyzované enzymy MAO. Produkt je stálý po mnoho dní při pokojové teplotě. Konverze substrátu na produkt oxidace probíhá kontinuálně od momentu smíchání enzymu MAO se substrátem, přičemž na počátku reakce se přímo získá křivka počáteční rychlosti reakce. Sytě žlutozelený reakční produkt má absorbční maximum při 421 nm v podobě širokého maxima měřitelného od 390 do 440 nm. Reakce může být tudíž prováděna i na velmi málo pokročilém spektrofotometrickém zařízení. Samotný substrát je bezbarvý a samovolně se v podmínkách reakce nepřeměňuje na produkt. Nevzniká proto žádné rušivé pozadí.The continuous spectrophotometric method for determining MAO activity is based on MAO-catalyzed color products of the oxidation of the chromogenic substrate 1-methyl 1-4- (1-methyl-2-pyrryl) -1,2,3,6-tetrahydropyridine. The product is stable for many days at room temperature. The conversion of the substrate to the oxidation product proceeds continuously from the moment the MAO enzyme is mixed with the substrate, whereby the initial reaction rate curve is directly obtained at the start of the reaction. The deep yellow-green reaction product has an absorption maximum at 421 nm in the form of a wide maximum measurable from 390 to 440 nm. The reaction can therefore be carried out on a very advanced spectrophotometric instrument. The substrate itself is colorless and does not spontaneously convert to a product under reaction conditions. There is therefore no disturbing background.

Stanovení je tak citlivé, že dovoluje přesné měření rychlostí při velmi nízkých změnách koncentrace substrátu (>1%). Citlivost reakce umožňuje měření při velmi nízkých koncentracích enzymů MAO a to jak v čisté formě, tak coby tkáňových homogenátů. Stanovení není citlivé vůči biologickým materiálům v pozadí, které všechny absorbují mezi 210 až 350 nm.The assay is so sensitive that it allows accurate measurements of velocities at very low variations in substrate concentration (> 1%). The sensitivity of the reaction allows measurements at very low concentrations of MAO enzymes, both in pure form and as tissue homogenates. The assay is not sensitive to background biological materials, all of which absorb between 210 and 350 nm.

Stanovení vykazuje linearitou reakční rychlosti v širokém koncentračním rozmezí enzymů MAO, substrátu a oxazolidinonů ve značné části reakční křivky při libovolných koncentracích enzymu či substrátu. Jako příklad může sloužit lineární odezva stanovení při výsledné koncentraci oxazolidinonů asi od 1 mM do 1 nM, při jakékoli koncentraci enzymu, s níž je možno dosáhnout změny absorbance v rozmezí od 0,0005 do 0,05/min při 412 nm a při koncentracích substrátu od 10 μΜ do 10 mM. Reakční rychlost je také lineární v širokých časových intervalech (do 90 minut) i při nízkých koncentracích enzymu.Tyto vlastnosti umožňují vysoce přesné stanovení rychlosti jako funkce koncentrace substrátu, koncentracee enzymu nebo koncentrace oxazolidinonového inhibitoru.The assay shows linearity of the reaction rate over a wide concentration range of MAO enzymes, substrate, and oxazolidinones over a large portion of the reaction curve at any enzyme or substrate concentration. As an example, a linear assay response can be obtained at a final oxazolidinone concentration of about 1 mM to 1 nM, at any enzyme concentration capable of producing a change in absorbance ranging from 0.0005 to 0.05 / min at 412 nm and at substrate concentrations from 10 μΜ to 10 mM. The reaction rate is also linear at wide time intervals (up to 90 minutes) even at low enzyme concentrations. These properties allow for a highly accurate rate determination as a function of substrate concentration, enzyme concentration, or oxazolidinone inhibitor concentration.

· 9 9 9 9 • · 9 »« 9 9 9 « 9 99 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 « 99 9« · 9 « «9 99 99 9 9 · 9 ««

9 «99 ·« «99 99 9 ’·*·<’ *99^9 99999 99 99 99 99 99 99 99

Stanovení může být prováděno v pufru, který nemá negativní vliv na reakci a který poskytuje hodnotu pH v rozmezí od 7,0 do 7,5. Výhodným pufračním roztokem je fosforečnan sodný. Nejlepší hodnotou pH pro reakci je přibližně hodnota 7,3. Navíc je nejlepší provádět stanovení v teplotním rozmezí od 25 do 40°C.The assay may be performed in a buffer that has no adverse effect on the reaction and which provides a pH in the range of 7.0 to 7.5. A preferred buffer solution is sodium phosphate. The best pH for the reaction is approximately 7.3. In addition, it is best to perform the assay at a temperature range of 25 to 40 ° C.

Příprava chromogeního substrátu l-metyl-4-(l-metyl-2-pyrryl)-l,2,3,6-tetrahydro-pyridin je popsána v N.Castangoli Jr. a kol., J. Med. Chem., číslo 39, strana 4756-4761 (1996) a odkazech tam uvedených. Substát je připravován jako zásobní roztok o koncentraci 10 až 15 mM v 50 mM fosforečnanu sodném. Tento roztok je uchováván na ledu, případně zmražený a při použití je obvykle zředěn v poměru 1:10-1:100 roztokem fosforečnanu sodného o koncentraci 50 mM (pH = 7 až 7,5).The preparation of the chromogenic substrate 1-methyl-4- (1-methyl-2-pyrryl) -1,2,3,6-tetrahydro-pyridine is described in N. Castangoli Jr. et al., J. Med. Chem., No. 39, pp. 4756-4761 (1996) and references therein. The substrate is prepared as a stock solution at a concentration of 10-15 mM in 50 mM sodium phosphate. This solution is stored on ice, optionally frozen, and in use is usually diluted 1: 10-1: 100 with 50 mM sodium phosphate solution (pH = 7 to 7.5).

Purifíkace MAO A z lidské placenty je popsána v N.Castangoli Jr. a kol., J. Med. Chem., číslo 39, strana 4756-4761 (1996) a J.I.Salach a kol., J. of Bio. Chem., číslo 260, strana 13199 (1985). MAO A z lidské placenty je takto získána v podobě koncentrovaného roztoku (5 nmol.mf¹). Příprava MAO B z hovězích jater je purifíkována dle N.Castangoli Jr. a kol., J. Med. Chem., číslo 39 a J.I.Salach a kol., Methods Enzymol., číslo 142, strana 627 - 623 (1987). MAO B z hovězích jater je takto získána v podobě koncentrovaného roztoku (8 nmoLml'¹). Pracovní zásobní roztoky enzymu jsou připraveny zředěním výchozích roztoků v poměru 1:50 50 mM fosforečnanem sodným, případně ještě 10% glycerolem. Roztok je uchováván na ledu až do použití. Popřípadě mohou být zmrazené roztoky MAO enzymů 800 - 3200 krát zředěny 50 mM fosforečnanem sodným bezprostředně před použitím. Tato metoda je vhodná při testování velkého množství oxazolidinonů.Purification of MAO A from human placenta is described in N. Castangoli Jr. et al., J. Med. Chem., No. 39, pp. 4756-4761 (1996) and Jalaala et al., J. of Bio. Chem., No. 260, page 13199 (1985). MAO A from human placenta is thus obtained as a concentrated solution (5 nmol.mf ¹ ). Preparation of MAO B from bovine liver is purified according to N. Castangoli Jr. et al., J. Med. Chem., No. 39; and Jalach, et al., Methods Enzymol., No. 142, pp. 627-623 (1987). MAO B from bovine liver is thus obtained in the form of a concentrated solution (8 nmoLml ^-1 ). Working enzyme solutions are prepared by diluting the starting solutions 1:50 with 50 mM sodium phosphate or 10% glycerol. The solution is kept on ice until use. Alternatively, frozen MAO enzyme solutions can be diluted 800 - 3200 times with 50 mM sodium phosphate immediately prior to use. This method is useful for testing large quantities of oxazolidinones.

Oxazolidinony jsou rozpouštěny v DMSO na výslednou koncentraci 50 mM. Sériové ředění 50 mM zásobního roztoku je prováděno s použitím DMSO tak, aby vznikly zásobní roztoky o koncentraci od 20 mM do 0,3125 mM. Tyto zásobní roztoky jsou po té zmraženy do doby použití. Tyto roztoky jsou při použití ředěny v poměru 1:100 do výsledného reakčního objemu.Oxazolidinones are dissolved in DMSO to a final concentration of 50 mM. Serial dilutions of a 50 mM stock solution are performed using DMSO to produce stock solutions ranging from 20 mM to 0.3125 mM. These stock solutions are then frozen until use. These solutions are diluted 1: 100 in use to the final reaction volume.

Obvykle je před reakcí enzym spolu s oxazolidinonovým inhibitorem předinkubován asi 15 minut v pufru z fosforečnanu sodného. Reakce jsou startovány přídavkem substrátu. Počáteční rychlosti jsou obvykle měřeny v časovém intervalu od jedné do šedesáti minut.Usually, the enzyme and the oxazolidinone inhibitor are preincubated for about 15 minutes in sodium phosphate buffer prior to reaction. Reactions are initiated by addition of substrate. Initial speeds are usually measured over a time interval of one to sixty minutes.

Postup fiuiguje dobře při stanovení inhibiční aktivity na MAO enzym jednoho oxazolinidonového inhibitoru ve spektrofotometrické kyvetě. Postup byl také přizpůsoben pro velkokapacitní použití na mikrotitrační desce (t.j. čtečce desek s 96, 384 a 1536 jamkami). Stovky stanovení mohou takto probíhat současně. Reakční směs má v tomto uspořádání 250 μΐ a účinná délka světelné dráhy je 0,75 cm. Obvykle se reakční směs skládá z 0,05 mM fosforečnanu • ftftft * · • · ·· ftft ·· » · ft ftft · · ftftft» • · · · · « · · • < · ft · · · ft ftft · * · · · · · · ft · ftft ft· · · ftft sodného (pH 7,3), oxazolidinonu o koncentraci do 500 mM, 1% DMSO, 80 μΐ substrátu (MAO A), respektive 200 μΐ substrátu (MAO B) a dostatečného množství enzymu aby bylo dosaženo změny absorbance od 0,0005 do 0,050 za minutupři 421 nm. Reakce probíhá při 37°C. Rychlého dosažení teploty reakce lze dosáhnout preinkubací desky a zásobních roztoků ve 37°C. V průběhu reakce je zaznamenáván vzrůst absorbance při 421 nm. Extinkční koeficient oxidačního produktu reakce je roven 25000 M^cnť¹ při 420 nm; viz N.CastangoIi Jr. a kol., J. Med. Chem., číslo 39, strana 4756-4761 (1996). Počáteční rychlosti jsou stanovovány lineární regresí ze závislosti změny absorbance v rozmezí od 0,06 do 0,12 při 421 nm na čase. Tento rozsah představuje asi 5 % úbytek substrátu z rekční směsi. Procento inhibice oxazolidinonu je vypočítáno ze vztahu:The procedure works well in determining the inhibitory activity on the MAO enzyme of one oxazolinidone inhibitor in a spectrophotometric cuvette. The procedure was also adapted for large-scale use on a microtiter plate (ie 96, 384 and 1536 well plate reader). Hundreds of assays can be performed simultaneously. The reaction mixture in this arrangement is 250 μΐ and the effective light path length is 0.75 cm. Typically, the reaction mixture consists of 0.05 mM phosphate ftftft ftftft ftft ftftft ftftft ftftft ftftft ftftft ftftft ftftft ftftft ftftft ftftft ftftft ftftft ftftft ftftft ftftft ftftft ftftft ftftft Sodium (pH 7.3), oxazolidinone up to 500 mM, 1% DMSO, 80 μΐ substrate (MAO A) and 200 μΐ substrate (MAO B), and sufficient the amount of enzyme to achieve a change in absorbance from 0.0005 to 0.050 per minute at 421 nm. The reaction proceeds at 37 ° C. Rapidly reaching the reaction temperature can be achieved by preincubating the plate and stock solutions at 37 ° C. The increase in absorbance at 421 nm is recorded during the reaction. The extinction coefficient of the oxidation product of the reaction is equal to 25000 M c cm ^-1 at 420 nm; see N.CastangoIi Jr. et al., J. Med. Chem., No. 39, pp. 4756-4761 (1996). Initial velocities are determined by linear regression as a function of absorbance change from 0.06 to 0.12 at 421 nm over time. This range represents about 5% loss of substrate from the reaction mixture. The percentage inhibition of oxazolidinone is calculated from:

%inhibice = 100{l-[rychlost(s inhibitorem) - rychlost(negativní kontrola)]/[rychlost(pozitivní kontrola) - rychlost(negativní kontrola)]}% inhibition = 100 {l- [rate (with inhibitor) - rate (negative control)] / [rate (positive control) - rate (negative control)]}

Pojem „negativní kontrola“ představuje kompletní reakční směs s 1% DMSO bez enzymu. Pojem „pozitivní kontrola“ představuje kompletní reakční směs s 1% DMSO bez inhibitoru. Výraz „rychlost(I)“ představuje počáteční rychlost reakce v kompletní reakční směsi. Výraz „rychlost(negativní kontrola)“ představuje počáteční rychlost reakce za reakčních podmínek negativní kontroly. Výraz „rychlost(pozitivní kontrola)“ představuje počáteční rychlost reakce za reakčních podmínek pozitivní kontroly. V případě, že je testována pouze jedna inhibiění aktivita oxazolidinonu na aktivitu MAO na mikrotitraění desce, jsou na desce přítomny dvě pozitivní kontroly a dvě negativní kontroly z nichž jsou vypočítány průměrné hodnoty. V případě, že má být stanovena inhibiění konstanta (ki) oxazolidinového inhibitoru, obsahuje každá deska od čtyř do osmi jamek s pozitivní kontrolou. Každý inhibitor je testován při šeswti až osmi koncentracích. Je počítáno relativní procento inhibice vzhledem k neinhibované reakci. Vzhledem k tomu, že oxazolidinony jsou kompetitivní inhibitory, je Ki počítáno znásledujícího vztahu:The term "negative control" represents a complete reaction mixture with 1% DMSO without enzyme. The term "positive control" represents a complete reaction mixture with 1% DMSO without inhibitor. The term "rate (I)" represents the initial rate of reaction in a complete reaction mixture. The term "rate (negative control)" represents the initial rate of reaction under the negative control reaction conditions. The term "rate (positive control)" represents the initial rate of reaction under the positive control reaction conditions. When only one inhibition of oxazolidinone activity to MAO activity is tested on a plate microtiter plate, two positive controls and two negative controls are present on the plate to calculate the mean values. For inhibition of the oxazolidine inhibitor constant (ki), each plate contains from four to eight positive control wells. Each inhibitor is tested at six to eight concentrations. The relative percent inhibition relative to the uninhibited reaction is calculated. Since oxazolidinones are competitive inhibitors, Ki is calculated as follows:

%inhibice = 100[I]/([I] + Ki(l+[S]/Km<_s)));% inhibition = 100 [I] / ([I] + K i (1 + [S] / Km < _s) ));

Viz I.H. Segel, Enzyme Kinetics., číslo 957, strana 105 (1975), Wiley Interscience, New York, New York. V tomto vztahu představuje [S] koncentraci chromogenního substrátu; [I] představuje koncentraci oxazolidinonového inhibitoru a Km(S) představuje disociační konstantu substrátu MAO enzymu.V praxi jsou data naměřená při inhibičním pokusu zpracovávána nelineární * ♦♦ ♦♦ »· ·· • ···· ♦ I · 4 t · ♦· * * · 4 • · · ·· · · * » · 9 • · · · » « ··« • ♦ ·♦ · » *« regresí, metodou nejmenších čtverců. Ki a jeho standardní odchylka jsou určeny z regrese. Nízká hodnota Ki ukazuje, že inhibitor se váže na MAO enzym pevně a je to tedy silný inhibitor.See I.H. Segel, Enzyme Kinetics., No. 957, page 105 (1975), Wiley Interscience, New York, New York. In this relationship, [S] represents the concentration of the chromogenic substrate; [I] represents the concentration of the oxazolidinone inhibitor and Km (S) represents the dissociation constant of the MAO enzyme substrate. In practice, the data measured in the inhibition experiment are processed non-linear. ♦♦ I · 4 t · ♦ 4 * least squares regression, by least squares regression. Ki and its standard deviation are determined from regression. A low Ki value indicates that the inhibitor binds tightly to the MAO enzyme and is thus a potent inhibitor.

Příklady provedení vynálezuDETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

Sloučenina podle vynálezu a jejich příprava je lépe srozumitelná z následujících příkladů, které mají pouze ilustrovat, ale v žádném případě nemají vynález omezit.The compound of the invention and its preparation is better understood from the following examples, which are intended to illustrate but not limit the invention.

Příklad 1Example 1

Příprava [4(S)-cis]-(-)-N-[[3-[3-fluor-4-(tetrahydro-l-oxido-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-2-oxo-5-oxazolidinyl]metyl]acetamidu.Preparation of [4 (S) -cis] - (-) - N - [[3- [3-Fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -2-oxo-5 -oxazolidinyl] methyl] acetamide.

Směs (S)-(-)-N-[[3-[3-fluor-4-(3,6-dihydro-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-2-oxo-5-oxazolidinyl]metyl] acetamid-S-oxidu (4,50 g, může být připraven dle mezinárodní publikace číslo WO 97/09328) a oxidu platničitého (697 mg) v metanolu (164 ml) je míchána na Parrově přístroji ve vodíkové atmosféře při 275,6 kPa (40 psi) po dobu 18 hodin. Katalyzátor je poté odstraněn filtrací přes Celite. Filtrát je zahuštěn za sníženého tlaku. Zbytek je rozdělen chromatografií na silikagelu (230-400 mesh, 350 g). Eluce je prováděna gradientem směsi metanolu/dichlormetanu (3/97 - 7/93). Titulní sloučenina je získána spojením a koncentrací frakcí s retenčním faktorem Rf= 0,44 při TLC (metáno 1/chloroform = 10/90). Teplota tání sloučeniny je 203°C až 204°C.(S) - (-) - N - [[3- [3-Fluoro-4- (3,6-dihydro-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -2-oxo-5-oxazolidinyl] methyl] acetamide-S-oxide (4.50 g, can be prepared according to International Publication No. WO 97/09328) and platinum oxide (697 mg) in methanol (164 mL) is stirred on a Parr apparatus under a hydrogen atmosphere at 275.6 kPa ( 40 psi) for 18 hours. The catalyst is then removed by filtration through Celite. The filtrate is concentrated under reduced pressure. The residue is separated by silica gel chromatography (230-400 mesh, 350 g). Elution is carried out with a gradient of methanol / dichloromethane (3/97 - 7/93). The title compound is obtained by combining and concentrating the fractions with a retention factor Rf = 0.44 by TLC (methane 1 / chloroform = 10/90). Melting point: 203-204 ° C.

Příklad 2Example 2

Příprava [4(S)-cis] -(-)-N- [[3- [3 -fluor-4-(tetrahydro-1 -oxido-2H-thiopyran-4-y l)feny 1] -2-oxo- 5 -oxazolidinyl]metyl]propionamidu.Preparation of [4 (S) -cis] - (-) - N - [[3- [3-Fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -2-oxo- 5-Oxazolidinyl] methyl] propionamide.

• * • φ • ♦· * I * * * 9 φ · • · · « * φ» · · « » < _β ις ·φφφ ···♦·<• * • φ • ♦ · * I * * * 9 φ · • · «* φ» · «» _{<β ις} φφφ · · ··· ♦ <

υ ·· φ· · · ·φ «♦ ··υ ·· φ · · · φ «♦ ··

1. krok: Příprava [4(S)-cis]-3-[3-fluor-4-(tetrahydro-l-oxido-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-5- aminoetyl-2-oxazolidinonu.Step 1: Preparation of [4 (S) -cis] -3- [3-fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -5-aminoethyl-2-oxazolidinone.

Směs [4(S)-cis]-(-)-N-[[3-[3-fluor-4-(tetrahydro-l-oxido-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-2-oxo-5-oxazolidinyl]metyl]acetamidu (Příklad 1; 2,50g) a hydroxylaminhydrochloridu (2,36 g) v pyridinu (30,6 ml) a etanolu (3,4 ml) je míchána v zášrubové zkumavce ve 100°C po dobu 22 hodin a dále při teplotě okolí dalších 16 hodin. V tomto intervalu je také přidán další hydroxylaminhydrochlorid (944 mg) a pyridin (4 ml). Reakční směs je po té zahuštěna za sníženého tlaku a rozředěna nasyceným roztokem uhličitanu sodného (100 ml) a soli (50 ml). pH roztoku je upraveno na hodnotu 11 pevným uhličitanem sodným. Roztok je extrahován směsí metáno 1/dichlormetan (10/90; 5x100 ml). Spojená organická fáze je zahuštěna za sníženého tlaku. Nečistý produkt reakce je rozdělen chromatografií na silikagelu (230 - 400 mesh, 150 g). Eluce je provedena gradientem směsi metáno 1/dichlormetan (6/94 - 10/90). Titulní sloučenina (teplota tání 159 - 161°C) je získána spojením frakcí zTLC (metanol/chloroform 10/90) s retenčním koeficientem Rf = 0,14.[4 (S) -cis] - (-) - N - [[3- [3-Fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -2-oxo-5] mixture -oxazolidinyl] methyl] acetamide (Example 1; 2.50g) and hydroxylamine hydrochloride (2.36g) in pyridine (30.6ml) and ethanol (3.4ml) is stirred in a screw tube at 100 ° C for 22h hours, and at ambient temperature for an additional 16 hours. Additional hydroxylamine hydrochloride (944 mg) and pyridine (4 mL) are also added at this interval. The reaction mixture is then concentrated under reduced pressure and diluted with saturated sodium carbonate solution (100 mL) and salt (50 mL). The pH of the solution is adjusted to 11 with solid sodium carbonate. The solution is extracted with methane 1 / dichloromethane (10/90; 5x100 mL). The combined organic phase is concentrated under reduced pressure. The impure reaction product is separated by silica gel chromatography (230-400 mesh, 150 g). Elution is performed with a gradient of methane 1 / dichloromethane (6/94 - 10/90). The title compound (m.p. 159-161 ° C) is obtained by combining fractions from TLC (methanol / chloroform 10/90) with a retention coefficient Rf = 0.14.

2. krok: Příprava [4(S)-cis]-(-)-N-[[3-[3-fluor-4-(tetrahydro-l-oxido-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-2-oxo-5-oxazolidinyl]metyl]propionamidu.Step 2: Preparation of [4 (S) -cis] - (-) - N - [[3- [3-Fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -2] oxo-5-oxazolidinyl] methyl] propionamide.

Roztok [4(S)-cis]-3-[3-fluor-4-(tetrahydro-l-oxido-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-5-aminoetyl-2-oxazolidinonu (Příklad 2, Krok 1.; 150 mg), anhydrid kyseliny propionové (62 μΐ) a pyridin (75 μΐ) v dichlormetanu je míchán v atmosféře dusíku po dobu 66 hodin. V průběhu tohoto intervalu je přidán další anhydrid kyseliny propionové (12 μΐ). Rakční směs je po té zředěna vodou (15 ml) a extrahována dichlormetanem (2 x 20 ml). Spojená organická fáze je promyta solným roztokem (10 ml, vysušena nad bezvodým síranem sodným a zahuštěna za sníženého tlaku. Získaný nečistý produkt je rozdělen chromatograficky na silikagelu (230 - 400 mesh, 35 g). Eluce je dosaženo gradientem směsimetanol/dichlormetan (3/97 - 5/95). Titulní sloučenina (teplota tání je 212 - 214°C) je získána spojením frakcí zTLC (metanol/chloroform, 10/90) s retenčním faktorem Rf = 0,51 a rekrystalizací ze směsi dichlormetan/dietyleter.[4 (S) -cis] -3- [3-Fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -5-aminoethyl-2-oxazolidinone solution (Example 2, Step 1) 150 mg), propionic anhydride (62 μΐ) and pyridine (75 μΐ) in dichloromethane are stirred under nitrogen for 66 hours. During this interval, additional propionic anhydride (12 μΐ) is added. The reaction mixture is then diluted with water (15 ml) and extracted with dichloromethane (2 x 20 ml). The combined organic phase is washed with brine (10 mL, dried over anhydrous sodium sulfate, and concentrated under reduced pressure. The impure product obtained is separated by chromatography on silica gel (230-400 mesh, 35 g). Elution is achieved with a gradient of methanol / dichloromethane (3 / The title compound (melting point 212-214 ° C) is obtained by combining the fractions from TLC (methanol / chloroform, 10/90) with a retention factor Rf = 0.51 and recrystallization from dichloromethane / diethyl ether.

··«·«· 9« 99 9« ·· • 9 · 9 9 9 9 · « 9 ♦9 9 99 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9« * · * « • · 9 9 · ·« · · 9 * · · »*«« 9 9 9 9 «·«· • 9 · « «9 «9 · « 9 99 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

Příklad 3Example 3

Příprava [4(S)-cis]-(-)-N-[[3-[3-fluor-4-(tetrahydro-l-oxido-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-2-oxo-5-oxayolidinzl]metyl]cyklopropankarboxamidPreparation of [4 (S) -cis] - (-) - N - [[3- [3-Fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -2-oxo-5 -oxayolidinzl] methyl] cyclopropanecarboxamide

Roztok [4(S)-cis]-(-)-3-[3-fluor-4-(tetrahydro-1 -oxido-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-5-aminoetyl-2- oxazolidinonu (Příklad 2, krok 1; 250 mg) a trietylaminu (0,16 ml) v dichlormetanu (3,1 ml) je míchán při teplotě 0°C v dusíkové atmosféře po dobu 2 hodin. Reakční směs je pak zředěna dichlormetanem (25 ml), promyta vodou (10 ml) a roztokem soli (10 ml). Pak je vysušena nad bezvodým síranem sodným a zahuštěna za sníženého tlaku. Výsledný nečistý produkt reakce je rozdělen za použití chromatografie na silikagelu (230 - 400 mesh, 40 g). Eluce je prováděna směsí metanol/dichlormetan (5/95). Spojené a zahuštěné frakce z TLC s R_f= 0,65 byly rozetřeny se směsí dichlormetan/dietyleter (50/50). Filtrací byla získána titulní sloučenina, teplota tání 242 -243°C.[4 (S) -cis] - (-) - 3- [3-Fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -5-aminoethyl-2-oxazolidinone solution (Example 2, step 1; 250 mg) and triethylamine (0.16 mL) in dichloromethane (3.1 mL) is stirred at 0 ° C under a nitrogen atmosphere for 2 hours. The reaction mixture is then diluted with dichloromethane (25 mL), washed with water (10 mL) and brine (10 mL). It is then dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated under reduced pressure. The resulting impure reaction product is separated using silica gel chromatography (230-400 mesh, 40 g). Elution is performed with methanol / dichloromethane (5/95). Combined and concentrated fractions from TLC with _Rf = 0.65 were triturated with dichloromethane / diethyl ether (50/50). Filtration gave the title compound, mp 242-224 ° C.

Příklad 4Example 4

Příprava [4(S)-trans]-2,2-dichlor-N-[[3-[3-fluor-4-(tetrahydro-l-oxido-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-2-oxo-5-oxazolidinyl]metyl]acetamidu.Preparation of [4 (S) -trans] -2,2-dichloro-N - [[3- [3-fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -2-oxo -5-oxazolidinyl] methyl] acetamide.

ClCl

Titulní sloučenina (teplota tání 198 - 200°C) je získána s použitím obecného postupu z příkladu 3 bez zásadních změn s tím, že dichloracetylchlorid byl nahrazen cyklopropankarbonylchloridem.The title compound (m.p. 198-200 ° C) is obtained using the general procedure of Example 3 without substantial changes, substituting cyclopropanecarbonyl chloride for dichloroacetyl chloride.

Příklad 5Example 5

Příprava (S)-(-)-N-[[3-[3-fluor-4-(tetrahydro-l,l-dioxido-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-2-oxo-5-oxazolidinyljmetyljpropionamidu.Preparation of (S) - (-) - N - [[3- [3-Fluoro-4- (tetrahydro-1,1-dioxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -2-oxo-5-oxazolidinyl] methyl] propionamide.

Krok 1: Příprava (S)-(-)-N-[[3-[3-fluor-4-(tetrahydro-l,l-dioxido-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-5-aminometyl-2-oxazolidinonu.Step 1: Preparation of (S) - (-) - N - [[3- [3-fluoro-4- (tetrahydro-1,1-dioxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -5-aminomethyl-2 -oxazolidinone.

Titulní sloučenina (teplota tání 194°C) je získána za použití obecného návodu z příkladu 2, kroku 1., bez zásadních změn s tím, že [4(S)-cis]-(-)-N-[[3-[3-fluor-4-(tetrahydro-l-oxido-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-2-oxo~5-oxazolidinyl]metyl]acetamid byl zaměněn za (S)-(-)-N-[[3-[3-fluor-4-(tetrahydro-l,l-dioxido-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-2-oxo-5-oxazolidinyl]metyl]acetamidS,S-dioxid (sloučenina může být získána postupem popsaným v Mezinárodní publikaci číslo WO 97/09328).The title compound (melting point 194 ° C) is obtained using the general procedure of Example 2, step 1., without substantial changes except that [4 (S) -cis] - (-) - N - [[3- [ 3-fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -2-oxo-5-oxazolidinyl] methyl] acetamide was replaced by (S) - (-) - N - [[ 3- [3-fluoro-4- (tetrahydro-1,1-dioxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -2-oxo-5-oxazolidinyl] methyl] acetamide S, S-dioxide (the compound can be obtained by described in International Publication No. WO 97/09328).

Krok 2:(S)-(-)-N-[[3-[3-fluor-4-(tetrahydro-l,l-dioxido-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-2-oxo-5-oxazolidinyljmetyljpropionamid.Step 2: (S) - (-) - N - [[3- [3-Fluoro-4- (tetrahydro-1,1-dioxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -2-oxo-5- oxazolidinylmethylmethylpropionamide.

Titulní sloučenina (teplota tání 200 - 201°C) je získána za použití obecného návodu z příkladu 2, kroku 2., bez zásadních změn s tím, že [4(S)-cis]-3-[3-fluor-4-(tetrahydro-l-oxido2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-5-aminoetyl-2-oxazolidinon byl zaměněn za (S)-(-)-N-[[3-[3-fluor-4-(tetrahydrO”l,l-dioxido-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-5-aminometyl-2-oxazoUdinon (příklad 5, krok 1·)·The title compound (melting point 200 - 201 ° C) is obtained using the general procedure of Example 2, step 2. without substantial changes except that [4 (S) -cis] -3- [3-fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -5-aminoethyl-2-oxazolidinone was replaced by (S) - (-) - N - [[3- [3-fluoro-4- (tetrahydrO)] 1,1-dioxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -5-aminomethyl-2-oxazolidinone (Example 5, Step 1 ·) ·

Příklad 6Example 6

Příprava (S)-(-)-2,2-dichlor-N-[[3-[3-fluor-4-(tetrahydro-1,1 -dioxido-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-2-oxo-5-oxazolidinyl]metyl]acetamidu.Preparation of (S) - (-) - 2,2-dichloro-N - [[3- [3-fluoro-4- (tetrahydro-1,1-dioxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -2- oxo-5-oxazolidinyl] methyl] acetamide.

Titulní sloučenina (teplota tání 136 - 137°C) je získána chromatografíí ve směsi metanol/chloroform (2/98) hrubého produktu získaného za použití obecného návodu z příkladu 3, bez zásadních změn stím, že dichloracetylchlorid byl zaměněn za cyklopropankarbonylchlorid a [4(S)-cis]-3-[3-fluor-4-(tetrahydro-l-oxido-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-5-ammoetyl-2-oxazolidinonu za (S)-(-)-N-[[3-[3-fluor-4-(tetrahydro-1, l-dioxido-2H'thiopyran-4-yl)fenyl]-5-aminometyl-2-oxazolidinon (příklad 5, krok 1).The title compound (m.p. 136-137 ° C) is obtained by chromatography in methanol / chloroform (2/98) of the crude product obtained using the general procedure of Example 3, without substantial changes by substituting dichloroacetyl chloride for cyclopropanecarbonyl chloride and [4 ( S) -cis] -3- [3-fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -5-aminoethyl-2-oxazolidinone for (S) - (-) - N - [[3- [3-fluoro-4- (tetrahydro-1,1-dioxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -5-aminomethyl-2-oxazolidinone (Example 5, Step 1).

Příklad 7Example 7

Příprava [4(S)-trans]-(-)-N-[[3-[3-fluor-4-(tetrahydro-l-oxido-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-2-oxo-5-oxazolidinyljmetyljpropionamidu.Preparation of [4 (S) -trans] - (-) - N - [[3- [3-Fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -2-oxo-5 -oxazolidinyl-methyl-propionamide.

Krok 1: Příprava (S)-(-)-N-[[3-[3-fluor-4-(tetrahydro-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-2-oxo-5-oxazolidinyljmetyljacetamidu.Step 1: Preparation of (S) - (-) - N - [[3- [3-Fluoro-4- (tetrahydro-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -2-oxo-5-oxazolidinyl] methyl] acetamide.

4* 4 44-4 * · 4 4 44 44 • · * ♦ · * 4 4444 • · · 44 44 4 4 *4 • · 444 «4 444 44 4 ·44··444 4444 ^l/ 44 4· 44 44 44 4«4 * 4 44-4 * · 4 4 44 44 • · * 4 · * 4 4444 • · 44 44 4 4 * 4 • · 444 «4 444 44 4 · 44 ·· 444 4444 ^{l /} 44 4 · 44 44 44 4 «

Při použití postupu z příkladu 1 bez zásadních změn s tím, že byly spojeny ty frakce z chromatografie, jejichž retenční faktor při TLC (metáno 1/chloroform 2/98) byl R_f = 0,67 je získána titulní sloučenina. Analýza vypočtená pro C17H21FN2O3S je: C 57,94; H 6,01; N 7,95; S 9,10. Nalezeno bylo: C 57,95; H 5,98; N 7,94; S 8,97.Using the method of Example 1 without substantial changes that were pooled fractions from the chromatography, the retention factor on TLC (methanol-1 / chloroform 2/98) were _Rf = 0.67 title compound is obtained. Analysis calculated for C 17 H 21 FN 2 O 3 S is: C 57.94; H, 6.01; N, 7.95; S, 9.10. Found: C, 57.95; H, 5.98; N, 7.94; S, 8.97.

Krok 2: Příprava [4(S)-trans]-(-)-N-[[3-[3-fluor-4-(tetrahydro-l-oxido-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]~2-oxo-5-oxazolidinyl]metyl]acetamidu.Step 2: Preparation of [4 (S) -trans] - (-) - N - [[3- [3-Fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -2- oxo-5-oxazolidinyl] methyl] acetamide.

Směs obsahující (S)-(-)-N-[[3-[3-fluor-4-(tetrahydro-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-2-oxo-5-oxazolidinyljmetyljacetamid (Příklad 7, krokl; 2,50 g) v dichlormetanu (35 ml) byla v dusíkové atmosféře, při teplotě 4°C zpracována pomocí MCPBA (2,16 g, >85% čistoty, <10,64 mmol) ve dvou částech. Teplota výsledné směsi byla ekvilibrována na teplotu okolí a směs byla míchána 20 hodin. V této době byl přidán další MCPBA (360 mg, >85% čistoty, <1,77 mmol). Reakční směs je pak zředěna díchlormetanem (50 ml) a promyta nasyceným vodným roztokem uhličitanu sodného (50 ml). Vodná fáze je znovu extrahována do směsi metanol/dichlormetan (2x50ml, 5/95) a spojená organická fáze byla promyta nasyceným roztokem soli (25 ml), vysušena nad bezvodým síranem sodným a zahuštěna při sníženém tlaku. Hrubý extrakt je chromatografován na silikagelu (230 - 400 mesh, 350 g) s elucí směsí metanol/dichlormetan (3,5/96,5 - 5/95) a ty frakce z TLC jejichž Rf = 0,42 byly spojeny. Tento preparát obsahuje směs cis a tram sulfoxidových produktů. Následnou purifíkací na HPLC (kolona Chiracel OD, eluce etanolem) a rozrtřením se směsí dichlormetan/dietyleterm (50/50) byla získána titulní sloučenina (teplota tání 211-212°C).A mixture containing (S) - (-) - N - [[3- [3-fluoro-4- (tetrahydro-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -2-oxo-5-oxazolidinyl] methyl] acetamide (Example 7, step 1; 2.50 g) in dichloromethane (35 mL) was treated with MCPBA (2.16 g,> 85% purity, <10.64 mmol) in two portions at 4 ° C under nitrogen. The resulting mixture was equilibrated to ambient temperature and stirred for 20 hours. At this time, additional MCPBA (360 mg,> 85% purity, <1.77 mmol) was added. The reaction mixture is then diluted with dichloromethane (50 mL) and washed with saturated aqueous sodium carbonate solution (50 mL). The aqueous phase is re-extracted into methanol / dichloromethane (2 x 50 mL, 5/95) and the combined organic phase is washed with saturated brine (25 mL), dried over anhydrous sodium sulfate, and concentrated under reduced pressure. The crude extract is chromatographed on silica gel (230-400 mesh, 350 g) eluting with methanol / dichloromethane (3.5 / 96.5 - 5/95) and those TLC fractions whose Rf = 0.42 were combined. This preparation comprises a mixture of cis and tram sulfoxide products. Subsequent purification by HPLC (Chiracel OD column, elution with ethanol) and trituration with dichloromethane / diethyl ether (50/50) gave the title compound (mp 211-212 ° C).

Krok 3: Příprava [4(S)-trans]-(-)-3-[3-fluor-4-(tetrahydro-l-oxido-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-5- aminometyl-2-oxazolidinonuStep 3: Preparation of [4 (S) -trans] - (-) - 3- [3-fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -5-aminomethyl-2- oxazolidinone

Při použití obecného postupu z příkladu 2, krok 1 bez závažných změn s tím, že [4(S)-cis]-(-)-N-[[3-[3-fluor-4-(tetrahydro-l-oxido-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-2-oxo-5-oxazolidinyl]-metyl] acetamid byl zaměněn za [4(S)-trans]-(-)-3-[3-fluor-4-(tetrahydro-l-oxido-2H-thiopyran•4-yl)fenyl]-2-oxo-5-oxazolidinyl]metyl]acetamid je získána titulní sloučenina, teplota tání 138 140°C.Using the general procedure of Example 2, step 1 without significant changes except that [4 (S) -cis] - (-) - N - [[3- [3-fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido- 2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -2-oxo-5-oxazolidinyl] methyl] acetamide was replaced by [4 (S) -trans] - (-) - 3- [3-fluoro-4- (tetrahydro) -1-Oxo-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -2-oxo-5-oxazolidinyl] methyl] acetamide gave the title compound, m.p. 138-140 ° C.

Krok 4: Příprava [4(S)-trans]-(-)-N-[[3-[3-fluor-4-(tetrahydro-l-oxido-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-2-oxo-5-oxazolidinyl]metyl]propionamidu.Step 4: Preparation of [4 (S) -trans] - (-) - N - [[3- [3-Fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -2- oxo-5-oxazolidinyl] methyl] propionamide.

• Φ-4--4 φ · · 4 4 4 4 4 φ φ ♦ • 4 4 · · 4 · 4 4 4 · · 4 4 4 · ¢4 < φ φφ φ ·· ·4 44 44 44 44• Φ-4--4 φ · · 4 4 4 4 4 φ φ ♦ • 4 4 · · 4 · 4 4 4 · · 4 4 4 · ¢ 4 <φ φφ φ ·· · 4 44 44 44 44

S použitím obecného postupu z příkladu 2, koku 2 bez závažných změn s tím, že [4(S)cis]-3-[3-fluor-4-(tetrahydro-1 -oxido-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-5-aminoetyl-2-oxazolidinon byl zaměněn za [4(S)-trans]-(-)-3-[3-fluor-4-(tetrahydro-l -oxido-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-5- aminometyl-2-oxazolidinonu. Tak je získána titulní sloučenina, s teplotou tání 200 - 202°C.Using the general procedure of Example 2, step 2 without significant changes except that [4 (S) cis] -3- [3-fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl ] -5-aminoethyl-2-oxazolidinone was replaced by [4 (S) -trans] - (-) - 3- [3-fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] 5-Aminomethyl-2-oxazolidinone. There was thus obtained the title compound, m.p. 200-202 ° C.

Příklad 8Example 8

Příprava [4(S)-trans]-(-)-N-[[3-[3-fluor-4-(tetrahydro-l-oxido-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-2-oxo-5- oxazolidinyl] metyl] cyklopropankarboxamidu.Preparation of [4 (S) -trans] - (-) - N - [[3- [3-Fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -2-oxo-5 oxazolidinyl] methyl] cyclopropanecarboxamide.

S použitím obecného postupu z příkladu 3 bez závažných změn s tím, že místo [4(S)“CÍs]-(-)-3-[3-fluor-4-(tetrahydro-l-oxido-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-5-aminoetyl-2-oxazoli-dmonu byl použit [4(S)-trans]-(-)-3-[3-fluor-4-(tetrahydro-1 -oxido-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-5-aminoetyl-2-oxazolidinonu. Tímto způsobem byla získána titulní sloučenina. Teplota tání této sloučeniny je 189 - 191°C.Using the general procedure of Example 3 without significant alterations except substituting [4 (S) C18] - (-) - 3- [3-fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-thiopyran-4-)]. yl) phenyl] -5-aminoethyl-2-oxazolidinone was used [4 (S) -trans] - (-) - 3- [3-fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-thiopyran-4)]. -yl) phenyl] -5-aminoethyl-2-oxazolidinone. In this way the title compound was obtained. Melting point 189-191 ° C.

Příklad 9Example 9

Příprava [4(S)-trans]-2,2-dichloro-N-[[3-[3-fluor-4-(tetrahydro-l-oxido-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-2-oxo-5-oxazolidinyl]metyl]acetamidu.Preparation of [4 (S) -trans] -2,2-dichloro-N - [[3- [3-fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -2-oxo -5-oxazolidinyl] methyl] acetamide.

Titulní sloučenina s teplotou tání 206 - 208°C, je získána s použitím obecného postupu uvedeného v příkladu 3 bez závažných změn s tím, že místo cyklopropankarbonylchloridu je užit dichloracetylchlorid a místo [4(S)-cis]-(-)-3-[3-fluor-4-(tetrahydro-l-oxido-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-5-aminoetyl-2-oxazolidinonu byl použit [4(S)-trans]-(-)-3-[3-fluor-4-(tetrahydro-l-oxido-2H-thiopyran-4-yl)fenyl]-5-aminoetyl-2-oxazolidinon.The title compound, m.p. 206-208 ° C, is obtained using the general procedure of Example 3 without significant changes except that dichloroacetyl chloride is used in place of cyclopropanecarbonyl chloride and [4 (S) -cis] - (-) - 3- [4 (S) -trans] - (-) - 3 - [[3-fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -5-aminoethyl-2-oxazolidinone] was used. 3-Fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -5-aminoethyl-2-oxazolidinone.

Příklad 10Example 10

Stanovení inhibiční aktivity oxazolidinonů na lidskou MAO-A • # 9 .»*·-· 9 9 4 9 «4 4 4 ♦ ♦ · 9 4 9 # 4444 • · 9 9 · 9* 9 9 4 · _1Λ · · 99944994449 *449 4994 4994Determination of Oxazolidinone Inhibitory Activity on Human MAO-A # 9. * 9 - 9 9 4 9 «4 4 4 ♦ ♦ · 9 4 9 # 4444 • 9 9 · 9 * 9 9 4 · ₁ · · 99944994449 * 449 4994 4994

94 44 44 49 4«94 45 44 49 4 «

Solubilízovanou a přečištěnou formu lidské MAO-A a substrátu poskytla laboratoř Dr, Neala Castangoliho mladšího z katedry chemie, Technické univerzity ve Virginii, Blacksburg, Virginia.A solubilized and purified form of human MAO-A and substrate was provided by Dr, Neal Castangoli Jr. of the Department of Chemistry, Technical University of Virginia, Blacksburg, Virginia.

Příprava tlumivých roztoků: fosforečnan sodný byl připraven jako 50 mM zásobní roztok, pH 7,3 při 37°C. Příprava testované látky: testované látky byly rozpuštěny v DMSO. Sériovým ředěním zásobních roztoků pomocí DMSO byly získány další zásobní roztoky v rozmezí koncentrací od 20 mM do 0,3125 mM. Tyto zásobní roztoky byly zmraženy do doby jejich použití. Tyto roztoky byly zředěny 1/100 do výsledné reakční směsi v době provádění reakce. 10 mM zásobní roztok chromogenního substrátu byl připraven v 50 mM fosfátovém pufru. Tento byl rozdělen na alikvóty a zmražen do doby použití.Buffer solutions: Sodium phosphate was prepared as a 50 mM stock solution, pH 7.3 at 37 ° C. Test substance preparation: Test substances were dissolved in DMSO. Serial dilution of the stock solutions with DMSO yielded additional stock solutions ranging from 20 mM to 0.3125 mM. These stock solutions were frozen until use. These solutions were diluted 1/100 into the resulting reaction mixture at the time of reaction. A 10 mM chromogenic substrate stock solution was prepared in 50 mM phosphate buffer. This was divided into aliquots and frozen until use.

Enzymová reakce - počáteční rychlosti byly měřeny na čtečce mikrotitraěních desek SPECTRAmax 250 (Molecular Devices Corp., Sunnyvale, CA.). Výsledná reakční směs obsahuje 0,05 M fosforečnan sodný (pH 7,3), 80 μΜ substrát, inhibitor o koncentraci v rozmezí do 500 μΜ, 1% DMSO a dostatek enzymu, aby byla vyvolána změna absorbance od 0,0005 do 0,005 za minutu při vlnové délce 421 nm. Reakce byly prováděny při 37°C. V průběhu reakce byl zaznamenáván vzrůst absorbance při 421 nm. Inhibitory byly preinkubovány s MAO-A v reakční směsi po dobu 15 minut před nastartováním reakce. Hodnoty Ki byly stanoveny z počátečních rychlostí s použitím výše uvedeného vztahu.Enzyme Reaction - Initial velocities were measured on a SPECTRAmax 250 microplate reader (Molecular Devices Corp., Sunnyvale, CA.). The resulting reaction mixture contained 0.05 M sodium phosphate (pH 7.3), 80 μΜ substrate, inhibitor at concentrations up to 500 μΜ, 1% DMSO, and sufficient enzyme to induce a change in absorbance from 0.0005 to 0.005 per minute at a wavelength of 421 nm. Reactions were carried out at 37 ° C. The increase in absorbance at 421 nm was recorded during the reaction. The inhibitors were preincubated with MAO-A in the reaction mixture for 15 minutes before starting the reaction. Ki values were determined from the initial velocities using the above relationship.

Výsledky jsou uvedeny v tabulce 1.The results are shown in Table 1.

TABULKA 1TABLE 1

In vitro aktivity proti S. aureus UC® číslo 9213 a gram-negativní bakterie H influenzae 30063 a inhibiční data lidské MAO AIn vitro activities against S. aureus UC® No. 9213 and Gram-negative H influenzae 30063 and human MAO A inhibitory data

Číslo vzorku Sample number MIC (pg/ml) S. aureus (UC 9213) MIC (pg / ml) S. aureus (UC 9213) MIC (Mg/ml) H. influenzae 30063 MIC (Mg / ml) H. influenzae 30063 Kz (μΜ) Kz (μΜ) 1 1 4 4 8 8 648 648 2 2 8 8 16 16 >3000 > 3000 3 3 8 8 16 16 734 734 4 4 2 2 8 8 2570 2570 5 5 4 4 8 8 3000 3000 6 6 2 2 2 2 >3000 > 3000 7 7 4 4 4 4 905 905 8 8 8 8 16 16 >3000 > 3000 9 9 1 1 2 2 396 396

Claims

A compound of formula I (I) wherein R 1 is

(a) methyl

(b) ethyl

(c) cyclopropyl; or

d) dichloromethyl;

R2 and R3 are the same, different and are

(a) hydrogen; or

b) fluorine;

or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

A compound according to claim 1, wherein R ₁ is methyl.

The compound of claim 1, wherein R 2 is fluoro; R ₃ is hydrogen.

A compound of formula I according to claim 1

0 ^:, +

Η (I)

The compound of claim 1 which is

a. [4 (S) -cis] - (-) - N - [[3- [3-Fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -2-oxo- 5-Oxazolidinyl] methyl] acetamide

b. [4 (S) -cis] - (-) - N - [[3- [3-Fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -2-oxo- 5 • oxazolidinyl] methyl] propionamide,

c. [4 (S) -cis] - (-) - N - [[3- [3-Fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -2-oxo- 5 • oxazolidinylmethyl-cyclopropanecarboxamide,

d. [4 (S) -cis] -2,2-dichloro-N - [[3- [3-fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-t-pyropyran-4-yl) phenyl] -2] oxo-5-oxazolidinyl] methyl] acetamide,

e. [4 (S) -trans] - (-) - N - [[3- [3-Fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -2-oxo- 5

- oxazolidinyl] methyl] propionamide,

f. [4 (S) -trans] - (-) - N - [[3- [3-Fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -2-oxo- Oxazolidines 1] methyl] cyclopropanecarboxamide or

g. [4 (S) -trans] -2,2-dichloro-N - [[3- [3-fluoro-4- (tetrahydro-1-oxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -2- oxo-5-oxazolidinyl] methyl] acetamide.

A compound of formula II (Π) wherein

R 2 and R 3 are the same or different and are 4 4444> 4

4 4 4 ·

4 4 · 4

(a) hydrogen

b) fluorine;

RJe

(a) ethyl or

b) dichloromethyl;

or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

The compound of claim 7, wherein R 2 is fluoro; R 3 is hydrogen.

The compound of claim 7, which is

(S) - (-) - N - [[3- [3-Fluoro-4- (tetrahydro-1,1-dioxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -2-oxo-5-oxazolidinyl] methyl propionamide or

(S) - (-) - 2,2-dichloro-N - [[3- [3-fluoro-4- (tetrahydro-1,1-dioxido-2H-thiopyran-4-yl) phenyl] -2-oxo -5-oxazolidinyl] methyl] acetamide.

Use of a compound of formula I, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, for the preparation of a medicament for microbial infections in a patient, comprising administering to a patient in need thereof an effective amount of a compound of formula I according to claim 1.

Use of a compound of formula II, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, for the preparation of medicaments against microbial infections in patients, comprising administering to a patient in need thereof an effective amount of a compound of formula II according to claim 7.

The ingestion of claim 10, wherein the compound of formula I is administered orally, parenterally, transdermally or topically in a pharmaceutical composition.

Use according to claim 11, wherein the compound of formula II is administered orally, parenterally, transdermally or topically in a pharmaceutical composition.

The use of claim 10, wherein the compound of Formula I is administered at a dosage of about 0.1 to 100 mg / kg body weight per day.

The use of claim 11, wherein the compound of formula II is administered at a dose of about 0.1 to 100 mg / kg body weight per day.

99 9999

9 «9

9 9 9

99 99 • * 9 · * β 99

9 9 9 <9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

A method for determining compounds that may exhibit monoamine oxidase inhibitory activity, comprising the steps of:

a) incubating the potential inhibitor with monoamine oxidase in a buffer, wherein the pH is from about 7.0 to 7.5;

b) adding 1-methyl-4- (1-methyl-2-pyrryl) -1,2,3,6-tetrahydropyridine to the incubation solution; and

c) determining the inhibitory activity of oxazolidinone on the monoamine oxidase.

The method of claim 16, wherein the inhibitor is an oxazolidinone antibiotic.

The method of claim 16, wherein the buffer is a phosphate solution.

The method of claim 16, wherein the pH of the buffer is about 7.3.

The method of claim 16, wherein the incubation time is about 15 minutes.

The method of claim 16, wherein the monoamine oxidase is monoamine oxidase A.

The method of claim 16, wherein the monoamine oxidase is monoamine oxidase B.

The method of claim 16, wherein the oxazolidinone is present at a final concentration of from about 1 mM to 1 nM.

The method of claim 16, wherein the monoamine oxidase enzyme is capable of eliciting a change in absorbance in the range of 0.0005 - 0.05 / min at 421 nm.

The method of claim 16, wherein the substrate is present at a concentration of about 50 μΜ to 500 μΜ.

The method of claim 16, wherein the evaluation is performed on a spectrophotometer.

The method of claim 16, wherein the evaluation is performed on a microtiter plate reader.